DE2065848A1 - Verfahren zur herstellung von steroid-glykosiden mit 2-desoxyzuckerresten - Google Patents

Description

u.Z.: F 091 Div. I, (Vo/Lu/ko)

Case: F 1565 TW

SHIONOGI & CO., LTD. Osaka, Japan

" Verfahren zur Herstellung von Steroid-Glykosiden . mit 2-Desoxyzuckerresten "

Priorität: 19. März I969, Japan, Nr. 2099^/69

Es sind bereits einige Verfahren zur selektiven Hydrolyse von Glykosiden der 2-Desoxyzucker bekannt. Beispielsweise beschreibt A. Stoll "Helvetica Chimica Acta" 3d. lS (1935), S. 120, eine selektive enzymatische Hydrolyse von Digilaniden zur Abspaltung der Glucoseeinheit von der glykosidischen Kette. F. Kaiser und Mitarbeiter beschreiben in Liebigs Annalen der Chemie, Bd. 603 (1957), S, 75, eine nicht selektive saure Hydrolyse von Cardenolid-tridigitoxosiden mit Säuren und anschließender wiederholter, langwieriger Verteilerchroniatographie. Diese Verfahren sind jedoch für eine präparative oder gewerbliche Anwendung wegen ihrer ilichtselektivität, ihrer niedrigen Ausbeute, ihrer um-

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ständlichen Verfahren, ihres umfangreichen Volumens der Reaktionsmischung, der Ähnlichkeit der physikalischen Konstanten der Produkte und anderer Schwierigkeiten unzulänglich.

Verfahren zur Hydrolyse von Glykosiden sind an sich bekannt; vgl. Journal of the American Chemical Society, Bd. 8l (1959), S. 2176, Bd. 69 (19^7), S..246, und Bd. 58 (1936), S. 373; I. J. Goldstein et al. in Methods in Carbohydrate Chemistry, 3d. V, S. 361 (1965); Organic Reactions, Bd. 2 (1944), S. 34l; Dugan in Canadian Journal of Chemistry, Bd. 43 (1965)_t S. 2033, und die darin angegebenen Literaturhinweise. Diese Verfahren, beziehen sich jedoch nicht auf Glykoside von 2-Desoxy-Zueker und

normalen sind ferner auf eine vollständige Hydrolyse von gegenüber^Sydrolysebedingungen widerstandsfähigen Glykosiden gerichtet. Bisher waren die Reaktionsbedingungen ziemlich drastisch und gaben keinen Hinweis auf eine selektive Hydrolyse in Bezug auf die Zuckereinheiten.

Der vorliegenden Erfindung liegt die Aufgabe zugrunde, ein neues Verfahren zur selektiven Hydrolyse von Glykosiden mit 2-Desoxy-Zuekereinheiten als Zuckerrest zu schaffen. Dabei soll

1) die Empfindlichkeit bei der Hydrolyse einer durch Glykolspaltung zu entfernenden bestimmten Zuckereinheit erhöht werden,

2) nur eine endständige 2:-De so xy-Zucke reinheit angegriffen werden,

3) eine höhere Ausbeute erzielt werden und

4) ein leicht zu handhabendes Verfahren angestrebt werden.

- r

Die Lösung der gestellten Aufgabe besteht auf dem überraschenden Befund, daß die nach der Spaltung einer Verbindung der allgemeinen Formel II

CH

.- OH

(ID

in der X, FL , Rp, R und η die in Anspruch 1 angegebene Bedeutung besitzen, mit einem zur Spaltung von Glykolen an sich bekannten Oxidationsmittel erhaltenen Produkte, die gegebenenfalls anschließend reduziert werden, sehr leicht und selektiv hydrolysiert werden können.

Die Erfindung betrifft somit den in den Ansprüchen gekennzeichneten Gegenstand.

Beim Verfahren vorliegender Erfindung werden daher in einer ersten Stufe die Glykoside einer Glykolspaltung unterworfen, wobei ein Dialdehyd oder dessen Acetale entstehen, diese Produkte gegebenenfalls zu den Dimethylolverbindungen reduziert und dann die Produkte der ersten Stufe in einer zweiten Stufe ,unter extrem milden Bedingungen hydrolysiert. Diese milden Be-'

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r V -ι

dingungen gestatten die mögliche Existenz einer instabilen Gruppe im anderen Teil der Glykosidmoleküle.

In den allgemeinen Formeln I und II bedeutet X z. B. die <X-, ß- oder ^-Butenolid-Gruppe, die Butanolid-Gruppe, die 2-Furylgruppe oder vorzugsweise die 3-Purylgruppe.

Der Acylrest R^ und die Acyloxyreste R^ und R₂ sind z. B. Alkanoylreste, wie die Formyl-, Acetyl-, Propionyl-, Butyryl-, önanthoyl-, Steäroyl-, Trimethylacetyl-, tert.-Buty!acetyl-, Cyclohexylcarbonyl-, Apocamphan-1-carbonyl-, Adamantanearbonyl- oder die Cyclopentanalkanoyl-Gruppe, ein ungesättigter aliphatischer Acylrest, wie die Crotonylgruppe, ein substituierter aliphatischer Acylrest, wie der Halogenacetylrest, die Glycyl-, Lactyl-, Bernsteinsäuremonoacyl-, Phenylpropionyl-, Cinnamoyl-Gruppe oder ein gegebenenfalls substituierter Phenoxyacetylrest, ferner ein gegebenenfalls substituierter aromatischer Acylrest, wie die Benzoyl-, Nitrobenzoyl-, Methoxybenzoyl-, .. Methylbenzoyl-, Naphthalincarbonyl-, Nicotinyl- oder die Puroyl- W Gruppe oder ein Halogenbenzoylrest, oder auch ein anorganischer Acylrest, wie die Kohlensäure-, Schwefelsäure- oder Phosphorsäuregruppe.

Spezielle Beispiele für Verfahrensgemäß eingesetzte Ausgangsverbindungen sind
Digitoxin,
Digoxin,
Gitoxin,

L J

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; "I" ZOB5848 ~!

Diginatin,

Digitoxigenin-bis-digitoxosid,

Digoxigenin-bis-digitoxosid,

Gitoxigenin-bis-digitoxosid,

Diginatigenin-bis-digitoxosid,

3ß-(ß-D-Digitoxosyl-ß-D-digitoxosyl-ß-D-digitoxosyl)oxy-17ß-

(3-furyl)-5ß,l¹*ß-androstan-l4-ol,
3ß-(ß-D-Digitoxosyl-ß-D-digitoxo3yl-ß-D-digitoxosyl)oxy-17ß-

(3-furyl)-5ß,lⁱlß-androstan-12ß,lii-diol_J 3ß-(ß-D-Digitoxosyl-ß-D-digitoxosyl-ß-D-digitoxosyl)oxy-17ß-

(3-fury1)-5ß,I4ß-androstan-l4,löß-diol, 3ß-(ß-D-Digitoxosyl-ß-D-digitoxosyl-ß-D-digitoxosyl)oxy-17ß-

3ß-Z^-0-(ß-D-Digitoxosyl)-ß-D-digitoxosy3joxy-17ß-(3-i"uryl)-

5ß,l4ß-androstan-l4~ol,
3ß-£4-O-(ß-D-Digitoxosyl)-ß-D-digitoxosy]Joxy-17ß-(3-furyl)-

3ß-Z?l-0-(ß-D-Digitoxosyl)-ß-D-digitoxosyl7-oxy-17ß-(3-i'uryl)-:

5ß,l4ß-androstan-l4,l6ß-diol_J
3ß-^-0-(ß-D-Digitoxo3yl)-ß-D-digitoxosyl7oxy-17ß-(3-furyl)-

5ß,l4ß-androstan-12ß,l4,l6ß-triol
und deren Ester.

Die erste Stufe des Verfahrens der Erfindung besteht in einer Glykolspaltung der Verbindung der allgemeinen Formel II an der endständigen Zuckereinheit mit gegebenenfalls anschließender Reduktion. Die Reaktion der ersten Stufe wird durch das nachstehende Reaktionsschema veranschaulicht.

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⁴ Ή

-S-

Glycol, _ί
_Spaltungs_~ _mc* HO' Γ"* ^ύΗ "..l^tel" · OHC-⁷ ' ^0H

CIL

und/oder \

ibiäldehyd)/ (2);

-CH

' und/oder

. OHC-CH₂ 0

isoliert _v !

C ^lcind · j

• S iaentifΓ- · ^: - ziert

(4)

HOCH

( £C£*eberier{f alls ) ·..

OH ^l

XDimethyΙοί)

Die Verbindung der Teilformel (1) reagiert mit dem Glykolspaltungsmittel unter wesentlich milderen Bedingungen als die entsprechenden 2-hydroxylierten Zuckerverbindungen. Die erhaltenen Produkte sind "Dialdehyde" (2) und deren Acetale, die durch die Teilformeln (3) und (4) veranschaulicht werden. Die Dialdehyde (2) und auch deren Acetale können mittels üblicher Reduktionsmittel in hoher Ausbeute zu "Dimethylolen" (5) reduziert werden*

Spezielle Beispiele für verfahrensgemäß eingesetzte Glykolspaltungsmittel sind Chromsäure, Permanganate, Salpetersäure, Perschwefelsäure, Kupfer( 'II)-hydroxid, Wismutate, Manganacetat, Jodosobenzol-alkanoate, Osmiumtetroxid, Rutheniumtetroxid und

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vorzugsweise Bleitetraacetat, Perjodate oder Perjodsäure. Die Spaltungsmittel kann man in verschiedenen Lösungsmitteln anwenden. Beispiele hierfür sind Kohlenwasserstoffe₄ wie Leichtbenzin, Petroläther, Heptan, Hexan, Benzol, Toluol, Xylol oder Cyclohexan, halogenierte Kohlenwasserstoffe, wie Tetrachlorkoh-

oder Tetrachloräthan, lenstoff, Chloroform, Methylenchlorid, Dichloräthan /Ither, wie Diäthyläther, Methylbutyläther, Tetrahydrofuran, Tetrahydropyran, Dioxan oder Äthylenglykoläther, Ester, wie Äthylacetat oder Butylacetat, Ketone, wie Aceton, Methyläthylketon oder Cyclohexanon, Alkohole, wie Methanol, Äthanol, Butanol oder m Octanol, Carbonsäuren, wie Essigsäure, Propionsäure oder Ameisensäure, Basen, wie Pyridin, Collidin oder Chinolin, oder ferner andere Lösungsmittel, wie Dimethylformamid, Dimethylsulfoxid, Wasser oder auch Mischungen der genannten Lösungsmittel. Gewöhnlich werden Bleitetraacetat in nicht-polaren Lösungsmitteln und Perjodsäure und Perjodate in polaren Lösungsmitteln angewendet. Gegebenenfalls kann man andere Lösungsmittel zufügen, um die Reaktionsteilnehmer zu lösen. Im Falle der Verwendung von Perjodaten oder Perjodsäure als Glykolspaltungsmittel und der Verwendung von verdünntem Alkohol als Lösungsmittel können sich Salze der Perjodsäure in dem Medium als Kristalle abscheiden und durch einfache Filtration entfernt werden. Man kann dem Reaktionsmedium zur Neutralisierung saurer Produkte Basen hinzufügen. Die Reaktion kann bei niedrigen oder erhöhten Temperaturen, durchgeführt werden. Die Menge des Glykolspaltungsmittels gegenüber dem Ausgangsraaterial beträgt vorzugsweise 1 bis 5 - Mol-Äquivalente, obwohl man ohne Nachteil mehr Spaltungsmittel . einsetzen kann. Die Endprodukte kann man nach an sich bekannten

L J

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Verfahren isolieren, ζ. B. durch Verdünnen, Konzentrieren, Extrahieren, Filtrieren und dergleichen. Sie können durch übliche Verfahren gereinigt werden, wie Umkristallisieren oder Chromatographieren. Die Produkte kann man dem Verfahren der nächsten Stufe ohne weitere Reinigung unterwerfen· Die so erhaltenen Produkte sind "Dialdehyde"der Teilformel (2) oder deren Acetale, wie sie durch die Teilformeln (3) und (4) dargestellt sind. Zur gegebenenfalls anschließenden Reduktion kann man geeignete Mittel zur Reduktion der "Dialdehyde" der Teilformel (2) oder deren Acetale der Teilformeln (3) und (4) zu den entsprechenden "Dimethylolen" der Teilformel (5) verwenden, vorausgesetzt, daß diese Mittel am anderen Teil des Grundmoleküls keine irreversib- ' len Veränderungen hervorrufen. Beispiele bevorzugter Reduktionsmittel beim erfindungsgemäßen Verfahren sind Borhydridverbindungen, wie Kaliumborhydrid, Natriumborhydrid, Lithiumborhydrid, Alkylborhydride, Borhydrid, Pyridinboran oder Alkylaminborane, Aluminiumhydridkomplexe, wie Lithiumaluminiumhydrid, Lithiumalkylaluminiumhydride, Lithiumalkoxyaluminiumhydrxde, Natriumaluminiumhydrid, Alkylaluminiumhydride oder Alkoxyaluminiumhydride, oder ferner verschiedene Hydrierungskatalysatoren, wie Kobalt-Kupfer-Chromit, Ruthenium-Kohle, Palladium-Kohle oder Palladium-Calciumcarbonat. Auch kann man die Reduktion nach Meerwein-Pondorf oder Meerwein-Schmidt durchführen. Die Reduktion kann in einem Lösungsmittel, wie Kohlenwasserstoffen, halogenierten Kohlenwasserstoffen, Äthern, Alkoholen, Estern, Carbonsäuren, Basen oder Wasser, bei erhöhter oder erniedrigter Temperatur ausgeführt werden. Bei der gegebenenfalls angevrendeten Reduktion beträgt die Menge.des Reduktionsmittels etwa 0

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bis 1 Mol-A'quivalent oder mehr. Bevorzugte Ergebnisse werden erhalten, wenn man 1 bis 10 Mol-Äquivalente von beispielsweise Natriumborhydrid als Reduktionsmittel verwendet. Die so hergestellten Produkte kann man nach an sich bekannten Verfahren isolieren, wie Zersetzen des ASdukts, Ausfällen durch Zugabe von unlöslichen Lösungsmitteln, Filtrieren, Verdünnen, Extrahieren, Waschen, Trocknen, Verdampfen der Lösungsmittel, Absorbieren oder Eluieren» Auch kann man mehrere dieser Verfahren anwenden. Das Verfahren über den Umweg der Reduktion ist der unmittelbaren Hydrolyse der "Dialdehyde" (2) oder deren Acetale, d. h. der Verbindungen der Teilformeln (3) und (4) tatsächlich j äquivalent und ist dem letztgenannten insofern überlegen,daß man weniger Nebenreaktionsprodukte, eine höhere Reinheit des Produktes, eine leichter gereinigte, höhere Ausbeute, usw. erzielt, ohne Rücksicht auf die Verwendung eines teuren Reduktionsmittels.

Die ziieite Stufe des Verfahrens vorliegender Erfindung besteht in der Hydrolyse der Produkte der ersten Stufe* Die Reaktion der zweiten Stufe kann durch das nachstehende Reaktionsschema wiedergegeben werden:

»Dialdohyd» (2) ß-Eliminierung - CH*

oder dessen Acetale und/oder Hydrolyse - -JV_-. ■>

O) oder (4) der. Acetale nin__/ f '

Λ—''J i

_flT>, ^, ■ „ , „ Hydrolyse der · „I

"Dimethylol" (5) Acetallruppen" " / ^H0 , ;

■ - ⁽⁶⁾ i

Die "Dialdehyde" (2) oder deren Acetale (3) und (4) und die "Dimethylole" (5) werden unter dem Einfluß der verschiedensten

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Γ , ' ΛΟ "I

Hydrolysierungsmittel weit milder-als die entsprechenden 2-Nor-Verbindungen hydrolysiert, die sich von 2-hydroxylierten Zuckereinheiten ableiten. Die bekannten, auf die· 2-hydroxylierten Zucker angewendeten Verfahren sollten die Reaktion unter einer strengeren Bedingung als beim Verfahren vorliegender Erfindung durchführen. Z. B» ist die Hydrolysebedingung bei Goldstein 0,1 bis 0,5 η Salzsäure β bis 8 Stunden bei Raumtemperatur, die von Dugan Erhitzen mit 5 prozentigem Kaliumhydroxid und die von Kubota (Tetrahedron, Bd. 24 (1968), S. 675) einstündiges Erhitzen unter Rückfluß mit 3 % Kaliumhydroxid in Äthanol und 30minütiges Erhitzen unter Rückfluß bei.6O°C mit 0,1 % p-Toluolsulfonsäure in Dioxan. Unter diesen Bedingungen zeigen empfindliche Gruppen, wie die 2-Desoxy-Zuckereinheiten, die 14-Hydroxygruppe oder der 17-ungesättigte Oxaring, irreversible Veränderungen, z. B. Bildung; von Iso-cardenoliden, Hydrolyse an einer unerwünschten Stelle, Dehydrierung und dergleichen. Wenn man dagegen die Hydrolyse mit 0,0065 η Salzsäure bei Raumtemperatur oder mit 0,1 % Kaliumbicarbonat bei Raumtemperatur ausführt, werden die Verbindungen (2), (3), (4) und (5) in kurzer Zeit hydrolysiert und man erhält die Verbindungen der Teilforniel (6). Unter den gleichen Bedingungen werden die Dialdehyde, deren Acetale oder die Dimethylole, die sich von 2-hydroxylierten endständigen Zuckereinheiten ableiten, d. h. solchen, die sich vom Purpureaglyl-cosid A durch Reaktion mit Natriumperjodat ableiten, nicht hydrolysiert. Man erhält das-unveränderte Ausgangsmaterial zurück. Die Reaktionsfähigkeit der zu hydrolysierenden Verbindungen fällt in die Reihenfolge "Dirne thylol", "Dialdehyd" und "Dimethyloldiacetat". Aus diesen An-

r . 1i -ι

gaben kann man schließen, daß im Falle der Dimethylole eine gewisse Beteiligung der freien, zum ReaktionsZentrum in Nachbarschaft stehenden Hydroxylgruppe stattfindet. Bei der höheren Reaktionsfähigkeit des Dialdehyds gegenüber dem Dimethyloldiacetat wird vermutet, daß es sich hier um das Ergebnis der Existenz der Carbonylgruppe in ß-Stellung zu dem zu hydrolysierenden ReaktionsZentrum handelt. Die Hydrolyse dieser Stufe kann durch die Wirkung eines Mittels erfolgen, das die Acetale zersetzt und die Alkohole gewinnen läßt. Reaktionsmittel in dieser Stufe können Säuren, Basen oder andere Reaktionsmittel mit äquivalentem Effekt sein, beispielsweise ein mit Ketonen reagierendes Mittel, das eine ß-oxydierte Carbonylverbindung in eine o<,ß-ungesättigte Oxoverbindung oder ein Acetal in eine Alkohol- und Ketonbindung mit dem Ketonreaktionsmittel überführt. Die Säuren können schwache Säuren, wie Phenole, aromatische oder alipahtische Carbonsäuren, Silicagel, saure Salze, wie Natriumbisulfat, Pyridinsulfat oder Ammoniumchlorid, oder starke Säuren, wie Salzsäure, Salpetersäure, Phosphorsäure oder Perchlorsäure sein/ Die Basen können schwache Basen, wie Aluminiumhydroxid, Calciuracarbonat, Kaliumbicarbonat, Natriumbicarbonat, Lithiumbicarbonat Natriumacetat, Kaliumacetat, Kaliumcarbonat, Natriumcarbonat, Lithiumcarbonat, Ammoniumhydroxid, Pyridin oder Trialkylamine, oder starke Basen sein, wie Xaliumhydroxid, Natriumhydroxid, Lithiumhydroxid oder Tetraalkylammoniumhydroxide. Die mit Ketonen reagierenden Mittel können Hydrazin, Phenylhydrazin, 2,4-Dinitro-pheny!hydrazin, Carbazid oder Hydroxylamin sein. Diese Hydrolysemittel kann man mit den Ausgangsmaterialien dieser JStufe in Anwesenheit eines Lösungsmittels, wie Wasser oder

L -J

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organischen Lösungsmitteln, in Berührung bringen. Bevorzugte · Säure- oder Basenkonzentrationen sind 0,0001 bis 30 %_s bezogen auf die Lösungsmittel, Bevorzugte Ergebnisse erhält man im Falle von 0,1 bis 0,0001 η Mineralsäure oder-Behandlung in einem sauren Medium von pH 1 bis- 4 bei Raumtemperatur über 0,5 bis 48 Stunden. Eine höhere Temperatur kann die Reaktionszeit ab-» kürzen. Die Produkte dieser Stufe kann man mittels eines üblichen Verfahrens, wie Ausfällen, Filtrieren, Verdünnen, Extrahieren, Waschen, Trocknen, Absorbieren oder Eluieren oder deren Kombination mit gegebenenfalls anschließender Reinigung, z. B. durch Chromatographieren oder Umkristallisieren, erhalten. Beim Verfahren vorliegender Erfindung erhält man im Falle der Hydrolyse von Verbindungen der Teilformel (2) mit Säuren, 3asen oder Ketonreaktionsmitteln und im Falle der Hydrolyse von Verbindungen der Teilformel (5) mit Säuren bevorzugte Ergebnisse.

Nach dem Verfahren vorliegender Erfindung kann man auch vorteilhaft die nachstehend aufgeführten Verbindungen herstellen:

Digitoxigenin-bis-digitoxosid,

Digoxigenin-bis-digitoxosid,

Gitoxigenin-bis-digitoxosid,

Diginatigenin-bis-digitoxosid,

Digitoxigenin-mono-digitoxosid,

Digoxigenin^mono-digitoxosid,

Gitoxigenin-mono-digitoxosid oder

Diglnatigenin-mono-digitoxosid,

3ß-(ß-D-Digitoxosyl)-oxy-17ß-(3-furyl)-5ß,l4ß-androstan-l4-ol,-

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Γ 43 Π

-**-■ 2065843

3a-(ß-D-DIgitoxosyl)-oxy-17ß-(3-furyl)-5ß,lⁱiß-androstan-12i5,

l4-diol,
3ß-(ß-D-Digitoxosyl)-oxy-17ß-(3-furyl)-5ß,l4ß-androstan-l4,l6ß-

diol,
3ß-(Ä-D-DIgitoxosyl)oxy-17ß-(3-furyl).-5ß-l4ß-androstan-12ß,l4, l6ß-triol,

3ߣI[_0-(ß-D-Digitoxosyl)-ß-D-digitoxosylJoxy-17ß-(3-i'uryl)-5ß,

I4ß-androstan-i4-ol,
3ß-Z#-0-(ß-D-Digitoxosyl)-ß-D-digitoxosy2j-oxy-17ß-(3-furyl)-

' 5ß,l4ß-androstan-12ß,l4-diol,
3ß-Z¹i-Ö-(ß-D-Digitoxosyl)-ß-D-digitoxosyl7-oxy-17ß-(3-furyl)~

5ß,l4ß-androstan-l4,l6ß-diol,
3ß-Z."4-0-(ß-D-Digitoxosyl)-ß-D-digitoxosyaj-oxy-17ß-(3-furyl)-

5ß,.l4ß-androstan-12ß_fl4,l6ß-triol
und deren Ester.

Die nach dem Verfahren vorliegender Erfindung erhältlichen Verbindungen sind Cardiotonika und Diuretika.

Die Beispiele erläutern die Erfindung.

Beispiel 1

(A) Zu einer gerührten Lösung von 1 g Digitoxin in 30 ml 95prozentigem Äthanol gibt man 1 g Natriumperjodat in 10 ml Wasser. Nach einer Stunde wird das Reaktionsgemisch filtriert, um Feststoffe zu entfernen. Das Piltrat wird bei einer Temperatur unterhalb 50⁰C konzentriert. Das Konzentrat extrahiert man mit Chloroform. Die Extraktlösung wird mit Wasser gewaschen, L _J

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über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet und unter vermindertem Druck eingedampft. Der weiße pulverförmige Rückstand des Dialdehyde zeigt im Dünnschichtchromatogramm. einen einzigen Fleck. Ausbeute 0,99 g. CoJ^.i + 3,¹J⁰ (c = O,4?8, Methanol). Positiv gegen Tollen-Reagens. « ..

(B-I) Zu einer Lösung, von 300 mg des rohen Dialdehyds (A) in 30 ml Methanol gibt man 4,5 al 0,05 η Salzsäure und hält die Lösung 2k Stunden bei Raumtemperatur, Man neutralisiert das Reaktionsgemisch mit 5prozentiger wäßriger Natriumbicarbonatlösung, dampft zur Entfernung des flüchtigen Lösungsmittels bei einer Temperatur unterhalb 50⁰C ein und extrahiert mit Chloroform. Der Chloroformextrakt wird mit Wasser gewaschen, über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet und zur Entfernung des Losungsmittels eingedampft, Nach der Reinigung von 225 mg Rohprodukt mittels Dünnschichtchromatographie an Silicagel unter Verwendung einer Mischung von Chloroform und Aceton (2 .: 1) als Entwicklungsmittel und nach Umkristallisieren aus einer Mischung von Sthylacetat und η-Hexan erhält man 12% mg Digitoxigeninbisdigitoxosid vom Fp. 223 bis 23O°C. Ausbeute: 50 %, bezogen auf Digitoxin. ^ι + 7,3° (c = 0,833* Methanol)

UV: /V. ^C2^H5^OH 217,5 Hai. (£= I¹* 200).
max

	66	C	8	H
ber*:	65	,22;	S	• 57;
gef.:-	,96;	,53-

2065843 -¹

(B-2) Man hält eine Lösung von 200 mg des rohen Dialdehyds (A) in 20 ml Aceton, das O₄I % Kaliumbiearbonat enthält, 2k Stunden bei Raumtemperatur. Das Reaktionsgemisch wird mit 5prozentiger wäßriger Essigsäure neutralisiert, unter vermindertem Druck konzentriert und danach mit Chloroform extrahiert. Die Extraktlösung wird mit Wasser gewaschen, über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet und zur Entfernung des Lösungsmittels eingedampft. Nach der Reinigung von 166 mg Rückstand mittels Dünnschichtchromatographie an Silicagel unter Verwendung einer Mischung von Chloroform und Aceton (2 : 1) als Entwicklungsmittel und nach Umkristallisieren aus einer Mischung von Xthylacetat und η-Hexan erhält man 83 mg Digitoxigenin-bisdigitoxosid vom Pp. 227 bis 230°C. Ausbeute: 50 %, bezogen auf Digitoxin.

(B-3) Eine Lösung von 200 mg des rohen Aldehyds (A) in einem Gemisch von 2. ml Chloroform und 6 ml Benzol vermischt man mit 8 g neutralem Aluminiumoxid und hält das Gemisch 20 Stunden bei Raumtemperatur. Dann wird das Gemisch zur Entfernung der Pestsubstanz filtriert und die Festsubstanz dreimal mit Je 100 ml einer Mischung aus Methanol und Chloroform (1 : 1) gewaschen. Das Piltrat und die Waschlösungen werden vereinigt und zur Entfernung der Lösungsmittel eingedampft. Nach der Reinigung von 137 mg Rückstand mittels DünnschichtChromatographie an Silicagel unter Verwendung einer Mischung von Chloroform und Aceton (2 : 1) und nach dem Umkristallisieren aus wäßrigem Methanol erhält man To mg Digitoxigenin-bisdigitoxosid vom Pp» 227 bis ,23O⁰C. Ausbeute: H5 %_t bezogen auf Digitpxin.

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(Β-4) Man vermischt eine gerührte Lösung von 500 mg des rohen Dialdehyds (A) in 50 ml 95prozentigem Methanol mit 250 mg Natriumborhydrid und hält das Gemisch 1 Stunde bei Raumtemperatur. Das Reaktionsgemisch wird mit 5prozentiger wäßriger Essigsäure neutralisiert, unter vermindertem Druck eingedampft und dann mit Chloroform extrahiert. Der Extrakt wird mit Wasser gewaschen, über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet und zur Entfernung des Lösungsmittels eingedampft. Nach der Reinigung von 503 mg Rückstand mittels Dünnschichtchromatographie erhält man das Dimethyl als einzigen Fleck. Das Produkt ist negativ gegen Tollenreagens« Das NMR-Spektrum beweist die Struktur. Man vermischt eine Lösung von 450 mg des rohen Dirnethylols in 30 ml Methanol mit 4,5 ml 0,05 η Salzsäure und hält die Lösung 3 Stunden bei Raumtemperatur. Das Reaktionsgemisch wird mit 5prozentiger wäßriger Natriumbicarbonatlösung neutralisiert, unter vermindertem Druck eingedampft und dann mit Chloroform extrahiert. Der Extrakt wird mit Wasser gewaschen, über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet und dann zur Trockene eingedampft. Nach der Reinigung des Rückstandes durch Umkristallisieren aus einer Mischung von Äthylacetat und η-Hexan erhält man 290 mg Digitoxigenin-bisdigitoxosid. Ausbeute: mehr als 80 %_> bezogen auf Digitoxin.

(B-5) Man erhitzt ein Gemisch aus 200 mg rohem Dialdehyd (A), 12 ml 95prozentigem Äthanol, l6o mg Phenylhydrazin-hydrochlorid, 240 mg Natriumacetat-trihydrat und 4 ml Wasser 6 Stunden unter Rückfluß. Das Reaktionsgemisch wird unter vermindertem Druck konzentriert und mit Chloroform extrahiert. Der Extrakt wird mit 0,5prozentiger Salzsäure und Wasser gewaschen, getrocknet und

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eingedampft. Man erhält 230 mg Rückstand, der nach Umkristallisieren aus einer Mischung von Aceton und Hexan 32 mg Digitoxigenih-bisdigitoxosid vom Pp. 227 bis 23O⁰C liefert. Ausbeute: 18,8 %_t bezogen auf Digitoxin.

Beispiel 2

Zu einer gerührten Lösung von 1 g Digoxin in einem Gemisch aus 20 ml Chloroform und 60 ml Methanol fügt man tropfenweise 10 ml einer lOprozentigen wäßrigen Natriumperjodatlösung hinzu und ^ rührt weitere 1,5 Stunden bei Raumtemperatur. Zur Entfernung der Festsubstanz wird das Gemisch filtriert und das Filtrat mit 10 ml Wasser verdünnt, zur Entfernung des flüchtigen Lösungsmittels unter vermindertem Druck eingedampft und mit Chloroform extrahiert. Der Extrakt wird mit Wasser gewaschen, über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet und eingedampft, wobei 1,0 g roher Dialdehyd zurückbleibt. Der rohe Dialdehyd wird in 120 ml 95p**ozentigem Methanol gelöst und mit 500 mg Natriumborhydrid unter Rühren bei Raumtemperatur vermischt. Die das Dimethylol enthalten-

de Mischung wird weitere 30 Minuten gerührt. Das Gemisch wird ^ auf einen pH 2,4 gegen Thymolblau-Reagenspapier mittels 0,1 η Salzsäure eingestellt und 3 Stunden bei Raumtemperatur gehalten. Das Reaktionsgemisch wird mit 5prozentiger Kaliumcarbonatlösung auf einen pH 6,8 bis 7j0 neutralisiert, zur Entfernung des flüchtigen Lösungsmittels eingedampft und dann mit Chloroform extrahiert. Der Extrakt wird mit Wasser gewaschen, über xvasserfreiem Natriumsulfat getrocknet und 2ur Entfernung des Lösungsmittels eingedampft. Nach der Reinigung von 707 mg Rückstand durch Umkristallisieren aus einer Mischung von Chloroform und

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Ai

Äther erhält man 587 mg reines Digoxigenin-bisdigitoxosid vom Pp. 195 bis 197°C. Ausbeute: 70,3 % der Theorie.

UV;JL^C2^H5^OH 218 mu (£= 14 500). IR; / ^CHC13 350O₃, 1782, max ·. max

1625 cm™¹.

	64	C	8	H
ber. s	,59;	8	S36S
gef·:	,06;

Beispiel 3

(A) Man fügt zu einer gerührten LSsung von 1 g Gitoxin in 250 ml einer Mischung von Chloroform und Methanol (1 ; I)-eine Lösung von 1 g Natriumperjodat in 10 ml Masser bei Raumtemperatur und hält das erhaltene Reaktionsgemisch 2 Stunden bei Raumtemperatur,, Das Reaktionsgemisch wird zur Entfernung von Pestsubstanz filtriert» unter vermindertem Druck zur Entfernung des flüchtigen Lösungsmittels konzentriert und dann mit Chloroform extrahierte Der Extrakt wird mit Wasser gewaschen, über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet und zur Trockene eingedampft<> Der Rückstand beträgt 98O mg, reduziert Tollenreagens und zeigt einen einzigen Fleck des Dialdehyds im Dünnsehichtchromatogrammo

(B-I) Man hält eine Lösung von 200 mg des rohen Dialdehyds (A) in 20 ml Aceton, das 0,1 % Kaliumbiearbonat enthält, 24 Stunden bei Raumtemperatur. Das Reaktionsgemisch wird mit 5prozentiger wäßriger Essigsäure neutralisiert, unter vermindertem Druck konzentriert und dann mit Chloroform"extrahiert. Der Extrakt wird

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"3

- **- . 7065848

mit Wasser gewaschen, über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet und unter vermindertem Druck zur Trockene eingedampft. Nach der Reinigung von 148 mg Rückstand mittels Dünnschichtchromatographie an Silicagel unter Verwendung eines Gemisches von Chloroform und Aceton (1 : 1) als Entwicklungsmittel und nach dem Umkristallisieren aus einer Mischung von Aceton und Hexan erhält man 69 mg reines Gitoxigenin-bisdigitoxosid vom Pp. 199 bis 2O1°C.

jp: + 18,6° (c = 0,591, Methanol). Ausbeute: 40,5 % aus Gitoxin.

(B-2) Man vermischt eine Lösung von 200 mg des rohen Dialdehyds (A) in 20 ml Methanol mit 3 ml 0,05 η Salzsäure und hält das Gemisch 24 Stunden bei Raumtemperatur. Die Reaktionsmischung wird mit 5prozentiger wäßriger Natriumbicarbonatl5sung neutralisiert, unter vermindertem Druck konzentriert und mit Chloroform extrahiert. Der Extrakt wird mit Wasser gewaschen, über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet und unter vermindertem Druck zur Trockene eingedampft. Nach der Reinigung von 139 mg Rückstand mittels Dünnschichtchromatographie an Silicagel unter Verwendung einer Mischung von Chloroform und Aceton (1:1) als Entwicklungsmittel und nach dem Umkristallisieren aus einer •Mischung von Aceton und Hexan erhält man 62 mg Gitoxigenin-bisdigitoxosid vom Fp. 199 bis 201⁰C. Ausbeute: 36,4 % aus Gitoxin,

- (B-3) Zu einer Lösung von 200 mg des rohen Dialdehyds (A) in . 20 ml Methanol fügt man 25 mg Natriumborhydrid und hält das Ge-

L 60982S/0S13 J

misch 1 Stunde bei Raumtemperatur. Das Reaktionsgemisch wird mit 5prozentiger wäßriger Essigsäure neutralisiert, unter vermindertem Druck eingedampft und dann mit Chloroform extrahiert. Der Extrakt wird mit Wasser gewaschen, über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet und unter vermindertem Druck zur Trockene eingedampft. Der Rückstand reduziert Tollenreagens nicht und zeigt im Dünnschichtchromatogramm einen einzigen Fleck der Dimethylol-Verbindung. Man vermischt eine Lösung von 200 mg des rohen Di- · methylols in 200 ml Methanol mit 3_s0 ml 0,05 η Salzsäure und hält das Gemisch 2 Stunden bei Raumtemperatur. Das Reaktionsgemisch wird mit 5prozentiger wäßriger Natriumbicarbonatlösung neutralisiert, unter vermindertem Druck konzentriert und dann mit Chloroform extrahiert. Der Extrakt wird mit Wasser gewaschen, über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet und zur Entfernung des Lösungsmittels eingedampft. Nach der Reinigung des Rückstandes mittels Dünnschichtchromatographie an Silicagel unter Verwendung einer Mischung von Chloroform und Aceton (1 : 1) als . Entwicklungsmittel und nach dem Umkristallisieren aus einer Mischung von Aceton und Hexan erhält man 130 mg Qitoxigenin-bisdigitoxosid vom Pp. 199 bis 215°C. Ausbeute: 78 % aus Gitoxin.

ZTvXJd³:+13,6° (c = 0,591, Methanol). UV: /t^C2^H5^OH 219 m/A.

max

( £ = 15 300). IR: { ^CHC13: 3500, 1735, 17¹JO, I630, 1625 cm"¹-.

max

^C35^H54°11^:

	64	C	H	36;
ber.:	. 64	,59;	8,	47.
ge f.:	,34;	8,

60982S/0913

Γ

- *> - ■ 7065848

Beispiel 4

Nach einem ähnlichen Verfahren wie im Beispiel 2 oxydiert man Diginatin mit Natriumperjodat zum Dialdehyd, reduziert anschließend mit Natriumborhydrid und hydrolysiert mit verdünnter Salzsäure. Man erhält Diginatigenin-bisdigitoxosid.

Beispiels

Zu einer Lösung von I¹JO mg Digitoxin-3^f-acetat in 8 ml 95prozentigem Äthanol fügt man l40 mg Natriumperjodat in 1,4 ml Wasser und hält das Gemisch 2 Stunden bei Raumtemperatur. Das Reaktionsgemisch wird zur Entfernung von Pestsubstanz filtriert, zur Entfernung des flüchtigen Lösungsmittels konzentriert und dann mit Chloroform extrahiert. Der Extrakt wird mit Wasser gewaschen, über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet und unter vermindertem Druck eingedampft. Man erhält l40 mg eines weißen pulverförmigen Dialdehyds, der Tollenreagens reduziert und das charakteristische NMR-Spektrum bei 0,3Of zeigt. Man vermischt eine Lösung von i40 mg des rohen Dialdehyds in 20 ml Methanol, mit 3 ml 0,05 η Salzsäure und hält die Mischung 24 Stunden bei % Raumtemperatur, Das Reaktionsgemisch wird mit 5prozentiger wäßriger Natriumbicarbonatlösung neutralisiert, unter vermindertem Druck konzentriert und dann mit Chloroform extrahiert. Der Extrakt wird mit Wasser gewaschen, über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet und unter vermindertem Druck zur Trockene eingedampft. Nach der Reinigung von 103 mg Rückstand mittels Dünnschichtchromatographie an Silicagel unter Verwendung einer Mischung von Chloroform und Aceton (2:1) als Entwicklungsmittel und nach dem Umkristallisieren aus einer Mischung von Aceton

L 609825/0913 _i

und η-Hexan erhält man 58 mg Digitoxigenin-bisdigitoxosid-3¹-acetat vom Pp. l40 bis l45°C. Ausbeute 49,5 % der Theorie.

	63	C	8	H
ber.:	63	,96;	CX)	,42;
gef.:	,79;	,76.

Beispiel 6
Zu einer Lösung von 139 mg Digitoxin-3"-acetat in 8 ml 95pro-

^ zentigem Äthanol fügt man eine Lösung von 139 mg Natriumperjodat in 1,4 ml Wasser und hält das Gemisch 3 Stunden bei Raumtemperatur. Das Reaktionsgemisch wird zur Entfernung von Pestsubstanz filtriert, zur Entfernung von flüchtigem Lösungsmittel konzentriert und dann mit Chloroform extrahiert. Der Extrakt wird mit Wasser gewaschen, über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet und unter vermindertem Druck eingedampft. Man erhält l46 mg weißen, pulverförmigen, rohen Dialdehyd,. der Tollenreagens reduziert und das charakteristische NMR-Spektrum bei 0,22

φ und 0,44J" zeigt. Der rohe Dialdehyd wird in 24 ml Methanol gelöst, mit 3,6 ml 0,05 η Salzsäure vermischt und 24 Stunden bei Raumtemperatur gehalten. Das Reaktionsgemisch wird mit 5prozentiger wäßriger Essigsäure neutralisiert, unter vermindertem Druck konzentriert und mit Chloroform extrahiert. Der Extrakt wird mit Wasser gewaschen, über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet und zur Trockene eingedampft. Nach der Reinigung von 116 mg Rückstand mittels Dünnschichtchromatographie an Silicagel und nach dem Umkristallisieren aus wäßrigem Methanol erhält man 62 mg Digitoxigenin-bisdigitoxosld-3"-acetat· vom Pp. 143

L 609825/0913 _i

- * - 7065848

bis 147⁰C. Ausbeute: 55,5 % der Theorie.

·· + 17,5° (c =0,253 Methanol).

C H CH₃CO

C₃₇H₅₆O₁₁.1/2 H₂O: ber.: 64,80; 3,38; 6,28;

gef,: 64,74; 8,25; 6,01,

Beispiel. 7

Zu einer Lösung von I50 mg Digitoxigenin-bisdigitoxosid in 10 ml 95prozentigem Äthanol fügt man eine Losung von 150 mg Natriumperjodat in 2 ml Wasser und hält das Gemisch 1 Stunde bei Raumtemperatur. Das Reaktionsgemisch wird zur Entfernung von Festsubstanz filtriert, zur Entfernung des flüchtigen Lösungsmittels konzentriert und dann mit Chloroform extrahiert. Der Extrakt wird mit Wasser gewaschen, über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet und zur Trockene eingedampft. Der Rückstand zeigt im Dünnschichtchromatogramm einen einzigen Fleck des Dialdehyds und reduziert Tollenreagens. I50 mg Dialdehyd werden in 15 ml 95prozentigem Methanol gelöst, mit 75 mg Natriumborhydrid vermischt und 2 Stunden bei Raumtemperatur gehalten. Das Reaktionsgemisch wird mit 5p**ozentiger wäßriger Essigsäure neutralisiert, unter vermindertem Druck konzentriert und mit Chloroform.extrahiert. Der Extrakt wird mit Wasser gewaschen, über v/ass er freiem Natriumsulfat getrocknet und zur Trockene eingedampft. Der Rückstand zeigt im Dünnschichtchromatogramm einen einzigen Fleck des Dimethylols und reduziert nicht Tollenreagens. 135 mg rohes Dimethylol werden in 12 ml Methanol gelöst, mit 1,8 ml 0,05 η

L 8G9Ö2S/Q913

- -π- ?065848

Salzsäure vermischt und 2 Stunden bei Raumtemperatur gehalten. Das Reaktionsgemisch wird mit 5prozentiger wäßriger Natriumbicarbonatlösung neutralisiert, zur Entfernung des flüchtigen Lösungsmittels eingedampft und mit Chloroform extrahiert. Der Extrakt wird mit Wasser gewaschen, über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet und zur Trockene eingedampft. Nach der Reinigung von 118 mg Rückstand durch Umkristallisieren aus einer Mischung von Ätyhlacetat und η-Hexan erhält man Digitoxigenin-monodigitoxosid vom Fp. 197 bis 200⁰C.

UV:^^C2^H5^OH 218 mu (£= 15 090). C OtJ^: - 5,2° (c = 0,327,

max

Methanol). Ausbeute: 7'6 % der Theorie.

Beispiels

Zu einer Lösung von 50 mg Digoxigenin-bisdigitoxosid in 3 nil 95prozentigem Äthanol fügt man eine Lösung von 50 mg Natriumperjodat in 0,5 nil Wasser und hält das Gemisch 1 Stunde bei Raumtemperatur. Das Reaktionsgemisch wird zur Entfernung von Fest- · substanz filtriert, zur Entfernung von flüchtigem Lösungsmittel konzentriert und mit Chloroform extrahiert. Der Extrakt wird mit Wasser gewaschen, über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet und zur Trockene eingedampft. Der Rückstand zeigt im Dünnschichtchromatogramm einen einzigen Fleck des Dialdehyds und reduziert Tollenreagens. Man löst 52 mg rohen Dialdehyd in 3 ml 95prozentigem Methanol, mischt 10 mg Natriumborhydrid hinzu und hält das Gemisch 1 Stunde bei Raumtemperatur. Das Reaktionsgemisch wird mit 5prozentiger wäßriger Essigsäure neutralisiert, unter vermindertem Druck konzentriert und dann mit Chloroform extrahiert, _]

609825/0313

ZS -,

Der Extrakt wird mit Wasser gewaschen, über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet und zur Trockene eingedampft. Der Rückstand zeigt im Dünnschichtehromatogramm einen einzigen Fleck des Dimethylols und reduziert nicht Tollenreagens« Man löst 45 mg des rohen Dimethylols in 2 ml Methanql, mischt 0,05 η Salzsäure hinzu und hält das Gemisch 1 Stunde bei Raumtemperatur. Das Reaktionsgemisch wird mit 5prozentiger wäßriger Natriumbicarbonatlösung neutralisiert, zur Entfernung des flüchtigen Lösungsmittels eingedampft und dann mit Chloroform extrahiert. Der Extrakt wird mit Wasser gewaschen, über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet und zur Trockene eingedampft. Nach der Reinigung von 44 mg Rückstand durch Umkristallisieren aus einem Gemisch von Äthylacetat und η-Hexan erhält man Digoxigenin-monodigitoxosid vom Pp, 210 bis 212°C.

Beispiel 9

Zu einer Lösung von 250 mg Gitoxigenin-bisdigitoxosid in 20 ml 95prozentigem Äthanol fügt man eine Lösung von 250 mg Natriumperjodat in 2,5-ml Wasser und hält das Gemisch 1,5 Stunden bei Raumtemperatur. Das Reaktionsgemisch wird.zur Entfernung von Festsubstanz filtriert, zur Entfernung des flüchtigen Lösungsmittels konzentriert und dann mit Chloroform extrahiert. Der Extrakt wird mit Wasser gewaschen, über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet und zur Trockene eingedampft. Der Rückstand zeigt im Dünnschichtchromatogramm einen einzigen Fleck des Dialdehyds und reduziert Tollenreagens, Man löst 250 mg des rohen Dialdehyds in 20 ml 95prozentigem Methanol, mischt 125 ml Natriumborhydrid hinzu und hält das Gemisch 2 Stunden bei Raumtemperatur. L -J

S0982S/Ö913

Das Re akt ions genii S ch wird mit 5prozentiger wäßriger Essigsäure neutralisiert, unter, vermindertem Druck konzentriert und dann mit Chloroform extrahiert. Der Extrakt wird mit Wasser gewaschen, über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet und zur Trockene eingedampft. Der Rückstand zeigt im Dünnschichtchromatοgranm einen einzigen Fleck des Dimethylols und reduziert nicht Tollenreagens. Man löst 230 mg des rohen Dimethylols in 20 ml Methanol, mischt 3,5 nil 0,05 η Salzsäure hinzu und hält das Gemisch 2 Stunden bei Raumtemperatur. Das Reaktionsgemisch wird mit 5prozentiger wäßriger Natriumbicarbonatlösung neutralisiert, zur Entfernung

des flüchtigen Lösungsmittels eingedampft und dann mit Chloroform extrahiert. Der Extrakt wird mit Wasser gewaschen, über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet und zur Trockene eingedampft. Nach der Reinigung von 207 mg Rückstand durch Umkristallisieren aus einer Mischung von Äthylacetat und η-Hexan erhält man Gitoxigenin-monodigitoxosid vom Fp. 2l6 bis 218 C.

Beispie 110

Zu einer Lösung von 100 mg 3ß-(ß-D-Digitoxosyl~ß-D-digitoxosylß-D-digitoxosyl)-Oxy-17ß-(3-furyl)-5ß$lⁱtß-androstan-l4-ol in 12 ml 95prozentigem Äthanol gibt man 100 mg Matriumperjodat in 1 ml Wasser und hält das Reaktionsgemisch 1 Stunde bei Raumtemperatur. Das Reaktionsgemisch wird unter vermindertem Druck konzentriert und mit Chloroform extrahiert. Der Extrakt wird mit Wasser gewaschen, über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet und unter vermindertem Druck zur Trockene eingedampft. Der Rückstand reduziert Tollenreagens und zeigt im Dünnschichtchromatografie einen einzigen Fleck des Dialdehyds. Eine.Lösung von 9$ mg

609825/0313

" 7065848

des rohen Dialdehyds in IO ml 95prozentigeni Methanol fügt man zu 50 mg Natriumborhydrid und hält das Gemisch 1 Stunde bei Raumtemperatur unter Stickstoff. Das Reaktionsgemisch wird mit 5prozentiger wäßriger Essigsäure neutralisiert, bei Raumtemperatur unter vermindertem Druck konzentriert und dann mit Chloroform extrahiert. Der Extrakt wird mit Wasser gewaschen, über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet, und unter vermindertem Druck zur Trockene eingedampft. Der Rückstand reduziert nicht Tollenreagens und zeigt im Dünnschichtchromatogramm einen einzigen Fleck des Dimethylols. Eine LSsung von 100 mg des rohen Dimethylols in 5 ml Methanol vermischt man mit 0,75 ml 0,05 η Salzsäure und hält das Gemisch 3 Stunden bei Raumtemperatur. Das Reaktionsgemisch wird mit 5prozentiger wäßriger Natriumbicarbcnatlösung neutralisiert und mit Chloroform extrahiert. Der Extrakt wird mit Wasser gewaschen, über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet . und unter vermindertem Druck zur Trockene eingedampft. Nach der Reinigung von 70 mg Rückstand durch Umkristallisieren aus einer Mischung von Aceton und η-Hexan erhält man 59 nig . reines 3ß-£^-0-(ß-D-Digitoxosyl)-ß-D-digitoxosyl7oxy-17ß-(3-furyD-Sßjl^ß-androstan-lJl-ol vom Pp. 199 bis 200⁰C. Ausbeutet 74,3 % der Theorie, /cxjjp: +1,0 + 0,8° (c = O,5l6, Methanol).

UV:?<.^C2^H5^0H 212 mil (.£ = 5 230). IR:/^CHC13: 3500 - 36ΟΟ cm"¹, max ' · max

	67	C	8	H
ber.:	67	,93;	3	,80;
gef.:	,96;	,97.

60982S/Ö913

Beispiel 11

Zu einer gerührten Lösung von 50 mg 3ß-(ß-D-Digitoxosyl-ß-D-digitoxosyl-ß-D-digitoxosyl)-oxy-17ß-(3-f'uryl}-5ß,lⁱfß-androstan-12ß,l4-diol in 6 ml Äthanol fügt man tropfenweise eine Lösung von 50 mg Natriumperjodat in 0,5 ml Wasser bei Raumtemperatur. Nach weiterem 30minütigem Rühren wird das Reaktionsgemisch zur Entfernung von Pestsubstanz filtriert, mit 20 ml Wasser verdünnt, unter vermindertem Druck zur Entfernung des flüchtigen Lösungsmittels eingedampft und dann mit Chloroform.extrahiert* Der Extrakt wird mit Wasser gewaschen, über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet und unter vermindertem Druck zur Trockene eingedampft. Man erhält ^4 mg rohen Dialdehyd. Eine Lösung von 43 mg des rohen Dialdehyds in 3 nil 95prozentigem Methanol vermischt man mit 20 mg Natriumborhydrid und hält das Gemisch 1 Stunde bei Raumtemperatur. Das das rohe Dimethylol enthaltende Reaktionsgemisch wird mit 0,1 η Salzsäure auf einen pH 2,8 gegen Thy molblau-Reagenspapier angesäuert. Nach 4stündigem Rühren unter Stickstoff wird die Lösung mit 5prozentiger Natriumbicarbonatl5sung neutralisiert, konzentriert und mit Chloroform extrahiert. Der Extrakt wird mit Wasser gewaschen, über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet und zur Trockene eingedampft. Nach der Reinigung von ¹Jl mg des Rohproduktes mittels Dünnschi cht Chromatographie an Silicagel unter Verwendung einer Mischung von Chloroform und Aceton (2 : 1) als Entwicklungsmittel und nach dem Umkristallisieren aus einer Mischung von Chloroform und Äther erhält man 30 mg 3ß-Z^-0-(ß-D-Digitoxosyl)-a-D-digitoxosyl7oxy-17ß-(3-furyl)-5ß,lⁱ»ß-androstan-12ß,l4-diol vom Fp. 136 bis 139°C

60982570913

j*

+ 0,8 + 0,4°; TtXJp₅: + 6,3 +0,5° (c = J₁OlO, Chloroform). UV:]^^G2^H5^OH:- 212' τψ (E= 4 640). IRtV ^CEC13: 3500,

max ^l max

l600 cm"¹.

C H

C₃₅H₅₂₁O₁₀.1/2 H₂O ber.: 65,30; 8,6l;

gef.: 65,76; 9,13.

Beispiell2

Zu einer gerührten Lösung von 8OO mg 3ß-(ß-D-Digitoxosyl-ß-D-digitoxosyl-ß-D-digitoxosyl)-oxy-17ß-(3-furyl)-5ß,l4ß-androstanl4,l6ß-diol in 60 ml Äthanol fügt man tropfemieise eine Lösung von 800 mg Natriumperjodat in 3 ml Wasser bei Raumtemperatur. Nach weiterem 45minütigem Rühren wird das Reaktionsgemisch zur Entfernung von Pestsubstanz filtriert, mit 20 ml Wasser verdünnt, unter vermindertem Druck zur Entfernung von flüchtigem Lösungsmittel eingedampft und dann mit Chloroform extrahiert. Der Extrakt wird mit Wasser gewaschen, über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet und unter vermindertem Druck zur Trockene eingedampft. Man erhält 909 mg rohen Dialdehyd. Eine Lösung von 900 mg.des rohen Dialdehyds in 80 ml 95prozentigem Methanol vermischt man mit 80 mg Natriumborhydrid und hält das Gemisch 1 Stunde bei Raumtemperatur. Das das rohe Dimethylol enthaltende Reaktionsgemisch wird mit 0,1 η Salzsäure auf einen pH 2,8 gegen Thyniolblau-Reagenspapier angesäuert. Nach 4stündigem Rühren unter Stickstoff wird die Lösung mit 5prozentiger Natriumblcarbonatlösung neutralisiert, konzentriert und mit Chloroform· extrahiert. Der Extrakt wird mit Wasser gewaschen, über wasserfreiem Natriumsul-

L _I

609825/0913

fat getrocknet und zur Trockene eingedampft. Mach der Reinigung von 724 mg Rohprodukt mittels Dünnschichtchromatographie an Silicagel unter Verwendung einer Mischung von Chloroform und Aceton (2 : 1) als Entwicklungsmittel und'nach dem Umkristallisieren aus einer Mischung "von Aceton und Hexan erhält man 3ß-£4 -0-(ß»D-Digitoxosyl) -ß-D-digitoxosylJoxy-^ß- (3-f uryl) -5ß, lijß-androstan-l^jlöß-diol.vom Pp. 105 bis 135^C

β⁷: + 10,4 +0,9° (c = 0,539, Methanol). UV:>.^C2^H5^0H:

max

^CHC13: 3500 l6O3cm"¹

212 mu (£=5 080). IR:/^CHC13: 3500, l6O3

max

C H

C₃₅H₅₄O₁₀.3/2 H₂O: ber.: 63,58; 8,68; .

gef.: 63,59; 8,71.

Beispiel 13

Zu einer Lösung von 100 mg 3ß-A-0-(ß-D-Digitoxosyl)-ß-D~ digitoxosyl7oxy-17ß-(3-furyl)-5ß,l4ß-androstan-l4-ol in 10 ml 95prozentigem Äthanol fügt man 1,0 ml einer lOprozentigen wäßrigen Lösung von Natriumperjodat und hält das Gemisch 1 Stunde bei Raumtemperatur. Das Reaktionsgemisch wird mit Wasser verdünnt , zur Entfernung von Methanol eingedampft und dann mit Chloroform extrahiert. Der Extrakt wird mit Wässer gewaschen, über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet und zur Entfernung des Lösungsmittels eingedampft. Man erhält 103 mg rohen Dialdehyd. Der rohe Dialdehyd wird in 8 ml 95?^rozentig^ern Methanol gelöst, mit 15 mg Natriumborhydrid vermischt und 30 Minuten bei Raumtemperatur gerührt. Das das Dimethylol enthaltende Reaktionsgemisch wird mit 0,1 η Salzsäure auf einen pH 2,4 angesäuert und 3 Stunden

^L 609 825/0913 ^J

bei Raumtemperatur gehalten. Dann wird die Mischung mit 5prozentiger wäßriger Natriumbicarbonatlösung auf einen pH 7,0 neutralisiert, mit Wasser verdünnt, zur Entfernung von flüchtigem Lösungsmittel eingedampft und mit Chloroform extrahiert. Der Extrakt wird mit Wasse"r gewaschen, über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet und zur Entfernung des Lösungsmittels eingedampft. Nach der Reinigung von 95 mg Rohprodukt durch Umkristallisieren aus einer Mischung von Methanol und Äthanol erhält man 77 g reines 3ß-(ß-D-Digitoxosyl)-oxy-17ß-(3-furyl)-5ß,l4ß-androstan-l4-öl vom Pp. 95 bis. 97°C CoJ^> - 10,8 ±

1,4° (c = 0,361, Methanol). UV:^-^C2^H5°^H: 212 mu (L = 5 430).

max '

IR=/^CH01-

max

	3400 -	3600,	max	9	H
3:			16OO cm"1. -	9	»11;
	H2O:	ber.	C		,43.
1/2		gef.	: 69,99;
		: 70,30;

Beispiel 14

Zu einer Lösung von 144 mg 35-/4-0-(ß-D-Dig"itoxosyl)-ß-D-digitoxosyl7bxy-17ß-(3-furyl)-5ß,l4ß-androstan-l4,l6ß-diol in 12 ml 95prozentigem wäßrigen Methanol gibt man 1,4 ml einer 10-prozentigen wäßrigen Lösung von Natriumperjodat und rührt das Gemisch 1 Stunde bei Raumtemperatur. Das Reaktionsgemisch wird mit. Wasser verdünnt, zur Entfernung von Methanol eingedampft und dann mit Chloroform extrahiert. Der Extrakt wird mit Wasser ge- - waschen, über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet und zur Ent-. fernung des Lösungsmittels eingedampft. Man erhält l40 mg rohen

^L ■ ' ^J

60982S/0313

Dialdehyd. Der rohe Dialdehyd wird in 12 ml 95prozentigem Methanol gelöst, mit 20 mg Natriumborhydrid vermischt und 1,5 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Das das Dimethylol enthaltende Reaktionsgemisch wird mit 0,1 η Salzsäure auf einen pH 2j6 angesäuert und 4 Stunden bei Raumtemperatur gehalten. Dann wird das Gemisch mit 5prozentiger wäßriger Natriumbicarbonatlösung auf einen pH 7,0 neutralisiert, mit Wasser verdünnt, zur Entfernung des flüchtigen Lösungsmittels eingedampft und mit Chloroform extrahiert. Der Extrakt wird zweimal mit Wasser gewaschen, über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet und zur Entfernung des Lösungsmittels eingedampft. Nach der Reinigung von 106 mg Rohprodukt durch Umkristallisieren aus einer Mischung von'Methanol und Äther erhält man 70 mg reines 3ß-(ß-D-Digitoxosyl)-oxy-17ß-(3-furyl)-5ß,l4ß-androstan-l4,l6ß-diol vom Pp. 213 .bis 219°C. Z~Ot?Q²: + 0°; Cx'JIL·: 11,2 + 2,0° (c = 0,403, Methanol).

.Ji_-C₂H₅OH 212 mu (£=5 600). IR: Z**{^o1: 3450 cm"¹, .ν* λ -u. ι max

UV

max

C H . .

φ C₂₉H₄₁₁O₇: ber.: 69,02; 3,79;

.gef.: 69,07; 8,94. - ..

Beispiel 15 .

Zu einer Lösung von 400 mg Digitoxin in 20 ml Dioxan gibt man 500 mg Bleitetraacetat und rührt das Gemisch 1,5 Stunden bei Raumtemperatur. Das Reaktionsgemisch wird zur Entfernung von fet ster Substanz filtriert und das Piltrat mit 10 ml Wasser verdünnt. Das verdünnte Piltrat wird zur Entfernung des flüchtigen

6098257Ö913

S3 -,

" ** " 7065848

Lösungsmittels eingedampft und mit Chloroform extrahiert. Der Extrakt wird mit Wasser gewaschen, über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet und zur Entfernung des Lösungsmittels eingedampft. Nach der Reinigung von 358 mg Rückstand mittels Dünnschichtchromatographie an Silieagel unter Verwendung einer Mischung von Chloroform und Äthylacetat (1 : 1) als Entwicklungs- -mittel und nach dem Umkristallisieren aus einer Mischung von Äther und Petroläther erhält man einen "Dialdehyd", der identisch mit dem nach Beispiel 1 (A) erhaltenen ist. Der erhaltene Dialdehyd wird in 95prozentigem Äthanol gelöst und mit 10 mg Natriumborhydrid vermischt. Nach 1 Stunde wird das Reaktionsgemisch mit In Schwefelsäure auf einen pH 2,4 gegen Thymolblau-Reagenspapier angesäuert und 30 Minuten bei Raumtemperatur gehalten. Das Reaktionsgemisch wird mit 0,1 η Natriumcarbonatlösung neutralisiert, zur Entfernung des flüchtigen Lösungsmittels eingedampft und mit Chloroform extrahiert. Der Extrakt wird mit Wasser gewaschen, über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet und zur Trockene eingedampft. Nach der Reinigung des Rückstandes mittels DünnschichtChromatographie an Silieagel unter Verwendung einer Mischung von Chloroform und Aceton (2:1) als Entwicklungsmittel und nach dem Umkristallisieren aus einer Mischung von Aceton und η-Hexan erhält man 237 mg Digitoxigenin-bisdigitoxosid vom Schmelzpunkt 226 bis 230⁰C. Ausbeute: 87 % der Theorie.

Beispiel l6

Zu einer Lösung von 100 mg Digitoxin in 4 ml Chloroform und 4 ml auf 0⁰C gekühlten Tetrachlorkohlenstoff gibt man 100 mg

6Q982S/Ö913 -J

pulverförmiges Rutheniumtetroxid.^; Nach 30minütigeia Rühren Vermischt man das Gemisch mit einer geringen Menge Methanol und filtriert zur Entfernung von fester Substanz. Das Filtrat wird zur Trockene eingedampft, und man erhält 99 rag eines Rückstandes, der mit dem nach dem Verfahren desBeispiels1 (A) erhaltenen identisch ist. Der Dialdehyd wird in 1 ml 95piOzentigem Äthanol gelöst, mit 8 mg Natriumborhydrid vermischt und die Mischung 30 Minuten auf Raumtemperatur gehalten. Das das rohe Dimethylol enthaltende Reaktionsgemisch wird mit 0,1 η Schwefelsäure auf einen pH 3,5 gegen Thymolblau-Reagenspapier angesäuert. Nach 3 Stunden wird das Reaktionsgemisch mit 5prozentiger E&triun-bicarbonatlösung , neutralisiert, konzentriert und mit Chloroform extrahiert. Der Extrakt πίτα mit Wasser gewaschen, über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet und zur Trockene eingedampft. Nach der Reinigung des Rückstandes mittels Dünnschicht-Chromatographie und nach dem Umkristallisieren erhält man 73 mg Digitoxigenin-bisdigitoxosid vom Fp. 228 bis 23O°C. Ausbeute: 89 % der Theorie.

Beispiel '17

Zu einer Lösung von 100 mg Digitoxin in 5 ml Essigsäure fügt man 1 ml Wasser und 500 mg pulverisiertes Natriumwismutat hinzu. Nach 3stÜndigem Schütteln bei Raumtemperatur wird das Gemisch zur Entfernung von fester Substanz filtriert. Die feste Substanz wird gründlich mit Äthylacetat gewaschen. Die Mischung des FiI-trats und der Waschwasser wird zur Trockene eingedampft. Der Rückstand wird mit Natriumborhydrid und verdünnter Schwefelsäure nach dem Verfahren gemäß Beispiel 1 (B-4) behandelt. Man erhält L

70 mg Digitoxigenin-bisdigitoxosid vom Pp. 223 bis 23O°C,
Ausbeute: 85 % der Theorie. · .

Beispiel 1 8

Zu einer Lösung von 10 mg Digitoxin in 1 ml Benzol fügt man
13 mg Jodosobenzol-diacetat hinzu. Nach 5stündigem Rühren wird das Reaktionsgemisch mit wäßriger Natriumbisulfatlösung gewaschen, über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet und zur Trokkene eingedampft. Der Rückstand zeigt im Dünnschichtchromatogramm den Dialdehyd-Fleck. Der Rückstand wird mit Natriumborhydrid und verdünnter Schwefelsäure nach dem Verfahren gemäß Beispiel 1 (B-4) behandelt. Man erhält Digitoxigenin-bisdigitoxosid vom Pp. 228 bis 231^PC. ■

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Claims (6)

1. Patentansprüche

   ( .y Verfahren zur Herstellung von Steroid-Glykosiden mit 2-uesoxyzuckerresten der allgemeinen Formel

   (D

   in der X der Rest eines Sauerstoff enthaltenden Kohlenwasserstoffrings ist, R₁ und R₂ Wasserstoffatome, Hydroxylgruppen oder Acyloxyreste bedeuten, R ein Viasserstoffatom oder ein Acylrest ist, der bei Jeder Zuckereinheit gleich oder verschieden sein kann, und η eine Zahl größer als 1 ist, dadurch gekennzeichnet , daß man eine Verbindung der allgemeinen Formel II \

   (ID

   OH

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   J?

   in der X₁ R., Rp, R und η die vorstehende Bedeutung besitzen, mit einem Glykolspaltungsmittel umsetzt und den erhaltenen Dialdehyd gegebenenfalls nach Reduktion zur Dimethylolverbindung hydrolysiert.
2. 2. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß man als Glykolspaltungsmittel Perjodsäure, ein Perjodat oder Bleitetraacetat verwendet.
3. 3. Verfahren nach den Ansprüchen 1 oder 2, dadurch gekennzeichnet, daß man 1 bis 5 Moläquivalente Perjodsäure, Perjodat oder Bleitetraacetat als Glykolspaltungsmittel verwendet»
4. ²J, Verfahren nach dem Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß man die Reduktion in Gegenwart von 1 bis 10 Moläquivalenten Natriumborhydrid durchführt.
5. 5. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß man

   die Hydrolyse mit einer Säure, einer Base oder einem mit Ketonen

   reagierendes Mittel durchführt.
6. 6. Verfahren nach Anspruch 5, dadurch gekennzeichnet, daß man die Hydrolyse in Gegenwart von 0,1 η bis 0,0001 η Mineralsäure oder durch Behandlung in einem sauren Medium vom pH 1 bis 4 durchführt.

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