DE1617409A1 - Praeparat zur Verhuetung,Hemmung und Inhibition der Lyse in lebenden Zellen fuer landwirtschaftliche und zootechnische Zwecke und Verfahren zur Herstellung des Praeparats - Google Patents

Description

• Die Erfindung betrifft ein pflanzlichen Ursprungs, aus der Opuntia fious indioa duroh Extraktions- und Reinigungsvorgaenge gewonnen In dem genannten Praeparat wurde eine hohe Wirkungakraft zur Verhuetung und Hemmung bis zur Inhibition der Lyse in lebende von Viren infizierte Zellen festgestellt, weshalb sioh die Versuche besonders nuetzlioh fuer landwirtschaftliche und zooteohnische Zweoke erwiesen haben.
• Es ist bekannt, dass die Viren sich nur fortpflanzen und infektioes werden, wenn sie von fuer sie anfaellige Zellen aufgenommen werden; daher e@scheint der fortpflanzungsmeohanismus der Virus-Zellen eng vom Bioohemismus der parasitenbefallenen Zellen abzuhaengen.
• Die Schwierigkeiten fuer die Hemmung der Viren-fortpflanzung liegen in der Tasache, das der Fortpflanzungsmechanismus ihrer Nuolexsaeuren und Proteine keine wesentliohen Untersohiode in der Biogenese der Nucleinsaeuren und Proteine der sie aufgenommenen Zellen zeigen.
• Aus diesem Grunde werden auoh die Wirtszellen vom Groessten Teil der Substanzen und Behandlungen die die Wirenwirkung einhemmen, beschaedigt.
• Die Forsohung hach Substanzen, die in der Lage sind, eine Selektivwirkung auf di. Viren und die dafuer anfaelligen Zellen aussuueben, ist desbels im Hinblick auf die un@aehligen Viruns-Infektionen, denen die lebenden Zellen unterworfen sind, nicht nur von aussergewoshnlichem praktische@ Interesee, sondern surch von grossem

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  teresse.
• Das @rgebnis der @@fgrund des Strudiums der bakterischen Viren durchdie Erfin@un gefuehrten Forschung ist ein@Praepara@ welches Gegenstand der vorliogenden Erfindung ist.
• Die vorliegende Erfindung beruht auf d@@ Feststellung, dass man bei Homogenisierung von Cladoden der Opuntia ficus indioa und Dialysierung des Homogenats bei gleioher Menge destillierten Wassers und einen 48 stuendigen Arbeitageng bei einer Temperatur von 4°C. in normalen Dialyscrohren ein loicht gelbliches Dialysat ersielt, das das praeparat bildet, welches organische,

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  noch nicht endgueltige Substansen enthaelt, die jedcoh imstande seina, die Fortpflansung der geprueften Viren stark he@@en, obne im wesentlichen den Biosheni@m@s der infe@tieeson Zellen su stoeren, de ihre Fortpflansung@geschwindigkeit praktisch unveraendert bleibt und in verschiedenen Faellen sogar erhoaht wird.
• Von diesen vorgetrngeren tatsachen ausgehend, die aufgrund sahlreisher Proben erfor@oht und kontrolliert wurden, hat man das Pr@@perat, das Gegenstand der Erfindung ist, erhalten, des@en ho@e wirks@@keit in Besug auf Inh@bition, He@@ung und Verhuetung der Vir@s-Infektio@en bei Tieren festgestellt wurde, wobei das Praeparat dnroh Rrtrektion und Reinigungsvorgaenge der Pflanzenart Opuntia fious indio@ @ewo@nen wird. den beigefusgten Zeiohnungen, die lediglioh als unbegreasbes Beispiel zu betraohten sind, sind zwei Diagra ne dargestellt, von denen sioh das erste auf das

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  und das sweite auf die Wirkuagen des Presparats auf einem besonderema umtersuchten Virentyp besicht, und

  * Fig. 1 tzllt

  die Kurve der Fraktionierung des Eitraktes der Opuntia fious indioa duroh einen Gelfiltrationsprozess@sind die Fig. 2 die Kurve der Truebung O ontsprechend den (h) ausgedrueokten zoit in Bosug auf das Wachotum und des lgse der Esoherichia coli mit Phage T4 infi@iert bei Zugabe von mehroren Fraktionen des Extrakts au versohiedenen Zeiton, und zwarvgenauer gesagt: - die Kurve W ist diejonige der Escherichia coli + Phage@ - di. Kurve Z @@t jen@ der Esoberichis coli + Phage + dialysiertem Extrakt, welcher 30 Minuten nach der Phage-Infoktion sugogebon wurde;

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  Zur Information wird nachstehend @in @ualitatives und quantitatives Verfahrensbeispiel fuer die Cewinnung des erfindungsgemessen virushemmonden Praeparats Cladoden der Opuntia ficus idioa werden in 2@2 C, gros@e Stueoke gesohnitten und bei Warmluft von oa. 60°C. getrocknet.
• Das getrocknete Material wird zu Pulver und dann mit Hilfe eines Loesungamittels, z.b. Methanol, der Extraktion untersogen, wobei die Temperatur fuer @en Arbeitsgang wird ein

  48 Stunden bei 60iC, * lton pt >ber die-

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  ches Gepaet verwendet. Der methanolische Extrakt wird unter verminderten Druck zum Trocknen gebraoht. Ler Trookenrueckstand wird in @as er suspendiert und in Dialyserohren bei 4-C, bei gleioher Wassermenge, die dreimal erneuert wird, dialysiert. Das D@alyseverfahren wird fuer die Dauer von drei Tagen fortgesetzt. Da so erhaltene dialysierts Praeparat dur chlaeuft dann(Harzjonenauotanuscher. @ob@@ z.B. die im Handel unter der Bezeiohung Dower I und Do@ex 50/od@@ andere gleichartige Irrrcs verwendet werden, um die @auren und hasischon Substanzen aus dc. Produkt su entfer@en.
• Die ausfliessende neutrale Fraktion wird unter vermindertem Druck getrocknet, und der Trockenrueckstand wird aui Papier mit Butanol/Wasser/Essigsaeure (4/2/3) chro@atographiert. Sodann wird der Rest des ausfliessenden dritten Hoechstwertes durch Ab lesung am Spektrophotometer (250 ar ) festgestellt, gesammelt und unter vermindertem Druck getrocknet. Der Trockenrueckstand wird sum mindesterg einem Gelfiltrationsvorgang unterzogen, indem er eine 120 cm lange Sephadex-Saeule G 10 passiert. Die Anschlaenmung wird mit bid@stilliertem Wasser bei einer Stundengesohwindigkeit von ca,. 6 ml durchgefuehrt. Von den verschiedenen getrennten Fraktionen zeigt nur die den Hoechstwert entsprechende, nit AV+++ (Fig. 1) bezeichnet, eine nennenswerte virenhe@@ende Wirkung.
• Die Fraktion OT ist aytotoxiach.
• Die fraktion AV+++ wird dann mindestens noch einmal in ein. Saeule des Typs Sephadzs O 10 surueokgefuehrt, bis man den aktiven Roechstwert erhaelt, dessen Ergiebigkeit ca. 1,5 : 1.000.000 des Ausgangsprodukts iBt Das auf Papier chromatographierte Praeparat mit boweglicher norma-1er Butan/Essigsaeure/Wasser-Phase (4/3/2 V/V) gibt einen einsigen Fleck von Rf = oa. 0,47.
• Nachfol@@@ wird ein Beispiel einer Inhibitionsprobe des Bekterienphagos T4 der Eacherichia coli mit Praeparaten entsprechend der vorliegenden Erfindung, die su versohiedenen Zeiten hinsugef@egt wurde@, eschrieben. Die Prob. wurde nach folgender Technik durchgefunehrt: 24 stuendige Zellen von Escheriohia @eli waren in 20 11 Brushe des Typs Tryptone Difco mit 5% @e@l-@ehalt eingestreut; bei einar temperatur von 37°C@ laeset man sie 150 Minuten waosen, webei die Kultur mit einem Luftstrom von 4 Lt@/h belueftet wird. Nach Ablauf dio@er Zeit werden der Kultur 0,2 ml der Phagoa@pension (5,8 x 108 Phago @l) beigefuegt. Der @it einem Seits-filter sterili@ierte Opumtia fious indion-Extrakt sird sowehl vorhar als nashher und w@@hrend der Beigabe der baktorisehen Viren beigefuegt.

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  metrischen Apparaten gemessen rnird,-i#an sechs Stundenhier Viren-

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  PIodukl : der Fraktson AV+++ (turveg zuit fortlaufender Linie) einer bo-

  deutenden Lyse zerfallen, die die Kultur sollstaondlæ klaert.

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  Die aids 4Fg ri Hunktisrte urvder Fig. 2 entspricht einer mit

  'hago T4 infiziertan Escheri¢hia ooli-Kultur mit Zusatz von dialy-

  eiert Eztrakt 30 Minuten nach der Phago-Infektion, wachrend die

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  der soheria!lia coli boigefueeSt wurde.

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  g ne antibicticche YirizuNg su haben scheint, noch sytotozischen Binr

  fluss auf die lebenden Zellen hat.

• Wie beroits gesagt, ist das Praeparat dafuer bestinmt, speziell in der Landwirtschaft und in einigen Faellen in der Zootechnik verwendet su worden.
• Fuer landwirtschaftliche Zwecke wird da Praeparat ia waesseriger oder o@liger Loesung oder auoh in Emulsionsform hergeatellt. In die-

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  Bespritsung angewendet werden Das getrocknete Praeparat in feiner Pulvorform unter Zusatzgeeigneter Fluessigkeiten kann als Aerosol angewendet werden. Selbstverstaendlich kann es auch in Kom bination mit underen, fuer den@elben Zweck nuetzlichen @itteln angewendet wurden, sofern diese mit den vereinbar sind,

Claims (1)

1, Hochwirksames Praeparat Verhustung, Hemmung und Inhibition der Lyse in lebenden virusinfisierten Zellen, dadurch gekennzeichnet; dass das Praeparat aus einem ausreichend geaeuterten Extrakt besteht, der mit Hilfe von Alkohol oder anderer organischer Loesungamittel gewonnen wird, wobei als Ausgangamaterial Cladoden der Opuntia fious indioa verwondet werden, 2, Praeparat nach Anspruch 1, in waesseriger oder oeliger Loe- Fung boiler ,flr'u1aion hrgostelltt zur terotacr 3.spri- eLrucujt IVIR6Ibukrnmr, t.ung unterfnewi sbnaastar arerer aahra3w die mit dem Praeparat :slbt vereinbar eind L+SLLCL(I 3, Praaparat nach Ant3pSh t in Pulverforn Z-ats ton * nigtsi g4 ppp tog riuessik.it&ttendung als Aeresol, 4. Verfahren Herstellung des Praeparats nach Anspruch 1i d durch gekennseichnet, dass Cladoden der Opuntia fious indion gewaschon, in kleine Stuecke geschnitten; bei Warmluft getrocknet, anschliossend zu Pulver @er@einert und dann mindestens einer Extraktion mit einem alkoholischen Loesungamittel untersogen werden, der Extrakt dann bei vermindertem Druok getrocknet uni unter Hinsufusgung von Wasser fuer eine Zeitdauer von drei Tagen wiederholt einen Dialyseprosess unter@@@@@@@ wird, das dialysierte Pra.parat dann Laeuterungsvorgaengen unterzogen wird, um aaure und basisohe Substansen zu entfernen, worauf der Rueckstand bis sur vollstaendigen Trockenheit in einem Raum bei berninderten Druck getrocknet wird; dor auf Papier chromatographierte Trockengehalt wird dann mit elnem Loesungmnittal fluessing gemacht und erneut bei veraindertam D@uck getyocknet und einer ersten @elfiltration untersogen, waehrend welohar die aktive und von den verbleibenden Fraktionen getrennte Fraktion durch biologische Pruefung gekennseichnet wird und f@er diese Fraktien wenigstens noch einmal die Celfiltratien wiedsrhelt wird, sodass der @ueckstand der aktiven Fraktion der Gemnnnten letstem Celfiltration das aktive Preeparat bildet. 5. Verfahren nach Anspruch 4, dadurch gekonnzelchnet, dass die verschiedenen Arbeitsvorgaenge, bei einer Temperatur von nicht uebor 70°@@ durchgefu@hrt w@rd@n.

L e e r s e i t e