DE06005877T1 - Verfahren zum Auswählen und Aufnehmen von Tierzellenkolonien - Google Patents

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Abstract

Verfahren zum Auswählen einer Zellkolonie, die eine gesteigerte Menge eines interessierenden Proteins exprimiert, welches die folgenden Stufen umfaßt:
(a) Bereitstellen von Zellkolonien in einem halbfesten Medium,
(b) Inkontaktbringen der Zellkolonien mit einem markierten Protein, welches an das interessierende Protein binden kann, so daß die Helligkeit der Zellkolonien bei Sichtbarmachung der Menge an interessierendem Protein, welches von der Zellkultur exprimiert wird, entspricht, und
(c) Auswählen einer Zellkolonie mit verstärkter Helligkeit.

Claims (17)

  1. Verfahren zum Auswählen einer Zellkolonie, die eine gesteigerte Menge eines interessierenden Proteins exprimiert, welches die folgenden Stufen umfaßt: (a) Bereitstellen von Zellkolonien in einem halbfesten Medium, (b) Inkontaktbringen der Zellkolonien mit einem markierten Protein, welches an das interessierende Protein binden kann, so daß die Helligkeit der Zellkolonien bei Sichtbarmachung der Menge an interessierendem Protein, welches von der Zellkultur exprimiert wird, entspricht, und (c) Auswählen einer Zellkolonie mit verstärkter Helligkeit.
  2. Verfahren nach Anspruch 1, wobei das markierte Protein in der unmittelbaren Nähe der Zellkolonien abgereichert wird.
  3. Verfahren nach Anspruch 1 oder Anspruch 2, wobei die Abreicherung des markierten Proteins einen dunkleren Bereich um jede helle Kolonie herum erzeugt.
  4. Verfahren nach einem der vorangegangenen Ansprüche, wobei die Abreicherung des markierten Proteins einen inversen Halo um jede helle Kolonie herum erzeugt.
  5. Verfahren nach einem der vorangegangenen Ansprüche, wobei das markierte Protein ein Antikörper, Ligand oder Rezeptor ist.
  6. Verfahren nach einem der vorangegangenen Ansprüche, wobei die Markierung eine Fluoreszenzmarkierung oder eine Lumineszenzmarkierung ist.
  7. Verfahren nach Anspruch 6, wobei die Fluoreszenzmarkierung grün fluoreszierendes Protein ist.
  8. Verfahren nach Anspruch 6 oder Anspruch 7, wobei die Fluoreszenz mit Licht einer geeigneten Anregungswellenlänge sichtbar gemacht wird.
  9. Verfahren nach Anspruch 6, wobei die Lumineszenzmarkierung aus der Gruppe ausgewählt ist, bestehend aus Luciferase, Lucifern, Aequorin und alkalischer Phosphatase.
  10. Verfahren nach einem der vorangegangenen Ansprüche, wobei die Zellkolonien Tierzellkolonien, Säugerzellkolonien oder Insektenzellkolonien sind.
  11. Verfahren nach einem der vorangegangenen Ansprüche, wobei das interessierende Protein ein biopharmazeutisches Protein ist.
  12. Verfahren nach einem der vorangegangenen Ansprüche, wobei das interessierende Protein bei der Behandlung oder Diagnose einer Erkrankung nützlich ist.
  13. Verfahren nach einem der vorangegangenen Ansprüche, wobei das interessierende Protein ein Membran- oder ein sekretiertes Protein ist.
  14. Verfahren nach einem der vorangegangenen Ansprüche, wobei das Verfahren automatisiert ist.
  15. Verfahren nach Anspruch 14, wobei das Verfahren unter Verwendung einer Vorrichtung für die Aufnahme von Tierzellkolonien automatisch durchgeführt wird, welche folgendes umfaßt: ein Vorrichtungsbett zum Anordnen eines Probenbehälters, der eine Mehrzahl von Tierzellkolonien umfaßt, einen Bildprozessor zum Identifizieren von Orten von Tierzellkolonien aus aufgenommenen Bildern und einen Aufnahmekopf, der unter Verwendung von Positionierungsmotoren über das Vorrichtungsbett zu Orten von Tierzellkolonien, die von dem Bildprozessor identifiziert wurden, bewegt werden kann, wobei der Aufnahmekopf eine Mehrzahl hohler Nadeln umfaßt, die durch Flüssigkeitsleitungen mit einer Drucksteuerung verbunden sind, welche so betreibbar ist, daß sie Mengen von Medium aus dem Probenbehälter in die hohlen Nadeln einsaugt, das Medium zurückhält und es ausstößt, wenn dies erforderlich ist, wodurch eine Aufnahme von Tierzellkulturen aus dem Medium ermöglicht wird.
  16. Verfahren zum Auswählen einer Zellkolonie, die eine gesteigerte Menge eines interessierenden Proteins exprimiert, wobei das Verfahren folgendes umfaßt: (a) Bereitstellen einer ersten Zellkolonie und einer zweiten Zellkolonie, (b) Aussetzen der ersten und der zweiten Zellkolonie an ein markiertes Protein, welches das interessierende Protein binden kann, (c) Sichtbarmachen der Zellkolonien und (d) Auswählen der helleren Zellkolonie unter der ersten und der zweiten Zellkolonie.
  17. Verwendung einer Vorrichtung zum Identifizieren von Zellkolonien, die gesteigerte Mengen eines interessierenden Proteins exprimieren, wobei die Vorrichtung eine Vorrichtung für die Aufnahme von Zellkolonien ist, die folgendes umfaßt: ein Vorrichtungsbett zum Anordnen eines Probenbehälters, der eine Mehrzahl von Tierzellkolonien umfaßt, eine Kamera zum Aufnehmen von Bildern der Tierzellkolonien, einen Bildprozessor zum Identifizieren von Orten von Tierzellkolonien aus aufgenommenen Bildern und einen Aufnahmekopf, der unter Verwendung von Positionierungsmotoren über das Vorrichtungsbett zu Orten von Tierzellkolonien, die durch den Bildprozessor identifiziert wurden, bewegt werden kann, wobei der Aufnahmekopf eine Mehrzahl hohler Nadeln umfaßt, die durch Flüssigkeitsleitungen mit einer Drucksteuerung verbunden sind, welche so betreibbar ist, daß sie Mengen von Medium aus dem Probenbehälter in die hohlen Nadeln einsaugt, das Medium zurückhält und es ausstößt, wenn dies erforderlich ist, wodurch eine Aufnahme von Tierzellkolonien aus dem Medium ermöglicht wird.
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