CN115666262A - 动物饲料组合物 - Google Patents

Abstract

本发明涉及至少一种糖酶与具有限定的A/X纤维分数的动物饲料的组合的用途；涉及一种具有限定的A/X纤维分数并且包含至少一种糖酶的动物饲料，所述至少一种糖酶的量被确定为适合于所述饲料的所述A/X纤维分数；以及所述动物饲料的制造方法。

Description

动物饲料组合物

发明背景

技术领域

本发明涉及至少一种糖酶与具有限定的A/X纤维分数的动物饲料的组合的用途；涉及一种具有限定的A/X纤维分数并且包含至少一种具有糖酶活性的酶的动物饲料，所述酶的量被确定为适合于所述饲料的所述A/X纤维分数；以及所述动物饲料的制造方法。

背景技术

在人口不断增长、食用更多动物蛋白的世界中需要提高农场动物的生长性能，并且本发明的目的是设计有助于应对这一挑战的解决方案。

木聚糖是在所有陆地植物中发现的半纤维素(Popper和Tuohy,PlantPhysiology,2010,153:373-383)。它们在次生细胞壁和木质部细胞中尤其丰富。在具有II型细胞壁的草中，葡糖醛酸阿拉伯木聚糖是主要的半纤维素并且在许多基于草的食物和饲料产品中作为可溶性或不溶性膳食纤维存在。

植物木聚糖具有β-1,4-连接的吡喃木糖主链，该主链可以在O2或O3位置以物种和组织特异性方式用阿拉伯糖、葡糖醛酸和乙酸取代。具有经济上重要的物种(例如玉米、高粱、水稻和小米)的黍亚科(Panicoideae)的富含淀粉的种子在其细胞壁中具有特殊类型的高度取代的木聚糖。与小麦面粉相比，其中阿拉伯木聚糖主链中超过60％的木糖基单元未被取代。在玉米粒木聚糖中，未取代的主链木糖基的对应百分比为20-30％，并且在高粱中其为35-40％(Huismann等人，2000,Carbohydrate Polymers 42:269-279)。此外，在玉米和高粱中，木聚糖侧链可以比其他木聚糖中常见的单个阿拉伯糖或葡糖醛酸取代更长。这种增加的侧链复杂性往往是由于与侧链阿拉伯糖或葡糖醛酸结合的L-半乳糖和D-半乳糖以及D-木糖。玉米粒木聚糖中的约每十分之一的阿拉伯糖也被阿魏酸酯化，并且约每四分之一的木糖带有乙酰化(Agger等人，2010,J.Agric.Food Chem.58:6141-6148)。所有这些因素组合，使玉米和高粱中高度取代的木聚糖抵抗传统木聚糖酶的降解。

玉米在全世界被用作动物饲料，并且纤维是反刍动物日粮中的有效膳食组分，因为它们是自然界中现成的纤维素加工厂。然而，对于单胃动物来说，玉米纤维历来不是关键的能量来源。然而，已经开发了如WO 2003/106654和WO 2017/103159中所公开的具有木聚糖酶活性的能够分解细胞壁中高度支化的木聚糖主链以释放更多的木糖和被捕集在细胞壁内的其他营养物质的多肽。

肉鸡的酶补充可能会导致可消化能量的显著增加(表2；Jasek等人，2018.Impactof a multicarbohydrase containingα-galactosidase and xylanase on ilealdigestible energy,crude protein digestibility,and ileal amino aciddigestibility in broiler chickens.Poultry Science 97:3149-3155.)，然而没有观察到增重或FCR的提高(表3；Jasek等人，2018)。此外，可溶性膳食纤维的总肠道消化率增加(SDF，表7；Abelilla和Stein,2019.Degradation of dietary fiber in the stomach,small intestine,and large intestine of growing pigs fed corn-or wheat-baseddiets without or with microbial xylanase.J.Anim.Sci.2019.97:338-352.)导致饲喂给猪的基于玉米的日粮中可消化和可代谢的能量显著降低(Abelilla和Stein，2019)。

令人惊讶且完全违反直觉的是，最近已经发现一些因素，例如高A/X玉米纤维分数、玉米中阿拉伯木聚糖的质量与玉米中木糖总质量的比例，导致所添加的饲料酶(例如糖酶，优选地木聚糖酶)的不同水平的活性。本发明提供了一种具有限定的A/X玉米比率并且包含具有糖酶活性的多肽的动物饲料，所述多肽的量基于所述饲料的所述A/X玉米比率被确定为合适的；以及所述动物饲料的用途和制造方法。

发明内容

本发明涉及至少一种糖酶与具有限定的A/X纤维分数的动物饲料的组合用于提高动物饲料的营养价值的用途。

本发明进一步涉及至少一种糖酶与具有限定的A/X纤维分数的动物饲料的组合用于增加动物饲料的可消化性的用途。

本发明进一步涉及至少一种糖酶与具有限定的A/X纤维分数的动物饲料的组合用于提高动物中的一种或多种性能参数的用途。

本发明还涉及一种具有限定的A/X纤维分数并包含具有糖酶活性的多肽的动物饲料，所述多肽的量被确定为适合于所述饲料的所述A/X纤维分数。

本发明进一步涉及一种制造包含至少一种糖酶的动物饲料的方法，所述方法包括根据所述饲料的A/X纤维分数调节所述动物饲料中的一种或多种多肽的量的步骤。

附图说明

图1：在全球收集的总共130个玉米样品中，玉米中纤维分数(A/X玉米比率)的范围。A/X玉米比率的范围是0.61至0.97

图2：预测的经体重校正的饲料转化率(BWcFCR)与玉米纤维分数和糖酶添加量的关系。

图3：玉米中的纤维分数(A/X玉米比率)与本发明的木聚糖酶对经体重校正的饲料转化率的酶功效之间的关系。

图4：A/X总饲料比率与本发明的木聚糖酶对经体重校正的饲料转化率的酶功效之间的关系。

图5：玉米中的纤维分数(A/X玉米比率)与本发明的多糖酶(RVB)对经体重校正的饲料转化率的酶功效之间的关系。

图6：A/X总饲料比与本发明的多糖酶(RVB)对经体重校正的饲料转化率的酶功效之间的关系。

图7：总日粮中纤维分数的分布(A/X总饲料比)。

图8：实施例4的结果，第0天至第42天的经死亡率校正的饲料转化率

图9：实施例4的结果，第0天至第42天的饲料转化率点，相对于NC的增量

图10：实施例4的结果，第0天至第42天的经体重校正的饲料转化率

图11：实施例4的结果，第0天至第42天的经体重校正的饲料转化率点，相对于NC的增量

定义

α-半乳糖苷酶：术语“α-半乳糖苷酶”，也称为o-D-半乳糖苷半乳糖水解酶(EC.3.2.1.22)，意指催化或-D-半乳糖苷(例如半乳糖寡糖、半乳甘露聚糖和半乳糖脂)中末端非还原cx-D-半乳糖残基水解的酶。α-半乳糖苷酶活性可以在室温下在100mM MES(Sigma)缓冲液pH 7.0 1 0.05中使用4-硝基苯基cx-D-吡喃半乳糖苷(购自MegazymeInternational,Bray,Co.Wicklow,Ireland)作为底物测定。将酶以2倍稀释率稀释，然后将4-硝基苯基cx-D-吡喃半乳糖苷底物溶于含有所述酶的溶液中。通过测量随时间变化所释放的pNP在405nm处的吸光度，直接在缓冲液中跟踪α-半乳糖苷酶活性。详细测定可以在如本文所述的α-半乳糖苷酶测定中找到。

动物：术语“动物”是指除人类以外的任何动物。动物的示例是单胃动物，包括但不限于猪(pig)或生猪(swine)(包括但不限于仔猪、生长猪和母猪)；家禽，例如火鸡、鸭子、鹌鹑、珍珠鸡、鹅、鸽子(包括乳鸽)和鸡(包括但不限于肉用仔鸡(在此称为肉鸡)、雏鸡、蛋鸡、母鸡(在此称为蛋鸡))；宠物，例如猫和狗；马。

动物饲料：术语“动物饲料”是指适合或旨在被动物摄入的任何化合物、制剂或混合物。用于单胃动物的动物饲料通常包含浓缩物以及维生素、矿物质、酶、直接饲喂的微生物、氨基酸和/或其他饲料成分(例如在预混物中)，而用于反刍动物的动物饲料通常包含草料(包括粗饲料和青贮料)并且还可以包含浓缩物以及维生素、矿物质、酶、直接饲喂的微生物、氨基酸和/或其他饲料成分(例如在预混物中)。

表观可代谢能量(Apparent metabolizable energy,AME)：术语“表观可代谢能量(AME)”是所消耗的饲料的总能量减去粪便、尿液和消化的气体产物中所含的总能量。

含阿拉伯木聚糖的材料：术语“含阿拉伯木聚糖的材料”意指任何含阿拉伯木聚糖的材料。阿拉伯木聚糖是一种半纤维素，其存在于包括木材和谷物在内的植物的初生细胞壁和次生细胞壁两者中，由两种戊糖阿拉伯糖和木糖的共聚物组成。阿拉伯木聚糖链含有大量的1,4-连接的木糖单元。许多木糖单元被2-取代的、3-取代的或2,3-取代的阿拉伯糖残基取代。

含阿拉伯木聚糖的材料的示例是草料、粗饲料、种子和谷物(无论是完整的还是通过从例如玉米、燕麦、黑麦、大麦、小麦压碎、碾磨等制备的)、树木或硬木(例如杨木、柳木、桉木、棕榈树、枫木、桦木)、竹子、草本和/或木本能源作物、农业食物和饲料作物、动物饲料产品、木薯皮、可可豆荚、糖料甘蔗、糖用甜菜、刺槐豆浆、蔬菜或水果渣、木材废料、树皮、刨花、锯屑、木浆、制浆废液、废纸、硬纸板、建筑和拆迁木材废料、工业或城市废水固体或污泥、粪肥、来自酿造和/或发酵过程的副产物、湿蒸馏酒粕、干蒸馏酒粕、酒糟(spentgrain)、废糖蜜(vinasse)和甘蔗渣。

如本文所定义的草料还包括粗饲料。草料是来自饲用植物、禾草和其他饲用植物、禾草和其他饲用植物、海藻、发芽谷物和豆类或它们的任何组合的新鲜植物材料，例如干草和青贮料。饲用植物的示例为苜蓿(紫花苜蓿)、百脉根(birdsfoot trefoil)、芸苔属(例如羽衣甘蓝、油菜(卡诺拉)、芜菁甘蓝(瑞典芜菁)、芜菁(turnip))、三叶草(例如杂种车轴草、红车轴草、地三叶草、白三叶草)、禾草(例如狗牙根、雀麦草、假燕麦草、羊茅草(fescue)、欧石楠草(heath grass)、草地早熟禾、芒草、鸭茅草(orchard grass)、黑麦草、柳枝稷、提摩西草(Timothy-grass))、玉米(玉蜀黍)、大麻、小米、大麦、燕麦、黑麦、高粱、大豆和小麦以及蔬菜(例如甜菜)。适用于青贮饲料的作物是普通禾草、三叶草、苜蓿、巢菜、燕麦、黑麦和玉米。草料还包括来自粮食生产的作物残茬(例如玉米秸秆；来自小麦、大麦、燕麦、黑麦和其他谷物的秸秆)；来自蔬菜的残余物，如甜菜缨(beet tops)；来自油籽生产的残余物，如来自大豆、油菜籽和其他豆类的茎和叶；以及来自供动物或人食用的谷物的提炼或来自燃料生产或其他工业的级分。

含阿拉伯木聚糖的材料的优选来源是草料、粗饲料、种子和谷物、糖料甘蔗、糖用甜菜和木浆。

体重增重：术语“体重增重”意指在给定时间段内动物的活体重量的增加，例如从第1天至第21天的增重。

糖酶：在本发明的上下文中，糖酶是催化糖类物质分解成单糖的酶。

糖酶的示例包括但不限于葡聚糖酶、木聚糖酶、果胶酶、半乳糖苷酶、纤维素、甘露聚糖酶、脱支酶和淀粉酶。

糖酶的主要靶标是来自谷类的纤维素、阿拉伯木聚糖和混合连接的葡聚糖以及来自植物蛋白来源的果胶多糖和寡糖。例如，木聚糖酶将直链多糖β-1,4-木聚糖降解成木糖。它有助于分解细胞壁，并由此暴露淀粉并增强消化。

根据本发明的优选糖酶是木聚糖酶(如下文更详细定义)和α-半乳糖苷酶。α-半乳糖苷酶(α-GAL，也被称为α-GAL A；EC 3.2.1.22)是一种糖苷水解酶，其从糖脂和糖蛋白水解末端α-半乳糖基部分。

在本发明上下文中有用的糖酶的示例是来自疏棉状嗜热丝孢菌(Thermomyceslanuginosus)的糖酶或通过经遗传修饰的微生物(例如米曲霉(Aspergillus oryzae)或解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens))的发酵产生的里氏木霉(Trichdermareesei)β-葡聚糖酶。

用于根据本发明使用的糖酶在蛋白酶存在下是稳定的。蛋白酶稳定性可以通过在蛋白酶(例如，胃蛋白酶，70mg/l)存在下在所需pH(例如pH 3、4或5)的缓冲液中孵育0.5mg纯化的糖酶蛋白/ml达所需时间(例如30分钟、45分钟、60分钟、90分钟或120分钟)，然后将pH升高至所需pH(例如pH 4、5、6或7)并测量残留活性来测定。相对于对照(未经蛋白酶处理的样品)，残余糖酶活性优选为至少20％，优选至少30％、40％、50％、60％、70％、80％或至少90％。

在根据本发明的用途中，糖酶可以在动物日粮之前、之后或同时饲喂给动物。后者是优选的。

在一个具体实施方式中，糖酶在处于其被添加到饲料中的形式时，或者当被包含在饲料添加剂中时，是明确限定的。明确限定意指，酶制备物基于蛋白质计为至少50％纯的。在其他具体实施方式中，酶酶制备物为至少60％、70％、80％、85％、88％、90％、92％、94％或至少95％纯的。纯度可以通过本领域中已知的任何方法，例如通过SDS-PAGE或通过尺寸排阻色谱法(参见WO 01/58275的实施例12)确定。

浓缩物：术语“浓缩物”意指具有高蛋白质和能量浓度的饲料，诸如鱼粉、糖蜜、低聚糖、高粱、种子和谷物(整粒玉米、燕麦、黑麦、大麦、小麦，或通过压碎、碾磨等从例如玉米、燕麦、黑麦、大麦、小麦制成)、油料压榨饼(例如，来自棉籽、红花、向日葵、大豆(诸如豆粕)、油菜籽/低芥酸菜籽、花生)、棕榈仁饼、酵母衍生材料和蒸馏酒粕(诸如湿蒸馏酒粕(wet distillers grains,WDS))和具有可溶物的干蒸馏酒粕(dried distillers grainswith solubles,DDGS)。

玉米蛋白溶解度：溶解度是蛋白质最重要的功能特性之一，但是玉米蛋白由于其高疏水性和二硫键的存在而表现出有限的溶解度(Esen，1986)。术语“玉米蛋白溶解度”也被称为“盐溶性蛋白(salt soluble protein,SSP)”或“promatest”，并且使用由AFNOR(2008)推荐的工序NF V03-741以[mg]为单位进行测量，并表示为当量mg白蛋白/100ml或mg蛋白质/100ml。Janas等人，2010描述了简要方法

膳食纤维：术语膳食纤维通常是指粗的、难消化的植物物质，主要由多糖(例如纤维素)构成，其当被人类食用时会刺激肠道蠕动。例如，膳食纤维可以包括细胞壁材料，例如纤维素、半纤维素、木质素和果胶，以及不被身体消化的树胶和粘质。膳食纤维包括多糖、寡糖、木质素和相关联的植物物质。可溶性和不溶性纤维构成了膳食纤维的两个基本类别。纤维素、半纤维素和木质素—不溶于水，而果胶、树胶和粘质—在水中变成粘性的。适用于根据本公开的产品和量化的膳食纤维来源包括但不限于谷糠、大麦、洋车前子、豆类、胰岛素、低聚果糖、聚葡萄糖、植物来源、水果来源、谷物来源、坚果和亚麻籽。

样品中膳食纤维的量可以通过标准方法进行量化。这些方法包括但不限于溶解样品以产生膳食纤维溶液，然后将所述膳食纤维溶液离心以产生沉淀物和上清液。在将上清液与沉淀物分离后，可以分析沉淀物以确定沉淀物中非膳食纤维组分的含量。沉淀物中的膳食纤维含量可以从沉淀物中非膳食纤维组分的含量来确定。通过使用离心来帮助分离样品中的膳食纤维，可以最小化纤维损失，从而导致更准确地测定样品中的膳食纤维含量。

相对于NC，糖酶对BWcFCR的影响：术语“相对于NC，糖酶对BWcFCR的影响”是指相对于不含糖酶的相同日粮，当饲喂添加了糖酶的日粮时FCR的变化。这种影响不以单位计表示，而是以单位差(点)计表示。例如，FCR差值是从1.57至1.56的一个点。

饲料转化率：术语“饲料转化率”是指饲喂给动物以使动物的重量增加特定量的饲料的量。提高的饲料转化率意指较低的饲料转化率。“较低的饲料转化率”或“提高的饲料转化率”意指在饲料中使用饲料添加剂组合物导致相较于当饲料不包含所述饲料添加剂组合物时使动物的重量增加指定量所需的饲料的量，使动物的重量增加相同量所需饲喂给动物的饲料的量较低。为了能够比较不同的组、群、舍或日粮，我们假设所有动物的体重相同，并且FCR针对体重差异进行了校正并变成经体重校正的饲料转化率(BWcFCR)。出于本发明的目的，对于家禽，体重校正是通过每30g额外体重在FCR中减去1个点来完成的，例如从1.57至1.56。

为了能够比较不同的组、群或试验，将每围栏的采食量针对该围栏内家禽在试验中的总天数进行调整，并且被称为经死亡率校正的FCR(mortality corrected FCR,mFCR)。关系如下：

·家禽总天数＝(每围栏的禽数×试验中天数)+家禽死亡天数。

·每家禽的经死亡率调整的采食量＝(围栏采食量/家禽总天数)×总试验天数

·经死亡率校正的FCR＝每家禽的经死亡率调整的采食量/每家禽的体重增重

饲料效率：术语“饲料效率”是指当在某一时间段期间动物以自由采食方式饲喂或饲喂指定量的食物时每单位饲料的增重量。“提高的饲料效率”是指与在不存在所述饲料添加剂组合物的情况下饲喂的动物相比，在饲料中使用根据本发明的饲料添加剂组合物导致每单位饲料摄入量的增重增加。

纤维分数：出于本发明的目的，术语“纤维分数”或“膳食纤维分数”是指质量分数(重量分数)，即饲料或食物的纤维组分的质量与所述饲料或食物的另一种纤维组分的质量之比。

具体地，本发明涉及A/X比率或A/X纤维分数，其是饲料或食物中阿拉伯糖(A)的质量与所述饲料或食物中木糖(X)的质量之比。

A/X总饲料比率，即总日粮中的A/X比率，是从所测量的A/X玉米比率和所测量的A/X豆粕比率，通过使用((日粮中玉米的百分比×所测量的玉米中阿拉伯糖的质量)+(日粮中豆粕的百分比×所测量的豆粕中阿拉伯糖的质量))/((日粮中玉米的百分比×所测量的玉米中木糖的质量)+(日粮中豆粕的百分比×所测量的豆粕中木糖的质量))计算的。总日粮中的A/X比率可以在0.91至1.42的范围内，其中分布如图7所示。

出于说明总日粮中的A/X比率的计算的目的，如下给出了示例：肉鸡日粮含有57.43％的玉米和37.6％的豆粕。所测量的玉米中阿拉伯糖的含量为1.72g/100g玉米，并且所测量的玉米中木糖的含量为2.41g/100g玉米。所测量的豆粕中阿拉伯糖的含量为2.42g/100g豆粕，并且所测量的豆粕中木糖的含量为1.25g/100g豆粕。因此，所计算的总日粮中阿拉伯糖与木糖的比率为1.02＝((57.43/100)*1.72)+((37.6/100)*2.42)/((57.43/100)*2.41)+((37.6/100)*1.25)。

A/X玉米比率：出于本发明的目的，术语“A/X玉米纤维分数”或“A/X玉米比率”是指玉米样品中阿拉伯木聚糖的质量与同一玉米样品中木糖的质量之比。对于全球收集的总共130个玉米样品，玉米中的A/X比率通常在0.61至0.97的范围内，如图1中所示。

不溶性A/X比率：术语“不溶性A/X比率”或“玉米不溶性A/X比率”被确定为玉米中的水不可提取的阿拉伯糖(不溶性阿拉伯糖)比水不可提取的木糖(不溶性木糖)含量，指示玉米阿拉伯木聚糖的结构特征。

可溶性A/X比率：术语“可溶性A/X比率”或“玉米可溶性A/X比率”被确定为玉米中的水可提取阿拉伯糖(可溶性阿拉伯糖)含量比水可提取木糖(可溶性木糖)含量。水可提取阿拉伯糖(可溶性阿拉伯糖)是通过从总阿拉伯糖中减去不溶性阿拉伯糖来计算的。水可提取木糖(可溶性木糖)是通过从总木糖中减去不溶性木糖来计算的。

A/X豆粕比率：出于本发明的目的，术语“A/X豆粕纤维分数”或“A/X豆粕比率”是指豆粕样品中阿拉伯木聚糖的质量与同一豆粕样品中木糖的质量之比。

成熟多肽：术语“成熟多肽”是指处于在翻译和任何翻译后修饰(例如N末端处理、C末端截断、糖基化、磷酸化等)之后的最终形式下的多肽。

在本发明中，成熟多肽可以是如在EP 16178681.9中公开的SEQ ID NO:1的氨基酸1至氨基酸208。

近红外光谱学：如本文所用，术语“近红外光谱学(near-infrared spectroscopy,NIRS)”是指使用电磁光谱的近红外区域(从约700nm至2500nm)的光谱方法。

非淀粉多糖(non-starch polysaccharide,NSP)：术语“非淀粉多糖(NSP)”是指食物中存在的除淀粉外的那些多糖(复合糖类物质)。它们是膳食纤维的主要部分，并且可以比总膳食纤维更精确地测量；包括纤维素、果胶、葡聚糖、树胶、粘质、菊粉和几丁质(并且不包括木质素)。NSP级分包括可溶性NSP和不溶性NSP以及组成糖。

营养物消化率：术语“营养物消化率”意指从胃肠道或胃肠道的特定区段(例如，小肠)中消失的营养物的分数。营养物消化率可以被测量为施用于受试者的营养物与受试者的粪便中排出的营养物之间，或者施用于受试者的营养物与胃肠道的特定区段(例如，回肠)上的消化物中残留的营养物之间的差值。

如本文所用的营养物消化率可以通过借助于在某一时段期间排泄物的总收集量，通过营养物的摄入量与排泄的营养物之间的差值来测量；或者使用不被动物吸收的惰性标记物来测量，并且允许研究人员计算在整个胃肠道或某一胃肠道区段中消失的营养物的量。这种惰性标记物可以是二氧化钛、氧化铬或酸不溶性灰分。消化率可以表示为饲料中营养物的百分比，或表示为饲料中每质量单位营养物中可消化营养物的质量单位。如本文所用的营养物消化率涵盖淀粉消化率、脂肪消化率、蛋白质消化率和氨基酸消化率。

如本文所用的能量消化率意指所消耗的饲料的总能量减去粪便的总能量，或所消耗的饲料的总能量减去动物胃肠道的特定区段(例如，回肠)上的残余消化物的总能量。如本文所用的可代谢能量是指表观可代谢能量，并且意指多消耗的饲料的总能量减去粪便、尿液和消化的气体产物中所含的总能量。能量消化率和可代谢能量可以使用与用于测量营养物的消化率相同的方法被测量为总能量摄入量与在粪便中排泄的总能量或在胃肠道的特定区段中存在的消化物中的总能量之间的差值，其中针对氮排泄进行适当校正以计算饲料的可代谢能量。

亲本或亲本木聚糖酶：术语“亲本”或“亲本木聚糖酶”意指这样的木聚糖酶，对该木聚糖酶进行取代以产生在本发明中使用的木聚糖酶变体。亲本可以是天然存在的(野生型)多肽或其变体或片段。

合并的SEM：术语“合并的SEM”是指平均值的经处理取平均的标准误差。

粗饲料：术语“粗饲料”是指具有高纤维水平的干燥植物材料，例如纤维、麸皮、来自种子和谷粒的外皮以及作物残茬(例如秸秆、干椰子肉、糠秕、甜菜渣)。

序列同一性：两个氨基酸序列之间或两个核苷酸序列之间的相关性通过参数“序列同一性”来描述。

出于本发明的目的，使用如在EMBOSS包的Needle程序(EMBOSS:The EuropeanMolecular Biology Open Software Suite,Rice等人，2000,Trends Genet.16:276-277)，例如5.0.0或更高版本中实现的Needleman-Wunsch算法(Needleman和Wunsch,1970,J.Mol.Biol.48:443-453)来测定两个氨基酸序列之间的序列同一性。所使用的参数是为10的空位开放罚分、为0.5的空位延伸罚分，以及EBLOSUM62(EBLOSUM62的EMBOSS版本)取代矩阵。将标记为“最长同一性”(使用-nobrief选项获得的)的Needle输出用作同一性百分比，并且计算如下：

(相同残余物×100)/(比对长度-比对中总空位数)

出于本发明的目的，使用如在EMBOSS包的Needle程序(EMBOSS:The EuropeanMolecular Biology Open Software Suite,Rice等人，2000，出处同上)，例如5.0.0或更高版本中实现的Needleman-Wunsch算法(Needleman和Wunsch,1970，出处同上)来测定两个脱氧核糖核苷酸序列之间的序列同一性。所使用的参数是为10的空位开放罚分、为0.5的空位延伸罚分，以及EDNAFULL(NCBI NUC4.4的EMBOSS版本)取代矩阵。将标记为“最长同一性”(使用-nobrief选项获得的)的Needle输出用作同一性百分比，并且计算如下：

(相同脱氧核糖核苷酸×100)/(比对长度-比对中总空位数)

快速消化的淀粉：术语“快速消化的淀粉”是指在20分钟后被快速消化并使用由Englyst等人(1999)开发的体外测定测量的淀粉。

抗性淀粉：术语“抗性淀粉”是指抗内源性或外源性酶消化的淀粉。使用由Englyst等人(1999)开发的体外测定测量或计算为从总淀粉中扣除快速消化的淀粉和缓慢消化的淀粉后剩余的淀粉。

盐溶性蛋白质：蛋白质的溶解度与表面疏水性(蛋白质-蛋白质)和亲水性(蛋白质-溶剂)相互作用有关；在食物情况下，此类溶剂是水，并且因此蛋白质溶解度被归类为亲水性。术语“盐溶性蛋白质”或“蛋白质溶解度”提供了对玉米中的蛋白质和淀粉颗粒对酶促攻击的易感性的指示。玉米的蛋白质溶解度可受到收获时的水分含量以及干燥时间和温度的影响(Odjo等人，2012)。盐溶性蛋白质是使用由AFNOR(2008)推荐的工序NF V03-741测量的，并表示为当量mg白蛋白/100ml或mg蛋白质/100ml。Janas等人，2010描述了简要方法

缓慢消化的淀粉：术语“缓慢消化的淀粉”是指在120分钟后被缓慢消化并使用由Englyst等人(1999)开发的包括总淀粉、快速消化的淀粉和抗性淀粉的测量在内的体外测定测量的淀粉。

总淀粉：术语“总淀粉”是指由α-1,4-连接的D-葡萄糖单元的长直链无支化链(直链淀粉)和/或长α-1,6-支链葡萄糖单元(支链淀粉)组成的天然植物聚合物。评估总淀粉的方法包括测量通过使用对α(1-4)键和α(1-6)键有特异性活性的α-淀粉酶和淀粉葡糖苷酶释放的葡萄糖。总淀粉可以通过多种方法测量，所述方法不限于由Englyst等人(1999)、Hall(2015)或McCleary等人(2018)所述的方法。

变体：术语“变体”意指具有木聚糖酶活性的多肽，该多肽在一个或多个(例如，几个)位置处包含改变，即取代、插入和/或缺失。取代意味着用不同的氨基酸替换占据某一位置的氨基酸；缺失意味着去除占据某一位置的氨基酸；并且插入意味着在占据某一位置的氨基酸旁边或紧接着占据该位置的氨基酸加入氨基酸。本发明的变体具有如在EP16178681.9中公开的SEQ ID NO:1的多肽的木聚糖酶活性的至少20％，例如至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％、或至少100％。

透明性：术语“透明性(vitreousness)”也被分析实验室(Germ Services,France)描述为rendement brut en semoule[％]，这是用于确定用于本发明目的的玉米透明性的方法。它是用于确定谷物质地的重要因素，通常通过透明胚乳与粉状胚乳的比率确定—基于透明区域呈玻璃状和半透明，而粉状胚乳是白色、粉状和不透明的外观(Zhang和Xu，2019)。另一种半定量地界定玉米中的淀粉和蛋白质基质的方法是确定透明性百分比。高透明性与较多的蛋白质(醇溶蛋白)和淀粉包封以及降低的淀粉消化率(体外)有关，尤其是当透明性增加到高于60％时(Blasel等人，2006)。

野生型木聚糖酶：术语“野生型”木聚糖酶意指由天然存在的微生物(例如细菌、酵母或在自然界中发现的丝状真菌)表达的木聚糖酶。

木聚糖酶：在本文中，木聚糖酶是一种将直链多糖β-1,4-木聚糖降解成木糖的酶。它有助于分解细胞壁，并由此暴露淀粉并增强消化。

优选地，术语“木聚糖酶”是指催化一些葡糖醛酸阿拉伯木聚糖中的1,4-β-D-木糖基键的内切水解的葡糖醛酸阿拉伯木聚糖内切-1,4-β-木聚糖酶(EC 3.2.1.136)。

已知的木聚糖酶基于序列相似性被分类为酶家族(cazy.org)。主要具有内切木聚糖酶活性的酶先前已在糖苷水解酶家族(GH)5、8、10、11、30和98中进行了描述。某一家族内的酶具有一些特征，例如3D折叠，并且它们往往共享相同的反应机制。一些GH家族具有狭窄的或单特异性的底物特异性，而其他家族则具有广泛的底物特异性。

商购可得的GH10和GH11木聚糖酶往往用于分解阿拉伯木聚糖的木糖主链。在动物饲料中，这会导致谷物细胞壁降解，随后改善包封在细胞内的营养物(淀粉和蛋白质)的释放。木聚糖降解还导致形成可用于后肠发酵的木糖低聚物，并且因此可以帮助动物获得更多可消化能量。然而，此类木聚糖酶对侧链空间位阻敏感，并且虽然它们可有效地降解来自小麦的阿拉伯木聚糖，但是它们对在禾本科物种(例如玉米或高粱)的种子中发现的木聚糖不是非常有效。

WO 2003/106654公开了许多具有推定的木聚糖酶活性的多肽。在WO 2003/106654中描述了SEQ ID NO 190的GH30木聚糖酶的变体，以便克服固有的pH和热稳定性问题。WO2003/106654的许多多肽与本发明相关。WO 2017/103159还公开了一种具有木聚糖酶活性的GH30亚家族8多肽，其中该GH30亚家族8多肽具有与本发明相关的木聚糖酶活性。

在本发明的一个实施方式中，具有木聚糖酶活性的多肽是GH30家族木聚糖酶，例如来源于枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、解淀粉芽孢杆菌(Bacillusamyloliquefaciens)、地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)或饲料类芽孢杆菌(Paenibacillus pabuli)的木聚糖酶。

木聚糖酶活性可以于37℃用0.2％ AZCL-葡糖醛酸木聚糖作为底物在0.01％

X-100和200mM磷酸钠pH 6中测定。一个木聚糖酶活性单位被定义为在37℃、pH 6下在200mM磷酸钠pH 6中从作为底物的0.2％ AZCL-葡糖醛酸木聚糖每分钟产生的1.0微摩尔的天青精(azurine)。

含木糖的材料：术语“含木糖的材料”是指任何含木糖的材料。木糖是一种戊糖，并且是半纤维素木聚糖的主要结构单元。木糖可以从木材、甘蔗或椰子中提取。它也少量天然存在于浆果、菠菜、西兰花和梨中，并作为膳食纤维阿拉伯木聚糖的一部分。阿拉伯木聚糖链含有大量的1,4-连接的木糖单元。许多木糖单元被2-取代的、3-取代的或2,3-取代的阿拉伯糖残基取代。

具体实施方式

如上所述，本发明涉及至少一种糖酶与具有限定的A/X纤维分数的动物饲料的组合用于提高动物饲料的营养价值的用途。

本发明的糖酶可以以单组分糖酶的形式或以多组分糖酶组合物的形式添加到饲料中，例如可从

Advance(被进一步称为“RVB”)商购获得，包括内切-1,4-β-木聚糖酶、β-木糖苷酶、内切-1,3 1,4-β-葡聚糖酶、昆布多糖酶、α-阿拉伯呋喃糖苷酶、α-葡糖醛酸酶、阿魏酸酯酶、内切-1,4-β-葡聚糖酶、纤维二糖水解酶、β-葡糖苷酶、聚半乳糖醛酸酶、果胶酯酶、内切-1,5-α-阿拉伯聚糖酶、α-半乳糖苷酶、鼠李糖半乳糖醛酸酶、天冬氨酸蛋白酶、金属蛋白酶、内切-1,4-β-甘露聚糖酶、β-甘露糖苷酶。

优选的糖酶是如上所定义的木聚糖酶，例如：

SEQ ID NO 1是“野生型”木聚糖酶(如在WO03106654中由SEQ ID NO:190所定义)：

SEQ ID NO 2包含以下序列：

SEQ ID NO 3是GH11木聚糖酶并且包含以下序列：

SEQ ID NO 4是GH11木聚糖酶并且包含以下序列：

SEQ ID NO 5包含以下序列：

SEQ ID NO:6是来自丙酮丁醇梭菌(Clostridium acetobutylicum)的成熟GH30_8木聚糖酶的氨基酸序列：

Ala Ser Asn Val Met Val Asn Leu Ala Ser Lys Lys Gln Val Ile Arg

Gly Phe Gly Gly Met Asn Ser Val Ala Trp Ala Gly Asp Leu Thr Ala

Ala Gln Arg Glu Thr Ala Phe Gly Asn Gly Asn Asn Gln Leu Gly Leu

Ser Val Val Arg Ile Phe Val Asp Asp Asn Lys Asn Asn Trp Tyr Lys

Glu Leu Pro Thr Ala Lys Ser Ala Ile Ala His Gly Ser Ile Val Phe

Ala Thr Pro Trp Asn Pro Pro Ser Ser Met Thr Glu Thr Phe Asn Arg

Asn Gly Glu Lys Ala Lys Arg Leu Arg Tyr Asp Lys Tyr Gly Asp Tyr

Ala Lys Tyr Leu Asn Asp Phe Val Ser Tyr Met Lys Asn Asn Gly Val

Asn Leu Tyr Ala Ile Ser Val Gln Asn Glu Pro Asp Tyr Gly Arg Asp

Trp Thr Trp Trp Thr Pro Gln Glu Val Leu Arg Phe Met Arg Asp Tyr

Ala Gly Ser Ile Asn Cys Arg Val Met Ser Pro Glu Ser Phe Ser Tyr

Gln Lys Asn Met Tyr Asp Pro Ile Leu Asn Asp Pro Lys Ala Leu Ala

Asn Met Asp Ile Leu Gly Thr His Thr Tyr Gly Thr Gln Val Lys Asp

Phe Pro Tyr Pro Leu Phe Lys Gln Lys Ala Ala Gly Lys Asp Leu Trp

Met Thr Glu Val Tyr Val Pro Asn Ser Asp Ala Asn Ser Ala Asp Arg

Trp Pro Glu Ala Leu Glu Val Ala Asn His Ile Asn Asn Ala Met Val

Glu Gly Asp Phe Gln Ala Tyr Val Trp Trp Tyr Ile Arg Arg Ser Tyr

Gly Leu Ile Lys Glu Asn Gly Ala Ile Ser Lys Arg Gly Tyr Met Met

Ala His Phe Ser Lys Phe Val Arg Pro Gly Tyr Val Arg Val Asp Ala

Thr Lys Asn Pro Val Gly Asn Val Tyr Val Ser Ala Tyr Thr Gly Asn

Asn Lys Val Val Ile Val Ala Ile Asn Lys Gly Thr Tyr Pro Val Asn

Gln Ser Phe Asn Ile Gln Asn Ser Thr Val Ser Asn Val Ser Ser Trp

Val Thr Ser Gly Thr Leu Asn Met Ala Lys Thr Asn Ser Asn Ile Asn

Ala Ala Asn Gly Arg Phe Asn Ala Ser Leu Pro Ala Gln Ser Val Thr

Thr Phe Val Ala Asp Leu Asn Ser Thr Lys Pro Thr Thr Asn Pro Thr

Thr Asn Pro Thr Pro Gly Ser Thr Val Thr Leu Asn Asn Gly Trp Tyr

Tyr Ile Lys Asn Ile Asn Ala Gln Lys Tyr Leu Gln Val Ala Asn Asn

Thr Gly Lys Ala Gly Gln Asn Val Glu Leu Gly Ser Gly Ser Gly Val

Ala Gly Gln Lys Trp Tyr Leu Thr Asn Thr Gly Asp Gly Tyr Ile Thr

Leu Lys Asn Ala Leu Gly Asn Tyr Met Leu Asp Val Ser Tyr Gly Glu

Asn Lys Asp Gly Ser Asn Ile Gln Ile Phe Asn Ala Tyr Ser Gly Asp

Ser Gln Lys Phe Ala Val Lys Ala Ser Ser Lys Asn Gly Gln Tyr Ser

Val Ala Thr Lys Ser Ser Asn Gly Ser Lys Val Leu Asp Asp Tyr Asn

Phe Gly Thr Ala Asp Gly Thr Asn Val Cys Gln Trp Thr Tyr Gly Gly

Asn Ala Asn Gln Leu Trp Val Phe Glu Pro Thr Asn Asn

SEQ ID NO:7是来自假交替单胞菌(Pseudoalteromonas tetraodonis)的成熟GH30_8木聚糖酶的氨基酸序列：

Ser Asn Val Thr Ile Asn Phe Asn Thr Gln Tyr Gln Gln Ile Asp Gly

Phe Gly Gly Met Asn Ala Pro Gly Trp Ile Asn Asp Leu Thr Pro Ala

Gln Ala Thr Lys Ala Phe Gly Thr Gly Asn Gly Glu Met Gly Leu Ser

Ile Met Arg Met Arg Ile Ala Pro Asp Ser Asn Gln Trp Tyr Lys Gln

Val Pro Thr Ala Lys Ile Ala Lys Ser Tyr Gly Ala Lys Leu Leu Ala

Ser Pro Trp Ser Pro Pro Ala Tyr Met Lys Ser Asn Asn Asn Leu Asn

Asn Gly Gly Lys Leu Glu Lys Thr His Tyr Trp Gly Tyr Thr Asn His

Leu Met Asp Phe Thr Asn Tyr Met Ala Ser Gln Gly Ala Ser Val Tyr

Ala Leu Ser Leu Gln Asn Glu Pro Asp Trp His Pro Glu Tyr Glu Ser

Cys Asp Trp Ser Ala Ser Asp Phe Val Asn Tyr Leu Asn Asp Gln Gly

Trp Arg Leu Asp Pro Ala Leu Lys Ile Leu Ala Pro Glu Ser Leu Gly

Phe Asn Lys Ala Leu Ser Asp Pro Ile Leu Asn Asn Ser Val Ala Asn

Asn Tyr Val Asp Ile Ile Gly Gly His Leu Tyr Gly Val Ser Pro Ser

Asn Tyr Pro Leu Ala Leu Gln Lys Gly Lys Lys Leu Trp Met Thr Glu

His Tyr Thr Asp Asn Glu Asp Gly Asn Asn Trp Asn Ala Ser Ile Asp

Val Gly Leu Glu Leu His Gln Ser Met Val Ser Asn Tyr Ser Ala Tyr

Ile Trp Trp Tyr Ile Arg Arg Ser Tyr Gly Leu Met Ser Glu Asp Gly

Asn Val Ser Lys Arg Gly Tyr Ile Met Ala Gln Phe Ser Lys Tyr Ile

Arg Pro Gly Tyr Thr Arg Ile Gly Ala Thr Glu Met Pro Glu Asn Asn

Val Tyr Val Thr Ala Tyr Lys Asn Asn Ala Gly Lys Leu Val Ile Val

Val Val Asn Lys Ser Gly Ser Pro Lys Ala Leu Asp Phe Thr Leu Gln

Asn Gly Thr Val Asn Thr Leu Thr Lys Tyr Ser Thr Ser Ala Ser Met

Asn Met Glu Tyr Arg Gly Lys Ser Thr Val Ser Asn Asn Arg Phe Ser

Ala Tyr Ala Asp Ala Trp Ala Val Gln Thr Phe Val Ser Asn

SEQ ID NO:8是来自类芽孢杆菌属(Paenibacillus)sp-19179的成熟GH30_8木聚糖酶的氨基酸序列：

Ala Ser Asp Ala Ile Val Asn Ile Ser Ala Glu Lys Gln Val Ile Arg

Gly Phe Gly Gly Ile Asn His Pro Val Trp Ile Gly Asp Leu Thr Ala

Ala Gln Arg Glu Thr Ala Phe Gly Asn Gly Asn Asn Gln Leu Gly Phe

Ser Ile Leu Arg Ile Tyr Val His Glu Asp Arg Asn Gln Trp Tyr Arg

Glu Val Glu Thr Ala Lys Arg Ala Ile Ala Leu Gly Ala Ile Val Phe

Ala Ser Pro Trp Asn Pro Pro Ala Asp Met Val Glu Thr Phe Asn Arg

Asn Gly Asp Pro Ser Ala Lys Arg Leu Arg Tyr Asp Lys Tyr Ala Ala

Tyr Ala Gln His Leu Asn Asp Phe Val Thr Tyr Met Arg Asn Asn Gly

Val Asn Leu Tyr Ala Ile Ser Val Gln Asn Glu Pro Asp Tyr Ala His

Asp Trp Thr Trp Trp Thr Pro Gln Glu Met Leu Arg Phe Met Lys Glu

Asn Ala Gly Ser Ile Asn Thr Arg Val Ile Ala Pro Glu Ser Phe Gln

Tyr Leu Lys Asn Met Ser Asp Pro Ile Leu Asn Asp Pro Gln Ala Leu

Ala Asn Met Asp Ile Leu Gly Ala His Leu Tyr Gly Thr Gln Val Ser

Asn Phe Ala Tyr Pro Leu Phe Lys Gln Lys Gly Ala Gly Lys Asp Leu

Trp Met Thr Glu Val Tyr Tyr Pro Asn Ser Asp Asn Asn Ser Ala Asp

Arg Trp Pro Glu Ala Leu Asp Val Ser Tyr His Ile His Asn Ala Met

Val Glu Gly Asp Phe Gln Ala Tyr Val Trp Trp Tyr Ile Arg Arg Ser

Tyr Gly Pro Met Lys Glu Asp Gly Thr Ile Ser Lys Arg Gly Tyr Ala

Met Ala His Phe Ser Lys Phe Val Arg Pro Gly Tyr Val Arg Val Glu

Ala Thr Lys Asn Pro Glu Thr Asn Val Tyr Val Ser Ala Tyr Lys Gly

Asn Lys Lys Leu Val Ile Val Ala Val Asn Lys Asn Asn Ser Gly Val

Asn Gln Asn Phe Val Leu Pro Asn Ala Ser Val Ser Lys Ile Ser Arg

Trp Ile Thr Ser Gly Ser Ser Asn Leu Gln Pro Gly Thr Glu Leu Thr

Met Thr Gly Gly Asn Phe Trp Ala His Leu Pro Ala Gln Ser Val Thr

Thr Phe Val Ala Asp Leu Gly

SEQ ID NO:9是来自胡萝卜软腐果胶杆菌胡萝卜亚种(Pectobacteriumcarotovorum subsp.Carotovorum)的成熟GH30_8木聚糖酶的氨基酸序列：

Asp Thr Val Lys Ile Asp Ala Lys Thr Ser Tyr Gln Ile Ile Gln Gly

Phe Gly Gly Met Asn Ala Pro Gly Trp Ile Asn Asp Leu Thr Thr Glu

Gln Val Asn Thr Ala Phe Gly Asn Asp Thr Gly Gln Ile Gly Leu Ser

Ile Met Arg Met Arg Ile Asp Pro Asp Ala Asn Arg Trp Asn Ile Gln

Val Ser Ser Ala Arg Gln Ala Ser Leu Leu Gly Ala Lys Leu Met Ala

Thr Pro Trp Thr Pro Pro Ala Tyr Met Lys Ser Asn Lys Ser Leu Ile

Asn Gly Gly Arg Leu Leu Ser Glu His Tyr Ser Gly Tyr Thr Glu His

Leu Leu Lys Phe Ser Asn Phe Met Gln Thr Asn Asn Ala Pro Leu Tyr

Ala Ile Ser Ile Gln Asn Glu Pro Asp Trp Lys Pro Asp Tyr Glu Ser

Cys Glu Trp Asn Gly Asn Asp Phe Lys Asn Tyr Leu Lys Ser Gln Gly

Ser Lys Phe Gly Ser Leu Lys Val Ile Val Gly Glu Ser Leu Asn Phe

Asn His Ser Leu Thr Asp Pro Thr Leu Asn Asp Ser Glu Ala Ala Lys

His Val Ala Ile Val Gly Gly His Leu Tyr Gly Thr Thr Pro Lys Pro

Tyr Pro Leu Ala Gln Asn Lys Gly Lys Glu Val Trp Met Thr Glu His

Leu Val Asp Ser Lys Gln Ser Ala Asn Asn Trp Ser Ser Ala Leu Glu

Val Ala Ser Glu Met Asn Ala Ser Met Val Ala Asn Tyr Asn Ala Tyr

Val Trp Trp Tyr Ile Arg Arg Ser Tyr Gly Leu Leu Thr Glu Asp Gly

Lys Val Ser Lys Arg Gly Tyr Val Met Ala Gln Tyr Ala Lys Phe Val

Arg Pro Gly Phe Gln Arg Ile Gln Ala Thr Glu Asn Pro Gln Ala Asn

Val His Leu Thr Ala Tyr Lys Asn Ser Glu Gly Lys Met Val Ile Val

Ala Ile Asn Thr Asn Asp Ser Asp Gln Leu Leu Ser Leu Asn Ile Ser

Asn His Thr Val Ser Lys Phe Glu Lys Tyr Ser Thr Ser Ala Ile Leu

Asn Val Glu Tyr Gly Gly Thr Tyr Lys Val Asp Ser Asn Gly Lys Ser

Ser Val Trp Leu Asn Pro Leu Ser Val Thr Thr Phe Val Gly Lys

SEQ ID NO:10是来自瘤胃球菌属种属(Ruminococcus sp.)CAG:330的成熟GH30_8木聚糖酶的氨基酸序列：

Ala Asp Val Cys Val Ile Asp Thr Asp Thr Glu His Gln Met Ile Arg

Gly Phe Gly Gly Ile Asn His Pro Glu Trp Ala Gly Asp Leu Thr Gln

Ala Gln Arg Gln Thr Ala Phe Gly Asn Gly Glu Asn Glu Leu Gly Leu

Thr Val Leu Arg Val Phe Val Asn Pro Asp Ser Ser Gln Trp Ser Arg

Ala Leu Pro Thr Ala Gln Phe Ala Thr Gln Met Gly Val Thr Val Phe

Ala Ser Pro Trp Glu Pro Pro Ala Asn Leu Thr Glu Ser Gly Gly Ser

Asn Gly Lys Leu His Leu Pro Lys Ser Asn Tyr Ala Ala Tyr Ala Lys

His Leu Asn Asp Phe Gly Thr Tyr Met Lys Asn Asn Asn Val Asp Leu

Tyr Ala Ile Ser Val Gln Asn Glu Pro Asp Tyr Ala Ser Glu Trp Thr

Tyr Trp Ser Thr Asp Glu Thr Thr Asp Phe Ile Ala Asn Tyr Gly Asp

Gln Ile Thr Ser Thr Arg Leu Met Ser Pro Glu Ser Phe Gln Tyr Ala

Pro Glu Asn Ala Ser Trp Val Ser Asp Gly Gly Lys Lys Phe Tyr Arg

Lys Ile Leu Asn Asn Ser Lys Ala Met Ala Asn Cys Asp Val Phe Gly

Thr His Phe Tyr Gly Thr Gln Arg Ser Trp Met Asp Phe Pro Asp Leu

Glu Asn Ser Gly Lys Glu Ile Trp Met Thr Glu Val Tyr Val Pro Asn

Ser Asp Lys Asp Ser Ala Asn Arg Tyr Pro Glu Ala Leu Gln Val Ser

Glu Asn Ile His Asn Ala Met Val Val Gly Asn Met Ser Ala Tyr Thr

Trp Trp Tyr Ile Arg Arg Asn Tyr Gly Leu Met Thr Glu Asp Gly Lys

Ile Ser Lys Arg Gly Tyr Cys Met Ala Gln Tyr Ser Lys Tyr Val Arg

Pro Gly Asp Val Arg Ile Asp Ala Thr Glu Gln Pro Ala Asp Asn Val

Tyr Val Ser Ala Tyr Lys Gly Asp Asp Asn Gln Val Thr Ile Val Ala

Ile Asn Lys Gly Thr Glu Ser Tyr Ser Gln Gln Phe Ala Val Asp Ala

Asp Ala Gln Ile Thr Glu Val Asp Arg Tyr Arg Thr Ser Ala Ser Glu

Asn Leu Ala Lys Thr Glu Asn Met Glu His Asp Ser Ser Ser Phe Trp

Ala Gln Leu Pro Ala Glu Ser Val Ser Thr Phe Val Val Thr Leu Glu

Asp Gln Pro Val Glu Pro Asp Glu Asn Gly Tyr Tyr Phe His Asp Thr

Phe Glu Ser Asp Asn Cys Asp Trp Gln Gly His Gly Ser Ala Asp Ile

Thr Leu Ser Gly Arg Ile Pro Tyr Gln Gly Thr Asn Ala Leu Leu Val

Gln Asn Arg Ala Ser Ala Trp Asn Gly Ala Glu Lys Val Leu Pro Ala

Lys Ala Phe Gln Ala Gly Lys Glu Tyr Ser Phe Ser Val Cys Leu Asn

Tyr Met Asp Gly Glu Ser Ser Lys Asn Ala Ala Leu Ser Leu Gln Tyr

Thr Asp Ala Ala Gly Glu Thr Lys Tyr Ala Arg Ile Ala Ser Ala Ser

Ala Ala Lys Gly Asn Tyr Val Gln Leu Ala Asn Pro Ser Phe Lys Leu

Pro Asp Gly Gly Lys Asn Phe Lys Ile Tyr Val Glu Thr Glu Gly Asp

Thr Asp Asn Phe Tyr Ile Asp Glu Ala Ile Gly Ala Val Lys Gly Thr

Ala Ile Glu Gly Pro

SEQ ID NO:11是来自链霉菌属(Streptomyces)sp-62627的成熟GH30_8木聚糖酶的氨基酸序列：

Ser Arg Thr Pro Ser Ala Ala Ala Thr Ser Val Thr Val Asp Pro Ser

Ala Thr Arg Gln Thr Ile Arg Gly Phe Gly Gly Met Asn His Pro Leu

Trp Ile Gly Asp Leu Thr Pro Ala Gln Arg Asp Thr Ala Phe Gly Asn

Gly Glu Gly Gln Leu Gly Phe Ser Val Leu Arg Ile Pro Val Ser Glu

Asp Arg Ala Asn Trp Ser Arg Glu Val Ala Thr Ala Lys Arg Ala Thr

Glu Leu Gly Ala Ile Val Phe Ala Ser Pro Trp Asn Pro Pro Ala Asn

Met Val Glu Thr Phe Val Arg Gly Gln Gln Thr Asp Ala Lys Arg Leu

Arg His Ser Met Tyr Gly Ala Tyr Ala Gln His Leu Asn Asp Phe Val

Ala Phe Met Lys Ser Asn Gly Val Asn Leu Tyr Ala Ile Ser Val Gln

Asn Glu Pro Asp Tyr Ala His Asp Trp Thr Trp Trp Thr Pro Ser Glu

Met Thr Arg Phe Leu Arg Glu Asn Ala Gly Ser Ile Ser Thr Lys Val

Ile Ala Pro Glu Ser Phe Gln Tyr Val Lys Thr Phe Ser Asp Pro Ile

Leu Asn Asp Ala Ala Ala Leu Ala Asn Leu Asp Ile Leu Gly Ala His

Leu Tyr Gly Thr Ser Phe Gln Asn Phe Pro Tyr Pro Leu Phe Lys Gln

Lys Gly Gly Gly Lys Glu Leu Trp Met Thr Glu Val Tyr His Pro Asn

Ser Ser Asp Ser Ala Asp Leu Trp Pro Gln Ala Leu Asp Val Ala Glu

His Ile His Arg Ala Met Val Asp Ala Glu Phe Gln Ala Tyr Val Trp

Trp Tyr Ile Arg Arg Gly Tyr Gly Pro Met Arg Glu Asp Gly Arg Ile

Ser Lys Arg Gly Ala Gly Met Ala His Phe Ser Lys Phe Val Arg Pro

Gly His Val Arg Val Ala Val Thr Pro Ala Pro Gln Pro Asn Val Tyr

Leu Ser Ala Tyr Lys Gly Gly Gly Ser Arg Val Val Val Val Ala Val

Asn Lys Gly Ala Ser Pro Val Ser Gln Gln Phe Thr Leu Asn Asn Asn

Asn Ser Ser Gly Val Ser Ser Trp Val Thr Asp Ala Ser Arg Asn Leu

Ala Ser Gln Gly Arg Ile Thr Val Ala Asn Gly Ala Phe Thr Ala Arg

Leu Pro Ala Gln Ser Val Thr Thr Leu Val Thr Gly

SEQ ID NO:12是来自糖丁酸梭菌(Clostridium saccharobutylicum)的成熟GH30_8木聚糖酶的氨基酸序列：

Ala Ser Asn Ala Thr Ile Asn Leu Ser Ala Gln Lys Gln Val Ile Arg

Gly Phe Gly Gly Ile Asn Leu Pro Ala Trp Ala Gly Asp Leu Thr Ala

Ala Gln Arg Glu Thr Ala Phe Gly Asn Gly Asp Asn Gln Leu Gly Leu

Ser Val Leu Arg Ile Tyr Val Asp Asp Asn Lys Asn Asn Trp Tyr Lys

Glu Leu Ala Thr Ala Lys Lys Ala Ile Glu His Gly Ala Ile Val Phe

Ala Thr Pro Trp Asn Pro Pro Ala Tyr Met Thr Glu Lys Phe Asn Arg

Asn Gly Asp Thr Asn Ala Lys Arg Leu Arg Tyr Asp Lys Tyr Ala Ala

Tyr Ala Gln His Leu Asn Asp Phe Val Ser Tyr Met Lys Asn Asn Gly

Val Asn Leu Tyr Ala Ile Ser Val Gln Asn Glu Pro Asp Tyr Gly Lys

Glu Trp Thr Trp Trp Thr Pro Gln Glu Ile Leu Arg Phe Ile Lys Glu

Asn Ala Gly Ser Ile Asn Cys Arg Val Met Ser Pro Glu Ser Phe Ser

Tyr Gln Lys Asn Met Tyr Asp Pro Ile Leu Asn Asn Pro Gln Ala Leu

Ala Asn Met Asp Ile Leu Gly Thr His Thr Tyr Gly Thr Arg Val Asn

Asp Phe Ala Tyr Pro Leu Phe Lys Gln Lys Gly Ala Gly Lys Glu Leu

Trp Met Thr Glu Val Tyr Val Pro Asn Ser Asp Thr Asn Ser Ala Asp

Arg Trp Pro Glu Ala Leu Asp Val Ala Asp His Ile Asn Asn Ala Met

Val Glu Gly Asp Phe Gln Ala Tyr Val Trp Trp Tyr Ile Arg Arg Ser

Tyr Gly Phe Ile Lys Glu Asp Gly Asn Val Ser Lys Arg Gly Tyr Met

Met Ala His Phe Ser Lys Phe Val Arg Pro Gly Tyr Val Arg Val Asp

Ala Thr Lys Asn Pro Thr Pro Asn Val Tyr Leu Ser Ala Tyr Lys Gly

Asn Asn Lys Val Val Ile Ile Ala Ile Asn Lys Gly Thr Ser Asp Val

Lys Gln Ser Phe Thr Met Pro Asn Ser Lys Val Ser Ser Val Ser Ser

Trp Gln Thr Thr Ala Thr Ala Asn Leu Ala Lys Ser Ala Ser Asn Thr

Asn Val Tyr Asn Gly Asn Phe Thr Ala Thr Leu Pro Ala Gln Ser Val

Thr Thr Phe Val Gly Asp Ile Lys

SEQ ID NO:13是来自Paenibacillus panacisoli的成熟GH30_8木聚糖酶的氨基酸序列：

Ala Ser Asp Ala Val Ile Asn Leu Ser Ala Gln Lys Gln Val Ile Arg

Gly Phe Gly Gly Ile Asn His Pro Ala Trp Ile Gly Asp Leu Thr Ala

Ala Gln Arg Glu Thr Ala Phe Gly Asn Gly Gln Asn Gln Leu Gly Phe

Ser Ile Leu Arg Val Tyr Ile Asp Pro Asp Arg Asn Asn Trp Ser Arg

Glu Val Ala Thr Ala Lys Lys Ala Ile Glu Lys Gly Ala Leu Val Phe

Ala Ser Pro Trp Asn Pro Pro Ser Ser Met Val Glu Thr Phe Asn Arg

Asn Gly Asp Arg Asn Ala Lys Arg Leu Arg Tyr Asp Lys Tyr Ala Ala

Tyr Ala Gln His Leu Asn Asp Phe Val Thr Tyr Met Lys Asn Asn Gly

Val Asn Leu Tyr Ala Ile Ser Val Gln Asn Glu Pro Asp Tyr Ala His

Glu Trp Thr Trp Trp Thr Pro Gln Glu Ile Leu Arg Phe Met Lys Glu

Asn Ala Gly Ser Ile Asn Cys Lys Val Met Ala Pro Glu Ser Phe Gln

Tyr Leu Lys Asn Ile Ser Asp Pro Ile Leu Asn Asp Pro Gln Ala Leu

Ala Asn Met Asp Ile Leu Gly Ala His Leu Tyr Gly Thr Gln Val Ser

Asn Phe Ala Tyr Pro Leu Phe Lys Gln Lys Gly Ala Gly Lys Glu Leu

Trp Met Thr Glu Val Tyr Tyr Pro Asn Ser Asp Asn Asn Ser Ala Asp

Arg Trp Pro Glu Ala Leu Glu Val Ser His His Met His Asn Ala Met

Val Glu Gly Asp Phe Gln Ala Tyr Val Trp Trp Tyr Ile Arg Arg Ser

Tyr Gly Pro Met Lys Glu Asp Gly Thr Ile Ser Lys Arg Gly Tyr Asn

Met Ala His Phe Ser Lys Phe Ile Arg Pro Gly Tyr Val Arg Val Asp

Ala Thr Lys Asn Pro Asp Thr Asn Val His Val Ser Ala Tyr Lys Gly

Asn Asn Lys Val Val Ile Val Ala Ile Asn Arg Gly Thr Thr Ala Val

Asn Gln Asn Phe Val Leu Gln Asn Gly Arg Ala Ala Thr Leu Ser Arg

Trp Ile Thr Asp Ala Asn Arg Asn Leu Ala Pro Glu Ser Asn Leu Asn

Ala Ser Ser Gly Ser Phe Phe Ala His Leu Pro Ala Lys Ser Val Thr

Thr Phe Val Gly Asp Leu Thr Gly Ser Thr Leu Asn Ile Glu Asp Ala

Ala Leu Thr Asn Ser Val Thr Gln Asp Thr Tyr Ser Lys

SEQ ID NO:14是来自人粪便宏基因组的成熟GH30_8木聚糖酶的氨基酸序列：

Ala Gln Ala Ala Ser Asp Ala Val Ile Asn Leu Asn Asn Thr His Gln

Glu Ile Met Gly Phe Gly Gly Met Asn His Pro Thr Trp Ala Gly Asp

Leu Thr Ser Ser Gln Arg Glu Thr Ala Phe Gly Asn Gly Thr Asn Gln

Leu Gly Phe Gln Val Leu Arg Ile Trp Val Asp Ser Asp Arg Asn Asn

Trp Tyr Lys Glu Leu Ala Thr Ala Lys Ala Ala Leu Ala Lys Gly Ala

Ile Val Phe Ala Thr Pro Trp Asn Pro Pro Ser Asn Leu Cys Glu Thr

Phe Tyr Lys Asn Gly Ser Ala Asn Ala Lys Arg Leu Lys His Asp Lys

Tyr Ala Ala Tyr Ala Gln His Leu Asn Asp Phe Val Thr Tyr Met Arg

Asn Asn Gly Val Glu Leu Tyr Gly Ile Ser Val Cys Asn Glu Pro Asp

Tyr Gly His Asp Trp Thr Trp Trp Thr Glu Ser Glu Val Val Thr Phe

Leu Lys Tyr Tyr Ala Gly Ser Ile Asn Cys Arg Ile Ile Ala Pro Glu

Ser Phe Ser Tyr Gln Lys Ser Tyr Tyr Asp Ala Ile Ile Asn Asp Ser

Gln Ala Leu Ala Gln Val Asp Ile Ile Gly Thr His Leu Tyr Gly Thr

Ser Tyr Asn Asn Phe Ser Tyr Pro Leu Tyr His Gln Lys Ala Ser Ser

Lys Gln Leu Trp Met Thr Glu Val Tyr Thr Pro Asn Ser Thr Ser Ser

Ala Asp Lys Trp Pro Glu Ala Ile Asn Val Ala Glu His Ile His Lys

Ala Met Val Asn Asp Phe Gln Thr Tyr Val Trp Trp Tyr Ile Arg Arg

Ser Tyr Gly Pro Met Lys Glu Asp Gly Thr Leu Ser Lys Arg Gly Tyr

Cys Met Ala Gln Phe Ser Lys Phe Ile Arg Arg Gly Tyr Lys Arg Val

Asp Ala Thr Glu Asn Pro Asn Asn Gly Val Tyr Val Ser Ala Tyr Thr

Gly Asp Gly Lys Ala Val Ile Val Ala Val Asn Ser Gly Ser Ser Asp

Cys Ser Gln Ser Phe Thr Ile Lys Gly Lys Thr Leu Lys Asn Val Asp

Arg Tyr Arg Thr Ser Gly Ser Glu Asn Leu Ala Lys Thr Ser Asn Leu

Glu Leu Ser Gly Asn Gly Phe Trp Ala Tyr Leu Pro Ala Asn Ser Val

Ser Thr Phe Val Cys Thr Val Glu Asn Ser Ser Ser Asn Pro

SEQ ID NO:15是来自根际弧菌(Vibrio rhizosphaerae)的成熟GH30_8木聚糖酶的氨基酸序列：

Gly Ser Val Tyr Ile Asn Phe Asn Thr Glu Tyr Gln Glu Ile Asp Gly

Phe Gly Ala Met Asn Ala Pro Gly Trp Val Asn Asp Leu Thr Ser Ala

Gln Ala Thr Lys Ala Phe Gly Asn Gly Asp Gly Gln Met Gly Leu Ser

Ile Met Arg Met Arg Ile Asp Pro Asp Ser Asn Gln Trp Tyr Arg Gln

Val Pro Thr Ala Gln Ile Ala Tyr Ser Tyr Gly Ala Lys Leu Leu Ala

Thr Pro Trp Ser Pro Pro Ala Tyr Met Lys Thr Asn Asn Asn Val Asn

Asn Gly Gly Lys Leu Lys Lys Glu His Tyr Trp Gly Tyr Thr Asp His

Leu Met Asp Phe Thr Asn Tyr Met Ala Gly Lys Asn Ala Pro Ile Tyr

Ala Leu Ser Ile Gln Asn Glu Pro Asp Trp His Pro Asn Tyr Glu Ser

Cys Asp Trp Ser Gly Ala Asp Phe Val Asn Tyr Leu Asn Asp Gln Gly

Trp Arg Leu Asp Ser Ser Leu Lys Ile Leu Ala Pro Glu Ser Leu Gly

Phe Asn Pro Ala Leu Ser Asp Pro Ile Leu Lys Asp Ser Val Ala Ser

Ser His Ile Asp Ile Ile Gly Gly His Leu Tyr Gly Val Gln Pro Arg

Asn Tyr Pro Leu Ala Leu Gln Lys Gly Lys Lys Leu Trp Met Thr Glu

His Tyr Thr Asp Thr Asp Asn Ala Asn Ile Trp Asp Lys Ala Met Asn

Val Gly Leu Glu Leu His Gln Ser Met Val Ser Asn Tyr Ser Ala Tyr

Ile Trp Trp Tyr Leu Arg Arg Ser Tyr Gly Met Leu Thr Glu Asp Gly

Asn Ile Ser Lys Arg Gly Tyr Ile Met Ser Gln Phe Ser Lys Phe Ile

Arg Pro Gly Asp Val Arg Ile Ala Ala Thr Glu Val Pro Glu Ser Asn

Val Tyr Val Thr Ala Tyr Lys Asn Arg Ser Gly Lys Leu Val Ile Ala

Val Val Asn Lys Thr Asn Ser His Lys Lys Leu Asp Phe Thr Leu Gln

Asn Gly Thr Val Gly Ser Met Thr Lys Tyr Val Thr Ser Ala Ser Gln

Asn Val Gly Tyr Ala Gly Lys Tyr Ala Val Ser Asn Asn Arg Phe Thr

Ala Tyr Ala Asp Pro Leu Ser Val Gln Thr Phe Val Ser Glu

SEQ ID NO 16是指木聚糖酶Xyl5(如在US 2019 0106689中由SEQ ID NO:1所定义)及其变体。Xyl5是来自枯草芽孢杆菌的成熟GH30木聚糖酶的氨基酸序列

Ala Ala Ser Asp Val Thr Val Asn Val Ser Ala Glu Lys Gln Val Ile

Arg Gly Phe Gly Gly Met Asn His Pro Ala Trp Ala Gly Asp Leu Thr

Ala Ala Gln Arg Glu Thr Ala Phe Gly Asn Gly Gln Asn Gln Leu Gly

Phe Ser Ile Leu Arg Ile His Val Asp Glu Asn Arg Asn Asn Trp Tyr

Lys Glu Val Glu Thr Ala Lys Ser Ala Val Lys His Gly Ala Ile Val

Phe Ala Ser Pro Trp Asn Pro Pro Ser Asp Met Val Glu Thr Phe Asn

Arg Asn Gly Asp Thr Ser Ala Lys Arg Leu Lys Tyr Asn Lys Tyr Ala

Ala Tyr Ala Gln His Leu Asn Asp Phe Val Thr Phe Met Lys Asn Asn

Gly Val Asn Leu Tyr Ala Ile Ser Val Gln Asn Glu Pro Asp Tyr Ala

His Glu Trp Thr Trp Trp Thr Pro Gln Glu Ile Leu Arg Phe Met Arg

Glu Asn Ala Gly Ser Ile Asn Ala Arg Val Ile Ala Pro Glu Ser Phe

Gln Tyr Leu Lys Asn Leu Ser Asp Pro Ile Leu Asn Asp Pro Gln Ala

Leu Ala Asn Met Asp Ile Leu Gly Thr His Leu Tyr Gly Thr Gln Val

Ser Gln Phe Pro Tyr Pro Leu Phe Lys Gln Lys Gly Ala Gly Lys Asp

Leu Trp Met Thr Glu Val Tyr Tyr Pro Asn Ser Asp Thr Asn Ser Ala

Asp Arg Trp Pro Glu Ala Leu Asp Val Ser Gln His Ile His Asn Ala

Met Val Glu Gly Asp Phe Gln Ala Tyr Val Trp Trp Tyr Ile Arg Arg

Ser Tyr Gly Pro Met Lys Glu Asp Gly Thr Ile Ser Lys Arg Gly Tyr

Asn Met Ala His Phe Ser Lys Phe Val Arg Pro Gly Tyr Val Arg Ile

Asp Ala Thr Lys Asn Pro Asn Ala Asn Val Tyr Val Ser Ala Tyr Lys

Gly Asp Asn Lys Val Val Ile Val Ala Ile Asn Lys Ser Asn Thr Gly

Val Asn Gln Asn Phe Val Leu Gln Asn Gly Ser Ala Ser Asn Val Ser

Arg Trp Ile Thr Ser Ser Ser Ser Asn Leu Gln Pro Gly Thr Asn Leu

Thr Val Ser Gly Asn His Phe Trp Ala His Leu Pro Ala Gln Ser Val

Thr Thr Phe Val Val Asn Arg

涵盖24位、26位、36位、37位、60位、71位、74位、75位、76位、124位、133位、155位、167位、208位、317位和321位的变体。

根据本发明的优选的α-半乳糖苷酶是指SEQ ID NO 17(如在WO-2015011276中由SEQ ID NO:2所定义)及其变体

Asn Arg Asn Thr Phe Phe Val Leu Phe Leu Leu Ile Ser Asn Leu

Val Ser Gly Gln Asp Leu Lys Leu Trp Tyr Ser Gln Pro Ala Gln Asn

Trp Ser Glu Ala Leu Pro Ile Gly Asn Ser Arg Leu Gly Ala Met Val

Tyr Gly Gly Ile Glu Arg Glu Glu Leu Gln Leu Asn Glu Glu Thr Phe

Trp Ala Gly Ser Pro Tyr Asn Asn Asn Asn Pro Asn Ala Val His Val

Leu Pro Val Val Arg Lys Leu Ile Phe Glu Gly Arg Asn Lys Glu Ala

Gln Arg Leu Ile Asp Ala Asn Phe Leu Thr Gln Gln His Gly Met Ser

Tyr Leu Thr Leu Gly Ser Leu Tyr Leu Glu Phe Pro Glu His Gln Asn

Gly Ser Gly Phe Tyr Arg Asp Leu Asn Leu Glu Asn Ala Thr Thr Thr

Thr Arg Tyr Gln Val Asp Asp Val Thr Tyr Thr Arg Thr Thr Phe Ala

Ser Phe Thr Asp Asn Val Ile Ile Met His Ile Lys Ala Ser Lys Ala

Asn Ala Leu Asn Phe Thr Ile Ala Tyr Asn Cys Pro Leu Val His Lys

Val Asn Val Gln Asn Asp Gln Leu Thr Val Thr Cys Gln Gly Lys Glu

Gln Glu Gly Leu Lys Ala Ala Leu Arg Ala Glu Cys Gln Ile Gln Val

Lys Thr Asn Gly Thr Leu Arg Pro Ala Gly Asn Thr Leu Gln Ile Asn

Glu Gly Thr Glu Ala Thr Leu Tyr Ile Ser Ala Ala Thr Asn Tyr Val

Asn Tyr Gln Asp Val Ser Ala Asp Glu Ser His Arg Thr Ser Glu Tyr

Leu Lys Arg Ala Met Gln Ile Pro Tyr Glu Lys Ala Leu Lys Asn His

Ile Ala Tyr Tyr Lys Lys Gln Phe Asp Arg Val Arg Leu Thr Leu Pro

Ala Gly Lys Ala Ser Gln Leu Glu Thr Pro Lys Arg Ile Glu Asn Phe

Gly Asn Gly Glu Asp Met Ala Met Ala Ala Leu Leu Phe His Tyr Gly

Arg Tyr Leu Leu Ile Ser Ser Ser Gln Pro Gly Gly Gln Pro Ala Asn

Leu Gln Gly Ile Trp Asn Asn Ser Thr His Ala Pro Trp Asp Ser Lys

Tyr Thr Ile Asn Ile Asn Thr Glu Met Asn Tyr Trp Pro Ala Glu Val

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至少一种糖酶与动物饲料的组合的用途

本发明还涉及至少一种糖酶与A/X比率大于0.70，优选地大于0.705、优选地大于0.71、优选地大于0.715、优选地大于0.72、优选地大于0.725、优选地大于0.73、优选地大于0.735、优选地大于0.74、优选地大于0.745、优选地大于0.75、优选地大于0.76、优选地大于0.77、优选地大于0.78、优选地大于0.79、优选地大于0.80的动物饲料的组合的用途。

本发明还涉及至少一种糖酶与A/X比率低于1.5，优选地低于1.4、优选地低于1.3、优选地低于1.2、优选地低于1.15、优选地低于1.1、优选地低于1.05、优选地低于1、优选地低于0.95、优选地低于0.9、优选地低于0.85、优选地低于0.84、优选地低于0.83、优选地低于0.83、优选地低于0.82、优选地低于0.81的动物饲料的组合的用途。

本发明还涉及至少一种糖酶与A/X总饲料比率大于0.91，优选地大于0.95、优选地大于1.00、优选地大于1.05、优选地大于1.10、优选地大于1.15、优选地大于1.20、优选地大于1.25、优选地大于1.30的动物饲料的组合的用途。

本发明进一步涉及至少一种糖酶与A/X比率大于0.70，优选地大于0.705、优选地大于0.71、优选地大于0.715、优选地大于0.72、优选地大于0.725、优选地大于0.73、优选地大于0.735、优选地大于0.74、优选地大于0.745、优选地大于0.75、优选地大于0.76、优选地大于0.77、优选地大于0.78、优选地大于0.79、优选地大于0.80的动物饲料的组合用于增加所述动物饲料的消化率的用途。

本发明进一步涉及至少一种糖酶与A/X比率低于1.5，优选地低于1.4、优选地低于1.3、优选地低于1.2、优选地低于1.15、优选地低于1.1、优选地低于1.05、优选地低于1、优选地低于0.95、优选地低于0.9、优选地低于0.85、优选地低于0.84、优选地低于0.83、优选地低于0.83、优选地低于0.82、优选地低于0.81的动物饲料的组合用于增加所述动物饲料的消化率的用途。

本发明进一步涉及至少一种糖酶与A/X总饲料比率大于0.91，优选地大于0.95、优选地大于1.00、优选地大于1.05、优选地大于1.10、优选地大于1.15、优选地大于1.20、优选地大于1.25、优选地大于1.30的动物饲料的组合的用途。

在本发明中，消化率可以被提高至少1％，例如至少1.5％、至少2.0％、至少2.5％、至少3％、至少3.5％、至少4％或至少至少5％。

本发明进一步涉及至少一种糖酶与A/X比率大于0.70，优选地大于0.705、优选地大于0.71、优选地大于0.715、优选地大于0.72、优选地大于0.725、优选地大于0.73、优选地大于0.735、优选地大于0.74、优选地大于0.745、优选地大于0.75、优选地大于0.76、优选地大于0.77、优选地大于0.78、优选地大于0.79、优选地大于0.80的动物饲料的组合用于提高所述动物饲料的营养价值的用途。

本发明进一步涉及至少一种糖酶与A/X比率低于1.5，优选地低于1.4、优选地低于1.3、优选地低于1.2、优选地低于1.15、优选地低于1.1、优选地低于1.05、优选地低于1、优选地低于0.95、优选地低于0.9、优选地低于0.85、优选地低于0.84、优选地低于0.83、优选地低于0.83、优选地低于0.82、优选地低于0.81的动物饲料的组合用于提高所述动物饲料的营养价值的用途。

本发明进一步涉及至少一种糖酶与A/X总饲料比率大于0.91，优选地大于0.95、优选地大于1.00、优选地大于1.05、优选地大于1.10、优选地大于1.15、优选地大于1.20、优选地大于1.25、优选地大于1.30的动物饲料的组合的用途。

在本发明中，所述饲料的营养价值可以被提高至少1％，例如至少1.5％、至少2.0％、至少2.5％、至少3％、至少3.5％、至少4％或至少至少5％。

本发明进一步涉及至少一种糖酶与A/X比率大于0.70，优选地大于0.705、优选地大于0.71、优选地大于0.715、优选地大于0.72、优选地大于0.725、优选地大于0.73、优选地大于0.735、优选地大于0.74、优选地大于0.745、优选地大于0.75、优选地大于0.76、优选地大于0.77、优选地大于0.78、优选地大于0.79、优选地大于0.80的动物饲料的组合用于提高动物中的一种或多种性能参数的用途。

本发明进一步涉及至少一种糖酶与A/X比率低于1.5，优选地低于1.4、优选地低于1.3、优选地低于1.2、优选地低于1.15、优选地低于1.1、优选地低于1.05、优选地低于1、优选地低于0.95、优选地低于0.9、优选地低于0.85、优选地低于0.84、优选地低于0.83、优选地低于0.83、优选地低于0.82、优选地低于0.81的动物饲料的组合用于提高动物中的一种或多种性能参数的用途。

本发明进一步涉及至少一种糖酶与A/X总饲料比率大于0.91，优选地大于0.95、优选地大于1.00、优选地大于1.05、优选地大于1.10、优选地大于1.15、优选地大于1.20、优选地大于1.25、优选地大于1.30的动物饲料的组合的用途。

在本发明中，一种或多种性能参数可以被提高至少1％，例如至少1.5％、至少2.0％、至少2.5％、至少3％、至少3.5％、至少4％或至少至少5％。

在一个实施方式中，动物性能的提高是体重增重的增加。在另一个实施方式中，提高是提高的饲料转化率。在进一步的实施方式中，提高是增加的饲料效率。在另一个实施方式中，所述提高是体重增重的增加和/或提高的饲料转化率和/或增大的饲料效率。

在本发明中，将这些提高与相同的但不包含糖酶或不包含根据饲料的A/X纤维分数调整糖酶的量的饲料进行比较。

术语提高动物饲料的营养价值是指提高饲料中营养物的消化率和可用性。营养价值特别是指提高饲料的含阿拉伯木聚糖的级分(例如，半纤维素)的溶解和降解，从而导致营养物从胚乳中具有由高度顽固的半纤维素构成的细胞壁的细胞的释放增加。因此，增加的阿拉伯木聚糖低聚物释放表明细胞壁被破坏，并且因此饲料的营养价值得到提高，从而导致提高的动物性能，例如升高的生长速率和/或增重和/或饲料转化率(即，相对于增重，所摄入的饲料的重量)。此外，阿拉伯木聚糖低聚物释放可以导致直接或通过后肠中的细菌发酵提高这些组分本身的利用率，从而导致产生短链脂肪酸，所述脂肪酸可以很容易地在后肠中被吸收并用于能量代谢。

动物饲料

在一个方面中，本发明涉及一种具有限定的A/X纤维分数并且包含至少一种如上定义的糖酶的动物饲料。

优选地，饲料中的A/X纤维分数在0.61至0.97的范围内。

更优选地，饲料中的A/X纤维分数大于0.70，优选地大于0.705、优选地大于0.71、优选地大于0.715、优选地大于0.72、优选地大于0.725、优选地大于0.73、优选地大于0.735、优选地大于0.74、优选地大于0.745、优选地大于0.75、优选地大于0.76、优选地大于0.77、优选地大于0.78、优选地大于0.79、优选地大于0.80。

更优选地，饲料中的A/X纤维分数低于1.5，优选地低于1.4、优选地低于1.3、优选地低于1.2、优选地低于1.15、优选地低于1.1、优选地低于1.05、优选地低于1、优选地低于0.95、优选地低于0.9、优选地低于0.85、优选地低于0.84、优选地低于0.83、优选地低于0.83、优选地低于0.82、优选地低于0.81。

优选地，饲料中的A/X总饲料纤维分数在0.91至1.42的范围内。

更优选地，A/X总饲料比率大于0.91，优选地大于0.95、优选地大于1.00、优选地大于1.05、优选地大于1.10、优选地大于1.15、优选地大于1.20、优选地大于1.25、优选地大于1.30。

具有糖酶活性的多肽可以介于0.1ppm酶蛋白/kg动物饲料至150ppm酶蛋白/kg动物饲料之间，例如0.5ppm酶蛋白/kg动物饲料至100ppm酶蛋白/kg动物饲料、1ppm酶蛋白/kg动物饲料至75ppm酶蛋白/kg动物饲料、2ppm酶蛋白/kg动物饲料至50ppm酶蛋白/kg动物饲料、3ppm酶蛋白/kg动物饲料至25ppm酶蛋白/kg动物饲料、2ppm酶蛋白/kg动物饲料至80ppm酶蛋白/kg动物饲料、5ppm酶蛋白/kg动物饲料至60ppm酶蛋白/kg动物饲料、8ppm酶蛋白/kg动物饲料至40ppm酶蛋白/kg动物饲料、10ppm酶蛋白/kg动物饲料至30ppm酶蛋白/kg动物饲料、13ppm酶蛋白/kg动物饲料至75ppm酶蛋白/kg动物饲料、15ppm酶蛋白/kg动物饲料至50ppm酶蛋白/kg动物饲料、17.5ppm酶蛋白/kg动物饲料至40ppm酶蛋白/kg动物饲料、25ppm酶蛋白/kg动物饲料至75ppm酶蛋白/kg动物饲料或30ppm酶蛋白/kg动物饲料至60ppm酶蛋白/kg动物饲料，或这些区间的任何组合投配。

饲料中的最终总糖酶浓度在50-500mg/kg动物饲料的范围内，例如60mg/kg动物饲料至450mg/kg动物饲料、70mg/kg动物饲料至400mg/kg动物饲料、80mg/kg动物饲料至350mg/kg动物饲料、90mg/kg动物饲料至300mg/kg动物饲料、100mg/kg动物饲料至300mg/kg动物饲料、110mg/kg动物饲料至250mg/kg动物饲料、120mg/kg动物饲料至200mg/kg动物饲料，或这些区间的任何组合。

饲料中的最终总糖酶浓度在0.00001％至0.1％，优选地0.0001％至0.1％、优选地0.001％至0.1％、优选地0.01％至0.1％、优选地0.01％至0.05％的范围内。

动物饲料组合物或日粮具有相对较高的蛋白质含量。可以如WO 01/58275的表B的第2列至第3列中所示表征家禽和猪的日粮。可如在该表B的第4列中所示表征鱼日粮。此外，此类鱼日粮的粗脂肪含量通常为200-310g/kg。

根据本发明的优选的动物饲料组合物具有50-800g/kg的粗蛋白含量。蛋白质源可为植物蛋白源和/或动物蛋白。

植物蛋白可以源自植物蛋白源，诸如豆类和谷类，例如来自豆科(Fabaceae)(豆科植物类(Leguminosae))、十字花科(Cruciferaceae)、藜科(Chenopodiaceae)和禾本科(Poaceae)的材料，诸如大豆粉、羽扇豆粉、菜籽粉，以及它们的组合。植物蛋白的蛋白质含量为至少10％(w/w)、20％(w/w)、30％(w/w)、40％(w/w)、50％(w/w)、60％(w/w)、70％(w/w)、80％(w/w)或90％(w/w)。

优选地，植物蛋白源可以是来自豆科的一种或多种植物(例如大豆、羽扇豆、豌豆或菜豆)的材料。植物蛋白源也可以是来自藜科的一种或多种植物(例如甜菜、糖用甜菜、菠菜或藜麦)的材料。植物蛋白源的其他示例是油菜籽和卷心菜。在本发明中，大豆是优选的植物蛋白源。植物蛋白源的其他示例是谷类，诸如大麦、小麦、黑麦、燕麦、玉蜀黍(玉米)、稻米和高粱。

除了如上所定义的植物蛋白以外，本发明的动物饲料组合物还可包含动物蛋白，诸如肉粉和骨粉、羽毛粉和/或鱼粉，通常含量为0-25％。本发明的动物饲料还可包含通常量为0-30％的具有可溶物的干蒸馏酒粕(DDGS)。

优选地，所述蛋白质源选自由以下项组成的组：大豆、野生大豆、豆类、羽扇豆、花菜豆、红花菜豆、瘦身豆、利马豆、法国菜豆、蚕豆、鹰嘴豆、小扁豆、花生、珍珠豆型花生、卡诺拉、葵花籽、棉籽、菜籽(油菜籽)或豌豆，或者是从例如以下物质加工而成的：豆粕、全脂豆粕、大豆蛋白浓缩物(SPC)、发酵豆粕(FSBM)、葵籽饼粉、棉籽粕、菜籽粕、鱼粉、骨粉、羽毛粉、乳清，或它们的任何组合。

此外，或者作为替代方案(相对于上述粗蛋白含量)，本发明的动物饲料组合物可具有10-30MJ/kg的可代谢能量含量。在本发明中，所述能量源可选自由以下项组成的组：玉蜀黍、玉米、高粱、大麦、小麦、燕麦、稻米、黑小麦、黑麦、甜菜、糖用甜菜、菠菜、马铃薯、木薯、藜麦、卷心菜、柳枝稷、稷、珍珠稗、粟，或者是从例如以下物质加工而成的：磨碎的玉米、磨碎的玉蜀黍、马铃薯淀粉、木薯淀粉、磨碎的高粱、磨碎的柳枝稷、磨碎的稷、磨碎的粟、磨碎的珍珠稗，或它们的任何组合。

此外，或者作为替代方案(相对于上述粗蛋白含量)，本发明的动物饲料组合物可具有0.1-200g/kg的钙含量；和/或0.1-200g/kg的有效磷含量；和/或0.1-100g/kg的甲硫氨酸含量；和/或0.1-150g/kg的甲硫氨酸加半胱氨酸含量；和/或0.5-50g/kg的赖氨酸含量。

具体地，可代谢能量、粗蛋白、钙、磷、甲硫氨酸、甲硫氨酸加半胱氨酸和/或赖氨酸的含量可在WO 2001/58275的表B中的范围2、3、4或5(范围2-5)中的任一者内。

粗蛋白被计算为氮(N)乘以系数6.25，即粗蛋白(g/kg)＝N(g/kg)×6.25。通过Kjeldahl法(A.O.A.C.,1984,Official Methods of Analysis，第14版，Association ofOfficial Analytical Chemists,Washington DC)测定氮含量。

可以根据NRC出版物Nutrient requirements in swine，1988年第9次修订版，subcommittee on swine nutrition,committee on animal nutrition,board ofagriculture,national research council.National Academy Press,Washington,D.C.，第2-6页和European Table of Energy Values for Poultry Feed-stuffs,Spelderholtcentre for poultry research and extension,7361DA Beekbergen,TheNetherlands.Grafisch bedrijf Ponsen&looijen bv,Wageningen.ISBN 90-71463-12-5来计算可代谢能量。

全饲动物日粮中钙、有效磷和氨基酸的日粮含量是根据饲料表计算的，诸如Veevoedertabel 1997,gegevens over chemische samenstelling,verteerbaarheid envoederwaarde van voedermiddelen,Central Veevoederbureau,Runderweg 6,8219pkLelystad.ISBN 90-72839-13-7。

优选地，本发明的动物饲料含有0-80％的玉蜀黍；和/或0-80％的高粱；和/或0-70％的小麦；和/或0-70％大麦；和/或0-30％的燕麦；和/或0-40％的豆粕；和/或0-25％的鱼粉；和/或0-25％的肉粉和骨粉；和/或0-20％的乳清。

动物饲料可以例如制成粉状饲料(非粒状)或粒状饲料。通常，将研磨的饲料原料混合，并根据所讨论的物种的说明书添加足够量的必要维生素和矿物质。酶可以作为固体或液体酶制剂添加。例如，对于粉状饲料，可以在成分混合步骤之前或期间添加固体或液体酶制剂。对于粒状饲料，也可以在饲料成分步骤之前或期间添加(液体或固体)糖酶/酶制备物。通常，液体酶制剂包含本发明的糖酶，任选地以及多元醇(例如甘油、乙二醇或丙二醇)，并且在造粒步骤之后添加，例如通过将液体制剂喷涂到丸粒上。糖酶也可被掺入饲料添加剂或预混物中，然后可将所述饲料添加剂或预混物添加到最终饲料中。

或者，可以通过冷冻液体酶溶液与填充剂(例如经研磨的豆粕)的混合物冷冻，然后将该混合物冻干，来制备糖酶。

在本发明中，所述动物饲料可进一步包含一种或多种附加的酶；一种或多种益生元；一种或多种维生素；一种或多种矿物质和一种或多种氨基酸，如下所述。

本发明的动物饲料可以通过任何已知的方法生产。例如，本发明的动物饲料是通过包括以下步骤的方法制备的：

(a)将动物饲料添加剂与一种或多种蛋白质源和一种或多种能量源混合；

(b)任选地对(a)的动物饲料进行蒸汽处理，之后压制经蒸汽处理的混合物以形成丸粒；以及

(c)任选地将液体制剂喷洒到(a)或(b)的动物饲料上。

在一个实施方式中，在步骤(a)中添加至少一种糖酶。在一个实施方式中，在步骤(c)中添加所述糖酶。

在本发明方法中，动物饲料可以通过以下方式制粒：对(a)的混合物进行蒸汽处理以获得水分含量低于20重量％的混合物，然后压制所述经蒸汽处理的混合物以形成丸粒。优选地，动物饲料是通过以下方式制粒的：对(a)的混合物进行蒸汽处理以获得水分含量低于20重量％的混合物，其中当在调理器的出口处测量时蒸汽处理介于60℃与100℃之间；以及压制所述经蒸汽处理的混合物以形成丸粒。在本发明方法中，步骤b)中的总停留时间可以介于1秒与10分钟之间。在本发明方法中，在将经蒸汽处理的混合物制粒后，丸粒的温度可以介于70℃与105℃之间。

附加的酶

在本发明中，本文所述的组合物和/或动物饲料可任选地包含一种或多种酶。可以基于来自NC-IUBMB，1992的酶命名法手册(handbook Enzyme Nomenclature)对酶进行分类，另请参见Internet上http://www.expasy.ch/enzyme/处的ENZYME网站。ENZYME是与酶命名法有关的信息库。其主要基于国际生物化学与分子生物学联合会命名委员会(Nomenclature Committee of the International Union of Biochemistry andMolecular Biology,IUB-MB)，Academic Press,Inc.,1992的建议，并且其描述已经提供了EC(酶委员会)编号的每种类型的表征酶(Bairoch A.，ENZYME数据库，2000，Nucleic AcidsRes 28:304-305)。这种IUB-MB酶命名法是基于其底物特异性，有时是基于其分子机理；此类分类未反映这些酶的结构特征。

在Henrissat等人，“The carbohydrate-active enzymes database(CAZy)，2013”,Nucl.Acids Res.(2014年1月1日)42(D1):D490-D495中描述了某些糖苷水解酶(例如内切葡聚糖酶、半乳聚糖酶、甘露聚糖酶、葡聚糖酶和半乳糖苷酶)的另一种分类；还参见www.cazy.org。

因此，本发明的组合物、动物饲料或动物饲料添加剂还可包含至少一种其他酶，所述至少一种其他酶选自包括以下的组：乙酰木聚糖酯酶(EC 3.1.1.23)、酰基甘油脂酶(EC3.1.1.72)、α-淀粉酶(EC 3.2.1.1)、β-淀粉酶(EC 3.2.1.2)、阿拉伯糖呋喃糖苷酶(EC3.2.1.55)、纤维二糖水解酶(EC 3.2.1.91)、纤维素酶(EC 3.2.1.4)、阿魏酰酯酶(EC3.1.1.73)、半乳聚糖酶(EC 3.2.1.89)、α-半乳糖苷酶(EC 3.2.1.22)、β-半乳糖苷酶(EC3.2.1.23)、β-葡聚糖酶(EC 3.2.1.6)、β-葡糖苷酶(EC 3.2.1.21)、三酰基甘油脂肪酶(EC3.1.1.3)、溶血磷脂酶(EC 3.1.1.5)、溶菌酶(EC 3.2.1.17)、α-甘露糖苷酶(EC3.2.1.24)、β-甘露糖苷酶(甘露聚糖酶)(EC 3.2.1.25)、植酸酶(EC 3.1.3.8、EC3.1.3.26、EC 3.1.3.72)、磷脂酶A1(EC 3.1.1.32)、磷脂酶A2(EC 3.1.1.4)、磷脂酶D(EC3.1.4.4)、蛋白酶(EC 3.4)、支链淀粉酶(EC 3.2.1.41)、果胶酯酶(EC 3.1.1.11)、木聚糖酶(EC 3.2.1.8、EC 3.2.1.136)、β-木糖苷酶(EC 3.2.1.37)，或它们的任何组合。

本发明的组合物、动物饲料或动物饲料添加剂还可包含半乳聚糖酶(EC3.2.1.89)和β-半乳糖苷酶(EC3.2.1.23)。

本发明的组合物、动物饲料或动物饲料添加剂还可包含植酸酶(EC 3.1.3.8或EC3.1.3.26)。可商购获得的植酸酶的示例包括Bio-Feed^TM植酸酶(Novozymes)、

P、

NP和

HiPhos(DSM Nutritional Products)、Natuphos^TM(BASF)、Natuphos^TM E(BASF)、

和

Blue(AB Enzymes)、

(Huvepharma)、

植酸酶(Aveve Biochem)、

XP(Verenium/DuPont)和

PHY(DuPont)。其他优选的植酸酶包括在例如WO 98/28408、WO 00/43503和WO 03/066847中描述的那些。

本发明的组合物、动物饲料或动物饲料添加剂还可包含木聚糖酶(EC 3.2.1.8)。可商购获得的木聚糖酶的示例包括

WX(DSM Nutritional Products)、

XT和Barley(AB Vista)、

(Verenium)、

X(Huvepharma)、

XB(木聚糖酶/β-葡聚糖酶，DuPont)和

XAP(木聚糖酶/淀粉酶/蛋白酶，DuPont)、

XG 10(木聚糖酶/葡聚糖酶)和

02CS(木聚糖酶/葡聚糖酶/果胶酶，Aveve Biochem)和Naturgrain(BASF)。

本发明的组合物、动物饲料或动物饲料添加剂还可包含蛋白酶(EC 3.4)。可商购获得的蛋白酶的示例包括

ProAct(DSM Nutritional Products)、Winzyme Pro

(Suntaq International Limited)和

DP100(Novus International)。

本发明的组合物、动物饲料或动物饲料添加剂还可包含α-淀粉酶(EC 3.2.1.1)。可商购获得的α-淀粉酶的示例包括

A和

RumiStar^TM(DSMNutritional Products)。

本发明的组合物、动物饲料或动物饲料添加剂还可包含多组分酶产品，例如

Octazyme(Framelco)、

G2、

VP和

MultiGrain(DSM Nutritional Products)、

Excel或

Advance(Adisseo)。

摄生素

本发明的组合物、动物饲料或动物饲料添加剂还可另外包含摄生素。摄生素是被设计用于给予胃肠道中微生物菌群的健康平衡的化合物。摄生素包括许多不同的饲料添加剂，例如益生菌、益生元、植生剂(精油)和有机酸，这些饲料添加剂在下文更详细地描述。

益生菌

在本发明中，所述组合物、动物饲料或动物饲料添加剂还可包含一种或多种附加益生菌。具体地，所述动物饲料组合物还可包含来自以下属中的一种或多种属的细菌：乳杆菌属(Lactobacillus)、乳球菌属(Lactococcus)、链球菌属(Streptococcus)、芽孢杆菌属(Bacillus)、片球菌属(Pediococcus)、肠球菌属(Enterococcus)、明串珠菌属(Leuconostoc)、肉食杆菌属(Carnobacterium)、丙酸杆菌属(Propionibacterium)、双歧杆菌属(Bifidobacterium)、梭菌属(Clostridium)和巨型球菌属(Megasphaera)，或它们的任何组合。

优选地，所述组合物、动物饲料或动物饲料添加剂还包含来自以下品系中的一种或多种品系的细菌：枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、地衣芽孢杆菌(Bacilluslicheniformis)、解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)、蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)、短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)、多粘芽孢杆菌(Bacilluspolymyxa)、巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)、凝结芽孢杆菌(Bacillus coagulans)、环状芽孢杆菌(Bacillus circulans)、屎肠球菌(Enterococcus faecium)、肠球菌属(Enterococcus spp)、和片球菌属(Pediococcus spp)、乳杆菌属(Lactobacillus spp)、双歧杆菌属(Bifidobacterium spp)、嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)、嗜酸片球菌(Pediococsus acidilactici)、乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)、两歧双歧杆菌(Bifidobacterium bifidum)、特氏丙酸杆菌(Propionibacterium thoenii)、香肠乳杆菌(Lactobacillus farciminus)、鼠李糖乳杆菌(lactobacillus rhamnosus)、丁酸梭菌(Clostridium butyricum)、动物双歧杆菌动物亚种(Bifidobacterium animalisssp.animalis)、罗伊氏乳杆菌(Lactobacillus reuteri)、唾液乳杆菌唾液亚种(Lactobacillus salivarius ssp.salivarius)、埃氏巨型球菌(Megasphaera elsdenii)、丙酸杆菌种(Propionibacteria sp)。

更优选地，本发明的组合物或动物饲料还包含来自以下枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)品系中的一种或多种品系的细菌：3A-P4(PTA-6506)、15A-P4(PTA-6507)、22C-P1(PTA-6508)、2084(NRRL B-500130)、LSSA01(NRRL-B-50104)、BS27(NRRL B-501 05)、BS 18(NRRL B-50633)、BS 278(NRRL B-50634)、DSM 29870、DSM 29871、DSM 32315、NRRL B-50136、NRRL B-50605、NRRL B-50606、NRRL B-50622和PTA-7547。

更优选地，本发明的组合物或动物饲料还包含来自以下短小芽孢杆菌(Bacilluspumilus)品系中的一种或多种品系的细菌：NRRL B-50016、ATCC 700385、NRRL B-50885或NRRL B-50886。

更优选地，本发明的组合物或动物饲料还包含来自以下地衣芽孢杆菌(Bacilluslichenformis)品系中的一种或多种品系的细菌：NRRL B 50015、NRRL B-50621或NRRL B-50623。

更优选地，本发明的组合物或动物饲料还包含来自以下解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)品系中的一种或多种品系的细菌：DSM 29869、DSM 29869、NRRL B 50607、PTA-7543、PTA-7549、NRRL B-50349、NRRL B-50606、NRRL B-50013、NRRL B-50151、NRRL B-50141、NRRL B-50147或NRRL B-50888。

所述组合物、动物饲料或动物饲料添加剂中的细菌品系中的每种细菌品系的细菌计数介于1×10⁴CFU/kg干物质与1×10¹⁴CFU/kg干物质之间，优选地介于1×10⁶CFU/kg干物质与1×10¹²CFU/kg干物质之间，更优选地介于1×10⁷CFU/kg干物质与1×10¹¹CFU/kg干物质之间。优选地，所述组合物、动物饲料或动物饲料添加剂中的细菌品系中的每种细菌品系的细菌计数介于1×10⁸CFU/kg干物质与1×10¹⁰CFU/kg干物质之间。

所述组合物、动物饲料或动物饲料添加剂中的细菌品系中的每种细菌品系的细菌计数介于1×10⁵CFU/动物/天与1×10¹⁵CFU/动物/天之间，优选地介于1×10⁷CFU/动物/天与1×10¹³CFU/动物/天之间，更优选地介于1×10⁸CFU/动物/天与1×10¹²CFU/动物/天之间。优选地，所述组合物、动物饲料或动物饲料添加剂中的细菌品系中的每种细菌品系的细菌计数介于1×10⁹CFU/动物/天与1×10¹¹CFU/动物/天之间。更优选地，所述益生菌的量为所述组合物或动物饲料或动物饲料添加剂的0.001重量％至10重量％。

在本发明中，一种或多种细菌品系可以以稳定孢子的形式存在。

商业产品的示例为

(DSM Nutritional Products)、Alterion(Adisseo)、Enviva PRO(DuPont Animal Nutrition)、

(混合酶+益生菌，DuPont AnimalNutrition)、

和

(Norel/Evonik)、和

PY1(Evonik)。

益生元

益生元是诱导微生物(例如，细菌和真菌)生长或活性的物质，所述微生物有助于其宿主的健康。益生元通常是不可消化的纤维化合物，所述不可消化的纤维化合物未经消化地穿过胃肠道的上部，并通过充当移生于大肠的有益细菌的底物来刺激所述有益细菌的生长或活性。通常，益生元增加胃肠道中双歧杆菌和乳酸菌的数量或活性。

酵母衍生物(灭活的完整酵母或酵母细胞壁)也可被认为是益生元。它们通常包括甘露寡糖、酵母β-葡聚糖或蛋白质内容物，并且通常来源于酵母，酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae)的细胞壁。

在本发明中，益生元的量可以是组合物的0.001重量％至10重量％。酵母产品的示例是

和Agrimos(Lallemand Animal Nutrition)。

氨基酸

本发明的组合物或动物饲料还可包含一种或多种氨基酸。所用氨基酸的示例是赖氨酸、丙氨酸、β-丙氨酸、苏氨酸、甲硫氨酸和色氨酸。在本发明中，氨基酸的量可以是组合物或动物饲料的0.001重量％至10重量％。

维生素和矿物质

在本发明中，组合物或动物饲料可包含一种或多种维生素，例如一种或多种脂溶性维生素和/或一种或多种水溶性维生素。此外，组合物或动物饲料可任选地包含一种或多种矿物质，例如一种或多种微量矿物质和/或一种或多种巨量矿物质。

通常脂溶性维生素和水溶性维生素以及微量矿物质形成了旨在添加到饲料中的所谓预混物的一部分，而巨量矿物质通常单独添加到饲料中。

脂溶性维生素的非限制性示例包括维生素A、维生素D3、维生素E和维生素K，例如维生素K3。

水溶性维生素的非限制性示例包括维生素C、维生素B12、生物素和胆碱、维生素B1、维生素B2、维生素B6、烟酸、叶酸和泛酸盐，例如D-泛酸钙。

微量矿物质的非限制性示例包括硼、钴、氯、铬、铜、氟、碘、铁、锰、钼、碘、硒和锌。

巨量矿物质的非限制性示例包括钙、镁、磷、钾和钠。

在本发明中，维生素的量可以是组合物或动物饲料的0.001重量％至10重量％。优选地，所述矿物质的量为所述组合物或动物饲料的0.001重量％至10重量％。

这些组分(以家禽和仔猪/猪例示)的营养需求列于WO 01/58275的表A中。营养需求意味着应在日粮中以指定的浓度提供这些组分。

或者，本发明的组合物或动物饲料包含WO 01/58275的表A中指定的单独组分中的至少一种组分。至少一种是指以下中的一种：一种或多种、一种或两种、或三种、或四种等等直至全部十三种，或直至全部十五种单独组分。更具体地，该至少一种单独组分以此类量包含在本发明的添加剂中，以提供在表A的第四列、第五列或第六列所示范围内的饲料内浓度。

优选地，本发明的组合物或动物饲料包含以下维生素中的至少一种维生素，以优选地提供在下表1中规定的范围内的饲料内浓度(分别用于仔猪日粮和肉鸡日粮)。

表1：典型的维生素建议

其他饲料成分

本发明的组合物或动物饲料可进一步包含着色剂、稳定剂、促生长添加剂和芳香族化合物/调味剂、多不饱和脂肪酸(PUFA)；产活性氧的物质、抗氧化剂、抗微生物肽、抗真菌多肽和真菌毒素管理化合物。

着色剂的示例是类胡萝卜素，诸如β-胡萝卜素、虾青素和叶黄素。

芳香族化合物/调味剂的示例是甲酚、茴香脑、十内酯、十一内酯和/或十二内酯、紫罗酮、鸢尾酮、姜醇、哌啶、亚丙基苯并呋喃酮(propylidene phatalide)、亚丁基苯并呋喃酮、辣椒素和单宁。

抗菌肽(AMP's)的示例是CAP18、林可霉素A、三丁酸甘油酯，Protegrin-1、Thanatin、防御素、乳铁蛋白、乳铁素和Ovispirin(例如Novispirin)(Robert Lehrer,2000)、菌丝霉素和他汀类，包括WO 03/044049和WO 03/048148中所公开的化合物和多肽，以及上述的保留抗微生物活性的变体或片段。

抗真菌多肽(AFP's)的示例是巨大曲霉(Aspergillus giganteus)肽和黑曲霉(Aspergillus niger)肽，以及它们的保留抗真菌活性的变体和片段，如在WO 94/01459和WO 02/090384中所公开的。

多不饱和脂肪酸的示例是C18、C20和C22多不饱和脂肪酸，例如花生四烯酸、二十二碳六烯酸，二十碳五烯酸和γ-亚油酸。

产活性氧的物质的示例是例如过硼酸盐、过硫酸盐或过碳酸盐的化学物质；以及例如氧化酶、加氧酶或合成酶的酶。

抗氧化剂可用于限制可生成的活性氧物质的数量，使得活性氧物质的水平与抗氧化剂平衡。

真菌毒素，例如脱氧雪腐镰刀菌醇、黄曲霉毒素、玉米赤霉烯酮和伏马菌素，可在动物饲料中发现并且可导致不利的动物性能或疾病。可将可(例如通过将真菌毒素灭活或通过结合真菌毒素)管理真菌毒素水平的化合物添加到饲料中以改善这些不利效应。真菌毒素管理化合物的示例是

Vitafix Ultra(Nuscience)、

Secure、

BBSH、

MTV(Biomin)、

和

Plus(Nutriad)。

糖酶的制剂

在本发明中，组合物中的具有糖酶活性的多肽可以被配制成固体制剂；

在本发明中，组合物中的具有糖酶活性的多肽也可以被配制成液体制剂；

在本发明中，所述液体制剂可以进一步包含20％-80％的多元醇(即多元醇的总量)，优选地25％-75％的多元醇，更优选地30％-70％的多元醇，更优选地35％-65％的多元醇，或最优选地40％-60％的多元醇。优选地，所述液体制剂包含20％-80％的多元醇，更优选地25％-75％的多元醇，更优选地30％-70％的多元醇，更优选地35％-65％的多元醇，或最优选地40％-60％的多元醇，其中所述多元醇选自由以下项组成的组：甘油、山梨糖醇、丙二醇(MPG)、乙二醇、二甘醇、三甘醇、1,2-丙二醇或1,3-丙二醇、二丙二醇、平均分子量低于约600的聚乙二醇(PEG)和平均分子量低于约600的聚丙二醇(PPG)。更优选地，所述液体制剂包含20％-80％的多元醇(即多元醇的总量)，更优选地25％-75％的多元醇，更优选地30％-70％的多元醇，更优选地35％-65％的多元醇，或最优选地40％-60％的多元醇，其中所述多元醇选自由甘油、山梨糖醇和丙二醇(MPG)组成的组。

在本发明中，所述液体制剂还可包含防腐剂，所述防腐剂优选选自由以下项组成的组：山梨酸钠、山梨酸钾、苯甲酸钠和苯甲酸钾，或它们的任何组合。优选地，所述液体制剂包含0.02％w/w至1.5％w/w的防腐剂，更优选地0.05％w/w至1.0％w/w的防腐剂，或最优选地0.1％w/w至0.5％w/w的防腐剂。更优选地，所述液体制剂包含0.001％w/w至2.0％w/w的防腐剂(即防腐剂的总量)，优选地0.02％w/w至1.5％w/w的防腐剂，更优选地0.05％w/w至1.0％w/w的防腐剂，或最优选地0.1％w/w至0.5％w/w的防腐剂，其中所述防腐剂选自由以下项组成的组：山梨酸钠、山梨酸钾、苯甲酸钠和苯甲酸钾，或它们的任何组合。

在本发明中，所述液体制剂还可包含一种或多种配制试剂(例如本文所述的那些配制试剂)，所述配制试剂优选选自由以下项组成的列表：甘油、乙二醇、1,2-丙二醇或1,3-丙二醇、氯化钠、苯甲酸钠、山梨酸钾、硫酸钠、硫酸钾、硫酸镁、硫代硫酸钠、碳酸钙、柠檬酸钠、糊精、葡萄糖、蔗糖、山梨糖醇、乳糖、淀粉、PVA、乙酸盐和磷酸盐，优选选自由以下项组成的列表：1,2-丙二醇、1,3-丙二醇、硫酸钠、糊精、纤维素、硫代硫酸钠、高岭土和碳酸钙。

在本发明中，所述固体制剂可例如作为颗粒、喷雾干燥的粉末或团聚物(例如，如在WO2000/70034中所公开的)。配制试剂可包括盐(有机或无机锌、钠、钾或钙盐，例如乙酸钙、苯甲酸钙、碳酸钙、氯化钙、柠檬酸钙、山梨酸钙、硫酸钙、乙酸钾、苯甲酸钾、碳酸钾、氯化钾、柠檬酸钾、山梨酸钾、硫酸钾、乙酸钠、苯甲酸钠、碳酸钠、氯化钠、柠檬酸钠、硫酸钠、乙酸锌、苯甲酸锌、碳酸锌、氯化锌、柠檬酸锌、山梨酸锌、硫酸锌)、淀粉或糖或糖衍生物(例如蔗糖、糊精、葡萄糖、乳糖、山梨糖醇)。

优选地，固体制剂的配制试剂选自由以下项组成的列表：氯化钠、苯甲酸钠、山梨酸钾、硫酸钠、硫酸钾、硫酸镁、硫代硫酸钠、碳酸钙、柠檬酸钠、糊精、葡萄糖、蔗糖、山梨糖醇、乳糖、淀粉和纤维素。优选地，所述配制试剂选自以下化合物中的一种或多种化合物：硫酸钠、糊精、纤维素、硫代硫酸钠、硫酸镁和碳酸钙。

优选地，本发明的组合物是酶颗粒，所述酶颗粒包含任选地与一种或多种附加酶组合的本发明的酶。所述颗粒由芯和任选的围绕所述芯的一个或多个包衣(外层)构成。

通常，颗粒的作为等效球直径(基于平均粒径的体积)测量的颗粒大小为20-2000μm，特别是50-1500μm、100-1500μm或250-1200μm。

所述芯可以通过例如通过包括造粒技术的方法将各成分的共混物造粒来制备，所述造粒技术为例如结晶、沉淀、锅包衣、流化床包衣、流化床附聚、旋转雾化、挤出、颗粒化(prilling)、滚圆、尺寸减缩方法、转鼓造粒和/或高剪切造粒。

用于制备芯的方法可见于Handbook of Powder Technology；Particle sizeenlargement by C.E.Capes；第1卷；1980；Elsevier中。制备方法包括已知的颗粒制剂技术，例如：

a)经喷雾干燥的产品，其中将含液体酶的溶液在喷雾干燥塔中雾化以形成小液滴，所述小液滴在沿着干燥塔向下期间干燥以形成含酶的微粒材料；

b)层状产品，其中将酶作为层包被在预形成的惰性芯粒子周围，其中将含酶溶液雾化，通常在流化床设备中雾化，其中将预形成的芯粒子流态化，并将含酶溶液粘附至芯粒子并干燥，以在芯粒子的表面上留下干酶层。如果可以找到所需大小的有用芯粒子，则可以通过这种方式获得所需大小的粒子。这种类型的产品在例如WO 97/23606中有所描述；

c)经吸收的芯粒子，其中酶被吸收到芯的表面上和/或吸收到芯的表面中，而不是将酶作为层包被在芯周围。此类方法描述于WO 97/39116中。

d)挤出或粒化的产品，其中将含酶糊状物压制成丸粒或在压力下通过小开口挤出并切割成粒子，随后干燥所述粒子。此类粒子通常具有相当大的大小，因为制造挤出开口的材料(通常是具有镗孔的板)对挤出开口上的可允许的压降设置了限制。此外，当使用小开口时，非常高的挤出压力会增加酶糊状物中的热量产生，这对酶是有害的；

e)颗粒化的产品，其中将含酶粉末悬浮在熔融蜡中，并将悬浮液喷雾(例如通过旋转圆盘雾化器喷雾)到冷却室中，液滴在所述冷却室中快速固化(Michael S.Showell(编著者)；Powdered detergents；Surfactant Science Series；1998；第71卷；第140-142页；Marcel Dekker)。所获得的产品是这样的产品，其中酶均匀地分布在整个惰性材料中，而不是集中在所述惰性材料的表面上。US 4,016,040和US 4,713,245也是与这种技术有关的文件；

f)混合器造粒产品，其中将液体添加到例如常规造粒组分的干粉组合物中，经由液体或粉末或两者引入酶。将液体和粉末混合，并且当液体的水分被吸收到干粉中时，干粉的组分将开始粘附并结块，并且粒子将堆积，从形成包含酶的颗粒。此类方法描述于US 4,106,991和相关文件EP 170360、EP 304332、EP 304331、WO 90/09440和WO 90/09428中。在这种方法的特定产品中，其中将各种高剪切混合器可用作造粒机，将由酶、填料和粘合剂等组成的颗粒与纤维素纤维混合以增强所述粒子，以便得到所谓的T-颗粒。增强的粒子更坚固，释放更少的酶粉尘。

g)尺寸缩减，其中通过研磨或压碎含酶的较大粒子、丸粒、片剂、团块等来生产芯。通过筛分经研磨或压碎的产品获得所希望的芯粒子级分。可以回收利用尺寸过大和过小的粒子。尺寸缩减描述于(Martin Rhodes(编著者)；Principles of Powder Technology；1990；第10章；John Wiley&Sons)中；

h)流化床造粒，所述流化床造粒涉及将微粒悬浮在空气料流中并经由喷嘴将液体喷射到流态化的粒子上。被喷雾液滴击中的粒子会被弄湿并变得发粘。发粘的粒子与其他粒子碰撞并粘附到所述其他粒子上并形成颗粒；

i)所述芯可以进行干燥，例如在流化床干燥器中干燥。技术人员可以使用在饲料或洗涤剂行业中其他已知的用于干燥颗粒的方法。干燥优选在25℃至90℃的产品温度下进行。对于一些酶，重要的是包含酶的芯在包衣之前含有少量的水。如果在去除过多的水之前包被水敏感性酶，则所述酶将被捕集在芯内，并且这可能负面地影响酶的活性。在干燥后，芯优选地含有0.1-10％w/w的水。

芯可以包含附加材料，例如填料、纤维材料(纤维素或合成纤维)、稳定剂、增溶剂、悬浮剂、粘度调节剂、轻球(light sphere)、增塑剂、盐、润滑剂和芳香剂。

芯可以包含粘合剂，例如合成聚合物、蜡、脂肪或碳水化合物。

芯可以包含多价阳离子的盐、还原剂、抗氧化剂、过氧化物分解催化剂和/或酸性缓冲组分，这些物质通常作为均质共混物。

在本发明中，芯可包含选自由以下项组成的组的材料：盐(例如乙酸钙、苯甲酸钙、碳酸钙、氯化钙、柠檬酸钙、山梨酸钙、硫酸钙、乙酸钾、苯甲酸钾、碳酸钾、氯化钾、柠檬酸钾、山梨酸钾、硫酸钾、乙酸钠、苯甲酸钠、碳酸钠、氯化钠、柠檬酸钠、硫酸钠、乙酸锌、苯甲酸锌、碳酸锌、氯化锌、柠檬酸锌、山梨酸锌、硫酸锌)、淀粉或糖或糖衍生物(例如蔗糖、糊精、葡萄糖、乳糖、山梨糖醇)、糖或糖衍生物(例如蔗糖、糊精、葡萄糖、乳糖、山梨糖醇)、有机小分子、淀粉、面粉、纤维素和矿物质以及黏土矿物(也称为水合层状硅酸铝)。优选地，所述芯包含粘土矿物，例如高岭石或高岭土。

所述芯还可以包含惰性粒子，其中酶被吸收到所述惰性粒子中，或例如通过流化床包衣施加到所述惰性粒子的表面上。

芯可以具有20-2000μm，特别是50-1500μm、100-1500μm或250-1200μm的直径。

芯可以被至少一种包衣包围，例如以提高储存稳定性、减少处理期间的粉尘形成，或用于对颗粒着色。任选的包衣可包括盐和/或蜡和/或面粉包衣，或其他合适的包衣材料。

包衣可以以芯的至少0.1重量％，例如至少0.5重量％、1重量％或5重量％的量施加。所述量可以为芯的至多100重量％、70重量％、50重量％、40重量％或30重量％。

包衣优选地为至少0.1μm厚，特别是至少0.5μm、至少1μm或至少5μm。在一些实施方式中，包衣的厚度低于100μm，例如低于60μm，或低于40μm。

包衣应通过形成基本上连续的层来包封芯单元。基本上连续的层应被理解为包衣具有很少的孔或没有孔，使得芯单元被包封或包围，具有很少或没有未包衣区域。所述层或包衣尤其应该在厚度上是均匀的。

所述包衣可进一步包含本领域已知的其他材料，例如填料、抗粘剂、颜料、染料、增塑剂和/或粘合剂，例如二氧化钛、高岭土、碳酸钙或滑石。

优选地，本发明的酶颗粒可包含含有本发明的酶的芯、一种或多种盐包衣和一种或多种蜡包衣。具有多层包衣的酶颗粒的示例在WO1993/07263、WO1997/23606和WO2016/149636中示出。

盐包衣可包含至少60重量％，例如至少65重量％、至少70重量％、至少75重量％、至少80重量％、至少85重量％、至少90重量％、至少95％重量％或至少99重量％的盐。盐包衣可以如在WO1997/05245、WO1998/54980、WO1998/55599、WO2000/70034、WO2006/034710、WO2008/017661、WO2008/017659、WO2000/020569、WO2001/004279、WO1997/05245、WO2000/01793、WO2003/059086、WO2003/059087、WO2007/031483、WO2007/031485、WO2007/044968、WO2013/192043、WO2014/014647和WO2015/197719中所述，或者是例如在WO 2001/00042中所述的聚合物包衣。

包衣中的盐于20℃可以具有高于60％，特别是高于70％、高于80％或高于85％的恒定湿度，或者其可以是这种盐的另一种水合物形式(例如，脱水物)。

盐可以是无机盐，例如硫酸盐、亚硫酸盐、磷酸盐、膦酸盐、硝酸盐、盐酸盐或碳酸盐或简单有机酸(小于10个碳原子，例如6个或更少碳原子)的盐，例如柠檬酸盐、丙二酸盐或乙酸盐。这些盐中的阳离子的示例是碱金属或碱土金属离子、铵离子或第一过渡系列的金属离子，例如钠、钾、镁、钙、锌或铝。阴离子的示例包括氯离子、溴离子、碘离子、硫酸根、亚硫酸根、亚硫酸氢根、硫代硫酸根、磷酸根、一碱式磷酸根、二碱式磷酸根、次磷酸根、焦磷酸二氢根、四硼酸根、硼酸根、碳酸根、碳酸氢根、偏硅酸根、柠檬酸根、苹果酸根、马来酸根、丙二酸根、琥珀酸根、山梨酸根、乳酸根、甲酸根、乙酸根、丁酸根、丙酸根、苯甲酸根、酒石酸根、抗坏血酸根或葡糖酸根。特别地，可以使用硫酸根、亚硫酸根、磷酸根、膦酸根、硝酸根、氯离子或碳酸根的碱金属或碱土金属盐，或简单有机酸的盐，例如柠檬酸盐、丙二酸盐或乙酸盐。

合适的盐的具体示例是NaCl(CH20℃＝76％)、Na2CO3(CH20℃＝92％)、NaNO3(CH20℃＝73％)、Na2HPO4(CH20℃＝95％)、Na3PO4(CH25℃＝92％)、NH4Cl(CH20℃＝79.5％)、(NH4)2HPO4(CH20℃＝93,0％)、NH4H2PO4(CH20℃＝93.1％)、(NH4)2SO4(CH20℃＝81.1％)、KCl(CH20℃＝85％)、K2HPO4(CH20℃＝92％)、KH2PO4(CH20℃＝96.5％)、KNO3(CH20℃＝93.5％)、Na2SO4(CH20℃＝93％)、K2SO4(CH20℃＝98％)、KHSO4(CH20℃＝86％)、MgSO4(CH20℃＝90％)、ZnSO4(CH20℃＝90％)和柠檬酸钠(CH25℃＝86％)。其他示例包括NaH2PO4、(NH4)H2PO4、CuSO4、Mg(NO3)2、乙酸镁、乙酸钙、苯甲酸钙、碳酸钙、氯化钙、柠檬酸钙、山梨酸钙、硫酸钙、乙酸钾、苯甲酸钾、碳酸钾、氯化钾、柠檬酸钾、山梨酸钾、乙酸钠、苯甲酸钠、柠檬酸钠、硫酸钠、乙酸锌、苯甲酸锌、碳酸锌、氯化锌、柠檬酸锌和山梨酸锌。

盐可以是无水形式，或者其可以是水合盐，即具有结合的结晶水的结晶盐水合物，例如在WO 99/32595中所述。具体示例包括无水硫酸钠(Na2SO4)、无水硫酸镁(MgSO4)、七水合硫酸镁(MgSO4.7H2O)、七水合硫酸锌(ZnSO4.7H2O)、七水合磷酸氢二钠(Na2HPO4.7H2O)、六水合硝酸镁(Mg(NO3)2(6H2O))、二水合柠檬酸钠和四水合乙酸镁。

盐包衣可包含单一盐或两种或更多种盐的混合物。所述盐可以是水溶性的，特别是溶解度为于20℃在100g水中至少0.1g，优选地至少0.5g/100g水，例如至少1g/100g水，例如至少5g/100g水。盐可以从盐完全溶解的盐溶液或从细离子小于50μm，例如小于10μm或小于5μm的盐悬浮液添加。

蜡包衣可包含至少60重量％，例如至少65重量％、至少70重量％、至少75重量％、至少80重量％、至少85重量％、至少90重量％、至少95％重量％或至少99重量％的蜡。

蜡的具体示例是聚乙二醇；聚丙烯；巴西棕榈蜡；小烛树蜡；蜂蜡；氢化植物油或动物油脂，例如聚乙二醇(PEG)、甲基羟丙基纤维素(MHPC)、聚乙烯醇(PVA)、氢化牛脂、氢化棕榈油、氢化棉籽油和/或氢化大豆油；脂肪酸醇；单甘油酯和/或双甘油酯，例如甘油硬脂酸酯，其中硬脂酸酯是硬脂酸和棕榈酸的混合物；微晶蜡；石蜡；和脂肪酸，例如氢化线性长链脂肪酸及其衍生物。优选的蜡是棕榈油或氢化棕榈油。

本发明的颗粒还可以作为无尘颗粒生产，例如如在美国专利号4,106,991和4,661,452中所公开的，并且可以任选地通过本领域已知的方法进行包衣。包衣材料可以是蜡质包衣材料和成膜包衣材料。蜡质包衣材料的示例是平均分子量为1000至20000的聚(环氧乙烷)产品(聚乙二醇，PEG)；具有16个至50个环氧乙烷单元的乙氧基化壬基酚；乙氧基化脂肪醇，其中所述醇含有12个至20个碳原子并且其中有15个至80个环氧乙烷单元；脂肪醇；脂肪酸；以及脂肪酸的甘油单酯、甘油二酯和甘油三酯。GB 1483591中给出了适用于通过流化床技术施加的成膜包衣材料的示例。

所述颗粒可进一步包含一种或多种附加的酶。然后每种酶将存在于更多颗粒中，从而确保酶的更均匀分布，并且还减少了由于不同粒径而导致的不同酶的物理分离。用于生产多酶共颗粒的方法在ip.com公开案IPCOM000200739D中公开。

WO 2013/188331中公开了通过使用共颗粒来配制酶的另一个示例。

本发明还涉及根据EP 238,216中公开的方法制备的受保护的酶。

因此，优选地，本发明提供了一种颗粒，所述颗粒包含：

(a)包含根据本发明的糖酶的芯，以及

(b)由围绕芯的一个或多个层组成的包衣。

在本发明中，包衣包括如本文所述的盐包衣。优选地，包衣包括如本文所述的蜡包衣。更优选地，包衣包括盐包衣，之后是本文所述的蜡包衣。可以将具有糖酶活性的多肽和其他多肽共造粒。

在本发明中，所述组合物可进一步包含一种或多种选自由一种或多种载剂项组成的列表的组分。所述载剂可选自由以下项组成的组：水、甘油、乙二醇、1,2-丙二醇或1,3-丙二醇、氯化钠、苯甲酸钠、山梨酸钾、硫酸钠、硫酸钾、硫酸镁、硫代硫酸钠、碳酸钙、柠檬酸钠、糊精、麦芽糖糊精、葡萄糖、蔗糖、山梨糖醇、乳糖、小麦面粉、小麦麸、玉米麸质粉、淀粉、高岭土和纤维素，或它们的任何组合。

在本发明中，所述组合物可进一步包含一种或多种附加的酶；一种或多种益生元；一种或多种维生素；一种或多种矿物质和一种或多种氨基酸，如下所述。

制造动物饲料的方法

本发明还涉及制造动物饲料的方法，所述动物饲料包含至少一种酶并且A/X比率大于0.70，优选地大于0.705、优选地大于0.71、优选地大于0.715、优选地大于0.72、优选地大于0.725、优选地大于0.73、优选地大于0.735、优选地大于0.74、优选地大于0.745、优选地大于0.75、优选地大于0.76、优选地大于0.77、优选地大于0.78、优选地大于0.79、优选地大于0.80。

本发明还涉及制造动物饲料的方法，所述动物饲料包含至少一种酶，并且A/X比率低于1.5，优选地低于1.4、优选地低于1.3、优选地低于1.2、优选地低于1.15、优选地低于1.1、优选地低于1.05、优选地低于1、优选地低于0.95、优选地低于0.9、优选地低于0.85、优选地低于0.84、优选地低于0.83、优选地低于0.83、优选地低于0.82、优选地低于0.81。

本发明还涉及制造动物饲料的方法，所述动物饲料包含至少一种酶并且A/X总饲料比率大于0.91，优选地大于0.95、优选地大于1.00、优选地大于1.05、优选地大于1.10、优选地大于1.15、优选地大于1.20、优选地大于1.25、优选地大于1.30。

因此，本发明的一个实施方式是一种制造动物饲料的方法，所述动物饲料

a)具有的A/X比率大于0.70，优选地大于0.705、优选地大于0.71、优选地大于0.715、优选地大于0.72、优选地大于0.725、优选地大于0.73、优选地大于0.735、优选地大于0.74、优选地大于0.745、优选地大于0.75、优选地大于0.76、优选地大于0.77、优选地大于0.78、优选地大于0.79、优选地大于0.80；并且

b)包含至少一种酶；并且

c)所述方法包括使用等式2，根据饲料中的A/X比率调整动物饲料中的至少一种酶的量的步骤

等式2：

并且与非酶处理对照相比，经体重校正的饲料转化率提高。

因此，本发明的一个实施方式是一种制造动物饲料的方法，所述动物饲料

a)具有的A/X比率低于1.5，优选地低于1.4、优选地低于1.3、优选地低于1.2、优选地低于1.15、优选地低于1.1、优选地低于1.05、优选地低于1、优选地低于0.95、优选地低于0.9、优选地低于0.85、优选地低于0.84、优选地低于0.83、优选地低于0.83、优选地低于0.82、优选地低于0.81；并且

b)包含至少一种酶；并且

c)所述方法包括使用等式2，根据饲料中的A/X比率调整动物饲料中的至少一种酶的量的步骤

等式2：

并且与非酶处理对照相比，经体重校正的饲料转化率提高。

因此，本发明的一个实施方式是一种制造动物饲料的方法，所述动物饲料

a)具有的A/X总饲料比率大于0.91，优选地大于0.95、优选地大于1.00、优选地大于1.05、优选地大于1.10、优选地大于1.15、优选地大于1.20、优选地大于1.25、优选地大于1.30；并且

b)包含至少一种酶；并且

c)所述方法包括根据饲料中的A/X比率并且使用等式2调整动物饲料中的至少一种酶的量的步骤

等式2：

并且与非酶处理对照相比，经体重校正的饲料转化率提高。

本发明的另一个实施方式是一种制造动物饲料的方法，所述动物饲料

包含至少一种酶，并且所述方法包括以下步骤

a)对动物饲料样品进行

a1)所述样品中膳食纤维的定量分析；

a2)所述动物饲料总量中的A/X比率的测定；以及

b)定量评估酶活性降低的倍数，作为所测定的A/X比率的函数(quantitativeevaluation of the factor by which the enzyme activity is reduced as afunction of the determined A/X ratio)；

c)使用等式2确定补偿活性降低所需的至少一种酶的总量

等式2：

并且与非酶处理对照相比，经体重校正的饲料转化率提高。

d)以步骤c)中确定的量将所述量的至少一种酶添加到所述动物饲料中。

动物饲料中膳食纤维含量的定量分析可通过标准方法，例如湿化学、HPLC、GLC或分光光度法、以及酶测定来执行。

湿化学方法包括如由Englyst等人(Englyst HN,Quigley ME,Hudson GJ(1994).Determination of dietary fiber as non-starch polysaccharides with gas-liquidchromatographic,high-performance liquid chromatographic or spectrophotometricmeasurement of constituent sugars.Analyst 119,1497-1509.)用来测定从饲料样品中分离出的可溶性级分、不溶性级分和总NSP级分形式的非淀粉多糖(NSP)的方法。简而言之，将5mL乙酸钠缓冲液添加到磨碎的饲料样品中，之后进行连续酶促处理以去除淀粉。然后将样品离心以收集可溶性NSP级分。剩余的沉淀物是不溶性NSP。将两部分酸水解，并使用气相色谱法、高效液相色谱法或分光光度法测定单糖。

酶测定可作为试剂盒购买，例如从Megazyme购买。

此外，膳食纤维级分可以从其他级分或作为NDF的百分比计算，如由Balckom等人在论文中所述(Mourtzinis S,Arriaga FJ,Bransby D,Balcom KS(2014).A simplifiedmethod for monomeric carbohydrateanalysis of corn stover biomass.GCBBioenergy 6,300-304.)。

根据本发明的方法的步骤a1)和a2)的定量分析是相当耗时和耗成本的。

相应动物饲料的近红外测量(NIR)将是用于确定动物饲料中的A/X比率的更省时且更成本有效的替代方案。然而，近红外光谱未给出具有所需精度的结果。因此，单独的定量分析和单独的近红外光谱法都不适合用于动物饲料总量中的A/X比率的成本有效且时间有效的测定。

根据本发明，这种问题是通过将针对动物饲料样品获得的近红外吸收与其定量分析的对应值相关联来解决的。如此获得的定量分析值与NIR测量的吸收之间的相关性优选地被描绘或绘制为校准图表，这有助于基于定量分析将其他样品的NIR测量的吸收与参数的对应精确值进行匹配。

因此，本发明的另一个目的是一种制造包含至少一种酶的动物饲料的计算机实现的方法，所述方法包括以下步骤：

A)对动物饲料样品进行

A1)近红外(NIR)光谱法以获得NIR光谱；

A2)将A1)中获得的NIR光谱中相应波长或波数处的吸收强度与校准图表或等式进行匹配；

A3)对样品中的膳食纤维的定量分析

A4)确定经处理的饲料原料和/或饲料的总量中的A/X比率；以及

B)定量评估酶活性降低的倍数，作为所测定的A/X比率的函数；

C)确定补偿活性降低所需的至少一种酶的总量

D)以步骤C)中确定的量将所述量的至少一种酶添加到所述动物饲料中。

本发明进一步包括借由另外遵循以下步骤来生成如A2)中的校准图表或等式的步骤

Ai)对如权利要求1所述的步骤A)中的动物饲料样品进行近红外(NIR)光谱法；

A-ii)将在步骤A-i)中获得的NIR光谱中的相应波长或波数处的吸收强度与在权利要求1中通过使样品经受以下而确定的对应参数及其值进行匹配

a1)样品中的A/X比率的定量分析；

a2)所述动物饲料总量中的A/X比率的测定；以及

A-iii)将步骤A-ii)的匹配绘制为校准图表和/或在校准等式中将步骤a1)和a2)中确定的参数表示为在步骤A-iii)中匹配的相应波长或波数处的吸收强度的函数。

根据所用的光谱仪，步骤A)的近红外(NIR)光谱可以使用任何合适的红外分光镜在400nm与2,500nm之间的波长处记录，所述红外分光镜基于单色仪原理或傅里叶变换原理工作。优选地，记录在1,000nm与2,500nm之间的NIR光谱。波长被容易地转换成相应的波数，并且因此，当然也可以记录相应波数处的NIR光谱。富含O-H键、C-H键和N-H键的有机化合物适用于借助于近红外光谱法进行检测。然而，诸如动物饲料的生物样品含有大量不同的有机化合物，并且因此代表复杂的基质。尽管如此，但是每种生物物质都具有独特的近红外光谱，可与单独指纹相媲美。因此，可以假定具有完全相同光谱的两种生物物质具有相同的物理和化学组成，并且因此是相同的。另一方面，如果两种生物物质具有不同的光谱，则可以假定它们是不同的，无论是在物理或化学特性方面，还是在两者方面。由于它们的个别和高度特异的吸收带，所以有机化合物的信号及其在NIR光谱中的强度可以很容易地归因于特定的有机化合物及其在已知重量样品中的浓度并与之相关。因此，NIR光谱允许可靠地预测或评定例如样品中膳食纤维的量。由于特定动物饲料的同一样品在步骤a)中经受定量分析并且在步骤A)中经受NIR光谱法，因此还可以将NIR光谱中的吸收及其强度归因于参数(例如样品中阿拉伯木聚糖的含量)或与所述参数相关联。一旦相应波长或波数处的吸收强度已被成功匹配，即归因于感兴趣的参数及其值或与所述感兴趣的参数及其值相关联，NIR光谱就允许对动物饲料中的膳食纤维进行可靠的预测或评定。为此目的，记录动物饲料的大量NIR光谱，例如100个、200个、300个、400个、500个或更多，并且将相应波长或波数处的吸收强度与对应的参数及其值进行匹配。

饲料中的A/X纤维分数与糖酶功效之间的关系可以通过以下等式来描述：

等式1：糖酶(mg EP/kg)对经体重校正的饲料转化率(BWcFCR)和玉米A/X比率的影响，R²＝0.74，RMSE＝0.027，n＝28，P<0.0001。

等式2：糖酶剂量(mg EP/kg)对BWcFCR和玉米A/X比率的影响，R²＝0.88，RMSE＝0.019，n＝28，P<0.0001

等式3：糖酶剂量(mg EP/kg)对BWcFCR和总日粮A/X比率的影响，R²＝0.51，RMSE＝0.036，n＝28，P<0.0001

相对于NC，糖酶对BWcFCR的影响＝0.725-0.7857143*日粮总A/X比率

通常，所述关系表明，经体重校正的饲料转化率随着总糖酶剂量(作为mg酶蛋白/kg计)和A/X比率的增加而提高。这种关系在图2中示出。图2和表2显示，在A/X玉米比率为0.71的日粮中，以FCR表示的对所有三种不同剂量的木聚糖酶(SEQ ID 2)的反应是相似的。对于含有为0.74的中等A/X玉米比率的木聚糖酶的日粮，FCR降低，并且因此得到改善。此外，显示木聚糖酶剂量越高，则对FCR的提高越好。对于含有为0.82的高A/X玉米比率的木聚糖酶的日粮，FCR甚至会被进一步降低，并且因此得到改善。在最高的A/X玉米比率下，使用最高的木聚糖酶剂量可以实现最低的FCR。

表2：所预测的木聚糖酶剂量和A/X玉米比率对BWcFCR的影响

本发明的实施方式

1.至少一种糖酶与A/X玉米比率大于0.70，优选地大于0.705、优选地大于0.71、优选地大于0.715、优选地大于0.72、优选地大于0.725、优选地大于0.73、优选地大于0.735、优选地大于0.74、优选地大于0.745、优选地大于0.75、优选地大于0.76、优选地大于0.77、优选地大于0.78、优选地大于0.79、优选地大于0.80的动物饲料的组合用于提高所述动物饲料的营养价值的用途。

2.至少一种糖酶与A/X玉米比率大于0.70，优选地大于0.705、优选地大于0.71、优选地大于0.715、优选地大于0.72、优选地大于0.725、优选地大于0.73、优选地大于0.735、优选地大于0.74、优选地大于0.745、优选地大于0.75、优选地大于0.76、优选地大于0.77、优选地大于0.78、优选地大于0.79、优选地大于0.80的动物饲料的组合用于增加所述动物饲料的消化率的用途。

3.至少一种糖酶与A/X玉米比率大于0.70，优选地大于0.705、优选地大于0.71、优选地大于0.715、优选地大于0.72、优选地大于0.725、优选地大于0.73、优选地大于0.735、优选地大于0.74、优选地大于0.745、优选地大于0.75、优选地大于0.76、优选地大于0.77、优选地大于0.78、优选地大于0.79、优选地大于0.80的动物饲料的组合用于提高动物中的一种或多种性能参数的用途。

4.根据权利要求1所述的用途，其中所述A/X玉米比率低于1.5，优选地低于1.4、优选地低于1.3、优选地低于1.2、优选地低于1.15、优选地低于1.1、优选地低于1.05、优选地低于1、优选地低于0.95、优选地低于0.9、优选地低于0.85、优选地低于0.84、优选地低于0.83、优选地低于0.83、优选地低于0.82、优选地低于0.81。

5.根据权利要求3或4所述的用途，其中动物中的所述一种或多种性能参数是所述饲料转化率。

6.至少一种糖酶与A/X总饲料比率大于0.91，优选地大于0.95、优选地大于1.00、优选地大于1.05、优选地大于1.10、优选地大于1.15、优选地大于1.20、优选地大于1.25、优选地大于1.30的动物饲料的组合用于提高所述动物饲料的营养价值的用途。

7.至少一种糖酶与A/X总饲料比率大于0.91，优选地大于0.95、优选地大于1.00、优选地大于1.05、优选地大于1.10、优选地大于1.15、优选地大于1.20、优选地大于1.25、优选地大于1.30的动物饲料的组合用于增加所述动物饲料的消化率的用途。

8.至少一种糖酶与A/X总饲料比率大于0.91，优选地大于0.95、优选地大于1.00、优选地大于1.05、优选地大于1.10、优选地大于1.15、优选地大于1.20、优选地大于1.25、优选地大于1.30的动物饲料的组合用于提高动物中的一种或多种性能参数的用途。

9.根据权利要求8所述的用途，其中动物中的所述一种或多种性能参数是所述饲料转化率。

10.根据权利要求1至9中任一项所述的用途，其中所述至少一种糖酶选自由以下项组成的组：枯草芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌或饲料类芽孢杆菌、疏棉状嗜热丝孢菌、里氏木霉、经遗传修饰的米曲霉或经遗传修饰的解淀粉芽孢杆菌。

11.根据权利要求1至10中任一项所述的用途，其中所述至少一种糖酶选自以下组：葡聚糖酶、木聚糖酶、果胶酶、半乳糖苷酶、纤维素、甘露聚糖酶、脱支酶或淀粉酶。

12.根据权利要求1至11中任一项所述的用途，其中所述至少一种糖酶在蛋白酶存在下是稳定的。

13.根据权利要求1至12中任一项所述的用途，其中所述木聚糖酶是枯草芽孢杆菌木聚糖酶。

14.根据权利要求1至13中任一项所述的用途，其中所述第二糖酶是α-半乳糖苷酶。

15.根据权利要求1至14中任一项所述的用途，其中所述木聚糖酶是木聚糖酶变体，所述木聚糖酶变体包含在与SEQ ID NO:1的24位、26位、36位、37位、60位、71位、74位、75位、76位、124位、133位、155位、167位、208位、317位和321位对应的一个或多个位置处的取代。

16.根据权利要求15所述的用途，其中所述木聚糖酶变体具有木聚糖酶活性并且其中所述木聚糖酶变体与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ IDNO:5或SEQ ID NO:6具有至少60％，例如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％但小于100％的序列同一性。

17.根据权利要求15或16中任一项所述的用途，其中所述木聚糖酶变体相对于所述亲本具有改进的特性，其中所述改进的特性选自由以下项组成的组：催化效率、催化速率、化学稳定性、氧化稳定性、pH活性、pH稳定性、比活性、在储存条件下的稳定性、底物结合、底物切割、底物特异性、底物稳定性、表面特性、热活性和热稳定性。

18.根据权利要求15至17中任一项所述的用途，其中所述木聚糖酶变体具有改善的热稳定性。

19.根据权利要求1至18中任一项所述的用途，其中将所述至少一种糖酶以50-500mg/kg动物饲料，例如60mg/kg动物饲料至450mg/kg动物饲料、70mg/kg动物饲料至400mg/kg动物饲料、80mg/kg动物饲料至350mg/kg动物饲料、90mg/kg动物饲料至300mg/kg动物饲料、100mg/kg动物饲料至300mg/kg动物饲料、110mg/kg动物饲料至250mg/kg动物饲料、120mg/kg动物饲料至200mg/kg动物饲料，或这些区间的任何组合的总量添加到所述动物饲料中。

20.根据权利要求1至19中任一项所述的用途，其中将所述木聚糖酶或木聚糖酶变体配制成固体制剂或液体制剂。

21.根据权利要求20所述的用途，其中所述液体制剂包含20％-80％的多元醇。

22.根据权利要求21所述的用途，其中所述多元醇选自由以下项组成的组：甘油、山梨糖醇、丙二醇(MPG)、乙二醇、二甘醇、三甘醇、1,2-丙二醇或1,3-丙二醇、二丙二醇、平均分子量低于约600的聚乙二醇(PEG)和平均分子量低于约600的聚丙二醇(PPG)。

23.根据权利要求20至22中任一项所述的用途，其中所述液体制剂进一步包含防腐剂，所述防腐剂优选地选自由以下项组成的组：山梨酸钠、山梨酸钾、苯甲酸钠和苯甲酸钾，或它们的组合。

24.根据权利要求20至23中任一项所述的用途，其中所述液体制剂进一步包含一种或多种配制试剂，所述配制试剂优选地选自由以下项组成的列表：甘油、乙二醇、1,2-丙二醇或1,3-丙二醇、氯化钠、苯甲酸钠、山梨酸钾、硫酸钠、硫酸钾、硫酸镁、硫代硫酸钠、碳酸钙、柠檬酸钠、糊精、葡萄糖、蔗糖、山梨糖醇、乳糖、淀粉、PVA、乙酸盐和磷酸盐，优选选自由以下项组成的列表：1,2-丙二醇、1,3-丙二醇、硫酸钠、糊精、纤维素、硫代硫酸钠、高岭土和碳酸钙。

25.根据权利要求20所述的用途，其中所述固体制剂是颗粒、喷雾干燥的粉末或附聚物。

26.根据权利要求20或25所述的用途，其中所述固体制剂包含选自由以下项组成的组的配制试剂：盐(有机或无机锌、钠、钾或钙盐，例如乙酸钙、苯甲酸钙、碳酸钙、氯化钙、柠檬酸钙、山梨酸钙、硫酸钙、乙酸钾、苯甲酸钾、碳酸钾、氯化钾、柠檬酸钾、山梨酸钾、硫酸钾、乙酸钠、苯甲酸钠、碳酸钠、氯化钠、柠檬酸钠、硫酸钠、乙酸锌、苯甲酸锌、碳酸锌、氯化锌、柠檬酸锌、山梨酸锌、硫酸锌)、淀粉或糖或糖衍生物(例如蔗糖、糊精、葡萄糖、乳糖、山梨糖醇)。

27.根据权利要求20、25或26中任一项所述的用途，其中所述固体制剂是酶颗粒。

28.一种动物饲料

a.所述动物饲料包含大于0.70，优选地大于0.705、优选地大于0.71、优选地大于0.715、优选地大于0.72、优选地大于0.725、优选地大于0.73、优选地大于0.735、优选地大于0.74、优选地大于0.745、优选地大于0.75、优选地大于0.76、优选地大于0.77、优选地大于0.78、优选地大于0.79、优选地大于0.80的A/X比率；以及

b.至少一种糖酶。

29.根据权利要求28所述的动物饲料，其中所述A/X玉米比率低于1.5，优选地低于1.4、优选地低于1.3、优选地低于1.2、优选地低于1.15、优选地低于1.1、优选地低于1.05、优选地低于1、优选地低于0.95、优选地低于0.9、优选地低于0.85、优选地低于0.84、优选地低于0.83、优选地低于0.83、优选地低于0.82、优选地低于0.81。

30.一种动物饲料

a.包含大于0.91，优选地大于0.95、优选地大于1.00、优选地大于1.05、优选地大于1.10、优选地大于1.15、优选地大于1.20、优选地大于1.25、优选地大于1.30的A/X总饲料比率；以及

b.至少一种糖酶。

31.根据权利要求29或30所述的动物饲料，其中所述至少一种糖酶选自由以下项组成的组：枯草芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌或饲料类芽孢杆菌、疏棉状嗜热丝孢菌、里氏木霉、经遗传修饰的米曲霉或经遗传修饰的解淀粉芽孢杆菌。

32.根据权利要求29至31中任一项所述的动物饲料，其中所述至少一种糖酶选自以下组：葡聚糖酶、木聚糖酶、果胶酶、半乳糖苷酶、纤维素、甘露聚糖酶、脱支酶或淀粉酶。

33.根据权利要求29至32中任一项所述的动物饲料，其中所述至少一种糖酶在蛋白酶存在下是稳定的。

34.根据权利要求29至33中任一项所述的动物饲料，其中所述木聚糖酶是枯草芽孢杆菌木聚糖酶。

35.根据权利要求29至35中任一项所述的动物饲料，所述动物饲料进一步包含α-半乳糖苷酶。

36.根据权利要求32至35中任一项所述的动物饲料，其中所述木聚糖酶是木聚糖酶变体，所述木聚糖酶变体包含在与SEQ ID NO:1的24位、26位、36位、37位、60位、71位、74位、75位、76位、124位、133位、155位、167位、208位、317位和321位对应的一个或多个位置处的取代。

37.根据权利要求29至36中任一项所述的动物饲料，其中所述木聚糖酶变体具有木聚糖酶活性并且其中所述木聚糖酶变体与SEQ ID NO:1、SEQ IDNO:2、SEQ ID NO:3、SEQID NO:4、SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:6具有至少60％，例如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％但小于100％的序列同一性。

38.根据权利要求29至37中任一项所述的动物饲料，其中所述木聚糖酶变体相对于所述亲本具有改进的特性，其中所述改进的特性选自由以下项组成的组：催化效率、催化速率、化学稳定性、氧化稳定性、pH活性、pH稳定性、比活性、在储存条件下的稳定性、底物结合、底物切割、底物特异性、底物稳定性、表面特性、热活性和热稳定性。

39.根据权利要求29至38中任一项所述的动物饲料，其中所述木聚糖酶变体具有改善的热稳定性。

40.根据权利要求29至39中任一项所述的动物饲料，其中将所述木聚糖酶以50-500mg/kg动物饲料，例如60mg/kg动物饲料至450mg/kg动物饲料、70mg/kg动物饲料至400mg/kg动物饲料、80mg/kg动物饲料至350mg/kg动物饲料、90mg/kg动物饲料至300mg/kg动物饲料、100mg/kg动物饲料至300mg/kg动物饲料、110mg/kg动物饲料至250mg/kg动物饲料、120mg/kg动物饲料至200mg/kg动物饲料，或这些区间的任何组合的量添加。

41.根据权利要求29至40中任一项所述的饲料，其中将所述木聚糖酶或木聚糖酶变体配制成固体制剂或液体制剂。

42.根据权利要求41所述的饲料，其中所述液体制剂包含20％-80％的多元醇。

43.根据权利要求42所述的饲料，其中所述多元醇选自由以下项组成的组：甘油、山梨糖醇、丙二醇(MPG)、乙二醇、二甘醇、三甘醇、1,2-丙二醇或1,3-丙二醇、二丙二醇、平均分子量低于约600的聚乙二醇(PEG)和平均分子量低于约600的聚丙二醇(PPG)。

44.根据权利要求41至43中任一项所述的饲料，其中所述液体制剂进一步包含防腐剂，所述防腐剂优选地选自由以下项组成的组：山梨酸钠、山梨酸钾、苯甲酸钠和苯甲酸钾，或它们的组合。

45.根据权利要求41至43中任一项所述的饲料，其中所述液体制剂进一步包含一种或多种配制试剂，所述配制试剂优选地选自由以下项组成的列表：甘油、乙二醇、1,2-丙二醇或1,3-丙二醇、氯化钠、苯甲酸钠、山梨酸钾、硫酸钠、硫酸钾、硫酸镁、硫代硫酸钠、碳酸钙、柠檬酸钠、糊精、葡萄糖、蔗糖、山梨糖醇、乳糖、淀粉、PVA、乙酸盐和磷酸盐，优选选自由以下项组成的列表：1,2-丙二醇、1,3-丙二醇、硫酸钠、糊精、纤维素、硫代硫酸钠、高岭土和碳酸钙。

46.根据权利要求41所述的饲料，其中所述固体制剂是颗粒、喷雾干燥的粉末或附聚物。

47.根据权利要求41或46所述的饲料，其中所述固体制剂包含选自由以下项组成的组的配制试剂：盐(有机或无机锌、钠、钾或钙盐，例如乙酸钙、苯甲酸钙、碳酸钙、氯化钙、柠檬酸钙、山梨酸钙、硫酸钙、乙酸钾、苯甲酸钾、碳酸钾、氯化钾、柠檬酸钾、山梨酸钾、硫酸钾、乙酸钠、苯甲酸钠、碳酸钠、氯化钠、柠檬酸钠、硫酸钠、乙酸锌、苯甲酸锌、碳酸锌、氯化锌、柠檬酸锌、山梨酸锌、硫酸锌)、淀粉或糖或糖衍生物(例如蔗糖、糊精、葡萄糖、乳糖、山梨糖醇)。

48.根据权利要求41、46或47中任一项所述的饲料，其中所述固体制剂是酶颗粒。

49.根据权利要求29至48中任一项所述的饲料，所述饲料进一步包含一种或多种选自由以下项组成的列表的组分：

一种或多种附加的酶；

一种或多种摄生素，例如益生菌、益生元和有机酸；

一种或多种维生素；

一种或多种载剂；

一种或多种矿物质；

一种或多种氨基酸；以及

一种或多种其他饲料成分。

50.根据权利要求29至50中任一项所述的饲料，所述饲料进一步包含一种或多种蛋白质源和一种或多种能量源。

51.根据权利要求50所述的动物饲料，其中所述蛋白质源选自由以下项组成的组：大豆、野生大豆、豆类、羽扇豆、花菜豆、红花菜豆、瘦身豆、利马豆、法国菜豆、蚕豆、鹰嘴豆、小扁豆、花生、珍珠豆型花生、卡诺拉、葵花籽、棉籽、菜籽(油菜籽)或豌豆，或者是从例如以下物质加工而成的：豆粕、全脂豆粕、大豆蛋白浓缩物(SPC)、发酵豆粕(FSBM)、葵籽饼粉、棉籽粕、菜籽粕、鱼粉、骨粉、羽毛粉、乳清，或它们的任何组合。

52.根据权利要求50或51中任一项所述的动物饲料，其中所述能量源选自由以下项组成的组：玉蜀黍、玉米、高粱、大麦、小麦、燕麦、稻米、黑小麦、黑麦、甜菜、糖用甜菜、菠菜、马铃薯、木薯、藜麦、卷心菜、柳枝稷、稷、珍珠稗、粟，或者是从例如以下物质加工而成的：磨碎的玉米、磨碎的玉蜀黍、马铃薯淀粉、木薯淀粉、磨碎的高粱、磨碎的柳枝稷、磨碎的稷、磨碎的粟、磨碎的珍珠稗，或它们的任何组合。

53.根据权利要求29至52中任一项所述的动物饲料，其中所述动物是单胃动物，例如猪或生猪(包括但不限于仔猪、生长猪和母猪)；家禽(包括但不限于家禽、火鸡、鸭子、鹌鹑、珍珠鸡、鹅、鸽子、乳鸽、雏鸡、肉鸡、蛋鸡、小母鸡和小鸡)；宠物动物，例如猫和狗；鱼类(包括但不限于青甘鱼、巨滑舌鱼、鲃鱼、鲈鱼、扁鲹、鲮脂鲤科、鳊鱼、大头鱼、大盖巨脂鲤、鲤鱼、鲶鱼、卡特拉魮、虱目鱼、红点鲑、丽鱼科鱼、军曹鱼、鳕鱼、莓鲈、金头鲷、石首鱼、鳗鱼、虾虎鱼、金鱼、丝足鱼、石斑鱼、花身副丽鱼、大比目鱼、爪哇鱼、野鲮属、濑鱼、泥鳅、鲭鱼、遮目鱼、银鲈、泥鱼、鲻鱼、paco、绿腹丽鱼、银汉鱼、河鲈鱼、梭子鱼、鲳参鱼、斜齿鳊、长丝异鳃鲶、大眼鰤鲈、海鲈鱼、海鲷、闪光鱼、鲈塘鳢、黑鱼、鲷鱼、锯盖鱼、鳎、蓝子鱼、鲟鱼、翻车鱼、香鱼、丁鲷、皇冠鱼、罗非鱼、鳟鱼、金枪鱼、大菱鲆、白鳟鱼、玻璃梭鲈、和白鲑鱼)；以及甲壳类动物(包括但不限于基围虾和对虾)。

54.一种制造A/X玉米比率大于0.70，优选地大于0.705、优选地大于0.71、优选地大于0.715、优选地大于0.72、优选地大于0.725、优选地大于0.73、优选地大于0.735、优选地大于0.74、优选地大于0.745、优选地大于0.75、优选地大于0.76、优选地大于0.77、优选地大于0.78、优选地大于0.79、优选地大于0.80的动物饲料的方法，所述方法包括以下步骤

a)确定所述饲料中的所述A/X玉米比率

b)将至少一种糖酶添加到所述饲料中，以及

c)使用等式2，根据所述饲料中的所述A/X玉米比率调整所述动物饲料中的所述至少一种糖酶的量

等式2：

并且与非酶处理对照相比，经体重校正的饲料转化率提高。

55.根据权利要求55所述的方法，其中所述A/X玉米比率低于1.5，优选地低于1.4、优选地低于1.3、优选地低于1.2、优选地低于1.15、优选地低于1.1、优选地低于1.05、优选地低于1、优选地低于0.95、优选地低于0.9、优选地低于0.85、优选地低于0.84、优选地低于0.83、优选地低于0.83、优选地低于0.82、优选地低于0.81。

56.一种制造A/X总饲料比率大于0.91，优选地大于0.95、优选地大于1.00、优选地大于1.05、优选地大于1.10、优选地大于1.15、优选地大于1.20、优选地大于1.25、优选地大于1.30的动物饲料的方法，所述方法包括以下步骤：

a)确定所述饲料中的所述A/X总饲料比率

b)将至少一种糖酶添加到所述饲料中，以及

c)使用等式2，根据所述饲料中的所述A/X总饲料比率调整所述动物饲料中的所述至少一种糖酶的量

等式2：

并且与非酶处理对照相比，经体重校正的饲料转化率提高。

57.根据权利要求55或56所述的方法，其中步骤a)是通过选自由以下组成的组的方法执行的：湿化学、HPLC、GLC、分光光度法和酶测定。

58.一种制造根据权利要求27至51中任一项所述的动物饲料的计算机实现的方法，其中(a)包括以下步骤：

A)对动物饲料样品进行

A1)近红外(NIR)光谱法以获得NIR光谱；

A2)将A1)中获得的NIR光谱中相应波长或波数处的吸收强度与校准图表或等式进行匹配

A3)对样品中的膳食纤维，特别是阿拉伯木聚糖和木糖的定量分析

A4)确定经处理的饲料原料和/或饲料的总量中的A/X比率；以及

B)定量评估酶活性降低的倍数，作为所测定的A/X比率的函数；

C)使用等式2确定补偿活性降低所需的至少一种酶的总量

等式2：

并且与非酶处理对照相比，经体重校正的饲料转化率提高；

D)以步骤C)中确定的量将所述量的至少一种酶添加到所述动物饲料中。

59.根据权利要求58所述的计算机实现的方法，其中所述步骤A2进一步包括通过以下步骤生成校准图表或等式的步骤

Ai)对如权利要求1所述的步骤A)中的动物饲料样品进行近红外(NIR)光谱法；

A-ii)将在步骤A-i)中获得的NIR光谱中的相应波长或波数处的吸收强度与在权利要求1中通过使样品经受以下而确定的对应参数及其值进行匹配

a1)样品中的A/X比率的定量分析；

a2)所述动物饲料总量中的A/X比率的测定；以及

A-iii)将步骤A-ii)的匹配绘制为校准图表和/或在校准等式中将步骤a1)和a2)中确定的参数表示为在步骤A-iii)中匹配的相应波长或波数处的吸收强度的函数。

60.根据权利要求58或59中任一项所述的方法或计算机实现的方法，其中所述A/X比率是所述A/X玉米比率并且其中所述A/X玉米比率大于0.70，优选地大于0.705、优选地大于0.71、优选地大于0.715、优选地大于0.72、优选地大于0.725、优选地大于0.73、优选地大于0.735、优选地大于0.74、优选地大于0.745、优选地大于0.75、优选地大于0.76、优选地大于0.77、优选地大于0.78、优选地大于0.79、优选地大于0.80。

61.根据权利要求59或60所述的方法或计算机实现的方法，其中所述A/X玉米比率低于1.5，优选地低于1.4、优选地低于1.3、优选地低于1.2、优选地低于1.15、优选地低于1.1、优选地低于1.05、优选地低于1、优选地低于0.95、优选地低于0.9、优选地低于0.85、优选地低于0.84、优选地低于0.83、优选地低于0.83、优选地低于0.82、优选地低于0.81。

62.根据权利要求59至61中任一项所述的方法或计算机实现的方法，其中所述A/X比率是所述A/X总饲料比率并且其中所述A/X总饲料比率大于0.91，优选地大于0.95、优选地大于1.00、优选地大于1.05、优选地大于1.10、优选地大于1.15、优选地大于1.20、优选地大于1.25、优选地大于1.30。

63.根据权利要求59至62中任一项所述的方法或计算机实现的方法，其中所述至少一种糖酶选自由以下项组成的组：枯草芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌或饲料类芽孢杆菌、疏棉状嗜热丝孢菌、里氏木霉、经遗传修饰的米曲霉或经遗传修饰的解淀粉芽孢杆菌。

64.根据权利要求59至63中任一项所述的方法或计算机实现的方法，其中所述至少一种糖酶选自以下组：葡聚糖酶、木聚糖酶、果胶酶、半乳糖苷酶、纤维素、甘露聚糖酶、脱支酶或淀粉酶。

65.根据权利要求59至64中任一项所述的方法或计算机实现的方法，其中所述至少一种糖酶在蛋白酶存在下是稳定的。

66.根据权利要求59至65中任一项所述的方法或计算机实现的方法，其中所述木聚糖酶是枯草芽孢杆菌木聚糖酶。

67.根据权利要求59至66中任一项所述的方法或计算机实现的方法，其中第二糖酶是α-半乳糖苷酶。

68.根据权利要求59至67中任一项所述的方法或计算机实现的方法，其中所述木聚糖酶是木聚糖酶变体，所述木聚糖酶变体包含在与SEQ ID NO:1的24位、26位、36位、37位、60位、71位、74位、75位、76位、124位、133位、155位、167位、208位、317位和321位对应的一个或多个位置处的取代。

69.根据权利要求59至68中任一项所述的方法或计算机实现的方法，其中所述木聚糖酶变体具有木聚糖酶活性并且其中所述木聚糖酶变体与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:6具有至少60％，例如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％但小于100％的序列同一性。

70.根据权利要求59或69中任一项所述的方法或计算机实现的方法，其中所述木聚糖酶变体相对于所述亲本具有改进的特性，其中所述改进的特性选自由以下项组成的组：催化效率、催化速率、化学稳定性、氧化稳定性、pH活性、pH稳定性、比活性、在储存条件下的稳定性、底物结合、底物切割、底物特异性、底物稳定性、表面特性、热活性和热稳定性。

71.根据权利要求59至71中任一项所述的方法或计算机实现的方法，其中所述木聚糖酶变体具有改善的热稳定性。

本发明将通过以下实施例进一步说明。

实施例

实施例1：肉鸡体内试验；玉米A/X比率为0.82

该研究评估了与以对照基础日粮饲喂的肉鸡相比，在玉米A/X玉米纤维分数为0.82的基于玉米的日粮中不同水平的膳食木聚糖酶(SEQ ID NO 2)、α-半乳糖苷酶(SEQ IDNO 17)和多糖酶(RVB)。

材料和方法

试验(BR 190307)于2019年10月24日至12月5日在巴西帝斯曼营养产品研究中心执行。

动物和畜禽舍

由商业孵化场供应1400只初生肉用小公鸡(Cobb 500)。

在到达的当天(第1天)，将雏鸡按体重分成各具有25只家禽的多组。将每组放置在一个散落着木屑的地面鸡圈(floor-pen)中，并且分配为不同处理中的一种处理。每种处理使用8个组重复。将所述雏鸡笼养在环境控制的房间中。使室温适应于家禽的年龄。在前几天中，在每个鸡圈中放置附加的红外线电加热灯。

饲喂和处理

实验日粮(育雏日粮、生长日粮和育肥日粮)是玉米A/X玉米纤维分数为0.82的基于玉米的标准日粮。将肉鸡处理42天。将SEQ ID NO 2的木聚糖酶以表3中所示的浓度使用。将SEQ ID NO 17的α-半乳糖苷酶以表3中所示的浓度使用。以表3中所示的浓度使用可作为

Advance(进一步被称为“RVB”)商购获得的多组分糖酶组合物。将日粮作为无补充的低能量日粮(阴性对照)、无补充的高能量日粮(阳性对照)或补充有SEQ ID NO 2、SEQID NO 2和SEQ ID NO 17或RVB的低能量日粮饲喂。处理如下(表3)：

1.阳性对照(PC)：不含酶的高能量基础日粮

2.阴性对照(NC)：不含酶的低能量基础日粮

3.NC+RVB：含500ppm多糖酶的低能量基础日粮

4.NC+5SEQ ID NO 2：含有5mg/kg木聚糖酶SEQ ID NO 2的低能量基础日粮

5.NC+5SEQ ID NO 2+2SEQ ID NO 17：具有5mg/kg木聚糖酶SEQ ID NO 2和5mg/kgα-半乳糖苷酶SEQ ID NO 17的低能量基础日粮

6.NC+2SEQ ID NO 2：具有2mg/kg木聚糖酶SEQ ID NO 2的低能量基础日粮

7.NC+2SEQ ID NO 2+2SEQ ID NO 17：具有2mg/kg木聚糖酶SEQ ID NO 2和5mg/kgα-半乳糖苷酶SEQ ID NO 17的低能量基础日粮

表3：处理

实验参数和分析

在第14天、第21天和第42天，测量体重增重(kg)并计算饲料转化率(g/g)。

结果和讨论

5mg/kg的木聚糖酶补充使得与饲喂NC的家禽相比BWG提高了11-97g，并且与饲喂PC的家禽相当。

2mg/kg的木聚糖酶补充使得与饲喂NC的家禽相比BWG提高了5-54g，并且与饲喂PC的家禽相当。

5mg/kg的木聚糖酶补充以及α-半乳糖苷酶使BWG增大与，饲喂PC的家禽相当。

5mg/kg的木聚糖酶补充以及α-半乳糖苷酶使FCR提高，与饲喂PC的家禽相当。

5mg/kg的木聚糖酶补充使得与饲喂NC的家禽相比FCR提高了0.042-0.069，并且与饲喂PC的家禽相当。

2mg/kg的木聚糖酶补充使得与饲喂NC的家禽相比FCR提高了0.026-0.052，并且与饲喂PC的家禽相当。

与饲喂PC的家禽相当，RVB补充提高了BWG和FCR。

表4.生长性能

实施例2：肉鸡体内试验；玉米A/X比率为0.71

该研究评估了与以对照基础日粮饲喂的肉鸡相比，在玉米A/X玉米纤维分数为0.71的基于玉米的日粮中不同水平的膳食木聚糖酶(SEQ ID NO 2)、α-半乳糖苷酶(SEQ IDNO 17)和多糖酶(RVB)。

材料和方法

试验(BR 190306)于2019年9月12日至10月24日在巴西帝斯曼营养产品研究中心执行。

动物和畜禽舍

由商业孵化场供应2 625只初生肉用小公鸡(Ross AP91)。

在到达的当天(第1天)，将雏鸡按体重分成各具有25只家禽的多组。将每组放置在一个散落着木屑的地面鸡圈(floor-pen)中，并且分配为不同处理中的一种处理。每种处理使用15个组重复。将所述雏鸡笼养在环境控制的房间中。使室温适应于家禽的年龄。在前几天中，在每个鸡圈中放置附加的红外线电加热灯。

饲喂和处理

实验日粮(育雏日粮、生长日粮和育肥日粮)是玉米A/X纤维分数为0.71的基于玉米的标准日粮。将肉鸡处理42天。将SEQ ID NO 2的木聚糖酶以表5中所示的浓度使用。将SEQ ID NO 17的α-半乳糖苷酶以表5中所示的浓度使用。以表5中所示的浓度使用可作为

Advance(进一步被称为“RVB”)商购获得的多组分糖酶组合物。将日粮作为无补充的低能量日粮(阴性对照)、无补充的高能量日粮(阳性对照)或补充有SEQ ID NO 2、SEQID NO 2和SEQ ID NO 17或RVB的低能量日粮饲喂。处理如下(表5)：

1.阳性对照(PC)：不含酶的高能量基础日粮

2.阴性对照(NC)：不含酶的低能量基础日粮

3.NC+RVB：含500ppm多糖酶的低能量基础日粮

4.NC+5SEQ ID NO 2：含有5mg/kg木聚糖酶SEQ ID NO 2的低能量基础日粮

5.NC+5SEQ ID NO 2+2SEQ ID NO 17：具有5mg/kg木聚糖酶SEQ ID NO 2和5mg/kgα-半乳糖苷酶SEQ ID NO 17的低能量基础日粮

6.NC+2SEQ ID NO 2：具有2mg/kg木聚糖酶SEQ ID NO 2的低能量基础日粮

7.NC+2SEQ ID NO 2+2SEQ ID NO 17：具有2mg/kg木聚糖酶SEQ ID NO 2和5mg/kgα-半乳糖苷酶SEQ ID NO 17的低能量基础日粮

表5：处理

实验参数和分析

在第14天、第21天和第42天，测量体重增重(kg)并计算饲料转化率(g/g)。

结果和讨论

5mg/kg的木聚糖酶补充使得与饲喂NC的家禽相比BWG提高了5-29g，并且与饲喂PC的家禽相当。

2mg/kg的木聚糖酶补充使得与饲喂NC的家禽相比BWG提高了13-36g，并且与饲喂PC的家禽相当。

表6.生长性能

实施例3：肉鸡体内试验；玉米A/X比率为0.74

该研究评估了与以对照基础日粮饲喂的肉鸡相比，在玉米A/X玉米纤维分数为0.74的基于玉米的日粮中不同水平的膳食木聚糖酶(SEQ ID NO 2)、α-半乳糖苷酶(SEQ IDNO 17)和多糖酶(RVB)。

材料和方法

试验(CS0619-07)于2019年8月5日至9月16日在美国DSM营养产品研究中心执行。

动物和畜禽舍

由商业孵化场供应2 100只初生肉用小公鸡(Hubbard-Cobb)。

在到达的当天(第1天)，将雏鸡按体重分成各具有20只家禽的多组。将每组放置在一个散落着木屑的地面鸡圈(floor-pen)中，并且分配为不同处理中的一种处理。每种处理使用15个组重复。将所述雏鸡笼养在环境控制的房间中。使室温适应于家禽的年龄。在前几天中，在每个鸡圈中放置附加的红外线电加热灯。

饲喂和处理

实验日粮(育雏日粮、生长日粮和育肥日粮)是玉米A/X纤维分数为0.74的基于玉米的标准日粮。将肉鸡处理42天。将SEQ ID NO 2的木聚糖酶以表7中所示的浓度使用。将SEQ ID NO 17的α-半乳糖苷酶以表7中所示的浓度使用。以表7中所示的浓度使用可作为

Advance(进一步被称为“RVB”)商购获得的多组分糖酶组合物。将日粮作为无补充的低能量日粮(阴性对照)、无补充的高能量日粮(阳性对照)或补充有SEQ ID NO 2、SEQID NO 2和SEQ ID NO 17或RVB的低能量日粮饲喂。处理如下(表7)：

1.阳性对照(PC)：不含酶的高能量基础日粮

2.阴性对照(NC)：不含酶的低能量基础日粮

3.NC+RVB：含500ppm多糖酶的低能量基础日粮

4.NC+5SEQ ID NO 2：含有5mg/kg木聚糖酶SEQ ID NO 2的低能量基础日粮

5.NC+5SEQ ID NO 2+2SEQ ID NO 17：具有5mg/kg木聚糖酶SEQ ID NO 2和5mg/kgα-半乳糖苷酶SEQ ID NO 17的低能量基础日粮

6.NC+2SEQ ID NO 2：具有2mg/kg木聚糖酶SEQ ID NO 2的低能量基础日粮

7.NC+2SEQ ID NO 2+2SEQ ID NO 17：具有2mg/kg木聚糖酶SEQ ID NO 2和5mg/kgα-半乳糖苷酶SEQ ID NO 17的低能量基础日粮

表7：处理

实验参数和分析

在第14天、第21天和第42天，测量体重增重(kg)并计算饲料转化率(g/g)。

结果和讨论

5mg/kg的木聚糖酶补充使得与饲喂NC的家禽相比BWG提高了8-75g，并且与饲喂PC的家禽相当。

2mg/kg的木聚糖酶补充使得与饲喂NC的家禽相比BWG提高了2-26g，并且与饲喂PC的家禽相当。

5mg/kg的木聚糖酶补充使得与饲喂NC的家禽相比FCR提高了0.013-0.043，并且与饲喂PC的家禽相当。

2mg/kg的木聚糖酶补充使得与饲喂NC的家禽相比FCR提高了0.001-0.016，并且与饲喂PC的家禽相当。

5mg/kg的木聚糖酶补充以及α-半乳糖苷酶使得与饲喂NC的家禽相比BWG提高了75-90g，并且与饲喂PC的家禽相当。

5mg/kg的木聚糖酶补充以及α-半乳糖苷酶显示出提高的FCR，与饲喂PC的家禽相当。

2mg/kg的木聚糖酶补充以及α-半乳糖苷酶使BWG提高了48g，并且这与饲喂PC的家禽相当。

当与饲喂NC的家禽相比时，饲喂RVB的禽类显示出提高的FCR。

表8.生长性能

结论

用木聚糖酶补充具有为0.82的高玉米A/X比率的基础饲料导致了显著提高的FCR和体重增重。

用木聚糖酶补充具有为0.74的中等玉米A/X比率的基础饲料导致了提高的FCR和体重增重。

用木聚糖酶补充具有为0.71的低玉米A/X比率的基础饲料导致了FCR和体重增重有很少的提高或没有提高。

对于补充多糖酶RVB和α-半乳糖苷酶，可以观察到相同的趋势。

实施例4：肉鸡体内试验；不同的玉米A/X比率

在2020-2021年间使用相同的实验设计进行了2项肉鸡研究

研究1：将Cobb 500雄性肉鸡从孵化饲养至第42天。有19只鸡/围栏和16个重复围栏/日粮。该研究是如表10所示使用基于玉米和豆粕的日粮在美国进行的。如表9所示，在阴性对照(NC)中，除了表观可代谢能量(AME)外，日粮是营养充足的。

研究2：将Ross 708雄性肉鸡从孵化饲养至第42天。有20只鸡/围栏和16个重复围栏/日粮。该研究是如表10所示使用基于玉米和豆粕的日粮在美国进行的。如表9所示，在阴性对照(NC)中，除了表观可代谢能量(AME)外，日粮是营养充足的。

根据表9，将日粮作为无补充的低能量日粮(阴性对照)、无补充的高能量日粮(阳性对照)或补充有玉米大豆酶(Cornsoyzyme)的低能量日粮饲喂。术语玉米大豆酶是指添加93g/MT量的SEQ ID NO 16的木聚糖酶和37g/MT的量的如在WO1994/23022中通过经校正的α-半乳糖苷酶的氨基酸序列SEQ IDNO:4定义的α-半乳糖苷酶。

表9.研究1和研究2中使用的实验性日粮的描述

¹所有日粮均包含1,000FYT/kg的植酸酶HiPhos(商购可得的6-植酸酶制备物)

表10.育雏期、生长期和育肥期中的示例性实验日粮

表11.经分析的实验日粮中使用的玉米的非淀粉多糖、阿拉伯糖和木糖含量

(计算的)＝根据总值和不溶性值的计算值。

表12.研究1中家禽从孵化至孵化后第42天的生长性能

¹与阴性对照相比，BW增益提高了30g＝FCR提高了1pt。

表13.研究2中家禽从孵化至孵化后第42天的生长性能

¹与阴性对照相比，BW增益提高了30g＝FCR提高了1pt。

结果和讨论

在含A:X比率≤0.70的玉米的日粮中补充玉米大豆酶不会影响经死亡率校正的FCR(mFCR)，并且当玉米的A:X比率为0.70时，FCR提高了0.5个点(表14，图9)。

在含A:X比率≤0.70的玉米的日粮中补充玉米大豆酶不会影响或者负面地影响经体重校正的FCR，并且当玉米的A:X比率为0.70时，FCR提高了1.3个点(表15，图11)。

表14.第0天至第42天的经死亡率校正的饲料转化率

mFCR，第0天至第42天	研究2	研究1
			A:X玉米比率	0.66	0.70
NC	1.511	1.520
			NC+CSZ	1.514	1.515
增量，FCR中的点	0.3	-0.5

表15.第0天至第42天的经体重校正的饲料转化率

BWcFCR，第0天至第42天	研究2	研究1
			A:X玉米比率	0.66	0.70
NC	1.511	1.516
			NC+CSZ	1.568	1.503
增量，FCR中的点	5.7	-1.3

本文描述和要求保护的发明的范围不受本文所公开的特定方面的限制，因为这些方面旨在作为本发明的几个方面的说明。任何等同的方面都旨在处于本发明的范围内。实际上，除了本文中示出和描述的那些修改之外，根据前面的描述，本发明的各种修改对于本领域技术人员将变得显而易见。此类修改也旨在落入所附权利要求的范围内。在有冲突的情况下，以本公开(包括定义)为准。

序列表

<110> 帝斯曼知识产权资产管理有限公司（DSM IP Assets B.V.）和诺维信专利公司（NOVOZYMES A/S）

<120> 动物饲料组合物

<130> 33219

<140> EP20175233.4

<141> 2020-05-18

<160> 17

<170> PatentIn第3.5版

<210> 1

<211> 391

<212> PRT

<213> 枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）

<400> 1

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370 375 380

<210> 10

<211> 565

<212> PRT

<213> 枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）

<400> 10

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Tyr Val Ser Ala Tyr Lys Gly Asp Asp Asn Gln Val Thr Ile Val Ala

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565

<210> 11

<211> 396

<212> PRT

<213> 枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）

<400> 11

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<210> 12

<211> 392

<212> PRT

<213> 枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）

<400> 12

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1 5 10 15

Gly Phe Gly Gly Ile Asn Leu Pro Ala Trp Ala Gly Asp Leu Thr Ala

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<210> 13

<211> 413

<212> PRT

<213> 枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）

<400> 13

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Gly Phe Gly Gly Ile Asn His Pro Ala Trp Ile Gly Asp Leu Thr Ala

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<210> 14

<211> 398

<212> PRT

<213> 枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）

<400> 14

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1 5 10 15

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<210> 15

<211> 382

<212> PRT

<213> 枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）

<400> 15

Gly Ser Val Tyr Ile Asn Phe Asn Thr Glu Tyr Gln Glu Ile Asp Gly

1 5 10 15

Phe Gly Ala Met Asn Ala Pro Gly Trp Val Asn Asp Leu Thr Ser Ala

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Gln Ala Thr Lys Ala Phe Gly Asn Gly Asp Gly Gln Met Gly Leu Ser

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<210> 16

<211> 391

<212> PRT

<213> 枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）

<400> 16

Ala Ala Ser Asp Val Thr Val Asn Val Ser Ala Glu Lys Gln Val Ile

1 5 10 15

Arg Gly Phe Gly Gly Met Asn His Pro Ala Trp Ala Gly Asp Leu Thr

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Ala Ala Gln Arg Glu Thr Ala Phe Gly Asn Gly Gln Asn Gln Leu Gly

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275 280 285

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305 310 315 320

Gly Asp Asn Lys Val Val Ile Val Ala Ile Asn Lys Ser Asn Thr Gly

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<211> 810

<212> PRT

<213> 枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）

<400> 17

Asn Arg Asn Thr Phe Phe Val Leu Phe Leu Leu Ile Ser Asn Leu Val

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165 170 175

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180 185 190

Asn Val Gln Asn Asp Gln Leu Thr Val Thr Cys Gln Gly Lys Glu Gln

195 200 205

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210 215 220

Thr Asn Gly Thr Leu Arg Pro Ala Gly Asn Thr Leu Gln Ile Asn Glu

225 230 235 240

Gly Thr Glu Ala Thr Leu Tyr Ile Ser Ala Ala Thr Asn Tyr Val Asn

245 250 255

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260 265 270

Lys Arg Ala Met Gln Ile Pro Tyr Glu Lys Ala Leu Lys Asn His Ile

275 280 285

Ala Tyr Tyr Lys Lys Gln Phe Asp Arg Val Arg Leu Thr Leu Pro Ala

290 295 300

Gly Lys Ala Ser Gln Leu Glu Thr Pro Lys Arg Ile Glu Asn Phe Gly

305 310 315 320

Asn Gly Glu Asp Met Ala Met Ala Ala Leu Leu Phe His Tyr Gly Arg

325 330 335

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Asn Leu Ser Glu Thr His Ser Pro Leu Phe Ser Met Leu Lys Asp Leu

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Ser Val Thr Gly Ala Glu Thr Ala Arg Thr Met Tyr Asp Cys Arg Gly

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805 810

Claims (23)

1.至少一种糖酶与A/X玉米比率大于0.70，优选地大于0.705、优选地大于0.71、优选地大于0.715、优选地大于0.72、优选地大于0.725、优选地大于0.73、优选地大于0.735、优选地大于0.74、优选地大于0.745、优选地大于0.75、优选地大于0.76、优选地大于0.77、优选地大于0.78、优选地大于0.79、优选地大于0.80的动物饲料的组合用于提高所述动物饲料的营养价值的用途。

2.至少一种糖酶与A/X玉米比率大于0.70，优选地大于0.705、优选地大于0.71、优选地大于0.715、优选地大于0.72、优选地大于0.725、优选地大于0.73、优选地大于0.735、优选地大于0.74、优选地大于0.745、优选地大于0.75、优选地大于0.76、优选地大于0.77、优选地大于0.78、优选地大于0.79、优选地大于0.80的动物饲料的组合用于增加所述动物饲料的消化率的用途。

3.至少一种糖酶与A/X玉米比率大于0.70，优选地大于0.705、优选地大于0.71、优选地大于0.715、优选地大于0.72、优选地大于0.725、优选地大于0.73、优选地大于0.735、优选地大于0.74、优选地大于0.745、优选地大于0.75、优选地大于0.76、优选地大于0.77、优选地大于0.78、优选地大于0.79、优选地大于0.80的动物饲料的组合用于提高动物中的一种或多种性能参数的用途。

4.根据权利要求3所述的用途，其中动物中的所述一种或多种性能参数是饲料转化率。

5.至少一种糖酶与A/X总饲料比率大于0.91，优选地大于0.95、优选地大于1.00、优选地大于1.05、优选地大于1.10、优选地大于1.15、优选地大于1.20、优选地大于1.25、优选地大于1.30的动物饲料的组合用于提高所述动物饲料的营养价值的用途。

6.至少一种糖酶与A/X总饲料比率大于0.91，优选地大于0.95、优选地大于1.00、优选地大于1.05、优选地大于1.10、优选地大于1.15、优选地大于1.20、优选地大于1.25、优选地大于1.30的动物饲料的组合用于增加所述动物饲料的消化率的用途。

7.至少一种糖酶与A/X总饲料比率大于0.91，优选地大于0.95、优选地大于1.00、优选地大于1.05、优选地大于1.10、优选地大于1.15、优选地大于1.20、优选地大于1.25、优选地大于1.30的动物饲料的组合用于提高动物中的一种或多种性能参数的用途。

8.根据权利要求7所述的用途，其中动物中的所述一种或多种性能参数是饲料转化率。

9.根据权利要求1至9中任一项所述的用途，其中所述至少一种糖酶选自以下组：葡聚糖酶、木聚糖酶、果胶酶、半乳糖苷酶、纤维素、甘露聚糖酶、脱支酶或淀粉酶。

10.一种动物饲料

a.所述动物饲料包含大于0.70，优选地大于0.705、优选地大于0.71、优选地大于0.715、优选地大于0.72、优选地大于0.725、优选地大于0.73、优选地大于0.735、优选地大于0.74、优选地大于0.745、优选地大于0.75、优选地大于0.76、优选地大于0.77、优选地大于0.78、优选地大于0.79、优选地大于0.80的A/X比率；以及

b.至少一种糖酶。

11.一种动物饲料

a.所述动物饲料包含大于0.91，优选地大于0.95、优选地大于1.00、优选地大于1.05、优选地大于1.10、优选地大于1.15、优选地大于1.20、优选地大于1.25、优选地大于1.30的A/X总饲料比率；以及

b.至少一种糖酶。

12.根据权利要求10或11所述的动物饲料，其中所述至少一种糖酶选自由以下项组成的组：枯草芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌或饲料类芽孢杆菌、疏棉状嗜热丝孢菌、里氏木霉、经遗传修饰的米曲霉或经遗传修饰的解淀粉芽孢杆菌。

13.根据权利要求10至12中任一项所述的动物饲料，其中所述至少一种糖酶选自以下组：葡聚糖酶、木聚糖酶、果胶酶、半乳糖苷酶、纤维素、甘露聚糖酶、脱支酶或淀粉酶。

14.根据权利要求10至13中任一项所述的动物饲料，其中将所述木聚糖酶以50-500mg/kg动物饲料，例如60mg/kg动物饲料至450mg/kg动物饲料、70mg/kg动物饲料至400mg/kg动物饲料、80mg/kg动物饲料至350mg/kg动物饲料、90mg/kg动物饲料至300mg/kg动物饲料、100mg/kg动物饲料至300mg/kg动物饲料、110mg/kg动物饲料至250mg/kg动物饲料、120mg/kg动物饲料至200mg/kg动物饲料，或这些区间的任何组合的量添加。

15.一种制造A/X玉米比率大于0.70，优选地大于0.705、优选地大于0.71、优选地大于0.715、优选地大于0.72、优选地大于0.725、优选地大于0.73、优选地大于0.735、优选地大于0.74、优选地大于0.745、优选地大于0.75、优选地大于0.76、优选地大于0.77、优选地大于0.78、优选地大于0.79、优选地大于0.80的动物饲料的方法，所述方法包括以下步骤

a)确定饲料中的所述A/X玉米比率

b)将至少一种糖酶添加到所述饲料中，以及

c)使用以下等式2，根据所述饲料中的所述A/X玉米比率调整所述动物饲料中的所述至少一种糖酶的量

等式2：

并且与非酶处理对照相比，经体重校正的饲料转化率提高。

16.一种制造A/X总饲料比率大于0.91，优选地大于0.95、优选地大于1.00、优选地大于1.05、优选地大于1.10、优选地大于1.15、优选地大于1.20、优选地大于1.25、优选地大于1.30的动物饲料的方法，所述方法包括以下步骤：

a)确定饲料中的所述A/X总饲料比率

b)将至少一种糖酶添加到所述饲料中，以及

c)使用以下等式2，根据所述饲料中的所述A/X总饲料比率调整所述动物饲料中的所述至少一种糖酶的量

等式2：

并且与非酶处理对照相比，经体重校正的饲料转化率提高。

17.根据权利要求15或16所述的方法，其中步骤a)是通过选自由以下组成的组的方法执行的：湿化学、HPLC、GLC、分光光度法和酶测定。

18.一种制造根据权利要求11至14中任一项所述的动物饲料的计算机实现的方法，其中(a)包括以下步骤：

A)对动物饲料样品进行

A1)近红外(NIR)光谱法以获得NIR光谱；

A2)将A1)中获得的NIR光谱中相应波长或波数处的吸收强度与校准图表或等式进行匹配

A3)对样品中的膳食纤维，特别是阿拉伯木聚糖和木糖的定量分析

A4)确定经处理的饲料原料和/或饲料的总量中的A/X比率；以及

B)定量评估酶活性降低的倍数，作为所测定的A/X比率的函数；

C)使用以下等式2确定补偿活性降低所需的至少一种酶的总量

等式2：

并且与非酶处理对照相比，经体重校正的饲料转化率提高；

D)以步骤C)中确定的量将所述量的至少一种酶添加到所述动物饲料中。

19.根据权利要求18所述的计算机实现的方法，其中所述步骤A2进一步包括通过以下步骤生成校准图表或等式的步骤

A-i)对如权利要求1所述的步骤A)中的动物饲料样品进行近红外(NIR)光谱法；

A-ii)将在步骤A-i)中获得的NIR光谱中的相应波长或波数处的吸收强度与在权利要求1中通过使样品经受以下而确定的对应参数及其值进行匹配

a1)样品中的A/X比率的定量分析；

a2)所述动物饲料总量中的A/X比率的测定；以及

A-iii)将步骤A-ii)的匹配绘制为校准图表和/或在校准等式中将步骤a1)和a2)中确定的参数表示为在步骤A-iii)中匹配的相应波长或波数处的吸收强度的函数。

20.根据权利要求18或19中任一项所述的方法或计算机实现的方法，其中所述A/X比率是所述A/X玉米比率并且其中所述A/X玉米比率大于0.70，优选地大于0.705、优选地大于0.71、优选地大于0.715、优选地大于0.72、优选地大于0.725、优选地大于0.73、优选地大于0.735、优选地大于0.74、优选地大于0.745、优选地大于0.75、优选地大于0.76、优选地大于0.77、优选地大于0.78、优选地大于0.79、优选地大于0.80。

21.根据权利要求18或19中任一项所述的方法或计算机实现的方法，其中所述A/X比率是所述A/X总饲料比率并且其中所述A/X总饲料比率大于0.91，优选地大于0.95、优选地大于1.00、优选地大于1.05、优选地大于1.10、优选地大于1.15、优选地大于1.20、优选地大于1.25、优选地大于1.30。

22.根据权利要求15至21中任一项所述的方法或计算机实现的方法，其中所述至少一种糖酶选自由以下项组成的组：枯草芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌或饲料类芽孢杆菌、疏棉状嗜热丝孢菌、里氏木霉、经遗传修饰的米曲霉或经遗传修饰的解淀粉芽孢杆菌。

23.根据权利要求15至22中任一项所述的方法或计算机实现的方法，其中所述至少一种糖酶选自以下组：葡聚糖酶、木聚糖酶、果胶酶、半乳糖苷酶、纤维素、甘露聚糖酶、脱支酶或淀粉酶。

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