CZ90999A3 - Farmaceutický přípravek obsahující antagonistu leptinu vhodný pro léčení inzulínové rezistence u diabetes mellitus II. typu - Google Patents
Farmaceutický přípravek obsahující antagonistu leptinu vhodný pro léčení inzulínové rezistence u diabetes mellitus II. typu Download PDFInfo
- Publication number
- CZ90999A3 CZ90999A3 CZ99909A CZ90999A CZ90999A3 CZ 90999 A3 CZ90999 A3 CZ 90999A3 CZ 99909 A CZ99909 A CZ 99909A CZ 90999 A CZ90999 A CZ 90999A CZ 90999 A3 CZ90999 A3 CZ 90999A3
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- leptin
- leo
- fragment
- antagonist
- ser
- Prior art date
Links
- NRYBAZVQPHGZNS-ZSOCWYAHSA-N leptin Chemical compound O=C([C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(C)C)CCSC)N1CCC[C@H]1C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O NRYBAZVQPHGZNS-ZSOCWYAHSA-N 0.000 title claims abstract description 109
- 229940039781 leptin Drugs 0.000 title claims abstract description 102
- 102000016267 Leptin Human genes 0.000 title claims abstract description 101
- 108010092277 Leptin Proteins 0.000 title claims abstract description 101
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 title claims abstract description 47
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 title claims description 14
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 title claims description 13
- 208000001072 type 2 diabetes mellitus Diseases 0.000 title abstract description 20
- 206010022489 Insulin Resistance Diseases 0.000 title description 13
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims abstract description 27
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 26
- 241001529936 Murinae Species 0.000 claims abstract 4
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 99
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 claims description 50
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 claims description 49
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 claims description 49
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 28
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 claims description 25
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 24
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 claims description 19
- 108010019813 leptin receptors Proteins 0.000 claims description 13
- 102000005861 leptin receptors Human genes 0.000 claims description 12
- 101001063890 Mus musculus Leptin Proteins 0.000 claims description 10
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 claims description 10
- 230000004927 fusion Effects 0.000 claims description 7
- 230000001766 physiological effect Effects 0.000 claims description 6
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 claims description 5
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 claims description 5
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 claims description 4
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 238000001212 derivatisation Methods 0.000 claims description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 3
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 claims description 3
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 claims description 3
- 241000288105 Grus Species 0.000 claims description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims description 2
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 claims description 2
- 230000021736 acetylation Effects 0.000 claims description 2
- 238000006640 acetylation reaction Methods 0.000 claims description 2
- 230000010933 acylation Effects 0.000 claims description 2
- 238000005917 acylation reaction Methods 0.000 claims description 2
- 238000007413 biotinylation Methods 0.000 claims description 2
- 230000006287 biotinylation Effects 0.000 claims description 2
- 229920001477 hydrophilic polymer Polymers 0.000 claims description 2
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 claims description 2
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims 5
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 claims 2
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 claims 2
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 claims 2
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- 238000009472 formulation Methods 0.000 claims 2
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 claims 2
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 claims 2
- SGTNSNPWRIOYBX-UHFFFAOYSA-N 2-(3,4-dimethoxyphenyl)-5-{[2-(3,4-dimethoxyphenyl)ethyl](methyl)amino}-2-(propan-2-yl)pentanenitrile Chemical group C1=C(OC)C(OC)=CC=C1CCN(C)CCCC(C#N)(C(C)C)C1=CC=C(OC)C(OC)=C1 SGTNSNPWRIOYBX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- BMGWZHWESYHXHC-UHFFFAOYSA-N 2-amino-3-methylpentanoic acid;2-amino-4-methylpentanoic acid Chemical compound CCC(C)C(N)C(O)=O.CC(C)CC(N)C(O)=O BMGWZHWESYHXHC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 claims 1
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 claims 1
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 230000021235 carbamoylation Effects 0.000 claims 1
- 238000007385 chemical modification Methods 0.000 claims 1
- 230000022244 formylation Effects 0.000 claims 1
- 238000006170 formylation reaction Methods 0.000 claims 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 claims 1
- 239000008177 pharmaceutical agent Substances 0.000 abstract 1
- 241000282322 Panthera Species 0.000 description 48
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 29
- 210000001789 adipocyte Anatomy 0.000 description 24
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 22
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 16
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 15
- 230000006377 glucose transport Effects 0.000 description 15
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 14
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 14
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 14
- 101100298295 Drosophila melanogaster flfl gene Proteins 0.000 description 12
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 12
- YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N Toluene Chemical compound CC1=CC=CC=C1 YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 230000004132 lipogenesis Effects 0.000 description 12
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 11
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 9
- RZEQTVHJZCIUBT-WDSKDSINSA-N Ser-Arg Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCNC(N)=N RZEQTVHJZCIUBT-WDSKDSINSA-N 0.000 description 8
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 8
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 8
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 7
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 210000000577 adipose tissue Anatomy 0.000 description 6
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 6
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 6
- RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N imidazole Natural products C1=CNC=N1 RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 6
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 6
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 6
- 239000012139 lysis buffer Substances 0.000 description 6
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 6
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 6
- 229920002527 Glycogen Polymers 0.000 description 5
- LDEBVRIURYMKQS-WISUUJSJSA-N Ser-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CO LDEBVRIURYMKQS-WISUUJSJSA-N 0.000 description 5
- GXDLGHLJTHMDII-WISUUJSJSA-N Thr-Ser Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O GXDLGHLJTHMDII-WISUUJSJSA-N 0.000 description 5
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 5
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 5
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 5
- 229940096919 glycogen Drugs 0.000 description 5
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 5
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 5
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 5
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 5
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 5
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- VRYALKFFQXWPIH-PBXRRBTRSA-N (3r,4s,5r)-3,4,5,6-tetrahydroxyhexanal Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CC=O VRYALKFFQXWPIH-PBXRRBTRSA-N 0.000 description 4
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 4
- 208000008589 Obesity Diseases 0.000 description 4
- JEHPKECJCALLRW-CUJWVEQBSA-N Ser-His-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O JEHPKECJCALLRW-CUJWVEQBSA-N 0.000 description 4
- 230000009471 action Effects 0.000 description 4
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 4
- PMMURAAUARKVCB-UHFFFAOYSA-N alpha-D-ara-dHexp Natural products OCC1OC(O)CC(O)C1O PMMURAAUARKVCB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000003042 antagnostic effect Effects 0.000 description 4
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 4
- AIYUHDOJVYHVIT-UHFFFAOYSA-M caesium chloride Chemical compound [Cl-].[Cs+] AIYUHDOJVYHVIT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 4
- 125000000151 cysteine group Chemical class N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 description 4
- 235000020824 obesity Nutrition 0.000 description 4
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 4
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 4
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 4
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 4
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 4
- 230000032258 transport Effects 0.000 description 4
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- SIFXMYAHXJGAFC-WDSKDSINSA-N Arg-Asp Chemical compound NC(=N)NCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O SIFXMYAHXJGAFC-WDSKDSINSA-N 0.000 description 3
- BFOYULZBKYOKAN-OLHMAJIHSA-N Asp-Asp-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O BFOYULZBKYOKAN-OLHMAJIHSA-N 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 3
- 101001063991 Homo sapiens Leptin Proteins 0.000 description 3
- QTZXSYBVOSXBEJ-WDSKDSINSA-N Met-Asp Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(O)=O QTZXSYBVOSXBEJ-WDSKDSINSA-N 0.000 description 3
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 3
- MOVJSUIKUNCVMG-ZLUOBGJFSA-N Ser-Cys-Ser Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)O)N)O MOVJSUIKUNCVMG-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 3
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 3
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 3
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 3
- 238000013461 design Methods 0.000 description 3
- UREBDLICKHMUKA-CXSFZGCWSA-N dexamethasone Chemical compound C1CC2=CC(=O)C=C[C@]2(C)[C@]2(F)[C@@H]1[C@@H]1C[C@@H](C)[C@@](C(=O)CO)(O)[C@@]1(C)C[C@@H]2O UREBDLICKHMUKA-CXSFZGCWSA-N 0.000 description 3
- 229960003957 dexamethasone Drugs 0.000 description 3
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 3
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 3
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 3
- 230000004130 lipolysis Effects 0.000 description 3
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 3
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 3
- 229920005862 polyol Polymers 0.000 description 3
- 150000003077 polyols Chemical class 0.000 description 3
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 3
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 3
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 description 3
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 3
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 2
- DYDKXJWQCIVTMR-WDSKDSINSA-N Asp-Met Chemical compound CSCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O DYDKXJWQCIVTMR-WDSKDSINSA-N 0.000 description 2
- DWBZEJHQQIURML-IMJSIDKUSA-N Asp-Ser Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O DWBZEJHQQIURML-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 2
- 101100398835 Caenorhabditis elegans leo-1 gene Proteins 0.000 description 2
- RGTVXXNMOGHRAY-WDSKDSINSA-N Cys-Arg Chemical compound SC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N RGTVXXNMOGHRAY-WDSKDSINSA-N 0.000 description 2
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L Magnesium chloride Chemical compound [Mg+2].[Cl-].[Cl-] TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- XZKQVQKUZMAADP-IMJSIDKUSA-N Ser-Ser Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O XZKQVQKUZMAADP-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- HYLXOQURIOCKIH-VQVTYTSYSA-N Thr-Arg Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCNC(N)=N HYLXOQURIOCKIH-VQVTYTSYSA-N 0.000 description 2
- XZUBGOYOGDRYFC-XGEHTFHBSA-N Thr-Ser-Met Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(O)=O XZUBGOYOGDRYFC-XGEHTFHBSA-N 0.000 description 2
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 2
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 2
- 230000008485 antagonism Effects 0.000 description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 2
- 239000012298 atmosphere Substances 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 2
- 230000034994 death Effects 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 2
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 2
- 230000037406 food intake Effects 0.000 description 2
- 235000012631 food intake Nutrition 0.000 description 2
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 2
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 2
- 238000005227 gel permeation chromatography Methods 0.000 description 2
- 239000007903 gelatin capsule Substances 0.000 description 2
- 102000049953 human LEP Human genes 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 2
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 2
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 2
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 2
- 230000037081 physical activity Effects 0.000 description 2
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 2
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 2
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 2
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 2
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 2
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 238000009987 spinning Methods 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 239000000829 suppository Substances 0.000 description 2
- 108010027345 wheylin-1 peptide Proteins 0.000 description 2
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JWZZKOKVBUJMES-UHFFFAOYSA-N (+-)-Isoprenaline Chemical compound CC(C)NCC(O)C1=CC=C(O)C(O)=C1 JWZZKOKVBUJMES-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GZCGUPFRVQAUEE-NKKIJKBOSA-N (2r,3s,4r,5r)-2,3,4,5,6-pentahydroxy-3-tritiohexanal Chemical compound O=C[C@H](O)[C@](O)([3H])[C@H](O)[C@H](O)CO GZCGUPFRVQAUEE-NKKIJKBOSA-N 0.000 description 1
- RIRGCFBBHQEQQH-UVCRECLJSA-N (2r,3s,4r,5r)-2-(hydroxymethyl)-5-[6-(1-phenylpropan-2-ylamino)purin-9-yl]oxolane-3,4-diol Chemical compound N=1C=NC=2N([C@H]3[C@@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O3)O)C=NC=2C=1NC(C)CC1=CC=CC=C1 RIRGCFBBHQEQQH-UVCRECLJSA-N 0.000 description 1
- QIVUCLWGARAQIO-OLIXTKCUSA-N (3s)-n-[(3s,5s,6r)-6-methyl-2-oxo-1-(2,2,2-trifluoroethyl)-5-(2,3,6-trifluorophenyl)piperidin-3-yl]-2-oxospiro[1h-pyrrolo[2,3-b]pyridine-3,6'-5,7-dihydrocyclopenta[b]pyridine]-3'-carboxamide Chemical compound C1([C@H]2[C@H](N(C(=O)[C@@H](NC(=O)C=3C=C4C[C@]5(CC4=NC=3)C3=CC=CN=C3NC5=O)C2)CC(F)(F)F)C)=C(F)C=CC(F)=C1F QIVUCLWGARAQIO-OLIXTKCUSA-N 0.000 description 1
- YRIZYWQGELRKNT-UHFFFAOYSA-N 1,3,5-trichloro-1,3,5-triazinane-2,4,6-trione Chemical compound ClN1C(=O)N(Cl)C(=O)N(Cl)C1=O YRIZYWQGELRKNT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000000452 Acetyl-CoA carboxylase Human genes 0.000 description 1
- 108010016219 Acetyl-CoA carboxylase Proteins 0.000 description 1
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- FRYULLIZUDQONW-IMJSIDKUSA-N Asp-Asp Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O FRYULLIZUDQONW-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 108010018763 Biotin carboxylase Proteins 0.000 description 1
- 201000004569 Blindness Diseases 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 241001416092 Buteo buteo Species 0.000 description 1
- 208000024172 Cardiovascular disease Diseases 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 102000029816 Collagenase Human genes 0.000 description 1
- 108060005980 Collagenase Proteins 0.000 description 1
- 229920002261 Corn starch Polymers 0.000 description 1
- 102000012410 DNA Ligases Human genes 0.000 description 1
- 108010061982 DNA Ligases Proteins 0.000 description 1
- 208000002230 Diabetic coma Diseases 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 230000005526 G1 to G0 transition Effects 0.000 description 1
- BCCRXDTUTZHDEU-VKHMYHEASA-N Gly-Ser Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O BCCRXDTUTZHDEU-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 102000000587 Glycerolphosphate Dehydrogenase Human genes 0.000 description 1
- 108010041921 Glycerolphosphate Dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- 101000976075 Homo sapiens Insulin Proteins 0.000 description 1
- 101000852815 Homo sapiens Insulin receptor Proteins 0.000 description 1
- 101000619708 Homo sapiens Peroxiredoxin-6 Proteins 0.000 description 1
- 102000003746 Insulin Receptor Human genes 0.000 description 1
- 108010001127 Insulin Receptor Proteins 0.000 description 1
- 102100034343 Integrase Human genes 0.000 description 1
- 206010023379 Ketoacidosis Diseases 0.000 description 1
- 208000007976 Ketosis Diseases 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 102100031775 Leptin receptor Human genes 0.000 description 1
- XGDCYUQSFDQISZ-BQBZGAKWSA-N Leu-Ser Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O XGDCYUQSFDQISZ-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- FSNCEEGOMTYXKY-JTQLQIEISA-N Lycoperodine 1 Natural products N1C2=CC=CC=C2C2=C1CN[C@H](C(=O)O)C2 FSNCEEGOMTYXKY-JTQLQIEISA-N 0.000 description 1
- 241000721701 Lynx Species 0.000 description 1
- 108010053229 Lysyl endopeptidase Proteins 0.000 description 1
- 102000016943 Muramidase Human genes 0.000 description 1
- 108010014251 Muramidase Proteins 0.000 description 1
- 108010062010 N-Acetylmuramoyl-L-alanine Amidase Proteins 0.000 description 1
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 1
- 206010033307 Overweight Diseases 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 102100022239 Peroxiredoxin-6 Human genes 0.000 description 1
- 239000004743 Polypropylene Substances 0.000 description 1
- 108010092799 RNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 102000006382 Ribonucleases Human genes 0.000 description 1
- 108010083644 Ribonucleases Proteins 0.000 description 1
- UBRXAVQWXOWRSJ-ZLUOBGJFSA-N Ser-Asn-Asp Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CO)N)C(=O)N UBRXAVQWXOWRSJ-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 1
- COLJZWUVZIXSSS-CIUDSAMLSA-N Ser-Cys-His Chemical compound C1=C(NC=N1)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CO)N COLJZWUVZIXSSS-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- FPCGZYMRFFIYIH-CIUDSAMLSA-N Ser-Lys-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O FPCGZYMRFFIYIH-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- BSXKBOUZDAZXHE-CIUDSAMLSA-N Ser-Pro-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O BSXKBOUZDAZXHE-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 235000021355 Stearic acid Nutrition 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- 239000012505 Superdex™ Substances 0.000 description 1
- 241000282898 Sus scrofa Species 0.000 description 1
- 108010006785 Taq Polymerase Proteins 0.000 description 1
- ZMZDMBWJUHKJPS-UHFFFAOYSA-M Thiocyanate anion Chemical compound [S-]C#N ZMZDMBWJUHKJPS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- LUMXICQAOKVQOB-YWIQKCBGSA-N Thr-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)[C@@H](C)O LUMXICQAOKVQOB-YWIQKCBGSA-N 0.000 description 1
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 1
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 1
- LUMQYLVYUIRHHU-YJRXYDGGSA-N Tyr-Ser-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O LUMQYLVYUIRHHU-YJRXYDGGSA-N 0.000 description 1
- GBOGMAARMMDZGR-UHFFFAOYSA-N UNPD149280 Natural products N1C(=O)C23OC(=O)C=CC(O)CCCC(C)CC=CC3C(O)C(=C)C(C)C2C1CC1=CC=CC=C1 GBOGMAARMMDZGR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 1
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 1
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 230000036528 appetite Effects 0.000 description 1
- 235000019789 appetite Nutrition 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-L aspartate group Chemical group N[C@@H](CC(=O)[O-])C(=O)[O-] CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-L 0.000 description 1
- 108010040443 aspartyl-aspartic acid Proteins 0.000 description 1
- 210000000227 basophil cell of anterior lobe of hypophysis Anatomy 0.000 description 1
- 238000010170 biological method Methods 0.000 description 1
- 238000010352 biotechnological method Methods 0.000 description 1
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 1
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 1
- 230000001914 calming effect Effects 0.000 description 1
- 230000001364 causal effect Effects 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 239000013611 chromosomal DNA Substances 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 229960002424 collagenase Drugs 0.000 description 1
- 230000001447 compensatory effect Effects 0.000 description 1
- 239000008120 corn starch Substances 0.000 description 1
- 239000000287 crude extract Substances 0.000 description 1
- ATDGTVJJHBUTRL-UHFFFAOYSA-N cyanogen bromide Chemical compound BrC#N ATDGTVJJHBUTRL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GBOGMAARMMDZGR-TYHYBEHESA-N cytochalasin B Chemical compound C([C@H]1[C@@H]2[C@@H](C([C@@H](O)[C@@H]3/C=C/C[C@H](C)CCC[C@@H](O)/C=C/C(=O)O[C@@]23C(=O)N1)=C)C)C1=CC=CC=C1 GBOGMAARMMDZGR-TYHYBEHESA-N 0.000 description 1
- GBOGMAARMMDZGR-JREHFAHYSA-N cytochalasin B Natural products C[C@H]1CCC[C@@H](O)C=CC(=O)O[C@@]23[C@H](C=CC1)[C@H](O)C(=C)[C@@H](C)[C@@H]2[C@H](Cc4ccccc4)NC3=O GBOGMAARMMDZGR-JREHFAHYSA-N 0.000 description 1
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 1
- 238000009795 derivation Methods 0.000 description 1
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 1
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- DROMNWUQASBTFM-UHFFFAOYSA-N dinonyl benzene-1,2-dicarboxylate Chemical compound CCCCCCCCCOC(=O)C1=CC=CC=C1C(=O)OCCCCCCCCC DROMNWUQASBTFM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 231100000676 disease causative agent Toxicity 0.000 description 1
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 1
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 1
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 1
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 239000012149 elution buffer Substances 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 210000000918 epididymis Anatomy 0.000 description 1
- 201000010063 epididymitis Diseases 0.000 description 1
- 235000020774 essential nutrients Nutrition 0.000 description 1
- ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N ethidium bromide Chemical compound [Br-].C12=CC(N)=CC=C2C2=CC=C(N)C=C2[N+](CC)=C1C1=CC=CC=C1 ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960005542 ethidium bromide Drugs 0.000 description 1
- 210000001723 extracellular space Anatomy 0.000 description 1
- 239000003925 fat Substances 0.000 description 1
- 230000004136 fatty acid synthesis Effects 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 1
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 238000005188 flotation Methods 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 235000003599 food sweetener Nutrition 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 150000002303 glucose derivatives Chemical class 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-L glutamate group Chemical group N[C@@H](CCC(=O)[O-])C(=O)[O-] WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-L 0.000 description 1
- 230000009931 harmful effect Effects 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 102000047882 human INSR Human genes 0.000 description 1
- 239000003906 humectant Substances 0.000 description 1
- ZMZDMBWJUHKJPS-UHFFFAOYSA-N hydrogen thiocyanate Natural products SC#N ZMZDMBWJUHKJPS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 239000008011 inorganic excipient Substances 0.000 description 1
- PBGKTOXHQIOBKM-FHFVDXKLSA-N insulin (human) Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H]1CSSC[C@H]2C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=3NC=NC=3)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CNC1=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O)=O)CSSC[C@@H](C(N2)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CN)[C@@H](C)CC)[C@@H](C)CC)[C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)C1=CN=CN1 PBGKTOXHQIOBKM-FHFVDXKLSA-N 0.000 description 1
- 230000003914 insulin secretion Effects 0.000 description 1
- 229960004903 invert sugar Drugs 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 125000000741 isoleucyl group Chemical group [H]N([H])C(C(C([H])([H])[H])C([H])([H])C([H])([H])[H])C(=O)O* 0.000 description 1
- 229940039009 isoproterenol Drugs 0.000 description 1
- 208000017169 kidney disease Diseases 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 230000002045 lasting effect Effects 0.000 description 1
- 125000001909 leucine group Chemical group [H]N(*)C(C(*)=O)C([H])([H])C(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 230000037356 lipid metabolism Effects 0.000 description 1
- 230000003520 lipogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 239000004325 lysozyme Substances 0.000 description 1
- 229960000274 lysozyme Drugs 0.000 description 1
- 235000010335 lysozyme Nutrition 0.000 description 1
- 229910001629 magnesium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 208000030159 metabolic disease Diseases 0.000 description 1
- 230000037353 metabolic pathway Effects 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- DJGAAPFSPWAYTJ-UHFFFAOYSA-M metamizole sodium Chemical compound [Na+].O=C1C(N(CS([O-])(=O)=O)C)=C(C)N(C)N1C1=CC=CC=C1 DJGAAPFSPWAYTJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 230000000116 mitigating effect Effects 0.000 description 1
- 210000004400 mucous membrane Anatomy 0.000 description 1
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- QIQXTHQIDYTFRH-UHFFFAOYSA-N octadecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O QIQXTHQIDYTFRH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OQCDKBAXFALNLD-UHFFFAOYSA-N octadecanoic acid Natural products CCCCCCCC(C)CCCCCCCCC(O)=O OQCDKBAXFALNLD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000008012 organic excipient Substances 0.000 description 1
- 230000003204 osmotic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 description 1
- 210000000496 pancreas Anatomy 0.000 description 1
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 1
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- -1 polypropylene Polymers 0.000 description 1
- 229920001155 polypropylene Polymers 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 238000011533 pre-incubation Methods 0.000 description 1
- 210000000229 preadipocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 239000011535 reaction buffer Substances 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000029964 regulation of glucose metabolic process Effects 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000010405 reoxidation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 239000003161 ribonuclease inhibitor Substances 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 1
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 239000008117 stearic acid Substances 0.000 description 1
- 238000005728 strengthening Methods 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 239000003765 sweetening agent Substances 0.000 description 1
- 230000009897 systematic effect Effects 0.000 description 1
- 238000007910 systemic administration Methods 0.000 description 1
- 239000000454 talc Substances 0.000 description 1
- 229910052623 talc Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 1
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 1
- 235000015112 vegetable and seed oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000008158 vegetable oil Substances 0.000 description 1
- 235000013311 vegetables Nutrition 0.000 description 1
- 230000004393 visual impairment Effects 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 239000001993 wax Substances 0.000 description 1
- 230000004580 weight loss Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/575—Hormones
- C07K14/5759—Products of obesity genes, e.g. leptin, obese (OB), tub, fat
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
- A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
- A61P5/48—Drugs for disorders of the endocrine system of the pancreatic hormones
- A61P5/50—Drugs for disorders of the endocrine system of the pancreatic hormones for increasing or potentiating the activity of insulin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Description
Farmaceutický přípravek obsahující antagonistů leptinu vhodný pro léčení inzulínové rezistence u diabetes mellitus II. typu
Oblast techniky
Předkládaný vynález se týká použití antagonistů leptinu pro léčení inzulínové rezistence u diabetes mellitus II. typu a léčiva pro léčení takové rezistence.
Dosavadní- stav techniky '
Diabetes mellitus je jedno, z nejčastěji se vyskytujících onemocnění metabolismu v průmyslových zemích. Na celém světě jě kolem 110 milionů diabetiků, a zatímco přibližně IQ* 1 II.' milionů jsou diabetici I. typu, převažující většina (přibližně 100 milionů) jsou diabetici II. typu. Nemoc je způsobena chybnou regulací metabolismu glukózy.· U diabetů
I. typu má selhání β buněk pankreatu za následek to, že se dále netvoří inzulín. Nedostatek inzulínu vede ke zvýšení glukózy v séru a, 'jestliže není léčen dodáním inzulínu, ke ketoacidóze, diabetickému kómatu a smrti pacienta. U diabetů
II. typu jsou příčinné vztahy odlišné a jsou charakterizovány počátečním vývojem inzulínové rezistence, tj. poklesem schopnosti buněk odpovídat adekvátně na inzulín. Nadměrná váha a zejména nedostatek tělesné aktivity jsou považovány za významné faktory pro vyvolání inzulínové rezistence. Ta není zpočátku zpozorována, protože je kompenzována zvýšenou sekrecí inzulínu. Avšak pokračující inzulínová rezistence vede během procesu probíhajícího po mnoho let k selhání' endogenního kompenzačního mechanismu a následnému rozvoji diabetů II. typu. Zatímco dieta a tělesná aktivita mohou
Μ «·· • 9 9 · · * φ » 9 9 9 * *
9 · · · · * «99 99 ♦· ’♦ • * «« ·· tento postup událostí oddálit, jsou' .často neschopné zabránit· ' manifestaci, nemoci. Pak je pro ‘-adekvátní kontrolu sérové glukózy zapotřebí lékařská intervence.
Rozhodující důležitost pro dlouhodobý úspěch léčby má, .že sérová -glukóza je udržována tak těsně,, jak je to jen .
možné,' ve fyziologickém rozmezí.. Současné, hledisko je, že hladiny glukózy, ·. které byly zvýšeny po .desetiletí, jako je tomu u špatně kontrolovaných' diabetiků (diabetici I.' i- II.
typu), významně přispívají k pozdním komplikacím-, u diabetů.
Tyto pozdní komplikace' jsou podstatou' poškození zejména krevních cév,, což vede k onemocněním ledvin, ztrátě zraku a kardiovaskulárním chorobám. Tdto takzvané pozdní poškození je důležitý faktor, který přispívá k úmrtnosti· diabetiků.
V roce 1994 byl 'popsán nový hormon í.eptin, · který_j e~ · tvořen v tukových buňkách '.a který chybí u myši s'geneticky . .způsobenou nadváhou '(myši ob/ob) (Zhang, Y.·, Proenca, R.,Maffei, M., Barone, . M., Leopold, L. a Friedman, . J.M.',.'
Positional cloning. of the mouše obese gene ,. and its human homologue, Nátuře, 372, 425-432, 1994). Lidský' a myši leptin jsou ďo velké míry identické. Podávání . injekcí rekombinantně připraveného leptinu 'myším ob/ob ' vede. ke 'snížení příjmu potravy a ke snížení váhy (Pelleymounter, Μ.A.,. Cullen, M.J.,
Baker., M.B., ,' Hecht, R., Winters, D., Boone, T. a Collins, F.,
Effects of the obese gene product ón body weight regulation in ob/ob ' mice, Science, 269, 540-543, 1995) . Doposud neexistuje údaj,' že mutace v genu ob .by mohla být'odpovědná za častý výskyt obezity u lidí (v USA je přibližně 30 .% populace se značnou.nadváhou) . ' Systematický, výzkum prokázal, že sérové' hladiny leptinu jsou- u obézních lidí zvýšeny,., stejně jako jsou zvýšeny v různých zvířecích modelech obezity (Dagogo-Jack, S., , Fanelli, C.,. Paramore, D., Brothers, J.
« 4 9 ·· ·« · · · 49 *
4 4 9 4 · · · • Φ * · · ·*
ΦΦ ·· • · 4 4 9 .4 4 4
444 ·«· • · • Φ ·· a Lándt, M., Plasma leptán and insulin relationships. in obese and'nonobese humans,'Diabetes, 45, '695-698, 1996, Considine,
R.V., Sinha, M.K., Heiman, M.L., Kriauciunas, A.. Stephens,
TiW., Nyce, M.R., Ohannesian, J.P., Marco, C.C., McKee, L.J., Bauer, T.L. a .Caro, J.F.,', Sérum, immunoreactive leptin concentrations in normai-weíght and obese humans, N. Engl. J. Med., '334, 292-295, 1996). Z tohoto důvodu se předpokládá, že leptin je signál zpětné vazby,· který informuje mozek o' množství energie,, která je uložena· v tukové tkáni. Podle tohoto předpokladu' je poté funkci mozku na jedné straně sníženi příjmu potravy 'tím, že inhibuje chuť k jídlu, á na druhé straně stimulace bazálního metabolismu. Zdá se, že v případě lidské obezity je tento regulační okruh přerušen.
Kromě toho se předpokládá, že leptin také působí přímo na A káně vně mozku. ” ' ” — ~ ”
Doposud byly publikovány tři studie týkající se přímého účinku· leptinu-na izolované buňky:
Kroder et al. (Kroder, . G., Kellerer, M. a Háring, H., Exp. Crin. Endocrin. Diabetes, 104,. Suppl. 2, ' 66 (abstrakt), 1996) předpokládali, že leptin tvoří spojení mezi inzulínovou rezistencí a obezitou a uvádějí,' že leptin snižuje inzulínem vyvolanou fosforylaci inzulínového receptorů a substrátu 1
I inzulínového ' receptorů (IRS-1). v krysích fibroblastech 1, které nadměrně exprimují Lidský inzulínový receptor. Rozsah ovlivnění konečného účinku inzulínu 1’eptinem, například stimulace glukózového transportu nebo syntéza glykogenu, nebyl zkoumán ani diskutován.
;Bylo . dokázáno, že citlivost -ha lipogenní ' hormony (dexametazon a inzulín) je v transformovaných preadipocytech
30A5, které nadměrně exprimují leptin, snížena' (Bai, Y.L.,
Zhang, S.Y., Kim, K.S., Lee, J.K. a Kím, K.H., J.· Biol.
• . * • 0 ·*0· • 00 « · • « • 0· t 0 0 * ·· 0·
0· k «0 « ι 0 0 1 ··· ··’ • <
»0
Chem., 271, 13939-13942, 19.96). Syntéza mastných kyselin a .syntéza'neutrálních lipidů byla snížena nadměrnou expresí leptinu dokonce i v nestimulovaném. stavu. Zatímco kontrolní buňky .projevovaly značné zvýšení rychlosti lipidové syntézy poté, co. byly.'buňky ošetřeny dexametazonem nebo inzulínem, nebo kombinací obou hormonů, buňky, . které nadměrně exprimovaly leptin, byly za těchto podmínek stěží vůbec· stimulovány.. Kromě· toho se- také zkoumala- inhibice aktivity glycerofosfátdehýdrogenázy a exprese acetyl-CoA-karboxylázy,' která nastává po . ošetření buněk kombinací ' dexametazonu a inzulínu. Bylo nalezeno, .že nebylo, možné stimulovat buňky exprimující leptin. Pozorované .účinky nažnačují, že leptán obecným způsobem tlumí lipidový metabolismus. 0 jakémkoliv . c možném spojení, mezi obezitou a inzulínovou rezistencí nebvla.
¥· 'zmTmra. .
V dalším modelovém' systému,, tj . ' y systému C2Ci2 myších svalových svazků, bylo zjištěno, že leptin projevuje účinky podobné . inzulínu (Berti, L., Kellěrer, M. a Haring, H..., . 1, A59 (abstrakt), transport glukózy, glykogenu,· jsou' stimulovány 'leptinem. Tyto nálezy jsou v rozporu s těmi, které, publikovali jiní autoři,' a také s výsledky, které jsou uvedeny zde. Možná se tykají účinku, který je specifický pro. tento buněčný typ.
Diabetologia, 39, Suppl studie uvádí, že jak
1996);. Tatotak syntéza
Podstata vynálezu překvapivě zjištěno, metabolických drah
V- našem výzkumu účinku leptinu na, izolované krysí adipočyty, modelovém . systému pro tukovou tkáň, bylo nyní že citlivost na inzulín důležitých tukové buňky, jako· je štimulace «· ·Φ·Φ ·« φ ·♦
I Φ » Φ * · · . · « ι» *· lipogeneze,; transport .glukózy a tvorba glykogenu, je drasticky snížena' (příklad 4), zatímco bazální hodnoty, zůstávají’ neovlivněny,. To samé se týká inhibice lipo.lýzy.
stimulované isoproterenolem. Glukózový transport : v. izolovaných krysích adipocytech je- přidáním 'inzulínu '•(10 nM) stimulován přibližně 14x. Tato. .kapacita, stimulace je snížena', způsobem závislým na dávce předběžnou inkubací s leptinem' v. různých koncentracích 15 hodin..' Leptin snižuje citlivost .'buňky/ tj . vytváří' inzulínovou rezistenci.' Křivky závislosti dávka/účínek pro inzulín při· různých koncentracích leptinu (přiklaď 5) dokazují, že- koncentrace, při kterých mohou být 'účinky detekovány již in vitro, což se týče jak inzulínu (0,1 -0,2 nM) , tak i leptinu'(0,5 - 1 nM), jsou ve. fyziologickém rozmezí (Dagogo-Jack et al., 1996, -Consídine et al 1996.) .. U .obézních lidí . j sou nalézány vyšší. hladiny leptinu (2-4 nM) (Dagogo-Jack et al., 1996, 'Consídine et al., 1996), takže je možné/ že- účinek inzulínu · je u těchto subjektů výrazněji 1 zhoršen. Závěr tedy svědčí pro to,, že chronicky zvýšený leptin, jak může být pozorován u obézních . subjektů, vede k inzulínové . rezistenci. Jak bylo j.iž . vysvětleno, výše, inzulínová rezistence j e' důležitý faktor v patogenezi diabetů II. typu.
Je proto, cílem vynálezu poskytnout nové antagonisty leptinu, které' mohou být formulovány ve farmaceutických přípravcích. Dalším cílem' .vynálezu, je. poskytnout' způsoby léčenídiabetů II. typu a jiné poruchy, které jsou, ve vztahu : s inzulínem. .’ ‘
Vynález sé následně týká. použití antagonistů/ leptinu, obzvláště těch,které jsou odvozeny od samotného leptinu, pro přípravu léčiva · pro použití u diabetes mellitus II. typu.
' 0
0 •
0
0*00 .6. .
•
000 0 · ·
··
0 · • · · ♦ ·
0 0 * ·*
00' · · · 0 ·0·
Antagonisté· leptánu pro toto použití-jsou detailněji popsány níže. - ' ' .
Podle prvního' cíle vynález -poskytuje . farmaceutické přípravky,· které .obsahují 'antagonistu leptínu. -Podle téhož .cíle' jsou popsány farmaceutické přípravky, . které- obsahují antagonisty leptinu, .'které -jsou odvoleny, z.leptánu.. Dále podle-tohoto cíle jsou popsány farmaceutické přípravky, které r· ' 1 - * obsahují · antagonistu leptinu, což 'je rozpustný receptor leptinu, nebo jeho derivát.
Podle ..druhého cíle vynález poskytuje·' způsoby, které používají 'farmaceutické přípravky .podle předkládaného’ vynálezu v-léčení diabetů II. typu. Podle,tohoto cíle vynález dále. 'poskytuje' .způsoby pro obnovení nebo. zesílení fyziologického účinku inzulínu..
Popis tabulek ' ,
Tabulka 1: ' Inhibice leptiňem . glukózovéhó transportu, vyvolaného inzulínem v krysích adipocytech. Pokus je detaílněpopsán v příkladu'8. ' ’ • I
Tabulka 2: Vychytávání 2-děoxyglukózy'krysími adipocyty jako funkce koncentrace leptinu.- Pokus je detailně popsán 'v příkladu 8.
Tabulka. 3: Antagonismus leptinového účinku fragmentem .leptinu 116—167 ve vztahu ké glukózovému transportu vyvolanému inzulínem v krysích adipocytech. Pokus je· detailně popsán v příkladu'10. ‘ ··*
7'
Tabulka 4: Aminokyselinová· sekvence lidského leptinu. Dva cysteiny jsou spojeny, disulfidovým můstkem.
Tabulka 5: 'Aminokyselinová sekvence myšího leptinu. Dva cysteiny jsou spojeny disulf idovým můstkem...
Tabulka 6: Aminokyselinová sekvence fragmentu 116-167· myšího leptinu. Dva cysteiny jsou .spojeny disulfidovým můstkem.
Detailní popis vynálezu .Vynález, který.je zde předkládán/ směřuje k přípravkům· a způsobům pro .snížení' nebo úplné Odstranění inzulínové rezistence inhibici·. účinku., leptinu. Pro'.· tento---účel-.mohou být použity peptidy, které působí jako antagonisté leptinu a. které vedou v izolovaných tukových buňkách in vitro ke i
zrušení leptinem.vyvolané inzulínové rezistence. 'Tyto peptidy jsou'v-důsledku toho vhodné pro léčbu inzulínové rezistence, výhodně u obézních pacientů.
Antagonisté leptinu · r
Antagonisté' leptinu podle vynálezu specificky' zahrnují peptidové antagonisty. Uvedené peptidy jsou odvozeny z fragmentů leptinu a mohou být' získány například chemickým nebo enzymatickým štěpením intaktního leptinu (např. lysylendopeptidázou,· trypsinem, endopArg C nebo cyanogenbromídem) nebo, , mohou být připraveny tak, že .jsou exprimóváriy, ' přímo .nebo . jako fůzní protein, v mikroorganismech. Ve spojení s přípravou peptidů v mikroorganismech není nutno spoléhat. na- přítomnost • flfl flfl · • flflfl fl « • · I · · · ♦ fl fl**· » · · « flfl fl* «· ·· · · · · » flflfl· fl.fl ··· ··· • · ·' • fl «· přirozených štěpných míst při výběru fragmentů,· které mají být exprimovány.' Pro odvo.zování těchto1 peptidů jsou vhodné lidský a zvířecí leptin, například krysí, myší, prasečí' nebo z antropoidní opice.
Jeden vhodný typický peptid je fragment zahrnující, úsek od aminokyseliny , 116 k aminokyselině ' 167 nebo . od aminokyseliny 116. k aminokyselině' 166 (tabulka 6, sekvence
I ' id: č. 1 4) podle sekvence, kterou publikovali Zhang et al,« (1994) (příklady 3 a 6) . V. příkladu 6 byly inkubovány adipocyty··· přibližně 15. . hodin v přítomnosti 10 nM . leptinu a různých koncentracích antagonistického fragmentu leptinu 116-167. Buňky byly poté stimulovány 5 nM inzulínem. V tomto pokuse bylo objeveno, že rostoucí množství- antagonisty vede k.obnovení kapacity pro stimulaci inzulínem a v přítomnosti' ••vysokých .koncentrací antagonisty leptinu se nevyvíjí žádná rezistence. Tedy při použití tohoto a, podobných testů může·· odborník snadno zjistit antagonistické vlastnosti každého by. . byl použitelný podlé také použity. analogy 'antagonisty leptinu, který předkládaného vynálezu.
Kromě toho, mohou být antagonistických fragmentů leptinu, ve .kterých je jedna nebo více aminokyselin nahrazeno nebo odstraněno. Výhodné náhrady jsou substituce konzervativních . aminokyselin. Takové konzervativní 'substituce,· zahrnují substituce aminokyselin nabitá-nabitá, polární-polární a hydrofobní-hydrofobní. Například jeden 'nebo více zbytků aspartátu může být nahrazeno ' zbytky glutamátovými a/nebo naopak a/ňebo jeden nebo více * I ' leucinových zbytků může být nahrazeno izoleucinovými zbytky a/nebo naopak. Další substituce a delece -mohou být tvořeny' racionálně na· základě sférických a strukturálních, zřetelů,
44· chemicky, formylače, jako je např. velikost aminokyseliny a sklon k vytvářeni nebo naopak narušování šroubovicové struktury.
Pro změnu a optimalizaci antagonistických vlastností uvedených peptidů specifickým způsobém 'se , mohou použít ‘ ' I molekulárně biologické'a biotechnologické metody. Kromě toho, aby se. zvýšila jejich stabilita nebo moduloval jej.ich-poločas
,. v plazmě a farmakoki.netika, mohou . být , peptidy modifikovány například pomočí acetylace, -karbamoylace, biotíňylace, acylace , nebo, 'derivatizace' s polyetylehglykolem nebo hydrofilhími polymery/
Protilátky proti leptinu, zejména jejich domény vázající lepťin, jsou jako antagonisté leptinu pro uvedený účel také vhodné. Kromě toho jsou také vhodné rozpustné' leptinové receptory a/nebo fragmenty leptinových receptorů, a jejich fúze . š, jinými . -proteiny ·. (např.. · oblast,F.c .-Ig'Gj.. . ..Každý antagonista leptinu, který je protein, ..může být’ změněnprostředky molekulární biologie, jako antagonisté peptidů. Podobně -mohou být tyto antagonisté připraveny tak, že jsou nebo jako fúžní 'protein, exprimovany,. -přímo v mikroorganismech nebo v libovolném expresních systémů. · počtu standardních
Farmaceutické prostředky . . '
Vynález se dále týká léčiva, které obsahuje antagonisty leptinu,- které jsou -popsány v této patentové přihlášce.
Léčivo' může být ' použito například ve formě farmaceutického přípravku, .který může-být podáván perorálně, například ve formě -tablet, obalených tablet, .tvrdých nebo měkkých želatinových tobolek, roztoků, ' emulzí nebo suspenzí. Mohou být také podávány rektálně, například ve' formě čípků nebo parenterálně, .například- ve' formě -injekčních . roztoků.
·· ···· ··' »' β| » β► · · ·, ) * · · ··· »
»« ·
10'
Léčiva· mohou být- také podávána prostřednictvím sliznic nosu, úst nebo plic. Aby se 'vytvořily farmaceutické v přípravky, mohou být tyto. sloučeniny spojeny s terapeuticky .inertními, organickými .a anorganickými excipienty; Příklady takových excipientů. pro tablety, - obalené tablety- a tvrdé želatinůvé tobolky j'-sou laktóza, kukuřičný škrob nebo j.egich deriváty, talek a kyselina ..stearová nebo její soli- Pro .přípravu··, roztoků jsou vhodné excipienty voda, polyoly, , sacharóza, invertní cukr a glukóza. Pro. injekční roztoky jsou·, vhodnými excipienty voda,, alkoholy, polyoly, glycerol a: rostlinné oleje. Pro čípky jsou vhodnými; excipi.enty rostlinné a ztužené oleje, vosky, tuky a polo,tekuté polyoly. Farmaceutické přípravky mohou také obsahovat konzervačníy prostředky, . rozpouštědla, stabilizátory, zvlhčovadla,·· emulgátory, sladidla, , · barviva, '.. chuťová 'korigenčia, soliý přo, změnu osmotického 'tlaku, pufry,- obaibvací činidla, - antioxidanty . a, je-li to vhodné, -také další léčebně aktývní· sloučeniny.
Výhodné' je perorální podávání a injekce. .Pro injekce- s.enoví an.tagonis té leptinu formulují ve vodném roztoku, výhodně ve fyziologicky přijatelném .pufru jako je Hanksúv nebo Ringerův roztok. Ale noví antágonisté.leptinu se; mohou také formulovat v pevné formě s tím, že se rozpouštějí nebo suspendují před použitím. . 1
Typické přípravky obsahují léčebně prospěšné .množství antagonisty leptinu. Léčebně prospěšné - množství může býttotéž jako léčebně účinné množství, jak se 'diskutuje níže. Kromě toho, léčebně prospěšné množství ,může být jednotková léková ' forma, která může , být použita buď sama· nebo v násobcích, .pro' poskytnutí', léčebně účinného množství antagonisty leptinu. Tedy léčebně prospěšné množství sé bude vztahovat, inter alia, k povaze poruchy, která má být-léčena.
·· · · * 0 0 0 · «* 0* ·*«* • · · · :··. ,: : ·♦ * ..· « · · * · • ·« ·« *· ··
Způsoby léčení • Způsoby vynálezu jsou použitelné v léčení každé poruchy, která .zahrnuje .působení léptinu. Z pohledů' vlastností' předkládaného .vynálezu· a pozorování, že leptin inhibuje některé z fyziologických aktivit inzulínu, jsou způsoby podle předkládaného vynálezu užitečné· .zejména'· v léčení poruch,· které zahrnují odchylky inzulínové aktivity, a·, obzvláště u diabetů II. typu. Takové odchylky v aktivitě inzulínu zahrnují . změny v lipogenezi, transportu ' glukózy,. ,tvorbě glykogenu 'a lipolýze., Způsoby podle předkládaného vynálezu tudíž zahrnují způsoby léčení diabetů II. typu a způsoby - . ' t obnovení nebo zesílení fyziologických účinků inzulínu.
Typický způsob znamená podávání pacientovi, který tuto léčbu potřebuje, léčebně účinné množství antagonisty, leptinu. Pacient. tut.o léčbu potřebuje,· když trpí poruchou zasahující do činnosti leptinu. Léčba je obzvláště indikována, j estliže pacient 'trpí diabetem II. typu. Léčba je také indikována, •jestliže pacient trpí poruchou charakterizovanou odchylkou v aktivitě inzulínu, jako jsou změny v lipogenezi, transportu glukózy, tvorbě glykogenu a lipolýze.· U ,poruch, kde jsou zapojeny takové odchylky,· jsou užitečné způsoby obnovení nebo. zesílení fyziologických účinků inzulínu.
Léčebně účinné množství závisí například na povaze léčené poruchy, , způsobu podávání, konkrétních vlastnostech vybraného antagonisty a. zejména na úsudku .ošetřujícího lékaře. Obecně léčebně účinné množství je množství postačující, pro provedení léčení cílené nemoci nebo pro· uskutečnění vytyčeného cíle způsobu, například obnovení nebo zesílení fyziologických účinků inzulínu. Konečně terapeuticky účinné množství . závisí na klinicky určené -účinnosti • 9 ··
• ·9 • · ·
999 • 9 φ · «»* * ·
99 · · * · « · 9 · · • 9 99« 999 · *
99 ·· .12 a toxicitě každého antagonisty leptinu. Taková určeni jsou • ' rutinně a dobře prováděna klinickým odborníkem..
Termín „léčení ve svých různých gramatických formách se ve vztahu k předkládanému vynálezu týká prevence, léčení, zvrácení, zmírnění,, zklidnění, minimalizace, potlačení nebo zastavení škodlivých 'účinků nemoci, postupu nemoci, příčinného agens nemoci, nebo jiného abnormálního stavu.
Dávky, které jsou výhodné pro systémové podávání, jsou přibližně 0,01 mg/kg až přibližně 50 mg/kg'tělesné hmotnosti a den. „ . ,
Vynález je dále- podrobněji vysvětlen pomocí příkladů .a tabulek, aniž by, jimi.byl jakkoliv omezován.
Příklady provedení vynálezu''
Příklad 1
Klonování myšího leptinu
Izolace RNA - dospělým myším je 'odstraněna tuková, tkáň nadvariat a je okamžitě zmražena v tekutém dusíku. 1 gram tukové tkáně je rozdrcen v třecí misce .pod tekutým dusíkem, a,poté se přidá. 15 ml 5M roztoku guanidiumthio'kyanátu v 50mM Tris (pH 7,5), lOmM EDTA ď 0, ÍM DTT, a vše se důkladně homogenizuje, aby ' se získala jemná disperze. Poté, c.o byly· části tkáně kompletně homogenizovány, přidá se 10 g pevného CsCl a směs se míchá při teplotě místnosti. Po přidání 10 ml H2O se 25 ml tohoto roztoku navrství v.centrifugační zkumavce nad 9 ml .5,7M roztoku CsCl.· Po stočení trvajícím 15 hodin v rotoru- SW28 při 25 000 řpm jl8 °C) , je zkumavka hluboce • to ·· • # · · • · · to · • · ·*· ··· to to ® »* ♦· ·· « toto • · · to ·· • , * * to • toto toto • to toto*· to · to to
13' zmražena v tekutém dusíku a spodní čtvrtina zkumavky se odřízne horkou čepelkou skalpelu, zmražený, obsah se odebere a pelet RNA se seškrábne zespoda. RNA je rozpuštěna, a poté precipítována etanolem.
Syntéza .cDNA - Směs 1 pg celkové RNA z tukové tkáně a 1 pg' specifického .· oligonukleotidového. primeru
5J-GAAŤGCAGAATAAATAAATA (sekvence identifikačního čísla (id. č.)l, Žhang et al., 1994) se rozpustí v 10 pl H2O, a-poté se zahřátím· denaturuje a inkubuje se '5 min v 65 ’C. Po přidání '0,5. μί inhibitoru RNázy,' 5 nmol každého z dNTP' -a, .0,5 μί reverzní transkriptázy AMV '(Boehrínger Mannheim) se směs inkubuje 1 hodinu ve 42 °C. Toté je cDNA' doplněna ría 200 pl H20 a uskladněna při -20 ?C.
PCR - 3 pl cDNA se specifickým primerem se amplifikuje , -sý,5., pg.. každého .....ze .dvo.u . primerů 5' -GAAAGAAGGATC- CAGTGCCTATCCAGAAAGTCCA (sekvence id. č. 2)- a 5' -GGAGAGAAGCTT. GAGGGAGAGAAATGAATGATGG ' (sekvence id. č. 3, Zhang et.al., 1994) a 2,5 U Taq polymerázy (Perkin Elmer) po 30 cyklů v reakčním -pufru. doporučeném výrobcem (l,5mM MgClj, 2θ0μΜ dNTP, ve 100 pl) . Každý cyklus se skládá z 1 min. v 94 °C, min. v 55 QC‘a 2 min. v· 72 °C.
Ligace - specificky amplifikovány produkt PCR (velikosti
583,bp) z reakce PCR je štěpen, pokaždé ve 37 °C 2 hodiny a v pufru, jehož složeni je v souladu s instrukcemi výrobce·, s restrikčními enzymy BamHI a Hindlll (Boehrínger Mannheim), poté . je fragment o' velikosti· 564 bp purifíkován elektroforézou ’ a izolován. Je inkubován ve 30·. °C 2 hodiny ve '20 pl, spolu s . 0,1 pg vektoru pQÉ31 (Qiagen) naštěpeného BámHI a Hindlll a.20 U T4 DNA ligázy (New England Biolabs).
Klonování - 5 pl ligační směsi se drží 30 min. na ledu spolu se 100 pl transformačně kompetentních buněk '£. coli *« «·»·
·. »» * » · · • · * * · * · ··· ··· • · · ·* ·· ·· · * · · ♦ * ·· ·· ·· kmene HB101 a směs je poté jemně třepána 5 minut ve vodní lázni ve, 37 ŮC. Po přidání 0,9 ml živného média obsahujícího •10. mM MgClž se směs třepe 1 hodinu ve 37 °C. Objemy po 100 μΐ této směsi jsou naneseny na agarové misky obsahující ampicilin (100 ^g/ml). .
Identifikace . klonů - klony, které vyrostly- přes. noc' při 37 °C 'se inokulovaly do tekutých, tkáňových kultur ' o objemu 2 ml obsahujících ampicilin, pěstovaly se do stacionární fáze/ a poté se· stočily. Buňky se suspendovaly v 0', 1'ml- 25mM Triš (pH 8) , 50. mM glukózy, 10 mM EDTA a lysozymu (2 mg/ml) a, poté co se inkubovaly při' teplotě místnosti 5 minut, se lyžovaly přidáním 0,2 ml 0,2M NaOH, 1% SDS. Chromozomální DNA še precipitovala přidáním 150 μΐ 3M octanu sodného/kyseliny octové (pH 5,2}' a stočila se 5 minut' při 4. °.C (10 000 rpm .
v Sigma . 2MK). .Plazmidová, DNA se precipitovala 2,5. objemy etanolu, stočila (viz výše)· a' pů omytí etanolem 'doplnila' do 100 μί-H2O, a přidalo· se 10 μΐ roztoku RNázy '(10 mg/ml) .
Plazmidová DNA se naštěpila restrikčními enzymy (BglI, Xhol + PvuII, Boehringer Mannheim) podle instrukcí, výrobce, a výsledné fragmenty DNA se měřily proti DNA' standardu v agarózovém· gelu po elektřofóréze a obarvily ethidiumbromidem. Klony, které měly správné fragmenty,, se zkoumaly stejným způsobem za použití restrikčního enzymu Á-flIII (New , England Bioiabs) . na přítomnost -zbytku glutaminu 49. ' '
Identita jednoho klonu E. coli obsahujícího Gln4.9 (pQEob3-9). a jednoho klonu neobsahujícího. Gln49 (pQEob3-4) byla potvrzena prostřednictvím sekvencování rekombinantního leptinu obsahujícího
MetArgGlySer (His) SThrAspPro ..(z vektoru pQE31)
DNA'. Tvorba ' presekvenci následovanou
• · ·. • * • · *· ·· .
»· ···· • · • · ·
aminokyselinami 22 až 167 z'myšího leptánu se kontrolovala’ v malých tkáňových kulturách. ' .
Zatímco oba rekombinantní leptány (s -a bez Gln49) mohou
I být použity v pokusech, které jsou popsányníže, příklady se specificky týkají leptinu, .který obsahuje Gln49 a který je ' ' · f získán expresí pQEob3-9.
Příklad 2
Příprava leptinu- .
Disrupce - baktérie z 10 1 'fermentoru byly odstředěny při 4800 rpm 20 min. Sediment se zmrazil při -20 °C a pak se suspendoval· v lyzovacím pufru (6M' guanidiumchlorid, 0,lM NaH2PO4, lOmM Tris/HCl, pH 8} (5 . ml lyzovacího pufrů/g' sedimentu) , a poté ' se směs míchala .při teplotě místnosti jednu hodinu a stočila se při.4800 rpm 30 min.·
Chromatografie Ni-NTA 100 ml Ni-NTA agarózy F.F (Qiagen, . '-Hilden) se - přidalo ke hrubému extraktu', který obsahuje .přibližně 800 mg leptinu a vše se míchá pří, 4- °C přes ' noc. Suspenze projde přes skleněnou kolonu '(průměr 5, cm), - která j'e opatřena fritou. . Kolona, spolu' s Ni-NTA agárózou, které .je , v. ní obsažena, se promyje 300 ml lyzovacího pufru, a poté 100 ml lyzovacího pufruObsahujícího lOmM imidazol (5 ml/min). Pak se provede -frakční elůoe leptinu použitím lineárního .gradientu 10 až 200mM imidazolu v.lyzovacím pufru , (objem gradientu: 300 ml v 5' ml/min). Frakce se analyzuj i- . RP-HPLC. a ty, které mají - adekvátní čistotu a koncentraci se spojí (=Ni-NTA eluát).
Skládání struktury (folding) - Ni-NTA eluát se naředí lyzovacím pufrem na koncentraci 1-3 mg/ml a upraví se na'pH' 9
·444 roztokem hydroxidu sodného. Po .přidání' β-merkaptoetanolu (od 4 do '6 mol β-merkaptoetanolu na 1 mol- leptinu) se směs inkubuje při teplotě místnosti 2 -hodiny v uzavřené nádobce. Pro reoxidaci a opětném složení struktury se rožt.ok nalije do 9x objemu skládacího pufru (0,1M Tris/HCl, pH 9) a vše se míchá při 16 °C .16 až 24 hodin za přístupu vzduchu. Každý zákal, který se objeví, se. odstraní, stočením (4 000 rpm, 45min).'.'r
HPLC' s reverzní fází- pH směsi se upraví 'na pH 3 . s. HCI a nanese na kolonu RP 2,5 x 30 cm (PLRPS 30.0 Á, 10 μ, Polymer Laboratories, Ámherst, USA) rychlostí, '20 ml/min. Kolona se pak promyje 300 .ml eluentu A (0,1% vodný 'TFA) Leptin se eluuje ve 100 minutách (rychlost toku -7 ml/min)· aplikací gradientu od 25 do 50 % eluentu B (0,09% TFA v acetonitrilu). Frakce-· se analyzují prostřednictvím analytické HPLC. Frakce adekvátní čistoty ,'a koncentrace' se spojí (RP pool) . Pool se ošetří' 7 mmol Na2HPO4/.l a upraví se na pH 3 s NaOH, a· rozpouštědlo se odstraní na- rotačním evaporátoru. Vodný roztok . leptinu . se poté neutralizuje s NaOH (pH 7,4) a uskladní '.při 4 °C přes noc. Každý výsledný zákal se Odstraní stočením (4 000 rpm, 10 min)·.
Gelová permeační · chromatografie ' - neutralizovanýa stočený- roztok leptinu se · koncentruje na 10-15 mg/ml ultrafiltrací, a poté se sterilizuje filtrací.. 50 až 75 mg se nanese na , kolonu Superdex 75 (2,6 x60 cm, Pharmacia,
Švédsko). Jako eluční pufr se použije PBS (154mM NaCI, lOmM fosforečnan sodný, -pH 7,4)' při rychlosti toku 3 ml/min. Leptin, který byl tímto způsobem purifikován·, se poté ještě jednou filtruje přes membránu o velikosti pórů 0,22 um a uskladní se při -70 -°C. 1 ·» »·44
Příklad 3.
Příprdva antagonistického fragmentu 116-167 /
• Ke 40 m-1' roztoku 1-eptinu (1 .mg/ml v -PBS) s.e přidá 1 ml
| 1M Tris/HCl, pH 8, | a poté, co' | se | přidalo | 160 ' pg |
| lysylendopeptpidézy, jé | leptin štěpen | ' Při | teplotě | místnosti |
| 3 hodiny. pH směsi se | potom upraví | na | PH . 3 . a | směs se |
fřakcionuje RP-HPLC,' jak je popsáno v příkladu 2, Fragment 116-167 je identifikován elektronspray hmotovou spektrometrií (5532 D), j.e odstraněno rozpouštědlo, jak' je popsáno v. příkladu'2, fragment je koncentrován a. purifikován prostřednictvím gelové permeační chromatografie..
Příklad- 4
Izolace adipocytů
Ádipocyty bylý připraveny'z tukové tkáně nadvarlat samců, laboratorního potkana kmene Wistar (140-160 g, chovné stanice' Hoechst AG, Kastengrund) pomocí štěpeni, kolagenázou .(Rodbell, J. Biol. Chem., 239, 37.5-380,. 1964), dvakrát promyty KRH (25mM H.epes-volná kyselina, 25mM Hepes-sodná sůl, 80mM NaCl, lmM MgSO,i, 2mM CaCl2·, . 6mM KCl,. ÍmM pyruvát sodný, 0,5% BSA)' a lx DMEM (DulbecCovo minimální základní živné médium), . doplněným. 5,5 mM glukózou,. 20 mM H.epes (pH 7,4), 2%' fetální telecí sérum, 1% BSA, 50 U. penicilinu/ml, 10 mg streptomycinu/ml, ’ prostřednictvím flotace (800x, 1 min, v malých plastových zkumavkách),.a konečně naředěny na objem 20 ml DMEM/g vlhké hmotnosti tukové tkáně .(titr buněk:' přibližně 2,5xlOs buněk/ml).
• · φ· · · φ · φφ φ φ φ φ φ « · φ φφφ φφφ
Ο φ φ φ ·
Příklad 5 '
Primární .tkáňová kultura adipocytů a inkubace sleptiriem
Adipocyty se inkubovaly ' při 37 °C 15-18 hodin v-atmosféře 5% CO2 a za jemného třepání,, v doplněném (viz výše) DMEM za přítomnosti 100 nM . fenylisopropyladenosinu (4 ml DMEM na 1 ml buněk, titr buněk přibližně SxlO'1 buněk/ml, v '. 50 ml sterilních polypropylenových zkumavkách) a v přítomností či nedostatku leptinu.. Adipocyty byly pak třikrát promyty chladným KRH- a titr buněk 'se. upravil na
J* přibližně 3xlOs/ml přidáním 0,7 ml KRH bez· glukózy k buněčné vrstvě, která zůstala .po kompletním odstraněni posledního promývacího roztoku. Aby se, určila kapacita adipocytů ' ke stimulaci· inzulínem a .jejich .. senzitivíta na inzulín po primární tkáňové kultuře, byly- -promýté adipocyty inkubovány při- '37 /C .20 min v přítomnosti či nedostatku lidského inzulínu (konečná koncentrace 0,02.až 50nM) , ’ a poté se měřil ' · l · - .
transport glukózy nebo lipogeneze. Příklad 6 '
Transport' glukózy
Transport glukózy, se měřil jako specifické' vychytávání nemetabolizovatělnéhó 'glukózového analogu ',2-deoxyglukózy (Muller a Wied, Diabetes, 42, . 1852-1867, 1993.) . 50 μΐ adip.ocytové suspenze v KRH, která -buď byla nebo nebyla předem inkubována s.inzulínem (viz výše),, bylo inkubováno 5 min- při 25 °C, , s 50 μΐ KRH, které bylo doplněno 2-deoxy-D-[2, 62H]glukózou (0,5 μθί, 0,2 . mM) . · Ihkubační' směs se přenesla- do
toto · • toto· to to · to to to« ·· • ·· * • · · · a ··· · ·· to « ♦ · ·♦ tenkých měkkých plastových centrifugačních,· zkumavek, které již obsahovaly 200 μΐ dinonylftalátového oleje, a okamžitě se stočily (2000 x g, 30 s),. Za použití speciálních nůžek'byly zkumavky přestřiženy v olejové vrstvě (v sousedství horního okraje)' a horní poloviny zkumavek, spolu s buněčnou vrstvou, která pokaždé plavala na 'olejové vrstvě,' se přenesly do :scintilačních lahviček.x Pák se přidalo 10 ml scintilační tekutiny (na vodné bázi) a měřila se radioaktivita buněk. Aby se ' korigovala radioaktivita , 2-deoxyglukózy, která pronikla do mezer mezi buňkami, nebo která do buněk - difundovala nespecificky, odečítala se radioaktivita buněk, které byly inkubovány předem, s cytochalásinem B (20 μΜ), od celkové radioaktivity buněk pro každou jednotlivou inkubační směs (Gliemann et al'., Biochim. Biophys. Acta, 286,'1-9, 1972).
Příklad 7 . : '·,
Lipogeneze (
Lipogeneze se měřila jako inkorporace D-gíukózy do lipidů extrahóvatelných toluenem (Moody et’al., Horm. Metab. Res., 6, 12-16, 197 4,) . 200 μΐ adipocytové suspenze v .KRH se ínkubovalo ve scintilačních lahvičkách, při 37 °C 20 min, v 680' μΐ KRH, které bylo doplněno' 3,5mM glukózou a - 20 .. μΐ roztoku· inzulínu. Lipogeneze začala, po přidání 100 μΐ D- [3-3H] glukózy (.25 μΟί/ιηΙ KRH). Po 90minutové inkubaci při 37°Č s jemným'-třepáním v atmosféře 5% CO2 se přidalo 10 ml scintilační tekutiny (na bází- toluenu) a určovala, se· radioaktivita toluenové fáze po důkladném protřepání a následné separaci . fází (alespoň 4 hodiny inkubace) . Radioaktivita -lipidů toluenové fáze se korigovala podle • 0 · ··* » · · a «« · 0 « 0 * e radioaktivity inkubační směsi, která ' obsahovala· totéž množství [3H]glukózy, ale žádné buňky.
Příklad 8
Leptinová inhibice transportu glukózy· vyvolané inzulínem a lipogeneze.vyvolané inzulínem
Izolované krysí · adipocyťy se inkubovaly 15 hodin v primární tkáňové kultuře v přítomnosti či nedostatku zvyšujících se koncentrací leptinu. Buňk.y se . .poté promýly. a testovaly na transport glukózy a lipogenezi v bazálním stavu a stavu stimulovaném inzulínem (10 ,nM) .. Stimulační faktor inzulínu se vypočítával jako poměr mezi . bazálnl a inzulínem stimulovanou aktivitou.. Každá hodnota představuje průměr -ze dvou nezávislých kultur adipocytů, přičemž aktivita byla určena' v každém případě dvakrát nebo třikrát.· Výsledky jsou shrnuty v tabulce 1.
Tabulka 1
Koncentrace inzulínu: 5 nM
| Leptin Koncentrace [nM] | Glukóza Transport* | Lipogeneze* |
| o | '13,4 | 3,9 |
| 0,3 | 13, 4 | 3,9 |
| 1 . | 11,75 | ' 3,2 |
| 3 . . | 7/4 : | • 2, 15 |
| ' ' io. | 3,5 | 1,5 |
| '30 | 2,35 | 1/15 |
| 100 | 1,5 | 1,05 |
* Faktory-jsou podíly hodnot po stimulaci a bazálních hodnot.
« · · · - * • fl ·· Μ ··
Příklad 9
Vliv leptinu na závislost účinku na dávce inzulínu /
Izolované krysí adipocyty se inkubovaly 16,5 hodiny v primární, kultuře v přítomnosti nebo .nedostatku zvyšujících· se. koncentrací lé.ptinu’. Buňky , byly poté promyty a testovány na stimulaci transportu glukózy· odlišnými koncentracemi inzulínu. .Aktivita g.lukózového transportu je. dána jako „hodnota 'dpm -2-deoxy-[3H]glukózy, která je specificky spojena s buňkami. .Každá· hodnota představuje, průměr ze dvou nezávislých ádipocytových kultur, přičemž aktivita byla určována . v každém případě čtyřikrát.. Výsledky jsou shrnuty v. tabulce 2. · ·
Tabulka 2
Měřený parametr: transport glukózy
| 0 Inzulín [nM] | Leptin | [nM] . | ||||||
| Ό | 0,05 | 1 | 2 | 5 | 10 ' | 30 | 100.' | |
| 0 ' | 671 | 654 | 634 | 68 8 | 712 | ’ 75'5 | 68.8 | ' 747 ' |
| 0,02 | 784 | 735 ' | 678 | 704 1 | 734 | .7 73 | 704 | 766' |
| 0, 05 | '1285 | 1025 | 824 | 755 | 798 | 802 | 745 . | 780 |
| i—1 ; o | 2406 | 1674 | 1189 | 8 60 | ' 8 8 3’ | 856 | 789 | 803 ' |
| 0,2 | 4762 | 3320 | 158 7 | 100 6 . | 923 h | 941 , | . 852 | 813 . |
| .0,5. | 6976 | 5138 | 2180- | 137.7 | 1167· : | 1209 ; | ' 943 | .' 8 83’. |
| 1 | 7981 | 6834 | 3904 | 1916 | 158 3 | 1573. | 118.3 | 896 - |
| 2 | 8576 | 7942 ’ | 55.10 '' | '2680 | 2140 | 2061 | '1374. | 1034 |
| 5 | 89-56 | 8794 | 6985 ' | 4323- | 2 950 | 2476 | 1782 | 1205 |
| io; | 9064 | 9134 | 8241 ’ | 6107 ' | 3682 ' | 2710 | 1972; | 1451 |
| 50 | 9072 ' | 9189 | 8932 | '7032. | 4031 | 2967 | 2114 | 1723 |
fl fl • flfl flfl · · flfl flflfl· flfl flfl flfl » flfl·· flfl · fl · · · flfl · -flfl ♦ ·· ··« flfl flflfl · · « • flfl flfl flfl ·· ··
Dané hodnoty jsou ' v každém případě vychytávání 2-deoxyglukózy značené' 3H měřené v dpm (rozpad za minutu),.
Příklad 10 > , Antagonismus fragmentu 116-167 k účinku leptinu '
Izolované , krysí adipocyty se inkubovaly 17,5. hodiny v primární -kultuře- v přítomnosti -nebo- nedostatku,'leptinu (10 nM) ' a zvyšujících se koncentrací .fragmentu - leptinu 116-167. Buňky byly. poté. promyty a testovány, na stimulaci transportu.' glukózy· nebo lipogenezi 5nM' inzulínem. .Stimulační, faktor pro -inzulín se- poté vypočítával jako- poměr mezi inzulínem stimulovanou a bazální aktivitou. Každá hodnota > .představuje průměr ze dvou nezávislých·.adipócytových 'kultur, přičemž -aktivita byla určována'v každém .případě třikrát.
Výsledky jsou-shrnuty v'tabulce ,3.
Tabulka 3 .
Leptin-10 nM, inzulín 5-nM . ’
| Fragment ' Koncentrace [nM]· | . Glukóza' . Transport* | Lipogeneze* |
| 0- | 3,5.5 | 1, 5. |
| 0,3 . | 3,65 . | 1, 65 |
| . . 1 | .4,5 | 2,15 |
| ' 3 | 5,75 | 2,6 5 |
| 10 -.. | • 7,75 ' | 3,1. |
| 30 ' :_t | 10,8 | '3,6 |
| 100 | 12,55 | ' 4 |
| 300 ' | . 13,2 | 4 .' |
| pouze, inzulín | 13,.-4 | 3,9-' |
• 0 • ·0 ► 0 0« • 0 ··
0·0 ·«· 0 *
0« ·· * Faktory jsou kvocienty hodnot.· po stimulaci a bazálrtích' hodnot. .
Tabulka 4
Sekvence id. č. 4: Lidský leptin.
| 1- Met | His | Trp | Gly | Thr· | Leu | Cys | Gly | Phe | Leu | Trp | Leu | Trp | Pro | Tyr |
| Leu | Phe | Tyr | Val | Gin | Ala | Val | Pro | Ile | Gin | Lys | Val | Gin | Asp | Asp |
| Thr | Lys | Thr | Leu | Ile | Lys | Thr | Ile | Val | Thr | Arg | Ile | Asn | Asp | Ile |
| Ser | His | Thr | Gin | Ser | Val | Ser | Ser | Lys | Gin | Lys | Val | Thr | Gly | Leu |
| Asp | Phe | Ile | Pro | Gly | Leu | His | Pro | Ile | Leu | Thr | Leu | Ser | Lys | Met |
| Ašp | Gin | Thr | Leu | Ala | Val | Tyr | Gin | Gin. | Ile | Leu | Thr | Ser | Met | Pro |
| Ser | Arg | Asn | Val | Ile | Gin | Ue | Ser | Asn | Asp | Leu | Glu | Asn | Leu. | .Arg |
| Asp | Leu | Leu | His | Val | Leu | Ala | Phe | Ser | Lys | Ser | Cys | His | Leu | Pro |
| Trp | Ala | Ser | Gly | Leu | Glu | Thr' | Leu | Asp | Ser | Leu | Gly Gly | Val | Leu | |
| Glu | Ala | Ser | Gly | .Tyr | Ser | Thr | Glu | Val | Val | Ala | Leu | Ser | Arg | Leu |
| Gin | Gly | Ser | Leu | Gin | Asp | Met | Leu | Trp | Gin | Leu | Asp | Leu | Ser | Pro |
| Gly | Cys - | -167 |
Tabulka 5
Sekvence i.d- č. 5; Myší leptin
| 1-Met | Cys | Trp | Arg | Pro | Leu | Cys | Arg | Phe | Leu | Trp | Leu | .Trp | Ser | Tyr |
| ' Leu | Ser | Tyr | .Val | Gin | Ala | Val- | Pro | Ile | Gin. | Lys | Val | Gin | Asp | Asp |
| Thr' | Lys | Thr | Leu | Ile, | Lys | Thr | Ile | Val | Thr· | Arg | Ile | Ash | Asp | Ile |
| Ser | His | Thr | Gin | Ser | Val | Ser | Ala | Lys | Gin | Arg | Val | Thr | Gly | Leu |
| ,Asp | Phe | Ile | Pro | Gly | Leu | His | Pro | Ile | Leu | Ser | Leu | Ser | Lys | Met |
| Ásp | Gin | Thr | Leu. | Ala | Val | Tyr | Gin | Gin.' | Val | Leu | Thr | ser | Leu | Pro |
| Ser | Gin | Asn | Val | Leu | Gin | Ile | Ala | Asn | Asp | Leu | Glu | Asn | Leu | Arg |
| Asp | Leu | Leu | His | Leu | Leu | Ala | Phe | Ser | Lýs | Ser | Cys | Ser | Leu | Pro |
| '.Gin | Thr | Ser | Gly | Leu | Gin | Lys | Pro | Glu | Ser. | Leu | Asp | .Gly | Vál | Leu |
| Glu | Ala | Ser | Leu | Tyr | Ser | Thr | Glu | Val | Val | Ala | Leu | Ser | Arg | Leu |
| Gin | .Gly | Ser | Leu | Gin- | Asp | Ile | Leu | Gin | Gin | Leu | Asp | Val | Ser | . Pro |
| Glu | Cys- | -167 |
Tabulka 6
Sekvence id. č. 6
Fragment 116-167 z myšího leptinu
| 116-Ser | cys | Ser | Leu | Pro | Gin | .Thr | Ser | Gly | Leu | Gin | Lys | Pro | Glu. | Ser |
| Leu | Asp | Gly | Val | Leu | Glu | Ala | Ser | Leu | Tyr | Ser | Thr | Glu | Val | Val |
| Ala | Leu | Ser | Arg | Leu | Gin | Gly | Sér | Leu | Gin | Asp | Ile1 | Leu | Gin | Gin |
| Leu | Asp | Val | Ser | Pro | Glu· | Cys- | 167 |
Dva cysteiny přítomné· v sekvencích ukázaných v tabulkách. 4 až- 6 jsou spojeny disulfidovým můstkem.
i « · • φφ ♦ Φ '····
Q 4 φ · β, Φ ΦΦ 9 9 . ♦ · » · * · ·· ·· ·· ·· ·*
SEZNAM SEKVENCÍ (2) INFORMACE PRO SEKVENCI'S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 1:
(i) ’ CHARAKTERISTIKA SEKVENCE :
(A) DÉLKA: 20 párů bázi ’ · ' .(B) TYP:.nukleová kyselina (C) TYP'VLÁKNA: jednoduché (D) TOPOLOGIE':· lineární ' ' (ii) TYP MOLEKULY: DNA..(genomová).
(ix! ZNAKY: .
- ’ ' (A) JMÉNO/.OZNAČENÍ: exon .
(B) POZICE: l.'.2Ó (xi) POPIS SEKVENCE: SEKVENCE S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 1
GAATGCAGAA TAAATAAATA 2 0 (2) INFORMACE PRO SEKVENCI S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 2:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
, (A) DÉLKA: 34 párů baží (B) TYP: nukleová'kyselina' (C) TYP VLÁKNA: jednoduché· (D) TOPOLOGIE: lineární
(.ii) TYP MOLEKULY: DNA (genomová) (ix) , ZNAKY: , (A) JMÉNO/OZNAČENÍ: exon (B) POZICE: 1..34 (xi) POPIS SEKVENCE: SEKVENCE S' 'IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM/2:
GAAAGAAGGA TCCAGTGCCT ATCCAGAAAG TCCA . · 34 •4 444« (2) INFORMACE PRO SEKVENCI S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 3:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) .DÉLKA: 34 párů baží (B) TYP: nukleová kyselina.
(C)' TYP VLÁKNA: jednoduché (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: DNA (genomo.vá) ·.
(ix) ZNAKY:. .
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ:'exgn (B) POZICE: 1..34 (xi) POPIS SEKVENCE: SEKVENCE S IDENTIFIKAČNÍM'ČÍSLEM 3':
GGAGAGAAGC TTGAGGGAGA GAAATGAATG ATGG 34 (2) INFORMACE PRO SEKVENCI S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 4:
/ ·
'. .(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE: ’ (A) DÉLKA: 167. aminokyselin .
(B) TYP,: aminokyselina .
(C) . TYP VLÁKNA: jednoduché (D) TOPOLOGIE: lineární ' ; ' ·· (ii) TYP.MOLEKULY: peptid (ix) ZNAKY:
. (A) JMÉNO/OZNAČENÍ:'peptid (B) POZICE: 1..167 .(xi) POPIS SEKVENCE: SEKVENCE S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 4:
| Met | His | .Trp | Gly. | Thr | Leu | Cys | Gly | Phe | Leu | Trp | Leu | Trp | Pro | Tyr | Leu |
| 1 | 5 , | 10 | 15 | ||||||||||||
| Phe | Tyr | Val | Gin | Ala | Val | Pro | Ilě | Gin | Lys | Val | Gin | Asp | Asp | Thr | Lys |
| 20 | 25 | 30* | |||||||||||||
| Thr | Leu | Ile | Lys | Thr | ile | Val | Thr | Arg | •Ile | Asn | Asp | Ile | Ser | His | Thr |
| 35 | 40 | 45 | |||||||||||||
| Gin | Ser | Val | Ser | Ser | Lys | Gin | Lys | Val | Thr | Gly | Leu | Ásp | Phe | Ile | Pro |
| 50 | 55 | 60 | |||||||||||||
| Gly | Leu | His | Pro | Ile | Leu | Thr | Leu | Ser | Lys | Met | Asp | Gin | '. Thr | Leu | Ala |
| '65 | 70 | 75 | 80 | ||||||||||||
| Val | Tyr | Gin | Gin | Ile | Leu | Thr | Ser | Met | ' Pro | Ser | Arg | Asn | Val | Ile' | GÍn |
| 85 | 90 | 95 |
•0 *0*· *0
| Ile | Ser Asn | Asp | Leu | Glu | Asn | Leu | Arg | Asp | Leu | Leu | His | Val | Leu | Ala |
| 100 | 10S | 110 | ||||||||||||
| Phe | Ser Lys | Ser | Cys | His | Leu | Pro | Trp | Ala | Ser. | Gly | Leu | Glu | Thr | Leu |
| 115. | 120 | 125 | ||||||||||||
| Asp | Ser Leu | Gly | Gly | val | Leu | Glu | Ala | Ser | Gly | Tyr | Ser | Thr | Glu | val |
| 130 | '13 5 | 140 | ||||||||||||
| Val | Ala- Leu | Seř | Arg | Leu | Gin | Gly | Ser | Leu | Gin | Asp | Met. | Leu | Trp | Gin |
| 145 | 15,0 | 155 | 160 | |||||||||||
| Leu | Asp·, Leu | Ser | Pro | Gly | Cys |
165 .(2) INFORMACE PRO SEKVENCI S IDENTIFIKAČNÍM--ČíŠLEM 5:
(i)' CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA:.167 aminokyselin (B) TYP: aminokyselina (C) TYP VLÁKNA; jednoduché ' . ' (D) · TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: peptid (ix) ZNAKY:' ' y .
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: peptid : - · . ''· (3) POZICE: 1..167, ' (Xi).POPIS SEKVENCE: SEKVENCE S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 5:
| Met 1 | Cys | Trp | Arg | Pro 5 ' | Leu | Cys | Arg | Phe | Leu 10 | Trp | Leu | Trp | Ser | Tyr 15 | Leu |
| Ser | Tyr | Val | Gin 20 | Ala | Val | Pro | Ile | Gin 25 | Lys | Val | Gin | Asp | Asp 30- | Thr | Lys |
| Thr | Leu | Ile 35 | Lys | Thr' | Ile | Val | Thr 40 | Arg | Ile | Asn | Asp | Ile 4 5 | Ser | His | Thr |
| Gin | Ser 50 | Val | Ser | Ala | Lys | Gin 55 | Arg | Val | Thr. | Gly | Leu 60 | Asp | Phe | Ile | Pro |
| Gly 65 | Leu | His | Pro | Ile | Léu 70 | Ser | Leu | Ser | Lys | Met 75 | Asp | Gin | Thr | Leu | Ala 80' |
| Vál | Tyr | Gin | Gin | Val Θ5 | Leu | Thr | Ser | 'Leu | Pro 90 | Ser | Gin | Asn | Val | Leu 95 | Gin |
| Ile | Ala | Asn | Asp 100 | Leu | Glu | Asn | Leu | Arg 105 | Asp | Leu | Leu | His | Leu 110 | Leu | Ala |
···· • flfl « 1 ·· ·♦ • · · · fl · * · • flfl fl ·« • ·
4« ··
| Phe | ser | Lys | Ser | Cys | Ser | Leu | Pro | Gin | Thr | Ser | Gly | Leu | Gin | Lys | Pro |
| 115 | 120 | 125 | |||||||||||||
| Glu | Ser | Leu | Asp | Gly | Val | Leu | Glu | Ala | Ser | Leu | Tyr | Ser | Thr | Glu | Val |
| 130 | 135 | 14 0 | |||||||||||||
| Val | Ala | Leu | Ser | Arg | Leu | Gin | Gly | Ser | Leu | Gin | Asp | Ile | Leu | Gin | Gin |
| 145 | 150 | 155 | 160 | ||||||||||||
| Leu | Asp | Val | Ser | ' Pro | Glu | cys | |||||||||
| 155 |
(2)' INFORMACE PRO SEKVENCI S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 6:
.(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) 'DÉLKA: 52 aminokyselin ' (B) TYP: aminokyselina · u (C) TYP VLÁKNA: jednoduché '' • (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: peptid. j ’ (ix) 'ZNAKY: .
(A) JMÉNO/OZNAČENÍpeptid (B) POZICE: I..52 (xi) POPIS SEKVENCE: SEKVENCE S· IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 6:
| Ser | Cys | Ser | Leu | Pro | Gin | Thr | Ser | Gly | Leu | .Gin | Lys | Pro | Glu | Ser | Leu |
| 1 | 5 | 10 | 15 | ||||||||||||
| Asp | Gly | Val | Leu | Glu | Ala | Ser | Leu | Tyr | Ser | Thr | Glu | Val | Vál | Ala | Leu |
| 20 | 25 | 30 | |||||||||||||
| Ser | Arg | Leu | Gin | Gly | Ser | Leu | Gin | Asp | Ile | .Leu | Gin | Gin | Leu | Asp | Val |
| 35 | 40 | 45 |
Ser Pro Glu Cys
Claims (16)
- PATENTOVÉ NÁROKY1. Farmaceutický přípravek vyznačuj ící se tím, že obsahuje antagonistu leptinu v teraputicky prospěšném množství pro ' léčení' diabetů II. .typu.
- 2. Farmaceutický . přípravek .podle nároku 1 v y·z n. a č u j í c í se t í m, že antagonistaleptinu je odvozen z lidského nebo. zvířecího leptinu.
- 3. Farmaceutický přípravek podle nároku 2 vyznačující setím, že antagonista leptinu . je' odvozen z leptinu, který- je · vybrán .. ze skupiny obsahující lidský,, krysí, myší' a prasečí -lép.tin a leptin . antropoidních opic.
- 4. Farmaceutický přípravek podle , nároku 3 v y z.n a č u j.í c í se tím, že antagonista leptinu je odvozen z myšího leptinu. \ '·'.·
- 5.. .Farmaceutický přípravek podle nároku 4 vyznačující se ť i m, že antagonista leptinu je buďto vnitřní fragment myšího leptinu nebo .. fragment karboxylovéhó konce myšího leptinu.Farmaceutický· . · přípravek podle' nároku 5 vyznačující s e . t í m, že antagonista .leptinu je fragment myšího. leptinu obsahující sekvenci aminokyselin ' identifikačního čísla 6 uvedenou zde v tabulce 6,00 000*«. 9 0 * 0 '· 0 0 • 0» 0 · » 0 0 0 0 0 9 «ί 0 0 90 900 «09 «0009« 9 0 • 9 00 99 00 00 ' Ί. Farmaceutický přípravek podle . nároku 6 vyznačující se' t í m, ,že antagonista leptinu' obsahuje j.ednu nebo několik- konzervativních substitucí - aminokyselin.
- 8. Farmaceutický přípravek podlé 'nároku.. 7 vyznačuj. í'.c 1 se -tím, že konzervativní substituce ' aminokyselin nahrazuje' jednu, .iontovou aminokyselinu jinou iontovou ' aminokyselinou ..nebo. nahrazuje: jednu hydrofobní aminokyselinu .jinou hydrofobní aminokyselinou. , · ‘ I
- 9. Farmaceutický · přípravek' podle. . nároku . 8 v y z n a č.-.u j i .-.c i - :s e . t 1-.m, . že- .'konzervativnísubstituce aminokyselin- je vybrána ze skupiny substitucí nahrazujících kyselinu glutamovoii kyselinou asparagovou, kyselinu asparagovou. kyselinou 'glutamovou, isoleucin leucinem a leucin isoieucihem.
- 10.Farmaceutický přípravek. podle' nároku 6 vyznačující s e . , t í m, že antagonista leptinu je modifikován chemickou modifikací vybranou ze skupiny obsahující acetylaci, ' karbamoyla.ci, formylaci, biotinylaci, acylaci, . derivatizací polyetylenglykolem . a derivatizací hydrofilními polymery.
- 11. Farmaceutický přípravek. podle nároku .1 vyznačující, se -tím, že antagonista leptinu je vybrán ze skupiny- obsahující rozpustný receptor00 0·0 0 0 «0 0 0 «Β Β 0 0 Β « . leptinu, fragment receptoru leptinu, fúzi s rozpustným re.ceptórem leptinu a fúzi s fragmentem receptoru leptinu.
- 12.Způsob, léčení diabetů II. typu, .vyznačující se t í m, že pacientovi, kterýtakové léčení potřebuje, se κ . podá terapeuticky účinné ' množství přípravku podle nároku 1. '
- 13·. Způsob podle nároku' 12, vyznačující se tím,' že podávaný přípravek obsahuje antagonistů leptinu, kterým je fragment myšího, leptinu obsahující sekvenci.aminokyselin identifikačního čísla 6 uvedenou v tabulce 6.
- 14. Způsob podle nároku 13, v y z n a č u j í c í s e . t í m, že antagonista leptinu obsahuje . jednu nebo· několik konzervativních substitucí aminokyselin. '.·.
- 15. Způsob podle nároku 12, vyznačuj ící se-tím, že -přípravek obsahuje antagonistů leptinU vybraného zeskupiny- obsahující rozpustný receptor leptinu, fragment receptoru. leptinu,. fúzi s rozpustným receptorem leptinu . a fúzi s fragmentem receptoru leptinu. ...
- 16. Způsob· obnovení nebo zesílení fyziologického účinku inzulínu vyzná č-ující' se tím, že se pacientovi, který takové obnovení nebo, zesílení potřebuje, podá . terapeuticky účinné množství přípravku -podle nároku 1.. .1-7. Způsob podle nároku 16vyznačující se, tím, že přípravek obsahuje' antagonistů leptinu,· kterým je *«» < *··· ·· ·· • · · · · · · • · ’ · · · · t • · ··· · · · ····»· • ft · · · · · · * · *···· ·· ·» ·· ·· fragment myšího . leptinů se sekvencí aminokyselin identifikačního čísla 6 uvedenou zde v.tah. 6.' >
- 18. Způsob podle nároku· 17' v y z ,n a č u . j .1 c i s-e tím, že ' antagonista leptinu obsahuje, jednu, nebo několik konzervativních substitucí' aminokyselin,.rl9. Způsob po'dle' nároku 16 v y z. n .a. č u j i c i s e tim, že .přípravek; obsahuje antagonistů leptinu vybraného ze skupiny obsahující rozpustný receptor leptinu, fragment . receptoru leptinu, fúzi s rozpustným receptotem leptinu , a fúzi s fragmentem-receptoru leptinu,
- 20. Fragment myšího·..· leptinu, který· obsahuje aminokyseliny 116 až 167 nebo 1.16 až 1.66 myšího .leptinu..21.Způsob přípravy leptinového fragmentu, podle kteréhokoliv z nároků 2 až -11 a 20 vyznačuj íeí. se tí m, že ' ' a} gen kódující Ieptinový fragment se exprimuje použitím .vhodného systému vektor/hostitel a'b) ieptinový fragment se izoluje z hostitelského systému.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE19638487 | 1996-09-20 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ90999A3 true CZ90999A3 (cs) | 1999-06-16 |
Family
ID=7806282
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ99909A CZ90999A3 (cs) | 1996-09-20 | 1997-09-15 | Farmaceutický přípravek obsahující antagonistu leptinu vhodný pro léčení inzulínové rezistence u diabetes mellitus II. typu |
Country Status (18)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US6399745B1 (cs) |
| EP (1) | EP0956302A1 (cs) |
| JP (1) | JP2001500869A (cs) |
| KR (1) | KR20010029537A (cs) |
| CN (1) | CN1230966A (cs) |
| AR (1) | AR008444A1 (cs) |
| AU (1) | AU735178B2 (cs) |
| BR (1) | BR9711513A (cs) |
| CA (1) | CA2266585A1 (cs) |
| CZ (1) | CZ90999A3 (cs) |
| HU (1) | HUP9904023A3 (cs) |
| ID (1) | ID21861A (cs) |
| IL (1) | IL129057A0 (cs) |
| NO (1) | NO991186L (cs) |
| PL (1) | PL332458A1 (cs) |
| RU (1) | RU2201249C2 (cs) |
| WO (1) | WO1998012224A1 (cs) |
| ZA (1) | ZA978455B (cs) |
Families Citing this family (34)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| AU756617B2 (en) | 1998-07-28 | 2003-01-16 | Vlaams Interuniversitair Instituut Voor Biotechnologie Vzw | Leptin-mediated gene-induction |
| US6777388B1 (en) | 1998-08-21 | 2004-08-17 | Clf Medical Technology Acceleration Program, Inc. | Leptin-related peptides |
| US7208572B2 (en) | 1998-08-21 | 2007-04-24 | Albany Medical College | Leptin-related peptides |
| US20050272652A1 (en) | 1999-03-29 | 2005-12-08 | Gault Victor A | Peptide analogues of GIP for treatment of diabetes, insulin resistance and obesity |
| AU782230B2 (en) | 1999-09-22 | 2005-07-14 | Serono Genetics Institute S.A. | Methods of screening for compounds that modulate the LSR-leptin interaction and their use in the prevention and treatment of obesity-related diseases |
| EP1283878B1 (en) | 2000-05-22 | 2005-07-27 | Vlaams Interuniversitair Instituut voor Biotechnologie vzw. | Receptor-based interaction trap |
| US7235629B2 (en) | 2000-11-14 | 2007-06-26 | Vlaams Interuniversitair Instituut Voor Biotechnologie Vzw | Functional fragment of the leptin receptor |
| US8076288B2 (en) | 2004-02-11 | 2011-12-13 | Amylin Pharmaceuticals, Inc. | Hybrid polypeptides having glucose lowering activity |
| CN103897066A (zh) | 2004-02-11 | 2014-07-02 | 安米林药品有限责任公司 | 具有可选择特性的杂合多肽 |
| US7407929B2 (en) * | 2004-05-07 | 2008-08-05 | Boston Biomedical Research Institute | Leptin peptide antagonists |
| US7423113B2 (en) | 2004-08-25 | 2008-09-09 | Vib Vzw | Leptin antagonist |
| KR101123549B1 (ko) | 2004-11-01 | 2012-04-18 | 아밀린 파마슈티칼스, 인크. | 비만 및 관련 장애의 치료 |
| US8394765B2 (en) * | 2004-11-01 | 2013-03-12 | Amylin Pharmaceuticals Llc | Methods of treating obesity with two different anti-obesity agents |
| WO2006053883A1 (en) | 2004-11-18 | 2006-05-26 | Vib Vzw | Fibronectin iii domain as leptin receptor antagonists |
| US7307142B2 (en) * | 2004-11-26 | 2007-12-11 | Yissum Research And Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem | Leptin antagonists |
| EP2392595A1 (en) | 2005-02-11 | 2011-12-07 | Amylin Pharmaceuticals Inc. | GIP analog and hybrid polypeptides with selectable properties |
| US8263545B2 (en) | 2005-02-11 | 2012-09-11 | Amylin Pharmaceuticals, Inc. | GIP analog and hybrid polypeptides with selectable properties |
| BRPI0614649A2 (pt) | 2005-08-11 | 2011-04-12 | Amylin Pharmaceuticals Inc | polipeptìdeos hìbridos com propriedades selecionáveis |
| EP1922336B1 (en) | 2005-08-11 | 2012-11-21 | Amylin Pharmaceuticals, LLC | Hybrid polypeptides with selectable properties |
| EA200870365A1 (ru) * | 2006-03-23 | 2009-02-27 | Амилин Фармасьютикалз, Инк. | Эндотелин и агонисты рецепторов к эндотелину в лечении заболеваний обмена веществ |
| US8497240B2 (en) | 2006-08-17 | 2013-07-30 | Amylin Pharmaceuticals, Llc | DPP-IV resistant GIP hybrid polypeptides with selectable properties |
| US20100323955A1 (en) * | 2007-11-14 | 2010-12-23 | Amylin Pharmaceuticals, Inc. | Methods for treating obesity and obesity related diseases and disorders |
| US8778890B2 (en) | 2009-03-31 | 2014-07-15 | Temple University—Of the Commonwealth System of Higher Education | Leptin antagonist and methods of use |
| EP2416797A4 (en) | 2009-04-10 | 2013-04-24 | Amylin Pharmaceuticals Llc | AMYLINAGONIST COMPOUNDS FOR OXYGEN ANIMAL MICE |
| CA3138758A1 (en) | 2010-09-28 | 2012-04-19 | Amylin Pharmaceuticals, Llc | Highly soluble leptins |
| JP6040464B2 (ja) | 2011-07-08 | 2016-12-07 | アエゲリオン・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッドＡｅｇｅｒｉｏｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ， Ｉｎｃ． | 作用持続期間が増大し、免疫原性が減少した操作されたポリペプチド |
| RU2650646C2 (ru) | 2012-09-27 | 2018-04-16 | Дзе Чилдрен'З Медикал Сентер Корпорейшн | Соединения, предназначенные для лечения ожирения, и способы их применения |
| HUE042196T2 (hu) | 2013-11-26 | 2019-06-28 | Childrens Medical Ct Corp | Vegyületek elhízás kezelésére és alkalmazási eljárásaik |
| WO2015153933A1 (en) | 2014-04-03 | 2015-10-08 | The Children's Medical Center Corporation | Hsp90 inhibitors for the treatment of obesity and methods of use thereof |
| CN104829707B (zh) * | 2015-05-06 | 2017-12-19 | 广东省生物资源应用研究所 | 一条cd环和e螺旋区突变的瘦素活性肽及其编码基因和应用 |
| CN104829708B (zh) | 2015-05-06 | 2017-11-28 | 广东省生物资源应用研究所 | 一条d螺旋区突变的瘦素活性肽及其编码基因和应用 |
| WO2017013270A1 (en) | 2015-07-23 | 2017-01-26 | Universite De Strasbourg | Use of leptin signaling inhibitor for protecting kidneys from patients having ciliopathy |
| EA201990720A1 (ru) | 2016-09-12 | 2019-08-30 | Эгерион Фармасьютикалс, Инк. | Способы детекции нейтрализующих антител к лептину |
| EP3675961A1 (en) * | 2017-08-31 | 2020-07-08 | University Of Dundee | Leptin peptides and their use for treating neurological disorders |
Family Cites Families (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6309853B1 (en) | 1994-08-17 | 2001-10-30 | The Rockfeller University | Modulators of body weight, corresponding nucleic acids and proteins, and diagnostic and therapeutic uses thereof |
| US6001968A (en) * | 1994-08-17 | 1999-12-14 | The Rockefeller University | OB polypeptides, modified forms and compositions |
| US6048837A (en) * | 1994-08-17 | 2000-04-11 | The Rockefeller University | OB polypeptides as modulators of body weight |
| US5563243A (en) * | 1995-01-31 | 1996-10-08 | Eli Lilly And Company | Anti-obesity proteins |
| US5574133A (en) * | 1995-01-31 | 1996-11-12 | Eli Lilly And Company | Anti-obesity proteins |
| US5521283A (en) * | 1995-01-31 | 1996-05-28 | Eli Lilly And Company | Anti-obesity proteins |
| US5525705A (en) * | 1995-01-31 | 1996-06-11 | Eli Lilly And Company | Anti-obesity proteins |
| US5569743A (en) * | 1995-01-31 | 1996-10-29 | Eli Lilly And Company | Anti-obesity proteins |
| KR19990028388A (ko) * | 1995-06-30 | 1999-04-15 | 피터 지. 스트링거 | 당뇨병 치료 방법 |
| US7063958B1 (en) * | 1996-01-16 | 2006-06-20 | The Rockefeller University | Nucleic acids db, the receptor for leptin |
| US5922678A (en) * | 1996-06-28 | 1999-07-13 | Eli Lilly And Company | Methods for treating diabetes |
-
1997
- 1997-09-15 CN CN97198076A patent/CN1230966A/zh active Pending
- 1997-09-15 ID IDW990105A patent/ID21861A/id unknown
- 1997-09-15 US US09/147,805 patent/US6399745B1/en not_active Expired - Fee Related
- 1997-09-15 EP EP97942929A patent/EP0956302A1/en not_active Withdrawn
- 1997-09-15 IL IL12905797A patent/IL129057A0/xx unknown
- 1997-09-15 JP JP10514270A patent/JP2001500869A/ja active Pending
- 1997-09-15 BR BR9711513A patent/BR9711513A/pt not_active Application Discontinuation
- 1997-09-15 CZ CZ99909A patent/CZ90999A3/cs unknown
- 1997-09-15 HU HU9904023A patent/HUP9904023A3/hu unknown
- 1997-09-15 WO PCT/EP1997/005035 patent/WO1998012224A1/en not_active Application Discontinuation
- 1997-09-15 KR KR1019997002389A patent/KR20010029537A/ko not_active Application Discontinuation
- 1997-09-15 CA CA002266585A patent/CA2266585A1/en not_active Abandoned
- 1997-09-15 AU AU44586/97A patent/AU735178B2/en not_active Ceased
- 1997-09-15 RU RU99107759/14A patent/RU2201249C2/ru not_active IP Right Cessation
- 1997-09-15 PL PL97332458A patent/PL332458A1/xx unknown
- 1997-09-18 AR ARP970104293A patent/AR008444A1/es unknown
- 1997-09-19 ZA ZA9708455A patent/ZA978455B/xx unknown
-
1999
- 1999-03-11 NO NO991186A patent/NO991186L/no not_active Application Discontinuation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| PL332458A1 (en) | 1999-09-13 |
| ZA978455B (en) | 1998-03-20 |
| NO991186D0 (no) | 1999-03-11 |
| WO1998012224A1 (en) | 1998-03-26 |
| ID21861A (id) | 1999-08-05 |
| IL129057A0 (en) | 2000-02-17 |
| HUP9904023A2 (hu) | 2000-03-28 |
| NO991186L (no) | 1999-03-11 |
| US6399745B1 (en) | 2002-06-04 |
| BR9711513A (pt) | 1999-08-24 |
| AR008444A1 (es) | 2000-01-19 |
| JP2001500869A (ja) | 2001-01-23 |
| CA2266585A1 (en) | 1998-03-26 |
| HUP9904023A3 (en) | 2002-01-28 |
| RU2201249C2 (ru) | 2003-03-27 |
| AU4458697A (en) | 1998-04-14 |
| EP0956302A1 (en) | 1999-11-17 |
| KR20010029537A (ko) | 2001-04-06 |
| CN1230966A (zh) | 1999-10-06 |
| AU735178B2 (en) | 2001-07-05 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CZ90999A3 (cs) | Farmaceutický přípravek obsahující antagonistu leptinu vhodný pro léčení inzulínové rezistence u diabetes mellitus II. typu | |
| CZ416797A3 (cs) | Použití leptinu nebo leptonových mimetik pro výrobu léčiv pro léčení nebo prevenci diabetes mellitus a kompozice s jeho obsahem | |
| EP0866720B1 (en) | Ob protein for increasing lean tissue mass | |
| JPH093098A (ja) | 組換え肥満（ｏｂ）蛋白 | |
| MXPA02006834A (es) | Extremo anterior de obg3 globular y usos del mismo para disminuir la masa corporal. | |
| US7718400B2 (en) | Methods of increasing lean tissue mass using OB protein compositions | |
| NO324506B1 (no) | OB-fusjonsprotein, nukleinsyresekvens, vektor, vertscelle, fremgangsmate for fremstilling av proteinet, farmasoytisk preparat samt anvendelse av proteinet for fremstilling av et terapeutisk preparat. | |
| CZ20032706A3 (cs) | Izolovaný polypeptid a nukleová kyselina a farmaceutický přípravek, který je obsahuje, pro diagnostiku, prevenci a léčení degenerativních onemocnění sitníce | |
| EP1572230A1 (en) | Placental alkaline phosphatase to control diabetes | |
| KR100256664B1 (ko) | 단백질 p140의 신규 폴리펩티드 및 그를 암호하는 dna | |
| MXPA99002267A (en) | Use of leptin antagonists for treating insulin resistance in type ii diabetes | |
| AU2004200516B2 (en) | Methods of Increasing Lean Tissue Mass Using OB Protein Compositions | |
| AU2006201747B2 (en) | Methods of Increasing Lean Tissue Mass Using OB Protein Compositions | |
| WO2012075911A1 (zh) | 重组人prx-6蛋白在治疗烧烫伤和/或角膜损伤中的用途 | |
| AU3019700A (en) | Methods of treatment | |
| MXPA98000133A (en) | The use of a leptine or mimetico de leptina paratratar la diabe | |
| KR19980701798A (ko) | 비만 억제 단백질 | |
| MXPA97010239A (en) | Anti-obesi proteins |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PD00 | Pending as of 2000-06-30 in czech republic |