DE1492214A1 - Verfahren zur Herstellung von Zedalen - Google Patents

Description

Dr. Walter Beil 1 A 9 2 2 1 A

Alfr: " I τ opener Dr.1...., 'Wolff

Dr. i ,r. BeU

' »wane L %. Juni 1965

Frankfurt a. M.-Höchst Adeionstraße 58 - Tel. 31 2649

Unsere Hr. 11 703

THE UPJOHN COMPAHY Kalamazoo (Michigan, VStA)

Verfahren sur Herstellung τοη Zedalan

Die Torliegende Erfindung betrifft ein Verfahren zur Herstellung der neuen Verbindung Zedalan.

Ss ist bekannt, dass das Antibiotikum Streptosotocin erhalten werden kann durch Züchtung Ton Streptomyoes achromogenes Tar. streptozoticus (hinterlegt bei der Fermentation Diviaion, Horthern Utilization Beseareh Branch, U.S. Departement of Agriculture, Peoria, Illinois, unter der Bezeichnung HBBL 2697) in einem Hahrmedium. In der US-Patentschrift 3027300 wird die Herstellung und Aufarbeitung des Antibiotikums Streptosotocin aus derartigen Kulturen beschrieben.

Es wurde nun gefunden, dass der Stann Streptomyoes aohromogenes Tar. »treptoaoticus HBBL 3125 nicht nur Streptozotocin bildet, sondern auch ein Material, das bisher

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unbekannt blieb und in Torliegender Beschreibung al« Zedalan bezeichnet wird.

Die neue, erfindungsgemäse erhältliche Verbindung Zedalan unterscheidet eich το η den bekannten Fermentation*- produkten durch ihr IB- und UY-Spektrue, die beide in den beiliegenden Pig. 1 und 2 wiedergegeben aind| da· Molekulargewicht beträgt 157» die Summen formel ist ΟεΗ,,Α,Ο,.

Sine Kultur des Organismus Streptomyoes achromogenes Tar. streptozoticus HBBL 312$ kann το η der Fermentation DiTiei on, Northern Utilisation Branch, US Department of Agriculture, Peoria, Illinois bezogen werden.

Ein solcher Stamm besitzt die im US-patent 3 027 300 beschriebenen Eigenschaften* er ist jedoch, im Gegenaats sur dortigen Beschreibung, befähigt, unter den nachstehend beschriebenen Fermentationsbedingungen sowohl Zedalan wie auch Streptozotocln zu bilden.

Die bislang Terwendeten, Üblichen und gewöhnliehen Fermentationsbedingungen, denen Streptozotooin unterwerfe» wurde bildeten kein zedalan. Dur oh das erflndungsgemasse Verfahren wird es müglich, Zedalan au bilden, zu isolieren und in reiner kristalliner Form, frei τοη Streptosotooin, zu gewinnen.

Die Torliegende Erfindung stellt somit ein Verfahren sur Herstellung το η Zedalan bereit, das dadurch gekennzeichnet ist, dass man einen Zedalan-bildenden Stamm τοη Streptomyoes in einem wässrigen lahrsMdium bei einem pH-Wert τοη weniger als 6 unter aeroben Bedingungen während etwa 2-7 Tagen sUoh-

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tat und Xadalan au β dem Medium sodann isoliert.

Zadalan und Streptoaotooin können erhalten werden dureh ZUohtung το η Streptomyeeaashromogenea rar. atreptosotioua SiBL 3125 in einem wäaerigen Bahrmedlum unter submaraen aeroben Badingungani Torsugawelaa wird in einem Bahrmedlum gearbeitet} daa al na Qu alle für aaaimilierbaran Kohlenstoff, z.B. Kohlehydrate und Patte, aowle eine StioJt «to ff verbindung oder alwaiaaartlgaa Material enthält. Während eich im Prinzip aahlreiohe Madien eignen, werden aua wirtaohaftlichen Gründen beatiaaita Median berorzugt. AIa beTorsugte Quallen für Kohlehydrate gelten derzeit Oluaoae, Bextrin, Mol aas an, Maiamahl (raffiniert und nicht« raffiniert) «al Stärke (unlöalich und löalich) aowia Mlaokaagan AaTaM. Waltere gaaignata Kohlenatoffquellen aind iraltaaa, ftalaetoae, Mannit, Sojabohnenül, tierische und pflanmllosa lla oder dgl. JA· beToreugtan Sticketoffquallen ■lud protalBhaltige Materialien «la Baumwolleaaeaiehl, SoJa-Bohoaoaahl, Fiaohmehl, ejftfattataa Sojabohnenmehl, Papton •dar dgl. Waltere geeigr fee Materialien aind Erdnueamahl, Braehafa (getrocknete Hafaaer.len ana dar Bierher β teilung) Mala-glmtamekl, Com-.taap-liquor, Pieoh-atick-liquor, HUck-StAMa 4ar Alkeholdeetillation, Tryptioaae, fleiechextrakt, I_S lad a A« B-I lain B, pretaoly eierte Mil oh und Hprodnkta mat dgl. Auen Mischung*.* mehrerer dieser Subatansen kCmaen Tarwaadat wajlam* Daa Iu?.t«rm«diuai kann ferner anorganlaoha Bfthraalsa, beici^«F«i-3 ^«\pa, ^f* Kalium-, Natrium-,

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Kalzium-, Phosphat- und Sulfat ionen und dgl. sur Ye r fugung stellen, enthalten. Wesentliche Spurenelemente wie Magnesium, Mangan, Zink, Kobalt, Eisen und dgl. können ferner in dem zur Züchtung Ton Streptomyces aehromogenes var. streptozoticus HBBL 3125 benutzten Kulturmedium vorhanden sein. Biese Spurenelemente werden im allgemeinen als Verunreinigungen bei der Zugabe der restlichen Bestandteile des Mediums eingeführt.

Gemäss einer bevorzugten Arbeitsweise wird das In- »culum zunächst 70 Std. bei 39 + 0,5⁰C und dann bei 28° C i«kubiert, bis die produktent nähme erfolgen kann.

Um maximales Wachstum und Entwicklung το η Streptomyces achromogenee vsx. atreptosotious NBBL 3125 sieherzu- . stellen, sollte das Nährmedium Tor der Inokulierung mit dem ' Mikroorganismus auf einen pH-Wert «wischen etwa 6,5 und 7,5 eingestellt werden. Während der fermentation muss zur Herstellung Ton Zedalan der pH-wert unter 6 und vorzugsweise unter 5,5 gehalten werden, der pH-Wert kann durch Säurezugabe oder durch die Zugabe von Glucose, vorzugsweise durch langsame Zugabe von Glucose, gesteuert werden.

Zur Herstellung grosser Mengen an Zedalan und Streptozotociη sind submerse aerobe Züchtungebedingungen erforderlich. Bei der Bereitung begrenzter Mengen können Sohüttelkolben und Oberflächenkulturen in flaschen verwendet werde*. Erfolgt die Züchtung in gross en Kesseln oder Tanks, so empfiehlt es sich, die vegetative Torrn des Mikroorganismus bei der Inekulierung

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su T«r wenden, iu tine rereögerte Bildung το η Ζ β dal an und Streptoxotοoin und damit unwirtschaftliche Ausnutzung der Anlage aeu Termeiden. Ee empfiehlt sich demzufolge, sunäohst ein regetatires Inoculum de« Mikroorganismus herzustellen, indem man ein« r el at ire kleine Menge des Kulturmedium« mit der Sporenform, die auf einem Agar- Sohrägnährboden des Mikroorganismus erhalten wurie, inokuliertι sobald ein junges, aktires, yegetatiree Inoculum entstanden ist, wird dieses aseptisch in grosse Kessel oder Tanks überführt. Sas Medium, in welchem das τβ-getatire Inoculum gebildet wird, kann gleich oder verschieden Ton dem für die Herstellung von Zedalan und Streptosotocin rer.«endeten Medium sein.

Optimale Ausbeuten an Zedalan werden erhalt - η, wenn man das Kulturmedium 2-5 Tage lang bei 39 ± 0,5° und an-8ChIiessend 24 Std. lang bei etwa 28⁰C hält.

Die Blldungsge3chwindigkeit τοη Zedalan und Streptozotocin sowie deren Konzentrationen im Kulturmedium können während der Fermentation' yerfolgt «erden, indem man Proben nach dem im US-Patent 3 027 300 beschriebenen Verfahren «na- I

Iysiert.

Zedalan und Strepeto-zotocin können durch Extraktion oder Adsorption aus dem Kulturmedium gewonnen werden* die Adsorption kann an Kohle oder ähnlichen kapillaren Adsorbent!en erfolgen. Für die technische Herstellung wird die Lösungsmittelextraktion bevorzugt, da sie .reniger Zeitaufwand τθγlangt und billiger ist, sowie höhere Ausbeuten gestattet.

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Zedalan kann rom Strepto soto ei n auf Tereohiedene Weise getrennt werden. Beispielsweise kann man das Strepto— zo to ei η und Zedalan enthaltende Material in Ya aer rerruhren und dann filtrieren. Sex unlösliche Btiokstand besteht hauptsächlich aus Zedalan, das in wasser relatlT unlöslich ist, während Str ept ο so tool η relatlT löslich 1st. Auch können Zedalan und Strepto zotocin durch GegenstromTerteilung το ineinander getrennt werden.

Ein bevorzugtes Verfahren zur !Trennung το η Strepto-Botocin und Zedalan besteht darin, dass man das Streptoκο-tooin und Zedalan enthaltende Material an !Tonerde chromatography ert, beispielsweise an einer aus einer Aufschlämmung Ton Tonerde in wasserfreien 1-Propanol bestehenden Säule, Nach dem ELuieren «it einem niedrigen Alkanol, beispielsweise Äthanol, ist eine wirkungsTolle Trennung Ton Streptozotocin und Zedalan erreicht, indem die erste Fraktion das Zedalan enthält.

Das aus der Kolonne eluierte Zedalan kann weiter gereinigt werden unter Bildung des kristallinen Produkts. Beispielsweise kann man Zedalan in einem heissen Gemisch aus einem niedrigen Alkanol wie Methanol und Wasser lösen und die L<sung mit einer gesättigten wässrigen Schwefeldioxydlösung behandeln; darauf wird mit Aktivkohle behandelt und sodann durch !Diatomeenerde filtriert. Nach dem Einengen de« Mltrats erhält man kristallines Zedalan. Dieses wird abfiltriert, mit einem niedrigen Alkanol wie Methanol gewaschen und

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bei Bauart eap er atur getrocknet. BIe Kristalle können gegebenenfalls uafcristallleiert werden, ua die Beinhelt noch weiter au erhöh·»·

Eigenschaften von Zedalant

Zedalan ist eine sauer reagierende Sub·tan», die in ix wesentlichen reiner, kristalliner form die folgenden physikalischen und ohomleohen Eigenschaften aufweist! Titration! pla» 9,90 in 80* Alkohol (sauer)

8,40 in Wasser
Iqairalentgewichts 157

Molekttlargewiohti 157 (nloht direkt bestinat) SuasienforBieli

berechnet für gefunden

SohaelapuAti 200° (ser.)
U.T. AbsorptionsspektruM!

O 38,22| H 4,491 O 30,55.

C 38,21| H 4,27| 0 29,47.

λ^Μβχ-

26,74} 27,30»

	las (β)**"1	224	1303	(M)	111	»4
	(H)	285	1285	(Schw)	95	,98
SJctCT 3440	(S)		1261	(ß)
3405	(M)		1228	(Schw)
3275	(M)		1198	(S)
3230	(M) OeI		1107	(Schw)
3040
2990
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2962 (S) (OeI) 1095 (Schw)

2920 (S) (OeI) 1030 (M)

2Θ5Ο (S) (OeI) 1008 (M)

2750 (M) 972 (M)

2470 (Schw) 965 (Schw)

1689 (S) 928 (M)

1662 (S) 865 (M)

1647 (S) 852 (M)

1628 (M) · 835 (M)

1566 (S) 805 (Schw)

1504 (S) 762 (Sehw)

s| 1455 (M) (OeI) 755 (Sohw)

™ 1414 (S) (OeI) 739 (Schw)

1377 (M) (OeI) 724 (Schw)

701 (Schw)

In den folgenden Beispielen beziehen eich alle Pro ze nt angab β η auf das Gewicht; die Verhältniesahlen bei Löaungamittelgemischen beziehen sich auf das Volumen. Belapiel 1

A. Fermentation το η Zedalan.

Zedalan kann unter Verwendung der im US-Patent 3 027 beschriebenen Fermentationebedingungen bei einer berorzugten Ausgang et emp er atur το η 39⁰C unter Verwendung eines Ze dal anbildenden Stamme» το η Streptomyces erhalten werden. Ferner kann Zedalan durch Fermentation wie folgt hergestellt werden:

Ein Schrägnährboden alt Streptomyees aohromogenee Tar. streptofsoticus MRL 3125, hergestellt wie in Beispiel 2 des US-Patents 3 027 300 beschrieben, wurde zur Inokulierung το η mehreren 1- 1 Erlenmeyer-Kolben Terwendet, Ton denen jeder ml des folgenden Mediums enthielt:

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Gluoo SB-mo nohydrat 25 g Pharmamedia¹ 25 g Leitungswasser sum Auffüllen auf 1 Liter

Pharmamedia ist technisches Baumwollsameimehl, hergestellt Ton Traders Oil Mill Company, fort Worth, Texas.

Der pH-Wert bei der Yorsterilieierung betrug 7»2. Die Yorsttehtung wurde während 2 Tagen bei 28⁰C in einem Schüttelkolben (90 Bewegungen pro Minute) Torgenommen.

4 Kolben mit der obigen Yorsüohtung (1 Liter) wurden sur Inokulierung το η 680 1 folgenden sterilen Mediums, das si oh Ib einem Tank το η 756 Litern Inhalt befand, Ter wendet ι GUucoee-monohydrat 10 g/Liter

Wilson*β peptone liquor Ho. 159¹ 10 g/Liter Corn steep liquor 10 g/Liter Pharmamedia 2 g/Liter Specköl 2 ml ./Liter Leitungswasser zum Auffüllen auf 6fc>0 Liter WiIsOn¹S Peptone Liquor No 159 besteht aus hydrolysiert en ä Proteinen tierischen Ursprungs.

Der pH-Wert bei der Yorsterilieierung betrug 7»2. Es wurde sodann 18 Stunden lang bei 28⁰C unter einer Belüftung Ton 10 Litern pro Minute und einer fiUhr ge sch windigkeit Ton 185 U.d.M. gearbeitet.

Mit dem obigen Gemisch wurden sodann 14*550 Liter des folgenden sterilen Mediums, das sich in einem Ferment ationsgefäss Ton 18*900 Litern befand, lnokmlierti

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Maismehl 40 g/Liter Wilson*· peptone liquor So. 159 12 g/Liter Suffolk-Erdnussmehl ^X 10 g/Liter Maisstärke 18 g/Liter Ammoniumsulfat · 3 g/Liter Speoköl 75,6 Liter

Oil Mill, Im., P.O.Box 726, Suffolk, Yirgiaia Ue fermentation wurde 111 Std. lang durongeführt, _ suxttohvt 48 Std. lang bei 36 - 39°C und dann bei 28°0. Filtrierte Luft wurde in einer Menge το η 100 Sormal-Ll tern/Mi η. sugeführt, die Bührgesohwindigkeit betrug 124 U.p.M. B. Aufarbeitung

IHe gesamte Garbrühe aus der unter A beschriebenen Fermentation wurde durch Zugabe von 60^1ger Schwefelsäure auf einen pH-Wert τοη 4 eingestellt. Bann wurde filtriert unter Zugabe τοη 33* Diatomeenerde als Filterhilfsmittel. Der Filterkuchen wurde mit Wasser gewaschen. Dann wurden 1300 kg AktiTkohle im Piltrat aufgeschlämmt. Die Aufachläm- - mung wurde 15 Min. lang gerührt, dann wurde die Kohle mit el·

nem Drehfilter abfiltriert und während der Filtration mit Wasser gewaschen. Die Kohle wurde danach In 13 420 Liter 98-lOOJtiges Aoeton eingegeben, und das Gemisch wurde 30 Min. lang kräftig gerührt. Dann wurde abfiltriert, und dam FiI-trat wurde bei Termindertesi Druck auf 100 1 eingeengt, w©~ •ei man einen Feststoffgehalt τοη 640 mg pro ml erreichte.

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Dem Ko na ent rat wurden 900 1 1-Propanol unter Rühren zugegeben. Der sich bildende Niederschlag wurde ab filtriert und verworfen. Die propaaollSaung wurde durch azeotrope-Destillation getrocknet Das Bndvolumen betrug 416 1 bei einem Wassergehalt von 0,8jt. Während der Destillation bildete eich ein Niederschlag, der abfiltriert und verworfen wurde. Sann wurden 100 1 der propanollöeung an 250 Kg. Aluminiumoxyd (mit Säure gewaschen) und mit wasserfreiem 1-Propanol in einer Säule angeschlämmt) adsorbiert. Sie Höhe der Säule betrug 3,3 m. Nach Beschickung mit der propanole eung wurde die Säule mit 200 1 1-Propanol gewaschen und dann mit 800 1 absolutem Äthanol bei einer Durohflussgeschwindlgkeit von 1 l/Min, eluiert. folgende Fraktionen wurden aufgefangen:

Traktion No.	Feststoff (mg/ml)
1-15	0,53-16,00
16	22,99
17	21,15
18	18,40
19	21,94
20	30,23
21	31,07
22	28,18
23	22,37
24	20,48
25	15,47
26	8,93
27	5,68
28	3,75
29	3,15

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	Feststoff	H922U
Fraktion No.	2,46	(«λ/blL)
30	2,13
31	1,91
32	1,09
33	1,25
34	1,19
35	1
ι	0,61
43

Die Fraktionen 21-30 wurden vereinigt, bei vennindertem Druck auf ein Volumen von 60 1 eingeengt und zur Kristallisation gebracht. Man erhielt 253 g kriet aiii nee Material, das zu 85 - 90^ aus Zedalan bestand. Dieses Zedalan wurde mit produkt aua anderen Verfahrenegängen vereinigt \ind wie folgt gereinigt:

C. Reinigung

380 g rohes Zedalan, wie unter Teil B beschrieben er· halten, wurien in einem heissen Gemisch aus 12 1 Methanol und 4,8 1 Wasser gelöst. Dieser Lösung wurden 10 ml gesättigte wässrige Schwefeldioxydlösung und danach 38 g Aktivkohle sugesetzt. Dann wurde 5 Min. lang gerührt und durch Diatomeenerde filtriert. Das Filtrat wurde bei vermindertem Druck auf 6 1 eingeengt» hierbei betrug die Temperatur der Dämpfe 32⁰C. Zedalaakrlstalle, die sich so gebildet hatten, wurden ab filtriert, mit 20^igem Methanol gewaschen und bei Raumtemperatur und vermindertem Druck getrocknet. Die Ausbeute betrug 312 g. Weitere 20 g kristallines Zedalan wurden durch Einengen der Mutterlaugen erhalten.

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ffeispiel 2

Sie Inhibierung des Wachstums proliferierender neoplastiöcher Zellen konnte nach dem Verfahren von Smith et al, Cancer .Besearoh, Bd. 19» No. 8, S. 843-846 (1959) nachgewiesen werden.

Verschiedene Portionen von Zedalan wurden mit sterilem wasser verdünnt und den Kulturmedien in verschiedener Verdünnung zugegeben, so dass Zedalankonzentrationen von 200, 100, 50,25 und 12,5 Mikrogramm pro ml erhalten wurden. Die Inhibierung des Zellwachetums wurde nachdem von Snith et al beschriebenen Ve» fahre η berechnet.

folgende Ergebnisse wurden erhalt em

Konzentration von Zedalan fltuale Inhibierung (in unmittelbarer Umgebung der Zellen)

200 68

100 56

50 44

25 32

12,5 7

Zedalanlösungen können zum Waschen von Tumorgewebe verwendet «erden, das zur Transplantation verwendet werden soll, um das Wachstum äusserlicher oder losgelöster Zellen zu inhibieren, die andernfalls umgebende Gewebe beimpfen oder in andere meile des Körpers transportiert werden können, ferner kann nach ohlrugiacher Entfernung von Tumoren aus Versuchstieren Zedalan in den die Operationsstelle umgebenden

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flüssigkeiten gelöst worden, um erneut·· Wachstum« restlicher Tumorzellen zu inhibieren.

KLe ID₅₀ Ton Zedalan liegt bei etwa 73 Mikrogramm/ml. Sa wurde festgestellt, daee Zedalan und Streptozotooin enthaltende Gemische eich zur Behandlung rerschiedener kradkhafter Zustände auf Grund το η bösartigen Neoplaaaen eignen, wie z.B. zur Behandlung Tersehi edener Arten το η Leukämie, Hodgkins* acher Kraxkheit, Lymphomas, bei Carcinomen, Saroomen und anderen Tumor ar ten.

Zedalan und Streptozotooln- enthalt ende aesilsche können ferner an zu TestTersuchen Terwendete Batten und Mau·· Terabreicht werden, um das Wachstum bösartiger Heoplasmen und/oder yerlängerung der Oberlebenszelt der Tiere zu bewirken· Garnisehe aus Zedalan und Streptozotocin zeigten sich wirksam bei Tieren mit Sarcoma 180, Sarliche Carolnom und Leukämie. Derartige Zusammensetzungen, die Streptosotoeln und Zedalan aufweisen, werden zusammen mit einem pharmazeutisch en Träger τβΓarbeit et. Streptosotooin und Zedalan sind in den Fertigpräparaten in Mengen Ton 1 Gew.-Tl. Streptosotooin zu 0,03 - 19 Gew.-Tl. zedalan Torhanden.

Is kann systemieche Behandlung oder orale und parent erale Verabreichung erfolgen. Zur topischen Behandlung werden geeignete G*Bische auf begrenzte Flächen 9.3s Körper· angewandt, ferner kann lokale behandlung erfolgen durch Injektion in Gelerifc·*, Körperhöhlungen und durch Per fusion.

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Die Zusammensetzungen werden eur oralen Verabreichung an Menschen und Säugetiere in fester und flüssiger Doeierung βίο rm hergestellt, beispielsweise in Form τοη Tabletten, Kapseln, Pillen, Pulrern, Granulaten, Sirup«, Suspensionen, Elixiere und dgl. Zur oralen Verabreichung geeignete Pulver werden durch einfaches Zerkleinern von Streptosotooin und Zedalan auf eine geeignete »peilchengröase und Mischen mit einem ebenfalls zerkleinerten yerdünner erhalten. Als Verdünnungsmittel eignen sich geniesebare Kohlehydrate wie Stärke. Kapseln werden hergestellt, indem man ein Pulvergemisch der vorstehend besonriebenen Art in vorgeformte GelatinehUlsen einfüllt. Die Kapseln können auch 8treptozotocin und Zedalan allein ohne Verdünnungsmittel enthalten. Zweckmässigerweise wird ein Hilfsmittel für die Fülloperation wie Talk, wagneaiumstearat und dgl. dem Pulvergemisch zugegeben. Tabletten erhält man durch Herstellung •Ines Pulvergemische, Granulieren, Zugabe eines Gleitmittels und Yerpressen. Das Pulvergemisch wird erhalten, indem man StreptoBoticin und Zedalan mit einem Verdünnungsmittel oder einer Basis wie Stärke, Lactose, Kaolin, Terra Alba, Di ο al c ium- i phosphat oder dgl. mischt. Das Pulvergemisch kann granuliert werden, indem man es mit einem Bindemittel wie Haissirup, Stärkepaste, Gelatinelösung, M β thy Io el IuI oselö sung oder Ac azie nachleim benetzt und durch ein Sieb presst. Statt des Granulierena kann man auch das Pulvergemisch durch eine Schneckenpresse geben, und das dabei resultierende -produkt in Granulate aufbrechen. Die Granulate können mit 8tärke oder Lactose verdünnt und

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mit einem Gleitmittel versehen werden, um Ankleben an den Tablettiermaechen zu vermeiden; zu diesem Zweck eignet sich Stearinsäuro, ein Stearat, Talk oder Mineralöl. Das so vorbehandvilte Gemisch wird dann zu Tabletten verpresst. Die Tabejltten kann man mit einem Schutsüberzug aus einem Yersiegelungsmittel wie Schellack versehen, oder man kann einen Überzug aus Zucker und Methyleellulojae oder einen Glanzüberzug aus Cornauba Wax auftragen. Oral verabreichbare Flüssigkeiten werden in einheitlicher Dosierungsform in Form von Sirupe und Elixieren hergestellt. Ein Sirup wird gewonnen, indem man das Streptossotocin und Zedalan in einer geeignet aromatisierten wässrigen Sucrose-Lösung dispergiart. In gleicher Weise wird ein Elixier unter Ve: wendung eines wässrig-alkoholischen Trägers erhalten. Die Elixiere eignen sich insbesondere in solchen Fällen, in denen ein weiteres, in wasser nicht hinreichend lösliches Therapeuticum der Zusammensetzung einverleibt werden soll. Auch für parenteral« Verabreichung lassen sich flüssige Dosierungeformen herstellen. Bei der Herstellung solcher Mittel wird eine bestimmte Menge Streptosotooin und Zedalan in eine Ampulle gegeben, diese sterilisiert und verschlossen. Gleichseitig wird eine Ampulle mit sterilem Wasser, das als Träger dient und mit dem vor der Verabreichung eine Lösung oder Suspension gebildet wird, ml t geliefert. Zweckmassigerweise enthält das sterile Wasser ein Lokal-AnKethetioum und Pufferungsmittel in gelöster Form. Eine ρ ar β nt er al β Dosierungsform auf Oelbasis kann hergestellt werden durch Dispergit

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von Streptozotocin und Zedalan in einem parenteral verträglicher OeI, und zwar mit oder ohne zusätzlicher Hilfsmittel. Zur örtlichen Behandlung der Haut und der Schleimhäute können aufstäubbare Pulver, Aerosole, Tropfen (für Auge und Ohr), Salben, Cremes, Lotionen, SuppOeitorien und dgl. hergestellt werden. Aufstäubepulver erhält man in gleicher weise wie oral zu verabreichen!β Pulver unter Verwendung von Talk oder einem anderen mineralischen Verdünnungamittel anstelle der geniessbaren Verdünnungsmittel, salben werden erhalten durch Diapergieren von Streptozotocin und Zedalan in einer geeigneten Base wie Petrolatum, ™

Lanolin, Polyäthylenglykolen oder Gemischen davon. Zweckmässigerweiae werden Streptozotooin und Zedalan in einer Colloidmiihle unter Verwendung von leichtem flüssigem Petrolatum als Schlämmittel feinverteilt, ehe in der Salbengrundlage dispergiert wird. Cremes und Lotionen erhält man durch Dispergieren der Verbindungen in der Oelphase vor der Emulgierung dea OeIs in Wasser. Suppositories werden erhalten durch Dispergieren von Streptozotocin und Zedalan in einem Träger, welcher einen etwa bei Körpertemperatur liegenden Schmelzpunkt besitzt, oder in (

einem mit Gewebeflilssigkeiten leicht mi achbaren Träger. Beispielsweise kann man als Träger Kakaobutter oder verschiedene Polyäthylenglykol· verwenden.

Zur behandlung _von Geflügel und Haustieren unter oraler Ve-abrelohung werden Streptozotocin und Zedalan zweckmäseigerweise zu einem Vorfuttergemisch verarbeitet. Das Vorgemisch kann daneben essbare pharmazeutische Verdünnungsmittel der feereit* genannten Art wie Stärk·, Weizenmehl, Mehl, Calciumoarbonat, TaIk₉ Fischmehl oder dgl. enthalten. Es wird Im all-

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gemeinen dem regulären Futter zugesetzt.

Die zu verabreichende Menge an Streptozotocin und Zedalan hängt ab von Art, Alter und Gewicht des zu behandelnden Subjekts wie auch von der speziell zu behandelnden Krankheit sowie der Art der Verabreichung. Im allgemeinen liegt die parent er ale Dosis, angegeben als Gesamtmenge von Z ed al an und Streptozotocin bei etwa 0,1 - 10 mg/kg Körpergewicht. Die orale Dosis liegt bei etwa 1 - 10-fachen «rert der parenteralen Dosis, d.h. bei 0,1 bis 100 mg/kg Körpergewicht; sie wird 1-4 mal täglich gegeben.

Zur topischen und lokalen Anwendung können Zusammensetzungen mit etwa 0,05 - 25^ (Gewicht-Volumen) Streptozotocin und von etwa 0,05 - 25# (Gewicht-Volumen) Ze dal an verwendet werden.

In folgender Tabelle werden parebteral applizierbare Mengen angegeben!

Parenteral Spezies ^treptozotooln (ag) Zedalan (mg)

Mensch 45 - 510 510 - 45

Hund 15 - 170 170 - 15

Kata· 3-35 35-3

Ratte 0,6 - 6,8 6,8 - 0,6

Maus 0,15 - 1,7 1,7 - 0,15

Neben Streptozotocin und Zedalan al· Hauptbestandteilen können verschieden· ergänzende, aktive Zusätze gemacht werden. Bi* Menge dieser sekundären aktiven Beetanteile iet im all-

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gemeinen gleich der Menge, in der diese sekundären Stoffe unabhängig von den erstgenannten zu verabreichen sind. Ale sekundäre Bestandteile eignen sich beispielsweise anti-neoplaetische Mittel wie Busulf an, Chlor ambucil, Cyclophosphamid, Mechloräthamiahydrochlorid, Mercaptopurln, Natriuaaminopterin, Thio-tepa, Triäthy Ie melamin, Uracil-senfßl, Fluoraoil und Cytosin-arabinosidi Cartl co steroide wie Hydroeortison, Prednisolon, 6a-Hethylprednleolon und Trlamoinoloni Oestrogen· wie Diathylstilböstrol, Progesteron und Oestradiol; und Androgene wie KLuoxymesteron, Methyltestosteron und Testosteron. Auch können die sekundären Therapeutika alt Streptozotocin allein oder mit Zedalan alleine vereinigt werden.

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Claims (1)

1. U922U

   PATEHTAHSPBUCH t

   Verfahren zur Herstellung το η Zedalan, dadurch gekennzeichnet, dass man Streptoeyoee achromogenee rar. etreptozoticu· HBBL 3125 in einem fläsarigen Nähraedium bei einem pH-Wert von unter 6 unter aeroben Bedingungen etwa 2-7 Tage suchtet und das gebildete Zedalan aus dem Hahraediua gewinnt·

   iür THE UPJOHN COMPAHX

   Kalaaasoo (Michigan, TStA)

   Rech

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   -U-

   Leerseife