DE1909666A1 - Antifibrinolytisches Mittel - Google Patents

Description

Dft.-ING. WALTER ABlTZ DR. DIETER MORF

Patentanwälte

8 Mönchen 27, Pienzenauerstraße 28 Telefon 483225 uncM8M15 Telegramme: Chemindus München

26« Februar 1969

12 068

MBHCK & CO., IHC.
126 Eaat Lincoln Avenue ,Rahway, Hew Jersey, USA

Mittel

Die vpv3.iö'$snöc jß^fi-nßnir; uctiiifft neue airLiilbrin
Vor>ii:i1nn_t.;ßu xuiü cii; Torfalü'Cii rsirr Bokasa'pi'img· von
ten iiüsjoi'rl'fai.Tii.tc-liftii Ü^afeLa-ij-an mid tinöeren Erankhsitöii₅ aii i;-!f ciiiGii viA-üö-olo^iöcboia iiurinoljti^cbGn gustancl bei den Far.iüiitsri κΐίΐ'ϋα'ίΜ^ίΐεϊϊ. ü)ie voi'lie^eiiue lürfiiidung betrifft o .^;iie uoiio ^erbiaöinig 4-AniinoiaGtbylGubaTi"-'!"
iait uör i'orwol:"

- 1 -90S838/15A9

sau

12068 *

COOH

H₂NGH₂

Die Verbindung kann chemisch auch als 4-Anjinoinethylpenta- cyclo-f4o2.0.0.²'⁵0^0*^#^]-octan-1-carl)onsäure bezeichnet= werden. . _;

Diese Verbindung ist fUr die Verhinderung oder Behandlung . von pathologischen fibrinolytischen Zuständen bei Säuge- , tieren und beis.Menschen durch orale Verabreichung in einer Menge von 1 bis 2Oi vorzugsweise 2 bis 8 mg/kg Körpergevicht pro l'ag für variierende Behandlungsp er iod cn brauch^-? bar. - -γ?-.. ...."'<

Die Auflösung von fibrinnieöerschlagen bei Säugetieren beruht auf ihrer lysis durch das Enzym Plasmin (Fibrinolysin), das is Blut aus Plasminogen gebildet wird, das ebenfalls iia Blut vorliegt. Diese Umwandlung von Plasminogen in Plasmin wird durch Aktivator en im Blut gefördert und überrnäsaige fibrinolytische Aktivität scheint das Ergebnis eines Übsrschusses an derartigen Aktivatoren zu sein. Wenn su viel Pla&xnin vorliegt, gerät das Gerinnv.ngSBystem des Blutes aus dem Gleichgewicht, lebensfähige Klüiapchen können nicht aufrechterhalten werden und es kann Häxoorrhagie - eintreten» Diese Situation ist als fibrinoly,'bischer Zustand bekannt. Andere Enzyiasysteme (die Kallikreine, Komplement) können ebenfalls in unerv/Ußschter Weise aktiviert werden, wenn ein derartiger Sustand vorliegt.

Antifibrinolytisehe Mittel, d»h. Arzneimittel, die die Akti-

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vierung von Plaaiainogen unter Bildung von Plasmin inhibieren, haben in jüngster Zeit Interesse erregt. Is wird angenommen, daß diese antifibrinolytischen Mittel die Wirkung des? Aktivatoren für die Umwandlung von * Plasminogen in Elastin εtüren. Me klinische Anwendung derartiger Arzneimittel uafa&t ihre Verabreichung an Personen, die sich verschiedenen Arten von ohirurgisehen !Eingriffen (beispieleweise efcirurgiWhen Her2~L>unge~ und Erostataeingriffen) unterziehen, bei Mtaorrhagisehen Erobleaen bei des? Entbindung» bei Menorrhagie und bei vielen anderen Anwendungen, die in des? Literatur Vorgeschlagen worden sind (vgl* Acta Medica Seand» Buppl» 44β* Band 180 (1966)},

Bin antiflbrinolytieöhes Standardmittöl, in Vergleiob-nit* dem neuere Mittel im allgemeinen getestet \terden» ist 6*Aiainoöapronöäure, bekannt als EAöA» Ein liachteil dieses Mittels sind die erfordert*ichen sehr hohen Dosierungen, in tianohen Pillen 3 bis 6 g oder iselir all© 4 bis 6 Stunden, Auch sind liebeneffekte, wie Schwinöel, Brechreis und Diarrhö"3» beobachtet worden. Ta jüngster Eeit öind swei stärkere Mittel beschrieben wordetif näalich Trans.-4-aiainorjethylcyclohexancarbonsäure (AKGHA) imü 4-AffiinoBethylben-EiOösäure (EAMBA). Von j ed am-ö er beiden Mittel wird angegeben, da3 es sowohl bei -Iestu in vitro als auch bei 2ssts in vivo aktiver ißt als EACA (vgl. Scaiid» 3, Haöiaat» (1965), l\i 2J0, und Acta !»harmacol. et ϊοχίοοΐ (1965>_s 2g, 340» in bsi. f" on Literatur s teil en wird Ai-IGKA--diskutiert)»

Ι»? \Λΐΐ'άα gefunrloiij das dio ei'i'inßungsgeaäße Verbindung eine A>:i:^viteu seigt* die etwa das 115-faohe der Aktivität von IUCA bi2i Tests in vitro beti\-i.gt_f. die iia wesentlichen die glc-rlehen sind wie die Sests, von denen aan weiß* daß eie siit--.kliyisehen Ergebnissen ba:b:i Hen sch en in Übex^eins t.1

09838/1549 SAO OWGfNAL

Btehen. Bs wurde weiterhin ein verbessertes antifibrinolytisches Verfahren zur therapeutischen Behandlung gefun* *· den, bei dem viel kleinere Dosen der Droge erforderlich sind. · '

Die erfindungsgemäße Verbindung wird ausgehend von der bekannten Verbindung Cuban~1,4-dicarbonsäuredimethylester hergestellt, die auch als Pentacyclo~[4.2.0.0.^2#i5O.^'⁸O»^] octan-1,4-dicarbonsäurediaethylester bezeichnet wird. Blaser wird in wesentlichen in der in J. Am. Cheia. Soo. 86, 962, (1964) beschriebenen Weise hergestellt. Infrarotspektrea, UMH-Ergebni3se, Schmelzpunkt und Elementaranalys© liefern im Vergleich mit den beschriebenen Werten, günstige Ergeb~ nisse. Das Material erweist sich bei DUnnsehichtchromato- ·' graphie und bei Dampfphasenchromatographle als homogen.

Nachfolgend wird das stufenweise Verfahren zur Herstellung der erfindungsgemäßen Verbindung veranschaulicht.

B e i s ρ i e 1

Herstellung vor	3	/	—COOCH5 u	/	ι CO
			1) HaOH
	ι Cuban-i^-dicarbonsäuremonomethylester (II)	2) HCl rtTT An« -«_____
'Γ'	/
		/
/

(D

(II)

i>»84 g (0,0265 Mol) Cuban-1 ^-dicarbonsäuredimethylester (I)

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^ 19Ö9666

12068 «

werden in 75 ml siedendem absolutem Methanol gelöst (die Auflösung geschieht langsam). Diese Lösung wird zu einer Lösung, von Natriuminethylat gegeben, die durch Auflösen von 0,61 g (0,0265 Mol) metallischem Hatrium in 75 ml absolutem Methanol hergestellt wird. !lach der Zugabe von 10 ml destilliertem Wasser wird die Lösung magnetisch gerührt _v und 22 Stunden unter Stickstoff am Rückfluß gehalten. Nach der Entfernung des Methanols im Vakuum (40 bis 50⁰C) werden 25 ml destilliertes Wasser zugegeben, wodurch alles auaser einer kleinen Menge feststoff aufgelöst wird. Dieses Material wird durch Extraktion mit drei getrennten 25 inl-Anteilen Chloroform entfernt., lach Trocknen über Magnesiumoulfat ergeben die vereinigten Ghloroformschichten 0,73 β (12,5 ^cß>) iravsrseiften festen Diester (I), der zurückgelaitst werden kann. Die wäSrige Schicht wird nach dem Abkühlen mit 5,0 Kl 6,On Chlorwasserstoffsäure angesäuert. Der sich ergebende reichliche weiße Niederschlag wird dann in fünf getrennte 1.00 ml-Anteile Essigsäureäthylestor extrahiert, die vereinigten Extrakte werden mit Wasser gemschen ιιηά übe:? Magnesiumsulfat getrocknet, filtrieren xmü Entfernung ües Lösungsmittels im Vakuum liefern 4»02 g weißen Peststoff (74 5', berechnet als Monoaäur®). Die Dünnschichtchromatographi;) -zeigt, dai3 das Produkt ein® Mischung ä®x beiden er-•«'orwets': sauren komponente», der Mono« und der Disäuro, ist, wobei die letatere m.w eine geringere Komponente dar-'•;ttslItc Düirnschiohtchrojaatographie (SiI. Q») 90:25:4 Hen^:3cij:0io3Ean:Essigsäure H₂SO^, Char., Hf (Monosäiare) « 0,73j Γ-f (Π« .,ur©) ~ 0,55* Das Ma-äex-ial scheint, eiamal getrocknet j tu Ol-.lor/Oforns praktisch unlöslich, in Essigsäureäthyl-» GBtßr n.-'cht -jeli'i? löslich und in Äthanol und Methanol lösiich s'i 3«in-,

Die Τϊΰπηυιΐβ wird errsioiit, indesi ein Silicar 7G Analtech

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2068 ^Ό

TJnibar χη &.\ιΐ steigend or ¥eise mit 90:25:4 Benzol:Dioxan:Es

als Eluierungsmittel verwendet wird, wobei dann Methanol extrahiert wird. Bei einem Durchlauf liefern 4j90 g der rohen Ssureiaischung 2,79 g reine Monosäure, wäh rend der Rest sich in der Disäurezone verliert. Unreines Material kann erneut chromatographiert oder verestert werden. Dia reine Monosäure schmilzt, wie sie aus der Säule gewonnen wird, bei 172 bis 176⁰C. Dreimaliges Umkristallisieren aus Essigsäureäthyleeter ergibt eine Analysenprobe mit einem F ä 174,5 bis 176⁰C. Ein MMR-Spektrum (d-»DMSO) zeigt ein Singlat bei 3,70 ppm (5 Protonen, COOCH,) und ein. Siiaglet bei 4,22 ppm (6 Protonen, Kubus).

Herstellung von 4-Carboxaiaidocuban-1-carbonsäureinetbylaster (Hl) *

0 tr

1) (Oj

2) ClC

II

's ι Ύ,ίτ-ί nt.

(III)

2ώ einer trockenen Atmosphäre werden unter Stickstoff 2,22 g (10,80 3MuI) Cuban-1 ^-^dicarbonsaureiBonoaiethylester (II) in 50 üil trockenem !Tetrahydrofuran (destilliert über Natrium« hydrid) gelöst. Die Hieolmng wird mechanisch gerührt. Nach

auf -10⁰G worden 1,14 g (11,26 mMol) Sriäthylamin 1C ml Tetrahydrofuran (THP) auf einmal augögeb@n₉ dann ·

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12068 Γ

werden im Verlauf von 5 Minuten 1,21 g (11,24 -xnHol) Chlorameisensäureäthylester in 10 ml THl? zugesetzt, wobei die Temperatur bei.-10 ί 2⁰O gehalten wird. Sriäthylaminhydroohlorid scheidet sich aus der Reaktionsmischung ab. Nach Rühren für weitere 30 Minuten bei -10⁰C wird 10 Minuten lang unter fortgesetztem Kühlen (die !Temperatur steigt auf +1O⁰O) Ammoniakgas durch die Mischung geperlt. Das Eisbad wird entfernt und die Mischung wird über Rächt gerührt. Hach der Zugabe von 40 ml destilliertem Wasser wird die klare farblose Lösung im Vakuum bei 50 bis 60⁰C zur Entfernung des ΪΗϊ¹ eingedampft. Das Produkt kristallisiert während des Eindampfens. Abkühlung liefert 1,14 g (51,7 #) Peststoff. Kontinuierliche Extraktion der wäßrigen Schicht mit Essigsäureäthylester und anschließende !^kristallisation des Rückstandes aus Methanol liefert nur weitere 105 mg Produkt (insgesamt 56,7 #). Das Material kristallisiert aus Methanol in Form von glänzenden Platten, jedoch scheint das Rohmaterial im wesentlichen ebenso rein zu sein wie das umkristallisierte Material. Das Produkt zeigt kein scharfes Sclurelirverhalten, sondern wird bei 228 bis 238⁰C dunkel und schmilzt dann bei 238 bis 24O⁰C zu einem dunkelbraunen Material«

Ein lH-SH-öpektrura '(d-DMSO) zeigt die folgenden Absorptionen: Singlet bei 3,S3 PP^m (3 Pi?otonen, COOCH,), Singlet bei 4,11 Piim (δ Protonen, Kubus), breite Absorption bei 6,8 bis 7,3 ppm (2 Protonen, COM,,).

7 -

SAD ORIGINAL

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Herstellung von 4~CyanoCuban-I^carbonsäuremethylester (IV)

Verbindung III

POCl,

GlCH₂CH₂Cl

CH₃OOO

(IV)

Zu 410 mg (2,00 mMol) 4-Carboxamidocuban-i-carbonsäurömethylester (III), suspendiert in 1JJ ml-frisch destilliertem 1,2-Diohloräthan, werden 1,0 ml Phosphoroxychlorid gegeben. Nach 30-minütigeni Erhitzen zum Rückfluß ist der Pest stoff aufgelöst, dann wird die Mischung etwas trüb, Nach der Entfernung des Lösungsmittels und des überschüssigen Phospfcoroxychlorids im Vakuum bei 60 bis 70⁰C wird der Rückstand in 25 ml Chloroform aufgenommen. .Mach gründlichem V/ascnen mit gesättigtem ITatriumbicarbonat wird die ChloröforiBsohicht über wasserfreiem Magnesiumsulfat getrocknet und aann au einem weißen Pestiatoff eingedampft, wobei 296 mg (79 λ roh) mit einem P - 138 bis 143⁰C erhalten werden. Eine kleine Probe läßt sich aus absolutem Äthanol gut umkristallisieron und zeigt einen P «* 145,5 bis 147⁰C. Bin HMR- Spekbrum in GD<71₇- aeigt ein Singlet bei 3 »70 ppm (3 Pro- ö ufid ein Singlet bei 4,32 ppm (6 Protonen). Ein Infrarot spectrum (ICBr-PreßXihg)" zeigt Absorptionen bei

2220 on."¹ und bei 1720 cm**¹

- 8

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Herstellung von 4-0yanocuban-1-carbonsäure (Y)

Verbindung IV

1) KaOH

2) HGl

HOOO

■OH

2u 290 rag (1,55 jbMo!) ^Cyanocuban-i-OarbonsäuraiDethylester (IV) gelöst in 10 ml heißem absolutem Äthanol, werden 1,0 Kl 2,0On Hatriumhydroxyd gegeben. Die Lösung v/ird 2 Stmifian gerührt und am Rückfluß gehalten und dann über Macht bei Baumtexaperatur belassen. Nach der Entfernung des Athanola im Yakuum werden 10 ral Wasser zugegeben, die'Lösung wird filtriert, gekühlt und mit 1,0 ml 6n HCl angesäuert. Die sich abscheidende Säure wird in Essigoäureäthylester extrahiert, die Extrakte v/erden über Kagneoium«= aulfai; getrocknet, filtriert und im Vakuum eiiigedampft, wobei sieb 217 mg rohe Cyanosäure (81 $>) nit eineia P « 196 bit· 202⁰G ergeben.

bei 16⁽Ό cm

liefert eine Probe lait aiaeraiohender tliv ü±e TerwanCimg beim nächsten Syntliesaachritt tßpekti-'ua se?:igt Absorptionen bei 2220 ob" und ""¹

9 -

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Herstellung rom 4-Ajninopiethyleuban--1-carbon8äure (TTI)

1) Hg/P*»C₂H₅OH,H₂O,HCl

—— > *-. a COOH

2) Dowex-1-Acetat

Verbindung ("V)

H₂HCH₂-

Zu 156 Big (0,90 mMol) 4"-Cy&nocuban-1 «carbonsäure (V)₃ gs-Ib* st in 25 ml Methanol, werden 10 ml destilliertes Wasser, O₉50 ml 6,On HCl und 100 mg Platinoxyd gegeben. Die Mischung wird 70 Minuten lang in einer P&rr-Apparatur mit 2,46 kg/cm (35 Tb a./inch ) hydriert. lach Filtrieren zwv Entfernung des Katalysators wird d&8 Methanol im Vakuum entfernt und die sich ergebende wäßrige lib'sung wird aur Entfernung eine^ leichten Trübheit durch Gelite filtriert«, Bella Eindampfen bleibt das rohe Hyärochlorid snirüelc. Ein UMR-öpektrum des rohe^ Amino säur eayd ro chlor id e in D₂O seigt ein Si:iglst "bsi ^ 3ρ32 ppm (2 Protonen) und ein Quartett (AgBg-MyStOr)₁. ä@s-" sen Mitte bsi 4,11 ppra (6 Protonen) liegt. Sie Umwandlung des Salzes in die freie Aminosäure wird erreicht, eine wäßrige Lösung über 3}crwex~1-Acetat geleitet Die fraie Aminosäure vjird durch Hmkristallisatiois aua einer l/aBser/AcQton-Mischung gereinigt, wobei sieb-Hadein ergeben.

Daa reine Material (VI) zersetzt sich ohne au

bei 2^5 bis 255⁰C _f wenn es in ©in Scluoelspunktbad ait 16O⁰O gebracht v/ird. Bas i^Jaterial äsigt bei der

- 10 -

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tographie, Silicagel G, 3:1:1 ButanolEssigsäure«Wasser, Rf β 0»60, einen klaren gelben FLeek (ETinhydrin) und Infrarötabsorptionen (KBr-Preßling) bei 2130 cm"¹, 1640 cm"*"³, 1625 cm"¹, 1560 cm"¹, 1530 cm"¹," 1500 cm"¹, 1460 cm"*¹, 1400 cm"*¹ (breit), 1310 cm*"¹, 1240 cm""¹, 1200 cm"¹, 1170 cm~¹p 1160 cm"¹ imd 760 cm"¹.

Erfindungsgemäß können die Carboxylesterderivate der Verbindung VI durch direkte Veresterung der Aminosäure iiar-

9·

gestellt werden, beispielsweise bei Verwendung von alkoholischem Chlorwasserstoff oder thionylchlorid, gefolgt von Alkohol. Ebenso werden die Alkanoylaminoderivate der Ver~ bindung VI durch Acylierung der Aminosäuren hergestellt«. Diese Ester und Alkanoylaminoßerivate sollen ebenfalls in den Rahmen der vorliegenden Erfindimg fallen und von der obigen Formel VI umfaßt werden.

Die erfiudungsgemäße Verbindung wird beim erfindungsgemäßen Verfahren entweder oral oder intravenös verabreicht, wobei die orale Verabreichung bevorzugt ist. Die Ester v.nd Amide dieser Verbindungekla3se sind selbst in vitro nicht eahr aktiv, jedoch kann die Einwirkung von Enzymen in vivo die langsame Freisetzung der hoohaktiven Aminosäuren bewirken, so daß die Droge im Körper länger aur Verfügung steht. Dies ist wegen der Neigung dieser Drogen wichtig, rasch im Urin ausgeschieden au werden.

Die e-jrfinäungagemäße Verbindung kann in jedem pharmaseutisc?' veit;?£griclien !Träger in For-a von Pillen, !Tabletten otter Fans©In angewendet werden. Die pbarinaaeuticch verträ.'jlic.cen SaIi:vjt aovrohl der Aiainogruppe_f wie beispielsweise Hycirochloriö₇ Hycrcbromid, Sulfi5t_f Citrat, Ear trat und derlei« clie*n_;. öl.s axidh öor Carbcxy^ruppe, wie Allralimetallsals:, Erd-

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^6AD ORIGINAL

12068 4t,

alkalimetallsalz und dergleichen, sind ohne weiteres verwendbar, insbesondere in injizierbaren Mitteln.

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Claims (3)

26o Februar 1969

1. Die Verbindung mit der Strukturformel

H₂HOH₂

■COOH

2« Verfahren ζητ Herstellimg der Verbindung Bit der Formel

-GOOH

s—\

gekennzeichiistj- ü&5 Jüan die Verbinäuiig mit der

GOOH

- 15 -909 8 38/15 A 9

19QS666

3. Mittel star Behandlung eines pathologischen fibriöo-

lyti3CliQti Zustands bei Säugetieren und beiis Möäaeiieki gelcenhseiöhnet durch einen Gehalt an einer terbiüäünjg 8 sr Formel

H₂UCH₂-

/1 A

ÖOOH

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