DD266272A5

DD266272A5 - Verfahren zur stabilisierung eines tierischen wachstumsfoerdenden hormons

Info

Publication number: DD266272A5
Application number: DD87307709A
Authority: DD
Inventors: Edwin J Jun Hamilton; Bruce D Burleigh
Original assignee: ��@��@�K@��@��Kk��
Priority date: 1986-05-16
Filing date: 1987-10-08
Publication date: 1989-03-29
Also published as: US4816568A

Abstract

Erfindungsgemaess wird zur Stabilisierung eines tierischen, wachstumsfoerdernden Hormons, das die verminderte Bildung von unloeslichen Substanzen und die Erhaltung der loeslichen Bioaktivitaet des Wachstumshormons in waessriger Umgebung gewaehrleistet, ein wachstumsfoerderndes Hormon mit einer effektiven Menge eines Stabilisators gemischt. Der Stabilisator wird ausgewaehlt aus folgenden Substanzen: (a) einem Polyol, beispielsweise nichtreduzierende Zucker, Zuckeralkohole, Zuckersaeuren, Laktose u. a.; (b) einer Aminosaeure, beispielsweise Glyzin, Sarkosin, Lysin, Serin, Arginin, Betain, Asparaginsaeure u. a.; (c) einem Polymer einer Aminosaeure mit einer geladenen Seitengruppe bei einem physiologischen p H-Wert; (d) einem Cholinderivat, beispielsweise Cholinchlorid, Cholindihydrogenzitrat, Cholinbitartrat, Cholinbikarbonat, Tricholinzitrat, Cholinaskorbat, Cholinborat u. a.

Description

Anwendungsgebiet der Erfindung

Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Stabilisierung eines tierischen, wachstumsfördernden Hormons. Das erfindungsgemäß hergestellte Hormon wird angewandt zur Wachstumsförderung bei Tieren durch Verabreichung einer wirksamen Menge des stabilisierten wachstumsfördernden Hormons. Die Stabilisatoren verringern die Bildung von unlöslichen Substanzen und erhalten die lösliche Bioaktivität des wachstumsfördernden Hormons in einer wäßrigen Umgebung.

-2- 266 272 Charakteristik de· bekannten Standes der Technik

Ein Hauptproblem bei der Verabreichung von wachstumsfördernden Hormonen ist die Denaturierung dar natürlichen Globulars'ruktur, was zur Aggregation des Wachstumshormons In ausgefällte Formen führt, wodurch die verfügbare Menge des aktiven Wachstumshormons verringert wird. Die Bildung dieser unlöslichen Substanzen kann auch Rohrleitungen, Membranen und verschiedene Pumpen der implantierten Zuleitungsvorrichtungen blockieren. Fast immer tritt infolge der Bildung dloser unlöslichen Substanzen ein Systemausfall ein. Neben der Bildung der unlöslichen Substanzen Ist dia Erhaltung der löslichen Bioaktivität des Hormons ein weiteres Problem bei der Verabreichung von wachstumsfördernden Hormonen. Es ist daher notwendig, Aggregationen des Wachstumshormons durch den Zusatz von Stabilisatoren zu verhindern. Der Stabilisator hat die Aufgabe, die Bildung von unlöslichen Substanzen zu verringern und die Bioaktivität des löslichen Wachstumshormon zu erhalten.

Es wurde eine Reihe von Stabilisatoren auf diesem Gebiet offengelegt, welche den Zusammenbruch der Strukturen der Protoine verhindern. Beispielsweise wurde Glycerol zur Stabilisierung der Aktivität verschiedener Proteine verwendet. Gekko u.a., Biochemistry (1981), 20,8.4ββ(Μβ7β. Zu den Beispielen für Proteine, die in diesem Beitrag beschrieben werden, gehören Chymotrypslnogen A (aus Rinderpankreas), Ribonuklease A (aus Rlnderpankreas), ß-Laktoglobln (aus Milch), Rinderserumalbumin, Insulin (aus der Rinderpankreas), Eiweißlysozym und a-Chymotrypsln.

US-PS 4179337 beschreibt ein Verfahren für die Kopplung eines Polypeptide wie Enzymen und Insulin an Polyethylenglykol oder Polypropylenglykol mit einem Molekulargewicht von 500 bis 20000 Dalton. Das Polyethylenglykol oder Polypropylenglykol wird als Schutz des Polypeptide vor Aktivitätsverlust beschrieben, und die Zusammensetzung kann ohne Immunlogene Reaktion injiziert werden.

US-PS 4439181 legt eine Methodozur Verhinderung der Ausfällung von Proteinen in Drogenabgabesystemen offen, wolche von der Fluldität des Infusats abhängig sind, um richtig funktionleren zu können. Die Methode besteht im Mischen eines Polyols mit der Proteinlösung vor der Einführung der Lösung in das Drogenabgabesystem. Zu den Beispielen für die beschriebenen Polyole gehören Glyzerol und biokompatible C₄- bis C₁₀-PoIyOIe. Beispielhaft für die Polyole sind Ery'.VJtol, Arabinose, Xylose, Ribose, Adonitol, Arabitol, Rhamose, Inositol, Fruktose, Galaktose, Glukose, Mannose, Sorbose, Maltoeo. Sukroee, Melezitose, und Raffinose. Die festen Polyole worden in einer wäßrigen Insulinstandardlösung aufgelöst oder es w'i 1 zuerst eine wäßrige Lösung hergestellt und dann mit dem Insulin gemischt, um die Endkonzentration dee Polyols In der Lösung ve > etwa 10 bis 90 Vol.-% zu erreichen, wobei der Ausgleich durch das Protein gebildet wird. Andere Proteine, die als Gegenstand der gleichen Ausfällungsproblem 8 beschrieben werden, sind Wachstumshormon, Glukagon und ähnl'ihe.

Während bisher eine Reihe von verschiedenen Stabilisatoren für spezielle Proteine bekannt wurde, gilt leider die Tatsache, daß ein bestimmter Stabilisator zwar bei einem bestimmten Protein wirksam sein kann, daß er aber nicht unbedingt für die Stabilisierung cinos wachstumsfördernden Hormons wirksam ist.

Ziel der Erfindung

Ziel der Erfindung ist die Bereitstellung eines Verfahrens, mit dem ein wachstumsförderndes Hormon stabilisiert werden kann, wobei die Bildung von unlöslichen Substanzen verringert wird und die lösliche Bioaktivität des Hormons erhalten bleibt.

Darlegung des Wesen« der Erfindung

Der Erfindung Hegt die Aufgabe zugrunde, geeignete Stabilisatoren aufzufinden.

Erfindungsgemäß wird ein neuartiges Verfahren zur Verfügung gestellt zur Herstellung eines stabilisierten tierischen, wachstumsfördernden Hormons.

Die Erfindung ermöglicht die verringerte Bildung von unlöslichen Substanzen und die Erhaltung der löslichen Bioaktivität des wachstumsfördernden Hormons In einer wäßrigen Umgebung. Has stabilisierte Wachstumshormon kann hergestellt werden durch Mischen eines wachstumsfördernden Hormons mit einer wirksamen Menge eines Stabilisators, der zwischen einer oder mehreren der folgenden Substanzen ausgewählt wird:

(a) Polyol, ausgewählt aus der Gruppe, die aus nlchtroduzierenden Zuckern, Zuckeralkoholon, Zuckersäuren, Pentaerythritol, Laktose, wasserlöslichen Dextranen und Ficoll besteht;

(b) Aminosäure, ausgewählt aus der Gruppe, die aus Glyzin, Sarkosin, Lysin oder dessen Salzen, Serin, Arginin oder dessen Salzen, Betain, Ν,Ν-Dlmethylglyvio. Asparaginsäure oder deren Salzen, Glutaminsäure oder deren Salzen besteht;

(c) Polymer einer Aminosäure r'A '„iner geladenen Seitongruppe bei einem physiologischen pH-Wert und

(d) Cholinderlvat, ausgewählt aus der Grippe, die aus Cholinchlorid, Cholindihydrogenzitrat, Cholinbitartrat, Cholinbikarbonat, Tricholinzitrat, Cholinaskorbat, Cholinborat, Cholinglukonat, Cholinphosphat, Di(cholin)sulfat und Dicholinmukat besteht. Erfindungsgomäß wird das wachstumsfördernde Hormon ausgewählt aus der Gruppe, die aus wachstumsfördernden Schafs-, Human-, Vogel·, Schweins- und Rinderwachstumshormon besteht. Besonders bevorzugt ist wachstumsförderndes Rinderhormon.

Das Poiyol ist erfindungogemäß in Mengen zwischen etwa 2,6 und otwa 99Gew.-% der stabilisierten, wachstumsfördernden Zubereitung vorhanden. Besonders bevorzugt ist das Polyol Xylitol.

Die Aminosäure ist erfindungsgemäß in Mengen zwischen etwa 2,5 und etwa 99Gow.-% der stabilisierten, wachstumsfördernden Zusammensetzung vorhanden. Die bevorzugte Aminosäure ist Sarkosin.

Das Polymer einer Aminosäure ist In Mengen von etwa 2,5 bis etwa 99Gew.-% der stabilisierten, wachstumsfördernden

Zusammensetzung vorhanden. Bevorzugt ist das Polyer einer Aminosäure eine Polyomlnosäure, die ausgewählt wird aus der Gruppe, die aus Polylysin, Polyasparaginsäure, Polyglutaminsäure, Polyhlstidin, Polyornithin und Salzen der genannten Polyaminosäuren besteht. Bevorzugt ist das genannte Polyamlnosäuresalz Poly-DL-Lysln-HBr. Das Chollnderivat ist in Mengon zwisc 9n etwa 2,6 und etwa 99Gew.-% der stabilisierten, wachstumsfördornden Zusammensetzung vorhanden. Bevorzugt ist es Cholinchlorld

Kurze Beschreibung der Zeichnungen:

Abb. 11st eine grafische Darstellung, welche die mittlere Zahl an Nanogramm von Schweinowachstumshormon je Milliliter Blutserum zeigt, die dem Zeitpunkt entspricht, zu dem die Blutserumprobe nach der Implantation entnommen wurde. Erfindungsgemäß wird ein stabilisiertes, tierisches wachstumsförderndes Hormon, ein Verfahren für seine Herstellung und ein Verfahren zur Auslösung der Wachstumsförderung bei einem Tier durch Verabreichung einer wirksamen Menge des stabilisierten, wachstumsfördernden Hormons zur Verfügung gestellt. Die Stabilisatoren der vorliegenden Erfindung verringern nicht nur die Bildung von unlöslichen Substanzen, sondern erhalten die Bioaktivität des löslichen Teils des Wachstumshormons. Nach der vorliegenden Erfindung wird eine wirksame Menge eines Stabilisators mit einem Wachstumshormon vor der Verabreichung des Hormons an das Tier gemischt. Bei einem Ausführungsbeispiel der vorliegenden Erfindung wird das stabilisierte, wachstumsfördernde Hormon dem Tier Injiziert. Bei diesem Ausführungsbeispiel sind die stabilisierten Wachstumsh »mono in einer wäßrigen Lösung, die aus aufgelöstem Wachstumshormon und aufgelöstem Stabilisator besteht. Nach einem anderen Ausführungsbeispiel der vorliegenden Erfindung werden die stabilisierten, wachstumsfördernden Hormone über eine Implantierte Vorrichtung verabreicht. Nach diesem Ausführungsbeispiel können die stabilisierten Wachstumshormone im flüssigen oder trockenen Zustand sein. Wenn eine implantierte Vorrichtung zur Verabreichung gewählt wird, hat das stabilisierte Wachstumshormon vorzugsweise die Form eines trockenen Gemische, das aus dem festen Wachstumshormon und dem festen Stabilisator besteht, die nach der Einführung in eine wäßrige Umgebung benetzt werden und sich aufzulösen beginnen.

Die Stabilisatoren sind besonders geeignet für tierische, wachstumsfördernde Hormone. Zu den Beispielen für diese Hormone gehören wachstumsfördernde Rinder-, Hi nan-, Pferde-, Vogel-, Schafs- und Schweinshormone. Vorzugsweise ist das Hormon ein wachstumsförderndes Rinder- oder S-nwelnshormon. Die Konzentration des wachstumsfördernden Hormons kann zwar in Abhängigkeit von der gev/ünschten Dosierung und dem Speziellen wachstumsfördernden Hormon variieren, im allgemeinen aber ist das Hormon in Mengen zwischen etwa 1 und etwa 07,5Gew.-% des Gesamtgewichts der wachstumsfördernden Zusammensetzung vorhanden. Vorzugsweise ist das wachstumsfördernde Hormon in Mengon von etwa 6 bis zu etwa 50Gew.-% des Gesamtgewichts der wachstumsfördernden Zusammensetzung vorhanden. Wie Fachleute erkennen werden, können die Wachstumshormone einen hohen Gowlchteanteil des Gesamtgewichts der wachstumsfördernden Zusammensetzung ausmachen, wenn sich die Zusammensetzung im festen Zustand befindet, da kein Wasser und andere geeignete wäßrige Lösungsmittel erforderlich sind, um die Zusammensetzung einspritzbar zu machen.

Die Wachstumshormone zur Verwendung In der vorliegenden Erfindung können durch Extraktions und anschließende Konzentrationstechniken aus den Hypophysen verschiedener Tiere abgeleitet worden. Geeignet sind nur.h Wachstumshormone, die durch Rekombinant-DNA-Methoden hergestellt werden. Die Aminosäurefolgen von verschiedenen Hormonen, die für die vorliegende Erfindung geeignet sind, sind bekannt. Beispielsweise wird die Aminosäurefolge von menschlichen wachstumsfördernden Hormonen in einem Beitrag von C. H. Li in Kirk-Othmer, „Encyclopedia of Chemical Technology" (Enzyklopädie der Chemitechnologie), 3. Aufl., Bd. 12, S. 549-552, beschrieben. Die Aminosäurefolge von Rinderwachsti nshormon wird In einem Beitrag von R. P. Woychlk, Nucleic Acid Res., 10,7197 (1982), beschrieben. Die Aminosäurenfolge von Schafswachstumshormon wird in einem Beitrag von C. H. Li u. o„ Arch. Blochem. Blophys., 156,493-508 (1973), beschrieben. Die Aminosäurenfolge von Schweinswachstumshormon wird in einem Beitrag von P. H. Seeburg u.a., DNA, 2,37,45 (1983), beschrieben. Alle die oben genannten Referenzen, in denen die Aminosäurefolgen beschrieben werden, werden in ihrer Gesamtheit hier als Referenz oinbezogen. Neben den oben genannten können auch Wachstumshormone eingesetzt werden, die durch Exzisloi von bis zu 12 Aminosäureresten aus den Amlnoanden der Aminosäurefolgen modifiziert worden. Die Stabilisatoren, die für ü._u vorliegende Erfindung geeignet sind, haben im allgemeinen zwei Eigenschaften. Erstens sind sie im allgemeinen sehr polar. Zweitens müssen die Stabilisatoren inwäßrigen Lösungen löslich sein. Nach einem Ausführungsbeispiel ist der Stabilisator vorzugsweise in ausreichenden Mengen "orhanden, so daß die Lösung mit dem Stabilisator gesättigt ist, wenn sich die Stabllisator-Wachstumshormon-Formulation in einer wäßrigen Umgebung oder Lösung befindet. Es Ist offensichtlich, daß verschiedene Stabilisatoren jeweils eine eigene Löslichkeit haben und in unterschiedlichen Mengen vorhanden sein können. Wenn die wachstumsfördernde formulation in einer wäßrigen Lösung dispergiert oder aufgelöst Ist, sollte der Stabilisator In einer Menge von etwa 6Gew.-% bis zur vollständigen Sättigung in der wäßrigon Formulation vorhanden sein, welche das Wachstumshormon enthält. Wenn die trockene Formulation gewählt wird, kann der Stabilisator einen höheren Prozentsatz des Gewichtes der Gesamtformulation ausmachen, da ein Hauptbestandteil, d.h., das Wasser oder wäßrige Lösungsmittel, entfällt. Demzufolge schließen die unten aufgeführten jeweiligen Gewichtsprozentsätze von speziellen Stabilisatoren sowohl wäßrige Formulationen als euch feste Formulationen ein, welche den Stabilisator und das wachstumsfördernde Hormon enthalten.

Stabilisatoren, die bei der vorliegenden Erfindung eingesetzt werden können, sind Folyole, die ausgewählt werden aus nichtreduzierenden Zuckern, Zuckeralkoholen, Zuckersäuren, Laktose, Pentaerythritol, wasserlösliche Dextrane und Ficoll. Ein Beispiel für einen nichtreduzierenden Zucker ist Sukroso. Zu den Beispielen für Zuckeralkohole gehören Mannitol, Xylitol, Erythritol, Threitol, Sorbitol und Glyzerol. Ein Beispiel für Zuckersäure Ist L-Glukonat und dessen Metallsalze. Vorzugsweise ist das Polyol Xylitol. Entgegen den Erwartungen, die man nach dem Lesen zahlreicher bisheriger Beschreibungen und insbesondere der US-PS 4439181 haben könnte, sind nicht alle Polyole für die Stabilisierung von wachstums'ördernden Hormonen geeignet. Zwar kann mit vielen Polyolen dio Verringerung in der Bildung von unlöslichen Substanzen erreicht werden, mit einigen aber kann nicht die Bioaktivität des löslichen Teils des wachstumsfördernden Hormons erhalten worden. Beispiele für solche Polyole sind bei den reduzierenden Zuckern u.a. Fruktose, Mannose und Maltose.

Laktose, ebenfalls ein reduzierender Zuckor, scheint eine Ausnahme gegenüber den übrigen reduzierenden Zuckern zu sein. Wio Fachleuten nffensic .ltlich sein wird, haben die Polyole, die bei der vorliegenden Erfindung eingesetzt werden, unterschiedliche Löslichkeiten in Wasser. Währond die Mongo des Polyols in stabilisierenden Mengen vorhanden ist, kann das Polyol in Mengen zwischen etwa 2,5 und etwa 99 üow.-% dos Gesamtgewichts der Gesamtformulierung vor der Einführung in eine wäßrige Umgebung vorhanden sein. Vorzugsweise ist das Polyol In Mengen zwischen etwa 15 und etwa 60 Gew.-% vorhanden. Andere Stabilisatoren, dia für die vorliegende Erfindung gooignet sind, sind bestimmte Aminosäuren. Zu den Beispielen von Aminosäuren, die oingosotzt worden könnon, gehören Glyzin, Sarkosin, Lysin oder dessen Salze, Serin, Arginin oder dessen Salze, Betain, Ν,Ν-Dimothylglyzin, Asparginsäure oder deren Salze, Glutaminsäure oder deren Salze. Verwendet werden können auch Mischungen dieser Aminosäuren. Vorzugsweise ist Sarkosin die Aminosäure. Währenddie Aminosäure in stabilisierenden Mengen vorhanden ist, kann sie allgemein in Mengen zwischen etwa 2,R und etwa 99 Gew.-% des Gesamtgewichts der Gesamtformulatlon vor der Einführung in eine wäßrige Umgebung vorhanden sein. Vorzugsweise ist die Aminosäure !n Mengen zwischen etwa 15 und etwa 60 Gew.·% vorhanden.

Es wurde festgestellt, daß bestimmte Polymere von Aminosäuren brauchbare Stabilisatoren für Wachstumshormone sind. Diese Polyaminosäuren oder deren Salze können durch geladene Seitengruppen bei physiologischem pH-Wert charakterisiert werdon. Die Ladung kann entweder „+" oder „-" sein. Zu einigen Beispielen für Polyaminosäuren, die eine stabilisierende Wirkung haben können, gehören Polylysln, Polyasparaginsäure, Polyglutamlnsfture, Polyarginin, Polyhistidin, Polyornith'.i und die Salze dieser Polyaminosäuren. Das Polyuminosäuresalz ist vorzugsweise Poly-DL-Lysln-HBr. Im allgemeinen sind diese besonderen Stabilisatoren in Mengen zwischen etwa 2,5 und etwa 99 Gew.-% des Gesamtgewichts der Gesamtformulation vorhanden. Vorzugsweise ist das Polyaminosäurenderivat in Mengen zwischen etwa 15 und etwa 60 Gew.-% vorhanden. Eine woitere Klasse von Stabilisatoren, die eingesetzt werden können, sind die Cholinderlvate. Zu den Beispielen für diese Stabilisatoren gehören Chollnchlorid, Chollndihydrogenzitrat, Cholinbitanret, Cholinbikarbonnt, Trichollnzitrat, Chollnaskorbat, Choiinborat, Choiingiukonat, Cholinphosphat, üi(cholin)sulfat und Dicholinmukat. Vorzugswelse ist das Cholinderivat Cholinchlorid. Im allgemeinen sind diese Stabilisatoren in Mengen zwischen etwa 2,5 und etwa 99 Gew.-% des Gesamtgewichts der Gesamtformulation vorhanden, bevor sie In eine wäßrige Umgebung eingeführt werden. Vorzugswelse ist das Cholinderivat in Mengen von etwa 15 bis zu otwa 60 Gew.-% des Gesamtgewichts der Gesamtformulation vorhanden. Die Herstellung der stabilisierton, wachstumsfördernden Zusammensetzungen oder Formulationen, welche den Stabilisator und das Wachstumshormon onthalten, kann durch einfaches mechanisches Mischen erf> -Igen. Wenn eine injiziorbare Form der stabilisierten, wachstumsfördornden Formulation gewünscht wird, wird der Stabilisator zuerst In einer wäßrigen Lösung dispergiert, die gerührt oder goschüttelt werden kann, um eine schnellere Löslichbarmachung des Stabilisators zu erreichen. Nachdem die wäßrige Lösung des Stabilisators hergestellt worden Ist, wird das wachstumsfördernde Hormon zugesetzt. Das prozentuale Gewicht des wäßrigen Lösungsmittels oder des Wassers braucht nur eine ausreichende Menge zu sein, um den Stabilisator und das Wachstumshormon aufzulösen und um die Verabreichung der Formulation durch eine Injektion zu ermöglichen. Es wird angenommen, daß Mengen zwischen etwa 40 und etwa 90 Gow.-% angemessen sind. Obwohl das vorstehende Verfahren als das bevorzugte beschrieben wurde, kann die Reihenfolgo des Zusatzes geändert w srden und sollte In keiner Weise als Eineng mg des Rahmens der vorliegenden Erfindung betrachtet werden. Bei einem anderen Austu" -iingsbeispiel können der Stabilisator und das Wachstumshormon naß oder trocken gemischt werden, um eina feste Formt ... jn zu schaffen, die für Implantate besonders geeignet ist. Nachdem das Wachstumshormon und der Stabilisator gemischt worden sind, können beliebige andere, wahlweise Zusätze wie Puffersubstanzen, Salze, Adjuvanzien usw. zugegeben werden.

Da die Verabreichung dor vorliegenden Wnchstumshormonformulatlonen an ein Tier vorgesehen Ist, muß der pH-Wert für das Tier physiologisch akzeptabel sein und darf nicht zur Destabllisierung des wachstumsfördernden Hormons beitragen. Im allgemeinen liegt der pH-Wort der stabilisierten, wachstumsfördernden Formulation zwischen etwa 4 und etwa 10, wobei der bevorzugte pH-Wert-Bereich .-wischen etwa 6,5 und etwa 8,0 liegt. Der pH-Wert der wachstumsfördernden Formulation kann durch effektive Mengen einer pharmazeutisch akzeptablen Blase oder Säure abgestimmt werden, um den geforderten pH-Wert zu erreichen. Geeignete Säuren und Basen sind Fachleuten allgemein bekannt.

Die Erfindung sieht außordem eine Methode zur Wachstumsförderung bei Tieren vor, welche in der Verabreichung einer effektiven Menge einer stabilisierten, wachstumsfördernden Zusammensetzung an das Tier besteht, die aus einer wachstumsfördernden Menge eines wachstumsfördernden Hormons mit einer stabilisierenden Menge eines Stabilisators besteht, der ausgewählt wurde aus einem oder mehreren der folgenden:

(a) einem Polyol, das aus der Gruppe augewählt wurde, die aus nlchtreduzlerenden Zuckern, Zuckeralkoholen, Zuckersäuren, Laktose, Pentaerythritol, Ficoll und wasserlöslichen Dextranen besteht;

(b) einer Aminosäure, die aus der Gruppo ausgewählt wurde, die aus Glyzin, Sarkosin, Lysin oder dessen Salzen, Serin, Arginin oder dossen Salzen, Botnin, Ν,Ν-Dimentylglyzin, Asparaginsäure oder deren Salzen, Glutaminsäure oder deren Salzen besteht;

(c) einem Polymer einer Aminosäure mit geladenen Seitengruppen bei einem physiologischen pH-Wert und

(d) einem Cholinderivat, das ausgewählt wurde aus der Gruppe, die aus Cholinchlorid, Cholindihydrogenzitrat, Cholinbitartrat, Cholinkarbonat, Tricholinzitrat, Cholinaskorbat, Choiinborat, Choiingiukonat, Cholinphosphat, Di(cholin)sulfat und Dicholinmukat bosteht.

Die wachstumsförderndon Formulationen sind für die Verabreichung an Tiere, vorzugsweise an Schweine und Kühe, vorgesehen. Diese Zubeioitungen könnon auf unterschiedliche Weise verabreicht werden. Bei einum Ausführungsbeispiel kann dio wachstumsfördorndo Zubereitung die Form einer Flüssigkeit oder einer Lösung haben, die durch subkutane Injektion oder für ein die Flüssigkeit enthaltendes Reservoir einer Implantierten Zuführungseinrichtung eingeführt wird. Bei einem anderen Ausführungsbeispiel wird die Zubereitung des stabilisierten Wachstumshormons in Tabletten- oder Pelletform gepreßt, bevor es in ein Reservoir einer Zuführungseinrichtung gegeben wird. Um Pellets aus de,- stabilisierten, wachstumsfördernden Zubereitung herstellen zu können, werden vorzugsweise verschiedene Bindemittel eingesetzt. Zu den Beispielen für geeignete Bindemittel gehören Natriumbnntonit, Ethylzellulose, Stearinsäure, Kalziumstearat, Adipinsäure, Polyethylenglykol, entazotyliertes Chitlon und Zelluloseazetat. Im allgemeinen ist dos Bindemittel in Mengen zwischen etwa 0,5 und etwa 10 Gow.-% des Gesamtgewichts der festen, wachstumsfördernden Zubereitung vorhanden. Vorzugswelse Ist das Bindemittel in Mengen zwischen 1 und etwa 5 Gew.-% vorhanden.

Den Pellets worden vorzugsweit e Schmiermittel zugesetzt, um die Erreichung einer dauerhaften Freisetzung des Pellets zu unterstützen und um die Horstel ung zu erloichern. Zu den Beispielen für diese Schmiermittel gehören die üblichen wasserunlöslichen Schmiermittel für Tabletten, wie beispielsweise Magnesiumstearat, Natriumstearat, Kalziumsteerat, pulverisierte Stoaratsauro, Talk, Paraffin, Kakaobutter, Graphit, Lykopodlum oder deren Kombinationen. Vorzugsweise ist das Schmiermittel ein Fettsäuredorivat wie cllo Stoarate, einschließlich Magnosiumstearat, Natriumstearat und Kalziumstearat. Die Menge des Schmiermittels kann unterschiedlich sein, im allgemeinen aber ist es in Mengen von etwa 0,6 bis etwa 10 Gew.-% des Gesamtgewichts dos Pollots vorhanden. Vorzugsweise ist das Schmiermittel in Mengen zwischen etwa 1 und etwa 6 Gow.-% vorhanden.

Die Zubereitung dos stabilisierten Wachstumshormons, vorzugsweise in pelletierter Form, kann n> 'as Reseivoir einer Zuführungsvorrichtung gegeben werden. Das Reservoir wird von oiner Wand definiert und um jdoen, die zumindest zu einem Abschnitt aus einer porösen Membran besteht. 'Jtc.gnete Stoffe für die Schaffung des phasen Teils der Außenwand der Vorrichtung sind im allgemeinen die, durch welche der Stabilisator und das Wachstumshormon über die Poren passleren könnon. Die Porengrößo dos porösen Materials kann zwischen etwa 5pm unti etwa 250pm betragen, wobei eine Porengröße von 10 bis 10Ομηι bevorzugt wird. Geeignete Stoffe für die Herstellung dieser Wände sind natürlich vorkommende oder synthetische Stoffe, die biologisch kompatibel mit Körporflüssigkeiten, -gewebe und -Organen und im wesentlichen in den Körperflüssigkeiten unlöslich sind, mit denen die Vorrichtung in Kontakt kommt. Der Einsatz von Stoffen, die in Körperflüssigkeiten löslich sind, ist nicht erwünscht, da die Auflösung dor Wand der Vorrichtung sowohl die Freisetzungsrate des Wachstumshormons als auch die Fähigkeit des Systems, über eine längere Zeit an seinem Platz zu bleiben, beeinträchtigen würde. Wünschenswert ist es auch, wenn das Material durch eine konstante Porösität gekennzeichnet ist; treten mit der Zeit Porösitätsänderungen auf, ändert sich auch die Froisotzungsrate des Wachstumshormons mit der Zelt.

Stoffe, die für die Herstellung dus porösen Abschnitts der Wand der Vorrichtung geeignet Rind, sind in Fachkreisen als aus einer Vielzahl verschmolzener Teilchen bestohond bekannt, dio eine Stützstruktur bilden, die untereinander verbundene Poren In mikroskopischer G. "9 aufweisen. Eine Vielzahl solcher Stoffe ist kommerziell verfügbar oder kann nach verschiedenen, in Fachkroisen bekannten Methoden hergestellt werden, einschließlich der geätzten Kernspur·, Auslaug- und polyolektrolytischen Prozesse, der lonenaustauschpolymerreaktionen und anderer Techniken. Siehe beispielsweise „Synthetic Polymer Membranes" (Synthotischo Polymermembranen), R.E.K>sting, Kapitel 4 und 5, veröffentlicht von McGraw-Hill, 1971, und Chemical Reviews: Ultrafiltration 18,363 bis 455 (1934).

Zu den mikroporösen Stoffen, die für die Herstellung dieser Teile der Vorrichtungen der vorliegenden Erfindung geeignet sind, gehören mikroporöse Polyalkylene, wie mikroporöses Polyethylen, mikroporöse Polykarbonate, mikroporöse Polyamide, mikroporöse Modakrylkopolymere, Polyester, die durch Veresterung einer Dikarbonsäure oder eines Anhydride mit einem Alkylonpolyol hergestellt wurden, Phenolpolyester, vernetzte Olefinpolymere, Polyolefine, Polyurethane, Polyimide und Polybenzimidazole. Bevorzugte mikroporöse Stoffe sind mikroporöse Polyethylene.

Wie Fachleute erkennen werden, ist die Diffusionsrate des Inhalts des Reservoirs vom jeweiligen Material, den Bestandteilen des Reservoris, der Porengrößo des porösen Materials und den Abmessungen des porösen Matoriale, d. h., der Stärke und der wirksamen Oberfläche, abhängig. Die vorliegende Erfindung ist zwar nicht auf bestimmte Abmessungen des porösen Abschnitts der Vorrichtung beschränkt, ausgezeichnete Ergebnisse aber wurden mit mikroporösen Polyethylenscheiben mit einer Porengrößo zwischen 10 und 70Mm, einem Durchmesser von 2 bis 4mm und einer Stärke von 1,6 bis 3mm erreicht. Bei den Vorrichtungen, dio vorteilhaft in Verbindung mit der vorliegenden Erfindung eingesetzt werden können, besteht im typischen Fall nur ein Abschnitt der Außenwand aus einem porösen Material. Die übrige Wand besteht aus einem Material, das im wesentlichen undurchlässig für das Wachstumshormon und den (die) Stabilisator(en) im Reservoir und die Körperflüssigkoiten ist, die mit der implantierten odor eingesetzten Vorrichtung in Kontakt sind. Dieser Abschnitt der Außenwand ist vorteilhaft im wesentlichen so gekennzeichnet, wio obon dor poröse Abschnitt der Wand charakterisiert wurde. Das Material sollto mit Körperflüssigkeiten, -gewebe und -Organen kompatibel sein und kann aus Stoffen bestehen, die kommerziell verfügbar sind oder nach in Fachkreisen bekannten Vorfahren hergestellt werden können. Zu den geeigneten undurchlässigen Stoffen gehören Stahl oder andere geeignete Metalle, azylsubstituierte Zelluloseazetate und dessen Alkylderivate, partiell oder vollständig hydrolysierto Alkylon-Vinylazotatkopolymere, unplastifiziertes Polyvinylazetat, quorvernetzte Homo- und Kopolymere von Polyvinylazotat, vernotzto Polyester von Akryl- und Methakrylsäuro, Polyvinylalkylethern, Polyvinylfluorid, Silizium, Polykarbonat, Polyurethan, Polyamid, Polysulfone, Polyimide, Polyolefine, Polybenzimidazole, Styrenakrylonitrilkopolymere, vernefztes Poly(othylenoxid), Poly(alkylene), Poly(vinylimidazol), Poly(ester), chlorosulfonierte Polyolefine und Ethylen-Vinylesterkopolymoro wio Eth\ lon-Vlnylozotat. Ein bevorzugtes Material ist Silizium.

Ausführungsbelsplel

Die vorliegendo Erfindung wird weiter ausführlich durch die nachfolgenden Beispiele veranschaulicht, die jedoch nicht als Einschränkung von deren Rahmen zu betrachten sind.

Bespiel V

Isotonischor physiologischer Phosphatpuffer (IPPB) mit einem pH-Wert von 7,3 wurv.'a aus Natriumhydrogenphosphaten (0,1 F Phosphaten) und 0,2% NaN₃ horgestollt. Unter Verwendung dieses Puffers wurden Lösungen von Zusätzen hergestellt, wie das In der Tabelle 1 gezeigt wird. Dann wurden otwa 40-mg-Portionon von Rinderwachstumshormon in sterilen 50-ml-Zontrifugonröhrchen mit 100μΙ dor Lösungen benetzt. Dio Röhrchen wurden boi 37⁰C gelagert. Nach der Lagerung, bei 37°C (Zeiten sind der Tabelle 1 zu entnehmen) wurde Jodes 50-ml-Röhrchon im typischen Fall wie nachstehend behandelt. Erstens wurden dom Röhrchen 40ml IPPB zugesetzt (definiert als Beginn der Löslichmachbarzoit). Unter Verwendung eines Becher-Sonikators wurde das bonotzto Mrtorial im Röhrchen wirksam zur Suspension gebracht/aufgelöst. Die resultierende Suspension wurde anschließend während oiner Periode des Stehenlassens bei Zimmertemperatur verwirbelt. Das entsprechende Röhrchen wurde etwa 5 min bei 1900 G zentrifugiert (definiert als Ende dor Löslichmachbarkeit). Der resultierende obenauf schwimmende Schicht wurde fast vollständig mit einer Pipette entfernt, und der ungelöste Rückstand wurde in 20ml zugesetztem Wasser zur

Suspensior. gebracht. Nach dem Zentrifugieren und der Entfernung der obenauf schwimmenden Schicht wurde der Rückstand im Röhrchen bei Zimmertemperatur in einem Konzentrator Savent Speed Vac auf einen Kammerenddruck von euva 15OmT getrocknet. Der pelletierte trockene Rückstand wirdo nus dem Röhrchen entnommen und sein Gewicht anhand des Differenzgewichte des Röhrchens bestimmt.

In den untenstehenden Tabellen werden die Ergebnisse von Funkrezeptoranalysen (RRA) und Hypox-Wachstumsversuchen für verschiedene der Zubereitungen gegeben. Die Angebe »+" bezeichnet eine im wesentlichen 100%lge Aktivität gegenüber dem natürlichen Rinderwanhstumsstandard (bGH-Standard), „ - " bezeichnet wenig oder keine Aktivität und „ <" gibt einen dazwischenliegenden t'"itätspegel an. Zwei Symbole bezeichnen ein Ergebnis, das zwischen den genannten Symbolen liegt. Bei den nachfolgenden Beispielen waren die als Posten 7500 (1), Posten 7237C, Posten 8096C und 7500 identifizierten Rinderwachstumshormono nach Parlow gereinigte Hypophysenwachstumshormone.

Tabelle Zubereitung

Verwendete bGH

Zusatz

Gew.-% d. Zusätze s in Lösung

Tage 37⁰C

Löslichmachbar zeit (h)

Unlösl.S

als Gew.-% d.Ausg.-bGH

RRA

Hypox-

Wachstum

Ratten

30 31 32 33 34 35 36

Posten 7500(1)	Sukrose	6
Posten 7500(1)	Sukrose	16
Posten 7500(1)	Sukrose	50
Posten 7237 C	Sukrose	60
Posten 7237 C	Mannitol	15
Posten 7500(1)	Mannitol	16
Posten 7500(1)	Sorbitol	50
Posten 7237 C	Sorbitol	50
Posten 7237 C	Sorbitol	41
Posten 7237 C	Laktose	15
Posten 7237 C	Laktose	52
Posten 7500(1)	Ficoll	24
Posten 7237 C	Ficoll	19
Posten 7500(1)	Glyzerol	51
Posten 7237 C	Glyzerol	51
Posten 7500(1)	Glyzin	5
Posten 7500(1)	Glyzin	15
Posten 75CK)	Glyzin	15
Posten 7500(1)	Glyzin	16
Posten 723 7 C	Glyzin	15
Posten 7237 C	Glyzin	15
Posten 7237 C	Sarkosin	6
Posten 7237 C	Sarkosin	15
Posten 7237 C	Sarkosin	30
Posten 7237 C	Sarkosin	30
Posten/23.'C	Sarkosin	40
Posten 723V C	PoIy-DL-	29
	Lyeine-HBR
	(MW = 37 K)
Poeten 7237 C	Betain	45
Posten 7237 C	PoIy-L-	28
	Asparagat
	Na⁺(14 000)
Posten 7237 C	Cholin-	50
	chiorid
Posten 7237C	L-Arginin	45
	HCI
Posten 7237 C	Na⁺D-	33
	Glukonat
Posten 80976 C	Na⁺L-	46
	Asparatat
Posten 8096 C	L-Arginin	39
	L-Asparatat
Posten «096 C	L-Lysin	50
	L-Aparatat
Posten 7237 C	N,N-Dime-	30
	thylglzin
	NaCI
Posten 7237 C	PoIy-L-	17
	glukat
	Na⁺(60000)

22	1,6	39
21	1,6	20
20	1,3	6
15	2,5	5
19	1,7	20
20	2,3	21
20	1.3	6
19	1,7	9
20	1,P	6
19	1,5	12
20	1,5	5
21	1,5	26
19	2,6	23
19	0,75	17
19	1,75	10
22	1,6	35
22	3,0	19
17	2,3	13
17	2,3	14
19	1,5	16
20	1,5	16
20	1,7	46
20	1,7	31
20	1,7	8
20	1,7	12
20	1,7	11
18	1,6	16
20	1,7	20
19	1,5	12
21	1,5	10
20	1,5	8
20	1,5	7
19	1,5	14
20	1,6	13
19	1,5	11
20	1,7	27

2,0

18

Fortsetzung der Tabelle 1	Verwendete bGH	Zusatz	Gew.-% d. Zusatzes in Lösung	Tage 37⁰C	Löslich machbar zeit (h)	Unlösl.S. als Gew.-% d.Ausg.-bGH	-7-	266 272
Zubereitung	Posten 7237 C Posten 7237 C	PoIy-L ornithin PoIy-L- glutamat- Na⁺(60 000)	30 17	19 19	1,5 2,0	18 18	RRA	Hypox- Wachstum Ratten
38 39						+ +

Beispiel 2: Kontrollexperimente

Nach dem Verfahren von Beispiel 1 wurde eine Reihe von Kontrollexperimenten durchgeführt. Untenstehende Tabelle 2 führt die entsprechenden Doton von diesen Kontrollexperimenten auf. Wie aus untenstehender Tabelle 2 entnommen werden kann, ergibt die IPPB-Lösung allein zwischen otwa 39 und etwa 52Gew.-% unlösliche Substanzen. Jede Verringerung der Menge der unlöslichen Substanzen unter diesen Boreich wird daher als Verbesserung betrachtet. Viele der Beispiele in der untenstehenden Tabelle orgeben zwar eine beachtliche Verringerung bei der Bildung der unlöslichen Substanzen, erhalten die Bioaktivität aber nicht bei einem annehmbaren Wert, Überraschenderweise sind viele der Polyole, die bei den bekannten Lösungen als goeignete Stabilisatoren für die Aufrechterhaltung der Fließfähigkeit verschiedener Proteine beschrieben werden, für die Verwendung bei wachstumsförderndon Hormonen nicht geeignet.

Tabelle 2 — Kontrollexperimonte

Zubereitung Verwendete bGH

Zusatz

Gew.-%d. Zusatzes in Lösung

Tage 37 ⁰C

Löslichmachbar-zeit(h)

Unlösl.S. als Gow.-% d.Ausg.-bGH

RRA

Hypox-

Wachstum

Rnttftn

Posten 7500(1)	IPPB	—
Posten 7237 C(D	IPPB	—
Poston 7500(1)	Dextrose	15
Posten 7237 C	Dextrose	51
Poston 7237 C	Mannose	51
Poston 7237 C	Fruktose	50
Posten 7237 C	Maltose	28
Posten 7237 C	Polyethy-
	lenglykol
	(MW = 400)	20
Posten 7500(1)	Ethylen-	50
	glykol
Posten 7237 C	Ethylen-	50
	glykol

15	28	52
19	2,3	39
23	3,2	14
15	2,3	2
19	1,7	3
19	1,7	10
19	2,6	10
18	2,5	36
21	1,5	83

2,6

80

Beispiel 3;

Zwei Experlmento wurden unter Verwendung von Pariow-bGH ausgeführt, d is trocken mit einem Stabilisator gemischt wurde, um die Bedingungen eines Implantats zu simulieren. Die Benetzungsexperinunte wurden folgendermaßen ausgeführt. In ein B0-ml-Röhrchon wurden trockenes Zusatzmittel, trockenes Wachstumshormon und IPPB gegeben. Die Röhrchen wurden dann luftdicht verschlossen und bei 37⁰C19 Tage lang inkubiert. Nach der Inkubation wurden die Probon auf die gleiche Weise wie im Beispiel 1 analysiert. Tabelle 3 unten führt die Daten von den trockenen Zusatzoxpsrimonten auf. Aus don Daten in der Tabelle 3

geht hervor, daß sich dio Verringerung bei den unlöslichen Substanzen nicht wesentlich von der im Beispiel 1 unterscheidet, bsi denen der Zusatz zuerst in Lösung aufgelöst wurde. Folglich demonstrieren die simulierten Implantatexperimento dio Wirksamkeit der vorliegenden Erfindung.

Tabelle 3—Zubereitungon, trocken

Zubereitung Verwendete bGH

Zusatz Gew. Gew. Zus, Menge an Tage d.bGH in Lösung IPPB (pi) 37⁰C

Posten 72:)7 C Pentaery- 40 mg 47 mg 100

thritol Posten 72.')7C L-Sorin 40mg 41mg 150

19 19

Unlösl. RRA Hypox- Gow. % Wachstum

d.Ausg.-l,3H Ratten

27 +

19 +

Beispiel 4:

Um die Effektivität einer implantierten Vorrichtung zu demonstrieren, die Schweinswachstumshormon und einen Stabilisator enthielt, verglichen mit einer implantierton Vorrichtung, die nur Schweinswachstumshormon enthielt, wurden folgende Fypcrimante durchgeführt. In jedes von 20 hohlen Siliiiumröhrchen mit den Abmessungen von 2cm χ 0,7 cm wurdo eine runde Teflon-Scheibe eingesetzt, um jedes Röhrchen in zwei gleichgroße Abteile zu trennen. In jedes Abteil von 10 Röhrchen

(nachstehend als Röhrchen A bezeichnen) wurdon 20 mg Parlow-Schweinswachstu ι ^hormon (Posten 4556) gegeben. Die Röhrchen wurden dann an beiden Enden mit einer mikroporösen Polyethylonschoibo mit einer Porengröße von 70μηι abgedichtet. Die restlichon 10 Röhrchen (nachstehend als Röhrchon B bezeichnet) wurden auf die gleiche Weise vorbereitet, das Parlow-Schweinswachstumshormon war jedoch ein Gemisch der Posten 4654 und 4673. Es wurde kein signifikanter Unterschied zwischen den in den Röhrchon A und B eingesetzten Wachstumshormonen festgestellt. Neben dom Wachstumshormon enthielten die Röhrchon B zusätzlich 80 mg Sukrose, die homogen mit dem Wachstumshormon vor der Einführung in die Röhrchen gemischt wurden.

Jedes Röhrchen wurde subkutan unter das Ohr eines Schweines implantiert. Anschließend wurde das Vorhandensein des Wachstumshormons in den einzelnen Schweinen durch Analyse dor Blutserumpegel gemessen. Das Wachstumshormon wurde in Einheiten von ng/ml gemesson.

Die untenstehende Tabelle 4 gibt die mittlere Zahl an ng des Schweinswachstumshormons je ml Blutserum an, die dem Zeitpunkt entspricht, zu dem die Blutprobe nach der Implantation entnommen wurde.

Tabelle 2 wird mit ihren Daten in der Abb. 1 dargestellt. Außordem wird eine Linie gezogen, um das gewünschte Minimalmaß von 8 ng/ml des Wachstumshormons zu voranschaulichen.

Diese Experimente domonstrioron, daß dio stat 'isiorton Wachstumshormonzubereitungon höhere Konzentrationen des Wachstumshormons im Serum ergeben als das Wachstumshormon allein.

Tabelle 4

Wirkung der Zuführungssystemo auf den Pegel des Wachstumshormons im Blutserum

Tag	Zuführungssystem	B
	A	35,8
1	2,8	45,0
2	3,4	23,2
3	3,8	25,4
5	5,1	7,0
7	4,6	9,3
9	6,9	2,4
11	4,4	2,0
13	2,7

Die oben gegebenen Mittelwerte sind durch Kovarianz mit dnm mittleren Wachstumshormonpegel des Blutes einen Tag vor der Implantation und für Tag 0 abgestimmt worden.

Claims

1. Methode zur Stabilisierung eines tierischen, wachstumsfördernden Hormons, welches die verminderte Bildung von unlöslichen Substanzen und die Erhaltung der löslichen Bioaktivität des Wachstumshormons in einer wäßrigen Umgebung gewährleistet, gekennzeichnet durch das Mischen eines wachstumsfördernden Hormons mit einer effektiven Menge eines Stabilisators, um eine stabilisierte, wachstumsfördernde Zubereitung zu schaffen, bei welcher der Stabilisator aus einer oder mehreren der folgenen Substanzen ausgewählt wird:

(a) einem Polyol, das nus der Gruppe ausgewählt wird, die aus nichtreduzioi anden Zuckern, Zuckeralkoholen, Zuckersäuren, Laktose, Pentaerythritol, wasserlöslichen Dextranen und Ficoll besteht;

(b) einer Aminosäure, die aus der Gruppe ausgewählt wird, die aus Glyzin, Sarkosin, Lysin oder dessen Salzen, Serin, Arginin oder dessen Salzen, Betain, Ν,Ν-Dimethylglyzin, Asparaginsäure oder deren Salzen, Glutaminsäure oder deren Salzen und deren Gemischen besteht;

(c) einem Polymer einer Aminosäure mit einer geladenen Seitengruppe bei einem physiologischen pH-Wert und

(d) einem Cholinderivat, das aus der Gruppe ausgewählt wird, die aus Cholinchlorid, Cholindihydt ogenzitrat, Cholinbitartrat, Cholinbikarbonat, Tricholinzitrat, Cholinaskorbat, Cholinborat, Cholinglukonat, Cholinphosphat, Di(cholin)sulfat und Dicholinmukat besteht.

2. Methode nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß das genannte wachstumsfördernde Hormon ausgewählt wird aus der Gruppe, die aus wachstumsfördernden Schafs-, Human-, Vogel-, Schweins- und Rinderwachstumshormon besteht.

3. Methode nach Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet, daß das genannte wachstumsfördernde Hormon wachstumsförderndes Rinderhormon ist.

4. Methode nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß das genannte Polyol in Mengen zwischen e^f-/va 2,5 und etwa 99Gew.-% der stabilisierten, wachstumsfördernden Zubereitung vorhanden ist.

5. Methode nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß das genannte Polyol Xylitol ist.

6. Methode nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß die genannte Aminosäure in Mengen zwischen etwa 2,5 und etwa 99Gew.-% der stabilisierten, wachstumsfördernden Zusammensetzung vorhanden ist.

7. Methode nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß die genannte Aminosäure Sarkosin ist,

8. Methode nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß das genannte Polymer einer Aminosäure in Mengen zwischen etwa 2,5 bis etwa 99Gew.-% der stabilisierten, wachstumsfördernden Zusammensetzung vorhanden ist.

9. Methode nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß das genannte Polymer einer Aminosäure eine Polyaminosäuro ist, die aus der Gruppe ausgewählt wird, die aus Polylysin, Polyasparaginsäure, Polyglutaminsäure, Polyarginin, Polyhistidin, Polyornithin und Salzen der genannten Polyaminosäuren besteht.

10. Methode nach Anspruch 9, dadurch gekennzeichnet, daß das genannte Polyaminosäuresalz Poly-DL-Lysin-HBrist.

11. Methode nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß das genannte Cholinderivat in Mengen zwischen etwa 2,5 und etwa 99Gew.-% der stabilisierten, wachstumsfördernden Zusammensetzung vorhanden ist.

12. Methode nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß das genannte Cholinderivat Cholinchlorid ist.