CZ433599A3 - Kompozice obsahující fytazu s vysokou aktivitou - Google Patents
Kompozice obsahující fytazu s vysokou aktivitou Download PDFInfo
- Publication number
- CZ433599A3 CZ433599A3 CZ19994335A CZ433599A CZ433599A3 CZ 433599 A3 CZ433599 A3 CZ 433599A3 CZ 19994335 A CZ19994335 A CZ 19994335A CZ 433599 A CZ433599 A CZ 433599A CZ 433599 A3 CZ433599 A3 CZ 433599A3
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- granulate
- phytase
- feed
- phytaza
- composition
- Prior art date
Links
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims abstract description 79
- 108010011619 6-Phytase Proteins 0.000 title claims abstract description 70
- 229940085127 phytase Drugs 0.000 title claims abstract description 58
- 230000000694 effects Effects 0.000 title claims description 41
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 title 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 claims abstract description 104
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 53
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims abstract description 45
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims abstract description 43
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 36
- 230000008569 process Effects 0.000 claims abstract description 27
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims abstract description 24
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 18
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 claims abstract description 18
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 claims abstract description 16
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 claims abstract description 16
- 241000223259 Trichoderma Species 0.000 claims abstract description 8
- 241000228212 Aspergillus Species 0.000 claims abstract description 7
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims abstract description 7
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 claims abstract description 7
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 101
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 101
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 claims description 101
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims description 29
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 23
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 claims description 22
- 238000005453 pelletization Methods 0.000 claims description 22
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 claims description 21
- 239000008107 starch Substances 0.000 claims description 20
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 19
- 238000001125 extrusion Methods 0.000 claims description 17
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims description 16
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 claims description 15
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 14
- 108010073178 Glucan 1,4-alpha-Glucosidase Proteins 0.000 claims description 13
- 239000008188 pellet Substances 0.000 claims description 13
- 241000228245 Aspergillus niger Species 0.000 claims description 9
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 9
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 claims description 7
- 235000010980 cellulose Nutrition 0.000 claims description 7
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims description 7
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 claims description 7
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 claims description 6
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 6
- 102100022624 Glucoamylase Human genes 0.000 claims description 5
- 239000004354 Hydroxyethyl cellulose Substances 0.000 claims description 5
- 229920000663 Hydroxyethyl cellulose Polymers 0.000 claims description 5
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 claims description 5
- 230000012010 growth Effects 0.000 claims description 5
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 claims description 5
- 235000019447 hydroxyethyl cellulose Nutrition 0.000 claims description 5
- 229920003088 hydroxypropyl methyl cellulose Polymers 0.000 claims description 5
- 239000003549 soybean oil Substances 0.000 claims description 5
- 235000012424 soybean oil Nutrition 0.000 claims description 5
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 claims description 4
- 239000000654 additive Substances 0.000 claims description 4
- 238000005054 agglomeration Methods 0.000 claims description 4
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 claims description 4
- 239000008157 edible vegetable oil Substances 0.000 claims description 4
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 claims description 4
- 239000001866 hydroxypropyl methyl cellulose Substances 0.000 claims description 4
- 235000010979 hydroxypropyl methyl cellulose Nutrition 0.000 claims description 4
- UFVKGYZPFZQRLF-UHFFFAOYSA-N hydroxypropyl methyl cellulose Chemical group OC1C(O)C(OC)OC(CO)C1OC1C(O)C(O)C(OC2C(C(O)C(OC3C(C(O)C(O)C(CO)O3)O)C(CO)O2)O)C(CO)O1 UFVKGYZPFZQRLF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 229920002451 polyvinyl alcohol Polymers 0.000 claims description 4
- 239000004382 Amylase Substances 0.000 claims description 3
- 229920002134 Carboxymethyl cellulose Polymers 0.000 claims description 3
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 claims description 3
- 235000010948 carboxy methyl cellulose Nutrition 0.000 claims description 3
- 239000008112 carboxymethyl-cellulose Substances 0.000 claims description 3
- 235000013305 food Nutrition 0.000 claims description 3
- 239000002243 precursor Substances 0.000 claims description 3
- 240000006439 Aspergillus oryzae Species 0.000 claims description 2
- 235000002247 Aspergillus oryzae Nutrition 0.000 claims description 2
- 241000499912 Trichoderma reesei Species 0.000 claims description 2
- 239000000828 canola oil Substances 0.000 claims description 2
- 235000019519 canola oil Nutrition 0.000 claims description 2
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 claims description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 2
- 238000002425 crystallisation Methods 0.000 claims description 2
- 230000008025 crystallization Effects 0.000 claims description 2
- 238000009478 high shear granulation Methods 0.000 claims description 2
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 claims description 2
- 239000004372 Polyvinyl alcohol Substances 0.000 claims 2
- 101710130006 Beta-glucanase Proteins 0.000 claims 1
- 108010001817 Endo-1,4-beta Xylanases Proteins 0.000 claims 1
- 238000004042 decolorization Methods 0.000 claims 1
- 238000003259 recombinant expression Methods 0.000 claims 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 abstract description 8
- 239000008103 glucose Substances 0.000 abstract description 8
- -1 ammonium ions Chemical class 0.000 abstract description 6
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 abstract description 3
- 238000012258 culturing Methods 0.000 abstract description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 27
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 25
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 17
- 238000004898 kneading Methods 0.000 description 15
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 15
- 229920002261 Corn starch Polymers 0.000 description 13
- 239000008120 corn starch Substances 0.000 description 11
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 11
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 10
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 10
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 10
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 10
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 9
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 9
- IMQLKJBTEOYOSI-GPIVLXJGSA-N Inositol-hexakisphosphate Chemical compound OP(O)(=O)O[C@H]1[C@H](OP(O)(O)=O)[C@@H](OP(O)(O)=O)[C@H](OP(O)(O)=O)[C@H](OP(O)(O)=O)[C@@H]1OP(O)(O)=O IMQLKJBTEOYOSI-GPIVLXJGSA-N 0.000 description 8
- 238000005563 spheronization Methods 0.000 description 8
- 235000010724 Wisteria floribunda Nutrition 0.000 description 7
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 7
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 7
- 235000002949 phytic acid Nutrition 0.000 description 7
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 7
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 6
- 238000005469 granulation Methods 0.000 description 6
- 230000003179 granulation Effects 0.000 description 6
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 6
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 6
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 5
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 5
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 5
- 230000000593 degrading effect Effects 0.000 description 5
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 5
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 5
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 4
- OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N Phosphorus Chemical compound [P] OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000005277 cation exchange chromatography Methods 0.000 description 4
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 4
- WRUGWIBCXHJTDG-UHFFFAOYSA-L magnesium sulfate heptahydrate Chemical compound O.O.O.O.O.O.O.[Mg+2].[O-]S([O-])(=O)=O WRUGWIBCXHJTDG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- 229940061634 magnesium sulfate heptahydrate Drugs 0.000 description 4
- 239000011574 phosphorus Substances 0.000 description 4
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 description 4
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 4
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 4
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 3
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 description 3
- 240000003183 Manihot esculenta Species 0.000 description 3
- 235000016735 Manihot esculenta subsp esculenta Nutrition 0.000 description 3
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 3
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 3
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 3
- IMQLKJBTEOYOSI-UHFFFAOYSA-N Phytic acid Natural products OP(O)(=O)OC1C(OP(O)(O)=O)C(OP(O)(O)=O)C(OP(O)(O)=O)C(OP(O)(O)=O)C1OP(O)(O)=O IMQLKJBTEOYOSI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000282849 Ruminantia Species 0.000 description 3
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 3
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 3
- 238000005571 anion exchange chromatography Methods 0.000 description 3
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 3
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 3
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 3
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 3
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 3
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 3
- 210000003608 fece Anatomy 0.000 description 3
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 3
- 229910052816 inorganic phosphate Inorganic materials 0.000 description 3
- 229960000367 inositol Drugs 0.000 description 3
- SURQXAFEQWPFPV-UHFFFAOYSA-L iron(2+) sulfate heptahydrate Chemical compound O.O.O.O.O.O.O.[Fe+2].[O-]S([O-])(=O)=O SURQXAFEQWPFPV-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 3
- 244000144972 livestock Species 0.000 description 3
- 239000010871 livestock manure Substances 0.000 description 3
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 3
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 3
- 235000021317 phosphate Nutrition 0.000 description 3
- 244000144977 poultry Species 0.000 description 3
- 235000013594 poultry meat Nutrition 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- 239000013074 reference sample Substances 0.000 description 3
- CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N scyllo-inosotol Natural products OC1C(O)C(O)C(O)C(O)C1O CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000004291 sulphur dioxide Substances 0.000 description 3
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 2
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002028 Biomass Substances 0.000 description 2
- VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L Calcium carbonate Chemical compound [Ca+2].[O-]C([O-])=O VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 101710121765 Endo-1,4-beta-xylanase Proteins 0.000 description 2
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 2
- 229920001503 Glucan Polymers 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 2
- 229920002488 Hemicellulose Polymers 0.000 description 2
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N Magnesium Chemical compound [Mg] FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 235000019759 Maize starch Nutrition 0.000 description 2
- 229920002774 Maltodextrin Polymers 0.000 description 2
- 239000005913 Maltodextrin Substances 0.000 description 2
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 2
- 108010064785 Phospholipases Proteins 0.000 description 2
- 102000015439 Phospholipases Human genes 0.000 description 2
- WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M Potassium chloride Chemical compound [Cl-].[K+] WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 2
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 244000061456 Solanum tuberosum Species 0.000 description 2
- 235000002595 Solanum tuberosum Nutrition 0.000 description 2
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000209140 Triticum Species 0.000 description 2
- 235000021307 Triticum Nutrition 0.000 description 2
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 2
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 2
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 2
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-DVKNGEFBSA-N alpha-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-DVKNGEFBSA-N 0.000 description 2
- 150000003863 ammonium salts Chemical class 0.000 description 2
- 150000001450 anions Chemical class 0.000 description 2
- 230000000433 anti-nutritional effect Effects 0.000 description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 2
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 2
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 2
- 235000013330 chicken meat Nutrition 0.000 description 2
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 2
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 2
- 235000019621 digestibility Nutrition 0.000 description 2
- 239000000428 dust Substances 0.000 description 2
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 2
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 2
- CDAISMWEOUEBRE-GPIVLXJGSA-N inositol Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O CDAISMWEOUEBRE-GPIVLXJGSA-N 0.000 description 2
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 description 2
- 229910052749 magnesium Inorganic materials 0.000 description 2
- 229940035034 maltodextrin Drugs 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 235000012054 meals Nutrition 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 235000010755 mineral Nutrition 0.000 description 2
- 239000001814 pectin Substances 0.000 description 2
- 229920001277 pectin Polymers 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 2
- 239000000467 phytic acid Substances 0.000 description 2
- 229940068041 phytic acid Drugs 0.000 description 2
- 235000019422 polyvinyl alcohol Nutrition 0.000 description 2
- FGIUAXJPYTZDNR-UHFFFAOYSA-N potassium nitrate Chemical compound [K+].[O-][N+]([O-])=O FGIUAXJPYTZDNR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920001592 potato starch Polymers 0.000 description 2
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 2
- 229940100486 rice starch Drugs 0.000 description 2
- 238000005245 sintering Methods 0.000 description 2
- 239000002002 slurry Substances 0.000 description 2
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 2
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 2
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 2
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 2
- JIAARYAFYJHUJI-UHFFFAOYSA-L zinc dichloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Zn+2] JIAARYAFYJHUJI-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- SPFMQWBKVUQXJV-BTVCFUMJSA-N (2r,3s,4r,5r)-2,3,4,5,6-pentahydroxyhexanal;hydrate Chemical compound O.OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C=O SPFMQWBKVUQXJV-BTVCFUMJSA-N 0.000 description 1
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PAWQVTBBRAZDMG-UHFFFAOYSA-N 2-(3-bromo-2-fluorophenyl)acetic acid Chemical compound OC(=O)CC1=CC=CC(Br)=C1F PAWQVTBBRAZDMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000251468 Actinopterygii Species 0.000 description 1
- 229920000310 Alpha glucan Polymers 0.000 description 1
- 239000005995 Aluminium silicate Substances 0.000 description 1
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O Ammonium Chemical compound [NH4+] QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- 239000004254 Ammonium phosphate Substances 0.000 description 1
- 108010065511 Amylases Proteins 0.000 description 1
- 102000013142 Amylases Human genes 0.000 description 1
- 229920000945 Amylopectin Polymers 0.000 description 1
- 235000019890 Amylum Nutrition 0.000 description 1
- 235000019737 Animal fat Nutrition 0.000 description 1
- 101710152845 Arabinogalactan endo-beta-1,4-galactanase Proteins 0.000 description 1
- 241000228195 Aspergillus ficuum Species 0.000 description 1
- 235000007319 Avena orientalis Nutrition 0.000 description 1
- 244000075850 Avena orientalis Species 0.000 description 1
- 229920002498 Beta-glucan Polymers 0.000 description 1
- 108700038091 Beta-glucanases Proteins 0.000 description 1
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 108010008885 Cellulose 1,4-beta-Cellobiosidase Proteins 0.000 description 1
- 241000282994 Cervidae Species 0.000 description 1
- 241000132536 Cirsium Species 0.000 description 1
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 1
- 239000004470 DL Methionine Substances 0.000 description 1
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 1
- 229920001353 Dextrin Polymers 0.000 description 1
- 239000004375 Dextrin Substances 0.000 description 1
- 235000019739 Dicalciumphosphate Nutrition 0.000 description 1
- 101710147028 Endo-beta-1,4-galactanase Proteins 0.000 description 1
- 241000283086 Equidae Species 0.000 description 1
- 108090000371 Esterases Proteins 0.000 description 1
- 235000019733 Fish meal Nutrition 0.000 description 1
- 108010093031 Galactosidases Proteins 0.000 description 1
- 102000002464 Galactosidases Human genes 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 229920002527 Glycogen Polymers 0.000 description 1
- SQUHHTBVTRBESD-UHFFFAOYSA-N Hexa-Ac-myo-Inositol Natural products CC(=O)OC1C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C1OC(C)=O SQUHHTBVTRBESD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 240000005979 Hordeum vulgare Species 0.000 description 1
- 235000007340 Hordeum vulgare Nutrition 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- BVHLGVCQOALMSV-JEDNCBNOSA-N L-lysine hydrochloride Chemical compound Cl.NCCCC[C@H](N)C(O)=O BVHLGVCQOALMSV-JEDNCBNOSA-N 0.000 description 1
- 108090001060 Lipase Proteins 0.000 description 1
- 239000004367 Lipase Substances 0.000 description 1
- 102000004882 Lipase Human genes 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 description 1
- 239000004594 Masterbatch (MB) Substances 0.000 description 1
- 239000006057 Non-nutritive feed additive Substances 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- 241000283903 Ovis aries Species 0.000 description 1
- 235000019482 Palm oil Nutrition 0.000 description 1
- 241000286209 Phasianidae Species 0.000 description 1
- 108010059820 Polygalacturonase Proteins 0.000 description 1
- 239000004614 Process Aid Substances 0.000 description 1
- 239000012564 Q sepharose fast flow resin Substances 0.000 description 1
- 241000209056 Secale Species 0.000 description 1
- 235000007238 Secale cereale Nutrition 0.000 description 1
- 238000010793 Steam injection (oil industry) Methods 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910010413 TiO 2 Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 1
- 235000016383 Zea mays subsp huehuetenangensis Nutrition 0.000 description 1
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-UHFFFAOYSA-N alpha-D-glucopyranose Natural products OCC1OC(O)C(O)C(O)C1O WQZGKKKJIJFFOK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000012211 aluminium silicate Nutrition 0.000 description 1
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011609 ammonium molybdate Substances 0.000 description 1
- APUPEJJSWDHEBO-UHFFFAOYSA-P ammonium molybdate Chemical compound [NH4+].[NH4+].[O-][Mo]([O-])(=O)=O APUPEJJSWDHEBO-UHFFFAOYSA-P 0.000 description 1
- 235000018660 ammonium molybdate Nutrition 0.000 description 1
- 229940010552 ammonium molybdate Drugs 0.000 description 1
- 229910000148 ammonium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019289 ammonium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 235000019418 amylase Nutrition 0.000 description 1
- 239000007900 aqueous suspension Substances 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 238000004061 bleaching Methods 0.000 description 1
- 229910000019 calcium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 1
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 1
- 244000309466 calf Species 0.000 description 1
- 238000011088 calibration curve Methods 0.000 description 1
- 108010089934 carbohydrase Proteins 0.000 description 1
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 1
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 238000005341 cation exchange Methods 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 235000013339 cereals Nutrition 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 1
- 239000002285 corn oil Substances 0.000 description 1
- 235000005687 corn oil Nutrition 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 235000019425 dextrin Nutrition 0.000 description 1
- MNNHAPBLZZVQHP-UHFFFAOYSA-N diammonium hydrogen phosphate Chemical compound [NH4+].[NH4+].OP([O-])([O-])=O MNNHAPBLZZVQHP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NEFBYIFKOOEVPA-UHFFFAOYSA-K dicalcium phosphate Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O NEFBYIFKOOEVPA-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 229940038472 dicalcium phosphate Drugs 0.000 description 1
- 229910000390 dicalcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 1
- 150000002170 ethers Chemical class 0.000 description 1
- 108010093305 exopolygalacturonase Proteins 0.000 description 1
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 1
- 235000019197 fats Nutrition 0.000 description 1
- 239000011790 ferrous sulphate Substances 0.000 description 1
- 235000003891 ferrous sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- 239000004467 fishmeal Substances 0.000 description 1
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 1
- 229940096919 glycogen Drugs 0.000 description 1
- 229920003063 hydroxymethyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 229940031574 hydroxymethyl cellulose Drugs 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 239000003262 industrial enzyme Substances 0.000 description 1
- 238000009776 industrial production Methods 0.000 description 1
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 1
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910000359 iron(II) sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000001788 irregular Effects 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 235000015094 jam Nutrition 0.000 description 1
- NLYAJNPCOHFWQQ-UHFFFAOYSA-N kaolin Chemical compound O.O.O=[Al]O[Si](=O)O[Si](=O)O[Al]=O NLYAJNPCOHFWQQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000019421 lipase Nutrition 0.000 description 1
- 239000012669 liquid formulation Substances 0.000 description 1
- 229960005337 lysine hydrochloride Drugs 0.000 description 1
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- SBSZHUBPJCUAAL-UHFFFAOYSA-L magnesium;sulfate;tetrahydrate Chemical compound O.O.O.O.[Mg+2].[O-]S([O-])(=O)=O SBSZHUBPJCUAAL-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 235000009973 maize Nutrition 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- FFEARJCKVFRZRR-UHFFFAOYSA-N methionine Chemical compound CSCCC(N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 1
- 235000006109 methionine Nutrition 0.000 description 1
- 238000001471 micro-filtration Methods 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 239000002674 ointment Substances 0.000 description 1
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 239000002540 palm oil Substances 0.000 description 1
- 235000010987 pectin Nutrition 0.000 description 1
- QVLTXCYWHPZMCA-UHFFFAOYSA-N po4-po4 Chemical compound OP(O)(O)=O.OP(O)(O)=O QVLTXCYWHPZMCA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 1
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 1
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 1
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 description 1
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 description 1
- 239000001103 potassium chloride Substances 0.000 description 1
- 235000011164 potassium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 239000004323 potassium nitrate Substances 0.000 description 1
- 235000010333 potassium nitrate Nutrition 0.000 description 1
- OTYBMLCTZGSZBG-UHFFFAOYSA-L potassium sulfate Chemical compound [K+].[K+].[O-]S([O-])(=O)=O OTYBMLCTZGSZBG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910052939 potassium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011151 potassium sulphates Nutrition 0.000 description 1
- 235000019833 protease Nutrition 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000009877 rendering Methods 0.000 description 1
- 230000000630 rising effect Effects 0.000 description 1
- 238000005096 rolling process Methods 0.000 description 1
- 210000004767 rumen Anatomy 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 238000011218 seed culture Methods 0.000 description 1
- 150000004760 silicates Chemical class 0.000 description 1
- 239000000344 soap Substances 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000007974 sodium acetate buffer Substances 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 239000012798 spherical particle Substances 0.000 description 1
- 238000005507 spraying Methods 0.000 description 1
- 238000013112 stability test Methods 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 239000000454 talc Substances 0.000 description 1
- 229910052623 talc Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 1
- YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N trichloroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(Cl)(Cl)Cl YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000013311 vegetables Nutrition 0.000 description 1
- 235000015099 wheat brans Nutrition 0.000 description 1
- 229920001221 xylan Polymers 0.000 description 1
- 150000004823 xylans Chemical class 0.000 description 1
- 239000010457 zeolite Substances 0.000 description 1
- 239000011701 zinc Substances 0.000 description 1
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011592 zinc chloride Substances 0.000 description 1
- 235000005074 zinc chloride Nutrition 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23K—FODDER
- A23K10/00—Animal feeding-stuffs
- A23K10/10—Animal feeding-stuffs obtained by microbiological or biochemical processes
- A23K10/14—Pretreatment of feeding-stuffs with enzymes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23K—FODDER
- A23K40/00—Shaping or working-up of animal feeding-stuffs
- A23K40/25—Shaping or working-up of animal feeding-stuffs by extrusion
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23K—FODDER
- A23K20/00—Accessory food factors for animal feeding-stuffs
- A23K20/10—Organic substances
- A23K20/163—Sugars; Polysaccharides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23K—FODDER
- A23K20/00—Accessory food factors for animal feeding-stuffs
- A23K20/10—Organic substances
- A23K20/189—Enzymes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23K—FODDER
- A23K40/00—Shaping or working-up of animal feeding-stuffs
- A23K40/10—Shaping or working-up of animal feeding-stuffs by agglomeration; by granulation, e.g. making powders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23K—FODDER
- A23K40/00—Shaping or working-up of animal feeding-stuffs
- A23K40/20—Shaping or working-up of animal feeding-stuffs by moulding, e.g. making cakes or briquettes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23K—FODDER
- A23K50/00—Feeding-stuffs specially adapted for particular animals
- A23K50/10—Feeding-stuffs specially adapted for particular animals for ruminants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23K—FODDER
- A23K50/00—Feeding-stuffs specially adapted for particular animals
- A23K50/40—Feeding-stuffs specially adapted for particular animals for carnivorous animals, e.g. cats or dogs
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23K—FODDER
- A23K50/00—Feeding-stuffs specially adapted for particular animals
- A23K50/70—Feeding-stuffs specially adapted for particular animals for birds
- A23K50/75—Feeding-stuffs specially adapted for particular animals for birds for poultry
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23K—FODDER
- A23K50/00—Feeding-stuffs specially adapted for particular animals
- A23K50/80—Feeding-stuffs specially adapted for particular animals for aquatic animals, e.g. fish, crustaceans or molluscs
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/80—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for fungi
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/16—Hydrolases (3) acting on ester bonds (3.1)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/98—Preparation of granular or free-flowing enzyme compositions
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A40/00—Adaptation technologies in agriculture, forestry, livestock or agroalimentary production
- Y02A40/80—Adaptation technologies in agriculture, forestry, livestock or agroalimentary production in fisheries management
- Y02A40/81—Aquaculture, e.g. of fish
- Y02A40/818—Alternative feeds for fish, e.g. in aquacultures
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Animal Husbandry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Birds (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Mycology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Insects & Arthropods (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Physiology (AREA)
- Marine Sciences & Fisheries (AREA)
- Fodder In General (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Cosmetics (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Detergent Compositions (AREA)
- Immobilizing And Processing Of Enzymes And Microorganisms (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Carbon And Carbon Compounds (AREA)
- Silicates, Zeolites, And Molecular Sieves (AREA)
Description
Kompozice obsahující fytazu s vysokou aktivitou
Oblast techniky
Vynález se týká přípravy a formulování fytazových enzymů a jejich použití pro přípravu granulátů použitelných v krmivech pro zvířata.
Dosavadní stav techniky
Použití různých enzymů, jakým je například fytaza, v krmivech pro zvířata, například v rámci živočišné výroby, se stává obvyklou praxí. Tyto enzymy jsou do krmiv přidávány za účelem zlepšení biodostupnosti živných a minerálních látek pro zvířata, přičemž tyto enzymy mohou rovněž zlepšit stravitelnost složek krmivá. Takové enzymy jsou obvykle vyráběny kultivací mikroorganismů ve fermentorech provozovaných v rámci velkovýroby průmyslovými výrobci enzymů. Po ukončení fermentace se rezultující břečka podrobí řadě filtračních stupňů za účelem oddělení biomasy (mikroorganismy) od požadovaného enzymu (v roztoku). Takto získaný roztok enzymu se potom prodává buď ve formě kapaliny (často až po přidání různých stabilizátorů) nebo se zpracuje na suchou formulaci.
Kapaliny s obsahem enzymu a suché formulace obsahující enzym jsou potom použity v komerčním měřítku při velkovýrobě krmiv. Kapalné formulace mohou být přidány ke krmivům až po jejich peletizaci, aby se zabránilo tepelné desaktivaci enzymu nebo enzymů, ke které by jinak mohlo dojít v průběhu peletizačního procesu.
4« 44 • ·
Suché formulace obvykle podstupují parní peletizaci, při které se krmivo vystaví před peletizaci účinku vstřikované páry. Při následném peletizačním stupni se krmivo tlačí skrze průvlak a získané pásy se nasekají na vhodné pelety různých délek. V průběhu tohoto procesu může teplota vystoupit na 60 až 95 °C.
Fytazy jsou enzymy, které (alespoň částečně) hydrolyzují fytát (myo-inositolhexakis-fosfát) na myo-inositol a anorganický fosfát. Tyto enzymy se nacházejí v pšeničných otrubách, v semenech rostlin, v živočišných střevech a mohou být rovněž produkovány mikroorganismy. Fytazy se dodávají do krmivá pro zvířata, protože jsou schopné odbourávat fytát a mohou zvyšovat biodostupnost fosforu a dalších nutričních složek pro zvířata. Fytázy mohou rovněž zvyšovat stravitelnost vápníku.
prvkem pro růst organismu, do krmivá často přidáván dosažení dobrého růstu není často zapotřebí v
Fosfor je esenciálním Hospodářským zvířatům je anorganický fosfor za monogastrických zvířat.
účelem To však případě krmiv určených pro přežvýkavce vzhledem k tomu, že v bachoru přežvýkavců jsou přítomné mikroorganismy, které katalýzují konverzi fytátu na inosítol a anorganický fosfát. Odbourání fytátu je často žádoucí vzhledem k tomu, že kyselina fytová může mít antinutriční charakter v případě, že chelatizuje užitečné minerály, vápník, zinek, hořčík a železo, přičemž nepříznivě reagovat s proteiny a tak snižovat biodostupnost pro zvířata. Přídavek fytazy může snížit množství anorganické složky krmivá, které by mělo být přidáno, v důsledku čehož dochází k vylučování menšího množství fosforu ve hnoji, čímž se hnůj stává přijatelnější pro okolní životní prostředí.
jakými jsou může rovněž jejich rovněž
Pro různé fytazové enzymy již byly klonovány a exprimovány příslušné geny. Takto EP-A-0 420 358 (Gist-Brocades) popisuje expresi mikrobiálních fytaz.
• · 9 9 99999 « 9 9 9 · · 9 999999 9 · · 9 9 9 9
9999 999 9999 99 99
V pozdější patentové přihlášce EP-A-0 684 313 (Hoffmann La Roche) se popisují sekvence DNA kódující různé polynukleotidy mající fytazovou aktivitu.
V patentovém dokumentu EP-A-0 758 018 (Gist-Brocades) se popisují způsoby zlepšení stability enzymů, zejména určených pro použití v krmivech pro zvířata a jsou zde uvedeny fytazy.
V patentovém dokumentu WO-A-94/03612 (Alko) se popisuje výroba enzymů odbourávajících fytát kultivací mikroorganismu Trichoderma, zatímco patentový dokument WO-A-97/16076 (Novo Nordisk) popisuje přípravky obsahující enzym pro použití při výrobě krmiv pro zvířata obsahujících různé hydrofobní látky.
Krmivo pro zvířata představuje jednu z největších nákladových položek při chovu hospodářských užitkových zvířat a i ostatních zvířat. Kromě toho přísady, jakými jsou například fytazy, mohou ještě dále významně zvýšit pořizovací náklady spojené s krmivý. Proto je jedním z cílů vynálezu poskytnout fytazové kompozice, které se vyrábí s nižšími pořizovacími náklady. Toho může být dosaženo v případě, že bude možné vyrobit fytazové kompozice s vysokým obsahem fytazy nebo s vysokou aktivitou fytazy. Existuje několik faktorů, které umožnily přihlašovateli vyrobit také kompozice s vysokou aktivitou fytazy a tyto faktory budou diskutovány v další části popisu.
Dodatečnou výhodou přípravy kompozic s vysokou aktivitou fytazy, která byla přihlašovatelem zjištěna, je to, že tyto kompozice vykazují citelně zvýšenou stabilitu enzymu, zejména v průběhu peletizačního procesu při přípravě krmiv pro zvířata (ve formě pelet), v důsledku čehož si krmivo zachovává vyšší aktivitu fytázy ve srovnání s kompozicemi podle dosavadního stavu techniky.
··· ··· • * ·· ·«
Podstata vynálezu
První předmět vynálezu se týká způsobu přípravy vodné kapaliny obsahující fytazu, jehož podstata spočívá v tom, že zahrnuje
a) kultivaci ve vodném prostředí mikroorganismu rodu Aspergillus nebo Trichoderma majícího heterologní gen kontrolou glukoamylazového (v případě rodu nebo celobiohydrolazového (v případě rodu promotoru a za podmínek umožňujících expresi fytazy, přičemž vodné prostředí fytazy pod Aspergillus) Trichoderma) rekombinantní obsahuje jako živinu pro mikroorganismus zdroj uhlíku a asimilovatelný zdroj dusíku, asimilovatelný
b) filtraci vodného prostředí za účelem odstranění mikroorganismu a získání vodného filtrátu, a
c) podrobení filtrátu získaného ve stupni b) mikrofiltraci k získání vodné kapaliny mající koncentraci fytazy rovnou alespoň 14 000 FTU/g.
Nově bylo zjištěno, že tento způsob poskytuje obzvláště vysokou koncentraci fytazy v získaném vodném roztoku. To umožnilo přípravu dalších fytazových kompozic, které mají rovněž vysokou hladinu aktivity enzymu, což znamená, že uvedený způsob je nejen lacinější (náklady jsou vztaženy na jednotku enzymatické aktivity), nýbrž i poskytuje vyšší stabilitu enzymu vzhledem k tomu, že bylo zjištěno, že koncentrovanější kompozice obsahující fytazu jsou mnohem více stabilnější než kompozice s nižší koncentrací.
Výhodnými mikroorganismy jsou druhy Aspergillus niger, Aspergillus oryzae nebo Trichoderma reesei. V případě mikroorganismu Aspergillus je gen fytazy vhodně pod kontrolou glukoamylazového (nebo amyloglukosidazového (AG)) promotoru. V případě mikroorganismu Trichoderma je výhodné použít celobiohydrolazový promotor.
• · 4 •
444 » · ► 4 «4 4
Asimilovatelný zdroj uhlíku může zahrnovat glukózu nebo/a maltodextrin nebo/a asimilovatelný zdroj dusíku může obsahovat amoniové ionty. Glukóza a amoniové ionty mohou být jedinými zdroji asimilovatelného uhlíku nebo dusíku ve vodném prostředí. Předpokládá se, že nebude použit žádný komplexní zdroj uhlíku nebo dusíku. Amoniové ionty mohou být dodány ve formě buď amoniaku nebo amonné soli. Výhodné amonné soli zahrnují dusičnan amonný, síran amonný a fosforečnan amonný.
Výhodně se zdroj uhlíku nebo/a dusíku dodá do kultivačního prostředí v průběhu fermentačního procesu. Rychlost dodávky jak zdroje uhlíku, tak i zdroje dusíku může být v podstatě stejná jako rychlost konzumace těchto zdrojů mikroorganismem. Takto může být zdroj uhlíku nebo/a dusíku dodáván do kultivačního prostředí kontinuálním způsobem. Zdroj uhlíku a zdroj dusíku mohou být dodávány do kultivačního prostředí odděleně nebo společně.
Získaná vodná kapalina může mít koncentraci fytázy alespoň rovnou 16 000 a možná i 18 000 FTU/g nebo dokonce ještě vyšší koncentraci fytazy.
Použitím uvedených mikroorganismů za uvedených podmínek se dosáhne relativně vysoké koncentrace fytazy ve filtrátu. To umožňuje jeho ultrafiltraci. Při realizaci některých dosud známých způsobů obsahuje rezultující filtrát příliš mnoho jemně desintegrovaného pevného podílu a příliš mnoho dalších látek na to, aby mohla být provedena jeho ultrafiltrace (dochází k ucpání filtru uvedenými látkami). Avšak při provádění způsobu podle vynálezu se získá relativně čirý filtrát, který může být podroben ultrafiltraci bez dalšího dodatečného zpracování, přičemž tato ultra-filtrace poskytuje vodnou kompozici s vysokou koncentrací fytazy.
V rámci způsobů dosavadního stavu techniky byla diskuována možnost podrobení buď filtrátu nebo vodné kompozice buď krystalizačnímu nebo/a odbarvovacímu stupni, • ·
4· 44 4 4 ·· ·· «4
4 4 4 4 4
4 4 4 ·
4 444 4·4 • 4 4 provedemu například filtrací přes aktivní uhlí. Při způsobu podle vynálezu však nemusí být oba uvedené stupně (které by jinak zvyšovaly provozní náklady výroby fytazy) provedeny.
Výhodně mikroorganismy nemají nebo alespoň neexprimují glukoamylazový gen. To znamená, že mikroorganismus může věnovat více energie výrobě fytazy.
Mikroorganismus může mít několik kopii genu fytazy. Bylo zjištěno, že tímto způsobem může být dosaženo vyšší produktivity při produkci fytazy, protože takto dochází k expresi většího počtu genů fytazy.
Vodná kompozice může být v podstatě prosta taka-amylazy.
Při provádění způsobu podle vynálezu je výhodné, jestliže mikroorganismus zkonzumuje ještě před filtrací provedenou v rámci stupně b) (v podstatě) veškeré množství zdroje uhlíku nebo/a dusíku. Toho může být dosaženo tím, že se fermentace nechá probíhat po určitou dobu ještě potom, co došlo k poslední dodávce zdroje uhlíku nebo/a dusíku. Alternativně je možné ponechat probíhat fermentaci ještě za stupněm, kdy byl přidán veškerý zdroj uhlíku nebo/a dusíku. Jeddnoznačně patrnou výhodou takového postupu je, že vodná kompozice je potom (v podstatě) prosta zdroje uhlíku nebo/a dusíku (například prosta glukózy nebo/a amonných iontů). To má rovněž za následek získání čistci vodné kapaliny, která může obsahovat menší množství vedlejších produktů. Snížením počtu vedlejších produktů lze minimalizovat počet procesních stupňů nezbytných k získání požadované vysoké enzymatické aktivity fytazy.
Nejvýhodnějším mikroorganismem je Aspergillus niger. Je rovněž výhodné, když je fytaza exprimována v mikroorganismu s glukoamylazovou signální sekvencí.
Získaná vodná kapalina obsahující fytazu může být potom použita pro různé účely, vzdor tomu, že se zde uvažuje její použití při výrobě krmiv pro zvířata. Druhý předmět
444 444
4 4 * 4
4 4 4 4 4 4 * 4 4 4 4 4
4444 444 4444 44 44 vynálezu se týká této vodné kapaliny, která je připravitelná způsobem podle prvního předmětu vynálezu a která obsahuje fytazu v koncentraci alespoň rovné 14 000 FTU/g.
V rámci této přihlášky vynálezu pojem fytaza nezahrnuje pouze přírodně se vyskytující fytazu, nýbrž zahrnuje i jakýkoliv enzym, který má aktivitu fytazy, například schopnost kazalyzovat reakci zahrnující odstranění nebo uvolnění anorganického fosforu (fosforečnanu) z myo-inositolfosfátů. Výhodně bude fytaza náležet do třídy EC 3.1.3.8. Samotnou fytazou je výhodně fungální fytaza, jakou je například fytaza odvozená od druhů Aspergillus nebo Trichoderma.
Vynález rovněž zahrnuje způsoby přípravy fytazových formulací ve formě granulátů, ve kterých se jako nosič používá jedlý uhlohydrátový polymer. Tento nosič může být v zrnité nebo práškové formě. Vodná kapalina obsahující fytazu, kterou je například roztok nebo suspenze, může být smíšena s pevným nosičem, na kterém dochází k její absorpci. V průběhu míšení nebo po něm se kapalina obsahující fytazu a pevný nosič zpracují na granulát, který může být následně vysušen. Použití uhlohydrátového nosiče umožňuje absorpci většího množství kapaliny (a tudíž i fytazy). Získaná směs může být použita k vytvoření tvárné pasty nebo neelastické hmoty, které mohou být snadno zpracovány na granule, což znamená že tato pasta nebo hmota je vytlačovatelná v extrudéru. Vhodně nosič neobsahuje vlákna, což umožní snadnější granulaci: případně přítomná vlákna by mohla bránit granulačnímu procesu realizovaného vytlačováním.
V rámci dosavadního stavu techniky existuje celá řada dokumentů týkajících se pelet obsahujících enzymy, avšak takové pelety nacházejí použití jako povrchově aktivní činidla (detergenty), nej častěji v pracích prášcích. Na rozdíl od toho se předmět přihlášky vynálezu
týká použití pelet v krmivech pro zvířata a z tohoto důvodu jsou granuláty podle vynálezu jedné (pro zvířata) a výhodně také stravitelné. Není proto překvapující, že granuláty, granule a kompozice podle vynálezu jsou prosté mýdel, detergentů a bělidel, zeolitů, pojiv, plniv (TiO2, kaolin, křemičitany, talek, atd.) a obdobných látek.
(C6Hio°5> n· Výhodně a-D-glukopyranozové (1-44) -a-D-glukanový (rozvětvený D-glukan
Jedlý uhlohydrátový polymer by měl být zvolen tak, aby byl pro zvíře, pro které je krmivo určeno, jedlý a výhodně také stravitelný. Takové polymery výhodně zahrnují glukózu (například polymer obsahující glukózu) nebo jednotky uhlohydrátový polymer jednotky, amylozu polymer) nebo/a ; vazbami (l-»4)-a-D a obsahuje (lineární amylopektin (1-46) -α-D) .
Výhodným uhlohydrátovým polymerem je škrob. Další vhodné polymery obsahující glukózu, které mohou být použity místo škrobu nebo společně se škrobem, zahrnují a-glukany, β-gluksny, pektin (jakým je proto-pektin) a glykogen. Rovněž lze uvažovat o derivátech uvedených polymerů, jakými jsou jejích ethery nebo/a estery, i když je třeba nejlépe se vyhnout zželatinovanému škrobu, který by neměl být přítomen. Vhodným uhlohydrátovým polymerem je ve vodě nerozpustný uhlohydrátový polymer.
V dále uvedených příkladech je použit kukuřičný, bramborový a rýžový škrob. Rovněž však mohou být použity škroby získané s dalších zdrojů (například z rostlin, jakými jsou například zelenina nebo jiná zemědělská plodina), mezi které například patří tapioka, maniok, pšenice, ságo, žito, oves, ječmen, jam, sorgum nebo maranta třinová. Stejně tak mohou být v rámci vynálezu použity přirozeně se vyskytující nebo modifikované (například dextrin) typy škrobů. Výhodně uhlohydrát (například škrob) obsahuje malé množství nebo nulové množství proteinu, například méně než 5 % hmotn., například méně než 2 % hmotn. a výhodně méně než 1 % hmotn..
99
9 9
9 9
999 999
9
99 ·· 99 · ·· • · · · · · · 9
9 9 . · · • · 9 9 · · • · · ♦ · ·· 99 99 999 9999
Alespoň 15 % hmotn. pevného nosiče může být tvořeno uhlohydrátovým polymerem (jakým je například škrob). Výhodně je však alespoň 30 % hmotn. pevného nosiče tvořeno uhlohydrátem a optimálně je alespoň 40 % hmotn. pevného nosiče tvořeno uhlohydrátem. Výhodněji uhlohydrát (například škrob) tvoří převážnou složku pevného nosiče, což znamená, že například více než 50 % hmotn., výhodně alespoň 60 % hmotn., vhodně alespoň 70 % hmotnosti a optimálně alespoň 80 % hmotnosti pevného nosiče je tvořeno uvedeným uhlohydrátem. Tyto hmotnostní procentické údaje jsou vztaženy na celkovou hmotnost neenzymových složek ve finálním suchém granulátu.
muže
Množství kapaliny obsahující fytazu (a tudíž i množství enzymu), které může být absorbováno nosičem je obvykle omezeno množstvím vody , které může být absorbováno. Pro přírodní granulární škrob se může uvedené množství pohybovat mezi 25 a 30 % hmotn. aniž by přitom byla použita zvýšená teplota (která by způsobila nabobtnání škrobu). V praxi bude procentické množství enzymové kapaliny, určené pro přidání k uhlohydrátu, často mnohem větší, protože kapalina obsahující enzym bude obvykle obsahovat velké množství pevného podílu. Fytazový roztok asi 25 % hmotnosti pevného podílu, v obsahovat důsledku čehož mohou být uhlohydrát (například škrob) a fytazový roztok smíšeny v poměru uhlohydrát:fytazový roztok rovném 0,5:1 až 2:1, například 1,2:1 až 1,6:1, což je v poměru asi 60 % hmotn. :40 % hmotn.. Výhodně se k pevnému nosiči přidá takové množství kapaliny, že (v podstatě) veškerá voda v uvedené (vodné) kapalině je absorbována uhlohydrátem přítomným v pevném nosiči.
Při zvýšených teplotách mohou škrob a ostatní uhlohydrátové polymery absorbovat mnohem větší množství vody při současném nabobtnání. Z tohoto důvodu je uhlohydrátový polymer schopen absorbovat vodu (nebo vodné kapaliny obsahující enzym) požadovaným způsobem. Tak
0 0 • •00
0 0 0· 0000
například kukuřičný škrob může absorbovat při teplotě 60 °C množství vody, které je rovné trojnásobku jeho hmotnosti, přičemž při teplotě 70 °C tento škrob absorbuje množství vody rovné až desetinásobku jeho hmotnosti. V rámci vynálezu se takto uvažuje o použití vyšších teplot za účelem dosažení absorpce větších množství kapaliny obsahující enzym, což přichází zejména v úvahu v případě tepelně stabilních enzymů. U těchto enzymů může být proto smíšení pevného nosiče a kapaliny (enzymu a vody) provedeno při zvýšené teplotě (například při teplotě vyšší než je okolní teplota), jakou je například teplota vyšší než 30 °C, výhodně vyšší než 40 °C a optimálně vyšší než 50 °C. Alternativně nebo dodatkově může být uvedená kapalina připravena při této teplotě.
Nicméně obecně jsou výhodné podmínky, při kterých k nabobtnání pevného nosiče nedochází, což znamená nízké teploty (například teplotu okolí). To může minimalizovat úbytek aktivity enzymů, ke kterému dochází v důsledku nestability enzymů (tepelně sensitivních enzymů) při zvýšených teplotách. Vhodnými teplotami pro smíšení enzymu a vody jsou teploty od 20 do 25 ° C.
Mechanické zpracování, použité v rámci vynálezu pro převedení směsi enzymu, vody (například kapaliny obsahující fytazu) a pevného nosiče do formy granulí (jinými slovy: granulování), může zahrnovat známé techniky, které se běžně používají v procesu formulace krmiv a enzymů. Tyto techniky mohou zahrnovat expanzi, vytlačování, sféronizaci, peletování, vysokostřižnou granulaci, bubnovou granulaci, aglomeraci ve fluidním loži nebo kombinaci uvedených technik. Tyto procesy jsou obvykle charakterizovány uplatněním mechanické energie, například prostřednictvím pohonu šněku, otáčení mísícího mechanismu, tlaku válcovacího mechanismu peletizačního stroje, pohybu částic způsobeného otáčením základnové desky, pohybu částic způsobeného proudem plynu v aglomeračním zařízení ·» · ·· ·· ·· • · · · ·· · · · · 9 * ·· · · ····· 9···9 9 9 999 999
9 9 9 9 9 9
9999 999 9999 99 ·· provozovaném na bázi fluidní vrstvy, přičemž lze použít i kombinace uvedených mechanismů. Tyto procesy umožňují smíšení pevného nosiče (například ve formě prášku) s enzymem a vodou, například ve formě kapaliny obsahující enzym (vodný roztok nebo suspenze) a následné granulování získané směsi.
V rámci další formy provedení vynálezu se granulát (například aglomerát) vytvoří postřikem pevného nosiče kapalinou obsahující enzym v aglomeračním zařízením s fluidní vrstvou.V tomto případě získané granule obsahují granulát, který může být vyroben v aglomeračním zařízení s fluidním ložem.
Výhodně míšení kapaliny obsahující fytazu a pevného nosiče může dodatečně zahrnovat hnětení směsi. To může zlepšit plastičnost směsi, což zase usnadňuje průběh granulace (například vytlačování).
V případě, že se granulát připravuje vytlačováním, potom se toto vytlačování výhodně provádí při nízkém tlaku. Výhodou tohoto nízkotlakového vytlačování je, že při něm nedochází nebo dochází jen v malé míře ke zvýšení teploty. Nízkotlakové vytlačování se například provádí v košovém extrudéru typu Fuji Paudal. Výhodně nemá vytlačování za následek zvýšení teploty vytlačovaného materiálu nad teplotu 40 °C. Vytlačováním mohou být získány granule, které se mohou odlamovat po průchodu skrze průvlak extrudéru, nebo mohou být získány pomocí řezačky.
Vhodně budou mít granule obsah vody 30 až 40 % hmotn., například 33 až 37 % hmotn.. Obsah enzymu v granulích výhodně činí 3 až 10 % hmotn., zejména 5 až 9 % hmotn..
Získané granule mohou být zaobleny (sféronizace), například ve sféromizéru, zejména ve sféromizéru typu Marumeriser, nebo/a zhutněny. Granule mohou být zaobleny ještě před sušením, neboť se tím dosáhne omezení tvorby
9· · ·· *· 99
9 9 9 99 9 9 · · · · • · · 9 99999 • 9 · · 9 9 9 999999
9 9 9 9 9 9 • 9 9999 999 9999 99 99 prachu ve finálním granulátu, přičemž zaoblený usnadňuje povlékání granulátu.
Granule mohou být potom vysušeny, například v sušičce s fluidním ložem, nebo může být v případě aglomerace prováděné ve fluidním loži přímo vysušen v aglomeračním zařízení k získání pevného suchého granulátu. Mohou být použity i další sušící metody, o kterých je obecně známo, že jsou vhodné pro sušení granulátu. Výhodně je granulát tekoucím produktem.
Uvedené sušení se výhodně provádí při teplotě od 25 do 60 °C, například při teplotě od 30 do 50 °C. Sušení může trvat od 10 minut do několika hodin, například od 15 do 30 minut. Doba sušení bude samozřejmě záviset na množství granulátu určeného k sušení, přičemž jako vodítko lze uvést, že vysušení jednoho kilogramu granulí trvá 1 až 2 sekundy.
Po vysušení granulí má rezultující granulát výhodně obsah vody rovný 3 až 10 % hmotn., například 5 až 9 % hmotn..
Získané granule mohou být povlečeny za účelem získání dodatečných (například výhodných) charakteristik nebo vlastností, mezi které patří nízký obsah prachu (neprašná úprava), získání požadované barvy, ochrana enzymu před okolním prostředím, dosažení různých účinků enzymu v jednom a téže granulátu nebo kombinace uvedených charakteristik. Granule mohou být povlečeny tukem, voskem, polymerem, solí nebo/a mastí nebo povlakem (například kapalinou) obsahujícím (druhý) enzym. Je samozřejmě možné povléci granule několika požadovanými vrstvami (různých) povlaků. Pro nanesení povlaku nebo povlaků na granule je známe celá řada postupů, které zahrnují použití fluidního lože, vysokostřížného granulátoru, mixéru-granulátoru nebo mixéru typu Nauta.
·· ·· · · · · ·
• ·
V rámci dalších forem provedení mohou hýt do granulátu zabudovány dodatečné přísady, mezi které například patří procesní pomocná činidla sloužící k dalšímu zlepšení stability enzymů v průběhu peletizačního procesu nebo/a stability granulátu v průběhu skladování. Některé z výhodných přísad jsou uvedeny dále.
Do granulátu mohou být začleněny soli (například společně s pevným nosičem nebo vodou). Výhodně mohou být přidány anorganické soli (jak je to navrženo v patentovém dokumentu EP-A-0 758 018), které mohou zlepšit zpracování a stabilitu v průběhu skladování suchého enzymového přípravku. Výhodnými anorganickými solemi jsou ve vodě rozpustné soli. Tyto soli mohou obsahovat dvojmocný kationt, jakým je (zejména) hořčík a vápník. Nejvýhodnějším aniontem je síranový aniont, i když mohou být použity i další ve vodě rozpustné anionty. Soli mohou být přidány (například do směsi) v pevné formě. Nicméně tyto soli mohou být rozpuštěny ve vodě nebo v kapalině obsahující enzym a to ještě dříve než je uvedená voda nebo kapalina obsahující enzym smíšena s pevným nosičem. Vhodně je sůl přidána v množství alespoň rovném 15 % hmotn. (vztaženo na hmotnost enzymu), například v množství rovném alespoň 30 % hmotn. Nicméně sůl může být přidána v množstvím rovném až 60 % hmotn. nebo dokonce v množství rovném až 70 % hmotn. (opět vztaženo na hmotnost enzymu). Tato množství mohou být aplikována buď do granulí nebo do granulátu. Granulát může proto obsahovat méně než 12 % hmotn. soli, například 2,5 až 7,5 % hmotn. soli, zejména 4 až 6 % hmotn. soli.
V případě, že je sůl přidána ve vodě, potom její množství může činit 5 až 30 % hmotn., zejména 15 až 25 % hmotn.
Dalšího zlepšení stability enzymu v průběhu peletizace může být dosaženo zabudováním hydrofobních, gelotvorných nebo pomalu (například ve vodě) rozpustných sloučenin. Tyto sloučeniny mohou být přidány v množství 1 áž 10 % hmotn., například v množství 2 až 8 % hmotn. a výhodně v množství 4 až 6 % hmotn. (vztaženo na hmotnost vody a složek pevného nosiče). Takové vhodné sloučeniny zahrnují deriváty celulózy, jakými například jsou HPMC (hydroxypropylmethylceluloza), CMC (karboxymethylceluloza), HEC (hydroxyethylceluloza; polyvinylalkoholy (PVA); nebo/a jedlé oleje. Tyto jedlé oleje, jako například sójový olej nebo olej canola, mohou být přidány (například do směsi určené ke granulaci) jako pomocná procesní činidla, i když je často výhodné, aby granuláty neobsahovaly žádné hydrofobní látky (například palmový olej).
Granuláty mají výhodně relativně úzkou distribuci velikosti částic (například jsou monodisperzní). Tato vlastnost může usnadnit homogenní distribuci enzymu v granulátu nebo/a homogenní distribuci enzymového granulátu v krmivu pro zvířata. V rámci způsobu podle vynálezu je snaha připravit granuláty s úzkou distribucí velikosti částic. Nicméně v případě potřeby je možné zařadit do způsobu podle vynálezu dodatečný stupeň, který ještě dále zužuje distribuci velikosti částic připravených granulí a který zahrnuje prosévání. Distribuce velikosti částic uvažovaného granulátu se vhodně pohybuje mezi 100 a 2000 mikrometry, výhodně mezi 200 a 1800 mikrometry a optimálně mezi 300 a 1600 mikrometry. Granule mohou mít nepravidelný (avšak výhodně pravidelný) tvar, například přibližně sférický tvar.
Do krmiv zvířat, která zahrnují krmivá určená pro domácí zvířata mohou být přidány další vhodné enzymy. Funkce těchto enzymů často spočívá ve zlepšení rychlosti konverze krmivá, čehož se dosáhne například snížením viskozity nebo snížením antinutričního účinku některých složek krmivá. Rovněž mohou být použity krmné enzymy, například za účelem snížení množství sloučenin ve hnoji, které jsou škodlivé pro okolní životní prostředí. Výhodnými enzymy pro tyto účely jsou: karbohydrazy, jakými jsou ·9 · ·· ·· • · « · 9 9 9 · 4 9 4 4 • · 4 4 4 4 4 ·· • · · 4 · 9 · 9 · 9 9 9 9
9 9 9 9 9 9
9999 999 ···· 99 99 amyolytické enzymy a enzymy odbourávající rostlinnou buněčnou stěnu, zahrnující celulazy, jako β-glukanazy, hemicelulazy, jako xylanazy, nebo galaktanazy; peptidazy, galaktosidazy, pektinazy, esterazy; proteazy, výhodně s neutrálním nebo/a kyselým optimem pH; a lipázy, výhodně fosfolipazy, jako například savčí pankreatické fosfolipazy.
Výhodně tyto enzymy nezahrnují enzymy odbourávající škrob (například amylazy). V rámci některých forem provedení mouhou být z enzymů vyloučeny proteazy, zejména ty, které mohou při trávení produkovat škodliviny.
Jestliže je enzymem enzym odbourávající rostlinnou buněčnou stěnu, jako například celulaza, a zejména hemicelulaza, jako xylana, potom finální granulát může mít aktivitu enzymu pohybující se od 3 000 do 100 000, výhodně od 5 000 do 80 000 a optimálně od 8 000 do 70 000 EXU/g. Jestliže je enzymem celulaza, jako například β-glukonaza, potom může mít finální granulát emzymatickou aktivitu od 500 do 15 000, výhodně od 1 000 do 10 000 a optimálně od 1 500 do 7 000 BGU/g.
Uvedené granule mohou obsahovat 5 až 20, například 7 až 15 % hmotn. enzymu nebo enzymů. Tyto enzymy mohou být přirozeně se vyskytujícími enzymy nebo rekombinantními enzymy.
Výhodný způsob podle vynálezu proto zahrnuje:
a) smíšení vodné kapaliny obsahující fytazu a pevného nosiče obsahující alespoň 15 % hmotn. jedlého uhlohydrátového polymeru, například smíšení pevného nosiče s vodnou kapalinou obsahující enzym;
b) případně hnětení získané směsi;
c) granulování, například mechanickým zpracováním, směsi za účelem získání granulí obsahujících enzym, například za použití granulátoru nebo vytlačováním;
d) případnou sféronizaci granulí; a • 9 • · 9 9 · 9 9 999999 • 9 9 · 9 9 9 99 9999 999 9999 99 99
e) sušení získaných granulí k získání granulátu obsahujícího enzym.
V průběhu celého tohoto procesu je třeba udržovat nejvyšší teplotu, které je enzym vystaven nebo které jsou enzymy vystaveny, nižší než 80 °C.
Granuláty podle vynálezu jsou vhodné pro použití při přípravě krmiv pro zvířata. V rámci nej širší formy provedení vynález zahrnuje granulát obsahující fytazu a jedlý uhlohydrátový polymer, přičemž tento granulát má aktivitu alespoň rovnou 6 000 FTU/g. Při výrobě krmiv pro zvířata se uvedený granulát smísí skrmivovými látkami buď jako takový nebo jako součást předsměsí. Charakteristiky granulátu podle vynálezu umožňují jeho použití jako složky směsi, která je obzvláště vhodná jako krmivo pro zvířata, zejména v případě, kdy je tato směs zpracována parou a následně peletizována. Vysušené granule mohou být v takových peletách viditelné nebo rozlišitelné.
Takto se třetí předmět vynálezu týká způsobu přípravy krmivá pro zvířata nebo předsměsí pro taková krmivá nebo prekurzoru takových krmiv, jehož podstata spočívá v tom, že se smísí kompozice podle druhého předmětu vynálezu s jednou nebo více látek (například zrní) nebo přísad tvořících součást krmiv pro zvířata. Směs může být sterilizována, například vystavením účinku páry. Rezultující kompozice se potom vhodným způsobem zpracuje na pelety.
Čtvrtý předmět vynálezu se týká kompozice obsahující granulát podle druhého předmětu vynálezu, který je výhodně jedlou krmivovou kompozicí, jakou je například krmivo pro zvířata. Tato kompozice je výhodně ve formě pelet (z nichž každá může obsahovat 1 až 5 granulí, například 2 až 4 granule).
Vhodně uvedená kompozice obsahuje 0,05 až 2,0, například 0,3 až 1,0, optimálně 0,4 až 0,6, FTU/g fytazy. Xylanaza může být přítomna v množství 0,5 až 50, například
až 40, EXU/g. Alternativně nebo dodatečně může být přítomna celulaza v množství 0,091 až 1,0, například 0,2 až 0,4, BGU/g.
Uvedená kompozice může mít obsah vody 10 až 20 % hmotn., například 12 až 15 % hmotnosti. Množství enzymu nebo enzymů je vhodně rovno 0,0005 až 0,0012 % hmotn., zejména alespoň rovno 5 ppm.
Pátý předmět vynálezu se týká způsobu podpoření růstu zvířat, jehož podstata spočívá v tom, že se zvířatům podává potrava obsahující kompozici podle čtvrtého předmětu vynálezu. Tato potrava může zahrnovat buď granulát jako takový nebo granulát přítomný v krmivu.
Šestý předmět vynálezu se týká použití kompozic v krmivu pro zvířata nebo jako složky pro tato krmivá nebo v potravinovém režimu zvířat.
Sedmý předmět vynálezu se týká použití kompozice obsahující alespoň 15 % hmotnosti jedlého uhlohydrátového polymeru jako nosiče fytazy za účelem zlepšení stability fytazi v průběhu peletizace.
Vhodnými zvířaty jsou hospodářská zvířata (prasata, drůbež, skot, koně, ovce), nepřežvykující nebo monogastrická zvířata (prasata, drůbež, mořská zvířata, jako například ryby), přežvýkavci (hovězí dobytek, ovce, například krávy, kozy, jeleni, telata a jehňata). Drůbež zahrnuje zejména slepice, kuřata a krocany a krůty).
Výhodné znaky a charakteristiky některého z předmětů vynálezu jsou rovněž aplikovatelné na další mutatis mutandis.
V následující části popisu bude vynález blíže objasněn pomocí konkrétních příkladů jeho provedení, přičemž tyto příklady mají pouze ilustrační charakter a nikterak neomezují rozsah vynálezu, který je jednoznačně vymezen definicí patentových nároků.
·· · · · é
Příklady provedení vynálezu
Příklad 1
Fermentace Aspergillus niger CBS 513.88
Přípravky fungálních spor Aspergillus niger byly připraveny za použití standardních technik.
Spory a následně buňky pocházející ze série šaržových fermentací provedených v Erlenmayerových baňkách byly převedeny do fermentoru o obsahu 10 litrů. Po nárůstu kultury byl obsah fermentor použit jako zaočkovací kultura pro finální šaržovou fermentaci provedenou v objemu kultury rovném 500 litrů.
Použitá kultivační prostředí obsahují: 91 g/1 kukuřičného škrobu (BDH Chemicals), amonium, 38 g/1 hydrátu glukózy, 0,6 g/1 heptahydrátu síranu hořečnatého, 0,6 g/1 chloridu draselného, 0,2 g/1 heptahydrátu síranu železnatého a 12 g/1 dusičnanu draselného. pH se udržuje na hodnotě 4,6 ± 0,3 automatickou titrací za použití buď 4N NaOH nebo 4N H2SO4.
Buňky byly kultivovány při teplotě 2 8 °C a při automaticky regulované koncentraci rozpuštěného kyslíku (25% nasycení vzduchu). Produkce fytazy dosáhla maximální úrovně 5 až 10 U/ml po 10 dnech fermentace.
Uvedená fermentace byla opakována za použití síranu amonného namísto kukuřičného škrobu (poskytujícího ekvivalentní obsah asimilovatelného dusíku).
Příklad 2
Čistění a charakterizace fytazy: test stanovující aktivitu fytazy
9 9 9 99999
9 9 9 · · » «9999·
9 9 9 9 9 9
100 μΐ kultivačního filtrátu (v případě potřeby zředěného) nebo supernatantu nebo 100 μΐ demineralizované vody použité jako referenční vzorek bylo přidáno do inkubační směsi mající následující složení:
0,25M natriumacetátový pufr, pH 5,5 nebo glycin/HCl-pufr, pH 2,5, lmM sodná sůk kyseliny fytové a demineralizovaná voda (doplněno na objem 900 μΐ.
Rezultující směs se inkubuje po dobu 30 minut při teplotě 37 °C. Reakce se zastaví přidáním 1 ml 10% kyseliny trichloroctové. Po ukončení reakce se přidají 2 ml činidla (3,66 g heptahydrátu síranu železnatého v 50 ml roztoku molybdenanu amonného (2,5 g (NH4) €Mo7024.4H2O a 8 ml kyseliny sírové, zředěno demineralizovanou vodou na finální objem 250 ml).
Intenzita modrého zbarvení se měří spektrofotometricky při 750 nm. Tato měření indikují množství uvolněného fosforečnanu při porovnání s fosforečnanovou kalibrační křivkou vynesenou pro koncentrační rozsah 0 až 1 mMol/1.
Příklad 3
A) Exprese fytazy v Aspergillus niger CBS 523.86 mediovaná expresním vektorem obsahujícím A. Ficuum-fytazový gen kondenzovaný s promotorem nebo/a signálními sekvencemi genu A. niger-amiloglukosidazy
K dosažení nadměrné exprese fytazy v mikroorganismu Aspergillus niger se odvodí expresní kazeta, ve které je gen A. ficuum-fytazy pod kontrolou A. niger-amyloglukosidazového promotoru (AG) v kombinaci se signální sekvencí. K získání delší vedoucí sekvence se promotorové sekvence AG kondenzuje se sekvencí kódující fytazu zahrnující fytazovou vedoucí sekvenci, která byla kondenzována fytazovým genovým fragmentem kódujícím zralý • · · · »· • 4 4 · 4 4 * 4 4 · 4 ·
4 4 · ····· • · · « 4 4 4 ·· 4 4 4 4
4 4 4 4 · · «4 4·4· 444 4444 44 44 protein (viz příklad 10 patentového dokumentu EP-A-0 420 358) .
B) Exprese fytazového genu pod kontrolou promotoru AG v Aspergillus niger
Aspergillus niger, kmen CBS 513.88 (deponovaný 10.10.1988) byl transformován 10 μρ fragmentu DNA známými postupy (viz například příklad 9 patentového dokumentu EP-A-0 420 358) . Vždy jeden transformant byl izolován z každé expresní kazety a spory byly zaočkovány na selektivní acetamid-agarové desky. Byl proveden sběr spor každého transformantu po 3 denním nárůstu buněk při teplotě 37 °C na agarových deskách s 0,4% obsahem bramborové dextrozy (Oxoid, Velká Británie). Produkce fytazy byla testována v třepáčkových baňkách za následujících podmínek:
přiblžně 1 χ 108 spor se zaočkuje do 100 ml předkultivačního prostředí, které v jednom litru obsahuje:
g KH2PO4, 30 g maltózy, 5 g kvasničného extraktu, 10 g kaseinového hydrolyzátu, 0,5 g heptahydrátu síranu hořečnatého a 3 g Tween-u 80. pH bylo nastaveno na hodnotu
5,5.
Po nárůstu přes noc při teplotě 34 °C v rotační třepačce byl 1 ml kultivačního prostředí zaočkován do 100 ml hlavního kultivačního prostředí, které v jednom litru obsahuje: 2g KH2PO4, 70 g maltodextrinu (maldex MDO3,
Amylum), 12,5 g kvasničného extraktu, 25 g kaseionového hydrolyzátu, 2g síranu draselného, 5 g heptahydrátu síranu hořečnatého, 0,03 g chloridu zinečnatého, 0,02 g chloridu vápenatého, 0,05 g tetrahydrátu síranu hořečnatého a síranu železnatého. pH se nastaví na hodnotu 5,6.
Mycelium se ponechá růst po dobu alespoň 140 hodin. Produkce fytazy se měří stejně jako v příkladu 2. Uvedená fermentace se opakuje za použití ekvivalentních množství glukosy a síranu amonného ve funkci zdroje uhlíku a dusíku. Kultivační břečka se zfiltruje k získání filtrátu, který je takto oddělen od biomasy. Za použití expresní kazety PFYT3 (promotor AG/vedoucí fytazová sekvence) se dosáhne maximální aktivity fytázy 280 U/ml.
4· ·· · ·· ·· ·· • · · 4 «4 44 4 · 4 4 • 4 4 4 44444 · 44 4 4 4 444444
4 4 4 4 4 4 • 4 4444 444 4444 44 «4
Příklad 4
Čistění: izolace fytazy z filtrátu
Čistění provedené za účelem získání vysokopurifikované fytazy se provede následujícím způsobem:
1. kationtoměničová chromatografie při pH 4,9,
2. kationtoměničová chromatografie při pH 3,8,
3. aniontoměničová chromatografie při pH 6,3 a
4. ultrafiltrace.
1. Fytazový filtrát se zředí 20 krát vodou a jeho pH se nastaví na hodnotu 4,9. Takto získaný podíl se nechá protéci přes sloupec produktu S Sepharose Fast Flow, který je v rovnováze s 20mM pufrem na bázi systému kyselina citronová/NaOH, pH 4,9. Nevázaný podíl s fytazou se jímá a použije v následujícím stupni.
2. pH nevázaného podílu se nastaví z původní hodnoty 4,9 na hodnotu 3,8 a fytaza se váže na sloupci produktu S Sepharose Fast Flow, který je v rovnováze s 2mM pufrem na bázi systému kyselina citronová/NaOH, pH 3,8. Fytaza se potom eluuje ze sloupce 2 0 mM Na3PO4-50mM NaCl-pufrem, pH 7,6.
3. Spojené frakce fytazy z druhého kationtoměničového stupně se nastaví na hodnotu pH 6,3 a fytaza se váže na sloupec produktu Q Sepharose Fast Flow, který je v rovnováze s lOmM K3PO4-puf rem, pH 6,3. Fytaza se potom eluuje za použití elučního gradientu k dosažení koncentrace v témže pudru až 1M.
9
I < «
| Shrnutí výsledků čistění | ||
| Vzorek | Purifikační | faktor |
| Výchozí filtrát | 1 | |
| Po kationtoměničové | chromatografii,pH4,9 | 1,07 |
| Po kationtoměničové | chromatografii,pH3,8 | 1,2 |
| Po aniontoměničové | chromatografii,pHl,46 | 1,46 |
Finální produkt (po aniontoměničové chromatografií) obsahující 10 mg proteinu na 1 ml byl desetkrát koncentrován ultrafiltrací za použití zařízení Amicon Stirred Cell (2L modul) s membránou typu Kalle E35 při tlaku 0,3 MPa.
Finální koncentrace přečištěné fytazy dosahuje hodnoty 280 až 300 g/1 (28 až 30 %). Při specifické aktivitě 100 FTU/mg proteinu to znamená aktivitu fytazy 28 000 až 30 000 FTU/g.
Příklad 5
Stabilitní testy provedené s vysokoaktivní fytazou
Za účelem demonstrace skutečnosti, že vyšší koncentrace enzymu (v granulích získaných za použití kapaliny s vysokou aktivitou fytazy) poskytují vyšší stabilitu enzymu v průběhu peletizačního procesu, byly připraveny granuláty se stoupající koncentrací enzymu, načež byla testována stabilita fytazi ve vzorcích těchto granulátů v průběhu peletizace
Srovnávací vzorek A:
Příprava enzymového granulátu na bázi kukuřičného škrobu s nízkou aktivitou enzymu míšením, hnětením, vytlačováním, sféronizací a sušením
4 · · 4 4 4 4 4 • · · 4 4 4 · 444444
4 4 4 4 4 4
4444 444 4444 44 44
Míšením a hnětením se připraví směs 73 % hmotn.
kukuřičného škrobu, 4 % hmotnosti fytazového ultrafiltrátu s nízkým obsahem fytazy a 23 % hmotnosti vody. Tato směs se potom vytlačuje za použití košového - extrudéru typu Nica E-220, přičemž se získá mokrý extrudát, který se potom sféronizuje v zařízení Fuji Paudal Marumeriser po dobu 2 minut k získání kulatých částic se středním průměrem 600 pm. Tyto částice se následně suší v sušičce s fluidním ložem typu Glatt GPCG 1.1. Finální aktivita granulátu je rovna 610 FTU/g.
Srovnávací vzorek B:
Příprava enzymového granulátu na bázi kukuřičného škrobu se střední aktivitou enzymu míšením, hnětením, vytlačováním, sféronizací a sušením
Míšením a hnětením se připraví směs 70 % hmotnosti kukuřičného škrobu, 17 % hmotnosti fytazového ultrafiltrátu se střední aktivitou enzymu a 13 % hmotnosti vody. Tato směs se vytlačuje za použití košového extrudéru typu Nica E-220, přičemž se získá mokrý extrudát, který se potom sféronizuje v zařízení Fuji Paudal Marumeriser po dobu 2 minut k získání, středního průměru částic 600 pm. Tyto částice byly následně vysušeny v sušičce s fluidní vrstvou typu Glatt GPCG 1.1. Finální aktivita získaného granulátu byla rovna 4170 FTU/g.
Vzorek C:
Příprava enzymového granulátu na bázi kukuřičného škrobu s vysokou aktivitou enzymu míšením, hnětením, vytlačováním, sféronizací a sušením
Míšením a hnětením se připraví směs 67 % hmotn.
kukuřičného škrobu, 30 % hmotn. fytazového ultrafiltrátu připraveného v příkladu 4 (avšak zředěného na aktivitu 18 400 FTU/g) a 3 % hmotn. vody. Tato směs se potom vytlačuje za použití košového extrudéru typu Nica E-220, přičemž se získá mokrý extrudát, který se potom sféronizuje v zařízení •· 4 4 4 · 4 · 4 • 4 · 4 · · · * · 4 4 ·
4 4 4 44444 * 4 4 4 4 4 4 444 444
4 4 4 4 4 4
4444 444 4444 «4 44 typu Fuji Paudal Marumeriser po dobu 2 minut k získání kulatých částic mající střední průměr 500 μτη. Tyto částice byly následně sušeny v sušičce s fluidní vrstvou typu Glatt GPCG 1.1. Finální aktivita získaného granulátu je rovna 6830 FTU/g.
Srovnání stabilit enzymu v průběhu peletizace
Jednotlivé typy granulátů byly následně podrobeny peletizačnímu testu a jejich stability byly potom vzájemně srovnány. Peletizační test sestává ze smíšení enzymového granulátu s krmivovou předsměsi k dosažení obsahů 1500, 320 a 200 ppm. Tyto směsi se potom předběžně zpracují vstřikovanou parou k dosažení teploty 75 °C, načež se peletizují v peletizačním stroji při teplotě 82 °C k získání pelet, které se následně suší. Takový typ peletizačního procesu se zpravidla používá při průmyslové výrobě krmivových pelet.
V tabulce 1 jsou shrnuty výsledky peletizačních testů. Z těchto výsledků je patrné, že oba druhy pelet s vysokou koncentrací enzymu vykazují mnohem vyšší stabilitu enzymu v průběhu peletizace.
• •99 · 9 •9 999«
Tabulka 1
Výsledky peletizačních testů
| Číslo vzorku | Aktivita granulátu v FTU/g | Teplota po zpracování parou (°C) | Teplota pelet (°C) | Výtěžek enzymu po peletizaci (%) |
| Srovná- vací vzorek A | 610 | 75 | 82 | nižší než 17 |
Srovná-
| vací | ||||
| vzorek B | 4170 | 75 | 82 | 37 |
| Vzorek C | 6830 | 75 | 82 | 48 |
Příklad 6
Příprava enzymového granulátu na bázi bramborového škrobu obsahujícího přísadu sójového oleje a síranu hořečnatého míšením, hnětením, peletizaci a sušením
Do mixéru/hnětače se předloží 30 kg bramborového škrobu, ke kterému se přimísí 2,5 kg sójového oleje. Potom se přidá fytazový ultrafiltrát odvozený od mikroorganismu Aspergillus (16840 FTU/g) a obsahující heptahydrát síranu hořečnatého (3,5 kg MgSO4.7H2O se rozpustí ve 14 kg ultrafiltrátu). Tento produkt se důkladně promísí v hnětači, načež se vytlačuje a vysuší v sušičce s fluidním ložem stejně jako v příkladu 1. Získá se produkt mající aktivitu 5870 FTU/g.
Příklad 7 • · · · · · · · · · · 9 9 9 9 · 9 9 9 » · 9 9 · 9 · 9 9 9 9 * 9 9 9 9 9 ··
Příprava enzymového granulátu na bázi rýžového škrobu míšením, hnětením, vytlačováním, sféronizací a sušením
Míšením a hnětením se připraví směs 62 % hmotn. rýžového škrobu a 38 % hmotn. stejného filtrátu, jaký byl použit v příkladu 6. Tato směs se vytlačuje za použití košového extrudéru typu Fuji Paudal, přičemž se získá mokrý extrudát, který se potom sféronizuje v zařízení Marumeriser po dobu 1 minuty k získání kulatých částic majících střední průměr 785 pm. Tyto částice se následně vysuší v sušičce s fluidním ložem stejně jako v příkladu 1. Finální aktivita granulátu je rovna 7280 FTU/g.
Příklad 8
Příprava enzymového granulátu na bázi kukuřičného škrobu obsahujícího přísadu hydroxypropylmethylcelulózy (HMPC) míšením, hnětením, vytlačováním, sféronizací a sušením
Hnětením směsi 54 % hmotn. kukuřičného škrobu, 5 % hmotn. hydroxypropylmethylcelulózy a 41 % hmotn. fytazového ultrafiltrátu použitého v příkladu 6 se získá enzymový přípravek, který se následně vytlačuje za použití košového extrudéru typu Fuji Paudal, přičemž se získá mokrý extrudát, který se sféronizuje v zařízení Marumeriser po dobu jedné minuty k získání kulatých částic majících střední průměr 780 pm. Tyto částice se potom suší v sušičce s fluidním ložem po dobu 20 minut při teplotě fluidního lože 40 °C a vstupní teplotě vzduchu 75 °C. Takto se získá suchý enzymový granulát, který má aktivitu 8470 FTU/g.
Příklad 8
Příprava enzymového granulátu na bázi kukuřičného škrobu obsahující přísadu hydroxyethylcelulozy (HEC) míšením, hnětením, vytlačováním, sféronizací a sušením • φ φφφ ·Φ·
Enzymový přípravek zde byl získán míšením a hnětením 54 % hmotn. kukuřičného škrobu, 5 % hmotnosti hydroxymethylcelulózy a 41 % hmotn. stejného fytazového ultrafiltrátu, jaký byl použit v příkladu 6. Tato směs byla potom vytlačována za použití košového exdrudéru typu Fuji Paudal, přičemž byl získán mokrý extrudát, který byl sféronizován v zařízení Marumeriser po dobu jedné minuty k získání kulatých částic majících střední průměr 780 μιη. Tyto částice byly následně sušeny v sušičce s fluidním ložem po dobu 2 0 minut při teplotě fluidního lože 40 °C a vstupní teplotě vzduchu 75 °C. Takto získaný suchý enzymový granulát měl aktivitu 8410 FTU/g.
Příklad 10
V rámci tohoto příkladu byl použit ultrafiltrát mající aktivitu 18 000 FTU/g, který je odvozen z ultrafiltrátu z příkladu 4 a zředěn.
Vzorky
Aktivity 3 připravených vzorků byly 610 FTU/g (srovnávací vzorek A) , 4170 FTU/g (srovnávací vzorek B) a 6830 FTU/g (vzorek C) . Tyto vzorky poskytují tři krmivá s aktivitou 1,153, 1,685 resp. 1,745 FTU/g krmivá.
150 g prvního vzorku bylo smíšeno s 20 kg krmivá, které bude popsáno níže. Potom byla tato předsměs smíšena s 80 kg krmivá a rozdělena do dvou částí, které budou podrobeny testům při dvou různých teplotách. 153,6 g druhého vzorku bylo smíšeno s 20 kg krmivá. Tato směs o hmotnosti 20 153,6 g byla rozdělena do dvou stejných částí. Každá z těchto částí byla potom smíšena s 230 kg krmivá k získání krmivového vzorku pro testy.
Pro účely třetího testu bylo 96 g granulátu smíšeno s 20 kg krmivá a získaná směs byl rozdělena do dvou částí o hmotnosti 10 048 g. Každá z těchto částí byla potom smíšena φ ·
φ φ φ φ φ φ φ φ φφφ φφφ φ φ φφ φφ s 230 kg krmivá k získání krmivového vzorku pro testy. Rychlost peletizace byla 600 kg/h.
Použitá krmivová směs byla tvořena:
20,00 % hmotn. kukuřice,
30,00 % hmotn. pšenice,
10,00 % hmotn. sójových bobů,
18,20 % hmotn. sóji (hrubá moučka 46,7/3,7),
6,96 % hmotn. tapioky (65 % škrobu),
4,00 % hmotn. živočišné moučky (56,5/10,9), % hmotn. rybí moučky (70,7%),
1,30 % hmotn. směsi sójového a kukuřičného oleje,
4,00 % hmotn. živočišného tuku,
1,00 % hmotn. vitamino-minerálové předsměsi,
0,85 % hmotn. uhličitanu vápenatého,
1,05 % hmotn. hydrogenfosforečnanu vápenatého,
0,26 % hmotnosti soli,
0,16 % hmotn. lysin-hydrochloridu a
0,21 % hmotn. DL-methioninu.
Uvedené tři směsi byly potom peletizovány. Za tím účelem bylo krmivo zavedeno do kondicionéru, kde bylo přímo vystaveno účinku páry. Jeho teplota stoupla na 75 °C. Potom bylo zavedeno do peletizačního stroje, kde bylo protlačováno skrze prvlakovou desku s 5 mm otvory a 65 mm tloušťkou. Teplota krmivá v tomto stádiu stoupla o další 4 °C a dosáhla takto 79 °C.
Aktivita uvedených tří krmiv byla 10,11 (vzorek A), 10,04 (vzorek B) resp. 9,81 (vzorek C).
Při tomto testu byly stanoveny následující hodnoty zbytkové aktivity: 63 % (vzorek A), 66 % (vzorek B) resp. 72 % (vzorek C) pro vzorky s původní aktivitou 610, 4170
9
99
999 999 ···· resp. 6830 FTU/g. Z toho plyne, že dokonce při obdobných aktivitách (vzorek B a vzorek C) poskytuje formulace s nejvyšší aktivitou (vzorek C podle vynálezu: 6830 FTU/g)) mnohem vyšší stabilitu enzymu v průběhu peletizace. Tato stabilita je o 6 % vyšší než stabilita srovnávacího vzorku B, přičemž bylo pozorováno pouze malé 3% zvýšení stability (od vzorku A ke vzorku B) a to při výrazném zvýšení aktivity (z 610 FTU/g vzorku A na 4170 FTU/g vzorku B).
Claims (38)
1. Způsob přípravy vodné kapaliny obsahující fytázu, vyznačený tím, že zahrnuje
a) kultivaci ve vodném prostředí mikroorganismu rodu Aspergillus nebo Trichoderma majícího heterologní gen fytazy pod kontrolou glukoamylazového promotoru v případě rodu Aspergillus nebo celobiohydrolazového promotoru v případě rodu Trichoderma za podmínek umožňujících rekombinantní expresi fytazy, přičemž vodné prostředí obsahuje jako potravu pro mikroorganismus asimilovatelný zdroj uhlíku a asimilovatelný zdroj dusíku,
b) filtraci vodného prostředí za účelem oddělení mikroorganismu a získání filtrátu a
c) podrobení filtrátu ze stupně b) ultrafiltraci k získání vodné kapaliny mající koncentraci fytazy alespoň rovnou 14 000 FTU/g.
2. Způsob podle nároku 1, vyznačený tím, že mikroorganismem je Aspergillus niger, Aspergillus oryzae nebo Trichoderma reesei.
3. Způsob podle nároku 1 nebo 2, vyznačený tím, že mikroorganismus nemá nebo neexprimuje glukoamylazový gen (AG).
4. Způsob podle některého z předcházejících nároků, vyznačený tím, že mikroorganismus obsahuje množinu kopií genu fytazy.
44 44 » 4 · • 4 · ·
4 4 4
44 4444
4 44 44 44
44 4 4 4 4 4 4
4 4 4 4 4 4 • 4 4 444 444
4 4 4 4
444 4·44 4« 44
5. Způsob podle některého z předcházejících nároků, vyznačený tím, že vodná kapalina je v podstatě prosta taka-amylazy.
6. Způsob podle některého z předcházejících nároků, vyznačený tím, že před filtrací prováděnou ve stupni b) došlo v podstatě k úplné konzumaci zdrojů uhlíku a dusíku, přítomných ve vodném prostředí, mikroorganismem
7. Způsob podle některého z předcházejících nároků, vyznačený tím, že vodná kapalina je prosta zdrojů uhlíku nebo/a dusíku.
8. Způsob podle některého z předcházejících nároků, vyznačený tím, že fytaza je exprimována v mikroorganismu s glukoamylazovou signální sekvencí.
9. Způsob podle některého z předcházejících nároků, vyznačený tím, že ani vodný filtrát, ani vodná kapalina nejsou podrobeny krystalizaci nebo/a odbarvení.
10. Způsob podle některého z předcházejících nároků, vyznačený tím, že rezultující vodná kapalina má aktivitu fytazy rovnou 18 000 FTU/g nebo vyšší.
11. Vodná kapalina, vyznačená tím, že je připravitelná způsobem podle některého z předcházejících nároků a že obsahuje fytazu v koncentraci alespoň rovné 14 000 FTU/g.
·· ·· 9 «» ·· 99 » 9 · · ···· · · · 9 ·· · · · · · · · • · · · · · · ··· ··· • · · · · · · ·· ···· ··· ···· ·· ·«
12. Vodná kapalina podle nároku 11, vyznačená tím, že pochází z kultivačního prostředí, ve kterém byla exprimována fytaza.
13. Způsob přípravy granulátu obsahujícího fytazu, vhodného pro použití v krmivu pro zvířata, vyznačený tím, že se zpracuje pevný nosič obsahující alespoň 15 % hmotn. jedlého uhlohydrátového polymeru a vodná kapalina podle nároku 11 nebo 12 k získání granulí obsahujících fytazu.
14. Způsob podle nároku 13, vyznačený tím, že se vodná kapalina a pevný nosič mísí a získaná směs se potom hněte.
15. Způsob podle nároku 14, vyznačený tím, že se granule následně vysuší.
16. Způsob podle nároku 13 nebo 14, vyznačený tím, že zahrnuje
a) smísení kapaliny obsahující fytazu s pevným nosičem,
b) mechanické zpracování směsi získané ve stupni a) k získání granulí obsahujících enzym a
c) sušení granulí obsahujících enzym získaných ve stupni
b) .
17. Způsob podle nároku 15, vyznačený tím, že zpracování zahrnuje vytlačování, peletizaci, vysokostřižnou granulaci, aglomeraci ve fluidním loži nebo libovolnou kombinaci těchto zpracování.
• ·
18. Granulát obsahující fytazu, vyznačený tím, že je připravitelný způsobem podle některého z nároků 13 až 17.
19. Granulát, vyznačený tím, že je vytvořen z fytazy a pevného nosiče, který obsahuje alespoň 15 % hmotn. jedlého uhlohydrátového polymeru.
20. Granulát podle nároku 19, vyznačený tím, že obsahuje alespoň jeden dvojmocný kationt.
21. Granulát podle nároků 19 nebo 20, vyznačený tím, že granule obsahují jednu nebo několik hydrofobních, gelotvorných nebo ve vodě nerozpustných sloučenin.
22. Granulát podle nároku 21, vyznačený tím, že hydrofobní , gelotvorná nebo ve vodě nerozpustná sloučenina je tvořena derivatizovanou celulózou, polyvinylalkoholem (PVA) nebo jedlým olejem.
23. Granulát podle nároku 22,vyznačený tím, že derivatizovanou celulózou je hydroxypropylmethylcelulóza, karboxymethylcelulóza nebo hydroxyethylcelulóza nebo/a jedlým olejem je sójový olej nebo olej canola.
24. Granulát podle některého z nároků 19 až 23, vyznačený t í m, že dodatečně obsahuje endo-xylanazu nebo/a β-glukanazu.
25. Granulát podle některého z nároků 19 až 24, vyznačený t í m, že nosič obsahuje škrob.
26. Granulát podle některého z nároků 19 až 25, vyznačený t í m, že fytaza je jiná než tepelně stabilní fytaza.
27. Granulát podle některého z nároků 19 až 26, vyznačený t í m, že fytazou je fungální fytaza.
28. Kompozice podle některého z nároků 19 až 27, vyznačená tím, že fungální fytaza pochází z druhů Aspergilus nebo Trichoderma.
29. Způsob přípravy krmivá pro zvířata, předsměsi pro toto krmivo nebo prekurzoru tohoto krmivá, vyznačený tím, že zahrnuje smíšení granulátu obsahujícího fytazu podle některého z nároků 19 až 28 s jednou nebo více látek nebo přísad, které jsou součástí krmivá pro zvířata.
30. Způsob podle nároku 29, vyznačený tím, že směs látek a přísad, které jsou součástí krmivá, a kompozice nebo granulátu se podrobí účinku páry, načež se peletizuje a případně suší.
31. Kompozice, vyznačená tím, že obsahuje granulát podle některého z nároků 19 až 28 nebo/a granulát obsahující fytazu, mající aktivitu alespoň 6 000 FTU/g.
32. Kompozice podle nároku 31, vyznačená tím, že je jedlým krmivém.
33. Kompozice podle nároku 32, vyznačená tím, že je krmivém pro zvířata.
34. Kompozice podle nároku 32 nebo 33, vyznačená tím, že obsahuje pelety tvořené jednou nebo více látkami nebo přísadami, které tvoří součást krmivá, smíšenými s granulátem podle některého z nároků 19 až 27.
35. Kompozice podle některého z nároků 31 až 34, vyznačená tím, že je krmivém pro zvířata, předsměsi pro toto krmivo nebo prekurzorem tohoto krmivá, které jsou připravitelné způsobem podle nároku 29 nebo 30.
36. Způsob podpoření růstu zvířat, vyznačený tím, že se zvířata krmí potravou, která obsahuje granulát podle některého z nároků 19 až 27 nebo kompozici podle některého z nároků 31 až 35.
37. Použití granulátu podle některého z nároků 19 až 27 v krmivu pro zvířata nebo jako složky krmivá pro zvířata nebo v potravinovém řežimu zvířat.
38. Použití kompozice obsahující alespoň 15 % hmotn. jedlého uhlohydrátového polymeru jako nosiče fytazy za účelem zlepšení stability fytazy v průběhu peletizace.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US4861197P | 1997-06-04 | 1997-06-04 | |
| EP97201641 | 1997-06-04 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ433599A3 true CZ433599A3 (cs) | 2000-04-12 |
| CZ299459B6 CZ299459B6 (cs) | 2008-08-06 |
Family
ID=26146545
Family Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ0433499A CZ299636B6 (cs) | 1997-06-04 | 1998-06-04 | Zpusob prípravy granulátu obsahujícího fosfatázu,tento granulát, kompozice obsahující tento granulát, zpusob podporení rustu zvírat a použití uvedeného granulátu |
| CZ0433599A CZ299459B6 (cs) | 1997-06-04 | 1998-06-04 | Zpusob prípravy granulátu obsahujícího fytázu, takto získaný granulát, zpusob prípravy krmiva pro zvírata, kompozice obsahující uvedený granulát, zpusob podporení rustu zvírat a použití uvedeného granulátu |
Family Applications Before (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ0433499A CZ299636B6 (cs) | 1997-06-04 | 1998-06-04 | Zpusob prípravy granulátu obsahujícího fosfatázu,tento granulát, kompozice obsahující tento granulát, zpusob podporení rustu zvírat a použití uvedeného granulátu |
Country Status (24)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (3) | EP0986313B1 (cs) |
| JP (2) | JP2002502254A (cs) |
| KR (1) | KR20050042790A (cs) |
| CN (2) | CN1315397C (cs) |
| AT (2) | ATE266721T1 (cs) |
| AU (2) | AU740970B2 (cs) |
| BR (2) | BR9809915B1 (cs) |
| CA (2) | CA2292953C (cs) |
| CZ (2) | CZ299636B6 (cs) |
| DE (2) | DE69835815T2 (cs) |
| DK (2) | DK0986313T3 (cs) |
| ES (2) | ES2272005T3 (cs) |
| GB (2) | GB2341077B (cs) |
| HU (1) | HUP0002899A2 (cs) |
| ID (2) | ID24116A (cs) |
| IL (4) | IL133281A0 (cs) |
| NO (2) | NO995993L (cs) |
| NZ (2) | NZ501409A (cs) |
| PL (2) | PL194079B1 (cs) |
| PT (2) | PT986313E (cs) |
| RU (3) | RU2275052C2 (cs) |
| SK (2) | SK167699A3 (cs) |
| TR (2) | TR199903010T2 (cs) |
| WO (2) | WO1998055599A2 (cs) |
Families Citing this family (103)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6699704B1 (en) | 1994-04-25 | 2004-03-02 | Roche Vitamins Inc. | Heat tolerant phytases |
| ES2565163T3 (es) | 1996-10-28 | 2016-03-31 | General Mills, Inc. | Imbibición y encapsulación de partículas de liberación controlada y producto encapsulado |
| CA2231948C (en) | 1997-03-25 | 2010-05-18 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Modified phytases |
| TW409035B (en) | 1997-06-04 | 2000-10-21 | Gist Brocades Bv | Starch-based enzyme granulates |
| NZ330940A (en) | 1997-07-24 | 2000-02-28 | F | Production of consensus phytases from fungal origin using computer programmes |
| AU747111B2 (en) * | 1997-12-19 | 2002-05-09 | Kyowa Hakko Kogyo Co. Ltd. | Method for preventing/remedying mastitis |
| US7201923B1 (en) | 1998-03-23 | 2007-04-10 | General Mills, Inc. | Encapsulation of sensitive liquid components into a matrix to obtain discrete shelf-stable particles |
| DE69941212D1 (de) | 1998-03-23 | 2009-09-17 | Gen Mills Inc | Verkapselung von komponenten in essbaren produkten |
| US6451572B1 (en) | 1998-06-25 | 2002-09-17 | Cornell Research Foundation, Inc. | Overexpression of phytase genes in yeast systems |
| EP0969089A1 (en) * | 1998-06-29 | 2000-01-05 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Phytase formulation |
| WO2000021504A1 (en) * | 1998-10-09 | 2000-04-20 | General Mills, Inc. | Encapsulation of sensitive liquid components into a matrix to obtain discrete shelf-stable particles |
| DE19859385A1 (de) | 1998-12-22 | 2000-06-29 | Basf Ag | Verfahren zur Herstellung von enzymhaltigen Granulaten |
| CN1303895C (zh) | 1999-02-10 | 2007-03-14 | 巴斯福股份公司 | 含饲料酶的粒化物 |
| WO2000058481A2 (en) | 1999-03-31 | 2000-10-05 | Cornell Research Foundation, Inc. | Phosphatases with improved phytase activity |
| DE19922753A1 (de) * | 1999-05-18 | 2000-11-23 | Basf Ag | Enzym-Instantformulierungen für die Tierernährung |
| DE19929257A1 (de) * | 1999-06-25 | 2000-12-28 | Basf Ag | Polymerbeschichtete, granulierte enzymhaltige Futtermittelzusätze und Verfahren zu deren Herstellung |
| US6841370B1 (en) | 1999-11-18 | 2005-01-11 | Cornell Research Foundation, Inc. | Site-directed mutagenesis of Escherichia coli phytase |
| IL133851A (en) * | 1999-12-31 | 2002-12-01 | Smoler Feed Additives And Tech | Dietary supplement for animals |
| WO2001083727A2 (en) * | 2000-05-04 | 2001-11-08 | Dsm N.V. | Fluid bed process for the production of enzyme granules |
| CA2411230A1 (en) * | 2000-05-25 | 2001-11-29 | Diversa Corporation | Dietary aids and methods of use thereof |
| LU90594B1 (de) | 2000-06-09 | 2001-12-10 | Iee Sarl | Beleuchtetes Schaltelement |
| US6468568B1 (en) | 2000-06-16 | 2002-10-22 | General Mills, Inc. | Oligosaccharide encapsulated mineral and vitamin ingredients |
| US6436453B1 (en) | 2000-06-16 | 2002-08-20 | General Mills, Inc. | Production of oil encapsulated minerals and vitamins in a glassy matrix |
| US6558718B1 (en) | 2000-06-19 | 2003-05-06 | General Mills, Inc. | Nutrient clusters for food products and methods of preparation |
| DE10048868A1 (de) | 2000-10-02 | 2002-04-11 | Basf Ag | Verfahren und Vorrichtung zur Einmischung von Zusatzstoffen während der Konditionierung von Tierfutter |
| CA2465202C (en) | 2001-10-31 | 2014-01-21 | Phytex, Llc | Phytase-containing animal food and method |
| CA2471709C (en) | 2002-01-15 | 2010-06-22 | Basf Ag | Granulates containing feed-enzymes |
| WO2003059087A1 (en) | 2002-01-15 | 2003-07-24 | Basf Ag | Granulates containing feed-enzymes |
| US7431986B2 (en) | 2002-07-24 | 2008-10-07 | General Mills, Inc. | Encapsulation of sensitive components using pre-emulsification |
| ATE492631T1 (de) | 2002-09-13 | 2011-01-15 | Cornell Res Foundation Inc | Verwendung von mutationen zur verbesserung von aspergillus-phytasen |
| BRPI0410977A (pt) | 2003-06-11 | 2006-07-04 | Glatt Ingtech Gmbh | processo para a fabricação de granulado de enzima e granulados de enzima obtidos |
| ES2306079T3 (es) * | 2004-01-30 | 2008-11-01 | Basf Se | Granulados que contienen formulaciones de fitasa estabilizantes. |
| DE202005021811U1 (de) * | 2004-09-27 | 2010-04-15 | Novozymes A/S | Körnchen mit einem Kern und einer Beschichtung |
| GB0423139D0 (en) * | 2004-10-18 | 2004-11-17 | Danisco | Enzymes |
| ATE455470T1 (de) | 2005-02-24 | 2010-02-15 | Ipc Process Ct Gmbh & Co | Granulat für die herstellung von tiernahrungspellets |
| DE102005043325A1 (de) * | 2005-09-12 | 2007-03-15 | Basf Ag | Enzymhaltige Granulate für Futtermittel |
| DE102005043324A1 (de) * | 2005-09-12 | 2007-03-15 | Basf Ag | Phytasehaltiges Enzymgranulat II |
| DE102005043327A1 (de) * | 2005-09-12 | 2007-03-15 | Basf Ag | Verfahren zur Herstellung von festen Enzymgranulaten für Futtermittel |
| US7803413B2 (en) | 2005-10-31 | 2010-09-28 | General Mills Ip Holdings Ii, Llc. | Encapsulation of readily oxidizable components |
| DE102005056668A1 (de) * | 2005-11-28 | 2007-05-31 | Basf Ag | Fermentative Herstellung organischer Verbindungen |
| US7919297B2 (en) | 2006-02-21 | 2011-04-05 | Cornell Research Foundation, Inc. | Mutants of Aspergillus niger PhyA phytase and Aspergillus fumigatus phytase |
| WO2008017066A2 (en) | 2006-08-03 | 2008-02-07 | Cornell Research Foundation, Inc. | Phytases with improved thermal stability |
| BRPI0813522A2 (pt) | 2007-07-06 | 2014-12-30 | Basf Se | Processos para a produção de uma solução de glicose aquosa a partir do milho, e par a produção de uma substância orgânica pela fermentação, solução de glicose, uso de uma solução de glicose, glúten de milho, uso de um glúten de milho, e, composição de gênero alimentício |
| FR2918844B1 (fr) * | 2007-07-20 | 2012-11-02 | Adisseo France Sas | Composition thermoresistante pour animaux comprenant un melange enzymatique |
| JP2009207366A (ja) * | 2008-02-29 | 2009-09-17 | Kao Corp | ペットフード |
| CA2723949A1 (en) * | 2008-05-19 | 2009-11-26 | Nestec S.A. | Methods for reducing lipid absorption by an animal |
| JP5527723B2 (ja) * | 2008-07-10 | 2014-06-25 | 独立行政法人農業・食品産業技術総合研究機構 | 植物細胞壁成分から変換されたα−グルカンを保持する菌体の製造方法 |
| US20150140172A1 (en) | 2012-06-20 | 2015-05-21 | Danisco Us Inc. | Sandwich granule |
| US9551042B2 (en) | 2012-12-21 | 2017-01-24 | Novozymes A/S | Polypeptides having protease activity and polynucleotides encoding same |
| EP2799531A1 (de) | 2013-05-03 | 2014-11-05 | Clariant Produkte (Deutschland) GmbH | Einsatz von Phosphatasen zur enzymatischen Entschleimung von Triglyceriden |
| BR102013016609A2 (pt) * | 2013-06-27 | 2016-08-30 | Unicamp | ração enriquecida para aquicultura |
| EP3058055A1 (en) | 2013-10-15 | 2016-08-24 | Danisco US Inc. | Clay granule |
| BR112016010747A2 (pt) | 2013-11-14 | 2017-12-05 | Danisco Us Inc | enzimas estáveis através da redução de glicação |
| US20170246222A1 (en) | 2014-10-08 | 2017-08-31 | Novozymes A/S | Bacillus Strains with Fast Germination and Antimicrobial Activity against Clostridium |
| WO2016060935A2 (en) | 2014-10-08 | 2016-04-21 | Novozymes A/S | Compositions and methods of improving the digestibility of animal feed |
| EP3215615B1 (en) | 2014-11-04 | 2025-05-21 | Novozymes A/S | Polypeptides having serine protease activity and polynucleotides encoding same and their application in animal feed |
| CN107208080B (zh) | 2014-12-19 | 2022-03-25 | 诺维信公司 | 包括具有木聚糖酶活性的多肽和具有阿拉伯呋喃糖苷酶活性的多肽的组合物 |
| AU2016209132B2 (en) | 2015-01-23 | 2021-07-01 | Novozymes A/S | Bacillus strains improving health and performance of production animals |
| WO2016118850A1 (en) | 2015-01-23 | 2016-07-28 | Novozymes A/S | Bacillus subtilis subspecies |
| BR112017015623B1 (pt) | 2015-01-23 | 2022-05-31 | Novozymes A/S | Ração animal ou aditivo de ração animal ou pré-mistura de ração, método para melhora de um ou mais parâmetros de desempenho de um animal e para alimentação de um animal, e, uso de uma cepa de bacillus |
| EP4032409A1 (en) | 2015-07-02 | 2022-07-27 | Novozymes A/S | Animal feed comprising a feed additive for improving animal performance |
| EP3316699B1 (en) | 2015-07-02 | 2021-09-08 | Novozymes A/S | Animal feed compositions comprising gh25 lysozyme and 4-phytase and uses thereof |
| WO2017000922A1 (en) | 2015-07-02 | 2017-01-05 | Novozymes A/S | Animal feed compositions and uses thereof |
| GB201604750D0 (en) * | 2016-03-21 | 2016-05-04 | Huvepharma Eood | Enzyme comositions |
| WO2017202997A1 (en) | 2016-05-24 | 2017-11-30 | Novozymes A/S | Compositions comprising polypeptides having galactanase activity and polypeptides having beta-galactosidase activity |
| BR112018073875A2 (pt) | 2016-05-24 | 2019-02-26 | Novozymes As | polipeptídeo isolado, composição, grânulo, aditivo de ração animal, formulação líquida, ração animal, métodos para liberar galactose de material à base de planta, para melhorar um ou mais parâmetros de desempenho de um animal e o valor nutricional de uma ração animal, para preparar uma ração animal e para produzir o polipeptídeo, uso, polinucleotídeo, construto de ácido nucleico ou vetor de expressão, e, célula hospedeira recombinante. |
| BR112018073890A2 (pt) | 2016-05-24 | 2019-02-26 | Novozymes As | composição, grânulo, aditivo de ração para animal, ração para animal, formulação líquida, uso da composição, do grânulo, do aditivo de ração para animal ou da formulação líquida, polipeptídeo isolado, métodos para liberar galactose de material à base de planta, para melhorar um ou mais parâmetros de desempenho de um animal e para produzir o polipeptídeo, polinucleotídeo, construto de ácido nucleico ou vetor de expressão, e, célula hospedeira recombinante. |
| US11058129B2 (en) | 2016-05-24 | 2021-07-13 | Novozymes A/S | Animal feed additives |
| CN109415709A (zh) | 2016-07-08 | 2019-03-01 | 诺维信公司 | 具有木聚糖酶活性的多肽以及编码其的多核苷酸 |
| AU2017294067A1 (en) | 2016-07-08 | 2019-01-17 | Novozymes A/S | Xylanase variants and polynucleotides encoding same |
| EP3642339B1 (en) | 2017-06-22 | 2025-09-10 | Novozymes A/S | Xylanase variants and polynucleotides encoding same |
| CN111050565A (zh) | 2017-09-01 | 2020-04-21 | 诺维信公司 | 包含具有蛋白酶活性的多肽的动物饲料添加剂及其用途 |
| MX2020002177A (es) | 2017-09-01 | 2020-07-14 | Novozymes As | Aditivos para pienso para animales que comprenden un polipéptido que tiene actividad proteasa y usos de estos. |
| KR102006938B1 (ko) * | 2017-09-07 | 2019-08-02 | 주식회사 알파벳 | 기호성 및 보존안정성이 개선된 반려동물용 사료의 제조방법 |
| WO2019096903A1 (en) | 2017-11-20 | 2019-05-23 | Novozymes A/S | New galactanases (ec 3.2.1.89) for use in soy processing |
| FI3723506T3 (fi) * | 2017-12-14 | 2024-07-03 | Dsm Ip Assets Bv | Granulaatti, joka käsittää entsyymin, kantajan ja kasviöljyä |
| CN111492053A (zh) | 2017-12-20 | 2020-08-04 | 帝斯曼知识产权资产管理有限公司 | 动物饲料组合物及其用途 |
| BR112020012077B1 (pt) | 2017-12-20 | 2023-12-12 | Dsm Ip Assets B.V. | Uso de polipeptídeos para composições de ração animal |
| US12102103B2 (en) | 2018-01-11 | 2024-10-01 | Novozymes A/S | Animal feed compositions and uses thereof |
| AU2019215120B2 (en) | 2018-02-02 | 2024-03-07 | Novozymes A/S | Management of pathogenic lawsonia |
| WO2019170682A1 (en) | 2018-03-05 | 2019-09-12 | Novozymes A/S | Ruminant feed composition comprising a muramidase |
| WO2019207053A1 (en) | 2018-04-25 | 2019-10-31 | Novozymes A/S | Animal feed compositions and uses thereof |
| EP3843552A1 (en) | 2018-08-31 | 2021-07-07 | Novozymes A/S | Polypeptides having protease activity and polynucleotides encoding same |
| WO2020053274A1 (en) | 2018-09-11 | 2020-03-19 | Dsm Ip Assets B.V. | Animal feed composition and use thereof |
| MX2021002786A (es) | 2018-09-11 | 2021-05-12 | Dsm Ip Assets Bv | Composiciones de alimento animal y usos de las mismas. |
| BR112021004480A2 (pt) | 2018-09-11 | 2021-06-01 | Dsm Ip Assets B.V. | composição de ração animal e uso da mesma |
| WO2020053275A2 (en) | 2018-09-11 | 2020-03-19 | Dsm Ip Assets B.V. | Animal feed composition and use thereof |
| BR112021004408A2 (pt) | 2018-09-11 | 2021-11-03 | Dsm Ip Assets Bv | Composição de ração animal e uso da mesma |
| WO2020058225A1 (en) | 2018-09-17 | 2020-03-26 | Dsm Ip Assets B.V. | Animal feed compositions and uses thereof |
| BR112021004817A2 (pt) | 2018-09-17 | 2021-06-08 | Dsm Ip Assets B.V. | composições de ração animal e usos das mesmas |
| BR112021004826A2 (pt) | 2018-09-17 | 2021-06-08 | Dsm Ip Assets B.V. | composições de ração animal e usos das mesmas |
| US20220054600A1 (en) | 2018-09-17 | 2022-02-24 | Dsm Ip Assets B.V. | Animal feed compositions and uses thereof |
| CN113226049A (zh) | 2018-12-05 | 2021-08-06 | 诺维信公司 | 酶颗粒的用途 |
| US20220202044A1 (en) | 2019-03-11 | 2022-06-30 | Novozymes A/S | Fibrous maize-based animal feed with gh30 glucuronoxylan hydrolase |
| WO2021078839A1 (en) | 2019-10-22 | 2021-04-29 | Novozymes A/S | Animal feed composition |
| US20230276828A1 (en) | 2020-05-18 | 2023-09-07 | Dsm Ip Assets B.V. | Animal feed compositions |
| BR112022023230A2 (pt) | 2020-05-18 | 2022-12-27 | Dsm Ip Assets Bv | Composições de ração animal |
| CA3189083A1 (en) | 2020-08-13 | 2022-02-17 | Novozymes A/S | Phytase variants and polynucleotides encoding same |
| AU2021356138A1 (en) | 2020-10-07 | 2023-05-25 | Novozymes A/S | Enzymatic feed preservation |
| EP4228424A1 (en) | 2020-10-15 | 2023-08-23 | DSM IP Assets B.V. | Methods of modulating gastrointestinal metabolites |
| EP4447704A1 (en) | 2021-12-15 | 2024-10-23 | DSM IP Assets B.V. | Methods and uses for improving egg production and egg quality involving administering feed comprising muramidase (ec 3.2.1.17) |
| CN116406743A (zh) * | 2023-03-27 | 2023-07-11 | 武汉新华扬生物股份有限公司 | 一种改善麦芽糖酶性能的组合物、方法及应用 |
| WO2025017069A1 (en) | 2023-07-19 | 2025-01-23 | Novozymes A/S | Enzyme assisted juice extraction from sugar cane |
Family Cites Families (20)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR1501782A (fr) * | 1965-08-06 | 1967-11-18 | Quaker Oats Co | Aliments à base de viande et ayant l'aspect d'une viande persillée, qui sont destinés à des animaux familiers, et procédé de préparation de ces aliments |
| US3661786A (en) * | 1970-01-27 | 1972-05-09 | Procter & Gamble | Detergent compositions containing stabilized alpha-amylase |
| JPS5988088A (ja) * | 1982-11-12 | 1984-05-21 | Nagase Seikagaku Kogyo Kk | 酵素含有顆粒剤の製造方法 |
| DE3344104A1 (de) * | 1983-12-07 | 1985-06-13 | Henkel KGaA, 4000 Düsseldorf | Zur verwendung in pulverfoermigen waschmitteln geeignete enzymzubereitung |
| JPS6192570A (ja) * | 1984-10-12 | 1986-05-10 | Showa Denko Kk | 酵素造粒法 |
| FI77359C (fi) * | 1986-08-22 | 1989-03-10 | Suomen Sokeri Oy | Foderfix och foerfarande foer framstaellning av densamma. |
| DK435687D0 (da) * | 1987-08-21 | 1987-08-21 | Novo Industri As | Enzymholdigt granulat og fremgangsmaade til fremstilling deraf |
| US5010008A (en) * | 1988-12-12 | 1991-04-23 | Enzyme Bio-Systems Ltd. | Stable liquid enzyme concentrate and process for its production |
| SK280670B6 (sk) * | 1989-09-27 | 2000-05-16 | Gist-Brocades N.V. | Vyčistená a izolovaná sekvencia dna, konštrukt, ve |
| KR920703082A (ko) * | 1989-12-27 | 1992-12-17 | 후지사와 도모끼찌로 | 어류 질병의 예방 및 치료제 |
| JPH03280839A (ja) * | 1990-03-30 | 1991-12-11 | Nippon Soda Co Ltd | 反芻動物用飼料添加剤 |
| HU212783B (en) * | 1990-12-22 | 1996-11-28 | Egyt Gyogyszervegyeszeti Gyar | Process for producing new thiobenzoyl morpholide derivatives and weight increasing agents comprising such compounds |
| JPH04271785A (ja) * | 1991-02-28 | 1992-09-28 | Kao Corp | 酵素固形製剤及びその製造方法 |
| CA2141431A1 (en) * | 1992-07-31 | 1994-02-17 | Helena K. M. Nevalainen | Recombinant cells, dna constructs, vectors and methods for expressing phytate degrading enzymes in desired ratios |
| DE4422433A1 (de) * | 1994-06-28 | 1996-01-04 | Cognis Bio Umwelt | Mehrenzymgranulat |
| GB9416841D0 (en) * | 1994-08-19 | 1994-10-12 | Finnfeeds Int Ltd | An enzyme feed additive and animal feed including it |
| SK40697A3 (en) * | 1995-07-28 | 1997-10-08 | Gist Brocades Bv | Salt-stabilized enzyme preparations |
| AU2568797A (en) * | 1996-04-12 | 1997-11-07 | Novo Nordisk A/S | Enzyme-containing granules and process for the production thereof |
| DE19619219A1 (de) * | 1996-05-13 | 1997-12-04 | Hoechst Ag | Enzym-Vorgranulat für Tierfuttermittel-Granulate |
| DE19651446A1 (de) * | 1996-12-11 | 1998-06-18 | Henkel Kgaa | Umhüllte Enzymzubereitung mit verbesserter Löslichkeit |
-
1998
- 1998-06-04 CA CA002292953A patent/CA2292953C/en not_active Expired - Fee Related
- 1998-06-04 HU HU0002899A patent/HUP0002899A2/hu unknown
- 1998-06-04 BR BRPI9809915-9A patent/BR9809915B1/pt not_active IP Right Cessation
- 1998-06-04 PT PT98934911T patent/PT986313E/pt unknown
- 1998-06-04 PL PL98337464A patent/PL194079B1/pl unknown
- 1998-06-04 EP EP98934911A patent/EP0986313B1/en not_active Revoked
- 1998-06-04 JP JP50150999A patent/JP2002502254A/ja active Pending
- 1998-06-04 WO PCT/EP1998/003328 patent/WO1998055599A2/en active IP Right Grant
- 1998-06-04 KR KR1020057002771A patent/KR20050042790A/ko not_active Withdrawn
- 1998-06-04 CN CNB988071045A patent/CN1315397C/zh not_active Expired - Fee Related
- 1998-06-04 DE DE69835815T patent/DE69835815T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1998-06-04 GB GB9928690A patent/GB2341077B/en not_active Expired - Fee Related
- 1998-06-04 ES ES98934911T patent/ES2272005T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1998-06-04 PT PT98934912T patent/PT990026E/pt unknown
- 1998-06-04 NZ NZ501409A patent/NZ501409A/en unknown
- 1998-06-04 RU RU2000100316/13A patent/RU2275052C2/ru not_active IP Right Cessation
- 1998-06-04 ID IDW991521A patent/ID24116A/id unknown
- 1998-06-04 DE DE69823820T patent/DE69823820T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1998-06-04 TR TR1999/03010T patent/TR199903010T2/xx unknown
- 1998-06-04 WO PCT/EP1998/003327 patent/WO1998054980A2/en active IP Right Grant
- 1998-06-04 CZ CZ0433499A patent/CZ299636B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1998-06-04 SK SK1676-99A patent/SK167699A3/sk unknown
- 1998-06-04 SK SK1678-99A patent/SK167899A3/sk unknown
- 1998-06-04 GB GB9928686A patent/GB2340834B/en not_active Expired - Fee Related
- 1998-06-04 PL PL337457A patent/PL202955B1/pl unknown
- 1998-06-04 ID IDW991518A patent/ID24680A/id unknown
- 1998-06-04 DK DK98934911T patent/DK0986313T3/da active
- 1998-06-04 CA CA002292955A patent/CA2292955C/en not_active Expired - Fee Related
- 1998-06-04 CN CNB988071207A patent/CN1226936C/zh not_active Expired - Fee Related
- 1998-06-04 EP EP04007382A patent/EP1457560A1/en not_active Withdrawn
- 1998-06-04 NZ NZ501408A patent/NZ501408A/en unknown
- 1998-06-04 IL IL13328198A patent/IL133281A0/xx active IP Right Grant
- 1998-06-04 IL IL13328098A patent/IL133280A0/xx active IP Right Grant
- 1998-06-04 BR BRPI9809919-1A patent/BR9809919B1/pt not_active IP Right Cessation
- 1998-06-04 DK DK98934912T patent/DK0990026T3/da active
- 1998-06-04 AT AT98934912T patent/ATE266721T1/de not_active IP Right Cessation
- 1998-06-04 ES ES98934912T patent/ES2221181T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1998-06-04 EP EP98934912A patent/EP0990026B1/en not_active Revoked
- 1998-06-04 AU AU84357/98A patent/AU740970B2/en not_active Ceased
- 1998-06-04 RU RU2000100315/13A patent/RU2251301C2/ru not_active IP Right Cessation
- 1998-06-04 AU AU84358/98A patent/AU741828B2/en not_active Ceased
- 1998-06-04 TR TR1999/03015T patent/TR199903015T2/xx unknown
- 1998-06-04 CZ CZ0433599A patent/CZ299459B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1998-06-04 JP JP50151099A patent/JP2002502255A/ja active Pending
- 1998-06-04 AT AT98934911T patent/ATE338469T1/de active
-
1999
- 1999-12-02 IL IL133280A patent/IL133280A/en not_active IP Right Cessation
- 1999-12-02 IL IL133281A patent/IL133281A/en not_active IP Right Cessation
- 1999-12-06 NO NO995993A patent/NO995993L/no not_active Application Discontinuation
- 1999-12-06 NO NO995994A patent/NO995994D0/no not_active Application Discontinuation
-
2005
- 2005-08-31 RU RU2005127265/13A patent/RU2005127265A/ru not_active Application Discontinuation
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CZ433599A3 (cs) | Kompozice obsahující fytazu s vysokou aktivitou | |
| US20050054065A1 (en) | High-activity phytase compositions | |
| EP1713348B1 (en) | Granules containing stabilized phytase formulations | |
| EP1069832A1 (en) | Granulates containing feed-enzymes | |
| US20070269555A1 (en) | Enzyme Formulations | |
| CN100526459C (zh) | 高活性植酸酶组合物 | |
| MXPA99011240A (en) | High-activity phytase compositions | |
| EP1645195A1 (en) | Stabilized enzyme formulations | |
| MXPA99011241A (en) | Carbohydrate-based enzyme granulates | |
| MXPA00009822A (en) | Granulates containing feed-enzymes |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PD00 | Pending as of 2000-06-30 in czech republic | ||
| MM4A | Patent lapsed due to non-payment of fee |
Effective date: 20160604 |