DE10201749A1

DE10201749A1 - Fluidfördervorrichtung und Verfahren zum Zu-und Abführen von Fluiden

Info

Publication number: DE10201749A1
Application number: DE2002101749
Authority: DE
Inventors: Nico Michaelsen; Olaf Sollboehmer
Original assignee: Evotec OAI AG
Current assignee: Evotec OAI AG
Priority date: 2002-01-18
Filing date: 2002-01-18
Publication date: 2003-08-07
Also published as: EP1465731A2; AU2003235723A8; WO2003059515A2; WO2003059515A3; AU2003235723A1

Abstract

Eine Fluidfördervorrichtung zum Zu- und/oder Abführen von Fluiden in bzw. aus Vertiefungen (34) einer Mikrostruktur weist ein Fluidtransportmittel (28), wie eine Kapillare, auf. Mit dem Fluidtransportmittel (28) ist eine Fördereinrichtung, wie beispielsweise eine Pumpe, zum Zu- und/oder Abführen des Fluids zu bzw. aus den Vertiefungen (34) verbunden. Erfindungsgemäß weist die Fluidfördervorrichtung (10) eine Haltevorrichtung (12) auf, mit der das Fluidtransportmittel (28) gelenkig verbunden ist. Es ist somit möglich, die Fluidfördervorrichtung horizontal gegenüber der Mikrostruktur zu bewegen, wobei das Fluidtransportmittel (28) automatisch von einer in die nächste Vertiefung (34) gleitet.

Description

Die Erfindung betrifft eine Fluidfördervorrichtung zum Zu- und Abführen von Fluiden in bzw. aus Vertiefungen einer Mikrostruktur. Ferner betrifft die Erfindung ein Verfahren zum Zu- und Abführen von Fluiden in bzw. aus Vertiefungen einer Mikrostruktur.

Bei den Mikrostrukturen handelt es sich beispielsweise um Titerplatten mit einer Vielzahl von Vertiefungen (Wells), die zur Aufnahme von Kleinstmengen an Fluiden, wie Flüssigkeiten oder Partikel enthaltende Flüssigkeiten, dienen. Übliche Titerplatten weisen beispielsweise 1.536 oder 2.080 Wells auf.

Das Fassungsvermögen der einzelnen Wells liegt üblicherweise im µl-Bereich und ist insbesondere kleiner als 10 µl.

Nach dem Befüllen einer derartigen Mikrostruktur kann es je nach Art des Befüllungsverfahrens vorkommen, dass die einzelnen Wells unterschiedlich befüllt sind. Um vergleichbare Untersuchungsergebnisse zu erhalten, muss jedoch sichergestellt sein, dass sämtliche Wells mit derselben Fluidmenge befüllt sind. Eine geeignete Vorrichtung zur Volumenangleichung der einzelnen Wells ist insbesondere für Titerplatten mit einer sehr großen Anzahl von Wells nicht bekannt.

Zur vollständigen Entnahme bzw. zum Austausch von Flüssigkeit sind lediglich sogenannte Washer bekannt. Derartige Washer weisen beispielsweise mehrere in einer Reihe angeordnete Pipetten auf, die in einer Halterung gehalten und mit einer Vakuumpumpe verbunden sind. Zur Volumennivellierung sind Washer nicht geeignet. Um das Niveau der Wells auszugleichen, müsste der Washer mit einer exakten Handling-Einrichtung gehandhabt werden, so dass sämtliche Pipettenspitzen auf derselben Höhe angeordnet sind und die Pipettenspitzen exakt in die einzelnen Wells eingetaucht werden. Da der Durchmesser der Wells sehr klein ist, ist eine derartige Handhabung von Washern in der Praxis nicht möglich. Um das Niveau der Fluide in sämtlichen Wells einer Titerplatte auszugleichen, müsste der Washer ferner häufig angehoben, verschoben und wieder exakt abgesenkt werden. Dies würde eine sehr exakte Steuerung erfordern und wäre ferner äußerst zeitaufwendig. Aufgrund ihrer Abmessungen sind Washer ferner für Titerplatten mit einer großen Anzahl an Wells ungeeignet.

Ferner besteht beim Befüllen von Mikrostrukturen mit kleinen Öffnungen, wie beispielsweise bei Titerplatten mit einer Vielzahl kleiner Wells, das Problem, dass Dispenserspitzen oder Pipetten sehr genau gehandhabt werden müssen, um stets exakt in die einzelnen Wells eingeführt zu werden. Aufgrund der sehr feinen Dispensier- bzw. Pipettenspitzen können diese durch ein Aufsetzen auf einen Titerplattenrand leicht beschädigt werden und müssen daher häufig ausgewechselt werden. Das Befüllen von Mikrostrukturen wie Titerplatten mit einer Vielzahl von kleinen Öffnungen, in die einzeln Fluid abgegeben werden muss, ist daher teuer und zeitaufwendig.

Aufgabe der Erfindung ist es, eine Fluidfördervorrichtung sowie ein Verfahren zum Zu- und Abführen von Fluiden in bzw. aus Vertiefungen einer Mikrostruktur zu schaffen, mit der bzw. mit dem Fluide auf einfache Weise zu- bzw. abgeführt werden können.

Die Lösung der Aufgabe erfolgt erfindungsgemäß durch die Merkmale des Anspruchs 1 bzw. 10.

Die erfindungsgemäße Fluidfördervorrichtung weist mindestens ein Fluidtransportmittel, wie eine Kapillare oder ein Röhrchen auf. Das Fluidtransportmittel ist mit einer Fördereinrichtung zum Zu- und/oder Abführen des Fluids in die bzw. aus den Vertiefungen verbunden. Bei der Fördereinrichtung handelt es sich beispielsweise um eine Pumpe, durch die ein Fluid gefördert wird, oder eine Vakuumpumpe zum Abführen von Fluid aus den Vertiefungen. Ebenso kann es sich bei der Fördereinrichtung um ein Fluidreservoir handeln, das über ein oder mehrere Ventile mit dem Fluidtransportmittel verbunden ist, wobei ein Zuführen des Fluids zu den Vertiefungen durch Öffnen und Schließen des Ventils bzw. der Ventile sowie durch die Schwerkraft der Flüssigkeit erfolgt.

Erfindungsgemäß weist die Fluidfördervorrichtung eine Haltevorrichtung auf, mit der das mindestens eine Fluidtransportmittel gelenkig verbunden ist. Aufgrund des gelenkigen Befestigens des Fluidtransportmittels ist es möglich, beispielsweise mit der Fluidfördervorrichtung die Titerplatte zu überfahren, wobei die Spitze des Fluidtransportmittels auf der Oberfläche der Titerplatte gleitet. Hierbei fällt die Spitze des Fluidtransportmittels automatisch in die einzelnen Wells. Dieses Eintauchen in ein Well kann beispielsweise aufgrund der in dem Gelenk stattfindenden Bewegung oder optisch detektiert werden. Es ist somit mit Hilfe der erfindungsgemäßen Fluidfördervorrichtung möglich, durch einfaches Überfahren der Titerplatte eine Pipette oder ein anderes Fluidtransportmittel exakt in ein Well einzutauchen. Eine aufwendige und äußerst präzise handhabbare Handlingvorrichtung zum Eintauchen von Pipetten oder dergleichen in eine Öffnung in einer Mikrostruktur ist daher nicht mehr erforderlich.

Das Fluidtransportmittel ist beispielsweise derart gelenkig mit der Haltevorrichtung verbunden, dass die Verbindung über einen flexiblen Schlauch oder ein anderes elastisches Element erfolgt. Vorzugsweise ist zwischen der Haltevorrichtung und dem bzw. den Fluidtransportmittel(n) ein Gelenk ausgebildet, so dass das bzw. die Fluidtransportmittel um eine horizontale Achse schwenkbar sind. Es handelt sich bei dem Gelenk vorzugsweise um ein eine definierte Schwenkbewegung realisierendes Gelenk, dass beispielsweise eine Welle aufweist, um die die Schwenkbewegung erfolgt. Das Schwenken der Fluidtransportmittel erfolgt vorzugsweise frei, so dass die Fluidtransportmittel oder eine gemeinsame Halterung für mehrere Fluidtransportmittel aufgrund ihres Eigengewichts nach unten schwenken und beim Verfahren der Fluidfördervorrichtung über die Mikrostruktur oder umgekehrt durch beispielsweise zwischen den Wells vorgesehene Wandungen nach oben gedrückt werden. Ebenso ist es möglich, ein Federelement oder dergleichen vorzusehen, so dass die Spitzen der Fluidtransportmittel stets mit einer vorgegebenen Kraft auf die Mikrostruktur gedrückt werden. Hierdurch ist ein Hüpfen oder dergleichen der Fluidtransportmittel vermieden.

Vorzugsweise weist die Haltevorrichtung einen Anschlag auf, durch den die Lage der Fluidtransportmittel definiert ist. Der Anschlag ist hierbei vorzugsweise derart ausgebildet, dass die Fluidtransportmittel, sofern sie frei schweben, d. h. nicht an z. B. einem Well-Rand aufliegen, zur Vertikalen einen Winkel von > 10°, vorzugsweise > 20° und besonders bevorzugt > 30° aufweisen. Auch frei schwebende Fluidtransportmittel der Fluidfördervorrichtung sind somit stets schräg ausgerichtet. Aus dieser schrägen Lage können die Fluidtransportmittel frei nach oben bewegt werden, wobei sich der Winkel zur Vertikalen vergrößert. Durch die definierte Schräglage der Fluidtransportmittel ist beispielsweise beim Überfahren der Mikrostruktur ein Verkanten und dadurch hervorgerufenes Beschädigen der Fluidtransportmittel vermieden.

Der Anschlag ist vorzugsweise innerhalb des Gelenks ausgebildet, so dass auf einfache Weise der Schwenkwinkel des Gelenks begrenzt ist. Vorzugsweise ist der Anschlag derart einstellbar, dass unterschiedliche Winkel zur Vertikalen einstellbar sind.

Zur Volumennivelierung von beispielsweise in mehreren Wells einer Titerplatte vorhandenem Fluid kann die erfindungsgemäße Fluidfördervorrichtung mit einer Vakuumpumpe versehen sein, so dass durch die Fluidtransportmittel Fluid abgesaugt werden kann. Durch Einstellen des Winkels der Fluidtransportmittel sowie des vertikalen Abstandes zwischen der Titerplatte und der Fluidfördervorrichtung kann die Eintauchtiefe der Fluidtransportmittel in die einzelnen Wells definiert werden. Sobald dies festgelegt ist, kann die erfindungsgemäße Fluidfördervorrichtung relativ zu der Titerplatte bewegt werden, wobei die Fluidtransportmittel nacheinander in die einzelnen Wells eintauchen, indem sie durch die zwischen den Wells vorgesehenen Wandungen nach oben gedrückt werden und anschließend wieder in das nächste Well eintauchen. Bei ununterbrochen anliegendem Unterdruck und einer nicht zu schnellen Relativbewegung zwischen der Fluidfördervorrichtung und der Titerplatte können auf diese Weise die Mengen der in den Wells vorhandenen Fluide einfach nivelliert werden.

Ferner betrifft die Erfindung ein Fluidfördersystem, das die vorstehend beschriebene erfindungsgemäße Fluidfördervorrichtung und einen die Mikrostruktur tragenden Tisch aufweist. Vorzugsweise ist der Tisch und/oder die Fluidfördervorrichtung relativ zueinander bewegbar. Zum Zu- oder Abführen von Fluiden zu der Mikrostruktur ist insbesondere eine Bewegung in horizontaler Richtung möglich. Zur Definition der Eintauchtiefe der Fluidtransportmittel in Vertiefungen der Mikrostruktur ist ferner ein vertikales Verschieben der Fluidfördervorrichtung und/oder des Tisches möglich. Die in dem Fluidfördersystem eingesetzte Fluidfördervorrichtung ist vorzugsweise wie vorstehend beschrieben vorteilhaft weitergebildet.

Ferner betrifft die Erfindung ein Verfahren zum Zu- und Abführen von Fluiden in bzw. aus Vertiefungen einer Mikrostruktur. Gemäß dem erfindungsgemäßen Verfahren wird eine Fluidfördervorrichtung, die ein oder mehrere Fluidtransportmittel aufweist, bezüglich der Vertiefungen der Mikrostruktur ausgerichtet. Anschließend erfolgt ein Eintauchen des bzw. der Fluidtransportmittel(s) in eine bzw. mehrere erste Vertiefungen. Dieses Eintauchen kann durch Relativbewegungen zwischen der Mikrostruktur und der Fluidfördervorrichtung erfolgen, wobei detektiert wird, dass das oder die Fluidtransportmittel in eine Vertiefung fällt (fallen). Anschließend erfolgt ein horizontales Bewegen der Fluidfördervorrichtung relativ zur Mikrostruktur. Hierbei gleiten die gelenkig mit einer Haltevorrichtung verbundenen Fluidtransportmittel über die Mikrostruktur und werden hierbei aus den ersten Vertiefungen herausgedrückt und gleiten in zweite Vertiefungen. Bei einer weiteren Relativbewegung erfolgt ein Herausdrücken der Fluidtransportmittel aus den zweiten Vertiefungen und ein Hineingleiten in dritte Vertiefungen usw. Liegt an den Fluidtransportmitteln beispielsweise ein Unterdruck an, so kann durch das erfindungsgemäße Verfahren auf einfache Weise das Niveau von Fluiden beispielsweise in Wells einer Titerplatte, nivelliert werden. Da dies durch ein einfaches horizontales Bewegen der Fluidfördervorrichtung relativ zur Titerplatte erfolgt, handelt es sich hierbei um ein einfaches Verfahren, bei dem ein exaktes und häufiges Ausrichten einzelner Pipetten oder dergleichen auf die Lage der Wells nicht erforderlich ist.

Vorzugsweise erfolgt beim horizontalen Bewegen der Fluidtransportmittel ein Schwenken der Fluidtransportmittel um eine horizontale Achse. Hierzu ist entweder - wie vorstehend beschrieben - ein Gelenk vorgesehen oder es handelt sich um . eine flexible Verbindung der einzelnen Fluidtransportmittel mit der Haltevorrichtung.

Die Eintauchtiefe der Fluidtransportmittel in die Vertiefungen der Mikrostruktur wird entweder durch horizontales Verschieben der Fluidfördervorrichtung und/oder eines die Mikrostruktur tragenden Tisches, oder durch Einstellen eines Schwenkwinkels mit Hilfe eines an der Fluidfördervorrichtung vorgesehenen Anschlags, erreicht.

Besonders bevorzugt ist das Verwenden der vorstehend beschriebenen Fluidfördervorrichtungen zur Durchführung des erfindungsgemäßen Verfahrens.

Die erfindungsgemäße Vorrichtung eignet sich ferner auch zum "Waschen", d. h. zur Durchführung eines heute mit einem Washer durchgeführten Verfahrens.

Nachfolgend wird die Erfindung anhand einer bevorzugten Ausführungsform unter Bezugnahme auf die anliegenden Zeichnungen näher erläutert.

Es zeigen:

Fig. 1 eine schematische Seitenansicht einer oberhalb einer Titerplatte angeordneten bevorzugten Ausführungsform der Fluidfördervorrichtung,

Fig. 2 eine Schnittansicht entlang der Linie V-V in Fig. 1 und

Fig. 3-5 unterschiedliche Bewegungszustände der in Fig. 1 dargestellten Fluidfördervorrichtung.

Eine Fluidfördervorrichtung 10 weist eine Haltevorrichtung 12 auf, die in Richtung der Pfeile 14, 16 und 18 (Fig. 2) verschiebbar ist.

Die Haltevorrichtung 12 ist über ein um eine horizontale Achse 20 schwenkbares Gelenk 22 mit einem Aufnahmekopf 24 verbunden. Der Aufnahmekopf trägt mehrere Halteelemente 26, die wiederum einzelne Fluidtransportmittel 28, d. h. Kapillaren oder Röhrchen, tragen. Im dargestellten Ausführungsbeispiel trägt der Aufnahmekopf 24 vier Halteelemente 26, die jeweils mit einer Kapillaren 28 verbunden sind. Die einzelnen Kapillaren sind zueinander parallel angeordnet und über den Aufnahmekopf fest miteinander verbunden, so dass die Kapillaren 28 nur gemeinsam um die Achse 20 schwenkbar sind. Selbstverständlich ist es auch möglich, die einzelnen Kapillaren 28 bzw. deren Halteelemente 26 getrennt voneinander zu lagern.

Die einzelnen Fluidtransportmittel 28 sind einzeln oder vorzugsweise gemeinsam mit einer Fördereinrichtung, wie einer Pumpe, insbesondere einer Vakuumpumpe, verbunden. Die Fördereinrichtung ist vorzugsweise in der Haltevorrichtung 12 angeordnet oder außerhalb der Fluidfördervorrichtung 10 vorgesehen und mit dieser über Schläuche oder dergleichen verbunden.

Die Fluidfördervorrichtung ist oberhalb eines Tisches 30 angeordnet. Der Tisch 30 dient zum lagegenauen Halten einer Titerplatte 32 oder einer anderen Mikrostruktur. Die Titerplatte 32 weist eine Vielzahl von Vertiefungen 34 auf, die durch Wandungen 36 voneinander getrennt sind. Die Vertiefungen 34 sind durch eine beispielsweise aus Glas bestehende Bodenplatte 38 verschlossen.

Zum Zu- oder Abführen von Fluid in die Vertiefungen bzw. Wells 34 der Titerplatte 32 tauchen die Fluidtransportmittel 28 in die Wells 34 ein. Hierzu ist der Tisch 30 und/oder die Fluidfördervorrichtung vertikal verschiebbar. Die gemeinsam von dem Aufnahmekopf 24 getragenen Fluidtransportmittel 28 sind zueinander parallel und in einem Abstand zueinander angeordnet, der dem Abstand der Vertiefungen 34 angepasst ist. Vorzugsweise ist der Abstand der Fluidfördereinrichtungen 28 bzw. der Halteelemente 26 einstellbar, um die Fluidfördervorrichtung 10 an unterschiedliche Mikrostrukturen 32 anpassen zu können.

Zum Einstellen der Eintauchtiefe der Fluidtransportmittel 28 in die Wells 34 ist die Fluidfördervorrichtung 10 einerseits in horizontaler Richtung in Richtung des Pfeils 16 verschiebbar und ferner ein Winkel α, den die Fluidtransportmittel 28 gegenüber einer Vertikalen aufweisen, einstellbar. Hierzu weist die Haltevorrichtung 12 einen Anschlag 40 auf, der vorzugsweise einstellbar ist.

Aus den Fig. 3-5 ist beispielsweise die mit Hilfe der erfindungsgemäßen Fluidfördervorrichtung mögliche Volumennivellierung von in unterschiedlichen Wells 34 enthaltener Flüssigkeit ersichtlich. Hierzu liegt an den Fluidtransportmitteln 28 ein Unterdruck an. Durch das Einstellen des Winkels α mit Hilfe des Anschlags 40 sowie durch das Einstellen der horizontalen Lage der Fluidfördervorrichtung 10 bezüglich der Titerplatte 32 ist die Eintauchtiefe des Fluidtransportmittels 28 definiert. Während des Absaugens von Fluid aus einer ersten Vertiefung 34 (Fig. 3) erfolgt eine Bewegung der Fluidtransportvorrichtung 10 in Richtung eines Pfeils 42. Sobald das Fluidtransportmittel 28 aufgrund der Bewegung in Richtung des Pfeils 42 an eine Wandung 36 stößt, wird das Fluidtransportmittel in Richtung eines Pfeils 44 um das Gelenk 22 geschwenkt, so dass das Fluidtransportmittel 28 nach oben gedrückt wird und auf der Wandung 36 der Titerplatte 32 gleitet (Fig. 4). Bei einem weiteren Bewegen der Fluidfördervorrichtung 10 in Richtung des Pfeils 42 fällt das Fluidtransportmittel 28 in eine zweite Vertiefung 34, so dass aus dieser wiederum Fluid entnommen werden kann, bis auch die zweite Vertiefung 34 dasselbe Niveau wie die erste Vertiefung 34 aufweist.

Dieses Vorgehen wird über die gesamte Länge oder Breite einer Titerplatte fortgesetzt, so dass beim Einsatz der dargestellten bevorzugten Ausführungsform der Fluidfördervorrichtung vier Reihen an Wells 34 durch einmaliges Überfahren der Titerplatte nivelliert sind. Anschließend erfolgt ein Anheben der Fluidfördervorrichtung 10 in Richtung des Pfeils 16 und ein seitliches Versetzen der Vorrichtung in Richtung des Pfeils 18, so dass die Fluidtransportmittel 28 über den benachbarten Wells angeordnet sind. Anschließend erfolgt wiederum ein Absenken der Fluidfördervorrichtung 10 und ein erneutes Überstreifen der Titerplatte 32, so dass vier weitere Reihen an Wells 34 nivelliert sind.

Claims

1. Fluidfördervorrichtung zum Zu- und/oder Abführen von Fluiden in bzw. aus Vertiefungen (34) einer Mikrostruktur (32), mit
mindestens einem Fluidtransportmittel (28),
einer mit dem Fluidtransportmittel (28) verbundenen Fördereinrichtung zum Zu- und/oder Abführen des Fluides in die bzw. aus den Vertiefungen (34) und
einer Haltevorrichtung (12), mit der das mindestens eine Fluidtransportmittel (28) gelenkig verbunden ist.

2. Fluidfördervorrichtung nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass ein zwischen der Haltevorrichtung (12) und dem Fluidtransportmittel (28) vorgesehenes Gelenk (22) derart ausgebildet ist, dass das Fluidtransportmittel (28) um eine horizontale Achse (20) schwenkbar ist.

3. Fluidfördervorrichtung nach Anspruch 1 oder 2, dadurch gekennzeichnet, dass die Haltevorrichtung (12) einen Anschlag (40) aufweist, so dass das Fluidtransportmittel (28) zu einer Vertikalen stets einen Winkel aufweist, der > 10°, vorzugsweise > 20° und besonders bevorzugt > 30° ist.

4. Fluidfördervorrichtung nach Anspruch 3, dadurch gekennzeichnet, dass der Anschlag (40) einstellbar ist.

5. Fluidfördervorrichtung nach einem der Ansprüche 1-4, gekennzeichnet durch einen mehrere Fluidtransportmittel (28) tragenden Aufnahmekopf (24).

6. Fluidfördervorrichtung nach Anspruch 5, dadurch gekennzeichnet, dass die Fluidtransportmittel (28) parallel zueinander angeordnet sind.

7. Fluidfördervorrichtung nach Anspruch 6, dadurch gekennzeichnet, dass der Abstand der Fluidtransportmittel (28) einstellbar ist.

8. Fluidfördervorrichtung nach einem der Ansprüche 1-7, dadurch gekennzeichnet, dass die Haltevorrichtung (12) relativ zur Mikrostruktur (32) verfahrbar ist, so dass das mindestens eine Fluidtransportmittel (28) nacheinander in Vertiefungen (34) der Mikrostruktur (32) eintaucht.

9. Fluidfördervorrichtung nach einem der Ansprüche 1-8, dadurch gekennzeichnet, dass die Haltevorrichtung (12) in vertikaler Richtung verfahrbar ist.

10. Verfahren zum Zu- und/oder Abführen von Fluiden in bzw. aus Vertiefungen (34) einer Mikrostruktur (32) mittels einer Fluidfördervorrichtung (10), mit den Schritten:

- Ausrichten eines oder mehrerer Fluidtransportmittel (28) der Fluidfördervorrichtung (10) auf die jeweilige Vertiefung (34) der Mikrostruktur (32),

- Eintauchen des Fluidtransportmittels (28) in eine erste Vertiefung (34) und

- horizontales Bewegen der Fluidfördervorrichtung (10) relativ zur Mikrostruktur (32), so dass das gelenkig mit einer Haltevorrichtung (12) verbundene Fluidtransportmittel (28) aus der ersten Vertiefung (34) in eine zweite Vertiefung (34) gleitet.

11. Verfahren nach Anspruch 10, wobei beim horizontalen Bewegen der Fluidfördervorrichtung (10) das Fluidtransportmittel (28) um eine horizontale Achse (20) geschwenkt wird.

12. Verfahren nach Anspruch 10 oder 11, bei welchem die Eintauchtiefe des Fluidtransportmittels (28) durch horizontales Verschieben der Fluidfördervorrichtung (10) und/oder eines die Mikrostruktur (32) tragenden Tisches (30) erfolgt.

13. Verfahren nach einem der Ansprüche 10-12, bei welchem die Eintauchtiefe durch Einstellen eines den Schwenkwinkel des Fluidtransportmittels (28) begrenzenden Anschlags (40) eingestellt wird.

14. Verfahren nach einem der Ansprüche 10-13, bei welchem die Fluidfördervorrichtung (10) nach einem der Ansprüche 1-9 verwendet wird.