CZ416797A3 - Použití leptinu nebo leptonových mimetik pro výrobu léčiv pro léčení nebo prevenci diabetes mellitus a kompozice s jeho obsahem - Google Patents

Použití leptinu nebo leptonových mimetik pro výrobu léčiv pro léčení nebo prevenci diabetes mellitus a kompozice s jeho obsahem Download PDF

Info

Publication number
CZ416797A3
CZ416797A3 CZ974167A CZ416797A CZ416797A3 CZ 416797 A3 CZ416797 A3 CZ 416797A3 CZ 974167 A CZ974167 A CZ 974167A CZ 416797 A CZ416797 A CZ 416797A CZ 416797 A3 CZ416797 A3 CZ 416797A3
Authority
CZ
Czechia
Prior art keywords
leu
ser
gin
thr
asp
Prior art date
Application number
CZ974167A
Other languages
English (en)
Inventor
Thomas Wesley Stephens
Original Assignee
Eli Lilly And Company
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=21692725&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=CZ416797(A3) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Eli Lilly And Company filed Critical Eli Lilly And Company
Publication of CZ416797A3 publication Critical patent/CZ416797A3/cs

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/22—Hormones
    • A61K38/2264—Obesity-gene products, e.g. leptin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/575—Hormones
    • C07K14/5759—Products of obesity genes, e.g. leptin, obese (OB), tub, fat

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Emergency Medicine (AREA)
  • Child & Adolescent Psychology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Medicines Containing Plant Substances (AREA)

Description

Oblast techniky
Vynález se týká použiti leptinu nebo leptinových mimetik pro výrobu léčiv pro léčeni nebo prevenci diabetes mellitus jakož i kompozice s jeho obsahem.
Dosavadní stav techniky
Diabetes mellitus je metabolická porucha, charakterisovaná selháním lidské tkáně uchovávat cukry v normálním množství. Resistence k účinku inzulínu je nejdůležitější faktor diabetů typu II. Když tato resistence překročí kapacitu beta buněk produkovat inzulín, člověk se stane diabetikem. Během posledních 70 let se značně pomohlo lidem trpícím diabetem podáváním kontrolovaného množství inzulínu.
Obezita, obzvláště obezita horní poloviny těla je často asociována s inzulínově nezávislým diabetes mellitus potřebu vylučovat
Tento tak inzulínu, inzulín i zvaný neboť když diabetes typu II nemá absolutní j eho často tomu jsou navíc takovíto pacienti beta buňky ve snížených často obézní jsou schopné hladinách. K a demonstrují neschopnost reagovat na inzulín.
Je dobře známo, že dietní režim a cvičení vedoucí ke ztrátě • 0
- 2 hmotnosti jsou nej lepším přístupem k léčení obézních typů II diabetů. Bohužel tyto režimy jsou často neúčinné. Neúspěch hubnutí může být způsoben geneticky zděděnými faktory, které přispívají k zvýšení apetitu obvykle pro vysokokalorické potraviny, omezením fyzické aktivity a zvýšeným lipogenním metabolismem.Lidé, kteří zdědili takovéto genetické predispozice jsou náchylní k obezitě a často se stávají nositeli diabetů typu II, nehledě na jejich úsilí tento stav překonat. Ob/ob myš je modelem pro obezitu a diabetes, který je znám jako nesoucí autosomálni recesivní znak, vázaný na mutaci na šestém chromosomu. Nedávno Yiying Zhang a spolupracovníci publikovali poziční klonování myšího genu (ob) spojeného s tímto předpokladem. Viz Yiying Zhang a kolektiv Nátuře 372: 425-32(1994). Tato zpráva pojednává o genu, kódujícím protein s 167 aminokyselinami (zde dále leptin) s 21 aminokyselinami signálního peptidu, který je výhradně exprimován adipózní (tukovou) tkání.
Jak bylo ukázáno, hladiny cirkulujícího leptinu u obézních individuí se mění v širokém rozmezí. Následkem toho existuje nyní domněnka, že subpopulace obézních diabetiků typu II je zvláště přístupná k léčení leptinem.
Farmakologická činidla, která jsou biologicky účinná a napodobují účinek leptinu jsou proto užitečná pro léčení obezitního diabetů typu II, obzvláště v případech extrémně vysokých nebo nízkých úrovní cirkulujícího leptinu.
Jedním předmětem vynálezu je proto způsob léčení nebo prevence diabetů, který sestává z podávání obézní osobě s diabetem typu II účinné množství leptinu, leptinového mimetika nebo jeho farmaceuticky přijatelné sole. Výhodné provedení tohoto vynálezu zahrnuje metody pro léčení obézitního diabetů typu II majícího nízké endogenní hladiny leptinu.
- 3 Jako obezita je definováno, když individuum má hmotnostní index těla vyšší než 27 kg na čtverečný metr.
Leptinem se označuje protein produkovaný obezitním genem po provedení transkripce a vynechání intronů, převedení na protein a zpracováním zralého proteinu s odstraněným sekrečním signálním peptidem, například z N-koncového valinprolinu na C-koncový cystein zralého proteinu. Sekvence myšího a lidského leptinového proteinu jsou publikovány Zhangem a kol. v Nátuře 372: 425-32(1994). Sekvence krysího leptinu jsou publikovány v Murakami a kol., Biochemical and
Biophysical Research Comm., 209 (3) : 994-52 (1995) . U
lidského, myšího a krysího leptinu má Cys asociovaný s
disulfidickou formací polohu 96 a 145. Avša^ zejména u
myšího a lidského leptinu byla pozorována varianta
desGln(28). Z toho důvodu Cys rezidua asociovaná s
disulfidovou vazebnou formací mohou být v poloze 95 nebo 96
a v poloze 145 nebo 146. Leptin může být na základě této specifikace označován za obezitní protein, OB nebo ob genový produkt. Leptin tudíž zahrnuje SEQ ID NO: 1-6.
Odborník v oboru si je jistě dobře vědom toho, že jisté aminokyseliny jsou náchylné k přeskupení. Na příklad Asp se může přeskupit na aspartimid a isoasparigin jak je popsáno v publikaci Schón a kol., International Journal of Peptide and Protein Research, 14: 485-94 (1979) a v ní citovaných publikacích. Tyto přeskupené deriváty jsou zahrnuty v rozsahu předloženého vynálezu. Pokud není jinak uvedeno, aminokyseliny se nacházejí v L konfiguraci.
Výhodné formy leptinu používané v předloženém nárokovaném způsobu jsou přírodní sekvence. Použití lidského leptinu je upřednostňováno. Výhodnější leptiny požívané v předloženém způsobu zahrnují proteiny SEQ ID NOS: 1-6.
·
MYŠÍ LEPTIN
SEQ ID NO: 1
Val 1 Pro Ile Gin Lys 5 Val Gin Asp Asp Thr 10 Lys Thr Leu Ile Lys 15 Thr
Ile Val Thr Arg Ile Asn Asp Ile Ser His Thr Xaa Ser Val Ser Ser
20 25 30
Lys Gin Lys Val Thr Gly Leu Asp Phe Ile Pro Gly Leu His Pro Ile
35 40 45
Leu Thr Leu Ser Lys Met Asp Gin Thr Leu Ala Val Tyr Gin Gin Ile
50 55 60
Leu Thr Ser Met Pro Ser Arg Asn Val Ile Gin Ile Ser Asn Asp Leu
65 70 75 80
Glu Asn Leu Arg Asp Leu Leu His Val Leu Ala Phe Ser Lys Ser Cys
85 90 95
His Leu Pro Gin Ala Ser Gly Leu Glu Thr Leu Glu Ser Leu Gly Gly
100 105 110
Val Leu Glu Ala Ser Gly Tyr Ser Thr Glu Val Val Ala Leu Ser Arg
115 120 125
Leu Gin Gly Ser Leu Gin Asp Met Leu Gin Gin Leu Asp Leu Ser Pro
130 135 140
Gly Cys
145 kde:
Xaa v poloze 28 je Gin nebo nepřítomno.
Prasečí leptin
SEQ ID NO: 2
Val 1 Pro Ile Trp Arg 5 Val Gin Asp Asp Thr 10 Lys Thr Leu Ile Lys 15 Thr
Ile Val Thr Arg Ile Ser Asp Ile Ser His Met Gin Ser Val Ser Ser
20 25 30
Lys Gin Arg Val Thr Gly Leu Asp Phe Ile Pro Gly Leu His Pro Val
35 40 45
Leu Ser Leu Ser Lys Met Asp Gin Thr Leu Ala Ile Tyr Gin Gin Ile
50 55 60
Leu Thr Ser Leu Pro Ser Arg Asn Val Ile Gin Ile Ser Asn Asp Leu
65 70 75 X 80
Glu Asn Leu Arg Asp Leu Leu His Leu Leu Ala Ser Ser Lys Ser Cys
85 90 95
Pro Leu Pro Gin Ala Arg Ala Leu Glu Thr Leu Glu Ser Leu Gly Gly
100 105 110
Val Leu Glu Ala Ser Leu Tyr Ser Thr Glu Val Val Ala Leu Ser Arg
115 120 125
Leu Gin Gly Ala Leu Gin Asp Met Leu Arg Gin Leu Asp Leu Ser Pro
130 135 140
Gly Cys
145
Hovězí leptin
SEQ ID No: 3
Val Pro Ile Cys Lys Val Gin Asp Asp Thr Lys Thr Leu Ile Lys Thr
1 5 10 15
Ile Val Thr Arg Ile Asn Asp Ile Ser His Thr Xaa Ser Val Ser Ser
20 25 30
• ·
Lys Gin Arg 35 Val Thr Gly Leu Asp 40 Phe Ile Pro Gly Leu 45 His Pro Leu
Leu Ser Leu Ser Lys Met Asp Gin Thr Leu Ala Ile Tyr Gin Gin Ile
50 55 60
Leu Thr Ser Leu Pro Ser Arg Asn Val Val Gin Ile Ser Asn Asp Leu
65 70 75 80
Glu Asn Leu Arg Asp Leu Leu His Leu Leu Ala Ala Ser Lys Ser Cys
85 90 95
Pro Leu Pro Gin Val Arg Ala Leu Glu Ser Leu Glu Ser Leu Gly Val
100 105 110
Val Leu Glu Ala Ser Leu Tyr Ser Thr Glu Val Val Ala Leu Ser Arg
115 120 125 \
Leu Gin Gly Ser Leu Gin Asp Met Leu Arg Gin Leu Asp Leu Ser Pro
130 135 140
Gly Cys
145 kde
Xaa v poloze 28 je Gin nebo nepřítomno.
LIDSKÝ LEPTIN
SEQ ID NO: 4
Val Pro Ile Gin Lys Val Gin Asp Asp Thr Lys Thr Leu Ile Lys Thr 15 1015
Ile Val Thr Arg Ile Asn Asp Ile Ser His Xaa Xaa Ser Val Ser Ser
2530
Lys Gin Lys Val Thr Gly Leu Asp Phe Ile Pro Gly Leu His Pro Ile 3540
Leu Thr 50 Leu Ser Lys Met Asp 55 Gin Thr Leu Ala Val 60 Tyr Gin Gin Ile
Leu Thr Ser Met Pro Ser Arg Asn Val Ile Gin Ile Ser Asn Asp Leu
65 70 75 80
Glu Asn Leu Arg Asp Leu Leu His Val Leu Ala Phe Ser Lys Ser Cys
85 90 95
His Leu Pro Trp Ala Ser Gly Leu Glu Thr Leu Asp Ser Leu Gly Gly
100 105 110
Val Leu Glu Ala Ser Gly Tyr Ser Thr Glu Val Val Ala Leu Ser Arg
115 120 125
Leu Gin Gly Ser Leu Gin Asp Met Leu Trp Gin Leu Asp Leu Ser Pro
130 135 140
Gly Cys
145 kde:
Xaa v poloze 27 je Thr nebo Ala; a
Xaa v poloze 28 je Gin nebo nepřítomno
RHESUS LEPTIN
SEQ ID NO: 5
Val 1 Pro Ile Gin Lys 5 Val Gin Ser Asp Thr 10 Lys Thr Leu Ile Lys 15
Thr Ile Val Thr Arg Ile Asn Asp Ile Ser His Thr Gin Ser Val
20 25 30
Ser Ser Lys Gin Arg Val Thr Gly Leu Asp Phe Ile Pro Gly Leu
35 40 45
His Pro Val Leu Thr Leu Ser Gin Met Asp Gin Thr Leu Ala Ile • · • · ♦ · · ·
Tyr Gin Gin Ile Leu 65 Ile Asn Leu Pro Ser 70 Arg Asn Val Ile Gin 75
Ile Ser Asn Asp Leu Glu Asn Leu Arg Asp Leu Leu His Leu Leu
80 85 90
Ala Phe Ser Lys Ser Cys His Leu Pro Leu Ala Ser Gly Leu Glu
95 100 105
Thr Leu Glu Ser Leu Gly Asp Val Leu Glu Ala Ser Leu Tyr Ser
110 115 120
Thr Glu Val Val Ala Leu Ser Arg Leu Gin Gly Ser Leu Gin Asp
125 130 135
Met Leu Trp Gin Leu Asp Leu Ser Pro Gly Cys X
140 145
KRYSÍ LEPTIN
SEQ ID NO: 6
Val 1 Pro Ile His Lys 5 Val Gin Asp Asp Thr 10 Lys Thr Leu Ile Lys 15 Thr
Ile Val Thr Arg Ile Asn Asp Ile Ser His Thr Gin Ser Val Ser Ala
20 25 30
Arg Gin Arg Val Thr Gly Leu Asp Phe Ile Pro Gly Leu His Pro Ile
35 40 45
Leu Ser Leu Ser Lys Met Asp Gin Thr Leu Ala Val Tyr Gin Gin Ile
50 55 60
Leu Thr Ser Leu Pro Ser Gin Asn Val Leu Gin Ile Ala His Asp Leu
65 70 75 80
Glu Asn Leu Arg Asp Leu Leu His Leu Leu Ala Phe Ser Lys Ser Cys
85 90 95
·· ···<
• · · · · · · · · · ···· · ♦ · · · · · • · · · · · · · · « · · ·
9 - • • · · Φ ·
Ser Leu Pro Gin Thr Arg Gly Leu Gin Lys Pro Glu Ser Leu Asp Gly
100 105 110
Val Leu Glu Ala Ser Leu Tyr Ser Thr Glu Val Val Ala Leu Ser Arg
115 120 125
Leu Gin Gly Ser Leu Gin Asp Ile Leu Gin Gin Leu Asp Leu Ser Pro
130 135 140
Glu Cys
145
Navíc k výše uvedeným proteinovým sekvencím se často považuje za účinné připravení antidiabetických proteinů s jednou nebo dvěma aminokyselinovými vedoucími (leader) sekvencemi, zejména s leader sekvencemi, ^obsahujícími methionin. Dvě často používané leader sekvence jsou Met-Arg a Met-Asp. Takovéto proteiny mohou být pojmenovány inf ra jako Met-Arg-leptin nebo Met-Asp-leptin nebo mohou býti identifikovány jako Met-Arg-SEQ ID NO:X, kde X je 1 až 6.
U způsobů podle předloženého vynálezu jsou taktéž používána leptinová mimetika a fragmenty. Leptinová mimetika jsou obecně definována obecným vzorcem (I) (SEQ ID N0:7), který následuj e:
Val 1 Pro Ile Gin Lys 5 Val Gin Asp Asp Thr 10 Lys Thr Leu Ile Lys 15 Thr
Ile Val Thr Arg Ile Xaa Asp Ile Ser His Xaa Xaa Ser Val Ser Ser
20 25 30
Lys Gin Lys Val Thr Gly Leu Asp Phe Ile Pro Gly Leu His Pro Ile
35 40 45
Leu Thr Leu Ser Lys Xaa Asp Gin Thr Leu Ala Val Tyr Gin Gin Ile
50 55 60
·· ····
Leu Thr Ser Xaa Pro Ser Arg Xaa Val Ile Gin Ile Xaa Asn Asp Leu
65 70 75 80
Glu Asn Leu Arg Asp Leu i Leu His Val Leu Ala Phe Ser Lys Ser Cys
85 90 95
His Leu Pro Trp Ala Ser Gly Leu Glu Thr Leu Asp Ser Leu Gly Gly
100 105 110
Val Leu Glu Ala Ser Xaa . Tyr Ser Thr Glu Val Val Ala Leu Ser Arg
115 120 125
Leu Gin Gly Ser Leu Gin i Asp Met Leu Trp Gin Leu Asp Leu Ser Pro
130 135 140
145
Gly Cys
kde
Xaa v poloze 22 je Asn, Asp nebo Glu f
Xaa v poloze 27 je Thr nebo Ala;
Xaa v poloze 28 je Gin, Glu nebo nepřítomno f
Xaa v poloze 54 je Met nebo Ala;
Xaa v poloze 68 je Met nebo Leu;
Xaa v poloze 72 Asn , Asp nebo Glu f
Xaa v poloze 77 je Ser nebo Ala;
Xaa v poloze 118 je Gly nebo Leu;
uvedené proteiny vykazuji alespoň jednu substituci, zvolenou ze souboru zahrnujícího:
His v poloze 97 je i nahrazen : Ser nebo Pro;
Trp v poloze 100 je nahrazen Gin, Ala nebo Leu;
Ala v poloze 101 je nahrazen Thr nebo Val;
Ser v poloze 102 je nahrazen Arg;
Gly v poloze 103 je nahrazen Ala;
Glu v poloze 105 je nahrazen Gin;
Thr v poloze 106 je nahrazen Lys nebo Ser;
- 11 • ·· ·· ···· ·· ·· • · · · · · ···· • ·♦· * ♦ · · · ·· * · ♦ · · · * · · · · · · ··* · · · t · · · ··· ·· ·· ·· ·· ··
Leu v poloze 107 je nahrazen Pro;
Asp v poloze 108 je nahrazen Glu; nebo Gly v poloze 111 je nahrazen Asp.
Výhodně jsou leptinová mimetika obecného vzorce (II) (SEQ ID NO:8) který následuje:
Val 1 Pro Ile Gin Lys 5 Val Gin Asp Asp Thr 10 Lys Thr Leu Ile Lys 15 Thr
Ile Val Thr Arg Ile Asn Asp Ile Ser His Xaa Gin Ser Val Ser Ser
20 25 30
Lys Gin Lys Val Thr Gly Leu Asp Phe Ile Pro Gly Leu His Pro Ile
35 40 45
Leu Thr Leu Ser Lys Met Asp Gin Thr Leu Ala Val Tyr Gin Gin Ile
50 55 60
Leu Thr Ser Met Pro Ser Arg Asn Val Ile Gin Ile Xaa Asn Asp Leu
65 70 75 80
Glu Asn Leu Arg Asp Leu Leu His Val Leu Ala Phe Ser Lys Ser Cys
85 90 95
His Leu Pro Trp Ala Ser Gly Leu Glu Thr Leu Asp Ser Leu Gly Gly
100 105 110
Val Leu Glu Ala Ser Xaa Tyr Ser Thr Glu Val Val Ala Leu Ser Arg
115 120 125
Leu Gin Gly Ser Leu Gin Asp Met Leu Trp Gin Leu Asp Leu Ser Pro
130 135 140
Gly Cys
145
9999
- 12 ve kterém:
Xaa v poloze 27 je Thr nebo Ala;
Xaa v poloze 77 je Ser nebo Ala;
Xaa v poloze 118 je Gly nebo Leu;
uvedené proteiny vykazuji alespoň jednu substituci, výhodně jednu až pět substitucí, obzvláště výhodně jednu až dvě substituce zvolené ze souboru zahrnujícího:
His v poloze 97 je ] nahrazen : Ser;
Trp v poloze 100 je nahrazen Gin;
Ala v poloze 101 je nahrazen Thr;
Glu v poloze 105 je nahrazen Gin;
Thr v poloze 106 je nahrazen Lys;
Leu v poloze 107 je nahrazen Pro;
Asp v poloze 108 je nahrazen Glu; nebo
Gly v poloze 111 je nahrazen Asp.
Příklady výhodných proteinů podle předloženého vynálezu zahrnují proteiny SEQ ID NO:8, ve kterých
Xaa v poloze 27 je Thr;
Xaa v poloze 77 je Ser;
Xaa v poloze 118 je Gly; a
rezidua aminokyselin jsou v polohách 97, 100, 101, 105, 106, 107, 108 a 111 jak vyplývá z tabulky I. Přírodní lidská sekvence je uvedena pro srovnání s proteiny používanými v postupech podle předloženého vynálezu.
• · · · · ·
- 13 Tabulka I
Poloha aminokyseliny
Sloučenina 97 100 101 105 106 107 108 111
přiroz. lidský His Trp Ala Glu Thr Leu Asp Gly
1 Ser Trp Ala Glu Thr Leu Asp Gly
2 His Gin Ala Glu Thr Leu Asp Gly
3 His Trp Thr Glu Thr Leu Asp Gly
4 His Trp Ala Gin Thr Leu Asp Gly
5 His Trp Ala Glu Lys Leu Asp Gly
6 His Trp Ala Glu Thr Pro Asp Gly
7 His Trp Ala Glu Thr Leu, Glu Gly
8 His Trp Ala Glu Thr Leu Asp Asp
9 Ser Gin Ala Glu Thr Leu Asp Gly
10 Ser Trp Thr Glu Thr Leu Asp Gly
11 Ser Trp Ala Gin Thr Leu Asp Gly
12 Ser Trp Ala Glu Lys Leu Asp Gly
13 Ser Trp Ala Glu Thr Pro Asp Gly
14 Ser Trp Ala Glu Thr Leu Glu Gly
15 Ser Trp Ala Glu Thr Leu Asp Asp
16 His Gin Thr Glu Thr Leu Asp Gly
17 His Gin Ala Gin Thr Leu Asp Gly
18 His Gin Ala Glu Lys Leu Asp Gly
19 His Gin Ala Glu Thr Pro Asp Gly
20 His Gin Ala Glu Thr Leu Glu Gly
21 His Gin Ala Glu Thr Leu Asp Asp
22 His Trp Thr Gin Thr Leu Asp Gly
23 His Trp Thr Glu Lys Leu Asp Gly
24 His Trp Thr Glu Thr Pro Asp Gly
25 His Trp Thr Glu Thr Leu Glu Gly
26 His Trp Thr Glu Thr Leu Asp Asp
27 His Trp Ala Gin Lys Leu Asp Gly
·· ·· ···· • ·
- 14 - • ··· • · · • · • · · ♦ · ♦ • · · • · · · • · · · • · • ··· • ··
28 His Trp Ala Gin Thr Pro Asp Gly
29 His Trp Ala Gin Thr Leu Glu Gly
30 His Trp Ala Gin Thr Leu Asp Asp
31 His Trp Ala Glu Lys Pro Asp Gly
32 His Trp Ala Glu Lys Leu Glu Gly
33 His Trp Ala Glu Lys Leu Asp Asp
34 His Trp Ala Glu Thr Pro Glu Gly
35 His Trp Ala Glu Thr Pro Asp Asp
36 His Trp Ala Glu Thr Leu Glu Asp
37 Ser Gin Thr Glu Thr Leu Asp Gly
38 Ser Gin Ala Gin Thr Leu Asp Gly
39 Ser Gin Ala Glu Lys Leu Asp Gly
40 Ser Gin Ala Glu Thr Pro Asp Gly
41 Ser Gin Ala Glu Thr Leu Glu Gly
42 Ser Gin Ala Glu Thr Leu Asp Asp
43 Ser Trp Thr Gin Thr Leu Asp Gly
44 Ser Trp Thr Glu Lys Leu Asp Gly
45 Ser Trp Thr Glu Thr Pro Asp Gly
46 Ser Trp Thr Glu Thr Leu Glu Gly
47 Ser Trp Thr Glu Thr Leu Asp Asp
48 Ser Trp Ala Gin Lys Leu Asp Gly
49 Ser Trp Ala Gin Thr Pro Asp Gly
50 Ser Trp Ala Gin Thr Leu Glu Gly
51 Ser Trp Ala Gin Thr Leu Asp Asp
52 Ser Trp Ala Glu Lys Pro Asp Gly
53 Ser Trp Ala Glu Lys Leu Glu Gly
54 Ser Trp Ala Glu Lys Leu Asp Asp
55 Ser Trp Ala Glu Thr Pro Glu Gly
56 Ser Trp Ala Glu Thr Pro Asp Asp
57 Ser Trp Ala Glu Thr Leu Glu Asp
58 His Gin Thr Gin Thr Leu Asp Gly
59 His Gin Thr Glu Lys Leu Asp Gly
60 His Gin Thr Glu Thr Pro Asp Gly
61 His Gin Thr Glu Thr Leu Glu Gly
62 His Gin Thr Glu Thr Leu Asp Asp
··· · · · · · · · • ··· · · · ···· ······ ·· ··· · · • · · · · · · · · ·
- 15 • · · • · • · · · ··
63 His Gin Ala Gin Lys Leu Asp Gly
64 His Gin Ala Gin Thr Pro Asp Gly
65 His Gin Ala Gin Thr Leu Glu Gly
66 His Gin Ala Gin Thr Leu Asp Asp
67 His Gin Ala Glu Lys Pro Asp Gly
68 His Gin Ala Glu Lys Leu Glu Gly
69 His Gin Ala Glu Lys Leu Asp Asp
70 His Gin Ala Glu Thr Pro Glu Gly
71 His Gin Ala Glu Thr Pro Asp Asp
72 His Gin Ala Glu Thr Leu Glu Asp
73 His Trp Thr Gin Lys Leu Asp Gly
74 His Trp Thr Gin Thr Pro Asp Gly
75 His Trp Thr Gin Thr Leu Glu Gly
76 His Trp Thr Gin Thr Leu Asp Asp
77 His Trp Thr Glu Lys ProÁ Asp Gly
78 His Trp Thr Glu Lys Leu Glu Gly
79 His Trp Thr Glu Lys Leu Asp Asp
80 His Trp Thr Glu Thr pro Glu Gly
81 His Trp Thr Glu Thr Pro Asp Asp
82 His Trp Thr Glu Thr Leu Glu Asp
83 His Trp Ala Gin Lys Pro Asp Gly
84 His Trp Ala Gin Lys Leu Glu Gly
85 His Trp Ala Gin Lys Leu Asp Asp
86 His Trp Ala Gin Thr Pro Glu Gly
87 His Trp Ala Gin Thr Pro Asp Asp
88 His Trp Ala Gin Thr Leu Glu Asp
89 His Trp Ala Glu Lys Pro Glu Gly
90 His Trp Ala Glu Lys Pro Asp Asp
91 His Trp Ala Glu Lys Leu Glu Asp
92 His Trp Ala Glu Thr Pro Glu Asp
93 Ser Gin Thr Gin Thr Leu Asp Gly
94 Ser Gin Thr Glu Lys Leu Asp Gly
95 Ser Gin Thr Glu Thr Pro Asp Gly
96 Ser Gin Thr Glu Thr Leu Glu Gly
97 Ser Gin Thr Glu Thr Leu Asp Asp
• Φ· ΦΦ φφφφ ΦΦ ®φ ··· ·· · φ · · φ • φφφ φ φ · · · Φ· φ · · · · φ ΦΦ ·«· · φ • · · φφφφ φφφ
- 16 - • Φ · ΦΦ Φ· ΦΦ ··
98 Ser Gin Ala Gin Lys Leu Asp Gly
99 Ser Gin Ala Gin Thr Pro Asp Gly
100 Ser Gin Ala Gin Thr Leu Glu Gly
101 Ser Gin Ala Gin Thr Leu Asp Asp
102 Ser Gin Ala Glu Lys Pro Asp Gly
103 Ser Gin Ala Glu Lys Leu Glu Gly
104 Ser Gin Ala Glu Lys Leu Asp Asp
105 Ser Gin Ala Glu Thr Pro Glu Gly
106 Ser Gin Ala Glu Thr Pro Asp Asp
107 Ser Gin Ala Glu Thr Leu Glu Asp
108 Ser Trp Thr Gin Lys Leu Asp Gly
109 Ser Trp Thr Gin Thr Pro Asp Gly
110 ser Trp Thr Gin Thr Leu Glu Gly
111 Ser Trp Thr Gin Thr Leu Asp Asp
112 ser Trp Thr Glu Lys Pro y Asp Gly
113 Ser Trp Thr Glu Lys Leu Glu Gly
114 Ser Trp Thr Glu Lys Leu Asp Asp
115 Ser Trp Thr Glu Thr Pro Glu Gly
116 Ser Trp Thr Glu Thr Pro Asp Asp
117 Ser Trp Thr Glu Thr Leu Glu Asp
118 Ser Trp Ala Gin Lys Pro Asp Gly
119 Ser Trp Ala Gin Lys Leu Glu Gly
120 Ser Trp Ala Gin Lys Leu Asp Asp
121 Ser Trp Ala Gin Thr Pro Glu Gly
122 Ser Trp Ala Gin Thr Pro Asp Asp
123 Ser Trp Ala Gin Thr Leu Glu Asp
124 Ser Trp Ala Glu Lys Pro Glu Gly
125 Ser Trp Ala Glu Lys Pro Asp Asp
126 Ser Trp Ala Glu Lys Leu Glu Asp
127 Ser Trp Ala Glu Thr Pro Glu Asp
128 His Gin Thr Gin Lys Leu Asp Gly
129 His Gin Thr Gin Thr Pro Asp Gly
130 His Gin Thr Gin Thr Leu Glu Gly
131 His Gin Thr Gin Thr Leu Asp Asp
132 His Gin Thr Glu Lys Pra Asp Gly
i
- 17 4 · 9 • · e · e · 9 ·
133 His Gin Thr Glu Lys Leu Glu Gly
134 His Gin Thr Glu Lys Leu Asp Asp
135 His Gin Thr Glu Thr Pro Glu Gly
136 His Gin Thr Glu Thr Pro Asp Asp
137 His Gin Thr Glu Thr Leu Glu Asp
138 His Gin Ala Gin Lys Pro Asp Gly
139 His Gin Ala Gin Lys Leu Glu Gly
140 His Gin Ala Gin Lys Leu Asp Asp
141 His Gin Ala Gin Thr Pro Glu Gly
142 His Gin Ala Gin Thr Pro Asp Asp
143 His Gin Ala Gin Thr Leu Glu Asp
144 His Gin Ala Glu Lys Pro Glu Gly
145 His Gin Ala Glu Lys Pro Asp Asp
146 His Gin Ala Glu Lys Leu Glu Asp
147 His Gin Ala Glu Thr Pro X Glu Asp
148 His Trp Thr Gin Lys Pro Asp Gly
149 His Trp Thr Gin Lys Leu Glu Gly
150 His Trp Thr Gin Lys Leu Asp Asp
151 His Trp Thr Gin Thr Pro Glu Gly
152 His Trp Thr Gin Thr Pro Asp Asp
153 His Trp Thr Gin Thr Leu Glu Asp
154 His Trp Thr Glu Lys Pro Glu Gly
155 His Trp Thr Glu Lys Pro Asp Asp
156 His Trp Thr Glu Lys Leu Glu Asp
157 His Trp Thr Glu Thr Pro Glu Asp
158 His Trp Ala Gin Lys Pro Glu Gly
159 His Trp Ala Gin Lys Pro Asp Asp
160 His Trp Ala Gin Lys Leu Glu Asp
161 His Trp Ala Gin Thr Pro Glu Asp
162 His Trp Ala Glu Lys Pro Glu Asp
163 His Trp Ala Gin Lys Pro Glu Asp
164 His Trp Thr Glu Lys Pro Glu Asp
165 His Trp Thr Gin Thr Pro Glu Asp
166 His Trp Thr Gin Lys Leu Glu Asp
167 His Trp Thr Gin Lys Pro Asp Asp
168 His Trp Thr Gin Lys Pro Glu Gly
169 His Gin Ala Glu Lys Pro Glu Asp
170 His Gin Ala Gin Thr Pro Glu Asp
171 His Gin Ala Gin Lys Leu Glu Asp
172 His Gin Ala Gin Lys Pro Asp Asp
173 His Gin Ala Gin Lys Pro Glu Gly
174 His Gin Thr Glu Thr Pro Glu Asp
175 His Gin Thr Glu Lys Leu Glu Asp
176 His Gin Thr Glu Lys Pro Asp Asp
177 His Gin Thr Glu Lys Pro Glu Gly
178 His Gin Thr Gin Thr Leu Glu Asp
179 His Gin Thr Gin Thr Pro Asp Asp
180 His Gin Thr Gin Thr Pro Glu Gly
181 His Gin Thr Gin Lys Leu Asp Asp
182 His Gin Thr Gin Lys Leu Glu Gly
183 His Gin Thr Gin Lys Pro Asp Gly
184 Ser Trp Ala Glu Lys Pro Glu Asp
185 Ser Trp Ala Gin Thr Pro Glu Asp
186 Ser Trp Ala Gin Lys Leu Glu Asp
187 Ser Trp Ala Gin Lys Pro Asp Asp
188 Ser Trp Ala Gin Lys Pro Glu Gly
189 Ser Trp Thr Glu Thr Pro Glu Asp
190 Ser Trp Thr Glu Lys Leu Glu Asp
191 Ser Trp Thr Glu Lys Pro Asp Asp
192 Ser Trp Thr Glu Lys Pro Glu Gly
193 Ser Trp Thr Gin Thr Leu Glu Asp
194 Ser Trp Thr Gin Thr Pro Asp Asp
195 Ser Trp Thr Gin Thr Pro Glu Gly
196 Ser Trp Thr Gin Lys Leu Asp Asp
197 Ser Trp Thr Gin Lys Leu Glu Gly
198 Ser Trp Thr Gin Lys Pro Asp Gly
199 Ser Gin Ala Glu Thr Pro Glu Asp
200 Ser Gin Ala Glu Lys Leu Glu Asp
201 Ser Gin Ala Glu Lys Pro Asp Asp
202 Ser Gin Ala Glu Lys Pro Glu Gly
• 4 · ·
• *· *4
4444 • 4·
44 *«· Ií
203 Ser Gin Ala Gin Thr Leu Glu Asp
204 Ser Gin Ala Gin Thr Pro Asp Asp
205 Ser Gin Ala Gin Thr Pro Glu Gly
206 Ser Gin Ala Gin Lys Leu Asp Asp
207 Ser Gin Ala Gin Lys Leu Glu Gly
208 Ser Gin Ala Gin Lys Pro Asp Gly
209 Ser Gin Thr Glu Thr Leu Glu Asp
210 Ser Gin Thr Glu Thr Pro Asp Asp
211 Ser Gin Thr Glu Thr Pro Glu Gly
212 Ser Gin Thr Glu Lys Leu Asp Asp
213 Ser Gin Thr Glu Lys Leu Glu Gly
214 Ser Gin Thr Glu Lys Pro Asp Gly
215 Ser Gin Thr Gin Thr Leu Asp Asp
216 Ser Gin Thr Gin Thr Leu Glu Gly
217 Ser Gin Thr Gin Thr Pro X Asp Gly
218 Ser Gin Thr Gin Lys Leu Asp Gly
219 His Trp Thr Gin Lys Pro Glu Asp
220 His Gin Ala Gin Lys Pro Glu Asp
221 His Gin Thr Glu Lys Pro Glu Asp
222 His Gin Thr Gin Thr Pro Glu Asp
223 His Gin Thr Gin Lys Leu Glu Asp
224 His Gin Thr Gin Lys Pro Asp Asp
225 His Gin Thr Gin Lys Pro Glu Gly
226 Ser Trp Ala Gin Lys Pro Glu Asp
227 Ser Trp Thr Glu Lys Pro Glu Asp
228 Ser Trp Thr Gin Thr Pro Glu Asp
229 Ser Trp Thr Gin Lys Leu Glu Asp
230 ser Trp Thr Gin Lys Pro Asp Asp
231 Ser Trp Thr Gin Lys Pro Glu Gly
232 Ser Gin Ala Glu Lys Pro Glu Asp
233 Ser Gin Ala Gin Thr Pro Glu Asp
234 Ser Gin Ala Gin Lys Leu Glu Asp
235 Ser Gin Ala Gin Lys Pro Asp Asp
236 Ser Gin Ala Gin Lys Pro Glu Gly
237 Ser Gin Thr Glu Thr Pro Glu Asp
- 20 - • • · • • ·« · • · • · · · • · · t • · w • · ···· í .· • · • v * ·· • · Φ · • · • · · · • ··
238 Ser Gin Thr Glu Lys Leu Glu Asp
239 Ser Gin Thr Glu Lys Pro Asp Asp
240 Ser Gin Thr Glu Lys Pro Glu Gly
241 Ser Gin Thr Gin Thr Leu Glu Asp
242 Ser Gin Thr Gin Thr Pro Asp Asp
243 Ser Gin Thr Gin Thr Pro Glu Gly
244 Ser Gin Thr Gin Lys Leu Asp Asp
245 Ser Gin Thr Gin Lys Leu Glu Gly
246 Ser Gin Thr Gin Lys Pro Asp Gly
247 His Gin Thr Gin Lys Pro Glu Asp
248 Ser Trp Thr Gin Lys Pro Glu Asp
249 Ser Gin Ala Gin Lys Pro Glu Asp
250 Ser Gin Thr Glu Lys Pro Glu Asp
251 Ser Gin Thr Gin Thr Pro Glu Asp
252 Ser Gin Thr Gin Lys Leu y Glu Asp
253 Ser Gin Thr Gin Lys Pro Asp Asp
254 Ser Gin Thr Gin Lys Pro Glu Gly
255 Ser Gin Thr Gin Lys Pro Glu Asp
Ostatní výhodné proteiny jsou ty, ve kterých je
Xaa v poloze 27 je Ala;
Xaa v poloze 77 je Ser:
Xaa v poloze 118 je Gly; a
aminová rezidua js ou v polohách 97 , 100, 101, 105, 106,
107, 108 a 111 jak je pop sáno v tabul ce I.
Předložený vynález poskytuj e biologicky účinné prot einy,
které zajišťují efektivní léčeni obezitního diabetů typu II. Neočekávaně mají leptinové proteiny z tabulky I zlepšené vlastnosti způsobené specifickými substitucemi lidského obezitního proteinu. Tyto proteiny jsou stabilnější než myši i lidský obezitni protein a představují tudíž dokonalejší terapeutická činidla.
Byly provedeny pokusy s od pěti do šesti měsíců starými
- 21 i>9 9.
• 9· •· ·· •I · ·« « β·
Mfc9Λ • · ·· samci inbredni normální ICR myši, inbrední normální (ob/+), obézně diabetické myši (ob/ob) z Jackson Laboratories (Bar Harbor, Maine) nebo Harlan (England) a obézně diabetickými (db/db) myšmi.
Obě skupiny normálních a diabetických myší byla umístěny po šesti kusech v plastikových klecích (s podestýlkou) a voda a krmivo byly přístupné ad libitum. Teplota okolí zvířat byla udržována při 23° ± 2 °C a osvětlení bylo zapnuto od 6.00 hod do 18.00 hod. Krevní vzorky byly odebírány z žíly v ocasu. Nejbližší biologický test tedy je injektovat testovanou látku kteroukoli z několika podávačích cest (například i.v., s.c., i.p. nebo minipumpou nebo kanylou) a potom monitorovat spotřebu potravy a vody, přírůstek tělesné hmotnosti, chemické složení plasmy nebo hormonů (glukóza, inzulín, ACTH, kortikosteron, GH, T4) po různá časová období. Vhodná testovací zvířata zahrnují normální myši (ICR a pod.), a obézní myši {ob/ob, Avy/a, KK-Ay, tubby, tlusté(fat)). Kontrola na nespecifické účinky těchto injekci může být provedena s využitím vehikula s nebo bez testovaných látek podobných kompozicí a s týmiž zvířaty a monitorováním stejných parametrů nebo samotnými testovanými látkami u zvířat, u nichž se předpokládá, že nemají příslušné receptory (db/db myší, fa/fa nebo cp/cp krysy).
Úrovně krevní glukózy byly měřeny metodou glukózové oxidázy nebo spojenou hexokinázovou metodou. Plasmový inzulín byl určován radioimunologickou testovací soupravou s použitím krysího inzulínu jako standardu. Plasmové triglyceridy byly měřeny s použitím komerční soupravy s glycerolem jako standardem.
Výše uvedené studie demonstrovaly, že leptin a leptinová mimetika regulovala příjem potravy a tělesnou hmotnost u normálních ICR a geneticky obézních ob/ob myší. Chronické podávání leptinu nebo leptinových mimetik ob/ob myším plně zlepšilo diabetický stav těchto zvířat, což ukázalo potenciální příslib těchto anti- 22 «« · · · 9 · 9 «99 · « · 9999·
999 9 9 9 9999
999 9 949 99999
9999 9 99
9 9 9 9 <· ·999 diabetických proteinů pro léčeni obezitního diabetů typu II. Předkládaný vynález tedy podává způsoby pro léčení obezitního diabetů typu II, obzvláště takového, při němž jsou pozorovány nízké cirkulující úrovně leptinů.
Sloučeniny podle předkládaného vynálezu mohou být vyráběny známými chemickými procedurami, jako je peptidová syntéza v roztoku nebo v pevné fázi nebo semisyntéza v roztoku, začínající s proteinovými fragmenty, spojovanými k sobě konvenčními roztokovými metodami. Takové způsoby přípravy jsou dobře známy odborníkům v oboru a mohou být nalezeny v obecných textech, jako je H. Douglas a C. Penney, Bioorganic Chemistry (1981), str. 54-92.
Proteiny použitelné v nárokovaných použitích a způsobech mohou také být připraveny dobře známými rekombinantními DNA technikami, jako jsou techniky, popsané v Maniatis a kol., (1988) Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Press, Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, New York nebo Current Protocols in Molecular Biology (1989) a dodatky. Techniky provádění substitučních mutací na předem určených místech v DNA, která má známou sekvenci jsou dobře známy, například M13 příměrová mutageneze. Mutace, které mohou být provedeny v současných antidiabetických proteinech, nesmí dostat sekvenci ze čtecího rámce a výhodně nevytvoří komplementární oblasti, které by mohly produkovat sekundární mRNA strukturu. Viz DeBoer a kol., publikace Evropského patentu, 075,444 A (1983).
Předkládaný vynález podává způsob léčení obézních diabetiků typu
II. Způsob zahrnuje podávání účinného množství leptinu nebo leptinového mimetika v množství od 1 do 10000 μg/kg. Výhodná dávka je mezi 20 a 10000 μμ/kg. Ještě výhodnější dávka je mezi 200 a 600 μg/kg. Při praktikováni tohoto způsobu mohou být anti-diabetické proteiny podávány v jediné denní dávce nebo ve více dávkách za den. Režim ošetření může vyžadovat podávání po dlouhou dobu. Množství látky na jednu podávanou dávku nebo celkové podávané množství bude určeno lékařem a závisí na takových faktorech, jako je váha pacienta, jeho věk a celkový zdravotní stav a tolerance pacienta k podávané sloučenině.
· 0 ♦· ···· «0 0 · 0*4 0Φ 0 0000
000 0 · 0 0 0 00 • · 0 0 · « 0« 0000 0 0 0 · 0* 0 0 000 ¢0000 0 0 0 0 «< 00
Předložený vynález se také týká farmaceutických kompozici, zahrnujících sloučeniny podle předkládaného vynálezu. Proteiny, výhodně ve formě jejich farmaceuticky přijatelných soli, mohou být podávány parenterální cestou. Tak například mohou být proteiny smíchány s konvenčními farmaceutickými nosiči a excipienty. Kompozice obsahující nárokované proteiny obsahují od 0,1 % do 90 % hmotnostních účinného proteinu, výhodně v rozpustné formě a obecněji od 10 % do 30 % proteinu. Dále tyto proteiny mohou být podávány samy nebo v kombinaci s dalšími anti-obezitními činidly a činidly, používanými při léčení diabetů.
Při intravenózním podávání jsou proteiny podávány v běžně užívaných intravenózních tekutinách a podávány infúzí. Při intramuskulárním podávání je sterilní přípravek, výhodně vhodná rozpustná sůl proteinu, například sůl kyseliny chlorovodíkové, rozpuštěn a podáván ve farmaceutickém ředidle, jako je nepyrogenní voda nebo fyziologický roztok. Vhodná nerozpustná forma sloučeniny může být získána a podávána jako suspense na vodném základě nebo na základě farmaceuticky přijatelného oleje, například esteru mastné kyseliny s dlouhým řetězcem, jako je například ethyloleát.
Ve výhodném provedení se předkládaný vynález týká způsobu léčení obezitního diabetů typu II s nízkými úrovněmi leptinu, i když pacienti s vysokými úrovněmi endogenních leptinu mohou také využít nárokovaný způsob. Způsoby pro testování sérových a plasmových úrovní leptinu mohou být prováděny s použitím standardních metodologií, založených na protilátkách. Leptinové testovací soupravy jsou také komerčně dostupné od společnosti Lineo Research, lne. (14 Research Park Dr., St. Louis, MO 63304).
Výhodné je léčení obezitního diabetů typu II s úrovněmi leptinu v rozmezí 0 až 50 ng/ml. Výhodnější je léčení obezitního diabetů typu II s úrovněmi leptinu v rozmezí 0 až 30 ng/ml. Obzvláště výhodné je léčení obezitního diabetů typu II s úrovněmi leptinů v rozmezí 0 až 15 ng/ml.
- 24 Příklady provedení vynálezu
Pro ilustraci předmětu vynálezu jsou podány následující příklady, které pomáhají popsat jak provádět a praktikovat různá provedení předkládaného vynálezu. Tyto příklady v žádném případě neznamenají omezení rozsahu předkládaného vynálezu.
Přiklad 1
DNA sekvence, kódující následující proteinovou sekvenci:
Met-Arg-SEQ ID NO: 4 byla získána použitím standardní PCR metodologie z knihovny lidských tukových buněk (komerčně dostupné od CLONTECH). Stručně řečeno, degenerované primery byly zvoleny na základě publikovaných aminosekvencí lidského ob genu. Tyto primery byly připraveny pro použití v amplifikační metodě založené na polymerázové řetězové reakci (PCR) s využitím přístroje Model 380A DNA synthetiser (PE-Applied Biosystems, lne., 850 Lincoln Center Drive, Foster City, CA 94404). Přímé primery OB. FIM (5-GG GG CAT ATG AGG GTA CCT ATC CAG AAA GTC CAG GAT
GAC AC) a OB.F2H (5-GG GG CAT ATG AGG GTA CCC ATC CAG AAG
GTG CAG GAC GA) (a reverzní primery OB.R1M (5-GG GG GGATC GAT AAT TTA GCA TCC AGG GCT AAG ATC CAA CTG CCA AAG CAT) a OB.R2H (5-GG GG GGATC CTA TTA GCA CCC GGG AGA CAG GTC CAG
CTG CCA CAA CAT) byly smíchány spolu s PCR připravenou cDNA lidských tukových buněk jako s templátem (Clontech Laboratories, lne., 4030 Fabian Way, Palo Alto, CA 94303; Item #7128-1).
Byly provedeny 2 soubory PCR amplifikaci s použitím 2,5 jednotek Amplitag DNA polymerázy (Perkin Elmer Cetus) nebo 2 jednotek Vent DNA polymerázy (New England Biolabs) v 100 μΐ
- 25 reakcích. PCR reakce byly provedeny s použitím 1 μΐ cDNA lidských tukových buněk a 10 pmol každého primeru (všechny čtyři byly použity). Pro „Touchdown PRC byly použity následující operační podmínky:
2 cykly: 94 °C x 30 sec., 60°C x 30 sec., 72°C x 45 sec;
2 cykly: 94°C X 30 sec., 56°C X 30 sec., 72°C X 45 sec;
2 cykly: 94°C X 30 sec., 52°C X 30 sec., 72°C X 45 sec;
2 cykly: 94°C X 30 sec. , 48°C X 30 sec., 72°C X 45 sec;
2 cykly: 94°C X 30 sec., 44°C X 30 sec. , 72°C X 45 sec. ;
28 cyklů 94°C X 30 sec., 52°C X 30 sec., 72°C X 45 sec.
Výsledné produkty PCR reakce byly umístěny na 1 % agarózový gel a pruhy o velikosti přibližně 450 párů bází byly vizualizovány označením zabarvení ethidiumbrojnidem. Tyto pásy byly přítomny v obou souborech vzniklých PCR reakcí. Pásy byly sejmuty a reamplifikovány použitím výše uvedených podmínek ve 30 cyklech (94 °C x 30 sec., 52 °C x 30 sec., 72 °C x 45 sec.) . PCR produkt získaný s použitím Vent DNA polymerázy byl gelově purifikován a klonován do pCR-SCRIPT klonovacího vektoru (Stratagene). Vektor byl potom použit pro transformaci buněk E. coli. Plasmidová DNA byla izolována z 20 bílých kolonií E. coli a vzorky ze tří klonů byly sekvencovány. Dvě takové kolonie, E. coli DH10B/pOJ717 a E. coli DH10B/pOJ718 byly deponovány v Northern Regional Research Laboratories (NRRL) za podmínek Budapešťské Úmluvy a jsou dostupné pod označením B-21408, respektive B-21409.
Přiklad 2
Konstrukce vektoru
Plasmid, obsahující DNA sekvenci, kódující požadovaný protein byl konstruován tak, aby zahrnoval restrikční místa Ndel a BamHI. Plasmid, nesoucí klonovaný PCR produkt byl
- 26 ··· natráven Ndel a BamHI restrikčními enzymy. Malé fragmenty o asi 450 párech bází byly gelově purifikovány a ligovány do vektoru pRB182 ze kterého byla vynechána sekvence kódující A-C-B proinzulín. Ligační produkty byly transformovány do E. coli DH10B (komerčně dostupné) a kolonie, rostoucí na trypton-kvasinkových deskách s přidáním 10 μg/ml tetracyklinu byly analyzovány. Plasmidová DNA byla izolována, natrávena Ndel a BamHI a výsledné fragmenty byly separovány elektroforézou na agarózovém gelu. Plasmidy, obsahující očekávané fragmenty Ndel a BamHI o asi 450 párech bází byly uchovány. E. coli B BL21 (DE3) byly transformovány touto druhou plasmidovou expresí, vhodnou pro kultury pro produkci proteinů.
Techniky transformace buněk výše uvedenými vektory jsou dobře známy odborníkům v oboru a mohou být nalezeny v takových obecných referencích, jako je Maniatis a kol., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Press, Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, New York (1988) a Current Protocols in Molecular Biology (F. Ausabel, ed., 1989) a jejich dodatcích. Techniky zahrnují transformaci buněk E. coli, použitých ve výhodném provedení vynálezu, jak je uvedeno na příkladech, způsobem dobře známým odborníkům v oboru. Přesné podmínky, za nichž byly transformované buňky E. coli kultivovány závisí na povaze buněčné linie hostitele E. coli a použitého vektoru exprese nebo klonovacího vektoru. Tak například vektory, které zahrnují termoinducibilní oblast promotor-operátor, jako jsou cl857 termoinducibilní lambda-fágové oblasti promotoroperátor, vyžadují teplotní posun kultivačních podmínek z asi 30 °C na asi 40 °C, aby byla indukována syntéza proteinu.
Ve výhodném provedení vynálezu byly jako hostitelské buňky použity buňky E. coli K12 RV308, ale k disposici je mnoho
• · ·
9 9 9
9 9 9 ♦ · ♦* • · 9 · • ♦ 99
dalších buněčných linií, jako jsou například, aniž by tím byla omezena možná provedení vynálezu, E. coli K12 L201, L687, L693, L507, L640, L641, L695, L814 (E. coli B) . Transformované hostitelské buňky byly potom umístěny do vhodného média pod selektivním tlakem antibiotika, odpovídajícího genu resistence, který je přítomen v plasmidu exprese. Kultury jsou potom inkubovány po dobu a při teplotě, které odpovídají použité linii hostitelských buněk.
Proteiny, které jsou exprimovány v bakteriálních expresních systémech vysoké úrovně charakteristicky agregují v granulích nebo inkluzních tělesech, které obsahují vysoké úrovně přeexprimovaného proteinu. Viz například Kreuger a kol., Protein Folding (Gierasch a King, Ed. , 1990), str. 136-142, Američan Association for the Advancement of Science Publication č. 89-18S, Washington, D.C. Takové proteinové agregáty musí být solubilizovány, aby byla možná další purifikace a izolace požadovaného proteinového produktu, viz uvedená citace. Pro solubilizaci uvedených proteinů je možno použít množství technik, používajících silně denaturujících roztoků, jako je guanidinium-kyselina chlorovodíková a/nebo slabě denaturujících roztoků, jako je dithiothreitol (DTT).
Postupné odstranění denaturujících činidel (často dialýzou) z roztoku dovoluje, aby denaturovaný protein znovu přijal svoji přirozenou konformaci. Konkrétní podmínky denaturace a svinutí proteinu jsou závislé na konkrétním proteinovém expresním systému a/nebo na zpracovávaném proteinu.
Výhodně byly popisované proteiny exprimovány jako Met-ArgSeq ID NO: X a to tak, že exprimovaný protein rychle konvertoval na nárokovaný protein s kathepsinem C (známým též jako diaminopeptidáza) . Čištění proteinů probíhalo technikami známými v oboru a zahrnovalo reversní fázovou chromatografii, afinitní chromatografii a vylučovací
- 28 • *9 9 *·
9 99 9*
9 9 · ** • 99 *9 < · ♦ 9 9* 9 ·· ··
9 9 9· • * 999 * * «9999
99*9 * ♦·9· •» 9999 chromatografii.
Nárokované proteiny obsahují dva cysteinové zbytky. Pro stabilizaci proteinu tedy může být vytvořen disulfidový můstek. Do rozsahu předkládaného vynálezu spadají jak proteiny, ve kterých Cys v poloze 96 je spojen můstkem s Cys v poloze 146, tak i proteiny, které tento disulfidový můstek postrádáj i.
Navíc mohou proteiny podle předkládaného vynálezu existovat, obzvláště ve farmaceutických přípravcích, ve formě dimerů, trimerů, tetramerů a dalších multimerů. Takové multimery spadají do rozsahu předmětu předkládaného vynálezu.
Zastupuje:
Dr. Otakar Švorčík v.r.

Claims (16)

  1. PATENTOVÉ NÁROKY
    1. Použiti leptinu nebo leptinových mimetik pro výrobu léčiv pro léčeni nebo prevenci diabetes mellitus.
  2. 2. Způsob podle nároku 1, vyznačující se tím, že uvedený leptin nebo leptinové mimetikum je zvoleno ze souboru, zahrnujícího (a)
    Val 1 Pro Ile Gin Lys 5 Val Gin Asp Asp Thr 10 Lys Thr Leu Ile Lys 15 Thr Ile Val Thr Arg Ile Asn Asp Ile Ser His Thr Xaa Ser Val Ser Ser 20 25 30 Lys Gin Lys Val Thr Gly Leu Asp Phe Ile Pro Gly Leu His Pro Ile 35 40 45 Leu Thr Leu Ser Lys Met Asp Gin Thr Leu Ala Val Tyr Gin Gin Ile 50 55 60 Leu Thr Ser Met Pro Ser Arg Asn Val Ile Gin Ile Ser Asn Asp Leu 65 70 75 80 Glu Asn Leu Arg Asp Leu Leu His Val Leu Ala Phe Ser Lys Ser Cys 85 90 95 His Leu Pro Gin Ala Ser Gly Leu Glu Thr Leu Glu Ser Leu Gly Gly 100 105 110 Val Leu Glu Ala Ser Gly Tyr Ser Thr Glu Val Val Ala Leu Ser Arg 115 120 125
    Leu Gin Gly Ser Leu Gin Asp Met Leu Gin Gin Leu Asp Leu Ser Pro
    - 30 •· 9999
    130
    135
    140
    Gly Cys 145 kde: Xaa v poloze 28 je Gin nebo nepřítomno (SEQ ID NO: 1) (b)
    Val 1 Pro Ile Trp Arg 5 Val Gin Asp Asp Thr 10 Lys Thr Leu Ile Lys 15 Thr Ile Val Thr Arg Ile Ser Asp Ile Ser His Met Gin Ser Val Ser Ser 20 25 30 » Lys Gin Arg Val Thr Gly Leu Asp Phe Ile Pro Gly Leu His Pro Val 35 40 45 Leu Ser Leu Ser Lys Met Asp Gin Thr Leu Ala Ile Tyr Gin Gin Ile 50 55 60 Leu Thr Ser Leu Pro Ser Arg Asn Val Ile Gin Ile Ser Asn Asp Leu 65 70 75 80 Glu Asn Leu Arg Asp Leu Leu His Leu Leu Ala Ser Ser Lys Ser Cys 85 90 95 Pro Leu Pro Gin Ala Arg Ala Leu Glu Thr Leu Glu Ser Leu Gly Gly 100 105 110 Val Leu Glu Ala Ser Leu Tyr Ser Thr Glu Val Val Ala Leu Ser Arg 115 120 125 Leu Gin Gly Ala Leu Gin Asp Met Leu Arg Gin Leu Asp Leu Ser Pro 130 135 140
    Gly Cys
    145
    - 31 999
    99 9 99
    9 999 »· * 9 9 9 99
    9 9 99·
    99999·9 • 9 ··99 »999
    9 99*9
    9 9 9·9
    99 99*9*
    9 9 99
    99 *♦·· (SEQ ID NO: 2) (c)
    Val Pro Ile Cys Lys Val Gin Asp Asp Thr Lys Thr Leu Ile Lys Thr 1 5 10 15 Ile Val Thr Arg Ile Asn Asp Ile Ser His Thr Xaa Ser Val Ser Ser 20 25 30 Lys Gin Arg Val Thr Gly Leu Asp Phe Ile Pro Gly Leu His Pro Leu 35 40 45 Leu Ser Leu Ser Lys Met Asp Gin Thr Leu Ala Ile Tyr Gin Gin Ile 50 55 60 Leu Thr Ser Leu Pro Ser Arg Asn Val Val Gin Ile Ser Asn Asp Leu 65 70 75 80 Glu Asn Leu Arg Asp Leu Leu His Leu Leu Ala Ala Ser Lys Ser Cys 85 90 95 Pro Leu Pro Gin Val Arg Ala Leu Glu Ser Leu Glu Ser Leu Gly Val 100 105 110 Val Leu Glu Ala Ser Leu Tyr Ser Thr Glu Val Val Ala Leu Ser Arg 115 120 125 Leu Gin Gly Ser Leu Gin Asp Met Leu Arg Gin Leu Asp Leu Ser Pro
    130 135 140
    Gly Cys
    145 kde
    Xaa v poloze 28 je Gin nebo nepřítomno, (SEQ ID NO: 3)
    • toto • · ···« ·· ·· • to to • · • • · • • • · ·· • · • • · • · • · * • * to • · • · · • • • « ♦ • · • · • • • ··· ·· • · • to ♦ · • ·
    (d)
    Val 1 Pro Ile Gin Lys 5 Val Gin Ile Val Thr Arg Ile Asn Asp 20 Lys Gin Lys Val Thr Gly Leu * 35 Leu Thr Leu Ser Lys Met Asp 50 55 Leu Thr Ser Met Pro Ser Arg 65 70 Glu Asn Leu Arg Asp Leu Leu 85 His Leu Pro Trp Ala Ser Gly 100 Val Leu Glu Ala Ser Gly Tyr 115 Leu Gin Gly Ser Leu Gin Asp 130 135 Gly Cys 145 - kde Xaa v poloze 27 je Thr Xaa v poloze 28 j e Gin
    (SEQ ID NO: 4)
    Asp Asp Thr 10 Lys Thr Leu Ile Lys 15 Thr Ile Ser 25 His Xaa Xaa Ser Val 30 Ser Ser Asp 40 Phe Ile Pro Gly Leu 45 His Pro Ile Gin Thr Leu Ala Val 60 Tyr Gin Gin Ile Asn Val Ile Gin 75 Ile Ser Asn Asp Leu 80
    His Val Leu Ala Phe Ser Lys Sep Cys
    90 95 Leu Glu 105 Thr Leu Asp Ser Leu 110 Gly Gly Ser 120 Thr Glu Val Val Ala 125 Leu Ser Arg Met Leu Trp Gin Leu 140 Asp Leu Ser Pro
    nebo Ala; a nebo nepřítomno
    9 99 9· 9 • ··· 9 9 «9 • 9 ♦
    ·· 9*99 • 9 9 »9 ·· 9*9* • · ·
    9 9 9 • 9 · * 9 9 · ·· ·· *·99
    9 9 ·· t ·♦·
    9 9 9 99
    9 99
    9 ·»· (e)
    Val 1 Pro Ile Gin Lys 5 Val Gin Ser Asp Thr 10 Lys Thr Leu Ile Lys 15 Thr Ile Val Thr Arg Ile Asn Asp Ile Ser His Thr Gin Ser Val 20 25 30 Ser Ser Lys Gin Arg Val Thr Gly Leu Asp Phe Ile Pro Gly Leu 35 40 45 His Pro Val Leu Thr Leu Ser Gin Met Asp Gin Thr Leu Ala Ile 50 55 60 Tyr Gin Gin Ile Leu Ile Asn Leu Pro Ser Arg Asn Val Ile Gin 65 70 75 Ile Ser Asn Asp Leu Glu Asn Leu Arg Asp Leu Leu His Leu Le-μ 80 85 90 Ala Phe Ser Lys Ser Cys His Leu Pro Leu Ala Ser Gly Leu Glu 95 100 105 Thr Leu Glu Ser Leu Gly Asp Val Leu Glu Ala Ser Leu Tyr Ser 110 115 120 Thr Glu Val Val Ala Leu Ser Arg Leu Gin Gly Ser Leu Gin Asp 125 130 135 Met Leu Trp Gin Leu Asp Leu Ser Pro Gly Cys 140 145
    (SEQ ID NO: 5) (f)
    Val Pro Ile His Lys Val Gin Asp Asp Thr Lys Thr Leu Ile Lys Thr 1 5 10 15 Ile Val Thr Arg Ile Asn Asp Ile Ser His Thr Gin Ser Val Ser Ala
    20 25 30 ·· ····
    Arg Gin Arg 35 Val Thr Gly Leu Asp 40 Phe Ile Pro Gly Leu 45 His Pro Ile Leu Ser Leu Ser Lys Met Asp Gin Thr Leu Ala Val Tyr Gin Gin Ile 50 55 60 Leu Thr Ser Leu Pro Ser Gin Asn Val Leu Gin Ile Ala His Asp Leu 65 70 75 80 Glu Asn Leu Arg Asp Leu Leu His Leu Leu Ala Phe Ser Lys Ser Cys 85 90 95 Ser Leu Pro Gin Thr Arg Gly Leu Gin Lys Pro Glu Ser Leu Asp Gly 100 105 110 Val Leu Glu Ala Ser Leu Tyr Ser Thr Glu Val Val Ala Leu Ser Arg 115 120 125 Leu Gin Gly Ser Leu Gin Asp Ile Leu Gin Gin Leu Asp Leu Ser Pro
    130 135 140
    Glu Cys
    145 (SEQ ID NO: 6) (g)
    Val 1 Pro Ile Gin Lys 5 Val Gin Asp Asp Thr 10 Lys Thr Leu Ile Lys 15 Thr Ile Val Thr Arg Ile Xaa Asp Ile Ser His Xaa Xaa Ser Val Ser Ser 20 25 30 Lys Gin Lys Val Thr Gly Leu Asp Phe Ile Pro Gly Leu His Pro Ile 35 40 45 Leu Thr Leu Ser Lys Xaa Asp Gin Thr Leu Ala Val Tyr Gin Gin Ile 50 55 60 Leu Thr Ser Xaa Pro Ser Arg Xaa Val Ile Gin Ile Xaa Asn Asp Leu 65 70 75 80
    • · ····
    Glu Asn Leu Arg Asp 85 Leu Leu His Val Leu 90 Ala Phe Ser Lys Ser 95 Cys His Leu Pro Trp Ala Ser Gly Leu Glu Thr Leu Asp Ser Leu Gly Gly 100 105 110 Val Leu Glu Ala Ser Xaa Tyr Ser Thr Glu Val Val Ala Leu Ser Arg 115 120 125 Leu Gin Gly Ser Leu Gin Asp Met Leu Trp Gin Leu Asp Leu Ser Pro 130 135 140
    145
    Gly Cys
    kde: Xaa v poloze 22 je Asn, Asp nebo Glu; Xaa v poloze 27 je Thr nebo Ala; Xaa v poloze 28 je Gin, Glu nebo nepřítomno; Xaa v poloze 54 je Met nebo Ala; Xaa v poloze 68 je Met nebo Leu; Xaa v poloze 72 Asn, Asp nebo Glu; Xaa v poloze 77 je Ser nebo Ala; Xaa v poloze 118 je Gly nebo Leu;
    a uvedené proteiny vykazuji alespoň jednu substituci, zvolenou ze souboru zahrnujícího:
    His v poloze 97 je nahrazen Ser nebo Pro; Trp v poloze 100 je nahrazen Gin, Ala nebo Leu; Ala v poloze 101 je nahrazen Thr nebo Val; Ser v poloze 102 je nahrazen Arg; Gly v poloze 103 je nahrazen Ala; Glu v poloze 105 je nahrazen Gin; Thr v poloze 106 je nahrazen Lys nebo Ser; Leu v poloze 107 je nahrazen Pro ; Asp v poloze 108 je nahrazen Glu;
    nebo Gly v poloze 111 je nahrazen Asp, • · · ·
    - 36 (SEQ ID NO:7) a (h)
    Val 1 Pro lle Gin Lys 5 Val Gin Asp Asp Thr 10 Lys Thr Leu lle Lys 15 Thr lle Val Thr Arg lle Asn Asp lle Ser His Xaa Gin Ser Val Ser Ser 4 20 25 30 Lys Gin Lys Val Thr Gly Leu Asp Phe lle Pro Gly Leu His Pro lle 4 35 40 45 Leu Thr Leu Ser Lys Met Asp Gin Thr Leu Ala Val Tyr Gin Gin lle 50 55 60 Leu Thr Ser Met Pro Ser Arg Asn Val lle Gin lle Xaa Asn Asp Leu 65 70 75 80 Glu Asn Leu Arg Asp Leu Leu His Val Leu Ala Phe Ser Lys Ser Cys 85 90 95 His Leu Pro Trp Ala Ser Gly Leu Glu Thr Leu Asp Ser Leu Gly Gly 100 105 110 Val Leu Glu Ala Ser Xaa Tyr Ser Thr Glu Val Val Ala Leu Ser Arg 115 120 125 Leu Gin Gly Ser Leu Gin Asp Met Leu Trp Gin Leu Asp Leu Ser Pro 130 135 140
    Gly Cys
    145 kde:
    Xaa v poloze 27 je Thr nebo Ala;
    Xaa v poloze 77 je Ser nebo Ala;
    Xaa v poloze 118 je Gly nebo Leu;
    - 37 uvedené proteiny vykazují alespoň jednu substituci, výhodně jednu až pět substitucí a obzvláště výhodně jednu až dvě substituce zvolené ze souboru zahrnujícího:
    His v poloze 97 je i nahrazen ! Ser; Trp v poloze 100 je nahrazen Gin; Ala v poloze 101 je nahrazen Thr; Glu v poloze 105 je nahrazen Gin; Thr v poloze 106 je nahrazen Lys; Leu v poloze 107 je nahrazen Pro; Asp v poloze 108 je nahrazen Glu; nebo Gly v poloze 111 je nahrazen Asp,
    (SEQ ID N0:8) nebo jejich farmaceuticky přijatelné sole nebo solváty.
  3. 3. Způsob podle kteréhokoli z nároků 1 nebo 2, vyznačující se tím, že uvedený diabetes mellitus je asociován s vysokými úrovněmi endogenních leptinů.
  4. 4. Způsob podle kteréhokoli z nároků 1 nebo 3, vyznačující se tím, že uvedený diabetes mellitus je asociován s nízkými úrovněmi endogenních leptinů.
  5. 5. Způsob podle kteréhokoli z nároků 1 nebo 3, vyznačující se tím, že uvedený obezitní diabetes typu II má úrovně endogenních leptinů v rozmezí od 0 do 80 ng/ml.
  6. 6. Způsob podle kteréhokoli z nároků 1 nebo 3, vyznačující se tím, že uvedený obezitní diabetes typu II má úrovně endogenních leptinů v rozmezí od 0 do 50 ng/ml.
  7. 7. Způsob podle kteréhokoli z nároků 1 nebo 3, vyznačující se tím, že uvedený obezitní diabetes typu II má úrovně endogenních leptinů v rozmezí od 0 do 30 ng/ml.
    • ··
  8. 8. Způsob podle kteréhokoli z nároků 1 nebo 3, vyznačující se tím, že uvedený obezitni diabetes typu II má úrovně endogenních leptinů v rozmezí od 0 do 15 ng/ml.
  9. 9. Způsob léčení nebo prevence diabetes mellitus, který zahrnuje podávání leptinu nebo leptinových mimetik postiženému pacientovi.
  10. 10. Způsob podle nároku 9, vyznačující se tím, že uvedený leptin nebo leptinové mimetikum je zvoleno ze souboru, zahrnujícího leptiny s následujícími sekvencemi:
    SEQ ID NO:1, SEQ ID NO:2, SEQ ID N0:3, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:7, a SEQ ID NO:8. X 11. Způsob podle kteréhokoli z nároků 9 nebo 10, vyznačující se tím, že uvedený diabetes mellitus je asociován s vysokými úrovněmi endogenních leptinů. 12. Způsob podle kteréhokoli z nároků 9 nebo 10, vyznačující se tím, že uvedený diabetes mellitus je asociován s nízkými úrovněmi endogenních leptinů • 13. Způsob podle kteréhokoli z nároků 9 nebo 10,
    vyznačující se tím, že uvedený obezitni diabetes typu II má úrovně endogenních leptinů v rozmezí od 0 do 80 ng/ml.
  11. 14. Způsob podle kteréhokoli z nároků 9 nebo 10, vyznačující se tím, že uvedený obezitni diabetes typu II má úrovně endogenních leptinů v rozmezí od 0 do 50 ng/ml.
  12. 15. Způsob podle kteréhokoli z nároků 9 nebo 10, vyznačující se tím, že uvedený obezitni diabetes typu II má
    • 99 ·· ···· 99 99 9 9 9 • · • 9 9 • • 9 999 9 9 9 • · • * · • • 9 9 9 999 • · • • 9 9 * • · 9 9 9 • • ··· ·· ·· 9 9 9 9 9 9
    úrovně endogenních leptinů v rozmezí od 0 do 30
  13. 16. Způsob podle kteréhokoli z nároků 9 nebo 10, vyznačující se tím, že uvedený obezitní diabetes typu II má úrovně endogenních leptinů v rozmezí od 0 do 15 ng/ml.
  14. 17. Kompozice pro léčení nebo prevenci diabetes mellitus, vyznačující se tím, že obsahuje jako aktivní složku leptin nebo leptinové mimetikum.
  15. 18. Kompozice podle nároku 17, vyznačující se tím, že uvedený leptin nebo leptinové mimetikum je zvoleno ze souboru, zahrnujícího leptiny nebo leptinová mimetika následujících sekvencí: SEQ ID NO:1, SEQ ID NQ:2, SEQ ID N0:3, SEQ ID N0:4, SEQ ID N0:5, SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:7 a SEQ ID NO:8.
  16. 19. Způsob podle kteréhokoli z nároků 17 nebo 18, vyznačující se tím, že uvedený diabetes mellitus je asociován s nízkými nebo vysokými úrovněmi endogenních leptinů.
CZ974167A 1995-06-30 1996-06-26 Použití leptinu nebo leptonových mimetik pro výrobu léčiv pro léčení nebo prevenci diabetes mellitus a kompozice s jeho obsahem CZ416797A3 (cs)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US71895P 1995-06-30 1995-06-30

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CZ416797A3 true CZ416797A3 (cs) 1998-06-17

Family

ID=21692725

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CZ974167A CZ416797A3 (cs) 1995-06-30 1996-06-26 Použití leptinu nebo leptonových mimetik pro výrobu léčiv pro léčení nebo prevenci diabetes mellitus a kompozice s jeho obsahem

Country Status (14)

Country Link
US (1) US5756461A (cs)
EP (1) EP0836479A2 (cs)
JP (1) JPH11508895A (cs)
KR (1) KR19990028388A (cs)
CN (1) CN1195293A (cs)
AU (1) AU695934B2 (cs)
CA (1) CA2225454A1 (cs)
CZ (1) CZ416797A3 (cs)
EA (1) EA199800104A1 (cs)
HU (1) HUP9802609A2 (cs)
IL (1) IL122718A0 (cs)
NO (1) NO976063L (cs)
PL (1) PL324284A1 (cs)
WO (1) WO1997002004A2 (cs)

Families Citing this family (63)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6309853B1 (en) 1994-08-17 2001-10-30 The Rockfeller University Modulators of body weight, corresponding nucleic acids and proteins, and diagnostic and therapeutic uses thereof
US6471956B1 (en) 1994-08-17 2002-10-29 The Rockefeller University Ob polypeptides, modified forms and compositions thereto
US6350730B1 (en) 1994-08-17 2002-02-26 The Rockefeller University OB polypeptides and modified forms as modulators of body weight
US6048837A (en) * 1994-08-17 2000-04-11 The Rockefeller University OB polypeptides as modulators of body weight
US6429290B1 (en) 1994-08-17 2002-08-06 The Rockefeller University OB polypeptides, modified forms and derivatives
US6001968A (en) * 1994-08-17 1999-12-14 The Rockefeller University OB polypeptides, modified forms and compositions
US6124448A (en) * 1994-08-17 2000-09-26 The Rockfeller University Nucleic acid primers and probes for the mammalian OB gene
EP0759441A3 (en) * 1995-06-30 1999-06-30 Eli Lilly And Company Methods of treating neuropeptide Y-associated conditions
ZA965346B (en) * 1995-06-30 1997-12-24 Lilly Co Eli Methods of treating neuropeptide Y-associated conditions.
US6001816A (en) * 1996-06-20 1999-12-14 Merck & Co., Inc. Gene therapy for leptin deficiency
US6277592B1 (en) 1996-07-31 2001-08-21 Purina Mills, Inc. Porcine leptin protein, nucleic acid sequences coding therefor and uses thereof
ID21861A (id) * 1996-09-20 1999-08-05 Hoechst Ag Penggunaan antagonis leptin untuk pengobatan daya tahan terhadap insulin dalam diabetes tipe ii
ATE304864T1 (de) * 1997-01-07 2005-10-15 Amylin Pharmaceuticals Inc Verwendung von exedinen und deren antagonisten zur verminderung der lebensmittelaufnahme
IL120733A0 (en) * 1997-04-29 1997-08-14 Yeda Res & Dev Leptin as an inhibitor of cell proliferation
AU2951797A (en) * 1997-06-06 1998-12-21 Smithkline Beecham Plc Use of leptin antagonists for the treatment of diabetes
AU8671798A (en) * 1997-07-30 1999-02-22 Betagene, Inc. Methods and compositions relating to no-mediated cytotoxicity
ES2221717T3 (es) 1997-12-08 2005-01-01 Emd Lexigen Research Center Corp. Proteinas de fusion heterodimeras utiles para inmunoterapia dirigida e inmunoestimulacion general.
US5866547A (en) 1998-01-20 1999-02-02 Beth Israel Deaconess Medical Center Methods of neuroendocrine regulation of affective disorders
US20030105294A1 (en) * 1998-02-25 2003-06-05 Stephen Gillies Enhancing the circulating half life of antibody-based fusion proteins
WO1999044598A2 (en) * 1998-03-03 1999-09-10 Board Of Regents, The University Of Texas System Methods for inhibiting βcell apoptosis
JP4215857B2 (ja) * 1998-03-26 2009-01-28 裕 大村 学習・記憶能力改善剤
ES2267263T3 (es) * 1998-04-15 2007-03-01 Emd Lexigen Research Center Corp. Coadministracion de un inhibidor de la angiogenesis para reforzar la respuesta inmunologica por medio de la mediacion de una proteina de fusion de una citoquina con un anticuerpo.
US6777388B1 (en) 1998-08-21 2004-08-17 Clf Medical Technology Acceleration Program, Inc. Leptin-related peptides
US7208572B2 (en) 1998-08-21 2007-04-24 Albany Medical College Leptin-related peptides
EP1118001A1 (en) * 1998-10-02 2001-07-25 Amgen Inc. Method to determine a predisposition to leptin treatment
US6603058B1 (en) 1998-12-09 2003-08-05 Oklahoma Medical Research Foundation Non-human animal model for obesity and uses thereof
US6716810B1 (en) * 1998-12-09 2004-04-06 Eleanor Roosevelt Institute Composition and method for regulation of body weight and associated conditions
US20050272652A1 (en) 1999-03-29 2005-12-08 Gault Victor A Peptide analogues of GIP for treatment of diabetes, insulin resistance and obesity
US6475984B2 (en) 1999-04-29 2002-11-05 The Nemours Foundation Administration of leptin
US7067110B1 (en) 1999-07-21 2006-06-27 Emd Lexigen Research Center Corp. Fc fusion proteins for enhancing the immunogenicity of protein and peptide antigens
SK782002A3 (en) 1999-07-21 2003-08-05 Lexigen Pharm Corp FC fusion proteins for enhancing the immunogenicity of protein and peptide antigens
CN1235911C (zh) * 1999-08-09 2006-01-11 利思进药品公司 多细胞因子－抗体复合物
WO2001036489A2 (en) 1999-11-12 2001-05-25 Merck Patent Gmbh Erythropoietin forms with improved properties
AU4314801A (en) 2000-02-11 2001-08-20 Lexigen Pharm Corp Enhancing the circulating half-life of antibody-based fusion proteins
AU7172901A (en) * 2000-06-29 2002-01-14 Lexigen Pharm Corp Enhancement of antibody-cytokine fusion protein mediated immune responses by combined treatment with immunocytokine uptake enhancing agents
PT1366067E (pt) * 2001-03-07 2012-11-29 Merck Patent Gmbh Tecnologia de expressão para proteínas contendo uma unidade de anticorpo de isotipo híbrido
US6992174B2 (en) 2001-03-30 2006-01-31 Emd Lexigen Research Center Corp. Reducing the immunogenicity of fusion proteins
MXPA03009924A (es) * 2001-05-03 2004-01-29 Merck Patent Gmbh Anticuerpo recombinante especifico de tumor y uso del mismo.
ES2418954T3 (es) 2001-10-22 2013-08-19 Amgen, Inc. Uso de la leptina para el tratamiento de la lipoatrofia humana y método para determinar la predisposición a dicho tratamiento
ES2381025T3 (es) * 2001-12-04 2012-05-22 Merck Patent Gmbh Inmunocitocinas con selectividad modulada
US6899892B2 (en) * 2001-12-19 2005-05-31 Regents Of The University Of Minnesota Methods to reduce body fat
WO2004055056A1 (en) * 2002-12-17 2004-07-01 Merck Patent Gmbh Humanized antibody (h14.18) of the mouse 14.18 antibody binding to gd2 and its fusion with il-2
US8076288B2 (en) 2004-02-11 2011-12-13 Amylin Pharmaceuticals, Inc. Hybrid polypeptides having glucose lowering activity
EP2417980A1 (en) 2004-02-11 2012-02-15 Amylin Pharmaceuticals Inc. Hybrid polypeptides with selectable properties
US8404637B2 (en) 2005-02-11 2013-03-26 Amylin Pharmaceuticals, Llc GIP analog and hybrid polypeptides with selectable properties
US8263545B2 (en) 2005-02-11 2012-09-11 Amylin Pharmaceuticals, Inc. GIP analog and hybrid polypeptides with selectable properties
ES2258923B1 (es) * 2005-02-23 2007-11-01 Universitat De Les Illes Balears Uso de la leptina para la prevencion del exceso de peso corporal y composicion que contiene leptina.
EP1922336B1 (en) 2005-08-11 2012-11-21 Amylin Pharmaceuticals, LLC Hybrid polypeptides with selectable properties
BRPI0614649A2 (pt) 2005-08-11 2011-04-12 Amylin Pharmaceuticals Inc polipeptìdeos hìbridos com propriedades selecionáveis
US8227408B2 (en) * 2005-09-07 2012-07-24 Neurotez, Inc. Leptin as an anti-amyloidogenic biologic and methods for delaying the onset and reducing Alzheimer's disease-like pathology
US8497240B2 (en) 2006-08-17 2013-07-30 Amylin Pharmaceuticals, Llc DPP-IV resistant GIP hybrid polypeptides with selectable properties
JP5622720B2 (ja) * 2008-05-21 2014-11-12 ニューロテスインコーポレイテッド 神経原繊維変化に関連する進行性認知障害の治療方法
KR20120024529A (ko) * 2008-11-04 2012-03-14 니콜라오스 테자프시디스 신경섬유 매듭 및 아밀로이드 베타의 축적으로부터 기인하는 진행성 인지 기능 장애의 치료용 렙틴 조성물 및 치료 방법
EP2416797A4 (en) 2009-04-10 2013-04-24 Amylin Pharmaceuticals Llc AMYLINAGONIST COMPOUNDS FOR OXYGEN ANIMAL MICE
CN102552225A (zh) * 2010-01-25 2012-07-11 四川省中医药科学院 四氢姜黄素的新用途
US20110218141A1 (en) * 2010-03-03 2011-09-08 Hamrick Mark W Leptin therapy to increase muscle mass and to treat muscle wasting conditions
CA2813038C (en) 2010-09-28 2021-12-28 Amylin Pharmaceuticals, Llc Highly soluble leptins
WO2012122326A1 (en) * 2011-03-08 2012-09-13 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Engineered bacteria for oral delivery of glucoregulatory proteins
WO2013009539A1 (en) 2011-07-08 2013-01-17 Amylin Pharmaceuticals, Inc. Engineered polypeptides having enhanced duration of action and reduced immunogenicity
EP2900230B1 (en) 2012-09-27 2018-08-15 The Children's Medical Center Corporation Compounds for the treatment of obesity and methods of use thereof
ES2709976T3 (es) 2013-11-26 2019-04-22 Childrens Medical Ct Corp Compuestos para el tratamiento de la obesidad y procedimientos de uso de los mismos
WO2015153933A1 (en) 2014-04-03 2015-10-08 The Children's Medical Center Corporation Hsp90 inhibitors for the treatment of obesity and methods of use thereof
BR112019004715A2 (pt) 2016-09-12 2019-07-16 Aegerion Pharmaceuticals Inc métodos para detectar anticorpos neutralizantes anti-leptina

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6309853B1 (en) * 1994-08-17 2001-10-30 The Rockfeller University Modulators of body weight, corresponding nucleic acids and proteins, and diagnostic and therapeutic uses thereof

Also Published As

Publication number Publication date
EA199800104A1 (ru) 1998-10-29
NO976063D0 (no) 1997-12-23
NO976063L (no) 1998-02-16
CA2225454A1 (en) 1997-01-23
PL324284A1 (en) 1998-05-11
WO1997002004A2 (en) 1997-01-23
JPH11508895A (ja) 1999-08-03
MX9800133A (es) 1998-03-29
AU6479596A (en) 1997-02-05
US5756461A (en) 1998-05-26
WO1997002004A3 (en) 1997-05-22
KR19990028388A (ko) 1999-04-15
CN1195293A (zh) 1998-10-07
AU695934B2 (en) 1998-08-27
HUP9802609A2 (hu) 1999-03-29
IL122718A0 (en) 1998-08-16
EP0836479A2 (en) 1998-04-22

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CZ416797A3 (cs) Použití leptinu nebo leptonových mimetik pro výrobu léčiv pro léčení nebo prevenci diabetes mellitus a kompozice s jeho obsahem
US5521283A (en) Anti-obesity proteins
US5851995A (en) Anti-obesity proteins
US5532336A (en) Anti-obesity proteins
US5552522A (en) Anti-obesity proteins
US5559208A (en) Anti-obesity proteins
US5552524A (en) Anti-obesity proteins
RU2201249C2 (ru) Применение антагонистов лептина для лечения резистентности к инсулину при диабете ii типа
US5719266A (en) Anti-obesity proteins
WO1996023517A1 (en) Anti-obesity proteins
US5580954A (en) Anti-obesity proteins
US5567678A (en) Anti-obesity proteins
EP0810872A1 (en) Anti-obesity proteins
US5574133A (en) Anti-obesity proteins
US5569744A (en) Anti-obesity proteins
US5525705A (en) Anti-obesity proteins
US5563243A (en) Anti-obesity proteins
US5569743A (en) Anti-obesity proteins
US5563244A (en) Anti-obesity proteins
US5563245A (en) Anti-obesity proteins
US5567803A (en) Anti-obesity proteins
EP0743321A2 (en) Obesity gene product
EP0764722A2 (en) DNA encoding primate leptins as medicinal proteins
EP0784979A2 (en) Obesity protein formulations
US5922678A (en) Methods for treating diabetes