DE2112730A1 - Stabilisierung von neutraler Protease in alkalische Protease enthaltenden Enzymegemischen unter Verwendung alkalischer Proteaseinhibitoren - Google Patents
Stabilisierung von neutraler Protease in alkalische Protease enthaltenden Enzymegemischen unter Verwendung alkalischer ProteaseinhibitorenInfo
- Publication number
- DE2112730A1 DE2112730A1 DE19712112730 DE2112730A DE2112730A1 DE 2112730 A1 DE2112730 A1 DE 2112730A1 DE 19712112730 DE19712112730 DE 19712112730 DE 2112730 A DE2112730 A DE 2112730A DE 2112730 A1 DE2112730 A1 DE 2112730A1
- Authority
- DE
- Germany
- Prior art keywords
- protease
- alkaline protease
- mixture
- neutral
- inhibitor
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/24—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2)
- C12N9/2402—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2) hydrolysing O- and S- glycosyl compounds (3.2.1)
- C12N9/2405—Glucanases
- C12N9/2408—Glucanases acting on alpha -1,4-glucosidic bonds
- C12N9/2411—Amylases
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C11—ANIMAL OR VEGETABLE OILS, FATS, FATTY SUBSTANCES OR WAXES; FATTY ACIDS THEREFROM; DETERGENTS; CANDLES
- C11D—DETERGENT COMPOSITIONS; USE OF SINGLE SUBSTANCES AS DETERGENTS; SOAP OR SOAP-MAKING; RESIN SOAPS; RECOVERY OF GLYCEROL
- C11D3/00—Other compounding ingredients of detergent compositions covered in group C11D1/00
- C11D3/16—Organic compounds
- C11D3/38—Products with no well-defined composition, e.g. natural products
- C11D3/386—Preparations containing enzymes, e.g. protease or amylase
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/24—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2)
- C12N9/2402—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2) hydrolysing O- and S- glycosyl compounds (3.2.1)
- C12N9/2405—Glucanases
- C12N9/2408—Glucanases acting on alpha -1,4-glucosidic bonds
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/96—Stabilising an enzyme by forming an adduct or a composition; Forming enzyme conjugates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/99—Enzyme inactivation by chemical treatment
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
- Detergent Compositions (AREA)
- Cosmetics (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Description
PATENTANWÄLTE MÜNCHEN 2, HILBLESTRASSE
Anwaltsakte 20 698
Be/τα
Be/τα
Monsanto Company St. Louis U.S.A.
Datum
17. März
" Stabilisierung von neutraler Protease in alkalische
Protease enthaltenden Enzymgemisohen unter Verwendung alkalischer Proteaseinhibitoren "
Protease enthaltenden Enzymgemisohen unter Verwendung alkalischer Proteaseinhibitoren "
Neutrale Protease, im Gemisch mit alkalischer Protease,
verliert besonders in Form von Lösungen oder Pasten beim Stehenlassen viel von ihrer proteolytischen Wirksamkeit.
verliert besonders in Form von Lösungen oder Pasten beim Stehenlassen viel von ihrer proteolytischen Wirksamkeit.
11-21-0140
109841/1662
Eine solche Abnahme der Wirksamkeit, besonders in verdünnten lösungen bei geringen Konzentrationen, wurde bisher der
Autolyse, "Denaturierung oder Proteolyse durch die in dem T-e«
misch vorhandene alkalische Protease oder anderen Faktoren,
zugeschrieben. 15Is wurde nunmehr festgestellt, dass diese Abnahme
im wesentlichen allein der Proteolyse der neutralen Protease durch die vorhandene alkalische Protease zuzuschreiben
ist. Während die einfachste Lösung dieser Schwierigkeit zu entgehen, darin bestehen würde, die alkalische Protease
zu entfernen und damit eine derartige Proteolyse zu vermeiden,
ist dies nicht möglich, wenn man die alkalische proteolytische Wirksamkeit in dem Gemisch für dessen vn6verwendung·
zu erhalten wünscht, wie beispielsweise bei einem Additiv für ein Wäschedetergens, da man die entft-ute oder inhibierte
alkalische Protease dem G-emisch vor einer solchen Verwendung
wieder zuführen müsste. Es wurde nunmehr gefund^^, dass bestimmte
alkalische Proteaseinhibitoren hinsichtlich ihrer
Wirkung reversibel sind und bei höheren Konzentrationen wirksame alkalische Proteaseinhibitoren sind, .iedocn als solche
Inhibitoren bei geringeren Konzentrationen unwirksam sir.d,
zum Beispiel nach Verdünnung, so dass die Verdünnung in wirk samer Weise verwendet werden kann, die alkalische Proteasewirksamkeit
in einem solchen G-emisch wieder herzustellen, sofern es durch die relativ hohen Konzentrationen derartiger
Alkaliproteaseinhibitoren inhibiert wurde.
- 3 BAD ORIGINAL
1 0 9 8 A 1 / 1 6 S 2
"1Ke vorliegende TSrfindunsr beinhal+et demgeinäss die Verwendung einer? reversiblen alkalischen Proteaseinhibitors, wie
Fartoffelinhihitors und dergleichen, zur wirksamen Inhibieruni'""
der au kai i sehe"": Protease in einem Gemisch, das neutrale
und alkali srille Protease enthält, wodurch die vorhandene neu—
t-^al e P^o+esssp s+aMlisiert ivirdc "Her Inhibitor ist in relativ
hohen ν οι ·? entr ation en 7ur Tnhibierunp vorhanden, iedoch
wi ^i ^ie ^onz-p'tration des Tnhibitors vor der "^erweniun-r des
"^nzym^emischs so verdünnt, dass dessen alkalische Protease—
Wirksamkeit wieder hergestellt wird. Die Erfindung betrifft
weiterhin ne^+rale und alkalische Proteasegemische, die rniit
einem solchen reversiblen alkalischen Proteaseinhibitor stabilisiert
sind. "Die stabilisierten neutralen und alkalischen
Proteasep-emische sind wertvoll als Additive in Wäschedeteriüi
Spülmit ein.
^s können reversible alkalische Proteaseinhibitoren, wie der
kartoffel!nhilsi+or· und dergleichen, einverleibt werden einem
relativ konzentrierten n-emisch von proteolyti sehen Enzymen,
die neutral-31 und alkalische Protease enthalten, wie sie durch "
"ikrofcien - Fermentation unter Verwendung des ^akteriums
Bazillus sub ti Ils hergestellt werden, wobei man gleichzeitig·
"inzymwirksaTikeit in den konzentrierten T-emisehen nach ausgedehnter
Tareruns konserviert.
09841/1662
Vorzugsweise ist der reversible alkalische Proteaseinhibitor in dem .Gemisch in einer Konzentration im Bereich von ungefähr
50 bis ungefähr 1000 Gew.$, bezogen auf das Gewicht der
alkalischen Protease und vorzugsweise im Bereich von ungefähr 100 bis ungefähr 600 Gew.% vorhanden.
Das in dieser Weise formulierte erhaltene Gemisch kann dann
als Additiv Wäschedetergenzien und Spülmitteln einverleibt werden, wobei das Additiv gewöhnlich in einer Menge im Bereich
von ungefähr 0,03 bis ungefähr 1 Gew.% vorhanden ist.
Das stabilisierte, den reversiblen Inhibitor enthaltende Enzymgemisch
kann nach Wunsch in Form einer Flüssigkeit, Paste oder trockene Granulate hergestellt werden. Der Inhibitor
wird vorzugsweise gemeinsam mit dem Bnzymgemisch ausgefällt
oder sprühgetrocknet. Bei Verwendung wird das Inhibitor enthaltende Enzym so mit Wasser verdünnt, dass in der Arbeitslösung die Konzentratxon des Inhibitors nicht mehr ausreichend
hoch ist, seine inhibierende Wirkung auf die vorhandene alkalische Protease auszuüben. Vorzugsweise ist die In«
hibitorkonzentration in der Arbeitslösung geringer als ungefähr 1 Gew.^ und insbesondere geringer als ungefähr 0,1
Der für die Durchführung der Erfindung geeignete Kartoffelinhibitor
kann aus hellen Kartoffeln (Solanum tuberosum) mittels Extraktion an getrocknetem, lyophilisiertem weissem
Kartoffel - Saft erhalten werden. Die Extraktion des
- 5 ~ 109841/1662
.Kartoffelinhibitors kann geeigneterweise· nach Verfahren erreicht
werden, wie sie von Ryan, C. A. und Balls, A. K. Proc. N.A.S. 48, 1840 (1962), und Balls, A. K. und Byan,
0. Α., J. Biol. Chem. 238, Fo. 9,2976 (1963) beschrieben
sind.
Zur weiteren Verbesserung der Lagerungsfähigkeit oder Haltbarkeit der Enzymgemische kann der pH - Wert des erhaltenen
Gemischs aus Inhibitor und den Enzymen auf den sauren Bereich, d.h., weniger als 7 und vorzugsweise auf einen Wert im Be- '
reich von ungefähr 5t5 bis ungefähr 6 dadurch eingestellt ™
werden, dass man Säure, wie eine schwache organische Säure (Essigsäure), dem Gemisch zugibt. In ähnlicher Weise können
Calciumionen dem Inhibitor enthaltenden Gemisch in Form eines Calciumsalzes, wie Calciumacetat, Calciumchlorid, Calciumnitrat
und dergleichen, zugegeben werden, um auf diese Weise eine Calcium - Ionenkonzentration in dem Gemisch im
Bereich von ungefähr 10~li bis ungefähr 10 M zu bilden«.
Die nachfolgenden Beispiele erläutern die vorliegende Erfin«-·
dung, wobei die Proteaseaktivität bestimmt wurde durch das allgemein bekannte Casein - Digestionsverfahren und ebenso
unter Verfolgen der Hydrolysenanfangsgeschwindigkeit von Benzyloxycarbonylglycin - ρ - nitrophenylester (Z-GIy ONP)β
Bei dem Caseindigestionsverfahren katalysiert die alkalische
109841/1662
Protease die Caseinhydrolyse eine bestimmte Zeitdauer bei
pH 10; die Reaktion wird dann durch Zugabe von Trichloressigsäure
angehalten und die erhaltene Lösung filtriert. Die Farbe des !"iltrats wird durch 3?olin - Phenolreagens
entwickelt und die Höhe der Enzymwirksamkeit v/ird durch Messen des AbsorbtionsVermögens des Filtrate bei einer
Wellenlänge von 280 lau. bestimmte Das Caseindige3tionsverfahren
ist eingehender in Journal of General Physiology 30, 291 (1947) und in Methods of Enzymology 2, 33, Academic
Press M.Y., (1955) beschrieben.
Die Anfangahydrolysengeschwindigkeit von Z - GIy OHP wurde
in pH 6,1 wässrigem Phosphat-Puffer bei einer Wellenlänge
von 345 mu, einer Ionenkraft von 0,0^ u^id einer Substratkonzentration
von 5 χ 10 M verfolgt.
Beispiel 1. Reversible Inhibieruno' von alkalischer Protease durch den Kartoffelinhibitor
Es wurde eine wässrige Lösung mit einem Gehalt von 0,033 mg alkalische Protease pro ml hergestellt. Ein ml der hergestellten
Lösung (Lösung A) wurde einer Caseinstandardlö- .^
pH 10 zugegeben. Es wurde spektrophotometrisch festgestellt,
daß die Abs orbt ions fähigke it bei 280 mi sich um eine O.D.
(optische Dichte)-einheit erhöhte (iOO$ige Enzymaktivität).
Ein ml der gleichen hergestellten Lösung von alkalischer Protease, die jedoch ungefähr 0,1 mg Kartoffelinhibitor ent-
109841/1662 ~7"
hielt (Lösung B) y/urde hinsichtlich der alkalischen Proteaseaktivitat
in der gleichen Weise wie die Lösung A geprüft. Als Ab3orbtionsfu.higK.cit bei 280 mju ,vurde eine Erhöhung von
0,390 O.D.-einheiten (39^ige Enz/maktivität) beobachtet.
Danach wurden 0,2 ml der Lösung A 1 ml T.7asser zugegeben
und geprüft. Die Absorbtionsfähigkeit bei 280 πιμ erhöhte
sich um 0,140 O.D.-einheiten (100 $ige Enzymaktivität). Der gleiche Versuch mit 0,2 ml der Losung B, wozu man 1 ml
Wasser zugegeben hatte, zeigte eine Absorbtionserhöhung Λ
von 0,100 O.D.-einheiten bei 280 mju (71$ige Enzymwirksamkeit).
Die vorausgehenden Zahlen zeigen, daß ine 1 : 5 Verdünnung
der Kartoffelinhibit r-rkonze, ■■:·■:? ti on im wesentlichen
die alkalische Protease reaktiviert.
Beispiel 2 Reversible Inhibierung alkalischer ^roceaae
mittels Kartoffelinhibitor
Eine wässrige Lösung mit 0,0052 mg alkalischer Protease ä
pro ml (Lösung A) wurde hergestellt und spektrophotometrisch
unter Verwendung von Z-GIy ONP, wie oben angegeben, geprüft. Es wurde festgestellt, daß die Anfangshydrolysen-Geschwindigkeitskonstanten
11 χ 10~p Min war (iOQ#ige
Enzymakt ivit ät).
Eine zweite wässrige Lösung wurde hergestellt, wobei diese
1098A1 /1662
-8-BAD ORiGtNAL
3,2 mg alkalische Protease und 0,032 mg kristallinen Kartof«
felinhibitor pro ml enthielt (Lösung B). Diese Lösung wurde in der gleichen Weise geprüft. Die Anfangshydrolysen - Geschwindigkeitskonstante
"betrug 1,58 χ 10 .Min" (14^-ige
Enzymaktivität)o
-5 Danach wurden 2 ml des Substrats in 5 x 10 M Phosphat Puffer einem ml der Lösung B zugegeben und geprüft. Die An- "
fangshydrolysen - G-eschwindigkeitskonstante betrug nach ent«
—3 -1
sprechender Korrektur wegen der Verdünnung 5,0 χ 10 Min
(46^-ige Enzymwirksamkeit).
Die vorausgehenden Versuchsergebnisse zeigen, dass eine 1:2 Verdünnung der Inhibitorkonzentration eine 46$-ige alkalische
Proteaseaktivität wiederherstellt.
Beispiel 3 Stabilisierung von neutraler Protease in einem Enzymgemisch mittels einem Kartoffelinhibitor
Eine wässerige Lösung wurde mit einem G-ehalt von 5,27 mg
B. subtilis - Enzymgemisch pro ml in tris - HCl Puffer (Lösung
A) hergestellt. Das Gemisch enthielt neutrale Protease, alkalische Protease und Amylase. Die Enzymwirksamkeit betrug
1 χ 10 Einheiten/g neutrale Protease, 4,8 χ 10 Sinheiten/g
alkalische· Protease und 3,5 x 10 ■ Einheiten/g Amylase.
Eine zweite Lösung wurde in ähnlicher Weise hergestellt, wobei
sie jedoch zusätzlich 27,7 mg teilgereinigten Kartoffel-
. - 9 ~ 109841/1662
inhibitor pro ml enthielt (Lösung B).
Die neutrale Proteaseaktivität der Lösung wurde spektrophotometrisch
bei 345 mju· mit 3-(2-Furylakryloyl)-glycyl-L-leucinamid-(FAGLA)-substrat
geprüft, wie dies von Feder, "A Spectrophotometry Assay for Neutral Protease", Biochemical
and Biophysical Research Communications 32, No. 2, 326 - 332 (1968) beschrieben ist. Die Lösungen wurden
dauernd bei Zimmertemperatur gelagert. Die erhaltenen Werte sind als Reaktionsgeschwindigkeitskonstante der ersten M
Ordnung, k, ausgedrückt, wobei diese proportional ist der neutralen Proteasekonzentration in der Lösung.
Die Lösung A hatte anfangs einen k-Wert von 9»59 x ΙΟ"4"
Sek und die Lösung B einen k-Wert von 9,28 χ 10"^ Sek ,
wobei jeder dieser Werte eine 100%ige neutrale Proteaseaktivität anzeigt.
Nach 146 Stunden Lagerung wies die Lösung A einen k-Wert
von 1,96 χ 10~4 Sek" (21% der Anfangsaktivität) auf, wäh- ä
rend die Lösung B einen k-Wert von 9,24 x 10"^ Sek"
(100%ige Aktivität) hatte.
Nach 191 Stunden hatte die Lösung A keine feststellbare
neutrale Proteaseaktivität, während die Lösung B einen k-Wert von 9,51 χ 10"4 Sek"1 (iOO%ige Aktivität) aufwies.
Nach 287 Stunden wies die Lösung B einen k-Wert von 6,47 x 109 8-41/1662
- ίο -
10"4 Sek"1 (71^-ige Aktivität) auf.
Die vorausgehenden Beispiele dienen ausschliesi;lioh der Erläuterung.
"Die Erfindung "beinhaltet alle Abweichungen und
Änderungen, soweit diese von dem allgemeinen danken Gebrauch machen.
109841/1662 - n -
Claims (4)
1. ^erfahren zur Stabilisierung von neutraler Protease in
einem Gemisch mit einem Gehalt neutraler Protease und alkalischer Protease dadurch gekennzeichnet, dass man dem Gemisch
eine wirksame Menge eines reversiblen alkalischen Proteaseinhibitors einverleibt, wobei die inhibierende Wirkung
nach Verdünnung aufgehoben wird.
2. """erfahren gemäss Anspruch 1 dadurch gekennzeichnet, dass
man den reversiblen alkalischen Proteaseinhibitor dem Proteasegemisch
in einer Konzentration im Bereich von ungefähr 50 bis ungefähr 1000 Gew.<£, bezogen auf das Gewicht der alkalischen
Protease, einverleibt und dass das Enzymgemisch
weiterhin ein zusätzliches Enzym enthalten kann, das durch den reversiblen Inhibitor nicht nachteilig beeinflusst wird
und Calciumionen in einer Konzentration im Bereich von ungefähr 10~ M bis ungefähr 10 M verwendet werden, um die Stabilisierung der neutralen Proteaseaktivitat zu unterstützen.
3. "^erfahren gemäss Anspruch 1 dadurch gekennzeichnet, dass
man den p-T-"'ert des Gemische auf einen v/ert zwischen ungefähr
5,5 und ungefähr 6 zur weiteren unterstützung der Stabilisierung
der neutralen Proteaseaktivitat verringert und dass man als reversiblen Inhibitor den Saft von gemahlenen
hellfleischigen Kartoffeln verwendet.
- 12 -
1/16
4. Verfahren gemäss Anspruch 1 dadurch gekennzeichnet, dass
man als neutrales und alkalisches Proteasegemisch ein B. sub·
tills Enzymgemisch verwendet, das gegebenenfalls Amylase
enthalten kann.
enthalten kann.
{5} Stabilisierte Enzymzubereitung gekennzeichnet durch ein
CJ
G-emisch von neutraler Protease und alkalischer Protease und mit dem G-ehalt von ungefähr 50 bis 1000 Gew.$, bezogen auf
das G-ewicht der alkalischen Protease, eines reversiblen alkalischen Proteaseinhibitors, von ungefähr 10 bis unge«
fahr 10 M Calciumionen, um dadurch die Stabilisierung der neutralen Proteaseaktivitat zu unterstützen und den pH-Wert des Gemische auf einen Wert zwischen ungefähr 5,5 und ungefähr 6 zur weiteren Unterstützung der Stabilität der neutralen Proteaseaktivitat einzustellen und dass die Zubereitung gegebenenfalls Amylase enthalten kann.
CJ
G-emisch von neutraler Protease und alkalischer Protease und mit dem G-ehalt von ungefähr 50 bis 1000 Gew.$, bezogen auf
das G-ewicht der alkalischen Protease, eines reversiblen alkalischen Proteaseinhibitors, von ungefähr 10 bis unge«
fahr 10 M Calciumionen, um dadurch die Stabilisierung der neutralen Proteaseaktivitat zu unterstützen und den pH-Wert des Gemische auf einen Wert zwischen ungefähr 5,5 und ungefähr 6 zur weiteren Unterstützung der Stabilität der neutralen Proteaseaktivitat einzustellen und dass die Zubereitung gegebenenfalls Amylase enthalten kann.
109841/1662
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US2084570A | 1970-03-18 | 1970-03-18 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
DE2112730A1 true DE2112730A1 (de) | 1971-10-07 |
Family
ID=21800902
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
DE19712112730 Pending DE2112730A1 (de) | 1970-03-18 | 1971-03-17 | Stabilisierung von neutraler Protease in alkalische Protease enthaltenden Enzymegemischen unter Verwendung alkalischer Proteaseinhibitoren |
Country Status (4)
Country | Link |
---|---|
BE (1) | BE764370A (de) |
DE (1) | DE2112730A1 (de) |
FR (1) | FR2084751A5 (de) |
NL (1) | NL7103489A (de) |
Families Citing this family (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4511490A (en) * | 1983-06-27 | 1985-04-16 | The Clorox Company | Cooperative enzymes comprising alkaline or mixtures of alkaline and neutral proteases without stabilizers |
DE3614838A1 (de) * | 1986-05-02 | 1987-11-12 | Boehringer Mannheim Gmbh | Stabilisierte nad(p)h-abhaengige loesliche nitratreduktase verfahren zu ihrer herstellung und ihre verwendung |
-
1971
- 1971-03-16 NL NL7103489A patent/NL7103489A/xx unknown
- 1971-03-17 DE DE19712112730 patent/DE2112730A1/de active Pending
- 1971-03-17 FR FR7109343A patent/FR2084751A5/fr not_active Expired
- 1971-03-17 BE BE764370A patent/BE764370A/xx unknown
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
FR2084751A5 (en) | 1971-12-17 |
BE764370A (fr) | 1971-09-17 |
NL7103489A (de) | 1971-09-21 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
EP0007058B1 (de) | Verfahren und Reagens zur Bestimmung von Glycerin | |
DE2954076C2 (de) | ||
DE2904305C2 (de) | Reagens zur Lipasebestimmung und Verfahren zu seiner Herstellung | |
Kuwashima et al. | Biochemical changes in unilateral brain injury in the rat: A possible role of free fatty acid accumulation | |
EP0012184A1 (de) | Hämolysierlösung, Verwendung einer solchen für die Bestimmung von Glucose im Blut, und Hämolyseverfahren | |
DE2000127B2 (de) | Verfahren zur quantitativen Spaltung und zum quantitativen Nachweis von Tri-, Di- und Monoglyceriden | |
DE2112730A1 (de) | Stabilisierung von neutraler Protease in alkalische Protease enthaltenden Enzymegemischen unter Verwendung alkalischer Proteaseinhibitoren | |
Lynn Jr et al. | Role of EDTA and metals in mitochondrial contraction | |
DD159781A5 (de) | Verfahren und mittel sowie deren verwendung zur stabilisierung der alkalischen phosphatase | |
DE3918761C1 (de) | ||
EP0152091A2 (de) | Verfahren zur Verbesserung der selektiven Aktivitätshemmung von humaner Pankreas- und Speichelamylase sowie eine hierfür geeignete Inhibitorzubereitung | |
DE2804356C2 (de) | Verfahren zur Hydrolyse von proteingebundenen Cholesterinestern | |
DE2112727A1 (de) | Erhaltung der neutralen Proteaseaktivitaet in alkalische proteaseenthaltenden Enzymgemischen unter Verwendung natuerlicher competitiver Proteinsubstrate | |
DE1642654C3 (de) | Verfahren zur mikrobiologischen Herstellung eines stabilen gereinigten Lipase-Präparates und pharmazeutisches Mittel, welches dieses enthält | |
DE652236C (de) | Behandlung pflanzlicher Phosphatide mit Alkohol und Wasser | |
DE2239210C3 (de) | Verfahren zur Herstellung von a- Galactosidase, die eine starke a- Galactosidase-Aktivität und eine äußerst geringe Invertase-Aktivität aufweist, und deren Verwendung zur Zerlegung von Raffinose | |
DE1617279A1 (de) | Verfahren zur Herstellung pharmazeutischer Praeparate zur Verhinderung der Bildung von Blutgerinnseln | |
AT125192B (de) | Verfahren zur Herstellung von Hefe hoher enzymatischer Aktivität. | |
AT137659B (de) | Verfahren zum Entschlichten und Entfernen stärkehaltiger Appreturen von Texilien aller Art. | |
DE4011379C1 (de) | ||
Champion et al. | The role of cyclic GMP in the action of carbamylcholine on the cyclic AMP level in the dog thyroid | |
DE628319C (de) | Enzymatische Entschlichtung staerkegeschlichteter Ware | |
DE729842C (de) | Verfahren zur Vorbereitung von Sulfitablaugen fuer die Futter- und Naehrhefeerzeugung | |
AT155070B (de) | Mittel zur Förderung des Pflanzenwachstums. | |
DE674184C (de) | Verfahren zum Behandeln von Textilien mit Amylasen |