DE149936T1 - Mutanten von escherichia-coli, faehig zur ausscheidung von periplasmatischen proteinen in das extrazellulare medium, deren erhaltung und verwendung bei der herstellung von beta-laktamasen oder von hybridproteinen von beta-laktamasen. - Google Patents

Mutanten von escherichia-coli, faehig zur ausscheidung von periplasmatischen proteinen in das extrazellulare medium, deren erhaltung und verwendung bei der herstellung von beta-laktamasen oder von hybridproteinen von beta-laktamasen.

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DE149936T1
DE149936T1 DE1984402602 DE84402602T DE149936T1 DE 149936 T1 DE149936 T1 DE 149936T1 DE 1984402602 DE1984402602 DE 1984402602 DE 84402602 T DE84402602 T DE 84402602T DE 149936 T1 DE149936 T1 DE 149936T1
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beta
lactamase
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sensitive
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Nicole F-69100 Villeurbanne Fognini-Lefebvre
Jean-Claude F-01700 Miribel Lazzaroni
Raymond F-69007 Lyon Portalier
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Institut Merieux SA
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Institut Merieux SA
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    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/78—Hydrolases (3) acting on carbon to nitrogen bonds other than peptide bonds (3.5)
    • C12N9/86—Hydrolases (3) acting on carbon to nitrogen bonds other than peptide bonds (3.5) acting on amide bonds in cyclic amides, e.g. penicillinase (3.5.2)
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Claims (13)

  1. 84 402 602.1 0149963 Institut Merieux
    Patentansprüche
    · Mutanten von Escherichia coli, die im extrazellulären Medium periplasmisehe Proteine auszuscheiden in der Lage sind, dadurch gekennzeichnet, daß sie einem Elternstamm entsprossen sind, der in der Lage ist, eine Beta-Lactamase oder ein Hybridprotein, das eine endständige Aminosequenz trägt, welche dieser Beta-Lactamase analog ist, zu synthetisieren, wobei dieser Elternstamm keine periplasmisehen Proteine. mi tinbegriffen die Beta-Lactamase oder das genannte Hybridprotein ausscheidet oder davon nicht mehr als 5 % bei 30 0Causscheidet und wobei die Mutanten Träger einer Co-transducer-Mutation zu mehr als 50 % mit der GAL-Markierung sind, die wie beim Elternstamm nicht oder wenig empfindlich gegenüber einem oder mehreren Wachstumsinhibitor(en) sind, die ausgewählt sind aus Cholsäure, Chloramphenicol und Ethylendiamintetraessigsäure, und wobei diese empflindlich sind, ebenso wie der Elternstamm, gegen Colicin E ί, und welche, wie der Elternstamm, keine alkalische Phosphatase ausscheiden oder nicht mehr als 20 % davon bei 30 0C ausscheiden und welche mindestens 50 % der Beta-Lactamase (oder von dem genannten Hybridprotein) das bei 370C gebildet wird, ausscheiden.
  2. 2. Mutanten nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß der genannte Elternstamm ein durch ein Plasmid, welches die Genstruktur einer Beta-Lactamase trägt, modifizierter Stamm ist.
    0U9936
  3. 3. -Mutanten nach Anspruch T, dadurch gekennzeichnet, daß sie spontan zurückgebi1dete Klone ergeben, die keine Ausschei der von Beta-Lactamase mit einer Rückbildungshäufigkeit von 10"7 bis 10~8 sind.
  4. 4. Mutanten nach den vorhergehenden Ansprüchen, dadurch gekennzeichnet, daß sie gegen mindestens einem Bacteriophagen, ausgewählt aus folgenden Bacteriophagen: Tula, MeI, K3 und T6, empfindlich sind.
  5. 5. Mutanten nach Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet, daß das Plasmid pBR 322 oder ein anderes Plasmid einer analogen Klonage oder noch ein Faktor R ist.
  6. 6. Mutanten nach den Ansprüchen 2 bis 5, dadurch gekennzeichnet, daß der Elternstamm ein durch das Plasmid pBR 322 modifizierter Stamm ist, und daß sie gegen mindestens eines der beiden Colcine E 1 und A empfindlich sind, daß sie gegen mindestens eine der folgenden Drogen resistent sind: Cholsäure, Ethylendiamintetraessigsäure und Chloramphenicol, und daß sie gegen mindestens eines der folgenden Bacteriophagen empfindlich sind: Tula, MeI, K 3 und T 6.
  7. 7. Mutanten nach den Ansprüchen 2 und 5, dadurch gekennzeich net, daß der Elternstamm der bei der Nationalen Sammlung des Pasteur-Instituts unter Nr. 1-264 niedergelegte Stamm ist.
    0H9936
  8. 8. Ausscheidende Mutante nach Anspruch 7, dadurch gekennzeichnet, daß sie eine Mutante ist, die bei der Nationalen Sammlung des Pasteur-Instituts unter Nr. 1-265 niederge-1egt i st.
  9. 9. Ausscheidende Mutante nach Anspruch 7, dadurch gekennzeichnet, daß sie die Mutante ist, die bei der Nationalen Sammlung des Pasteur-Instituts unter Nr. 1-266 niederge-1egt ist.
  10. 10. Verfahren zur Erzeugung der Mutanten nach der Definition in den vorhergehenden Ansprüchen, dadurch gekennzeichnet, daß man einen El tern stamm auswählt, der keine periplasmisehen Enzyme ausscheidet oder diese zu nicht mehr als 5 % bei 30 C ausscheidet, wobei dieser Elternstamm gegen Cholsäure, Chloramphenicol oder Ethylendiamintetraessigsäure resistent ist, daß man diesen Elternstamm der Einwirkung eines mutagenen Reagenzes aussetzt und diejenigen Mutanten identifiziert, die mindestens 50% Beta-Lactamase oder dessen Proteinhybrid, das bei 370C gebildet wird, ausscheiden und keine alkalische Phosphatase oder diese zu nicht mehr als 20 % bei 3O0C ausscheiden.
  11. 11. Verfahren nach Anspruch 10, dadurch gekennzeichnet,
    daß man die Klone, die Beta-Lactamase ausscheiden, durch Züchten auf einem Milieu, das ein Antibiotikum für cyclisches Betalactam in Gegenwart eines Indikatorstammes, der für das Antibiotikum empfindich ist, enthält, identifizi ert.
    0H9936
  12. 12.· Verfahren nach den Ansprüchen 10 und 11, dadurch gekennzeichnet, daß man die Klone entfernt, die alkalische Phosphatase ausscheiden und eine positive Reaktion auf einen spezifischen Färbtest für dieses Enzym ergeben.
  13. 13. Verwendung der Mutanten nach den Ansprüchen 1 bis 9, zur Herstllung einer Beta-Lactamase oder eines Hybridproteins, das von einer Beta-Lactamase abgeleitet ist, ohne Bakterienlyse, wobei diese Herstellung dadurch gekennzeichnet ist, daß man in einem zweckmäßigen Milieu diese ausscheidenden Mutanten oder diese durch einen Plasmidvektor modifizierten ausscheidenden Mutanten, welche Träger der Fusion zwischen der Genstruktur der Beta-Lactamase und der Genstruktur oder deren ADN-Komplement sind, das in der Lage ist, für ein Protein, das synthetisiert werden soll, einen Code zu bilden, kultiviert und aus dem extrazellulären Milieu die Beta-Lactamase oder dessen Hybridprotein isoliert.
DE1984402602 1983-12-14 1984-12-14 Mutanten von escherichia-coli, faehig zur ausscheidung von periplasmatischen proteinen in das extrazellulare medium, deren erhaltung und verwendung bei der herstellung von beta-laktamasen oder von hybridproteinen von beta-laktamasen. Pending DE149936T1 (de)

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FR8320022A FR2556740B1 (fr) 1983-12-14 1983-12-14 Nouveaux mutants d'escherichia coli, capables d'excreter dans le milieu extracellulaire des proteines periplasmiques, leur obtention et leur application a la preparation de beta-lactamases ou de proteines hybrides de beta-lactamases

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DE149936T1 true DE149936T1 (de) 1986-05-22

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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
SE8505921D0 (sv) * 1985-12-13 1985-12-13 Kabigen Ab A method to export gene products to the growth medium of gram negative bacteria
JPS62166881A (ja) * 1986-01-16 1987-07-23 Michio Matsuhashi 大腸菌のペリプラズム蛋白質分泌変異株
FR2606031A1 (fr) * 1986-11-03 1988-05-06 Merieux Inst Nouvelles souches d'escherichia coli hyperproductrices et/ou hyperexcretrices de proteines exportees, procede d'obtention de ces souches, et application a la production de proteines
JPS6427473A (en) * 1987-07-23 1989-01-30 Mochida Pharm Co Ltd Human pancreas-secreting trypsin inhibitor and production thereof
JPH0684851U (ja) * 1993-05-14 1994-12-06 株式会社ジャレコ 水槽用水温制御装置
RU2481401C2 (ru) * 2011-07-15 2013-05-10 Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Уральская государственная медицинская академия Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации" (ГОУ ВПО УГМА Минздравсоцразвития России) СПОСОБ ВЫЯВЛЕНИЯ β-ЛАКТАМАЗОПРОДУЦИРУЮЩИХ ОКСИДАЗОПОЗИТИВНЫХ ГРАМОТРИЦАТЕЛЬНЫХ ДИПЛОКОККОВ, ПОДОЗРИТЕЛЬНЫХ НА ПРИНАДЛЕЖНОСТЬ К MORAХELLA (BRANCHAMELLA) CATARRHALIS

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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS5869897A (ja) * 1981-10-20 1983-04-26 Gakuzo Tamura Ｄｎａ遺伝子

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CA1243620A (fr) 1988-10-25
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EP0149936A3 (de) 1985-08-21
JPS60199381A (ja) 1985-10-08
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