DE1928428A1 - Arzneipraeparat mit bessernder und vorbeugender Wirkung bei Stoerung von Gehirnfunktionen und Verfahren zu seiner Herstellung - Google Patents
Arzneipraeparat mit bessernder und vorbeugender Wirkung bei Stoerung von Gehirnfunktionen und Verfahren zu seiner HerstellungInfo
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Description
DR. ELISABETH JUNG, DR. VOLKER VOSSIUS, DIPL.-ING. GERHARD COLDEWEY
TELEX S 28 088
k. Juni «969
UoZo ί E 388 (Vo/M/kä)
CHUGAI SEIYAEXJ KiSUSHIKI KAISHA
Tokyo, Japan .
11 Arzneipräparat mit bessernder und vorbeugender Wirkung toti
Störung von Gehirnfunktionen und Verfahren zu seiner Herstellung M
Pie Erfindung betrifft ein Arzneipräparat mit bessernder und vorbeugender Wirkung bei Störung von Gehirnfunktionen» insbesondere
bei Bewußtseinsstörungen und Gehirnödemens z.B« hei Kopfverletzungen oder Störung der Blutgefäßfunktion, und ein Verfahren
au seiner Herstellungo
Das Präparat der Erfindung wird hergestellt, in&«m.aan
(a) eine frisohe, homogenisierte, tierische Gehirnsuspension eur
Fällung der Mitochondrion zentrifugiert und dtn Mitoohondrientiberstand erneut zentrifugiert,
, (b) die erhaltenen Mitochondrion in einen Suepensionemedium su·-
pendiert, die Mitochondrienauspension zur Zerstörung der
9098S0/1ASA
ORtßlNAL INSPEGTED
zerstörten Mitochondrien zur Entfernung der Mitochondrienreste zentrifugiert,
(o) den in Stufe (b) erhaltenen Überstand mit venig Albumin und
mit dem in Stufe (a) erhaltenen zweiten Überstand versetzt, die erhaltene Lösung dialysiert und das Dialysebad gewinnt»
Bei der Untersuchung der Schwellung von Gehirnzellen wurde festgestellt,
dass der AdenosintriphoBphatase-Spiegel von Gehirnparallel
mitochondrion rasch / au"der Punktion verletzter Gehirnzellen abnimmt „ wobei Schwellung der Gehirnmitochondrien und des Gehirngewebes auftrittο Die Beziehung zwischen der Punktion der Gehirnmitochondrien
und der Schwellung von Gehirnzellen wurde unteres
Bucht, und/ergab sich,, dass ein Extrakt aus Mitochondrien von frischen, tierischen Gehirnzellen spezifisch die Abnahme der dinitrophenol-abhängigen Adenosintrlphosphatase-Aktivität (im folgenden kurz als DNP-ATPase bezeichnet) und die Schwellung der Mitochondrien heramto Verabreicht nan einem Tierp dessen Gehirn experimentell geschädigt wurde, ü0Bo einer Katze mit Be·=
Bucht, und/ergab sich,, dass ein Extrakt aus Mitochondrien von frischen, tierischen Gehirnzellen spezifisch die Abnahme der dinitrophenol-abhängigen Adenosintrlphosphatase-Aktivität (im folgenden kurz als DNP-ATPase bezeichnet) und die Schwellung der Mitochondrien heramto Verabreicht nan einem Tierp dessen Gehirn experimentell geschädigt wurde, ü0Bo einer Katze mit Be·=
von dem wußtBeinsBtörung, nach Entlastung / auf. das Gehirn ausgeübten
Druck dad Präparat der Erfindungs so kehren die wegen der Kopfverletzung ibnorm höhen und langsamen SEG-Frequenzsn
auf normale Werte zurück0 Diese Tatsache zeigt, dass das
Präparat der Erfindung eine erheblich bessernde Wirkung bei Störungen von Gehirnfunktionen, insbesondere bei Bewußtseinsstörung hat.
Xa folgenden wird das bevorzugte Verfahren zur Gewinnung des.
Präparats der Erfindung beschrieben.
" ■ ■ ; - BADORIQINAl
909850/U54
Vorzugsweise wird das Gehirnp Z0 B« von Ratten, Katzen, Hunden,
Schafen oder Rindern, dem Tier sofort nach den Töten rasoh entnommene Haoh einem bekannten Verfahren werden die Mitoohondrien
daraus gewonnen0 ZoB0 wird das Gehirn innerhalb von 10 - 19 Sekunden in eine Lösung von Mannit und Äthylendiamintetraessigsäure, im folgenden Mannit-EDTA-Lösung genannt, gebracht, deren
Pjj-Vfert mit Kaliumhydroxydlöeung auf 7« 4 eingestellt wurde« Bei
wesentlich längeren Zeiten erhält man schlechte Ergebnisse, da
sich dadurch nicht nur der aktive Paktor' zersetzt, sondern auch viel Fettsäure gebildet wird» die die DHP-ATPase-Alctivität
hemmto t
Das Tiergehirn wird in das 5-10-fache Volumen einer Mannit-EDTA-Löeung gebracht, die suspension wird homogenisiert und 10 Minuten bei 2000 g zentrifugiert· Nach der Entfernung des ffiedtrechlags wird der überstand noch einmal bei 20 000 g zentrifugiert,
wodurch man die ausgefällten Mitochondrion und den überstand (I)
erhalte
Die so erhaltenen Mitochondrion werden in einem geeigneten Medium
suspendiert, eingefroren und aufgetaute Sann wird die Suspension
1 Stunde bei 50 000 g zentrifugiert und man erhält den Überetand
Der überstand (I) wird 2 Stunden bei 50 000 g zentrifugiert, wodurch man den Überstand (III) erhält«
lösung bis zu einer Konzentration W β.B. \%
AlbuminAerßetzt Sann wird die Lösung in Dialysiersohläuohe abgefüllt und gegen einen 5 millimolaren Phosphatpuffer, der
■9 0 98.50/U 5.4
Vf* 1 It *
4 -
0,25 molar an Mannit ist, vom pH-Wert 7,4 24 Stunden bei 0.- 4
dialysiert« Der aktive Faktor befindet sich im Dialysierbado Me
einzelnen Stufen sind im folgenden echematieoh widergegeben«,
Gehirn
Homogenat
i
i
j Zentrifugation in einem Suspensionsmedium, 2000 g» 10 Min.
Niederschlag
jüberetand!
Niederschlag j
(MitochondrienJH
(MitochondrienJH
Zentrifugation .2Q-OOOgT 10 Mine
!Überstand (I)I
Einfrieren, Auftauen, Zentrifugation in einem Suspensionsmedium. 50 000 g, 1 Stunde
Jl
Zentrifugation 50 000 g, 2 Stunden
Niederschlag JÜberstand (IIM Niederschlag
Überstand (III)
Dialyse
Dialysat
(Pialysebad)
(Pialysebad)
Die Aktivität wird höher, wenn man die Überstände (II) und (III)
vereinigte Man erhält ein besseres Präparat durch Zugabe von Albumin zu den Überständen, da dadurch ein Vermischen der im Verlauf
des Verfahrens in geringen Mengen gebildeten fettsäuren, die
die DNP-ATPase hemmen* mit dem gewünschten Präparat verhindert
wird»
Die so erhaltene äussere Dialysierflüssigkeit mit dem aktiven
Faktor wird zur Haltbarmachung des Präparates lyophilisierto
909&50/U5A
Ii 'I
5.
mit Wasser
Das lyophilisierte Präparat wird zur Injektion/auf die gewünschte
Konzentration verdünntβ
Die Beispiele erläutern die Erfindung»
Sofort nach dem Abtrennen des Kopfes einer Ratte Vurde die Himl&Lffce
entnommen und in das fünffache Volumen einer kalten Mannit-EDTA-Lösung
(On3 molar Mannit und 0,01 millimolar Äthylendiamintetraessigsäure,
pH~Wert Yj. 4) gebracht«, Der Vorgang dauerte etwa
10 Sekundeno Dann wurde das.Gehirn mit einem Potter-Elvenhjem-
Homogenisator massig homogenisiert und das Homogenisat wurde 10
Minuten bei 20 000 g zentrifugiert 9 wodurch man einen Überstand
und die Mitochondrien als Niederschlag erhielt« Die Mitochondrien
vmrden gleichmässig in 10 ml kalter Manni.t-ED5DA~Lösung suspendiert und die Suspension wurde in einer Siefkühltruhe bei -200C
Bach dein Auftauen bei Kaumtemperatur wurde die Suspension
1 Stunde unter Kühlen bei 50 000 g zentrifugiert0 Hierbei
erhielt man den Überstand (H)0
Der Überstand (I) wurde 2 Stunden bei 50 000 g zentrifugierte Man
erhielt den Überstand (III).
Me vereinigten überstände (II) und (Hl) wurden mit 1 jS Albumin
Das ßemisch wurde gegen einen 5 millimolaren Phpsphatrj:
der 0f.25 molar an Mannit warf 24 Stunden dialysierto In
90 ml'Dialysebad war die Substanz mit der bessernden und vorbeugenden
Wirkung bei Störung der Gehirnfunktion enthaltene
Heispiel 2
IiXn Sohaf wurde sofort nach dem Töten an der Schläfe trepaniert
909850/1454
unji das Gehirngewebe wurde herausge saugt«, Bas erhaltene Gewebe
wurde auf die gleiche Weise wie in Beispiel 1 suspendiert und
aufgearbeitet« Man erhielt ein injizierbares Präparat mit bessernder
und vorbeugender Wirkung bei Gehirnfunktionsstörungenο
Eine Katze wurde mit Phenobarbital-Hatrium flach anästhetisiert
und der Kopf wurde rechts parietal trepanisierto Ein ^ kleiner, mit einem Polyäthylenschlauch verbundener Gummiballon
wurde in den Epiduralraum gebracht und an beiden Schläfen wurden EEG~Elektroden angebrachte Zur Aufzeichnung der Rindenströme
auf beiden Seiten wurden unipolare Elektroden verwendet und die indifferente Elektrode wurde an der Stirn angebrachte Der Polyäthylenschlauch und die Elektroden wurden mit Zahnzement befestigt O
Nach dem Abklingen der EEG-Abnormalitäten nach Beendigung der
Anästhesie wurde der Ballon durch anteilsweise Zugabe von 0t2 ml
. physiologischer Kochsalzlösung aufgebläht0 Zum Zeitpunkt der IConpression
treten hochamplitudige langsame Wellen» sowie spindel«=
förmige Entladungen zuerst auf der komprimierten Seite aufο
Sobald langsame Wellen auf der Gegenseite auftratenρ wurde die
Zufuhr der physiologischen Kochsalzlösung beendet und der Polyäthylenschlauch verschlossen Der Druck auf das Gehirn wurde 24-Stunden
lang aufrechterhaltene Dann wurde die physiologische Kochsalzlösung und. der Ballon entfernt und drei Stunden lang wei-.
ter beobachtete Wenn man feststellte, dass der Allgemeinzustand
normal wurde^, aber die Bewußtseinslage noch nicht wiederherge·^
stellt warp wurden 2 ml des Präparates der Erfindung mit dem
909850/U54
■■■-■ 1928A28
« 7 —
wirksamen Bestandteil aus 3 ~ 7 ß Gehirn intravenös injiziert»
worauf die Elektroenzephalogramme aufgenommen wurden<=
In der Zeichnung sind die Elektroenzephalogramme wiedergegebenσ
9.0 9-85 0/U54
Claims (4)
1. Präparat mit bessernder und vorbeugender Wirkung bei Störung von Gehirnfunktionen, dadurch gekenn -zeichnet , dass es hergestellt worden ist, indem man
(a) eine frische, homogenisierte, tierische Gehirnsuspertsion
™ zur Fällung der Mitochondrien zentrifugiert, und den
Mitochondrienüberstand erneut zentrifugiert,
(b) die erhaltenen Mitochondrien in einem Suspensionsmedium
suspendiert, die Mitochondriensuspension zur Zerstörung
der Mitochondrien einfriert und auftaut und die Suspen- -sion der zerstörten Mitochondrien zur Entfernung der
Mitochondrienreste zentrifugiert,
(c) den in Stufe (b) erhaltenen überstand mit wenig Albumin
und mit dem in Stufe (a) erhaltenen zweiten Oberstand
versetzt, die erhaltene Lösung dialysiert und das Dialysebad gewinnt.
2. Präparat nach Anspruch 1, d a d u r c h g e k β η η -w zeichnet, dass das frische Gehirn innerhalb von
10 - 15 Sekunden aus Ratten, Katzen, Hunden, Schafen und
Rindern gewonnen worden ist.
3. Präparat nach Anspruch 1, dad ure h ge kenn ζ ei c h
net , dass das frische, tierische Gehirn im 5 - lOfachen
Volumen einer Mannit-EDTA-LUsung homogenisiert worden ist.
4. Präparat nach Anspruch 3, da durch gekennzeich -net, dass die Mannit-EDTA-Lösung 0,01 millimolar an
Xthylendiamintetraeseigsäure und 0,3 molar an Mannit ist und
ORIGINAL INSPECTED 909850/U54
- 9 einen Pjj-Wert von 7»4 aufweist»
5o Präparat nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass zur Suspension der Mitochondrien Mannit-EDTA-Lösung
verwendet worden ist,
6 ο Präparat nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet,}
dass es hergestellt worden ist, indem man frische s homogenisierte, tierische Gehirnsuspension IO Hinuten
feel 2000 g zentrifugiert; den Überstand gewinnt, den erhaltenen
Überstand zur Ausfällung der Mitochohdrien zentrifugiert und
den Mitochondrientiberatand erneut zentrifugiert (Überstand III),
die erhaltenen Mitochondrien in einem Suspensionsmedium suspendiertj
die Mitochondriensuspenslon zur Zerstörung der Mitochondrien
einfriert und auftaut und die Suspension der zerstörten Mitochondrien bei 50 000 g zur Gewinnung des Überstandes (II)
abzentrifugiert; den Überstand (II) mit wenig Albumin und dem
Überstand (III) versetzt9 die erhaltene Lösung dialysiert und
das Dialysebad gewinnt0
7ο Verfahren zur Herstellung eines Arzneipräparatea nach Anspruch
I9 dadurch gekennzeichnet, dass man
(a) eine frische, homogenisierte, tierische Gehirnsuspension zur
Fällung der Mitochondrien zentrifugiert und den Mitochondrienüberstand erneut zentrifugiert,
(b) die erhaltenen Mitochondrien in einem Suspeneionsmedium suspendiert,,
die Suspension zur Zerstörung der Mitochondrien
■> einfriert und auftaut und die Suspension der zerstörten
Mitochondrien zur Entfernung der Mitochondrienreste zentri-. fugiertj,
909850/USU
t i
. - 10-
., (q) den in Stufe (b) erhaltenen Überstand mit venig Albumin und
dem in Stufe (a) erhaltenen zweiten Überstand versetzt, die
erhaltene Lösung dialysiert und. das Dialysebad gewinnt.
8e Verfahren nach Anspruch 7, dadurch gekennzeichnet, dass man das frische Gehirn aus Ratten, Katzene
Hunden, Schafen und Rindern innerhalb von 10 -^ 15 Sekunden gewinnt
O
9o Verfahren nach Anspruch 7» dadurch ge kenn=»
zeic hnet, dass man das frische* tierische Gehirn im 5-10
fachen Volumen einer Mannit-EDTA-LÖsung homogenisierte
• 1Oo Verfahren nach Anspruch 9, dadurch gekenn=
ί zeichnet, dass die IvIannit~EDT A-Lo* sung 0,3 molar an Man-.
nit und 0,01 millimolar an Äthylendiamintetraessigsäure ist und
der !»„-Wert der Lösung 7,4 beträgto
Ho Verfahren nach Anspruch 7S dadurch gekennzeichnet,
dass das Suspensionsmedium zur Suspension der
Mitochondrien aus einer Mannit-EDTA-Lösung beeteht»
. 12ο Verfahren nach Anspruch 7, dadurch gekenn-ζ
e i c hnet, dass man die frische, homogenisierte, tieri=>
sehe Gehirnsuspension 10 Minuten bei 2000 g zur Gewinnung des Überstandes zentrifugiert, den Überstand zur Ausfällung der
Mitochondrien zentrifugiert und den Mitochondrienüberstand er-I
neut zentrifugiert (Überstand III)P die Mitochondrien in einem
Suspensionemedium Suspendiert, die Mitochondriensuspension zur
Zerstörung der Mitochondrien einfriert und auftaut t die Suspension der zerstörten Hitochondrien zur Gewinnung des Überstandes
909850/U5A
(II) 1 Stunde bei 50 000 g zentrifugiert, der überstand mit
wenig Albumin und dem Überstand (ill) versetzt„ die erhaltene Lösung zentrifugiert und das Dialyeierbad gewinnt.
ORIGINAL INSPECTED 909 8 50/U 54
Leerseite
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP3796968 | 1968-06-05 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DE1928428A1 true DE1928428A1 (de) | 1969-12-11 |
Family
ID=12512377
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DE19691928428 Pending DE1928428A1 (de) | 1968-06-05 | 1969-06-04 | Arzneipraeparat mit bessernder und vorbeugender Wirkung bei Stoerung von Gehirnfunktionen und Verfahren zu seiner Herstellung |
Country Status (4)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US3720763A (de) |
| DE (1) | DE1928428A1 (de) |
| FR (1) | FR2010200B1 (de) |
| GB (1) | GB1256755A (de) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE3325376A1 (de) * | 1982-12-17 | 1984-06-20 | Jelesin-Gesellschaft, 4000 Düsseldorf | Therapeutisches mittel zur behandlung von fehlfunktionen des menschlichen diencephalon und/oder der hypophyse, insbesondere der multiplen sklerose |
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| JPS6046092B2 (ja) * | 1974-07-01 | 1985-10-14 | 中外製薬株式会社 | 脳機能障害の改善および予防成分の抽出法 |
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| GB2350565A (en) * | 1999-05-28 | 2000-12-06 | Johnson & Johnson Medical Ltd | Biological wound dressings comprising mitochondria |
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- 1969-06-04 DE DE19691928428 patent/DE1928428A1/de active Pending
- 1969-06-04 GB GB1256755D patent/GB1256755A/en not_active Expired
- 1969-06-05 FR FR6918482A patent/FR2010200B1/fr not_active Expired
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1971
- 1971-10-18 US US00190177A patent/US3720763A/en not_active Expired - Lifetime
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| Publication number | Publication date |
|---|---|
| FR2010200B1 (de) | 1974-02-01 |
| FR2010200A1 (de) | 1970-02-13 |
| US3720763A (en) | 1973-03-13 |
| GB1256755A (de) | 1971-12-15 |
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|---|---|---|---|
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