DE1768878C

DE1768878C - Tetracyclylmethyl p methvlamino benzoesäure, deren pharmakologisch vertraglichen Salze mit Basen oder Sauren und diese enthaltende thera peutische Mischungen

Info

Publication number: DE1768878C
Application number: DE19681768878
Authority: DE
Inventors: Gianfranco Dr Mailand Intelisano (Italien)
Original assignee: Itaichemi S r 1 Istituto Chimico Far maceutico, Sesto S Giovanni, Mailand (Ita lien)
Priority date: 1967-07-10
Filing date: 1968-07-10
Publication date: 1973-05-17

Description

H₃C CH₃

\ /
H,C OH N

ί ι

OH

CH,

, -}- CO-NH- CH, — N- -

COOH

OH O OHO
OH

Die erfindungsgemäße Verbindung erhält man dadurch, daß man Tetracyclin oder ein Derivat viavon in an sich bekannter Weise mit p-Methylaminobenzoesäure und Formaldehyd reagieren läßt.

Die Umsetzung wird in einem geeigneten organischen Lösungsmittel durchgeführt, beispielsweise einem aliphatischen Alkohol, wie Äthanol oder Methanol.

Der Formaldehyd kann in Form einer wäßrigen Lösung oder einer Lösung in einem organischen Lösungsmittel oder in fester oder in gasförmiger Form verwendet werden. Das erhaltene Produkt der Formel I kann man in üblicher Were durch Fällung mittels eines zweiten Lösungsmittels, durch Lyophilisation oder durch spontane Ausfällung aus der Reaktionslösung isolieren.

Die Salze der Verbindung der Formel I mit Basen oder Säuren werden durch die üblichen klassischen Reaktionen hergestellt.

Zur Herstellung der pharmakologisch verträglichen Salze mit anorganischen oder organischen Basen oder Säuren ^r.ind z. B. Chlorwasserstoffsäure. Laurinsäure oder Laurylschwefelsäure geeignet.

Das nachfolgende Beispiel soll die Erfindung weiter veranschaulichen.

Beispiel

Man löst unter Rühren 1 g Tetracyclin in 40 ml absolutem Äthanol. Zu der so erhaltenen Lösung gibt man unter fortwährendem Rühren eine Lösung, die sich aus 0,364 g p-Methylaminobenzoesäure in 20 ml einer 2: !-Mischung von Methanol und Wasser zusammensetzt.

Unter fortwährendem Rühren werden noch 0,252 ml Formaldehyd in 40%iger wäßriger Lösung zugegeben.

Die erhaltene Lösung wird 2 Stunden bei einer Temperatur von 35° C gehalten und dann in einer Kühleinrichtung auf eine Temperatur von —20° C gebracht.

Nach kurzer Zeit fällt das Produkt in Form eines gelben Pulvers aus. das abfiltriert wird. Die Mutterfaugen werden filtriert, nachdem sie wiederum in der Kühlvorrichtung bei -20 C belassen worden sind. Das nach den zwei Filtrationen erhaltene Produkt wird aus wenig absolutem Äthanol umkristallisiert. Es fällt in Form eines gelben Pulvers an, das in Wasser und Alkohol sehr gut löslich ist und sich in einer Natriumbicarbonatlösung unter Aufbrausen löst. Sein Schmelzpunkt beträgt 180 C. Das Produkt ergibt Salze mit verschiedenen Basen.

Die Verbindung der Formel I besitzt dasselbe antibiotische Wirkungsspektrum wie Tetracyclin. Es wird aber vom Verdauungstrakt besser resorbiert und vom Organismus bedeutend besser vertragen als

Tetracyclinhydrochlorid. Es liefert ferner höhere Blutspiegel als Tetracyclin, ist weniger toxisch und stabiler als Tetracyclin und andere Mannich-Verbindungen des Tetracyclins.

Die sehr interessanten Eigenschaften der Tetracyclinmethyl - ρ - methylaminobenzoesäure werden durch die nachfolgenden Ergebnisse von toxikologischen, pharmakologischen und chemotherapeutischen Versuchen veranschaulicht.

I. Toxikologische Versuche

Die DL₅₀ des auf intravenösem Weg (in Form des Hydrochlorids) verabreichten Produkts beträgt bei der Maus 240 mg/kg (DL₅₀ des Tetracyclinhydrochlorids = 165 mg/kg). Bei der Ratte können auf oralem Weg mehr als 3 g/kg Produkt verabreicht werden, ohne daß Zeichen von Toxizität sichtbar werden. Die tägliche Verabreichung von 100 mg/kg Produkt auf oralem Weg bei der Ratte während 60 aufeinanderfolgenden Tagen ruft weder eine Veränderung toxischen Charakters bei den Hauptorganen noch bei den wichtigsten biologischen Konstanten hervor.

1 766 878J

II. Die Mindesthemmkonzentrationen

Es werden die Mindesthemmkonzentrationen für verschiedene Bakterienstämme bestimmt. Bei aleiehem Gealt an Tetracyclin sind diese für Tetrac\c!lnh\drochlorid. Pyrro Hinomethyltetracyclin. Desmethvlchlortetracyelin und Tetracyclinm'ethyl-p-.nethylaminobenzoesäure nahezu gleich. Es wurden folaende Stämme verwendet: E. coli 100. Salmonella t\phi 199. Salmonella paratyphi B. Staphylococcus aureus. Sarcina lutea. Klebsiella pneumoniae. Pseudomonas aeruginosa. Bacillus subtilis. Bacillus cereus var. mvcoides 9634.

aus den nachstehenden Vergleichsversuchen hervor. Hierzu wurden die mit den verschiedenen Verbindungen erzielbaren Blutspiegel und Gewebespiegel und schließlich die Stabilitäten der ve-schiedenen Verbindungen bestimmt.

In den nachfolgenden Versuchsberichten s^:nd Abkürzungen benutzt, für die folgender Schlüssel gilt:

CH₃

III. Blutspiegel

Bei Ratte und Kaninchen werden nach oraler Verabreichung ebens- wie nach intramuskulärer Verabreichung des Produkts schon von der ersten Stunde an höhere Blutspiegel erreicht als mit den gleichen Dosen Tetracyclin. "

Diese Unterschiede sind noch wesentlicher nach 6 Stunden. Dienach 18 Stunden vorhandenen Mengen an aktivem Antibiotikum sind noch feststellbar, was beim Tetracyclin nicht mehr der Fail ist.

IV. Antireaktive Eigenschaften

Das Produkt besitzt antireaktive Eigenschaften, die man mit Hilfe ν. η verschiedenen Tests feststellen kann, beispielsweise dem araphyk'.tischen Schock-Test (die Verabreichung vor 500 mg, kg Produkt auf oralem Weg verhindert das Auftre :n von anaphyiaktischem Schock bei vorher sensibilisierten Tieren), die Sanarelli-Schwartzmann-Reaktion (die Verabreichung von 500 mg/kg des Produkts auf oralem Weg an Kaninchen vermindert die Schwere der lokalen Verletzung bis zur nahezu vollständigen Hemmung), dem Test der Aufnahme von Hautselbstüberpflanzungen (die Abstoßung der Selbstüberpflanzungen wird in ausgeprägter Weise bei Ratten verzögert, die täglich auf intraperitonealem Weg mit 200 rng/kg Produkt behandelt werden) und" dem Test im Hinblick auf einen durch einen Fremdkörper hervorgerufenes Granulom (das Gewicht des reaktiven Granuloms wird bei Ratten nahezu auf die Hälfte verringert, die auf oralem Weg mit 500 mg/kg Produkt behandelt worden sind).

Bei allen Experimenten wurden Vergleichsversuche mit gleichen Mengen Tetracyclin gemacht, die aile negative Ergebnisse ergaben.

Die überlegenen Eigenschaften der Tetracyclylmethyl-p-methylaminc benzoesäure gegenüber anderen Mannich-Verbindungen des Tetracyclin gehen

R
R

OH O OHJ Ö
OH

H: Tetracyclin

CH₂-NH -(CH₂U-CH-COOH

NH,

Lysinome'hyl-tetracyclin: nachfolgend als
TML bezeichnet

R = CH,-N

N-Pyrrolidinomethyl-tetracyclin, nachfolgend als TPM bezeichnet

^CH3

R = CH,- N

COOH

Tetracyclylmethyl-p-methylaminobenzoesäure, nachfolgend als TMB bezeichnet

I. Pharmakologische Untersuchungen

1. Es wurde der Blutspiegel bei Ratten untersucht nach oraler Verabfolgung des jeweiligen Tetracyclin-Derivats in einer Menge von 250 mg/kg, bezogen auf unverändertes Tetracyclin.

Die Bestimmung erfolgte auf mikrobiologischem Wege nach Verdünnung mit einem Puffer, pH-Wert 5,9. Die Ergebnisse sind ausgedrückt in meg Tetracyclin (unverändert)'ml.

Jeder Wert ist ein gemittelter Wert aus insgesamt zehn Untersuchungen, ausgedrückt als Mittelwert ± Standardfehler (m ± SF).

Substanz

Tetracyclin
(unverändert)

mg/kg

11.5

meg ml nach Verabfolgung

(in Stunden)
3 6

12

TML
TMB
TPM

·) ρ < 0,05.

250
250
250

1,42 ±0,2
1,92 ±0,2
1,54 ±0,2

3,12 ±0,3
3,84 ±0,2*)
2,04 ±0,4

2,06 ±0,2
4,22 ±0,4*)
1,85 ±0,4

0,53 ±0,07
0,79+0,01
0,60 ±0,1

2. Es wurde der Gewebespiegel bei Ratten bestimmt nach oraler Verabfolgung des jeweiligen Tetracyclin-Derivats in einer Menge von 250 mg/kg, bezogen auf unverändertes Tetracyclin.

Die Bestimmung erfolgte auf mikrobiologischem Weg nach Homogenisieren und Verdünnen mit einem Puffer, pH-Wert 5,9.

Die Ergebnisse sind ausgedrückt in meg Tetracyclin (unverändert)/g Frischgewebe.

Jeder Wert ist ein gemitte'.ter
Standardfehler (M ±SF).

aus insgesamt acht Untersuchungen, ausgedrückt als Mittelwert

M I.

ι :

Leber

iJ

I

meg

g

in nach Ve

rabfolgung

7.4 ±0.6

Mus

2.9 ±0.2

kel

1.85 ±0,2

M ,

: Tetracyclin
^: (unveränder'i

3—ft

4.3

lin Stundenl

8.3 ±0.6

■J

ή

3.85*)+0.3

Substanz

P M

. mg kg

4.5 ±0.3 i

±0.3 !

?· —6

7.8 ±0.5

3,78*) ±0.4 I

1.83 ±0.2

i 250 ^!

5.04 ±0.4 i

±0.3

6

8

±0.9 j

1.94 + 0.3

T

^; 250 !

4.21 ±0.6 I

2,98 ±0.3 !

9.

2

+ 1.3 j

T

i 250 !

7.

3

±0.5 i

T

0.05.

II. Stabilitätsversuche

Es wurde die Bildung \on Abbauprodukten iAnhydrotetracvclin + 4-Epianhydrotetracyclin| bei dem jeweiligen Tetracyclin-Derivat nach Ablauf eines Monats unter verschiedenen Aufbewa.irungsbedingungen untersucht.

Die in nachfolgender Tabelle angegebenen Werte drücken die prozentuale Menge an Abbauprodukten aus.

	Sub	aan/	1	Anfang->gehalt	Lntersuchungsbedingungen	20 C 6<i°„
			(Abbauprodukt ; in °ol _!	37 C 1 (Χ)^ο-_Ο	feuchtigkeit (Abbau- produk! ir. %i
	P	M	2.5 !	Feuchtigkeit (Abbau produkt in ⁰O)	10.9
T	M	L	3 j	95	6,6
T	M	B	2.5 ί	15,3	3.7
T		5.2

Aus den physikalischen als auch pharmakoiogischen Untersuchungen ergibt sich einwandfrei, daß die erfindungsgemäße Tetracyclylrnethyl-p-methylaminobenzoesäure (TMB) anderen, durch Mannich-Reaktion hergestellten Tetracyclin-Derivaten zweifelsfrei überlegen ist. Insbesondere zeigen die Vergleichsversuche, daß im Vergleich zu den bekannten Verbindungen das erfindungsgemälJe Tetracyclin-Derivat

a) im Verdauungstrakt besser absorbiert wird,

b) einen höheren Serum- und Gewebespiegel gewährleistet und

c) höhere Stabilität aufweist und weniger toxische Abbauprodukte bildet.

Die therapeutischen Mischungen enthalten Tetracyclylmethyl - ρ - methylaminobenzoesäure und ein pharmakologisch verträgliches Trägermittel.

Die erlindungsgemäßen Mischungen können oral, parenteral oder örtlich verabreicht werden und sind in der Humantherapie als antibiotische Zusammensetzungen in allen Fällen von Infektionen durch tetracyclinempfindliche Keime vt. λ endbar. Die antireaktiven Eigenschaften erlauben d^' Erstreckung ihrer chemotherapeutischen Wirkung auch auf die Reizungsoder Empfindungskomponente, die häufig die verschiedenen Infektionen begleitet.

Für die orale oder parenterale Verabreichung werden die Zusammensetzung gewöhnlich in Form von Dosierungseinheiten geliefert, die 0.10 bis 0,50 g aktiven Bestandteil enthalten, wie Dragees. Kapseln, injizierbare Flüssigkeiten, abgefüllt in Ampullen, und für die örtliche Verabreichung können sie in Form von Salbe geliefert werden, die 5 bis 15 Gewichtsprozent aktiven Bestandteil enthält, wobei der aktive Bestandteil in allen Fällen zusammen mit dem Pharmazeuten bekannten geeigneten Trägern oder Bindemitteln vorliegt.

Nachfolgend werden einige Beispiele für erfindungsgemäße Mischungen gegeben.

A. Kapseln, die jeweils 0,15 bis 0,500 g aktive Substanz in einem geeigneten Bindemittel enthalten.

B. Ampullen, die jeweils 0.1 bis 0,3 g aktive Substanz in einer Flüssigkeit für injizierbare Lösung enthalten.

C. Salbe, die 10% aktive Substanz in einer geeigneten Grundmasse enthält.

Die innerhalb 24 Stunden verabreichbaren Dosen variieren von Fall zu Fall. Die mittlere Dosis ist eine Kapsel alle 4 bis 6 Stunden bei oraler Verabreichung, eine Ampulle alle 6 Stunden oder ein- bis zweimal täglich bei Verabreichung auf parenteralem Weg und umfaßt bei örtlicher Anwendung drei bis vier Anwendungen pro Tag.

Claims

Patentansprüche.

1. Tetracyclylmethyl-p-methylaminobenzoesäure und deren pharmakologisch verträglichen Salze mit Basen oder Säuren.

2. Therapeutische Mischung, gekennzeichnet durch einen Gehalt an einer Verbindung gemäß Anspruch 1 und einem pharmakologisch verträglichen Trägermittel.

Die vorliegende Erfindung betrifft Tetracvclylmethyl-p-methylaminobenzoesäure, deren pharmakologisch verträglichen Salze mit Basen oder Säuren und diese enthaltende therapeutische Mischungen.

Die erfindungsgemäße neue Tetracyclylmethyl-p-methylaminobenzoesäure besitzt die Strukturformel