DE2127171A1

DE2127171A1 - Arzneimittel zur Behandlung von Viruserkrankungen

Info

Publication number: DE2127171A1
Application number: DE19712127171
Authority: DE
Inventors: Giancarlo Pavia Lancini (Italien); Thiry, Lise, Brüssel
Original assignee: Gruppo Lepetit S.P.A., Mailand (Italien)
Priority date: 1970-06-01
Filing date: 1971-06-01
Publication date: 1971-12-09
Also published as: JPS5025577A; NL7105342A; IL36616A0; IL36616A; FR2100709B1; FR2100709A1; JPS4924212B1; BE767846A; GB1317125A

Description

öruppo Lepetit S.p.A. Mailand/Italien

Arzneimittel zur Behandlung von Viruserkrankungen .

Die Erfindung betrifft Arzneimittel zur Verhütung oder zur Behandlung virusbedingter Infektionen, die eye · lische Derivate mit einem Piperazin-Gerüst, das eine Al ■ kylenbrücke aufweisen kann, enthalten.

Die Verbindungen, die die gegen die Viren gerich teten Wirkstoffe der Arzneimittel darstellen, zeichnen sich des weiteren dadurch aus, daß eines der Stickstoffatome des Piperazin-Anteils an ein anderes Amin-Stick stoffatom gebunden ist. Diese Verbindungen entsprechen folgender Formel

- R

(D

109850/1855

in der R ein Wasserstoff atom oder eine niedere Alkyl-, Acyl- oder Aralkylgruppe darstellt, R,, R₂, R, und R, jeweils unabhängig voneinander Wasserstoffatome oder nie-. dere Alkylgruppen bedeuten oder auch die Paare R-, und Rp oder R^ und R, einen den Piperazinring überbrückenden niederen Alkylenrest darstellen können, und X zwei Wasserstoff atome, den Benzylidenrest oder ein Wasserstoffatom und eine Acylgruppe sein kann.

Die Erfindung umfaßt auch Arzneimittel, die pharmazeutisch brauchbare Säureanlagerungssalze der Verbin düngen der allgemeinen Formel (I) enthalten· Einige dieser Verbindungen sind in der Fachliteratur beschrieben, so z.B. 3-Amino-8-methyl-3,8-diazabicyclo £3,2,1 der Formel:

. 7CH₂ CH₃-N ι ^ώ N-NH₂

8\ 6CHp

das von Cignarella et al. in J. Med· Chem.6,, 385 (1963) beschrieben ist. Vom gleichen Autor wird in J. Med.Chem. £, 29 (1963) auch das isomere 8-Amino-3-methylderivat beschrieben. Aminopiperazin-Verbindungen sind aus der USA-Patentschrift 2.663.7Ο6 bekannt· Andere Derivate dieser Reihe können nach bekannten Verfahren hergestellt werden. Soweit X in der allgemeinen Formel ein Wasserstoffatom und eine Acylgruppe bedeutet, erhält man die entsprechende

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Verbindung einfach durch Acylierung der betreffenden Verbindungen, die eine freie Aminogruppe aufweisen_β

Die Verbindungen der allgemeinen Formel, worin R einen Acyl- oder Alkylrest und X zwei Wasserstoffatome bedeutet, erhält man nach dem in der USA-Patentschrift 2.663·706 für 1-Methyl-if-aminopiperazin beschriebenen allgemeinen Verfahren.

Die Benzylidenamino-Derivate sind leicht durch Umsetzung der freien Amino-Verbindungen mit Benzaldehyd in üblicher Weise erhältlich. Arzneimittel, die diese Gruppe von Verbindungen enthalten, können neben dem Wirkstoff noch die üblichen Exzipienten, Stabilisierungs mittel, Eindickungsmittel, oberflächenaktiven Mittel und Lösungsmittel wie verschiedene Zucker, Cellulosederivate, Stärken, Polyoxyäthylenderivate, p-Hydroxy benzoate, Magnesiumstearat, Natriummetabisulfit, pyrogenfrei destilliertes Wasser, soweit diese für die orale oder parenterale Verabfolgung geeignet sind, enthalten.

In Betracht gezogen wird auch die intranasale Verabreichung von Suspensionen oder Lösungen, die in das Nasengewebe hineingesprüht werden können.

Für die orale Verwendung werden die Wirkstoffe zu Tabletten oder Kapseln mit einer Dosierung von 100 mg bis 1 g verarbeitet. Als Beispiel wird folgende Tablettenzusammensetzung genannt:

Wirkstoff gegen Viren	200 mg
Mannit	20 mg
Stärke	kO mg
Magnesiumstearat	5 mg

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Als Beispiel für eine parenteral zu verabreichende Lösung oder Suspension wird folgende prozentuale' Zusammensetzung angegeben:

#-(Gewicht/Volumen)

Wirkstoff gegen Viren 5,000

Natrium-metabisulfit 1,000

Methyl-p-hydroxybenzoat 0,050

w Propyl-p-hydroxybenzoat 0,010

pyrogenfrei destill. Wasser · ·

q.s. ad 100,000

Ein Spray zur intranasalen Verwendung kann beispielsweise folgende Zusammensetzung haben:

Wirkstoff gegen Viren 5 g

Thimerosal 2 mg

Methyl-p-hydroxybenzoat 80 mg

Propyl-p-hydroxybenzoat 20 mg

Natriumphosphat 500 mg

E.D.T.A. Dinatriumsalz ' 5 mg

" keimfreies destill. Wasser q.s. ad 100 ml

Um einen Eindruck von der Wirksamkeit der wirk samen Bestandteile dieser Zusammensetzungen gegen Viren zu geben, werden außerdem einige Ergebnisse über die Eindämmung von Fleckenbildung (Plaquebildung) bei Kulturen von mit Vaccinia-Viren infizierten Kükenembryo-Fibroblasten und bei mit Viren von Herpes simplex infizierten Kaninchennieren-Kulturen aufgeführt. Es ist darauf hinzuweisen,

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daß andere typische Tierviren wie Schafblattern (sheeppox), Hühnerpocken (fowl pox) oder Hals-Trachealkätarrh bei Katzen und Ochsen zu diesen Gruppen gehören.

Die direkte Wirkung einiger Wirkstoffe auf die virenbedingte Fleckenbildung wurde beispielhaft auf folgende Weise geprüft:

a) Unter Agar«

Das Virus wurde auf Einfachschichten primärer Kulturen von Kükenembryo-Fibroblasten adsorbiert und auf das Zellblatt wurde Agar gebracht, der ein Nährmedium und den Wirkstoff enthielt. Nach k Tagen bei 37° C wurde Neutralrot zugesetzt, 3 Stunden später wurden die Flecken gezählt.

b) In flüssigem Medium.

Die gleichen Zellen wurden in Leighton-Röhrchen gezüchtet. Nach der Virusadsorption ( ein PFU auf 1 bis 3 Zellen) wurden die Zellen gewaschen und mit 1 ml Nähr medium, das den Wirkstoff enthielt, versetzt; nach if-8 Stunden wurden Zellen und Flüssigkeit bei -7O⁰C eingefroren; das Virus wurde nach Aufbrechen der Zellen durch dreimaliges Einfrieren und Auftauen und durch eine 30 Sekunden dauernde Behandlung mit Schallwellen titriert. Wie bei dem Versuch unter Agar wurde die PFU-Zahl durch Auszählung der Flecken ermittelt. Die Ergebnisse wurden mit solchen von Kontrollkulturen verglichen·

1.0 9850/1856

c) Unter Methylcellulose.

Für das Virus herpes simplex wurden primäre KuI türen von Kaninchennieren verwendet. Man verfuhr wie unter a), arbeitete aber mit 2 % Methylcellulose anstatt mit Agar,

Die in den erfindungsgemäßen Arzneimitteln enthaltenen Verbindungen weisen im allgemeinen eine niedrige Toxizität gegenüber den Zellen auf. Einige davon erwiesen sich sogar bei Konzentrationen, die fünfmal so groß waren wie jene, bei der eine bedeutsame Hemmung des Viruswachstums eintritt, als nichttoxisch. Die Toxizität wurde nach obigen Agar-Verfahren, jedoch ohne Zusatz eines Erregers und unter Berücksichtigung derjenigen Produkt konzentration, die eine Färbung der Zellen durch Neutralrot verhindert, ermittelt.

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Tabelle I: Konzentration, die eine 90 ^-ige Hemmung des Viruswachsturns herbeiführt

( yU, g/ml ).

Verbindung

NH₂ -N N-CH₅ /' V-CH-H-H N-CH,

A- CH-N-N N

NH

CH2-COHN-N N-CH,

NH₉-N N-CH ² \/

VACCINIA

unter Agar

100

200

100

in flüssig. Medium

200-300

20

HERPES SIMPLEX

unter Methylcellulose

W	0)	Q)
		CO
CO	U	O
EcJ	φ	.H pi
	+>	rH
	P	rH
id		Φ

H O O

ftf) •Η ra m

CVl

CM

r-l

O O H

O O

in

CM

ο ο

CM

ir» M

CM O I

te

CM

IXl

W ο

tr\

ir»

CM O O O

te

CM

ir»
M

CM

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	-CH₂^	j	D	VACCINIA	r	in flüssig. Medium	j	HEEPES SIMPLEX
Verbindung	O	ι 1 I		unter Agar	—	unter Methyl- cellulose
H₂^J)-COC₂E₅		I i 50	—	—
I₂N-N N-CH₂-CH₂	20	20
H₂N-N N-CH₂-CH₂-	I \ ⁵⁰	50

- ίο -

Die Verbindungen, die die gegen das Virus gerichteten Wirkstoffe der erfindungsgemäßen Arzneimittel darstellen, entfalteten bei ihrer Erpropung am Tier durch parenterale Verabreichung noch bei Dosierungen von weniger als 90 mg/kg eine beachtliche Wirksamkeit. Als Beispiel wurden die Verbindungen der Beispiele if und 8 intraperitoneal bei einer Dosierung von 10 mg/kg an mit Vaccinia-Viren infizierten Mäusen getestet· Acht Tage nach der Vaccinia-Erstinjektion wurden die Vaccinia-Schädigungen am Schwanz der Mäuse ausgezählt. Die durchschnittliche Anzahl der Schädigungen, die die behandelten Tiere aufwiesen, wurde mit derjenigen der Kontrolltiere ver glichen» Die Verbindungen der Beispiele 4 und 8 setzten diese durchschnittliche Anzahl auf 17,8 bzw. 13»6 gegenüber 23 des Kontrollversuchs herab.

Beispiel 1; 1-Benzylidenamino-piperazin«

Eine Lösung von 7>8 g Piperazin-hexahydrat in 20 ml Wasser wurde mit 8 ml konzentrierter Salzsäure ver setzt. Unter Aufrechterhaltung einer Temperatur von etwa 3 bis 10⁰G wurden 2,8 g NaNO- in 8 ml H_P0 langsam zuge-

ο geben. Das Gemisch wurde drei Stunden bei 10 C abge stellt, dann mit Eis gekühlt und filtriert, um Verunreinigungen auszuscheiden. Die wässrige Lösung wurde durch Zusatz von Natriumhydroxid auf pH 12 eingestellt und anschließend mehrmals mit Chloroform extrahiert. Nach Abdampfung der organischen Phase erhielt man 3>4 g Nitroso Derivat, das weiterverwendet wurde. Es erfolgte an -

109850/1855

- li -

schließend eine Reduktion dieses Nitroso-Derivates in wässriger Lösung gemäß Verfahren nach G.W. Smith et al., Ind.Eng. Chem· Prod. Res. and Dev., Band 1, Nr. 2, Seite 117 (1962). Die hydrierte Lösung mit einem Anfangsgehalt an rohem Nitroso-Derivat von 3,4 g wurden mit 3fl5 g Benzaldehyd in 15 ml Äthanol versetzt. Das Gemisch wurde Zk Stunden bei Raumtemperatur abgestellt und dann mit Benzol extrahiert. Nach Abdampfung der organischen Schicht erhielt man k,k g 1-Benzylidenaminopiperazin mit einem Schmelzpunkt von 74-76 C.

Beispiel 2: 1-Ami nopiperazin.

ktk g 1-Benzylidenaminopiperazin wurden in einer wässrigen Lösung, die 4,7 ml konzentrierte HCl enthielt, zwei Stunden lang unter Rückfluß gehalten. Nach Kühlung wurde das Gemisch mit Benzol extrahiert und die wässrige Schicht anschließend im Vakuum abgedampft. Der Rückstand wurde aus wässrigem Methanol unter Gewinnung von k g 1-Aminopiperazindihydrochlorid-monohydrat kristallisiert. Die freie Base erhielt man nach herkömmlichen Verfahren durch Freisetzung aus dem Hydrochlorid mittels Alkali. Das Produkt wurde im Vakuum bei 58-6O°C/O,3 mm Hg rektifiziert ·

Beispiel 3:

1—Acetamido-4-methylpiperazin.

l-Amino-4-methylpiperazin wurde etwa drei Stunden

1 0 9 β :. J / I 8 5 5

mit überschüssigem Essigsäureanhydrid und dann - nach Austreiben des Essigsäureanhydrid-Überschusses unter Vakuum - mit Wasser behandelt und mit Natriumcarbonat neutralisiert. Man engte anschließend die wässrige Schicht unter Vakuum ein und filtrierte die ausfallenden anorganischen Salze ab. Der endgültige Rückstand wurde mit Diäthyläther gewaschen und dann aus Benzol kristallisiert; Schmelzpunkt I48 - ⁰

Beispiel 4: 4-Benzylidenamino-l-inethylpiperazin.

= Man löste 3,8 g 4-Amino-l-methylpiperazin in Wasser, stellte die Lösung durch Zusatz von Salzsäure auf pH 4 ein und setzte dann 3»15 g Benzaldehyd zu. Das Gemisch wurde 15 Minuten auf 50 C gehalten und nach erfolgter Kühlung mit Diäthyläther gewaschen. Nach Eindampfung der organischen Schicht erhielt man 4-Benzylidenamino-l-methylpiperazin mit einem Schmelzpunkt von 56-57 C.

Beispiel §;

3-Methyl-8-propionamido-3,8-diazabicyclo J}> ,2,1 Joetan·

Die Verbindung wurde nach der Arbeitsweise des Beispiels 3 unter Verwendung von 8-Amino-3-methyl-3,8-diazabicyclo ^/~3»2,1 ,/octan anstelle von l-Amino-4-methylpiperazin hergestellt. Die Ausbeute betrug 74 % » der Schmelzpunkt 133-135°C.

3 B 5

Beispiel 6:

8-Amino-3-propionyl-3,8-diazabicyclo /"3,2,

68 ml auf 0° gekühlte, 18 #-ige HCl wurde durch tropfenweisen Zusatz mit 18,6 g 3-Propionyl-3,8-diazabicyclo ,/"3^,I_-/ octan versetzt. Unter Aufrechterhaltung einer Temperatur von 0 bis + 5°C wurde langsam eine Lösung von 9»6 g Natriumnitrit in 15 ml Wasser züge tropft. Das Gemisch wurde drei Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Zu diesem Zeitpunkt wurden weitere k>8 g Na triumnitrit und 20 ml 18 #-ige HCl zugesetzt. Man rührte das Gemisch weitere drei Stunden bei Raumtemperatur, machte es dann mittels 30 #-igem NaOH alkalisch und extrahierte es gründlich mit Ither. Nach Trocknung des ätherischen Extrakts über Na₂SO^ und Eindampfen zur Trockne wurde der erhaltene Rückstand destilliert; Siedepunkt (0,5 mm Hg ) 150 - 153°C, Ausbeute 83 %. Unter Aufrechterhaltung einer Temperatur von + 10 bis + 20⁰C wurde eine Suspension von 35 g pulverisiertem Zn (0,508 Mol) in 50 ml Wasser tropfenweise mit 25 g (0,127 Mol) an nach obigem Verfahren hergestelltem Nitroso-Derivat in k-2. ml (0,72 Mol) Essigsäure versetzt. Das Gemisch wurde eine Stunde bei Raumtemperatur gerührt. Anschließend wurde der unlösliche Niederschlag abfiltriert und auf dem Filter mit einer kleinen Menge 5 /6-iger HCl gewaschen. Das FiI-trat wurde mit gekühltem 30 #-igen NaOH alkalisch ge macht und gründlich mit Chloroform extrahiert. Anschließend wurde der Extrakt über Na₂SO, zur Trockne eingedampft. Nach Destillation des Rückstandes erhielt man 16 g 8-Amino-3-propionyl-3,8-diazabicyclo /"3*2,±"J octan mit

1 0 9 8 b ) / 1 8 5 δ

einem Siedepunkt von 145°C bei 0,6 mm Hg,

Beispiel 7i

3-Amino-8-propionyl-3ι8-diazabicyclo /"3,2,1_7 octan.

Die Verbindung wurde gemäß Beispiel 6 unter Verwendung von 8-Propionyl-3,8-diazabicyclo /"3,2,lJ7octan anstelle von 3-Propionyl-3>8-diazabicyclo /~3,2,1 _^octan hergestellt. In einer Ausbeute von 61 % fiel 3-Amino-8-propionyl-3,8-diazabicyclo /"3,2,lJ7 octan mit einem Siedepunkt von 110 C bei 0,6 mm Hg an.

Beispiel 8:

l-Amjno-.4-.benzyl-2,6-dimethylpiperazin.

Man verfuhr wie im ersten Teil von Beispiel 6, verwendete aber als Ausgangsmaterial 2f-Benzyl-2,6-dimethylpiperazin anstelle von 3-Propionyl-3>8-diazabicyclo /"3»2,l_7octan. In einer Ausbeute von 77 % fiel if-Benzyl-2,6-dimethyl-l-nitrosopiperazin mit einem Siedepunkt von lZfO-lZf5°C bei 0,6 mm Hg an.

Unter Aufrechterhaltung einer Temperatur von etwa 45⁰C wurden 24 g des Nitroso-Derivates in 50 ml wasserfreiem Tetrahydrofuran tropfenweise zu einer Suspension von 9,5 g Lithium-aluminiumhydrid in 700 ml Tetrahydro furan gegeben. Anschließend wurde die Suspension sieben Stunden unter Rückfluß gehalten, dann auf -5°C gekühlt

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und mit 30 blL Wasser behandelt. Die organische Schicht wurde über Na₂SO, getrocknet, das Lösungsmittel abgedampft und der Rückstand bei 120-122°C/0,8 mm Hg destilliert. Die Ausbeute betrug 18,7 g·

Beispiel 9: l-Amino-4-äthylpiperazin.

Die Verbindung wurde nach der Arbeitsweise von Beispiel 8 hergestellt; Siedepunkt 75 - 8O⁰C bei 15 mm Hg.

Beispiel 10;

l-Amino-4-propylpiperazin.

Die Verbindung wurde nach der Arbeitsweise von Beispiel 8 hergestellt, Siedepunkt 96 - 98⁰C bei 15 mm Hg.

Beispiel 11;

l-Amino-4-(3-Phenylpropyl)-piperazin.

15 g 1-NxtrDsopiperazin in 100 ml 95 %-igem Äthanol wurden eine Stunde lang in Gegenwart von 30 g Natriumbicarbonat mit 29 g 3-Chlorpropylbenzol behandelt. Der anorganische Niederschlag wurde abfiltriert, die Lösung eingedampft und der Rückstand in Chloroform gelöst. Die Lösung wurde über einer Silikagel-Kolonne chromato graphiert (Eluiermittel CHCl₃ ; CH₃OH 99,5 : 0,5) .

i 5

5 B

Man erhielt 7 S Nitroso-Derivat, das gemäß Beispiel 8 mit Lithiumaluminiumhydrid behandelt wurde und 3_t8 S 1-Amino-4«.(3-phenylpropyl)-piperazin mit einem Siedepunkt von 117 - 120⁰C bei 0,2 mm Hg ergab.

Nach der vorstehenden Arbeitsweise können auch die Verbindungen des Beispiels 8 unter Verwendung von 1-Nitroso~2,6-dimethylpiperazin und Benzylbromid als Ausgangsmaterial hergestellt werden. · .

Beispiel 12; l-Amino-4-T3henäthyl-»piperazin.

Die Verbindung wurde nach der Arbeitsweise des Beispiels 11 hergestellt. Siedepunkt 1O8-11O°C/O,6 mm Hg.

/ 105 5

Claims

Patentansprüche;

1. Arzneimittel zur Behandlung von Viruserkrankungen, gekennzeichnet durch einen Gehalt einer Verbindung der allgemeinen Formel

\_ r

-N; ^N-

V-T

in der R ein Wasserstoffatom oder eine niedere Alkyl-, Aj^yI- oder Aralkylgruppe darstellt, R₁, R₂,R₅ und R jeweils unabhängig voneinander Wasserstoffatome oder niedere Alkylgruppen bedeuten oder die Paare R-, und R„ oder R, und R, auch einen den Piperazinring überbrückenden niederen Alkylenrest darstellen können, und X zwei Wasserstoffatome, den Benzylidenrest oder ein Wasserstoffatom und eine Acylgruppe sein kann, oder eines davon abgeleiteten, pharmazeutisch verträglichen Säureanlagerungssalzes als Wirkstoff.

2. Verfahren zur Herstellung gegen Viren wirkgeändert gemäß Ejngab*
eingegangen am

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- 18 samer Aminopiperazin-Derivate der Formel

in der R einen Phenyl-niederalkylrest und R₁, R , R, und R, jeweils Wasserstoffatome oder niedere Alkylreste bedeuten, dadurch gekennzeichnet, daß ein Nitroso-Derivat der Formel

^Rl

J 1

ON-F^/ ^NH

in der R₁» Rp» ^x ^un<^ % ol>iße Bedeutung haben, mit einem Phenyl-niederalkylhalogenid in einem organischen Lösungsmittel behandelt und die Nitrosogruppe nach bekannten Verfahren zu einer Aminogruppe hydriert.

Für: Gruppo Lenetit S.p.A.

Rechtsanwalt

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