DE1954110A1 - Neues Antibiotikum,Verfahren zu seiner Herstellung und seine Verwendung als Schaedlingsbekaempfungsmittel - Google Patents
Neues Antibiotikum,Verfahren zu seiner Herstellung und seine Verwendung als SchaedlingsbekaempfungsmittelInfo
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Description
Köln, den 22.10.1969 Kl/Ax
27j Doshomaohi 2-chome, Higashi-ku, Osaka (Japan).
Neues Antibiotikum, Verfahren zu seiner Herstellung und
seine Verwendung als Schädlingsbekämpfungsmittel
Die Erfindung "betrifft ein neu.es Antibiotikum, das als
T-7545 bezeichnet wird und die Antibiotika T-7545-A,
T-7545-B und deren Gemische umfaßt und durch Kultivierung
eines das Antibiotikum 1-7545 bildenden Stammes von Actinomycetes erhalten wird.
Auf der Suche nach neuen antibiotisch aktiven Substanzen
isolierte die Anmelderin eine große Zahl von Mikroorganismen des Bodens und untersuchte ihre Metabolite„
Die Forschungsarbeit führte zu den Feststellungen, daß gewisse vom Boden isolierte Mikroorganismen das neu
Antibiotikum T-7545 zu bilden vermögen, daß diese Mikroorganismen zu. Actinomycetes gehören, und daß es möglich
ist, das Antibiotikum durch Kultivierung diesirTYfikroorganismen
in einer Weise, daß das Antibiotikum im Kulturmedium angereichert wird, erhalten werden kann.
Der Erfindung liegen die vorstehenden Feststellungen zu.
Grunde» Die Erfindung betrifft somit ein neues Antibiotikum, das erhalten wird, indem ein T-7545 bildender
009822/189« SAD onmAL
Stamm, der zu Actinomycetes gehört, so kultiviert wird,
daß das Antibiotikum T-7545 im Kulturmedium gebildet wird, und das auf diese Weise im Kulturmedium angereicherte
Biotikum isoliert wird.
Ferner wurde überraschenderweise gefunden, daß das neue
Antibiotikum T-7545 ein ausgezeichnetes Mittel zur Bekämpfung von Pflanzenkrankheiten, beispielsweise des
Blattscheidenbrandes (sheath blight) von Reispflanzen
bei Anwendung in vivo ist, jedoch in vitro keine Wirkung gegen Bakterien und Pilze zeigt.
Die Erfindung betrifft demgemäß das neue Antibiotikum T-7545 und das Verfahren zu seiner Herstellung, ferner
ein gegenüber Menschen, Tieren und Fischen ungiftiges, im wesentlichen keine Phytotoxizität aufweisendes Fungizid
zur Bekämpfung von bakteriellen und pilzlichen Planzenkrankheiten«,
Die Erfindung umfaßt ferner eine Konzentratform dieses
Fungizids, die nach einfacher Verdünnung vor dem Gebrauch auf die Wirtspflanzen für die oben genannten Zwecke an—
wendbar, stabiler und zweckmäßiger zu lagern und zu transportieren ist als die verdünnten, gebrauchsfertigen Präparate
und ein systemisches Fungizid darstellt, das leicht von den Pflanzen aufgenommen wird.
Das Antibiotikum T-7545 wird durch Kultivierung eines zu
Actinomyces gehörenden Stammes, der dieses Antibiotikum zu bilden vermag, erhalten. Beispielsweise können der
Stamm, der von den Erfindern von Bodenproben aus Akashi City, Präfektur Hyogo, Japan, isoliert wurde und als
Streptomyces hygroscopicus var. limoneus bezeichnet wurde, sowie seine verwandten Stämme mit besonderem Vorteil verwendet
werden.
JäH^X ^i 0 9 8 2 2/18 9 6
Die milcrobiologiscfaen Eigenschaffen und Kultureigenschaften
von Streptomyces hygroseopicus var.limoneus sind nachstehend angegeben. Hierbei basieren die mit
"Rdg·" gekennzeichneten Farbbezeichnungen auf Ridgeway's
"Color Standard and Color Nomenclature."
1) Morphologische Eigenschaften
Das Luftmycel dieses Stammes zeigt monopodiale Verzwei-'
gung, und die Konidienketten sind spiralförmig. Der Mikroorganismus ist eiförmig oder rechteckig und hat eine
Größe von 1,0 bis 1,3 M x 1f0 bis 1,5« und eine glatte
Oberfläche.
2) Kultureigenschaften
Die folgenden Kultureigenschaften werden, falls nicht anders angegeben, bei Kultivierung bei 280C beobachtet.
Wenn die Kultivierung bei anderen Temperaturen durchgeführt wurde, sind diese Temperaturen in Klammern angegeben.
a) Czapek-Agar
Wachstum: farblos,- faltig
Rückseite: Raw Sienna (Rdg., Ill, 17-i) bis Sudanbraun
(Rdg., III, 15-k)
Luftmycel: Tilleul Buff (Rdg., XL, 17"'-f) bis Light
Buff (Rdg., XV, 17'-f) teilweise mausgrau
(Rdg., LI, 15""') längs der Peripherie der Kolonie.
Lösliches Pigment: Gelb mit schwach bräunlichen Ton.
Lösliches Pigment: Gelb mit schwach bräunlichen Ton.
b) Glucoee-Czapek-Agar: .
Wachstum: farblos bis Sulph-in Yellow (Rdg., IV, 21-i),
faltig
Rückseite: Raw Sienna
Luftmycel: Tilleul Buff bis Massicot Yellow-(Rdg.,
XVI, 21"-f) teilweise Light Olive Gray
(Rdg., LI, 25'""-ä) längs der Peripherie der Kolonie.
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Lösliches Pigment: gelb mit schwach "bräunlichem Ton.
c) Glycerin-Czapek-Agar:
Wachstum: farblos bis Orange Citrine (Rdg., IV, 19-k),
faltig
Rückseite: Raw Sienna
Rückseite: Raw Sienna
Luftmycel: Tilleul Buff bis Massicot Yellow, teilweise
hellolivgrau.
Lösliches Pigment: gelb mit schwach bräunlichem Ton
Lösliches Pigment: gelb mit schwach bräunlichem Ton
d) Glucose-Asparagin-Agar:
•JO* Wachstum: farblos
•JO* Wachstum: farblos
Rückseite: Old Gold (Rdg., XVI, 19'-i) bis Antimony
Yellow (Rdg,, XV, 17'-b) bis Cinnamon Brown
(Rdg., XV, 15«-k).
Luftmycel: hellolivgrau bis mausgrau mit gelben Flecken und schwarzen feuchten Flächen.
Lösliches Pigment: hellbraun
e) Calciummaleatagar:
Wachstum: Primuline Yellow (Rdg., XVI, 19') Rückseite: Primuline Yellow
1 Luftmycel: zunächst spärlich, jedoch später Tilleul
1 Luftmycel: zunächst spärlich, jedoch später Tilleul
Buff bis hell-olivgrau Lösliches Pigment: blaßgelb „
f) Stärkeagar: kein Wachstum
g) Modifiziertes Stärkeagar mit folgenden Bestandteilen: Lösliche Stärke 196
Kaliummonohyärogenphosphat 0,3$
CaIciurnearbonat 0,3#
Magnesiumsulfat 0,1#
Ammoniums ulf at 0,256
Natriumchlorid 0
Agar 256
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Wachstum* farblos bis Barium Yellow (Rdg,, XVI, 23'-d)
Rückseite: Deep Colfcnial Buff (Rdg., XXX, 21"-Id) bis
Snuff Brown (Rdg., XXIX, 15M-k)
luftmycel: Cartridge Buff (Rdg·, XXX, 19"-f) bis mausgrau mit schwarzen feuchten Stellen
Lösliches Pigment: hellbraun. Hydrolysierung der Stärke wurde beobaohtet.
h) Tyrosin-Agar:
Wachstum: farblos bis Irontian Yellow (Rdg.,XVI, 23')
Rückseite: Pale Ochraoeous Buff (Rdg., XV, 15»-f) bis
Light Oohraceous Buff (Rdg., XV, 15'-d)
Luftmyoel: nicht vorhanden Lösliches Pigment: nioht vorhanden
i) Hefeextrakt-Agar: Wachstum: farblos, faltig
Rückseite: cbemefarben (Rdg·, XVI, 19'-f)
Luftmyoel: weiß
Lösliches Pigment: hellbraun
j) Nähragar (37°O)i
Wachstum: farblos
Rückseite: farblos v
Luftmyoel: nicht vorhanden Lösliches Pigment: nicht vorhanden
k) Gluoose-Nähragar (370C):
Wachstum: farblos, faltig Rüokseite: Cartridge Buff bis Pale Ochraoeous Buff Luftmycel: nicht vorhanden
Lösliohes Pigment: nioht vorhanden
1) Nährbrühe (370C): Wachstum: farbloses Oberfläohenwaohstum und farbloses
flookiges Wachstum am Boden. Luftmyoel: nioht vorhanden
Lösliohes Pigment: nioht vorhanden
9822/1Öd6
m) Glucose-Nährbrühe (370C) j
Wachstum: Oberflächenwachsturn Cartridge Buff und farbloses
flockiges Wachstum am Boden· Luftmycel: nicht vorhanden Lösliches Pigment: nicht vorhanden
n) Kartoffel-Stichkultur:
Wachstum: farblos bis Pale Ochraceous Buff Luftmycel: Tilleul Buff bis mausgrau
Der Stich färbt sich Sayal Brown (Rdg., XXIX, 15"-i)
o) Möhrenstichkultur:
Wachstum: farblos Luftmyoel: weiß bis mausgrau Der Stich färbt sich Cinnamon Rufous (Rdg., XIV, 11'-i)
bis zimtbraun.
p) Cellulose:
Wachstum: Chartreuse Yellow (Rdg., XXXI, 25M-d) bis
Reed Yellow (Rdg., XXX, 23"-b). Luftmycel: mausgrau Lösliches Pigment: blaßgelb
q) Gelatine (250C):
Wachstum: sehr schlecht Luftmycel: nicht vorhanden Lösliches Pigment: nicht vorhanden
Die Gelatine wird leioht verflüssigt.
Das gleiche ist bei Nährgelatine der Pail.
r) Ganzes Ei (370C): Wachstum: farblos
Luftmycel: nicht vorhanden Lösliches Pigment: nicht vorhanden
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s) Laokmusmilch (370C):
Wachstum: Oberfläohenwachsturn,cremefarben bis Seashell
; Bink (Rdg., XIV, 11·-£)
Luftmycel: nicht vorhanden
Das Medium wird sohwach koaguliert, dann peptonisiert, wobei es Army Brown (Rdg., XL, 13"'-i) und schwach
sauer wird.
t) Löffler-Medium (370C) :
Wachstum» Naples Yellow (Rdg., XVI, 19'-d) zuerst und
später Light Buff.
Luftmyoel: nicht vorhanden
Lösliches Pigment: nicht vorhanden Keine Verflüssigung.
Lösliches Pigment: nicht vorhanden Keine Verflüssigung.
u) Peptongluoose-Agar:
Wachstum: Chartreuse Yellow
Rückseite: honiggelb
Luftmyoel: dünn, Cream Buff
Lösliches Pigment: gelb mit bräunlichem Ton
Wachstum: Chartreuse Yellow
Rückseite: honiggelb
Luftmyoel: dünn, Cream Buff
Lösliches Pigment: gelb mit bräunlichem Ton
v) Flachagar:
Wachstum: spärliches und farbloses Wachstum in die
Wachstum: spärliches und farbloses Wachstum in die
Substanz des Mediums
Rückseite: farblos bis mausgrau
Luftmycel: spärlich, Tilleul Buff bis mausgrau Lösliches Pigment: nicht vorhanden
Rückseite: farblos bis mausgrau
Luftmycel: spärlich, Tilleul Buff bis mausgrau Lösliches Pigment: nicht vorhanden
3) Physiologische Eigenschaften:
a) Temperatur und pH-Bereich
a) Temperatur und pH-Bereich
Kein Wachstum bei 1O0C und 500C auf Bennett-Agar oder
Glucoseasparaginagar unter aeroben Bedingungen. Wachstum findet bei 15 bis 450C statt, besseres Wachstum
bei 37 bis 4-50C. Kein Wachstum, wenn das Medium
einen pH-Wert von 4 hat. Bei pß 5 bis 10 findet zwar
Wachstum statt, jedoch liegt der optimale Bereich bei pH 6 bis 7.
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b) Gelatine: leicht verflüssigt
c) Stärke: hydrolysiert
Durchmesser der hydrolysierten Fläche/Durohmesser
der Kolonie = 33 mm/8 mm. d) Pyrosinasereaktion: negativ.
e) lackmusmilch: peptonisiert» Koagulierung zweifelhafte
f) Nitratreduktion: negativ.
g) Hydrolyse von Cellulo.se: negativ,
h) Farbstoffbildung: negativ.
i) Produkt: Antibiotikum T-7545.
4) Verwertung von Kohlenstoffquellen:
Die Verwertung von Kohlenstoffquellen, ermittelt nach der Methode von Pridham und Mitarbeitern (Journal of
Bacteriology £6 107-1H (1948)) ist nachstehend in Tabelle
1 angegeben.
Verwertung von Kohlenstoffquellen durch Streptomyces
hygroscopicus var. limoneus
Erythrit - Inosit ++
Adonit - D-Mannit ++
Sorbit + Dulcit
D-Xylose ++ .Trehalose ++
L-Arabinose ++ Salicin
L-Sorbose - Esculin -
D-Galactose ++ Inulin ++
Glucose ++ Dextran +
D-Fructose ++ Mannose ++
L-Rhamnose ++ Stärke ++
Melibiose ++ Glycerin ++
Maltose ++ Natriumacetat +
Saccharose ++ N^triumsuccinat +
Lactose ++ Natriumeitrat + Raffinose ++ Calcium-2-keto-
gluconat
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++: gut verwertet; ' +: ziemlich gut verwertet -: nicht verwertete
Der gemäß der Erfindung verwendete Stamm zeigt somit monopodiale Verzweigung, wobei die Spitze seines Luftmycels
spiralförmig ist· Die Konidien haben eine glatte Oberfläche. Der Stamm hat ein gelbes bis lederfarbenes
Wachstum auf synthetischen Medien im allgemeinen und erzeugt auf proteinhaltigen Medien kein braunes lösliches
Pigment»
Die vorstehenden Kultureigenschaften wurden mit den Beachreibungen
in "Bergey's Manual of Determinative Bacteriology1·,
7.Auflage (The Williams and Wilkins, 1957), in
wThe Actinomycetes" von S0A0 Waksman, Band 2 (The Williams
and Wilkins 1962) und in "Systematik der Stre-ptomyceten" von Ralph Hütter (Es, Karugas 1967) verglichen. Es wurde
festgestellt, daß der Stamm den Stämmen Streptomyces ambofaciens, Streptomyoes platensis und Streptomyces
hygroscopicus ähnlich ist.
Trotz der großen Ähnlichkeit in der Farbe sowohl des vegetativen Mycels als auch des Luftmycelsvunterscheiden
sich jedoch Streptomyces ambofaciens und der erfindungsgemäß verwendete Stamm dadurch, daß der erstere keine
schwarzen feuohten Flecken im Iiuftmycel hat, daß er Gelatine
in mittlerem Grade verflüssigt und ein gelbes flokkiges
Wachstum im verflüssigten Teil bildet, und daß er andere Kohlenstoffquellen als der erfindungsgemäß verwendete
Stamm verwertet· Streptomyces platensis unterscheidet sich von dem erfindungsgemäß verwendeten Stamm
daduroh, daß er ein tief olivfarbenes vegetatives Mycel
auf Ozapek-Agar bildet, wobei die Rüokseite der Kolonie
mit der Zeit dunkel ollvfarben wird, daß er ein cremefarbenes bis stumpf-gelbliches Wachstum auf Stärkeagar
ergibt, wobei sein Luftmyοel die Fafbe von Weiß nach
Mausgrau mit schwarzen Flecken verändert, und daß er
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andere Kohlenstoffquellen als der erfindungsgemäß verwendete Stamm verwertet. Bin Vergleich der Beschreibungen
von Streptomyces hygroscopicus mit den Kultureigenschaften des gemäß der Erfindung verwendeten Stammes zeigt,
daß der letztere sich von Streptomyces hygroscopicus dadurch unterscheidet, daß sein Wachstum oder die Rückseite
der Kolonie die hellgelbe Farbe bis Lederfarbe auf Czapek-Agar (einschließlich Glucose-Czapek-Agar und
GIycerin-Czapek -Agar), Glucose-Asparagin-Agar, Calciummaleatagar
und anderen Medien zeigt und ein gelblichweißes bis gelbes Luftmycel auf diesen Czapek-Agarmedien
bildet. Viele Kultureigenschaften dieses Stammes fallen jedoch mit den stabilen Eigenschaften von Streptomyces
hygroscopicus zusammen, die von !Dresner und Backus (Applied Microbiology, Band 4, Seite 243, 1956) angegeben
werden. Demgemäß wurde von der Anmelderin der erfindungsgemäß verwendete Stamm als eine Variante von Streptomyces
hygroscopicus identifiziert und als Streptomyoes hygros-
seiner copious var. limoneus bezeichnet. Dieser Stamm und einer/
Mutanten ist beim Institute for Fermentation, Osaka, unter der Nummer IPO 12703 hinterlegt worden.
Actinomyceten haben das allgemeine Merkmal, daß ihre
mikrobiologischen Eigenschaften äußerst mutativ sind,
und Streptomyces hygroscopicus var. limoneus ist keine Ausnahme von dieser Regel. Beispielsweise lassen sich
seine Kultureigenschaften und die Art der Verwertung von Kohlenstoffquellen leicht ändern, und es können zahlreiche
Mutanten vorhanden sein. Insbesondere lassen sich von ;
diesem Stamm leicht Mutanten erhalten,.die ein gelbes Luftmycel haben. Beispielsweise hat ein als IFO-12704
bezeichneter Stamm ähnliche Eigenschaften wie der Stamm IFO-12703, außer daß er ein gelbes Luftmycel hat, das
nicht hygroskopisch wird. Diese Mutanten können jedoch ebenfalls für die Zwecke der Erfindung verwendet werden,
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soweit sie die Fähigkeit haben, das Antibiotikum T-7545
zytoilden. Es spielt natürlich keine Rolle, ob die Mutation
spontan oder künstlich induziert wirdο
In das für die Zwecke der Erfindung verwendete Kulturmedium
werden assimilierbare Kohlenstoffquellen, verwertbare
Stickstoffquellen, anorganische Salze u.dgl. einbezogen··
Gegebenenfalls können Spurenelemente, z.B. Spurehnährstoffe, Wachstumsfaktoren, Vorstufen usw., dem Kulturmedium
zugesetzt werden· Zu den Kohlenstoffquellen, die der T-7545 bildende Stamm assimiliert, gehören u.a.
Kohlenwasserstoffe, Glucose, Saccharose, Melasse, Stärke, Dextrin und Glycerin. Als. Stickstoffquellen eignen sich
beispielsweise organische Stickstoffverbindungen wie Fleischextrakt, Sojabohnenmehl, Maisquellwasser, Pepton
und Casein sowie anorganische Stickstoffverbindungen wie Nitrate und Ammoniumverbindungen, die sämtlich vorteilhaft
verwendet werden können.
Die Kultivierung kann als Oberflächenkultur durchgeführt werden, jedooh ist es üblicher, die aerobe Submerskultur
anzuwenden. Bei der Submerskultur wird der Pg-Wert des Mediums vorteilhaft in der Nähe des Neutralpunktes gehalten.
Das Wachstum findet bei Bebrütungstemperaturen von 20 bis 40 G statt, jedoch wird das Medium vorzugsweise
im Bereich von etwa 23 bis 37°C gehalten. Die Anreicherung des gewünschten Antibiotikums ist in 4 bis
7 lagen beendet.
T-7545 hemmt nicht das Wachstum von Bakterien und Pilzen beim In-vitro—Test, sondern verursacht nur bei Pellieularia
sasakii und seinen eng verwandten Pilzen eine anomale Verzweigung (übermäßige Verzweigung, oder verzweigte Hyphen nehmen eine doldenartige Form an) an den
Spitzen der Hyphen. Daher sollte die biologische Austestung des Antibiotikums T-7545 wie folgt vorgenommen
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werden:
Pellicularia sasakii wird als TestOrganismus und reines
Agar als Nährmedium für den Test'verwendet. Der Testorganismus wird auf einer Kartoffel-(Saocharose)-Agarplatte
2 bis 5 Tage kultiviert. Die erhaltene Kultur wird verwendet, um in der Mitte einer 9 cm-Petrischale eine
Platte von modifiziertem Pfeffer-Medium zu impfen. Dieses Medium wird dann 2 Tage bei 270C bebrütet. Nach dieser
Zeit hat sich das Mycel über die gesamte Oberfläche der 10* Platte ausgebreitet. Das Wachstum bis sun Umfang eines
Kreises mit einem Radius von etwa 3 bis 3»5 cm von der
Mitte wird mit einem Bohrer herausgeschnitten und die hierbei erhaltene Agarscheibe als Impfmaterial verwendet.
Eine Verdünnungsreihe von Agarplatten, die unterschied-15' liehe Konzentrationen von Antibiotikum T-754-5 enthalten,
wird nach der üblichen Agarverdünnungsmethode hergestellt.
Eine Glasscheibe von 8 mm Durchmesser und etwa 0,2 mm Dicke wird in die Mitte jeder Agarplatte der oben genannten
Verdünnungsreihe gelegt, und die als Impfmaterial dienende Agarscheibe wird dann auf die Glasscheibe gelegt.
Nach Bebrütung für 40 Stunden bei 270C wird der Versuch
ausgewertet. Eine Betrachtung mit dem bloßen Auge zeigt,
daß bei Pellicularia sasakii die Spitze der Hyphen des Testorganismus, der auf der als Impfmaterial dienenden
Agarscheibe wächst, eine anomale Verzweigung erfährt. Die Verdünnungseinheit stellt den Wert der maximalen Verdünnung
dar, in der die Lösung eine solche anomale Verzweigung zu zeigen vermag. Eine wässrige Lösung, die
1000 γ-ml gereinigtes T-7545-A oder T-7545-B enthält,
hat 100000 Verdünnungseinheiten/ml bzw. 1500 Verdünnungseinheiten/ml.
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Daa bei diesem Test verwendete modifizierte Pfeffer-Medium
hat folgende Zusammensetzung:
Saccharose | Ο,29έ |
L-Asparagin | 0,396 |
Ammoniumnitrat | 0,19^ |
Kaliumdihydrogenphosphat | 0,196 |
Magnesiumsulfat | 0,001^6 |
Chelatverbindung wVelsenoln* | 1,2$ |
Agar | |
Eingestellt auf Pu 7 | (Hersteller |
♦Eisennatriumäthanoläthylendiamintriacetat | |
Dow Chemical). | |
Vor dem Gebrauch des Mediums werden die folgenden Vitamine
in den genannten Mengen zugesetzt(Gewicht pro ml
Medium): ,
Thiamin 1 γ/ml
Riboflavin 1 "
dalciumpantothenat 1 n
Niacin 1 M
Biotin 0,005 "
Polsäure *0,5 "
Pyrddoxinhydrochlorid 2 "
p-Aminobenzoesäure 0,5 M
Cyancobalamin 0,0002"
Wenn Streptomyces hygrosoopicus var.limoneus in der oben
beschriebenen Weise kultiviert wird, wird das Antibiotikum (D-7545 gebildet und hauptääohlioh in der Plüssigphase
der Brühe angereichert. Zur Gewinnung von Antibiotikum T-7545 ist es daher zweckmäßig, die Brühe zu filtrieren
und dann das Antibiotikum vom erhaltenen PiItrat abzutrennen. Wenn der verwendete Mikroorganismus nur eines
der beiden Antibiotika T-7545-A uud T-7545-B zu bilden
vermag» kann das gebildete Antibiotikum natürlich in üblicher Weise von der Kulturbrühe abgetrennt werden.
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Wenn der verwendete Mikroorganismus gleichzeitig beide Antibiotika zu bilden vermag, werden diese gleichzeitig
in der Kulturbrühe angereichert, so daß beide Antibiotika von der Kulturbrühe als Gemisch oder einzeln abgetrennt
werden können«
Zur Isolierung der Antibiotika können übliche Methoden der Isolierung von Metaboliten von Mikroorganismen von
ihren Kulturbrühen allein oder in Kombination angewendet werden. Beispiele solcher Methoden sind die Filtration,
Konzentrierung, Ionenaustauschchromatographie mit Ionenaustauschern, Adsorptionschromatdgrap&ie an Aktivkohle,
Kieselgel, Aluminiumoxyd usw., Gelfiltration mit "Sephadex" (Hersteller Pharmacia), Bio-Gel-P (BIO.RAD
Laboratories) usw., Verwendung verschiedener Lösungsmittel zur Überführung des Gelösten in eine andere
Flüssigphase, Ausfällung, Entfernung von Verunreinigungen, Dialyse, Trocknung und Umkristallisation.
Für die Abtrennung und Reinigung von Antibiotikum T-7545
von Verunreinigungen werden beispielsweise seine Wasserlöslichkeit und basischen Eigenschaften ausgenutzt. Während
bejqaielsweise wasserlösliche Verunreinigungen von
niedrigerem Molekulargewicht durchlaufen, kann das Antibiotikum T-7545 an Aktivkohle adsorbiert und mit einem
angesäuerten wässrigen Alkohol und /oder wässrigem Aceton eluiert werden.
Das Antibiotikum T-7545 wird an Kationenaustauschharzen
stark adsorbiert, wenn es sich in neutraler oder schwach saurer Lösung befindet, und mit einer gepufferten basischen
Lösung oder einer wässrigen Salzlösung eluiert· Das Antibiotikum 1-7545 kann auoh schwach an Anionenaustauschharzen
adsorbiert und mit Wasser eluiert werden·
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Die Trennung der Antibiotika T-7545-A und T-7545-B wird durch Ionenaustauechchromatographie unter Verwendung
gepufferter Kationen- und Anionenaustauschharze vorgenommen.
Beispielsweise kann das Antibiotikum T-7545 an dem Harz "Dowex 5OWx2" das mit Pyridin-Essigsäure-Puffer
(Pjj 5-6) gepuffert ist, adsorbiert werden. T-7545-B wird
mit der gepufferten Lösung (pH 6,2 bis 6,8) eluiert,
während T-7545-A mit der gepufferten Lösung (pH 7 bis ·
7,5) eluiert wird. Bei Verwendung des Harzes "Dowex 1x2" wird T-7545-A zuerst eluiert, worauf T»7545-B'mit Wasser
eluiert wird. Bei Verwendung fron Kieselgel als Adsorptionsmittel wird zuerst T-7545-B eluiert, während anschließend
T-7545-A mit n«-Propanol-Essigsäure-Wasser
(4:1:1) eluiert wird.
Als Ionenaustauschharze (stark oder schwach), die für den
oben genannten Zweck verwendet werden können, eignen sich
beispielsweise die Produkte der Handelsbezeichnung "Amberlite IR-100, 112 und 120·} "Amberlite XE-69",
"Amberlite IRC-50", "Amberlite XE-89", "Amberlite XE-64",
"Amberlite IR-45" und IRA-900 (Hersteller Rohm and Haas
Co.), Dowex-50x2, Dowex-1x2, Dowex-1x8 (Hersteller Low Chemical Co.),"Duolite CS-65H(Chemical Process Co.),
"Permutit-50" (Permutit β©.). Diese Harze können nach Verfahren
hergestellt werden, die in "Ion Exchange Resin"
(Robert Kumin, herausgegeben von John Wiley ft Sons, Inc., New York, N.Y., Seite 87-97) oder an den dort genannten
Schrifttumsstellen beschrieben sind. Die Korngröße und
der Vernetzungsgrad sind für jeden Harztyp in Abhängigkeit
▼on der jeweiligen Phase oder Stufe des Verfahrens zu wählen.
Die oben genannten Salze umfassen nicht nur die Alkalisalze von starken Säuren wie Natriumchlorid und Ammoniumchlorid,
sondern auch die Alkalisalze von organischen Säuren wie Natriumacetat, Aminoniumacetat usw. sowie die
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Salze von schwachen Säuren oder achwachen Basen, z.B.
solche von Essigsäure, Pyridin uedgl„
Die gewünschte Substanz, die in der oben "beschriebenen
Weise ziemlich weitgehend gereinigt worden isi; (Reinheit 80$ oder mehr), wird in ihr Hydrochlorid (1 Mol) überführt,
das durch Kristallisation aus einem Gemisch von Methanol und Aceton als weißes kristallines Pulver weiter
gereinigt werden kann» Sowohl die freie Form der Substanz als auch ihr Salz (z.B. Hydrochlorid, Sulfat, organisches
10. SuIfonat) können somit vorteilhaft der Reinigung unterworfen
werden.
Die in der beschriebenen Weise erhaltenen Antibiotika haben die nachstehend genannten physiaklischen, chemischen
und physiologischen Eigenschaften«,
1) Physikalische und chemische Eigenschaften von Antibiotikum T-7545-A:
__j . ,
a) Aussehen, Schmelzpunkt usw.s schwach basisches weißes
hygroskopisches Pulver, das keinen scharfen Schmelzpunkt hat und sich bei 100 bis 1350C zersetzt.
b) Löslichkeit: leicht löslich in Wasser und polaren
organischen Lösungsmitteln (z.B. Methanol, Pyridin, Dimethylformamid und Dirnethylsulfoxyd); sohwer löslich
in Aceton und Äthanol, unlöslich in Äthylacetat, Äther und Petroläter·
c) Farbreaktionen:
Molish-Reaktion (unter Erhitzen) · positiv
Pehlingsche Reaktion (unter Erhitzen) "
Anthronreaktion "
Phenol-Sulfonsäure-Reaktion w
- Orcinol-Sulfonsäure-Reaktion M
Naphthoresorein-Sulf onsäure-Reaktion "'
Benzidin-Perjodaä-Reaktion w
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Peptid-Nachweisreagens-Reaktion
(tert.-Butylhypochlorit) | positiv |
Alkalisches Kaliumpermanganat | reduziert |
Ninhydrin-Reaktion | schwache Pur |
purfarbe | |
d) pE'a und Molekulargewicht: | |
pK'a | 6,2 |
Durch Titration ermitiBLtes Molekular | |
gewicht | 510+25 |
e) Ultraviolett-äbsorptionsspektrum:
Oberhalb von 210 nm. wird keine charakteristische
Absorption festgestellt.
f) Infrarot-Absorptionsspektrum (Fig.i):
Deutliche
Absorptionsbanden:
3450 (stark) 2900 (mittel)
1640 (mittel) , 1450 (mittel)
1410 (mittel) 1370 (mittel)
1160 (mittel) 1120-1000 (s*kaffk)
920 (schwach) 900 (mittel)
855 (mittel)
g) Das kernmagnetische Resonanzspektrum der Probe läßt
die Anwesenheit von Methinprotonen (V)
-Q-H
in Nachbarstellung zum Sauerstoff erkennen.
h) Optische Drehung: /öj^2 = 110° + 15° (0=1, H2O)
110° + 15° (0=1, Pyridin)
92,5° + 10°(C=1, Dimethylformamid)
i) Elementaranalyse:
Die Verbindung besteht aus den Elementen 0, H, IST undO.
Nach 6-stUndiger Trocknung mit Phosphorpentoxyd bei
600C unter vermindertem Druck zeigt die Probe noch die
Anwesenheit von Wasser.
00 9 822/1896
C 47,6 + 1,50 ; H 7,17 + 0,50; N 3,01 + 0,50
j) Papierchromatographie: Die durch Papierchromatographie mit "Papier Whatman Nr01
und die durch Dünnschichtchromatographie an Kieselgel gemessenen Rf-Werte sind nachstehend in Tabelle
genannt,Eine alkalische Kaliumpermanganatlösung
(wässrige Lösung mit 20 Natriumcarbonat und 10 Kaliumpermanganat)
wird als Nachweisreagens verwendet.
Tabelle 2 | Lösungsmittelsystem | Papierheromatographie T-7545-A T-7545-A- hydrochlorid |
0,10-0,12 | Dünn- schicht- chromato- graphie T-7545-A |
n-Butanol«Essigsäure: Wasser (4:1:2) |
0,10-0,12 | 0,37-0,44 | 0,10 | |
7O0iges wässriges Aceton |
0,44 | 0,11-0,12 | 0,53 | |
n-Butanol:Äthanol: Wasser:konz»wässriges Ammoniak (40:10:49:1) |
0,11-0,12 | 0,01 | 0,08 | |
Äthylacetat Essigsäure Wasser (3:1:3) |
• 0,01 |
0,01-0,02 | 0,00 | |
Äthylacetat:Pyridin: Wasser (2:1:2) |
0,01-0,02 | 0,05 | 0,01 | |
n-Butanol:Pyridin: Wasser (4:2:1 j |
0,05 | 0,46-0,48 | 0,18 | |
n-Butanol:Pyridin: Wasser (4:3:7) |
0,46-0,48 | 0,55 | 0,27 | |
8O0iges Phenol(NH3) | 0,55 | 0,35-0,39 | 0,38 | |
n-Butanol:Äthanol: Wasser:Pyridin (35:15:40:107 |
0,35-0,39 | 0,06 | 0,44 | |
n-Propanol:Wasser: konz«wässriges Ammoniak (70:29:1) |
0,06-0,07 | 0,07 | ||
n-Propanol:Essigsäure: Wasser (4:1:1) |
0,30 | |||
00 9 8 22/1898
lc) Elektrophorese
Die Papierelektrophorese wurde unter Verwendung von 0,05-molarem Borsäurepuffer (pH 10) "bei einem Potentiäkunterschied
von 2 kV 2 Stunden und unter Verwendung
von Pyridin-Essigsäure (prr 6,0) "bei einem Potentialunterschied
von 2 kV 3 Stunden durchgeführt. Die Wanderungsstrecken der Substanz sind nachstehend angegeben
:
Borsäurepuffer (Pu 10) + 1,5 cm
Pyridin-Essigsäure-Puffer (pH 6,0) - 8,5 cm
1) Salze
Das Antibiotikum T-754-5 ist schwach basisch und bildet
Salze mit Säuren (z.B. Salzsäure, Schwefelsäure und organische Sulfonsäuren).
2) Physikalische und chemische Eigenschaften von Antibiotikum T-7545-B.
a) Aussehen, Schmelzpunkt usw.:
Schwach basisches weißes hygroskopisches Pulver, das
keinen scharfen Schmelzpunkt hat und sich bei 95 bis HO0C zersetzt.
b) Löslichkeit:
Leicht löslich in Wasser und polaren organischen Lösungsmitteln (z.B. Methanol, Pyridin, Dimethylformamid
und Dirnethylsulfoxyd); schwer löslich in Aceton
und Äthanol, unlöslich in Äthylacetat, Äther und Petroläther. .
c) Parbreaktionen:
Molish-Reaktion positiv Pehlingsche Reaktion (unter Erhitzen) "
Anthronreaktion "
Phenolsulfonsäurereaktion M
Orcinol-Sulfönsäure-Reaktion "
009822/1 89 6
Benzidin-Perjodat-Reaktion positiv
Peptid-Nachweisreagens-Reaktion
(tert.-Butylhypochlorit) "
(tert.-Butylhypochlorit) "
Alkalisches Kaliumpermanganat reduziert
Ninhydrin-Reaktion schwache Pupurfarbe
d)pK'a und Molekulargewicht:
pK'a 5,0
Durch Titration ermitteltes Molekulargewicht 520 +
10* e) Ultraviolett-Absorptionsspektrum:
Oberhalb von 210 mu. wird keine charakteristische
Absorption festgestellt«
f) Infrarot-Absorptionsspektrum (Fig.2): Deutliche Absorptionsbanden
■ 3400 (stark) · 2910 (mittel)
1638 (mittel) 1415 (mittel)
1080 (stark) 1025 (stark)
900 (mittel) 84-0 (mittel)
g) Das kernmagnetische Resonanzspektrum der Probe läßt
die Anwesenneit von Menthinprotonen ( , )
-G-H v '
in Hachbarsteilung zum Sauerstoff erkennen,
h) Optische Drehung:
ß.J I3 = 102 + 10° (0=1, H2O)
i) Elementaranalyse:
Die Verbindung besteht aus den Elementen G, H, N und 0·
Hach 6-stündiger Trocknung mit Phosphorpentoxyd Taei
600C unter vermindertem Druck zeigt die Probe noch die
Anwesenheit von Wasser.
C= 46,46 + 1,5?έ, H = 7,06 + 0,5?έ, N = 2,44 + 0,5^
C= 46,46 + 1,5?έ, H = 7,06 + 0,5?έ, N = 2,44 + 0,5^
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j) Dünnschichtchromatographie:
Der Rf-Wert betrug 0,43, gemessen durch Dünnschichtchromatographie an Kieselgel, wobei alkalische Kaliumpermanganatlösung
(wässrige Lösung mit 2$ Natriumoarbonat
und 1$ Kaliumpermanganat) als Nachweisreagens
und n-Propanol:Essigsäure!Wasser (4s1s1) als Entwickler
verwendet wurde«,
k) Elektrophoreses
Die Papierelektrophorese wurde unter Verwendung von 0,05-molarem Borsäurepuffer (ρΗ 10) bei einem Potentialunterschied
von 2 kV 2 Stunden und unter Verwendung von Pyridin-Essigsäure (pH 6,0) bei einem Potentialunterschied
von '2 kV 3 Stunden durchgeführt. Die Wanderungsstrecken der Substanz sind nachstehend arigegeben:
Borsäurepuffer (pH 10) +6,0
Pyridin-Essigsäure-Piffer - 4,0
1) Salzes
Das Antibiotikum T-7545-B ist schwach basisch und bildet Salze mit Säuren (z.Be Salzsäure, Schwefelsäure
und organische Sulfonsäuren)e
3) Biologische Eigenschaften von Antibiotikum T-7545
Das antibiotische Spektrum ist in Tabelle 3 angegeben· Als Testmedium wurde ein modifiziertes Pfeffer-Medium
(der oben genannten Zusammensetzung) für allgemeine Padenpilze und Hefen, G-lucosebouillon-Agar für pathogene
Padenpilze und pflanzenpathogene Bakterien, Bouillonagar für gewöhnliche Bakterien und Glycerin-Bouillonagar für
säurefeste Bakterien verwendet. In jedem Pail wurde die Agar-Verdünnungs-Methode angewendet»
00822/189
Antibiotiacb.es Spektrum von T-7545 TestOrganismus
Hemmende Mindestkonzentration
y/ml T-7545-A T-7545-B
280C,40 Std·
280C,40 "
280C,40 "
280C, 40 »
280C,40 »
280C,40 "
280C,40 »
280C,40 "
28°C,40
>100 >100
>100 >100
>100
>100
>100
>100 >100 >100
>100
Pyricularia oryzae Pellicularia sasakii
Colletotrichum
■jO lagenarium
Alternaria kikuchiana Aspergillus niger
Penicillium chrysogenum
Saccharomyces cerevisiae
Candida albioans
Trichophyton mentagrophytes
Xanthomonas oryzae Bacillus subtilis
Staphylococcus
aureus
Sarcina lutea Escherichia coli Proteus vulgaris
Mycobacterium avium Mycobacterium ATCC
Die Wirksamkeit der Substanzen gemäß der Erfindung gegen 30 verschiedene pflanzenpaöiogene Pilze, gemessen nach der
vorstehend beschriebenen mikrobiologischen Testmethode,' ist in Tabelle 4 und 5 angegeben. Jede Zahl in diesen
Tabellen ist jeweils der Wert der maximalen Verdünnung, bei der anomale Verzweigung durch eine wässrige Lösung
35 (1 mg/ml) des gereinigten Antibiotikums T-7545-A bzw.
T-7545-B hervorgebracht wird·
28°Cs40 | 11 | >100 | >100 |
280C,40 | Il | >100 | >100 |
280C840 | W | >100 | >100 |
280C840 | Il | >100 | >100 |
370C,14 | H | >100 | >100 |
370C,14 | Il | >100 | >100 |
370C,14 | H | >100 | >100 |
370C,14 | N | >100 | >100 |
370C,14 | Il | >100 | >100 |
370C,40 | Il | >100 | >100 |
370C,40 | H | >100 | >100 |
■; '009822/1896
Tabelle 4-Wirksamkeit von T-7545-A gegen pflanzenpathogene Pilze
Testorganismus
Wert maximaler Verdünnung, der zu anomaler Verzweigung der Hyphenspitze führt»
Pellicularia sasakii Rhizoctonia solani Corticium rolfsii
Phytophthora infestans
100,000
50.000
< 100
<2000
Tabelle 5
Wirksamkeit von T-7545-3 gegen pflanzenpathogene Pilae
Testorganismus
Wert maximaler Verdünnung, der zu anomaler Verzweigung der Hyphenspitze führt
Pellicularia sasakii Rhizoctonia solani Corticium rolfsii Phytophthora infestans
1500
<20
<100
<2000
Obwohl T-7545 das Wachstum einer Anzahl von Kikroorganismen
einschließlich Pellicularia sasakii bei üblichen
Testmethoden (in vitro) nicht hemmt, zeigte das Antibiotikum eine bemerkenswerte Wirkung gegen den Blattscheidenbrand
(sheath blight) von Reis in vivo.
Der Ultraviolettbereich des Spektrums, das Infrarotspektrum,
das kernmagnetische Resonanzspektrum, die Elementaranalyse und die übrigen Eigenschaften von Antibiotikum
T-7545 lassen annehmen, daß es ein Aminocyclitol-Antibiotikum
ist, das Glucose in I'IoleKül enthält» Das Antibiotikum
gemäß der Erfindung unterscheidet sich jedoch von den bekannten Aminocyclitol-Antibiotika und ihren
verwandten Verbindungen im Ausgangsmikroorganismus, in den physikalischen und chemischen Eigenschaften sowie
in den physiologischen Eigenschaften» Das Antibiotikum
verwandten Verbindungen im Ausgangsmikroorganismus, in den physikalischen und chemischen Eigenschaften sowie
in den physiologischen Eigenschaften» Das Antibiotikum
00982 2/189 6
BAD
gemäß der Erfindung ist somit als neues Antibiotikum anzusehen. T-7545-A und T-7545-B haben fast die gleichen
Infrarotspektren und Ultraviolettspektren, jedoch sind der Rf-Wert bei der Dünnschichtchromatographie, die
Wanderung bei der Hochspannungs-Papierelektrophorese und
die pK'a-Werte deutlich verschieden, und die Antibiotika
können durch Flüssigkeitschromatographie getrennt werden*
Diese Antibiotika zeigen in vitro keine wesentliche antimikrobische
Wirkung, jedoch üben sie eine starke Schutz-·
10* wirkung auf lebende Pflanzen gegen Pellicularia sasakii, Leptosphaeria salvini, Rhizoctdmia solani, Corticium
rolfsii, Phytophthora infestans, Sclerotinia aLerotiorum,
Xanthomonas oryzae und Oladosporium fulvum aus, so daß sie als landwirtschaftliches Fungizid oder Bestandteile
von Fungiziden verwendet werden kännenjSie können in pulverförmigen, flüssigen oder körnigen Präparaten mit
oder ohne Hilfsstoffe oder Streckmittel verwendet werden. Die Konzentration der Antibiotika in diesen Präparaten
kann im allgemeinen etwa 0,0001 bis 80$ betragen und in
Abhängigkeit von den zu bekämpfenden Schädlingen oder
von den Bedingungen variieren.
009822/1896
Za einem wässrigen Gemisch (pH 7)» das 3$ Glucose,
2,296 Sojabohnenmehl und 0,3$ Pepton enthält, werden 0,4$
• gefälltes Calciumcarbonat gegeben. Insgesamt 4 1 dieses Gemisches werden in aliquoten Teilen von je 50 ml in
200 ml-Erlenmeyerkolben gegeben, die dann sterilisiert
werden. Jeder Kolben wird mit 1 ml einer Impfkultur von Streptomyces hygroscopicus var· limoneus (lFÖ-12703)
geimpft, die durGh Schüttelkultur in einem Medium der oben genannten Zusammensetzung für eine Dauer von 2 Tagen
hergestellt worden ist, und II4 Stunden bei 280C auf
einer rotierenden Schüttelvorrichtung bei 200 TJpM bebrütet, Die erhaltenen Kulturbrühen werden vereinigt und filtriert« Auf diese Weise werden 2,8 1 einer filtrierten
Brühe erhalten, die pro Milliliter 2QO γ T7545-A und 150 γ T-7545-B enthält.
Mit der Kultur von Streptomyces hygrosoopicus var.limoneus
(IFW2703 wird ein gutes Ergebnis erhalten.
Zu einem wässrigen Gemisch (pH 7), das 3$ Glucose, 2$
Sojabohnenmehl und 0,3?6 Pepton enthält, werden 0,4$
gefälltes Oaloiumcarbonat gegeben. Insgesamt 2 1 dieses Gemisches werden in aliquoten Teilen von je 500 ml in
vier Sakaguchi-Kolben gegeben, die ein Fassungsvermögen von 2 1 haben und dann sterilisiert werden. Jeder Kolben
wird mit einer Schlaufenmenge einer Schrägkultur von Streptomyces hygroscopicus var. limoneus (IFO-12703) geimpft.
Die geimpften Kolben werden 2 Tage bei 280C auf
einer hin- und hergehenden Schüttelvorrichtung bebrütet,
die eine Sohwingap|>litttd* von 10 cm hat und mit 120 Zyklen/Minute
bewegt wird, um eine Impfkultur herzustellen. In einen 200 1-Tank aus nichtrostendem Stahl werden 100
009822/1896
eines Mediums gegeben, das durch Zugabe von 0,656 gefälltem
Calciumcarbonat zu einem wässrigen Gemisch (p™ 7),
das 5$ Glucose, 3,696 Sojabohnenmehl und O,5# Pepton enthält,
hergestellt worden ist. Das Gemisch im Tank wird sterilisiert und dann mit 2 1 der oben genannten Impfkultur
geimpft und 114 Stunden bei 27°C bei 5O#iger Belüftung
und 200 UpM bebrütet. Die Kultur wird filtriert, wobei 4 kg Diatomeenerde als Filterhilfsmittel verwendet
werden. Hierbei werden 68 1 einer filtrierten Kulturbrühe erhalten, die ein Gemisch von 100 γ T-7545-A und 150 γ
Ϊ-7545-Β pro Milliliter enthält.
Mit der Kultur von Streptomyces hygroscopicus var.limoneus
ebenso
(IPO 12704) wird ein/gutes Ergebnis erhalten.
(IPO 12704) wird ein/gutes Ergebnis erhalten.
Zu 680 1 einer filtrierten Kulturbrühe (die 100 γ Ϊ-7545-Α
und 150 γ T-7545-B pro ml enthält), die auf die in Beispiel 2 beschriebene Weise erhalten worden ist, werden
13,6 kg Aktivkohle gegeben. Das Gemisch wird 1 Stunde
so
gerührt,/daß die in der filtrierten Brühe enthaltenen aktiven Ingredientien an der Aktivkohle adsorbiert werden. Die Aktivkohle wird dann abfiltriert und zweimal mit je 136 1 Wasser gewaschen. Die gewaschene Aktivkohle wird zweimal zur Entfernung der gewünschten Produkte mit je 136 1 eines Gemisches von Aceton und 0,5n-Salzsäure (7:3) eluiert, wobei 272 1 Eluat erhalten werden, das dann durch eine Säule von 20 1 des Ionenaustauschharzes Amberlite IR-45 (0H-Form) geleitet wird, die Lösung wird dann unter vermindertem Druck eingeengt und mit dem 10-fachen Volumen Aceton versetzt, wobei 4,2 kg einer rohen Substanz erhalten werden, die 10 γ T-7545-A und 15 γ T-7545-B pro mg enthält. (Aasbeute etwa 6256).
gerührt,/daß die in der filtrierten Brühe enthaltenen aktiven Ingredientien an der Aktivkohle adsorbiert werden. Die Aktivkohle wird dann abfiltriert und zweimal mit je 136 1 Wasser gewaschen. Die gewaschene Aktivkohle wird zweimal zur Entfernung der gewünschten Produkte mit je 136 1 eines Gemisches von Aceton und 0,5n-Salzsäure (7:3) eluiert, wobei 272 1 Eluat erhalten werden, das dann durch eine Säule von 20 1 des Ionenaustauschharzes Amberlite IR-45 (0H-Form) geleitet wird, die Lösung wird dann unter vermindertem Druck eingeengt und mit dem 10-fachen Volumen Aceton versetzt, wobei 4,2 kg einer rohen Substanz erhalten werden, die 10 γ T-7545-A und 15 γ T-7545-B pro mg enthält. (Aasbeute etwa 6256).
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Zu 680 1 einer filtrierten Kulturbrühe (die 100 γ Ϊ-7554-Α
und 150 γ T-7545-B pro ml enthält), die auf die in Beispiel 2 beschriebene Weise erhalten worden ist, werden
13,6 kg Aktivkohle gegeben. Das Gemisch wird 1 Stunde gerührt, wobei die in der filtrierten Kulturbrühe enthaltenen
aktiven Bestandteile an der Aktivkohle adsorbiert werden. Die Aktivkohle wird dann abfiltriert und
zweimal mit je 136 1 Wasser gewaschen. Eine Säule (70 1), die mit der so behandelten Aktivkohle gefüllt ist, wird
mit 250 1 Wasser, das mit Butanol gesättigt ist, eluiert, wodurch die aktiven Bestandteile aus der Aktivkohle entfernt werden. Das Eluat wird unter vermindertem Druck
eingeengt und mit dem 10-fachen Volumen Aceton versetzt, wobei 770 g eines rohen Gemisches erhalten werden, das
70 γ !D7545-A und 100 γ T-7545-B pro mg enthält (Ausbeute
etwa 80#).
Die gemäß Beispiel 2 erhaltene filtrierte Kulturbrühe (680 1 mit 100 γ T-7545-A und 150 γ T-7545-B pro ml)
wird durch eine Säule, die mit 55 1 des Ionenaus tauschharzes IR-120 (H-Form) S.V. = 5) gefüllt ist,und dann
durch eine weitere Säule geleitet, die mit 65 1 des Ionenaustauschharzes
"Amberlite IR-45M (OH-Form, S.V. =5)
gefüllt ist. Diese Säulen werden mit 120 1 Wasser gewaschen. Das Waschwasser wird mit der durchgeleiteten
Lösung vereinigt. Die vereinigte Lösung wird durch eine Säule geleitet, die mit 60 1 des Ionenaustauschharzes
Dowex 5OWX-2 (H-Form, 149-297 μ) (S.V. = 2) gefüllt ist,
wobei die aktiven Bestandteile am Harz adsorbiert werden.
Das Harz wird mit 350 1 Wasser gewaschen, worauf die
aktiven Bestandteile mit 200 1 0,5η-ΝΪ,0Η eluiert werden.
Nachdem die ersten 30 1 des Ablaufs verworfen worden sind, werden die folgenden 125 1 aufgefangen und unter vermin-
009822/1896
dertem Druck eingeengt, worauf das 10-fache Volumen
Aceton zugesetzt wird. Hierbei werden 4-20 g der pulverförmigen
rohen aktiven Bestandteile gewonnen, worin etwa 150 γ T-7545-A und 200-250 γ T-7545-B pro mg enthalten
sind (Ausbeute 92$).
Eine Lösung von 420 g des gemäß Beispiel 4 hergestellten rohen Pulvers in 21 1 Pyridin-Essigsäure-Puffer (0,1-molar,
pH 6,0) wird hergestellt. Die Lösung wird bei
S0Ve 2 durch eine Säule (17,8 χ 146 cm) gegossen, die
mit 35 1 des Ionenaustauschharzes Dowex 5Ox-2 (149-297 w)
gefüllt ist, das mit der oben genannten Pufferlösung gepuffert wird, wodurch die aktiven Bestandteile am Harz
adsorbiert werden·
Weitere 75 1 Pufferlösung der oben genannten Zusammensetzung werden über die Säule gegossen, wodurch die Verunreinigungen
und Pigmente eluiert werden« Anschließend wird T-7545-B mit 125 1 Pyridin-Essigsäure-Puffer
(0,1-molar, pH 6,5) bei SV 2 eluiert, wobei 75 1 Eluat
entsprechend den Fraktionen 3 bis 5 (25 l/Fraktion) mit positiver Reaktion mit Anthron-Reagens aufgefangen werden.
Dieses Eluat wird unter vermindertem Druck eingeengt und dann lyophilisiert, wobei 112g (750 γ/mg) rohes T-7545-B
in Pulverform erhalten werden. Die Ausbeute beträgt etwa 90?i.
Durch die Säule, aus der T-7545-B eluiert worden ist,
werden 500 1 Pyridin-Essigsäure-Puffer (0,1-molar, pH 7,5)
bei SV 2 gegossen, wobei 250 1 Eluat, das den Fraktionen 5 bis 14 entspricht (25 l/Fraktion) mit positiver Reaktion
mit Anthron-Reagens aufgefangen werden. Dieses Eluat wird unter vermindertem Druck eingeengt und dann lyophilisiert,
wobei 75 g (750 γ/mg) rohes T-7545-A in Pulverform erhalten werden. Die Ausbeute beträgt etwa 90$.
0 0 9 8 2 2/1896
Eine Lösung von 42 g des gemäß Beispiel 4 hergestellten
Gemisches (enthaltend 150 γ I-7545-A und 200 bis 250 γ
.T-7545-B pro mg) in 210 ml Wasser wird hergestellt. Die
Lösung wird durch eine Säule geleitet, die mit 600 ml Ionenaustauschharz »Amberlite IRA-900» (OH-Form) (0,25
\ gefüllt ist,
bis. 0,84 mm) -βΓ, worauf mit Wasser eluiert und Fraktionen von je 200 ml Ablauf abgenommen werdenβ
bis. 0,84 mm) -βΓ, worauf mit Wasser eluiert und Fraktionen von je 200 ml Ablauf abgenommen werdenβ
Die Fraktionen, die die aktiven Bestandteile enthalten, die positiv mit Anthron-Reagens reagieren, werden ermittelt»
Die Fraktionen werden dann durch Dünnschichtchromatographie in T-7545-A-reiche Fraktionen (3» bis
7»Fraktion) und T-7545-B-reiche Fraktionen (8» bis 16.
Fraktion) getrennt» Die ersteren (Fraktionen mit hohem Gehalt an T-7545-A) werden vereinigt, worauf eine geringe
Menge Ionenaustauschharz "Amberlite IRO-50 (H)" zugesetzt
und der Pjr-Wert auf 8 eingestellt wird. Die Lösung wird
unter vermindertem Druck eingeengt, worauf das 10-fache Volumen Aceton zugesetzt wird, wobei 5,6 g rohe Substanz
erhalten werden, die 650 bis 700 γ Ϊ-7545-Α und 250 bis
300 γ T-7545-B pro mg enthält» x
Der gleichen Behandlung werden die an I-7545-B -reichen
Fraktionen unterworfen, wobei 9,5 g rohe Substanz erhalten werden, die 200 γ T-7545-A und 600 bis 700 γ
T-7545-B pro mg enthält. Ausbeute etwa 8596.
Zu 150 g Aktivkohle für Chromatographiezwecke (Tokusei-Shirasagi,
hergestellt durch die Anmelderin) werden 450 ml Wasser gegeben, worauf der pH-Wert der oben stehenden
Schicht durch Zusatz von In-HCl auf 3 eingestellt wird.
Das Gemisch wird in eine Säule von 750 ml (Verhältnis von
Höhe zu Durohmesser = 10) gepackt. Die Säule wird mit
009822/ 1896
Wasser gewaschen, bis der Pg-Wert des ablaufenden Waschwassers
3,5 beträgt. Durch diese Säule wird mit SV 3 eine Lösung von 8,5 g rohem Ϊ-7545-Α (750 γ/mg) in 750 ml
n/500-HCl geleitet, wobei der aktive Bestandteil adsorbiert wird.
Die Säule wird mit 3 1 n/500-HCl gewaschen, worauf der
aktive Bestandteil mit einem Gemisch von Methanol und n/500-HCl (3:7) eluiert wird. Die ersten 500 ml des Ablaufs
werden verworfen, worauf die folgenden 2,0 1 des Ablaufs, der farblos ist und positiv mit Anthron-Reagens
reagiert, aufgefangen wird. Die hierbei erhaltene aktive Fraktion wird bei SV 5 durch eine Säule (200 ml, Verhältnis
von Höhe zu Durchmesser = 6) geleitet, die mit Ionenaustauschharz "Amberlite IR 45 (OH)11 gefüllt ist,
das vorher mit 30$igem wässrigem Methanol gewaschen worden istβ Hierbei wird die durchgelaufene Lösung aufgefangen.
Die Säule wird mit 500 ml 30$igem wässrigem Methanol gewaschen, um die an der Säule verbliebenen aktiven Bestandteile
auszuwaschen.
Die durchgelaufene Lösung wird mit der Waschflüssigkeit vereiniget und unter vermindertem Druck eingeengt. Zum
Konzentrat wird das 10-fache Volumen Aceton gegeben, wobei 5,4 g fast reines It-7545-A (950 bis 1000 γ/mg) als
weißes Pulver erhalten werden (Ausbeute etwa 85$).
Eine Wiederholung des vorstehend beschriebenen Versuchs mit 8,5 g des gemäß Beispiel 5 erhaltenen rohen T-7545-B
(750 γ/mg) ergibt 5,7 g fast reines T-7545-B (950 bis /
1000 γ/mg) als weißes Pulver (Ausbeute etwa
00 9822/1896
Eine Lösung von 5,6 g des an T-7545-A-reichen Pulvers
(700 γ/mg A, 300 γ/mg B) in 30 ml Wasser wird hergestellt.
Die Lösung wird durch die mit 500 ml Harz ("Dowex 1x2,DH")
(Verhältnis von Höhe zu Durchmesser = 30) gegossen, wobei die aktiven Bestandteile an den Harzen, adsorbiert werden.
Die Harze werden mit Wasser eluiert. Der Ablauf wird in Fraktionen von je 500 ml aufgefangen, während die Fraktionen
auf die Anwesenheit von aktiven Bestandteilen mit Hilfe von Anthron-Reagens untersucht werden. Hierbei wird
T-7545-A in der 5. bis 7.Fraktion und I-7545-B.in der
17«bis 25.Fraktion festgestellt. Die erstgenannten Fraktionen werden unter vermindertem Druck eingeengt und dann
lyophilisiert, wobei 3,6 g T-7545-A (1000 γ/mg) erhalten werden. Die Ausbeute beträgt etwa 90$. Die Fraktionen,
die T-7545-B enthalten, werden unter vermindertem Druck eingeengt und dann lyophilisiert, wobei 1,3 g T-7545-B
(1000 γ/mg) erhalten werden. Die Ausbeute beträgt etwa
Eine Lösung von 9,5 g des gemäß Beispiel 6 erhaltenen, an T-7545-B-reichen Pulvers (700 γ/mg B, 180 γ/mg A)
in 50 ml Wasser wird hergestellt. Die Lösung wird durch eine Säule (Verhältnis von Höhe zu Durchmesser = 30)
gegossen, die mit 11 Harz (Dowex 1x2, OH) gegossen wird,
wobei die aktiven Bestandteile am Harz adsorbiert werden. Das Harz wird mit Wasser eluiert. Der Ablauf wird in
Fraktionen von je 500 ml aufgefangen, wobei auf Anwesenheit
von aktiven Bestandteilen in jeder Fraktion mit Hilfe von Anthron-Reagens geprüft wird. Hierbei wird T-7545-A
in der 9. bis 11.Fraktion und T-7545-B in der 35.bis 60.
Fraktion nachgewiesen. Die erstgenannten Fraktionen werden unter vermindertem Druck eingeengt und dann lyophilisiert,
wobei 1,45 g T-7545-A (1000 γ/mg) erhalten werden. Die Ausbeute beträgt etwa 85$. Die Fraktionen,
009 8 22/1896
die T-7545-B enthalten, werden in der gleichen Weise behandelt,
wobei 5,5'g T-7545-B (1OOO γ/mg) erhalten werden. Die Ausbeute beträgt etwa 83$.
Eine Lösung von 1 g des gemäß Beispiel 6 erhaltenen,
an T-7545-A reichen Gemisches von T-7545-A und T-7545-B in 50 ml Methanol wird hergestellt. Die Lösung wird mit
1 g Kieselgel gut gemischt. Das Gemisch wird unter vermindertem Druck getrocknet. Das getrocknete Gemisch wird'
oben auf eine Säule gegeben (1,5 χ 90 cm), die mit Kieselgel gefüllt ist, worauf Säulenchromatographie
unter Elution mit n-Propanol:Essigsäure:Wasser (4:1:1) mit Hufe von Dünnschicht Chromatographie folgt. ·
Es wird festgestellt, daß zuerst T-7545-B und dann
T-7545-A eluiert wird. Die Fraktionen, die jeweils den aktiven Bestandteile enthalten, werden aufgefangen. Jede
Fraktion wird unter vermindertem Druck eingeengt, worauf mit Aceton gefällt wird, wobei 190 mg T-7545-B als
weißes Pulver (Ausbeute etwa 65$) und 420 mg T-7545-A
als weißes Pulver (Ausbeute etwa 60$) erhalten werden.
Eine Lösung von 1 g des gemäß Beispiel 7, 8 oder 9 erhaltenen
gereinigten Pulver« von T-7545-A in 20 ml Methanol wird hergestellt. Zur Lösung werden 2 ml In-HCl gegeben,
worauf das Wasser und Methanol abdestilliert werden. Hierbei wird 1 g T-7545-A-hydrochlorid erhalten.
Die gleiche Behandlung von 1 g gereinigtem pulverförmigem T-7545-B, das gemäß Beispiel 7, 8 oder 9 erhalten
worden ist, ergibt 1 g I-7545-B-hydrochlorid.
0 0 9 8 2 2/1896
Bisher wurd,en organische Arsenmittel weitgehend für die
Bekämpfung des Blattscheidenbrandes der Reispflanze (sheath blight), organische Quecksilberverbindungen für
die Bekämpfung der Stengelfäule und Mittel auf Basis von Pentachlornitrobenzol (nachstehend kurz als PCNB bezeiohnet)
für die Fußkrankheit des Getreides, Weißährigkeit und die Sclerotiniakrankheit verwendete Diese Mittel
sind jedoch nicht immer unschädlich für Menschen und Haustiere oder sogar Fische und Pflanzen. Beispielsweise sind
organische Arsenmittel nicht nur chronisch giftig für Mensch und Tier, sondern verschlechtern auch den Ernteertrag
bei Reis, während organische Quecksilberverbindungen nicht nur chronisch giftig für Menschen und (Diere,
sondern auch giftig für Fische sind. PCNB ist auch insofern schädlich, als es das Wachstum der zu schützenden
jungen Sämlinge beeinträchtigt· Angesichts dieser Nachteile besteht ein dringendes Bedürfnis für ein neues
verbessertes Präparat«
Von der Anmelderin wurde überraschenderweise gefunden, daß die Kulturbrühe eines 1-7545 bildenden Stammes von
Mikroorganismen eine sehr starke hemmende Wirkung gegen Blattscheidenbrand (Pellicularia sasakii) in vivo (Anwendung
auf junge Reissämlinge) hat, obwohl sie bei der üblichen mikrobiologischen Austestung (in vitro) praktisch
keine antibiotische Wirkung hat. Weitere Untersuchungen haben gezeigt, daß dieses Antibiotikum T-7545 die Besonderheit
aufweist, daß es nur dann eine starke krankheitsbekämpfende.
Wirkung hat, wenn die Pflanze oder der Boden damit behandelt wird.
Es wurde ferner gefunden, daß das Antibiotikum T-7545
ni$ht nur gegen den Blattsoheidenbrand bei der Reispflanie,
sondern auoh gegen andere Pflanzenkrankheiten, z.B. die Wurzelfttule des Reises und die Fußkrankheit des Getreides
009822/1896
und Sclerotiafäule von Gemüse, blühenden Pflanzen und
Schößlingen von Bäumen sehr wirksam ist. Ferner ist das Antibiotikum T-7545 im wesentlichen unschädlich für
Mensch und Tier sowie Fische und beeinträchtigt selbst bei Anwendung in hohen Konzentrationen praktisch nicht
die Keimung, das Wachstum, den Ertrag und andere Merk-• male von Nutzpflanzen.
Die wirtschaftlichen Giftpräparate gemäß der Erfindung können die Kulturbrühe eines das Antibiotikum T-7545
bildenden Stamms der Gattung Streptomyces, das Filtrat der Kulturbrühe, ihr Konzentrat oder ein gereinigtes
Präparat der Kulturbrühe enthalten» Es ist auch möglich,
das Antibiotikum Τ-7Φ45 in Form der freien Base sowie
in Form von Salzen mit geeigneten organischen oder anorganischen Säuren (z.B. Oxalsäure, Bernsteinsäure, Schwefelsäure,
und Salzsäure) oder mit Metallen (z.B. Natrium, Kobalt, Kupfer, Aluminium und Calcium) zu verwenden.Ebenso
ist es/möglich, einen Ester oder Äther von T 7545 zu verwenden,
der beispielsweise durch Veresterung der Hydroxylgruppe von T-7545 mit einer Säure (z.B. Essigsäure, Malonsäure
oder Apfelsäure) erhalten werden kann.
Das Giftpräparat gemäß der Erfindung kann in beliebiger geeigneter Weise angewendet werden. Beispielsweise kann
die Substanz in Abhängigkeit vom jeweiligen Anwendungszweck, von der Anwendungszeit und der Anwendungsmethode
usw. unmittelbar als solche, nach Auflösung oder Diapergierung in einem geeigneten flüssigen Träger oder nach
Vermischung mit einem geeigneten festen Träger oder Streckmittel angewendet werden. Gegebenenfalls kann die
Substanz gemäß der Erfindung durch Zusatz eines Emuigators,
Dispergiermittels, Suspendiermittels, Adsorptionsmittels, Penetrationsmittels, Netzmittels, Verdickungsmittels,
Stabilisators und/oder Hilfsstoffs in verschie-
0 0 9822/1896
denen Präparatformeη, beispielsweise in Form von Lösungen
in Öl, Emulsionen, Netzpulvern, wässrigen Lösungen, löslichen Pulvern, Stäubemitteln, Tabletten, Granulat
und Aerosolen zur Anwendung kommen.
Es ist ferner möglich, diese Präparate nach Vermischung
mit anderen Germiziden, z.B. Kupfergermiziden, Germiziden mit,organischem Schwefel, Germiziden mit organischem Chloi;
Organophosphorgermiziden, anderen Antibiotika, Insektiziden (z.B. Insektiziden mit organischem-Chlor, Organophosphorinsektiziden,
Carbaminsäureinsektiziden, natürlichen Insektiziden), Akariziden, Nematoziden, Herbiziden,
Pflanzenwachstumsreglern,. Synergisten, insektenanziehenden oder -abweisenden Mitteln, Duftstoffen, Pflanzenmährst offen,
Düngemitteln u.dgl. zu verwenden.
Die antibiotischen Substanzen T-7545-A und T-7545-B haben
die folgende Toxizität:
a) Die Toxizität von Antibiotikum T-7545-A, das einer der
Wirkstoffe des Präparats ist, kann beispielsweise ermittelt. werden, indem das Antibiotikum T-7545-A Mäusen intravenös
injiziert und der LDcQ-Wert ermittelt oder die mittlere
Letaldosis für Oryzias latipes gemessen wird. Die Ergebnisse dieser Messungen sind in Tabelle 6 angegeben.
Tabelle 6: Akute Toxizität von T-7545-A VersuchstierTestmethodeToxizität
Mäuse intravenöse Injektion LDc0
>2000 mg/kg
Oryzias latipes Einsetzen in wässrige TIi >4O ppm
Lösung
b) Die Toxizität von Antibiotikum T-7545B, das ein weiterer Wirkstoff der Präparate ist, kann in der gleichen
Weise, wie oben für T-7545-A angegeben, ermittelt werden. Die Ergebnisse dieser Messungen sind nachstehend in
Tabelle 7 genannt:
009822/1896
Tabelle 7: Akute Toxizität von T-7545-B Versuchstier Testmethode Toxizität
Mäuse intravenöse Injektion LD50>2000 mg/kg
Oryzias latipes Einsetzen in wässrige ti. >40 ppm
Lösung
Die Konzentration des Wirkstoffs in den grauchsfertigen
Fungiziden gemäß der Erfindung beträgt gewöhnlich etwa 0,0001 bis 1,0 Gew.-^, vorzugsweise etwa 0,0003 bis
0,3 Gew.-0Jo bei flüssigen Präparaten (deh. Lösungen, Sus-Pensionen
oder Emulsionen) und etwa 0,01 bis 30 Gew.-^,
vorzugsweise etwa 0,1 bis 20 Gew.-# bei festen Präparaten. Nach Bedarf können jedoch auch Präparate mit höherer oder
niedrigerer Konzentration verwendet werden. Bei der Herstellung in Konzentratform kann der Wirkstoffgehalt der
15-- Konzentrate etwa 0,5 bis 80 Gew.-^ betragen.
Versuch 1
Bekämpfung des Blattscheidenbrandes des Reises (Rice sheath blight).
Versuchsmethode: Kinmaze-Reispflanzen wurden in 9 cm-Topfen
(3 Sämlinge pro Topf) kultiviert« Die Sämlinge wurden 80 Tage nach dem Einpflanzen getestet, wobei jeweils
6 Töpfe pro Behandlung verwendet wurden.
Impfmethode; Pathogene Pilze Pellicularia sasakii wurden
48 Stunden bei 3O0C auf einer Platte aus Kartoffel-Infusionszucker-Agar
kultiviert. Eine Agarscheibe von 10 mm Durchmesser wurde aus einer peripheren Kolonie ausgeschnitten.
Die Scheibe wurde in dem Innenraum der Blattscheide in der Nähe der Bodenoberfläche eingesetzt, und
zwar jeweils eine Scheibe pro Pflanze. Die Töpfe wurden unxer einer PVC-Atideckung bei der normalen Umgebungstemperatur
von 32 bis 25 C und bei einer relativen Feuchtigkeit von 100 bis 70% gehalten. Die Impfung wurde beim
GG9872/1896 '
•ad
prophylaktischen Test unmittelbar naoh Trocknung des
aufgebrachten Präparats an der Luft und beim Bekämpfungatest 3 Tage vor der Anwendung vorgenommene
Anwendung des Präparats: Eine Reihe von wässrigen lösungen
wurde aus einer Kulturbrühe von Streptomyces hygroscopi- · cus varolimoneus mit 10000 Verdünnungseinheiten/ml
hergestellte Ferner wurden verdünnte flüssige Präparate von handelsüblichen Bekämpfungsmitteln hergestellt. Zu
jeder dieser Lösungen und Präparate wurden 0,05$ (endgültige Konzentration) Dyne (ein von der Anmelderin hergestelltes
Verlaufmittel) gegeben« Das Gemisch wurde mit einer Spritzpistole in einer Menge von 30 ml/6 Töpfe,
gleichmäßig über die Blätter gesprüht. Der das Antibiotikum bildende Stamm wurde wie folgt kultiviert: Aliquote
Teile von je 60 ml eines flüssigen Mediums wurden in 200 ml-Erlenmeyerkolben gegeben. Jeder Kolben wurde mit
einer Ösenmenge des oben genannten Stammes geimpft. Die
Kolben wurden 5 Tage bei 280O auf einer rotierenden Schüttelvorrichtung bei 200 UpM bebrütet«, Das verwendete
Medium hatte folgende Zusammensetzung: 3$ Glucose, 2,25ε
rohes Sojabohnenpulver, 0,3$ Pepton und 0,4$ Calciumcarbonat.
Bestimmungsmethode: 10 Tage nach der Anwendung des Präparats
wurde die Länge jedes Stengels von· Bodenhöhe bis zur Oberkante der Läsion direkt gemessen. Die Ergebnisse
sind nachstehend in Tabelle 8 genannt.
0 0 9822/1896
Wirkung der Kulturbrühe bei der Bekämpfung des Blatt-Scheidenbrandes,(mittlere
Länge der Läsionen/Stengel in cm)
Präparat Dosierung Präventiv- Heil- Schädigung wirkung wirkung der Pflanze
Unbehandelte
Vergleichsproben - 27,9 30,1
Emulgierbares
Konzentrat von
Polyoxin PS(I) x60° 6»4 15,0
Konzentrat von
Polyoxin PS(I) x60° 6»4 15,0
Monzet-Uetzpulver
(2) X200C 0 1,1 ++
Kulturbrühe von Streptomyces 15 hygroscopicus
var.limoneus
X200C | 0 | 1,1 |
unverdünnt | 0 | 0,4 |
χ 2 | 0 | 0,4 |
x 4 | 0 | 0,7 |
χ 8 | 0 | 1,2 |
x16 | 0 | 1,5 |
x32 | 0 | 3,7 |
Auswertung; Bis zu einer 16-fachen Verdünnung war die Kulturbrühe sowohl für die Prophylaxe als auch für die
Behandlung gegen den Blattscheidenbrand des Reises überaus wirksam» Keinerlei Schädigung der Pflanzen wurde festgestellt.
(1) Enthalten! 30.000 PS-Einheiten/g als Polyoxin B.
(2) Enthaltend 20$ Methylarsin-bis-dimethyldithiocarbamat,
20$ Zinkdimethyldithiocarbamat und 40$ Bis-(dimethyI-thiocarbamoyl)disulfid.
Versuch 2
Bekämpfung des Blattscheidenbrandes des Reises durch
Vorbehandlung des Bodens
Versuchsmethode; Die gleichen Reispflanzen wie bei Versuch
1 wurden verwendet. Die Pflanzen wurden auf die gleiche Weise wie bei Versuch 1 geimpft.
009822/ 1896
Anwendung des Präparats; Wässrige Lösungen von pulverförmigem
!"-7545-A wurden auf die gleiche Weise wie bei
Versuch 1 auf die Pflanzen gesprüht "bzw, in einer Menge
von 5 ml/Topf in den Boden gespritzt.
Bewertungsmethode t Wie bei Versuch 1... Die Ergebnisse
sind in Tabelle 9 genannt.
!Tabelle 9
Bekämpfung des Blattscheidenbrandes des Reises durch
Vorbehandlung des Bodens (mittlere Länge der Läsionen/ Stengel in cm).
Präparat Dosierung Präventiv- Heil- Schädigung
-wirkung wirkung der Pflanze
TJnbehandelte Vergleiche-15
proben
T-7J45-A auf die Pflanzen gesprüht
20 T-7545-A in
den Boden gespritzt
Auswertung; T-7545-A hatte bei Einspritzung in den Boden und beim Aufsprühen auf die Pflanzen die gleiche Wirksamkeit
gegen den Blattscheidenbrand von Reis. Eine Schädigung der Pflanze bei der Behandlung vor dem Auflaufen
wurde nicht festgestellt.
Versuch 3
Bekämpfung des Blattscheidenbrandes des Reises
Kinmaze-Reispflanzen wurden zu je 3 Pflanzen/Topf in
a/5000-Wagner-Töpfe gepflanzt. G-ruppen von je 5 Töpfen
im ährentragenden Stadium wurden für den Versuch verwendet. Die Impfung wurde wie bei Versuch 1 vorgenommen, d.h.
eine Agarscheibe von 20 mm Durchmesser wurde auf die
009822/1896
— | 25, | CVJ | 28,7 | |
20 | ppm | 0, | 7 | 1,5 |
40 | ppm | 0 | 0,6 | |
80 | ppm | 0 | 0,3 | |
20 | ppm | o, | 6 | 1,3 |
40 | ppm | 0 | 0,5 | |
80 | ppm | 0 | 0,4 |
Blattscheide in der Nähe der Bodenoberfläche (1 Scheibe/ 2 Stengel) eingesetzt. Die Töpfe wurden in ein Gewächshaus
gestellt. 5 Tage nach der Impfung wurde T-7545-A in einer Menge von 500 ml/5 Töpfe wie bei Versuch 1 aufgebracht.
Die Bewertung wurde 21 bzw. 35 Tage nach der Behandlung
wie bei Versuch 1 vorgenommen. Die Ergebnisse sind in Tabelle 10 genannt.
Wirkung von T-7545-A bei der Bekämpfung des Blattscheidenbrandes (mittlere Länge der Läsionen/Stengel in cm)
Präparat Dosis Heilwirkung Schädigung
nach nach der Pflanze
21 Tg. 35 Tg. _
Unbehandelte Vergleichs- -
pflanzen - 32,5 56,3
Emulgierbares Konzentrat von Polyoxin PS |
X | 5 | 600 | 14,0 | 24,5 |
Monzet-Netzpulver | X | 10 | 2000 | 9,9 | 10,1 |
T-7545-A | 20 | ppm | 10,9 | 15,8 | |
40 | ppm | 9,5 | 9,6 | ||
ppm | 9,2 | 9,2 | |||
ppm | 9,0 | 9,0 |
Bei einer Konzentration von 10 ppm oder mehr war T-7545-A
äußerst wirksam bei der Behandlung nach dem Auftreten der Krankheit und unterdrückte die Bildung von neuen Läsionen
mehr als 1 Monat nach der Einwirkung. Keinerlei Schädigung
der Pflanzen wurde selbst bei einer Konzentration von 40 ppm festgestellt.
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Versuch 4
Bekämpfung der Stengelfäule des Reises
Versuchspflanzen: wie "bei Versuch 3 Anwendung des Präparats: wie bei ^ersuch 3
Impfmethode: Pathogene Pilze Helminthosporium sigmoideum wurden auf Reisstrohmedium 14 Tage bei 280C kultivierte
Je 1 Stück der erhaltenen Kultur (2 cm Länge) wurde pro Stengel in den Innenraum am Fuß der Blattscheide jeder
Reispflanze eingesetzt, nachdem das aufgesprühte Präparat an der Luft getrocknet war0 Anschließend wurde auf
die gleiche Weise wie bei Versuch 1 gearbeitet. Die Töpfe
wurden in einen PVG-Raum gestellt» 14 Tage nach der Impfung wurde die Länge der Läsion bei jedem Stengel
gemessen. Die Ergebnisse sind in Tabelle 11 genannt«
Wirksamkeit von T-7545-A bei der Bekämpfung der Stengelfäule (mittlere Länge der Läsionen/Stengel in cm)
Präparat Dosis Präventiv- Schädigung der wirkung. Pflanze
Unbehandelte
-----
-----
Unbehandelte | - | 8,5 |
Vergleichsprobe | ||
Fumiron-lietzpulver | X25OO | 2,1 |
(3) | X125O | 0,6 |
10 ppm | 2,3 | |
T-7545-A | 20 ppm | 1,8 |
40 ppm | 0,4 | |
Bei einer Konzentration von 10 ppm oder mehr zeigte T-7545-A eine starke Wirkung auf die Stengelfäule.
(3) Enthält 5$ Phenylquecksilber(II)-jodid.
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_ 42 - 195A 110
Versuch 5
Bekämpfung der Würzelfäule der Gurke (damping-off)
Versuchamethode; Rhizoctonia solani wurde auf Gerstenmedium
5 Tage "bei 280C kultiviert. Eine Bodenprobe des
Feldes wurde in 9 cm-Töpfe gefüllt, die dann mit Wasserdampf sterilisiert wurden. Das Häcksel-Impfmaterial wurde
gleichmäßig in die Oberschicht jedes Topfes bis zu einer Tiefe von e twa 3 cm in einer Menge von 2 g/Topf eingearbeitet.
Die Töpfe wurden 24 Stunden bei 280C in einer Impfkammer gehalten und dann in ein Gewächshaus überführt.
Das Präparat wurde wie bei Versuch 1 angewendet, d.he es
wurde in einer Menge von 30 ml/6 Töpfe/Gruppe auf die Bodenoberflache gesprüht.
Gesunde Gurkensamen (Sorte Suyo) wurden unmittelbar nach
der Behandlung in einer Menge von 10 Samen/Topf in die
Töpfe eingesetzt. Die Töpfe wurden dann in einem Gewächshaus bei 32 bis 280C gehalten. 14 Tage nach dem Säen
wurden die Ergebnisse als Läsionskoeffizienten ermittelt»
Ferner wurde der Grad der Schädigung berechnet.
0 : gesund
0,5 : nur die Wurzelhaare sind leicht angegriffen
1 : Luftteile in der Nähe der Bodenoberfläche und Wurzeln sind angegriffen.
2 : Anfangsphase des Abfaulens
3 ϊ Bei der Keimung angegriffen; Wachstum gehemmt.
Grad der Schädigung (96). = x 100
Hierin ist η die Zahl der Proben, die jedem Läsionskoeffizienten entspricht. Die Ergebnisse sind in Tabelle 12
genannt.
009822/1896
Tabelle 12
Wirkung von T-7545-A "bei der Bekämpfung der Wurzelfäule
Präparat
Dosis
Grad der Schädigung,
Schädigung der Pflanze
Unbehandelte
Vergleichsproben
Vergleichsproben
Pe nt achlornitrο-benzol
xtOOO
100
10
§0?6iges Netzpulver (Vergleichsprobe) χ 500
Ϊ-7545-Α
7 1 0,5 0
5 ppm 10 ppm
20 ppm 40 ppm
Bei einer Konzentration von 10 ppm oder mehr war T-7545-A
äußerst wirksam gegen die durch Rhizoctonia solani verursachte
Wurzelfäule und hatte keinen schädigenden Einfluß auf die Keimung des Samens und das Wachstum der
Sämlinge.
Tersuch 6
Bekämpfung der Wurzelfäule der Gurke durch Umhüllen des
Samens ; ; ; '
Impfmethode: wie bei Versuch 5
Anwendung des Präparats: Die Samen wurden mit Wasser benetzt
ttnd dann mit pulverförmigem T-7545-A leicht umhüllt.
Mittlere Auftragmenge: 80 mg/10 Samen. Versuchspflanze: wie bei Versuch 5.
Bewertungsmethode: wie bei Versuch 5.
09822/18^6
Tabelle 13 ■
Wirkung von T-7545-A "bei der Bekämpfung der Wurzelfäule
durch Umhüllen des Samens
Wirkstoffgehalt, i>
T-7545-A-Pulver,
Pentachlornitrobenzol-
Grad der Schädigung pulver Schädi- der Grad der Schädigung
gung,?b Pflanze Schädigung, der __^ Pflanze
O, Vergleichsprobe (4) 100 -
0,04 30 - 100 -
0,08 16 - 100
0,16 6 - 100 -
0,32 3 - 95
0,64 1 - 58 -
1,28 0,3 - 45 -
2,56 0 - 24 +
5,12 0 - 12 +
(4)
mit dem Hilfsstoff (Talkum) umhüllt.
T-7545-A ist gegen die Wurzelfäule auch wirksam, wenn
es als Staub auf die Samen aufgebracht wird. Bei diesem Verfahren wurde keine Schädigung der Pflanzen festgestellt«
Versuch 7
Bekämpfung von Corticium rolfsii bei der Gurke
Impfmethode: wie bei Versuch 5, d.h. pathogene Pilze Corticium rolfsii wurden 10 Tage kultiviert. Die erhaltene
Kultur wurde in einer Menge von 5 g/Topf in den Boden gegeben. Die Töpfe wurden in der oben beschriebenen Weise
behandelt.
Das Präparat wurde wie bei Versuch 5 in einer Menge von 30 ml/6 Töpfe/Gruppe aufgebracht. Die gleichen Versuchspflanzen wie bei Versuch 5 wurden verwendet. Ebenso war
die iewertungsmethode die gleiche wie bei Versuch 5.
Π09822/ 1 898
- 45 -
Wirkung von T-7545-A bei der Bekämpfung von Oorticium
rolfsii ; .
Präparat Dosierung Grad der Schädigung Schädigung,$ der Pflanze
Unbehandelte
Vergle ixhsproben | — | 87 |
Pentachlornitro- | xiooo | 38 |
benzol (5O$iges Netzpulver) |
X2OOO | 17 |
x1000 | 2 | |
T-7545-A | 5 ppm | 21 |
10 ppm | 13 | |
20 ppm | 6 |
40 ppm 0
Bei einer Konzentration von 10 ppm oder mehr war T-7545-A
äußerst wirksam gegen Oorticium rolfsii und schädigte die Pflanzen nicht«
Versuch 8
Bekämpfung von Gurkenmehltau
Versuchspflanze: gesunde Gurken (Sorte Suyo), die in a/5000-Wagnertöpfe gepflanzt wurdene Gruppen von je
3 Topfen mit Sämlingen 60 !Gage nach dem Einpflanzen wurden verwendet. Diese Töpfe und weitere Töpfe mit Gurkenpflanzen,
die bereits mit Shaerotheca fuliginea infiziert waren, wurden hintereinander aufgestellt, so daß eine
natürliche Infizierung stattfand.
Anwendung des Präparats: Eine wie bei Versuch 2 hergestellte Lösung des Präparats wird in einer Menge von
100 ml/3 Töpfe aufgebracht.
Bewertung: Probeblätter, die vor dem Auftrag des Präparats gesund waren, aber dann krank wurden, wurden für diese
Bewertung verwendet. Die Fläche der Läsion von 4 Blättern/Topf wurde gemessen. Die Ergebnisse sind in
0Q9822/18Ö6
— 4ο -
Tabelle 15 angegeben.
Wirkung von T-7545-A ,"bei der Bekämpfung von Gurkenmehltau
(mittlere spezifische Fläche der lasionen/Blatt ($))
Präparat Dosierung 12 Tage nach Schädigung
der Behänd- der Pflanze ' . lung
Unbehandelte Probe - 89,3 Karathane-Netzpulver
■ (5) ■ X2000 4,3 +
■ (5) ■ X2000 4,3 +
T-7545-A 12,5 ppm 6,5
25 ppm 3,8 50 ppm 1,9 -
(5) Enthält 19,5# 2-(1-Methylheptyl)-4,6-dinitrophenylcrotonat.
T-7545-A war wirksam bei der Bekämpfung von Mehltau und
hatte keine schädigende Wirkung auf Gurken«,
Versuch 9
Bekämpfung der Braunfäule der Tomate
Versuchspflanzen: Tomatenpflanzen (Sorte Ponterosa) werden in Töpfe von 12 cm Durchmesser gepflanzt (1 Pflanze/Topf).
Die Sämlinge werden 50 Tage nach dem Pflanzen verwendet· Je 6 Töpfe bilden eine Gruppe»
Das Präparat wurde wie bei Versuch 2 in einer Menge von 100 ml/6 Töpfe/Gruppe aufgebracht.
Impfmethode: Pathogene Pilze (Phytophthora infestans)
wurden auf einer Kartoffelinfusions-Agarplatte 10 Tage
bei 2O0C kultiviert. Die erhaltene Kultur wurde zur Herstellung
einer Suspension von Zoosporen in Wasser (etwa 10^ Zoosporen/ml) verwendet. 1 Tag nach der Anwendung des
Präparats wurden die Pflanzen durch Besprühen mit 20 ml der Suspension pro Topf infiziert. Die Töpfe wurden
822/1896
24 Stunden bei 2O0G in einer Impfkammer gehalten und dann
in ein Gewächshaus tiberführt.
Bewertung^ 7 Tage nach der Infizierung wurde die 3?läohe
jeder Läsion gemessen. Die Ergebnisse sind in !Tabelle 16 angegeben.
Wirkung von T-7545-A bei der Bekämpfung der Braunfäule
der Tomate. . i . -
Präparat Dosis Verhältnis der Schädi-
PPm durchschnittlichen gung der
Fläche der lasionen Pflanze
pro Blatt zu derjenigen der Ver-
gleichsprobent# ·
(76) 100 21,7
Unbehandelte Ver | 250 |
gleichsproben | 500 |
Daconyl-Netzpulver (6) |
12,5 |
I-7545-A | 25 |
50 | |
10,3
25,6
.25 18,2 -
11,4
(6) Enthält 75# Tetrachlorisophthalnitril (allgemein
verwendeter Wirkstoff für Vergleichspräparate).
T-7545-A war wirksam gegen die Braunfäule der Tomate und
hatte keine schädigende Wirkung auf die Pflanzen.
Versuch 10
Bekämpfung der Stengelfäule der Ilierenhohne
Versuchsaethode: Je eine Merenbohnenpflanze (Sorte
Taisho Kintoki) wurde in'Töpfe von 12 cm Durchmesser gepflanzt.
Die vollständig entfalteten obersten Blätter, die 40 Tage nach dem Einpflanzen abgeschnitten wurden,
wurden verwendet» Je 6 Blätter bildeten eine Gruppe.
00 9 822/1896 SAD
Anwendung des Präparats: Jeder Lösung des Präparats
wurde das Verlaufmittel "Dyne" "bis zu einer Endkonzentration
von 0,05$ zugesetzt. Die oben genannten Blätter wurden eingetaucht und unmittelbar an der Luft trocknen gelassen.
Versuchsgefäß: Je 10 ml Wasser wurde in Petrischalen von 9 cm Durchmesser gegeben. In jedes dieser feuchten Gefäße
wurde ein Ring aus Polyvinylchlorid gelegt. Die behandelten Blätter v/urden auf die Ringe gelegt, und zwar ,
10. jeweils 1 Blatt pro Ring.
Impfmethode: Pathogene Pilze SULerotinaa sclerotiorum
wurden auf einer Kartoffelinfusions-Agarplatte 5 Tage bei
200C kultiviert. Nach dieser Zeit wurden einige Agarscheiben
von 10 mm Durchmesser von einer Randkolonie aus-15, geschnitten. Je eine Scheibe wurde auf die Mitte jedes
Blatts gelegt, worauf das Blatt in einem Gefäß bei 200C
gehalten wurde.
Bewertung: 6 Tage nach der Infizieiung wurde die Fläche
der Läsion in jedem Blatt gemessen. Die Ergebnisse sind in Tabelle 17 genannt.
Tabelle 17
Wirkung von T-7545-A auf die Stengelfäule der Nierenbohne Präparat Konzen- Anteil der durchschnitt- Schädi-
tration liehen Fläche der Läsionen gung
pro Blatt, # der
Pflanze
Unbehandelte Vergleichspro- ben |
25 ppm | 100 |
T-7545 | 100 ppm | 18 |
X1000 | H | |
Earthcide- Netzpulver (7) |
13 |
(7) Enthält 5096 2,6-Dichlor-4-nitroanilin (allgemein
verwendetes Vergleiohspräparat).
009822/1806
T-7545-A war wirksam gegen die Stengelfäule der Nierenbohne und hatte keine schädigende Wirkung auf die Pflanze,
Versuch 11
Versuchsmethode:
Blattscheidenbrand: wie bei Versuch 1 wurden Stäubemittel, die die Verbindung enthielten, mit einem Feinzerstäuber
3 Tage nach der Infizierung in einer Menge von 300 mg/ 6 Töpfe aufgebracht.
Bakterielle Welkekrankheit (Bacterial leaf blight):
wie oben, wobei jedoch die Sämlinge 25 Tage nach dem" Ein·*
topfen behandelt wurden,
Pathogene Bakterien Xanthomonas oryzae wurde auf einem
Saccharose-Bouillon-Medium 1 Tag bei 280G kultiviert0
Das oberste Blatt jedes Sämlings wurde mit einer Nadel angestochen, an der sich eine Suspension (10 ml) der
Bakterienzellen befände Die Töpfe wurden 24 Stunden in
einer Impfkammer bei 24 0 gehalten und dann in ein Gewächshaus überführt«, 2 Tage nach der Infiaierung wurden
die Töpfe in der oben beschriebenen Weise bestäubte 10 Tage nach der Infizierung wurde die Länge jeder Läsion
gemessene
Brusone-Krankheit: wie bei der bakteriellen Welkekrankheit.
Pathogene Pilze Piricularia oryzae wurden auf einem Reisstrohinfusions-Agarmedium
10 Tage bei 280O kultiviert.
Die Töpfe wurden durch Besprühen mit einer Suspension der
/6 / geimpftο
Konidien (10 /ml) in einer Menge von 2 ml/Topf ap*
Die Töpfe wurden 24 Stunden in einer Impfkammer bei 280C
gehalten, aus der Kammer genommen, in der oben beschriebenen Weise bestäubt und dann in ein Gewächshaus
. überführt, 7 Tage naoh der Infizierung wurde das spezifi-
009822/18d6- '
sehe Verhältnis der durchschnittlichen Fläche der Läsionen
nach der Okamoto-Methode gemessene
Reisstengerbohrer (Rice stem "borer) t Reispflanzen in
Wagnertöpfen von 1/500Oa wurden 60 Tage nach dem Eintopfen und am vierten Tag nach dem Eindringen der Larven
von Chilo suppressalis mit 5 g/5 Töpfe bestäubt. Am 8oTag nach dem Eindringen wurden die Stengel aufgeschnitten,
worauf der Prozentsatz der überlebenden Larven berechnet wurdee
Grrüne Reisblatt-Kleinzikaden (Green rice leafhopper):
Unmittelbar nach dem Bestäuben auf die vorstehend für den Reisstengelbohrer beschriebene Weise wurden die Reispflanzen
mit Netzen bedeckt. In den Netzen wurden ausgewachsene Kleinzikaden (Naphotettix Oindceps) ausgesetzt.
Nach 1 Tag wurde das Ergebnis festgestellt und der Prozentsatz der überlebenden Tiere ermittelt.
Alle Präparate zeigten hohe Wirkung gegen Blattscheidenbrand und alle Testschädlinge. Kein Präparat hatte eine
schädigende Wirkung auf die Reispflanzen. Die Ergebnisse und die Vergleichsergebnisse mit verschiedenen Vergleichspräparaten
sind nachstehend in Tabelle 18 genannt.
009822/ 1896
T-7545-.Ä Zugemisclie Wirk-Konz.
stoffe
0,296
Konz. Pellicularia Xanthomosasakii,
nas oryzae Läaionsver- Länge der größerung,^ Läsion,
(8) J0 (8)
12
Μ· | 2-Amino-1,3,4- thiadiazoi-5- thiol |
5* | 12 |
0,296 | 2-Amino-1,3,4- thiadiazol-5- thiol |
9 | |
0,3* | - | — | ■ ^ |
- | 2-Formamido- 1,3,4-thiazol |
496 | 8 |
0,39* | 2-Formamido- 1,3,4-thiazol |
4* | _ |
- | 2-Amino-1,3,4- thiadiazol |
396 | 3 |
0,2* | 2-Amino-1,3,4- thiadiazol |
3* | |
3rBenzyliden- amino-4-phenyl- thiazolin-2-thion |
596 | 2 | |
0,3* | 3-Benzyliden- amino-4-phenyl- thiazolin-2-thion |
5* | 15 |
0,1* | - | - | 28 |
— | Als Polyoxin B 1000 PS-Einhei- ten/g |
4 | |
0,1* | Als Polyoxin B 1000 P8 |
||
1 0 0 0
8 8
(8) In Prozent, "bezogen auf die linbehandelten Vergleichsproben
= 100 .
009822/1896
T-7545
Konz.
Konz.
0,3$
0,35*
Zugemischter Bestandteil
Konz. Pellicularia Piricularia
Ο,3?6
Blasticidin-S-Benzylaminobenzolsulfonat
0,2
Blasticidin-S-Benzylaminobenzolsulfonat
0,2
Kasugamycin 0,2 Kasugamycin 0,2
0,O-Diisopropyl-S-benzylthiophosphat
1,5
0,0-Diisopropyl-S-benzylthiophosphat
1,5
O-Ä-thyl-S,S-diphenyldithiophosphat
O-Äthyl-S,S-diphenyldithiophosphat
t sasakii,
Läsionsirer
größerung,
(8)
10
10
8
8
oryzae, spez»Fläche der Läsion
(8)
0,3
0,3 0,4 0,3
2,7 2,5 Q,3 0,2
bezogen auf die unbehandelten Vergleichsproben 00.
009822/1Ö98
T-7445t Zugemischter Be- Konz« Pellicularia überlebens-KonZo
standteil sasakii, rate von
Läsionsver- Chilo · größerung,?6 suppressa-{§}
lia (8)
0,2$ - - 12
- · 1,3-Bis(carba-
moylthio)-2-
'10 (NjN-diinethyl-
amino)-propanhydroChlorid 2$ - 1
0,2^6 dto. 296 8 0
Dirne thyl(3-niei;hyl-4-nitro-
phenyl)thio—
phosphat 296 " — 3
phosphat 296 " — 3
0,29ε dto. Z$>
9 3
(8) $>, bezogen auf unbehandelte Vergleichsproben = 100„
!Tabelle 21
T-7545, Zugemischter Be- Konz« Pellicularia überlebens-Konz.
standteil sasakii, rate von
Läsionsver- Uaphotettix größerung,>
cinoliceps, (8) % tsr
1-Naphthyl-F-
methylcarbamat 1,5$ - 4
0, % dto. 1, 5$ 7 · 2
(8) fi, bezogen auf unbehandelte Vergleichsproben = 100·
009822/1898
Versuch 12
Bekämpfung der Braunfleckigkeit der Tomate
Testpflanzen: wie bei Versuch 9
Anwendung des Präparats: wie oben
Anwendung des Präparats: wie oben
Impfmethode: Pathogene Pilze Cladosporium fulvum wurden
auf einer Kartoffelinfusions-Saccharoseplatte 14 Tage
bei 200C kultiviert. Eine Suspension der Konidien (10V
ml) wurde aus der Kultur hergestellt. Die Pflanzen wurden mit der Suspension 3 Tage vor der Anwendung des Präparats
in einer Menge von 5 ml/Topf besprüht. Die Töpfe wurden 24 Stunden in einer Impfkammer bei 250O gehalten und
dann in ein Gewächshaus überführt.
Bewertung: 14 Tage nach der Infizierung wurde das spezifische Verhältnis der durchschnittlichen Läsionsfläche ■
in den Blättern gemessen. Die Ergebnisse sind in Tabelle 22 genannt.
Wirkung von T-7545-A bei der Bekämpfung der Braunfleckigkeit
der Tomate
20 Präparat 25
Dosis Spezifische ppm Fläche der Iäsion,?£
Schädigung der Pflanze
Unbehandelte Vergleichs pflanzen |
12,5 | 98,9 |
T-7545-A | 25,0 | 6,1 |
50,0 | 3,4 | |
1,7 | ||
T-7545-A war wirksam gegen die Braunfleckigkeit der
Tomate und hatte keine schädliche Wirkung auf die Pflanzen.
009822/1896
Versuch 13
Bekämpfung des Blattscheidenbrandes des Reises
Testpflanzen: wie "bei Versuch 3
Anwendung des Präparats: wie bei ^ersuch 3» jedoch unter
Verwendung von T-7545-B an Stelle von T-7545-A.
Bewertung:
14 Tage nach der Behandlung wie bei Versuch 1.
Die Ergebnisse sind in Tabelle 23 genannt.
Wirkung von T-7545-B bei | Länge | der Bekämpfung des | Schädigung der Pflanze |
brandes | Dosis ppm |
||
(durchschnittliche | 3 Blattscheiden | - | |
Präparat | 10 | - | |
Unbehandelte Ver gleichspflanzen |
20 | 'der Läsionen/Stengel in cm) | - |
T-7545-B | 40 | Heilwirkung nach 21 Tagen |
_ |
80 | 32,5 | ||
' 14,5 | |||
12,6 | |||
12,6 | |||
12,6 |
Bei einer Konzentration von 20 ppm oder mehr war T-7545-B äußerst wirksam bei der Behandlung nach dem Auftreten der
Krankheit. Es unterdrückte die Bildung neuer Läsionen mehr als 2 Wochen nach der Einwirkung. Keinerlei Schädigung
der Pflanzen wurde selbst bei einer Konzentration von 80 ppm festgestellt.
Versuch 14
Bekämpfung des Blattscheidenbrandes des Reises mit dem
Gemisch der Antibiotika T-7545-A und T-7545-B
Versuchsmethode:
Testpflanzen: wie bei Versuch 1
Impfemthode: wie bei Versuch 1
Anwendung des Präparats: wie bei Versuch 3 mit dem ünter-
Impfemthode: wie bei Versuch 1
Anwendung des Präparats: wie bei Versuch 3 mit dem ünter-
009822/1896
schied, daß T-7545-A und T-7545-B oder deren Gemische an Stelle von T-7545-A verwendet werden.
Bewertung: wie "bei Versuch
Die Ergebnisse sind nachstehend in Tabelle 24 genannt»
Wirkung eines Gemisches von T-7545-A und T-7545-B bei
der Bekämpfung des Blattscheidenbrandea
Dosierung des Präparats (ppm) Durchschnittliche Länge des befallenen Bereichs.
* L
Unbehandelte Vergleichspflanzen
T-7545-A (2,5 ppm)
T-7545-A (5 ppm>
T-7545-E (6,25 ppm)
T-7545-B (12,5 ppm)
T-7545-A (2,5 ρρπΟ+ϊ-7545-Β
(6,25 ppm)
T-7545-A (5 ppm) + T-7545-B (12,5 ppm) 1
Wirkung eines Gemisches von T-7545-A und T-7545-B bei der,
Bekämpfung des Blattscheidenbrandes
(27,8 cm) 23 11 65 47
- 1
Dosierung des Präparats,(ppm) Durchschnittliche Länge des befellenen
Bereichs,$
Unbehandelte Vergleichspflanzen T-7545-A (5) T-7545-A (10)
T-7545-A (20) Ϊ-7545-Β (10)
T-7545-B (20) T-7545-B (40) ϊ-7545-Α(8)+2-7545-B{2)
2-7545-A(5)+2?-7545-B(5) Τ~7545-Α(2)+!Ε-7545-Β(θ)
(30,1 cm)
25 21
2 76
5 42
009822/1898
I-7545-B "bekämpfte äußerst wirksam den Blattacheidenbrand.
Insbesondere war bei Gemischen von T-7545-B und Ϊ-7545-Α
die Wirkung um ein Vielfaches verstärkt.
Versuch 15
Bekämpfung der Wurzelfäule (Damping-off) bei der Gurke
Versuchsmethode: wie bei Versuch 5
Wirkung von T-7545-B bei der Bekämpfung der Wurzelfäule
der Gurke .
Präparat Dosis Grad der Schädigung, Schädi-
i> gang der
- ■ . -- - Pflanze
Unbehandelte Ver-15
gleiohspflanzen | x 1000 | too |
Pentaehlornitro- benzol |
x 500 | 1Q |
5Obiges Mtetzpulver Ve rglei cha präparat |
5 ppm | 0 |
T-7545-B | 10 ppm | 25 |
20 ppm | 9 | |
40 ppm | 3 | |
1 | ||
Bei einer Konzentration von 20 ppm oder mehr war T-7545-B
äußerst wirksam gegen die durch Rhizoctonia verursachte Wurzelfäule und hatte keine schädigende Wirkung auf die
Keimung des Samens und das Wachstum der Sämlinge.
Versuch 16
Bekämpfung von Rhizoctonia der Gurke durch Umhüllung des
Samens .
Impfmethode: wie bei Versuch 15
Anwendung des Präparats: wie oben beschrieben Versuchspflanze: wie bei Versuch 15
Bewertung: wie oben beschrieben
009822/1806
Wirkung von T-7545-B bei | der Bekämpfung von Rhizoctonia | 3 | Schädigung der Pflanze |
Pentachlornitro- benzol-Stäubemittel |
durch Umhüllen des Samens | T-7545-B-Stäubemittel | _ | Grad der Schädigung Schädi- der Pflanze gung,# |
|
Gehalt an Wirkstoff |
Grad der Schädi gung,^ |
- | ||
* | 100 | - | 100 | |
O(Vergleichs- pflanzen)(4) |
22 | mm | 88 | |
0,625 | 8 | 25 | ||
1,25 | 2 | 18 + : | ||
2,5 | O | 10 + | ||
5 | O | |||
10 |
(4) Nur mit dem Hilfsstoff (Talkum) umhüllt.
T-7545-B ist auch gegen Rhizoctonia wirksam, wenn ee als
Stäubemittel zum Umhüllen des Samens verwendet wird. Bei diesem Verfahren wurde ebenfalls keine schädigende Wirkung
auf die Pflanzen festgestellt.
Versuch 17
Bekämpfung von Rhizoctonia bei der Gurke mit einem Ge-
Bekämpfung von Rhizoctonia bei der Gurke mit einem Ge-
misch von T-7545-A und T-7545-B
Rhizoctonia solani wurde 5 Tage bei 280C auf Gerstenmedium
kultiviert. 10 kg der Bodenprobe des Feldes wurden mit Wasserdampf sterilisiert und mit 1,2 kg des kultivierten
Häcksels gemischt, der in die obere Schicht bis zu einer Tiefe von etwa 5 cm eingearbeitet wurde. Das
Gemisch wurde 24 Stunden bei 280C und 100$ relativer
Feuchtigkeit stehen gelassen. Es wurde dann bei Raumtemperatur
2 Tage getrocknet, worauf das kultivierte Häcksel abgeliebt, wurde. Der mit Rhizoctonia solani geimpfte
Boden wurde in Töpfe von 12 cm Durchmesser in einer Menge
009 822/1896
von 450 g/Topf gefüllt.
Anwendung des Präparats: wie "bei Versach 3 wurde das
Präparat in einer Menge von 40 ml/2 Töpfe/Gruppe auf den
Boden gesprüht. Bewertung: wie bei Versuch
Bekämpfung von Rhizoctonia solani bei | der Gurke mit einem |
Gemisch von T-7545-A und T-7545-B | |
Wirkstoffgehalt^ppm | Schädiflung, # |
Unbehandelte Vergleichspflanzen | 100 |
T-7545-A (10) | 69 |
T-7545-A (20) | 24 |
T-7545-A (40) | 11 ■ |
T-7545-B (10) | 88 |
T-7545-B (20) | 32 |
T-7545-B (»0). | 16 |
I-7545-A(5)+ T-7545-B (5) | 56 |
T-7545-A(1O)+T-7545-B(1O) | 16 |
T-7545-A(2O)+T-7545-B(2O) | 3 |
Pentachlornitrobenzol (500) | 16 |
Pentachlornitrobenzol (1000) | 3 |
009 8 22/1896
Tabelle 29
Bekämpfung von Rhizootonia solani "bei der Gurke
Wirkstoff und
Konzentration
Konzentration
Anwendungsmethode
Durchschnitt der Sämlinge
Unbehandelte
Vergleichspflanzen
Vergleichspflanzen
Ungeimpft
T-7545-A
5 ppm
13 ppm
26 ppm
0,62596..
0,62596..
■ 1,2596
2,55έ
.' 5,O?6 ■
.' 5,O?6 ■
Verwendung im Boden dto.
Umhüllung des Samens mit Pulver
dto β dto. dto. dto.
0 90
20 63 88
63 75 97 95 92
Nach 14 Tagen von Rhizoctonia
solani nicht befallen
Ο96 90
16 53 82
12
37
83 95 92
T-754-5-B war äußerst wirksam bei der Bekämpfung von
Rhizoctonia solani der Gurke. Insbesondere zeigte ein Gemisch von T-7545-B und T-7545-A eine hohe Wirksamkeit
25 bei Umhüllung des Samens.
Versuch
Bekämpfung des Blattscheidenbrandes des Reises (Pellicularia sasakii)
;
Versuchspflanzen: Reis wie bei Versuch 3 30 Impfmethoäe: wie bei Versuch 3
Anwendung des Präparats: wie bei Versuch 3
Bewertung: wie bei Versuch 3, außer daß 1 Stunde nach der
Anwendung des Präparats mit 22 mm/30 Minuten künstlich beregnet wurde. . '
009822/1896
Bekämpfung von Pellicularia sasakii des Reises mit T-7545-A
Wirkstoff Konzentration Mittlere Länge' des
erkrankten Bereichs, cm
Unbehandelte Ver gleichspflanzen |
— | 46,2 |
Polyoxin PS emulgierbares Konzentrat (3$)*. |
x3OO | 45,8 |
Monzet-Eetzpulver | x2000 | 11,4 |
T-7545-A | 12,5 ppm | 18,1 |
25 ppm | 11,4 | |
50 ppm | 12,3 | |
100 ppm | 10,2 |
^-Einheiten der wirksamen Fraktion von Polyoxin B/g gegen
Pellicularia sasakiio
Versuch 19
Bekämpfung des Blattscheidenbrandes des Reises (Pelli-
cularia sasakii) im Freilandversuch
Versuchsort: Fukuchiyama, Japan
Versuchspflanzen: Reispflanzen (Sorte Gohyakumankoku),
die auf dem Reisfeld am 1„Mai gepflanzt worden warene
Sämlinge vom 18»Juli wurden für diesen Versuch verwendet«
Impfmethodet Pathogene Pilze Pellicularia sasakii wurden
auf Reisstroh einer mittleren Länge von 2 om 5 üage bei
28°0 kultivierte Das Häcksel wurde dann in den Innenraum der Blattscheide in der Nähe der Wasseroberfläche des
Reisfeldes am 4«Juli eingesetzte
Anwendung des Präparats: Jedes Präparat wurde gleichmäßig mit der Spritzpistole in einer Menge von 200 1/10 a (wässrige
Lösung) gleichmäßig am 11„Juli über das Reisfeld
gesprüht. Am 17.Juli wurden 3 kg/10 a als Stäubemittel
angewendet.
009022/1898
Bewertung: Die Ergebnisse wurden nach den folgenden
Bewertunesziffern der Läsion jedes Stengels "bewertet.
Der Grad der Schädigung wurde berechnet. Bewertungsziffern:
3s Ausbildung der Krankheit an der unteren Blattscheide
(flag leaf sheath) 2: Ausbreitung der Krankheit auf die zweite Biatt-
scheide
1: Ausbreitung der Krankheit auf dritte bis vierte
■jO Blattscheide,
Grad der Schädigung =
3 x(Zahl der Pflanzen mit Ziffer 3) + 2 χ (Zahl der
Pflanzen mit Ziffer 2) + 1 χ (Zahl der Pflanzen mit Ziffer 1)
3 x Gesamtzahl der Pflanzen
Wirkstoff Konzentra- Mittlere Länge Schädigung der tion des erkrankten Pflanzen in i<>
Bereichs, cm
Unbehandelte
Vergleichspflanzen - 88,2 100,0
Vergleichspflanzen - 88,2 100,0
Emulgierbares
Konzentrat von
Polyoxin (3$)PS χ 600 48,0 84,4
Konzentrat von
Polyoxin (3$)PS χ 600 48,0 84,4
Monkit-Lösung(9) x 2000 19,8 41,1
T-7545-A-Lösung 28 ppm 19,2 45,2
T~7545-A-Stäu-
bemittel Ο9285& 16,8 40,3
(9) Enthält 6,5$ Eisenammonium-Methanarsensäure.
009822/1 386
T-7545-A 1,0$
Natriumligninsulfonat 0,1$
Polyoxyäthylenalkylaryläther 0,1?έ
Weißkohle 0,1$
Ton 98, 7$
Je nach Anwendungazweck und -methode wird das vorstehende
Präparat auf 1 bis 200 ppm Antibiotikum verdünnt*· Das verdünnte Präparat wird mit Sprühvorrichtungen auf den
Boden aufgebracht, oder das oben beschriebene Pulver wird unverdünnt zum Umhüllen des Samens verwendet.
T-7545-A-hydrochlorid 15,0$
Polyoxyäthylenalkylaryläther 2,0$
Lactose 83,0$
Vor der Anwendung wird dieses Präparat auf die in Beispiel
11 genannte Konzentration verdünnt. -
T-7545-A 40,0$
Methanol 5f0$
Aminstearat . 5,0$
Wasser 50,0$
Dieses Präparat wird auf 500 bis 100000 ppm verdünnt. Das verdünnte Präparat wird beispielsweise vom Flugzeug
aus versprüht.
T-7545-A 10,0$
Polyoxyäthylenalkylaryläther 5,0$
Methanol 20,0$
Methylnaphthalin 40,0$
Dimethylformamid 25,0$
009822/1896
Vor der Anwendung wird dieses Gemisch auf die in Beispiel 1 genannte Konzentration verdünnte
T-7545-A 0,1$
Aluminiumstearat , 0,02$
Talkum 99,88$
Je nach Anwendungszweck und -methode wird dieses Gemisch als solches in einer Menge von 1 Ms 8 kg/10 a auf den
Boden gestäubt oder zur Umhüllung des Samens verwendet«
Beispiel 16 - Gemischtes Stäubemittel A
T-7545-A 0,2$
2-Amirio-1,3,4-thiadiazol-5-thiol 5,0$
Aluminiumstearat 0,02$
Talkum 94,78$
Das vorstehende Präparat wird angewendet, wie in Beispiel
15 "beschrieben.
Beispiel 17 - Gemischtes Stäubemittel B T-7545-A 0,3.;
2-Pormamid-1,3,4-thiadiazol 4,0$
Talkum 95,
Dieses Präparat wird angewendet, wie in Beispiel 15 beschrieben.
T-7545-A 0,2$
2-Amino-1,3,4-thiadiazol 3,0$
Talkum 96,8$
Dieses Präparat wird angewendet, wie in Beispiel 15 beschrieben.
009822/Ί 89 6
T-7545-A 0,3$
3-Benzylidenamino-4-phenylthiazolin-
2-thion 5,0$
' Talkum 94,7$
Dieses Präparat wird angewendet, die in Beispiel 15 beschriebene
T-7545-A . 0,3$
Blasticidin-S-benzylaminobenzolsulfonat 0,2$
Talkum 99,5$
Dieses Präparat wird angewendet, wie in Beispiel 15 beschriebene
T-7545-A 0,3$
Kasugamycin 0,2$
Talkum 99,5$
Dieses Präparat wird angewendet, wie in Beispiel 15 beschrieben.
Beispiel 22 - Gemischtes Stäubemittel G
T-7545-A 0,3$
0,0-Diisopropyl-S-benzylthiophosphat 1,5$
Talkum > 98,2$
Dieses Präparat wird angewendet, wie in Beispiel 15 beschrieben.
Beispiel 23 - Gemischtes Stäubemittel H
T-7545-A -0,3$
T-7545-A -0,3$
0-Äthyl-S,S-diphenyldithiophosphat 2,0$
Talkum 97,7$
Dieses Präparat wird angewendet, die in Beispiel 15 be-
009822/1898
-■66 -
Beispiel 24
-
GPniisch,te3 Stäabemittel I
T-7545-A 0,196
Polyoxin (B 1000 PS-Einheiten/g) 0,1$
Ealkum ' 99
Dieses Präparat wird angewendet, wie in Beispiel 15 beschrieben.
Beispiel 25 - gemischtes Stäubemittel· J
T-7545-A 0,2$
T-7545-A 0,2$
1,3-Bis(carbamoylthio)-2(N,N-•jQ
dimethylamine)propanhydroChlorid 2,0%
Talkum 97,8%
Dieses Präparat wird angewendet, wie in Beispiel 15 beschriebene
Beispiel 26 - gemischtes Stäubemittel K
-15 T-7545-A 0,2%
-15 T-7545-A 0,2%
Dirnethyl(3-methyl-4-nitrophenyl)-
thiophosphat · 2,0%
Talkum 97t8%
Dieses Präparat wird angewendet, wie in Beispiel 15 beschrieben.»
Beispiel 27 - gemischtes Stäubemittel L
T-7545-A 0,3%
T-7545-A 0,3%
i-Naphthyl-lT-methylcarbamat 1,5%
Talkum 98,2%
Dieses Präparat wird angewendet, wie in Beispiel 15 beschrieben»
T-7545-B 1,0%
Natriumligninsulfonat 0,1%
Polyoxyäthylenalkylaryläther 0,1%
Weißkohle 0,1%
Ton 98,7%
^- 1fu9 8 2 2/1896
Je nach '"'nwendungszweok und -methode wird dieses Gemisch
auf 2 bis 400 ppm Antibiotikum verdünnt. Das verdünnte Präparat wird auf den Boden gestäubt oder das Pulver unverdünnt
zur Umhüllung des Samens verwendet«
I-7545-B-hydroChlorid 15,0$
Polyoxyäthylenalkylaryläther 2,00
lactose 83,
Vor der Anwendung wird das Gemisch auf die in Beispiel 1
genannte Konzentration verdünnt.
T-7545-B -40,00
Methanol 5,00
Aminstearat 5,00
Wasser 50,00
Das Gemisch wird auf 1000 bis 200000 ppm verdünnt. Das
verdünnte Präparat wird beispielsweise vom Plugzeug aus
versprüht« .
T-7545-B 10,00
Polyoxyäthylenalkylaryläther 5,00
Methanol '- 20,00
Methylnaphthalin 40,00
Dimethylformamid 25,00
Vor der Anwendung wird dieses Gemisch auf die in Beispiel 10 genannte Konzentration verdünnt.
T-7545-B · 0,20
Aluminiumstearat O,C20
Talkum 99,780
009822/ 189 S SAD
Sie nach Anwendungazweck und -methode wird dieses Gemisoh
als solches in einer Menge von 1 bis 8 kg/10 a verstäubt oder zum Umhüllen des Samens verwendet.
T-7545-B 0,2$
2-Amino-1,3,4-thiadiazol 3,
Talkum 96,
Dieses Präparat wird angewendet, wie in Beispiel 15 beschrieben©
Beispiel 34 - Gemischtes Stäubemittel N
T-7545-B 0,4$
Blasticidin-S-benzylaminobenzolsulfonat 0,2$
Talkum 99,4$
Dieses Präparat wird angewendet, wie in Beispiel 15 be-
schrieben.
Beispiel 35 - Gemischtes Stäubemittel 0
T-7545-B 0,4$
T-7545-B 0,4$
Kasugamicin 0,2$
Talkum 99,4$
Dieses Präparat wird angewendet, wie in Beispiel 15 beschriebene
T-7545-B 0,4$
0,0-Diisopropyl-S-benzylthiophosphat 1,5$
Talkum 98,1$
Dieses Präparat wird angewendet, wie in Beispiel 15 beschrieben.
00 9822/1896
T-7545-B 0,4*
0-Ithyl-S,S-diphenyldithiophosphat 2,0*
Talkum 97,6$
Dieses Präparat wird angewendet, wie in Beispiel 15 beschrieben·
Beispiel 38 - Gemischtes Stäubemittel R
T-7545-B 0,2*
T-7545-B 0,2*
Talkum 99,7*
Dieses Präparat wird angewendet, wie in Beispiel 15 beschrieben.
Beispiel 59 - gemischtes Stäabemittel S
T-7545-B 0,4*
T-7545-B 0,4*
1t3-Bis(oarbamoylthio)-2(N,N-dimethyl-
amino)propanhydrochlorid 2,0*
Talkum 97,6*
Dieses Präparat wird angewendet, wie in Beispiel 15 beschrieben.
Beispiel 40 - Gemischtes Stäubemittel· T
T-7545-B 0,3*
Dimethyl(3-methyl~4-nitrophenyl·)-
thiophosphat 2
Talkum 99,7*'
Dieses Präparat wird angewendet, wie in Beispiel 15 beschrieben«
Beispiel 41 - - Gemischtes Stäubemittel· TJ .
T-7545-B - 0,4* 1-Naphthyl·-N-methylcarbamat 1,5*-
T-7545-B - 0,4* 1-Naphthyl·-N-methylcarbamat 1,5*-
Talkum 98,1*
Anwendung des Präparats wie in Beispiel 15 beschrieben·
009822/1896
T-7545-A O,2#
T-7545-B . . 0,1Ji
Talkum ' 99,79^
5- Dieses Präparat wird angewendet, wie in Beispiel 15 beschrieben,
Beispiel 43 - Gemischtes Stäubemittel W Gefriergetrocknetes Pulver der Kulturbrühe
von Streptomyces hygroscopicus var. limoneus 100#
Dieses Präparat wird angewendet, wie in Beispiel 15 beschrieben·
009 822/18 96
Claims (1)
- Patentansprüche1) Verfahren zur Herstellung von Antibiotikum T-7545 und dessen Salzen, dadurch gekennzeichnet, daß man einen Stamm, der T-7545 bildet und zur Öattung Streptomyces gehört, kultiviert und das Antibiotikum aus der erhaltenen Kulturbrühe isoliert.2) Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß Streptomyces hygroscopicus als T-7545 bildender Stamm der Gattung Streptomyces verwendet wird.3) Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß Streptomyces hygroscopicus var. limoneus oder seine Mutanten als T-7545 bildende Stämme der Gattung Streptomyces verwendet werden.4) Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß Streptomyces hygroscopicus var.limoneus I]PO-12703 oder IPO-12704 als T-7545 bildende Stämme der Gattung Streptomyces verwendet werden·S\5^Antibiotikum T-7545-A, Antibiotikum T-7545-B, Salze^ dieser Antibiotika und deren Gemische, wobei T-7545-A die folgenden Eigenschaften hat:a) schwach basisches, weißes hygroskopisches Pulver, das keinen scharfen Schmelzpunkt hat und sich bei 100 bis 1350O zersetzt;b) leicht löslich in Wasser und polaren organischen Lösungsmitteln, schwer löslich in Aceton und Äthanol und unlöslich in Äthylacetat, Äther und Petroläther;o) Farbreaktionen:Molish-Reaktion positiv3fehlingsche Reaktion "009822/18 96Anthron-Reaktion positiv Phenol-Sulfonsäure-Reaktion "Orcinol-Sulfonsäurereaktion "Naphthoresorcin-Sulfonsäurereaktion " Benzidin-Perjodat-Reaktion "Peptid-Nachweisreagens-Reaktion " (tert«-Butylhypochlorit)Alkalisches Kalimnpermanganat reduziert Ninhydrinreaktion schwache Purpurfarbe10* d) pK'a-Wert 6,2e) durch Titration ermitteltes Molekulargewicht:510 + 25;f) oberhalb von 210 mti wird keine charakteristische Absorption festgestellt;15, g) deutliche Infrarotabsorptionsbanden:3450 (stark), 2900 (mittel), 1640 (mittel), 1450 (mittel), 1410 (mittel), 1370 (mittel), 1160 (mittel), 1120-1000 (stark), 920 (schwach), 900 (mittel), 855 (mittel); h) optische Drehung: /a_7 ^2 = 110 + 15° (0=1, H2O)110+15° (C=1,Pyridin)92,5+ 10° (C=!,Dimethylformamid)i) Elementaranalyse:
C 47,6 + 1,596; H 7,17 * 0,5#; N 3,01 + 0,5$j) durch Papierenromatographie und Dünnschichtchromatographie an Kieselgel ermittelte Rf-Werte:009 8 22/1896Lösiingsmittelsystem PapierhcromatocraOhie
I-7545-A T-7545-A-hydrοchlorid0,44 0,37-0,44n-Butanol:Äthanol: Wasser:konz.wässrigesAmmoniak 00:10:49:1.) 0,11-0,12 0,11-0,12Äthylacetat Essigsäure: Wasser (3:1:3)Ä"thylacetai;:Pyridin: Wasser (2:1:2)n~Butanol:Pyridin: Wasser (4:2:1$n-Butanol:Pyridin: Wasser (4:3:7) 0,01 0,01 0,01-0,02 0,01-0,02 0,05 0,050,46-0,48 0,46-0,48 80^iges Phenol(NH3) 0,55 0,55n-Butanol: Äthanol: Wasser:Pyridin (35:15:40:10)n-Propanol:V/asser: konz»wässriges Ammoniak (70:29:1)n-PropanolEssigsäure: . Wasser (4:1:1) 0,35-0,39 0,35-0,39 0,06-0,07 0,06Dünn-schicht-chromato-graphieT-7545-An-ButanolEssigsäure:Wasser (4:1:2) 0,10-0,12 0,10-0,1270$iges wässriges Aceton0,10 0,530,08 0,00 0,01 0,180,27 0,380,440,07 0,30k) Papierelektrophorese unter Verwendung von Borsäurepuffer (pH 10) bei einer Potentialdifferenz von 2 kV für 2 Stunden: +1,5 cm;009822/ 1896Papierelektrophorese unter Verwendung von Pyridin-Essigsäure (pH 6,0) bei einer Potentialdifferenz von 2 kV für 3 Stunden: -8,5 cm; l) antibiotisches Spektrum (in vitro):Testorganismus 28°C,40 Std. Hemmende Mindest
konzentration't-7545-3 280C,40 Il γ/πυ
T-7545-A>100 Pyricularia oryzae 280C, 40 It >100 >100 Pellicularia sasakii 280C140 Il >100 >100 Colletotrichum
lagenarium280C,40 N >100 >100 Alternaria kikuchiana 28°C,40 η >100 >1OO Aspergillus niger 280C,40 It >100 >100 Penicillium chryso-
genum280C,40 Il >100 >100 Saccharomyces
cerevisiae280C,40 η >100 >100 Candida albicans 280C,40 Il >100 >100 Irichophyton menta-
grophytes370C,14 Il >100 >100 Xanthomonas oryzae 370C,14 Il >100 >100 Bacillus subtilis 370C,H Il >100 >100 Staphylococcus
aureus370C,14 Il >100 >100 Sarcina lutea 370C,14 Il >100 > 100 Escherichia coli 370C,40 Il >100 >100 Proteus vulgaris 370C,40 Il >100 >100 Mycobacterium avium >100 >1OO Mycobacterium ATCC 607 >100 009822/ 1m) maximale Verdünnung, die zu anomaler Verzweigung der Hyphenspitzen führt:Pellicularia sasaKii 1OOOOORhizoctonia solani 50000Oorticium rolfsii < 100Phytophttna infestans < 2000und wobei !H545-B die" folgenden Eigenschaften hat:a) schwach basischesf weißes hygroskopisches Pulver, das keine scharfen Schmelzpunkt hat und sich bei 95 bis 1400C zersetzt;b) leicht löslich in Wasser, polaren organischen Lösungsmitteln, schwer löslich in Aceton und Äthanol und unlöslich in Äthylacetat, Äther und Petroläther;c) Farbreaktionen:Molish-Reaktion positivFehlingsche Reaktion «Anthron-Reaktion "Orcinol-Sulfonsäurereaktion MNaphthoresorcin-Sulfonsäurereaktion HBenzidin-Perjodat-Reaktion MPeptid-Nachweisreagens-Reaktion , (tert.-Butylhypochlorit) "Alkalisches Kaliumpermanganat reduziert Ninhydrinreaktion schwache Purpurfarbed) pK'a-Wert: 5,0;e) durch Titration ermitteltes Molekulargewicht: 520 +25;f) keine charakteristsiche Absorption oberhalb von 210 mu.;009822/1896g) deutliche InfrarotabsorptionslDanden bei 3400 (stark), 2910 (mittel), 1638 (mittel), 1415 (mittel), 1080 (stark), 1025 (stark), 900 (mittel), 840 (mittel);h) optische Drehung: /ä_7^3 ■ 102 + 10° (0=1, H2O)i) Elementaranalyse:C 46,46 + 1,5#; H 7,06 + 0,5#ί N 2,44 + 0,5*.j) Rf-Werte auf "spot"-Filmen für Dünnschichtchroma-.tographie an Kieselgel: 0,43 (n-Propanol:Essigsäure:Wasser = 4:1:1);k) Elektrophorese:Papierelektrophorese unter Verwendung von Borsäurepuffer (p„ 10) bei einer Potentialdifferenz von 2 kV für 2 Stunden: +6,0;Papierelektrophorese unter Verwendung von Pyridin-Essigsäure (pH 6,0) bei einer Potentialdifferenz von 2 kV für 3 Stunden: -4,0;l) antibiotisches Spektrum (in vitro):009822/1 896lestOrganismus 280C,40 Std. Hemmende Mindest
konzentration
γ/ml
T-7545-A T-7545-3>100 5 Pyricularia oryzae 280C,40 Il >100 >100 Pellicularia sasakii 280C, 40 Il >100 >100 Colletοtrichum
lagenarium280C,40 Il >100 >100 Alternaria kikuchiana 280C,40 Il > 100 >100 10 Aspergillus niger 280C,40 Il >100 >100 Penicillium. chryso-
genum280C,40 It >100 >100 Saccharomyces .
oerevisiae280C,40 Il >100 >100 15 Candida albicans 280C,40 Il >100 >100 Trichophyton menta-
grophytes280C,40 . Il >100 >100 Xanthomonas oryzae 370C,14 Il >100 >100 Bacillus subtilis 370C,14 Il >100 >100 20 Staphylococcus
aur e us370C,14 Il >100 » >100 Sarcina lutea 370C,14 It >100 >100 Escherichia coli 370C,14 Il >100 >100 • Proteus vulgaris 370C,40 It >100 >100 »5 Mycobacterium avium 370C,40 It >100 >100 Mycobacterium ATCC 607 >100 009822/ 1896m) maximale Verdünnung, die zu anomaler Verzweigung an den Hyphenapitzen führt:
Pellicularia sasakii 1500Rhizoctonia solani . ^ 20Oorticium rolfsii ' < 100Phytophthora infestans <20006) Hydrochloride, Sulfate und organische Sulfonate der Verbindungen nach Anspruch 5.7) Kulturbrühe, hergestellt durch Kultivierung eines Stammes, der T-7545 bildet und zur Gattung Streptomyces gehört.8) Schädlingsbekämpfungsmittel zur Bekämpfung von Pflanzenkrankheiten, enthaltend als Wirkatoff das Antibiotikum T-7545-A, das Antibiotikum T-7545-B, ein Salz dieser Antibiotika oder ein Gemisch dieser Wirkstoffe.9) Schädlingsbekämpfungsmittel zur Bekämpfung von Pflanzenkrankheiten, enthaltend eine Kulturbrühe, die durch Kultivierung eines T-7545 bildenden Stammes der Gattung Streptomyces erhalten worden ist.10. Schädlingsbekämpfungsmittel nach Anspruch.7, enthaltend Antibiotikum T-7545 als Wirkstoff.11. Schädlingsbekämpfungsmittel nach Anspruch 7, enthaltend Antibiotikum T-7545-B als Wirkstoff.12o Schädlingsbekämpfungsmittel nach Anspruch 7, enthaltend Antibiotikum T-7545-A und. T-7545-B als Wirkstoff.15. Schädlingsbekämpfungsmittel nach Anspruch 7 bis 11 in flüssiger Form, enthaltend den Wirkstoff in einer Menge von etwa 0,0001 bis 1 Gew.-^ό, bezogen auf das Präparat.14. Schädlingsbekämpfungsmittel nach Anspruch 7 bis 11 in Pulverform, enthaltend etwa 0,01 bis 30 Gew.-$ Wirkstoff, bezogen auf das Präparat.15. Schädlingsbekämpfungsmittel nach Anspruch 7 bis 11 in . Konzentratform, enthaltend etwa 0,5 bis 80 Gew.-^ Wirkstoff, bezogen auf das Konzentrat.009822/1896?5Lee rs ei te
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Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
DE2218648A1 (de) * | 1971-04-20 | 1973-03-08 | Takeda Chemical Industries Ltd | Neue antibiotika, verfahren zu ihrer herstellung und ihre verwendung als schaedlingsbekaempfungsmittel |
-
1969
- 1969-10-28 DE DE19691954110 patent/DE1954110A1/de not_active Withdrawn
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- 1969-10-29 FR FR6937207A patent/FR2021851A1/fr active Pending
- 1969-10-29 NL NL696916326A patent/NL149228B/xx not_active IP Right Cessation
- 1969-10-29 GB GB52922/69A patent/GB1278289A/en not_active Expired
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
DE2218648A1 (de) * | 1971-04-20 | 1973-03-08 | Takeda Chemical Industries Ltd | Neue antibiotika, verfahren zu ihrer herstellung und ihre verwendung als schaedlingsbekaempfungsmittel |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
FR2021851A1 (de) | 1970-07-24 |
NL6916326A (de) | 1970-05-04 |
DK137862C (de) | 1978-10-30 |
DK137862B (da) | 1978-05-22 |
GB1278289A (en) | 1972-06-21 |
CH532658A (de) | 1973-01-15 |
NL149228B (nl) | 1976-04-15 |
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