ES2712466T3 - Gránulos de enzima para pienso para animales - Google Patents

Abstract

Gránulo tratado con vapor adecuado para una composición de pienso que comprende una enzima y una sal de zinc de un ácido orgánico, donde el gránulo comprende un núcleo y una capa de recubrimiento que rodea el núcleo, y donde la mezcla de la enzima y la sal de zinc de un ácido orgánico está presente en el núcleo del gránulo.

Description

DESCRIPCION

Granulos de enzima para pienso para animales

CAMPO DE LA INVENCION

[0001] La presente invencion se refiere a granulos de enzima, especialmente para pienso para animales. La presente invencion ademas se refiere a la fabricacion de dichos granulos.

[0002] El alcance de la invencion esta definido por las reivindicaciones.

ANTECEDENTES DE LA INVENCION

[0003] En la tecnica en lo que se refiere a pienso para animales es un hecho bien conocido que la granulacion del pienso es un desideratum, ya que la granulacion del pienso aumenta la digestibilidad de especialmente la fraccion de almidon del pienso.

Ademas, es conocido que la granulacion de pienso para animales reduce problemas de polvo.

[0004] En el proceso de produccion de granulos de pienso es considerado necesario tratar con vapor el pienso triturado para matar microorganismos patogenos si estan presentes y gelatinizar parcialmente el almidon para mejorar las propiedades ffsicas del granulo, con lo cual un tratamiento de vapor de alrededor de 70-120°C es apropiado.

Compuestos activos presentes en los granulos de pienso tales como enzimas no son muy estables a altas temperaturas y humedades, y por lo tanto, se tiene que usar un exceso grande de enzimas, o componentes de pienso sin enzimas se granulan y se tratan con vapor, donde despues un lodo o solucion que contiene enzimas es recubierto sobre los granulos tratados con vapor.

Sin embargo, este proceso de recubrimiento es voluminoso y frecuentemente no es compatible con el equipo triturador de pienso.

[0005] Un intento para obtener granulos de enzimas mejorados para pienso es descubierto en WO 92/12645.

WO 92/12645 describe granulos-T, que son recubiertos con una grasa o una cera.

Dichos granulos-T se mezclan con componentes de pienso tratados con vapor y posteriormente se granulan.

Con esta invencion era posible tratar termicamente los granulos que comprendfan enzimas y evitar el recubrimiento voluminoso con enzimas despues del tratamiento termico.

El uso de granulos-T recubiertos de cera fue una mejora significativa en este campo ya que era posible mantener una actividad enzimatica aceptable durante la granulacion con vapor.

Otro intento para mejorar la estabilidad de la granulacion de granulos de enzimas es descrito en WO 2006034710 donde se ha descubierto que el recubrimiento de los granulos de enzimas con un recubrimiento de sal mejora la estabilidad de la granulacion.

US 5066 498 trata sobre suplementos nutricionales y describe la metionina de zinc como oligoelemento esencial para la reproduccion y el mantenimiento del crecimiento y WO 03/056934 se refiere a la encapsulacion de enzimas mediante el recubrimiento con una mezcla de lfpidos y compuestos hidrofobos de alto punto de fusion.

[0006] Algunos molinos de pienso son ejecutados bajo condiciones muy agresivas que son todavfa muy agresivas para los granulos de enzimas mejorados, por lo tanto sigue habiendo una demanda para una estabilidad de la granulacion mejorada.

[0007] La presente invencion proporciona una solucion a este problema por la incorporacion de una sal de zinc de una acido organico junto con la enzima.

[0008] Es conocido en la tecnica usar sales inorganicas de zinc y magnesio para estabilizar granulos enzimaticos para piensos para animales, ver WO 97/05245. Se ha descubierto sorprendentemente que el uso de sales de zinc de acidos organicos aumenta la estabilidad enzimatica despues de la granulacion pero tambien durante la granulacion con vapor.

[0008] Revy et al., Animal Science and Technology, vol. 116, 2004 paginas 93-112, divulga granulos que comprenden una enzima (fitasa) y metionina de zinc y su uso para alimentar animales.

RESUMEN DE LA INVENCION

[0009] Un objeto de la presente invencion es proporcionar un granulo enzimatico con buena estabilidad de granulacion.

Un segundo objeto de la presente invencion es proporcionar un simple proceso para obtener granulos enzimaticos con buena estabilidad de granulacion.

[0010] Se ha descubierto sorprendentemente que las sales de zinc de acidos organicos, tienen un efecto muy positivo en la estabilidad enzimatica durante la granulacion, y estabilidad per se, si se formulan junto con la enzima.

[0011] La presente invencion proporciona asf en un primer aspecto un granulo tratado con vapor adecuado para pienso que comprende una enzima y una sal de zinc de un acido organico, donde el granulo comprende un nucleo y una capa que rodea al nucleo, y la enzima y la sal de zinc de un acido organico esta presente en el nucleo del granulo.

[0012] La presente invencion proporciona en un segundo aspecto un proceso de preparacion de los granulos de la invencion, que comprende las etapas de:

a) preparar un nucleo que comprende una sal de zinc de un acido organico y una enzima, y

b) recubrir el nucleo con un material de recubrimiento.

La presente invencion ademas proporciona composiciones de pienso que comprenden componentes de pienso y el granulo de enzima de la invencion.

DESCRIPCION DETALLADA DE LA INVENCION

Introduccion

[0013] Hemos descubierto sorprendentemente que es posible aumentar la estabilidad de enzimas comprendidas en granulos durante la granulacion con vapor anadiendo una sal de zinc de un acido organico al nucleo del granulo. Definiciones

[0014] Mediante el termino "solucion" se entiende una mezcla homogenea de dos o mas sustancias.

[0015] Mediante el termino "suspension" se entiende partfculas finas suspendidas en un lfquido.

[0016] Mediante el termino "tamano de partfcula" se entiende el diametro medio de masa de los granulos.

[0017] Mediante el termino “nucleo de enzima” se entiende el granulo crudo que comprende la enzima, por lo tanto el granulo antes de que se apliquen los recubrimientos.

[0018] A menos que se defina de otro modo, todos los terminos tecnicos y cientfficos usados aqrn tienen el mismo significado segun lo entiende comunmente un experto en la materia a la que esta invencion pertenece.

Como se usa en la especificacion y reivindicaciones, el singular "un", "uno" y "el" incluyen las referencias plurales a menos que el contexto especifique claramente lo contrario.

Por ejemplo, el termino granulo puede incluir una pluralidad de granulos.

[0019] Mediante “sal de zinc organica” se entiende una sal de zinc de un acido organico.

El granulo

[0020] Cuando se hace referencia al granulo de la presente invencion este puede bien ser un unico granulo o diferentes granulos.

[0021] El granulo de la presente invencion puede tener una estructura de matriz donde los componentes se mezclan homogeneamente o puede haber un granulo estratificado que comprende un nucleo y una o mas capas que rodean el nucleo.

[0022] El granulo de la presente invencion, que es particularmente adecuado para la granulacion con vapor y como parte de una composicion de pienso granulada tratada con vapor, comprende una region que comprende enzimas donde una sal de zinc de un acido organico esta presente para estabilizar la enzima.

En una forma de realizacion particular de la presente invencion la enzima y la sal de zinc de un acido organico esta presente en una matriz homogenea.

La matriz que comprende la enzima y la sal de zinc de un acido organico pueden comprender otros componentes auxiliares.

[0023] Se ha descubierto que los tamanos de partfcula adecuados del granulo de la presente invencion son 20-2000 pm, mas particular 50-1000 pm. Aun incluso 75-700 pm. El granulo de la presente invencion puede en una forma de realizacion particular tener un tamano de partfcula por debajo de 700 pm.

En otra forma de realizacion particular de la presente invencion el tamano de partfcula del granulo final es 100-800 pm.

En una forma de realizacion mas particular de la presente invencion el tamano de partfcula del granulo final es 300­ 600 pm.

En una forma de realizacion mas particular de la presente invencion el tamano de partfcula es 450-550 pm.

En otra forma de realizacion particular de la presente invencion el tamano de partfcula del granulo final es inferior a 400 pm.

En otra forma de realizacion mas particular el tamano de partfcula de los granulos de la presente invencion es superior a 250 pm e inferior a 350 pm.

[0024] En una forma de realizacion particular de la presente invencion el tamano de partfcula del granulo de la presente invencion es entre 210 y 390 pm.

La matriz que comprende enzimas

[0025] La matriz o region que comprende enzimas del granulo puede ser el nucleo del granulo.

[0026] La region que comprende enzimas puede ser una mezcla homogenea que comprende una enzima y una sal de zinc de acido organico. Dicha mezcla homogenea puede constituir bien el nucleo o puede constituir una capa matricial que rodea una partfcula de nucleo inerte. La matriz enzimatica puede comprender agentes de granulacion adicionales.

[0027] La partfcula de nucleo, que consiste en una mezcla homogenea comprendiendo la enzima y la sal de zinc de un acido tiene en una forma de realizacion particular un tamano de partfcula de 20-800 pm. En una forma de realizacion mas particular de la presente invencion el tamano de partfcula del nucleo es 50-500 pm. En una forma de realizacion aun mas particular de la presente invencion el tamano de partfcula del nucleo es 100-300 pm. En una forma de realizacion mas particular de la presente invencion el tamano de partfcula del nucleo es 150-250 pm. En otra forma de realizacion particular de la presente invencion el tamano de partfcula del nucleo es 400-500 pm.

[0028] La partfcula del nucleo comprendiendo la enzima tiene en una forma de realizacion particular un tamano de partfcula de 20-800 pm. En una forma de realizacion mas particular de la presente invencion el tamano de partfcula del nucleo es 50-500 pm. En una forma de realizacion aun mas particular de la presente invencion el tamano de partfcula del nucleo es 100-300 pm. En una forma de realizacion mas particular de la presente invencion el tamano de partfcula del nucleo es 150-250 pm. En otra forma de realizacion particular de la presente invencion el tamano de partfcula del nucleo es 400-500 pm.

Partfcula de nucleo inerte:

[0029] Partfculas de nucleo inertes tales como partfculas de placebo, partfculas portadoras, nucleos inactivos, partfculas inactivas, partfculas sin igual, partfculas o semillas no activas, son partfculas que no comprenden enzimas o solo una cantidad menor de enzimas sobre la cual una mezcla de recubrimiento que comprende la enzima pueden ser estratificadas. Se pueden formular con materiales organicos o inorganicos tales como sales inorganicas, azucares, polialcoholes, moleculas organicas pequenas tales como acidos organicos o sales, almidon, harina, harina tratada, celulosa, polisacaridos, minerales tales como arcillas o silicatos o una combinacion de dos o mas de estos.

[0030] En una forma de realizacion particular de la presente invencion las partfculas para ser recubiertas son partfculas inactivas. En una forma de realizacion mas particular de la presente invencion el material de las partfculas del nucleo es seleccionado del grupo consistente en sales inorganicas, polialcoholes, moleculas organicas pequenas, almidon, harina, celulosa y minerales.

[0031] Partfculas inertes se pueden producir por una variedad de tecnicas de granulacion incluyendo: cristalizacion, precipitacion, recubrimiento en bombo, recubrimiento de lecho fluido, aglomeracion de lecho fluido, atomizacion giratoria, extrusion, formacion de perlas, esferonizacion, metodos de reduccion de tamano, granulacion en tambor, y/o granulacion de alta cizalladura.

Enzimas

[0032] La enzima de pienso en el contexto de la presente invencion puede ser cualquier enzima o una combinacion de diferentes enzimas que son adecuadas para ser dadas a un animal, lo que significa que de una manera u otra sera nutricionalmente bueno para el animal que se coma la enzima. Por consiguiente, cuando se hace referencia a "una enzima" esto en general se entendera para incluir una enzima de pienso o una combinacion de enzimas de pienso. En una forma de realizacion particular no se interpreta como incluyendo enzimas que tiene una funcion terapeutica en el sentido medico.

[0033] Las enzimas de pienso deberfan ser de calidad de pienso/alimento, lo que significa por tanto que estas no pueden ser nocivas para el animal y ser de una calidad de pienso/alimento que deberfan cumplir especificaciones de pureza recomendada para enzimas de calidad alimenticia. En una forma de realizacion particular esto significa que la enzima cumple especificaciones de pureza recomendada para enzimas de calidad alimentaria dada por la Comite Mixto FAO/OMS de Expertos en Aditivos Alimentarios (JECFA) y el codigo sobre los productos qufmicos alimentarios (FCC).

[0034] La enzima debe en una forma de realizacion particular comprender menos de 30 bacterias coliformes por gramo y comprender una cuenta viable inferior a 50000/g.

[0035] Los granulos de la invencion incluyen entre aproximadamente 0.0005 a aproximadamente 50 % en una base de peso en seco del componente enzimatico del granulo.

Por ejemplo, el porcentaje en peso de enzima en las formas de realizacion de la invencion comprende al menos 0.0005 a aproximadamente 25%, al menos 0.001 a aproximadamente 15%, al menos 0.01 hasta aproximadamente 10%, al menos 0.1 hasta aproximadamente 10%, al menos 1.0 hasta aproximadamente 10%, al menos 1.0 hasta aproximadamente 8%, al menos 1.0 hasta aproximadamente 5%, y al menos 2.0 hasta al menos 5% en el granulo. Dosis tfpicas de 25 a 400 gramos de los granulos estables enzimaticos por tonelada de pienso entregaran aproximadamente 0.0001 a aproximadamente 80 gramos de protefna enzimatica activa por tonelada de pienso, y los granulos enzimaticos se pueden dosificar hasta tanto como 5000 gramos por tonelada de pienso.

[0036] Debe entenderse que variantes enzimaticas (producidas, por ejemplo, por tecnicas recombinantes) se incluyen en el significado del termino "enzima".

Ejemplos de tales variantes enzimaticas se describe, por ejemplo en EP 251,446 (Genencor), WO 91/00345 (Novo Nordisk), EP 525,610 (Solvay) y WO 94/02618 (Gist-Brocades NV).

[0037] Las enzimas se pueden clasificar basandose en el manual Enzyme Nomenclature de NC-IUBBM, 1992), ver tambien la pagina ENZYME en internet: http://www.expasv.ch/enzvme/. ENZYME es un repositorio de informacion relativa a la nomenclatura de enzimas.

Esta principalmente basada en las recomendaciones de Nomenclature Committee of the International Union of Biochemistry and Molecular Biology (IUB-MB), Academic Press, Inc., 1992, y describe cada tipo de enzima caracterizada para el cual un numero de EC (Comision Enzimatica) ha sido proporcionado (Bairoch A. The ENZYME database, 2000, Nucleic Acids Res 28:304-305).

Esta nomeclatura enzimatica de IUB-MB se basa en su especificidad de sustrato y ocasionalmente en su mecanismo molecular; tal clasificacion no refleja las caracterfsticas estructurales de estas enzimas.

[0038] Otra clasificacion de ciertas enzimas glicosido hidrolasa, tal como endoglucanasa, xilanasa, galactanasa, mananasa, dextranasa y alfa-galactosidasa, en familias basadas en similitudes de secuencias de aminoacidos ha sido propuesta hace anos.

Actualmente se incluyen en 90 familias diferentes: ver el sitio de internet CAZy(ModO) (Coutinho, P.M. & Henrissat, B. (1999) servidor de enzimas activas de carbohidrato en URL: http://afmb.cnrs-mrs.fr/~cazy/CAZy/index.html (papeles correspondientes: Coutinho, P.M. & Henrissat, B. (1999) Carbohydrate-active enzymes: an integrated database approach. En "Recent Advances in Carbohydrate Bioengineering", H.J. Gilbert, G. Davies, B. Henrissat and B. Svensson eds., The Royal Society of Chemistry, Cambridge, pp. 3-12; Coutinho, P.M. & Henrissat, B. (1999) The modular structure of cellulases and other carbohydrate-active enzymes: an integrated database approach. En "Genetics, Biochemistry and Ecology of Cellulose Degradation"., K. Ohmiya, K. Hayashi, K. Sakka, Y. Kobayashi, S. Karita y T. Kimura eds., Uni Publishers Co., Tokio, pags. 15-23).

[0039] Los tipos de enzimas que se pueden incorporar en granulos de la invencion incluyen oxidorreductasas (EC 1.­ .-.-), transferasas (EC 2.-.-.-), hidrolasas (EC 3.-.-.-), liasas (EC 4.-.-.-), isomerasas (EC 5.-.-.-) y ligasas (EC 6.-.-.-).

[0040] Las oxidorreductasas preferidas en el contexto de la invencion son peroxidasas (EC 1.11.1), lacasas (EC 1.10.3.2) y glucosa oxidasas (EC 1.1.3.4). Un ejemplo de una oxidorreductasa disponible comercialmente (EC 1.-.-.-) es Gluzyme™ (enzima disponible por Novozymes A/S). Otras oxidorreductasas estan disponibles de otros proveedores.

Transferasas preferidas son transferasas en cualquiera de las siguientes sub-clases:

a transferasas que transfieren grupos mono-carbono (EC 2.1)

b transferasas que transfieren residuos de aldehfdo o de cetona (EC 2.2); aciltransferasas (EC 2.3) c glicosiltransferasas (EC 2.4)

d transferasas que transfieren grupos alquilo o arilo, aparte de grupos metilo (EC 2.5); y

e transferasas que transfieren grupos nitrogenados (EC 2.6).

[0041] Un tipo mas preferido de transferasa en el contexto de la invencion es una transglutaminasa (protefnaglutamina Y-glutamiltransferasa; EC 2.3.2.13).

[0042] Otros ejemplos de transglutaminasas adecuadas estan descritos en WO 96/06931 (Novo Nordisk A/S).

[0043] Hidrolasas preferidas en el contexto de la invencion son: hidrolasas de ester carboxflico (EC 3.1.1.-) tales como lipasas (EC 3.1.1.3) fitasas (EC 3.1.3.-), por ejemplo 3-fitasas (EC 3.1.3.8) y 6-fitasas (EC 3.1.3.26) glicosidasas (EC 3.2, que caen dentro de un grupo denominado aquf como "carbohidrasas"), tales como a-amilasas (EC 3.2.1.1); peptidasas (EC 3.4, tambien conocidas como proteasas); y otras carbonil hidrolasas.

Ejemplos de fitasas disponibles comercialmente incluyen fitasa de Bio-Feed™ (Novozymes), serie de productos Ronozyme™ (DSM Nutritional Products), Natuphos™ (BASF), Finase™ (AB Enzymes), y la serie de productos de Phyzyme™ (Danisco).

Otras fitasas preferidas incluyen aquellas descritas en WO 98/28408, WO 00/43503, y WO 03/066847.

[0044] En el presente contexto, el termino "carbohidrasa" se utiliza para indicar no solo enzimas capaces de descomponer cadenas de carbohidrato (por ejemplo almidones o celulosa) de especialmente estructuras anulares de cinco y de seis elementos (es decir glicosidasas, EC 3.2), pero tambien enzimas capaces de isomerizar carbohidratos, por ejemplo estructuras anulares de seis elementos tal como D-glucosa hasta estructuras anulares de cinco elementos tal como D-fructosa.

[0045] Carbohidrasas relevantes incluyen las siguientes (numeros EC en parentesis): a-amilasas (EC 3.2.1.1), pamilasas (EC 3.2.1.2), glucano 1,4-a-glucosidasas (EC 3.2.1.3), endo-1,4-beta-glucanasa (celulasas, EC 3.2.1.4), endo-1,3(4)-p-glucanasas (EC 3.2.1.6), endo-1,4-p-xilanasas ^{( E c} 3.2.1.8), dextranasas (EC 3.2.1.11), quitinasas (EC 3.2.1.14), poligalacturonasas (EC 3.2.1.15), lisozimas (EC 3.2.1.17), p-glucosidasas (EC 3.2.1.21), agalactosidasas (EC 3.2.1.22), p-galactosidasas (EC 3.2.1.23), amilo-1,6-glucosidasas (EC 3.2.1.33), xilano 1,4-pxilosidasas (EC 3.2.1.37), glucano endo-1,3-p-D-glucosidasas (EC 3.2.1.39), a-dextrina endo-1,6-a-glucosidasas (EC3.2.1.41), sacarosa a-glucosidasas (EC 3.2.1.48), glucano endo-1,3-a-glucosidasas (EC 3.2.1.59), glucano 1,4-p-glucosidasas (EC 3.2.1.74), glucano endo-1,6-p-glucosidasas (EC 3.2.1.75), galactanasas (EC 3.2.1.89), arabinano endo-1,5-a-L-arabinosidasas (EC 3.2.1.99), lactasas (EC 3.2.1.108), quitosanasas (EC 3.2.1.132) y xilosa isomerasas (EC 5.3.1.5).

[0046] En el presente contexto una fitasa es una enzima que cataliza la hidrolisis de fitato (mioinositol hexakisfosfato) a (1) mioinositol y/o (2) mono-, di-, tri-, tetra- y/o pentafosfatos de los mismos y (3) fosfato inorganico.

[0047] Tres diferentes tipos de fitasas son conocidos: una denominada 3-fitasa (nombre alternativo 1 -fitasa; una mioinositol hexafosfato 3-fosfohidrolasa, EC 3.1.3.8), llamada 4-fitasa (nombre alternativo 6-fitasa, nombre basado en el sistema de numeracion 1L y no de numeracion 1D, EC 3.1.3.26), y una llamada 5-fitasa (EC 3.1.3.72). Para los fines de la presente invencion, los tres tipos se incluyen en la definicion de fitasa.

[0048] Para los fines de la actividad de fitasa de la presente invencion puede ser, preferiblemente es, determinado en la unidad de FYT, una FYT que es la cantidad de enzima que libera 1 micro-mol ortofosfato inorganico por min. bajo las siguientes condiciones: pH 5.5; temperatura 37°C; sustrato: fitato de sodio (C6H6O24P6Na12) en una concentracion de 0.0050 mol/l.

Ensayos de fitasa adecuados estan descritos en ejemplo 1 de WO 00/20569.

FTU es para determinar la actividad de fitasa en el pienso y premezcla.

[0049] Ejemplos preferidos de fitasas son fitasas microbianas, tales como fitasas fungicas o bacterianas, por ejemplo derivadas de los siguientes:

i) Ascomicetos, tales como los descritos en EP 684313 o US 6139902; Aspergillus awamori PHYA (SWISSPROT P34753, gen 133:55-62 (1993)); Aspergillus niger (ficuum) PHYA (SWISSPROT P34752, Gene 127:87-94 (1993), EP 420358); Aspergillus awamori PHYB (SWISSPROT P34755, Gene 133:55-62 (1993)); Aspergillus niger PHYB (SWlSSPROT P34754, Biochem. Biophys. Res. Commun. 195:53-57(1993)); Emericella nidulans PHYB (SWISSPROT 000093, Biochim. Biophys. Acta 1353:217-223 (1997)); ii) Thermomyces o Humicola, tal como la fitasa de Thermomyces lanuginosus descrita en WO 97/35017; iii) Basidiomicetos, tal como Peniophora (WO 98/28408 y WO 98/28409);

v) Otras fitasas fungicas tales como las descritas en JP 11000164 (fitasa de Penicillium), o WO98/13480 (Monascus anka fitasa);

v) Bacillus, tal como Bacillus subtilis PHYC (SWISSPROT 031097, Appl. Environ. Microbiol. 64:2079-2085 (1998)); Bacillus sp. PHYT (SWISSPROT 066037, FEMS Microbiol. Lett. 162:185-191 (1998); Bacillus subtilis PHYT (SWISSPROT P42094, J. Bacteriol. 177:6263-6275 (1995)); la fitasa descrita en AU 724094, o WO 97/33976;

vi) Escherichia coli (por ejemplo US 6110719);

vii) Citrobacter, tal como Citrobacter freundii (descrita en WO 2006/038062, WO 2006/038128, o con la secuencia de UniProt Q676V7), Citrobacter braakii (descrita en WO 2004/085638 (Geneseqp ADU50737), y WO 2006/037328), y Citrobacter amalonaticus o Citrobacter gillenii (descrita en ^{w O} 2006/037327); viii) Otras fitasas bacterianas como la fitasa de Buttiauxella (descritas en WO 2006/043178);

ix) Fitasas de levadura, por ejemplo de Schwanniomyces occidentalis (por ejemplo descritad en US 5830732); al igual que

x) Una fitasa con una secuencia de aminoacidos de al menos 75% de identidad a una secuencia de aminoacidos madura de cualquiera de las fitasas de (i)-(ix);

xi) Una variante de la fitasa de (i)-(ix) que comprende una sustitucion, eliminacion, y/o insercion de uno o varios aminoacidos;

xii) Una variante alelica de la fitasa de (i)-(ix);

xiii) Un fragmento de la fitasa de (i) - (ix) que retiene actividad de fitasa; o

xiv) Un polipeptido sintetico disenado basandose en (i)-(ix) y teniendo actividad de fitasa.

Ejemplos preferidos de variantes de fitasa se describen en, por ejemplo, WO 99/49022, WO 99/48380, WO 00/43503, EP 0897010, EP 0897985, WO 2003/66847, al igual que en los mencionados arriba WO 2006/038063, WO 2006/038128, y WO 2006/43178).

[0050] Ejemplos de proteasas (peptidasas) disponibles comercialmente incluyen Kannase™, Everlase™, Esperase™, Alcalase™, Neutrase™, Durazym™, Savinase™, Ovozyme™, Pyrase™, tripsina pancreatica NOVO (PTN), Bio-Feed™ Pro y Clear-Lens™ Pro (todos disponibles por Novozymes A/S, Bagsvaerd, Dinamarca).

Otras proteasas preferidas incluyen aquellas descritas en WO 01/58275 y WO 01/58276.

[0051] Otras proteasas disponibles comercialmente incluyen Ronozyme™ Pro, Maxatase™, Maxacal™, Maxapem™, Opticlean™, Propease™, Purafect™ y Ox™ Purafect (disponible por Genencor International Inc., Gist-Brocades, BASF, o DSM Nutritional Products).

[0052] Ejemplos de lipasas disponibles comercialmente incluyen Lipex™, Lipoprime™, Lipopan™, Lipolase™, Lipolase™, ultra Lipozyme™, Palatase™, Resinase™, Novozym™ 435 y Lecitase™ (todas disponibles por Novozymes A/S).

[0053] Otras lipasas disponibles comercialmente incluyen Lumafast™ (lipasa de Pseudomonas mendocina de Genencor International Inc.); Lipomax™ (lipasa de Ps. pseudoalcaligenes de Gist-Brocades/Genencor Int. Inc.; y lipasa de Bacillus sp. de enzimas de Solvay. Otras lipasas estan disponibles de otros proveedores.

[0054] Ejemplos de carbohidrasas disponibles comercialmente incluyen Alpha-Gal™, Bio-Feed™ Alpha, Bio-Feed™ Beta, Bio-Feed™ Plus, Bio-Feed™ Wheat, Bio-Feed™ Z, Novozyme™ 188, Carezyme™, Celluclast™, Cellusoft™, Celluzyme™, Ceremyl™, Citrozym™, Denimax™, Dezyme™, Dextrozyme™, Duramyl™, Energex™, Finizym™, Fungamyl™, Gamanase™, Glucanex™, Lactozym™, Liquezyme™, Maltogenase™, Natalase™, Pentopan™, Pectinex™, Promozyme™, Pulpzyme™, Novamyl™, Termamyl™, AMG™ (Amiloglucosidasa Novo), Maltogenase™, Sweetzyme™ y Aquazym™ (todas disponibles por Novozymes A/S).

Otras carbohidrasas estan disponibles de otros proveedores, tales como las series de productos Roxazyme™ y Ronozyme™ (DSM Nutritional Products), Avizyme™, Porzyme™ y series de productos de Grindazyme™ (Danisco; Finnfeeds), y Natugrain™ (BASF), Purastar™ y Purastar™ OxAm (Genencor).

[0055] Otras enzimas disponibles comercialmente incluyen Mannaway™, Pectaway™, Stainzyme™ y Renozyme™.

[0056] En una forma de realizacion particular de la presente invencion la enzima de pienso es seleccionada del grupo consistente en endoglucanasas, endo-1,3(4)-beta-glucanasas, proteasas, fitasas, galactanasas, mananasas, dextranasas y alfa-galactosidasa, y se hace referencia a WO 2003/062409.

[0057] Enzimas de pienso adecuadas particulares incluyen: amilasas, fosfotasas, tales como fitasas, y/o fosfatasas acidas; carbohidrasas, tales como enzimas amilfticas y/o enzimas degradantes de la pared celular vegetal incluyendo celulasas tales como p-glucanasas y/o hemicelulasas tales como xilanasas o galactanasas; proteasas o peptidasas tales como lisozima; galatosidasas, pectinasas, esterasas, lipasas, en particular fosfolipasas tal como las fosfolipasas pancreaticas mamfferas A2 y glucosa-oxidasa.

En particular las enzimas de pienso tienen un pH neutro y/o acido optimo.

En una forma de realizacion particular de la presente invencion la enzima de pienso es seleccionada del grupo consistente en amilasas, fosfotasas, fitasas, celulasas, p-glucanasas, hemicelulasas, proteasas, peptidasas, galatosidasas, pectinasas, esterasas, lipasas y glucosa-oxidasa.

[0058] En una forma de realizacion particular de la presente invencion la enzima es seleccionada del grupo consistente en amilasas, proteasas, beta-glucanasas, fitasas, xilanasas, fosfolipasas y glucosa oxidasas.

Sales de zinc de acidos organicos

[0059] La sal de zinc de un acido organico es en una forma de realizacion particular soluble en agua.

[0060] Cuando se trabaja con pienso para animales es importante que los materiales usados en el granulo tengan una pureza determinada asf en una forma de realizacion de la presente invencion la sal de zinc de acido organico es calidad alimenticia. La sal de zinc organica de un acido organico se puede seleccionar pero no esta limitada al grupo consistente en sales de zinc de citrato, malato, maleato, malonato, metionato, succinato, lactato, formiato, acetato, butirato, propionato, benzoato, tartrato, ascorbato gluconato, quelatos de zinc de hidratos de aminoacidos y combinaciones de los mismos.

[0061] En una forma de realizacion particular de la presente invencion la sal de zinc de un acido organico es seleccionada del grupo consistente en sales de zinc de citrato, malato, maleato, malonato, metionato, succinato, lactato, formato, acetato y quelatos de zinc de hidratos de aminoacidos.

La sal de zinc de un acido organico se puede seleccionar del grupo consistente en citrato de zinc, malato de zinc, maleato de zinc, malonato de zinc, metionato de zinc, succinato de zinc, lactato de zinc, formato de zinc, acetato de zinc, butirato de zinc, propionato de zinc, benzoato de zinc, tatrato de zinc, ascorbato de zinc, gluconato de zinc, metionato de zinc, lisina de zinc, metionina de zinc y combinaciones de los mismos.

[0062] La sal de zinc de un acido organico se puede seleccionar del grupo consistente en citrato de zinc, malato de zinc, maleato de zinc, malonato de zinc, metionato de zinc, succinato de zinc, lactato de zinc, formiato de zinc, acetato de zinc, butirato de zinc, propionato de zinc, benzoato de zinc, tatrato de zinc, ascorbato de zinc, gluconato de zinc, metionato de zinc, lisina de zinc y combinaciones de los mismos.

[0063] La sal de zinc de un acido organico se puede seleccionar del grupo consistente en citrato de zinc, malato de zinc de , maleato de zinc, malonato de zinc, metionato de zinc, succinato de zinc, lactato de zinc, formato de zinc, acetato de zinc, butirato de zinc, propionato de zinc, benzoato de zinc, tatrato de zinc, ascorbato de zinc, gluconato de zinc, metionato de zinc, lisina de zinc, metionina de zinc y combinaciones de los mismos.

[0064] En una forma de realizacion particular de la presente invencion del anion organico es seleccionado de carboxilatos.

En una forma de realizacion particular la sal de zinc es seleccionada del grupo consistente en citrato de zinc, malato de zinc, maleato de zinc, malonato de zinc, metionato de zinc, succinato de zinc, lactato de zinc, formiato de zinc, acetato de zinc, butirato de zinc, propionato de zinc, benzoato de zinc, tatrato de zinc, ascorbato de zinc, gluconato de zinc, metionato de zinc y combinaciones de los mismos.

[0065] En una forma de realizacion particular de la presente invencion la sal de zinc de un acido organico es seleccionada del grupo consistente en sales de zinc de acidos organicos simples (menos de 10 atomos de carbono).

[0066] En una forma de realizacion particular de la presente invencion las sales de zinc de acidos organicos incluyen sales de zinc de aminoacidos tales como quelato de lisina de zinc o quelato de metionina de zinc.

En una forma de realizacion particular la sal de zinc de un acido organico no esta incluyendo aminoacidos.

[0067] En una forma de realizacion mas particular de la presente invencion la sal de zinc de un acido organico es seleccionada del grupo consistente en citrato de zinc, acetato de zinc, metionato de zinc, quelato de metionina de zinc y combinaciones de los mismos.

[0068] La cantidad de sal de zinc de un acido organico adicionado es en una forma de realizacion particular de la presente invencion 0.01-15% p/p basado en el nucleo enzimatico.

En una forma de realizacion mas particular de la presente invencion la sal de zinc de un acido organico se adiciona en cantidad de 0.05-10% p/p en el nucleo enzimatico.

En una forma de realizacion de la presente invencion aun mas particular la sal de zinc de un acido organico se adiciona en cantidad de 0.1-7% p/p.

En una forma de realizacion mas particular de la presente invencion la sal de zinc de un acido organico se adiciona en la cantidad de 0.5-3.5% p/p del nucleo enzimatico.

Las cantidades se calculan en las sales de zinc libres de agua.

Por libre de agua se entiende no incluyendo agua de cristalizacion presente en la sal.

[0069] En una forma de realizacion particular de la presente invencion la sal de zinc de un acido organico se puede seleccionar del grupo consistente en citrato de zinc, malato de zinc, maleato de zinc, malonato de zinc, metionato de zinc, succinato de zinc, lactato de zinc, formato de zinc, acetato de zinc, butirato de zinc, propionato de zinc, benzoato de zinc, tatrato de zinc, ascorbato de zinc, gluconato de zinc, metionato de zinc, lisina de zinc y combinaciones de los mismos, y el compuesto de zinc se adiciona en una cantidad de 0.01-15% p/p basado en el nucleo enzimatico.

[0070] La sal de zinc de un acido organico se puede adicionar en forma de una solucion, dispersion, emulsion o en forma solida.

En una forma de realizacion particular de la presente invencion la sal de zinc de un acido organico se anade en forma de una solucion.

La solucion es en una forma de realizacion particular una solucion acuosa.

En una forma de realizacion particular la sal de zinc de un acido organico se anade como un lfquido.

En otra forma de realizacion la sal de zinc de un acido organico se anade como un polvo.

[0071] En una forma de realizacion particular de la presente invencion la sal de zinc de un acido organico se puede seleccionar del grupo consistente en citrato de zinc, malato de zinc, maleato de zinc, malonato de zinc, metionato de zinc, succinato de zinc, lactato de zinc, formato de zinc, acetato de zinc, butirato de zinc, propionato de zinc, benzoato de zinc, tatrato de zinc, ascorbato de zinc, gluconato de zinc, metionato de zinc, lisina de zinc y combinaciones de los mismos, y el compuesto de zinc se adiciona en una cantidad de 0.01-15% p/p basado en el nucleo enzimatico y la sal de zinc de un acido organico se anade como un polvo.

[0072] La sal de zinc de un acido organico esta en una forma de realizacion particular presente en el granulo con la enzima como una mezcla.

En otra forma de realizacion particular de la presente invencion la sal de zinc de un acido organico esta presente en una capa que rodea la capa enzimatica.

[0073] En una forma de realizacion particular de la presente invencion la sal de zinc de un acido organico se puede seleccionar del grupo consistente en citrato de zinc, malato de zinc, maleato de zinc, malonato de zinc, metionato de zinc, succinato de zinc, lactato de zinc, formato de zinc, acetato de zinc, butirato de zinc, propionato de zinc, benzoato de zinc, tatrato de zinc, ascorbato de zinc, gluconato de zinc, metionato de zinc, lisina de zinc y combinaciones de los mismos, y el compuesto de zinc se adiciona en una cantidad de 0.01-15% p/p basado en el nucleo enzimatico y la sal de zinc de un acido organico esta presente en el granulo con la enzima como una mezcla.

Agentes de granulacion adicionales

[0074] El granulo puede comprender materiales adicionales tales como ligantes, productos de relleno, materiales fibrosos, agentes estabilizadores, agentes de solubilizacion, agentes de suspension, agentes de regulacion de viscosidad, esferas ligeras, plastificantes, sales, lubricantes y fragancias.

[0075] Los ligantes de la presente invencion pueden ser polfmeros sinteticos, ceras incluyendo grasas, caldo de fermentacion, carbohidratos, sales o polipeptidos.

Polfmeros sinteticos

[0076] Por polfmeros sinteticos se entiende polfmeros cuya estructura ha sido polimerizada sinteticamente.

[0077] Polfmeros sinteticos adecuados de la invencion incluyen en particular polivinilpirrolidona (PVP), alcohol polivinflico (PVA), acetato de polivinilo, poliacrilato, polimetacrilato, poliacrilamida, polisulfonato, policarboxilato, y copolfmeros de los mismos, en particular polfmeros o copolfmeros solubles en agua.

[0078] En una forma de realizacion particular de la presente invencion el polfmero sintetico es un polfmero de vinilo.

Ceras

[0079] Una "cera" en el contexto de la presente invencion debe entenderse como un material polimerico teniendo un punto de fusion entre 25 -150 °C, particularmente 30 to100°C mas particularmente 35 a 85°C mas particularmente 40 a 75°C. La cera esta preferiblemente en un estado solido a temperatura ambiente, 25°C. El lfmite inferior se prefiere que establezca una distancia razonable entre la temperatura a la que la cera comienza a fundirse a la temperatura en la que los granulos o composiciones comprendiendo los granulos estan normalmente almacenados, 20 a 30°C.

[0080] Para algunos granulos una caracterfstica preferible de la cera es que la cera deberfa ser soluble en agua o dispersable en agua, la cera deberfa desintegrarse y/o disolverse para proporcionar una rapida liberacion y disolucion del activo incorporado en las partfculas a la solucion acuosa. Ejemplos de ceras solubles en agua son polietilenglicoles (PEG's). Entre ceras insolubles en agua, que son dispersables en una solucion acuosa estan los trigliceridos y aceites.

Para algunos granulos es preferible que la cera sea insoluble.

[0081] En una forma de realizacion particular de la presente invencion la composicion de cera es una composicion hidrofflica. En una forma de realizacion particular al menos 25 % p/p de los constituyentes comprendidos en la composicion de cera es soluble en agua, preferiblemente al menos 50% p/p, preferiblemente al menos 75% p/p, preferiblemente al menos 85% p/p, preferiblemente al menos 95% p/p, preferiblemente al menos 99% p/p.

[0082] En otra forma de realizacion la composicion de cera es hidrofflica y dispersable en una solucion acuosa.

[0083] En una forma de realizacion particular la composicion de cera comprende menos del 75% p/p constituyentes hidrofobicos, preferiblemente menos del 50% p/p, preferiblemente menos del 25% p/p, preferiblemente menos del 15% p/p, preferiblemente menos del 5% p/p, preferiblemente menos del 1% p/p.

[0084] En una forma de realizacion particular la composicion de cera comprende menos del 75% p/p constituyentes insolubles de agua, preferiblemente menos del 50% p/p, preferiblemente menos del 25% p/p, preferiblemente menos del 15% p/p, preferiblemente menos del 5% p/p, preferiblemente menos del 1% p/p.

[0085] Las ceras adecuadas son compuestos organicos o sales de compuestos organicos teniendo una o varias de las propiedades anteriormente mencionadas.

[0086] La composicion de cera de la invencion puede comprender cualquier cera, que es sintetizada qufmicamente. Tambien puede comprender ceras aisladas de una fuente natural o un derivado.

Por consiguiente, la composicion de cera de la invencion puede comprender ceras seleccionadas de la siguiente lista no limitativa de ceras.

- Polietilenglicoles, PEG. Distintas ceras de PEG estan disponibles comercialmente teniendo tamanos moleculares diferentes, donde PEG con tamanos moleculares bajos tambien tienen bajos puntos de fusion. Ejemplos de PEG adecuados son PEG 1500, PEG 2000, PEG 3000, PEG 4000, PEG 6000, PEG 8000, PEG 9000 etc. por ejemplo de BASF (series de Pluriol E) o de Clariant o de Ineos. Derivados de polietilenglicoles tambien pueden ser usados.

- Polipropilenos (por ejemplo polipropilenglicol de Pluriol P series de BASF) o polietilenos o mezclas derivadas. Derivados de polipropilenos y polietilenos tambien pueden ser usados.

- Polfmeros de oxido de etileno, oxido de propileno o copolfmeros de los mismos son utiles, tal como en polfmeros en bloque, por ejemplo Pluronic PE 6800 de BASF. Derivados de alcoholes grasos etoxilados. - Ceras aisladas de una fuente natural, tal como cera carnauba (punto de fusion entre 80-88°C), cera de Candelilla (punto de fusion entre 68-70°C) y cera de abejas. Otras ceras naturales o derivadas de las mismas son ceras derivadas de animales o plantas, por ejemplo de origen marino. Aceite de planta hidrogenada o sebo animal. Ejemplos de tales ceras son sebo de buey hidrogenado, aceite de palma hidrogenado, semillas de algodon hidrogenado y/o aceite de soja hidrogenada, donde el termino "hidrogenado" como se utiliza en este caso debe ser interpretado como saturacion de cadenas de carbohidrato insaturado, por ejemplo en trigliceridos, donde enlaces dobles de carbono=carbono se convierten en enlaces sencillos carbono-carbono. Aceite de palma hidrogenado esta comercialmente disponible por ejemplo de Hobum Oele und Fette GmbH - Alemania o Deutche Cargill GmbH - Alemania. - Alcoholes de acidos grasos, tal como el alcohol de acido graso de cadena larga lineal NAFOL 1822 (C18, 20, 22) de Condea Chemie GMBH - Alemania, teniendo un punto de fusion entre 55-60°C. Derivados de alcoholes de acidos grasos.

- Monogliceridos y/o digliceridos, tal como glicerilo estearato, donde estearato es una mezcla de acido palmftico y estearico, son ceras utiles. Un ejemplo de esto es Dimodan PM - de Danisco Ingredients, Dinamarca.

- Acidos grasos, tales como acidos grasos de cadena larga lineal hidrogenada y derivados de acidos grasos. - Parafinas, es decir hidrocarburos solidos.

- Cera microcristalina.

[0087] En otras formas de realizacion ceras que son utiles en la invencion se pueden encontrar en C.M. McTaggart et. al., Int. J. Pharm. 19, 139 (1984) o Flanders et. al., Drug Dev. Ind. Pharm. 13,1001 (1987).

[0088] En una forma de realizacion particular de la presente invencion la cera de la presente invencion es una mezcla de dos o mas ceras diferentes.

[0089] En una forma de realizacion particular de la presente invencion la cera o ceras es seleccionada del grupo consistente en PEG, acidos grasos, alcoholes de acido graso y gliceridos.

[0090] En otra forma de realizacion particular de la presente invencion, las ceras son elegidas de ceras sinteticas. En una forma de realizacion mas particular las ceras de la presente invencion son PEG. En una forma de realizacion mas particular de la presente invencion la cera es seleccionada del grupo de sebo bovino, PEG y aceite de palma.

Caldo de fermentacion

[0091] Un caldo de fermentacion conforme a la invencion comprende celulas microbianas y/o detrito celular de las mismas (biomasa).

[0092] En una forma de realizacion preferida el caldo de fermentacion comprende al menos 10% de la biomasa, mas preferiblemente al menos 50%, aun mas preferiblemente al menos 75% y de la forma mas preferible al menos 90% o al menos 95% de la biomasa que se origina de la fermentacion.

En otra forma de realizacion preferida el caldo contiene 0-31% p/p sustancia seca, preferiblemente 0-20% p/p, mas preferiblemente 0-15% p/p tal como 10-15% p/p sustancia seca, 0% sustancia seca siendo excluida de dichas gamas.

La biomasa puede constituir hasta 90% p/p de la sustancia seca, preferiblemente hasta 75% p/p, mas preferiblemente hasta 50% p/p de la sustancia seca, mientras la enzima puede constituir hasta 50% p/p de la sustancia seca, preferiblemente hasta 25% p/p, mas preferiblemente hasta 10% p/p de la sustancia seca.

Polisacaridos

[0093] Los polisacaridos de la presente invencion pueden ser polisacaridos no modificados de origen natural o polisacaridos de origen natural modificados.

[0094] Polisacaridos adecuados incluyen celulosa, pectina, dextrina y almidon. Los almidones pueden ser solubles o insolubles en agua.

[0095] En una forma de realizacion particular de la presente invencion el polisacarido es un almidon. En una forma de realizacion particular de la presente invencion el polisacarido es un almidon insoluble.

[0096] Almidones de origen natural de una amplia variedad de fuentes vegetales se adecuan en el contexto de la invencion (bien como almidones per se, o como el punto de partida para almidones modificados), y almidones pertinentes incluyen almidon de: arroz, mafz, trigo, patata, avena, mandioca, palma de sagu, yuca, cebada, batata, sorgo, name, centeno, mijo, alforfon, arrurruz, taro, tannia, y pueden por ejemplo estar en forma de harina.

[0097] Almidon de mandioca esta entre los almidones preferidos en el contexto de la invencion; a este respecto se puede mencionar que mandioca y almidon de mandioca son conocidos bajo varios sinonimos, incluyendo tapioca, yuca, mandioca y manihot.

[0098] Como se emplea en el contexto de la presente invencion, el termino "almidon modificado" denota un almidon de origen natural, que ha sufrido alguna especie de al menos modificacion qufmica parcial, modificacion enzimatica, y/o modificacion ffsica o fisicoqufmica, y que - en general - muestra propiedades alteradas relativas al almidon "progenitor".

[0099] En una forma de realizacion particular de la presente invencion el granulo comprende un polisacarido.

Sales

[0100] El nucleo puede comprender sal adicional. La sal puede ser una sal inorganica, por ejemplo sales de sulfato, sulfito, fosfato, fosfonato, nitrato, cloruro o carbonato o sales de acidos organicos simples (menos de 10 atomos de carbono por ejemplo 6 o menos atomos de carbono) tal como citrato, malonato o acetato.

Ejemplos de cationes en esta sal son iones alcali o metalicos alcalinoterreos, aunque el ion de amonio o iones metalicos de la primera serie de transicion, tal como sodio, potasio, magnesio, calcio, zinc o aluminio.

Ejemplos de aniones incluyen cloruro, yoduro, sulfato, sulfito, bisulfito tiosulfato, fosfato, fosfato monobasico, fosfato dibasico, hipofosfito, pirofosfato de dihidrogeno, carbonato, bicarbonato, metasilicato, citrato, malato, maleato, malonato, succinato, lactato, formiato, acetato, butirato, propionato, benzoato, tartrato, ascorbato o gluconato.

En particular sales metalicas alcali o alcalinoterreas de sulfato, sulfito, fosfato, fosfonato, nitrato, cloruro o carbonato o sales de acidos organicos simples tales como citrato, malonato o acetato pueden ser utilizadas.

Ejemplos especfficos incluyen NaH²PO⁴ , Na²HPO⁴ , Na³PO⁴ , (NH⁴)H²PO⁴ , K²HPO⁴ , KH²PO⁴, Na²SO⁴ , K²SO⁴ , KHSO⁴ , ZnSO⁴, MgSO⁴, Mg(NO³)² , (NH⁴)²SO⁴ , borato sodico, acetato magnesico y citrato sodico.

[0101] La sal tambien puede ser una sal hidratada, es decir un hidrato de sal cristalina con agua ligado de cristalizacion, tal como se describe en WO 99/32595. Ejemplos de sales hidratadas incluyen sulfato de magnesio heptahidratado (MgSO⁴(7H²O)), sulfato de zinc heptahidratado (ZnSO⁴(7H²O)), fosfato sodico dibasico heptahidratado (Na²HPO⁴(7H²O)), nitrato de magnesio hexahidratado (Mg(NO³)²(6H²O)), borato sodico decahidratado, citrato sodico dihidratado y acetato magnesico tetrahidratado.

[0102] En una forma de realizacion particular de la presente invencion el ligante es un polipeptido. El polipeptido se puede seleccionar de gelatina, colageno, casefna, quitosano, acido poliaspartico y acido poliglutamatico. En otra forma de realizacion particular el ligante es un derivado de celulosa tal como hidroxipropilcelulosa, metilcelulosa o CMC.

Un ligante adecuado es un ligante carbohidratado tal como dextrina p. ej Glucidex 21D o Avedex W80.

Productos de relleno

[0103] Productos de relleno adecuados son sales inorganicas solubles y/o insolubles en agua tales como sulfato de alcali finamente molido, carbonato de alcali y/o cloruro de alcali, arcillas tales como caolfn (por ejemplo SPESWHITE™, English China Clay), bentonitas, talcos, zeolitas, yeso, carbonato calcico y/o silicatos.

[0104] Productos de relleno tfpicos son sulfato de di-sodio y lignosulfonato de calcio.

Otros productos de relleno son sflice, yeso, caolfn, talco, silicato de aluminio de magnesio y fibras de celulosa.

Materiales fibrosos

[0105] Celulosa pura o impura en la forma fibrosa tal como serrfn, celulosa fibrosa pura, algodon, u otras formas de celulosa fibrosa pura o impura.Tambien, ayudantes de filtracion basados en celulosa fibrosa pueden ser usados.

[0106] Diferentes marcas de celulosa en la forma fibrosa estan en el mercado, por ejemplo CEPO™ y ARBOCELL™. Ejemplos pertinentes de ayudantes de filtracion de celulosa fibrosa son Ar Bo Ce Ll BfC 200™ y ARBOCELL BC 200™.

Fibras tambien sinteticas se pueden usar como se describen en EP 304331 B1.

Agentes estabilizadores

[0107] Agentes estabilizadores o protectores tales como se usan de forma convencional en el campo de la granulacion.

Agentes estabilizadores o protectores pueden caer en diferentes categorfas: materiales alcalinos o neutros, agentes reductores, antioxidantes y/o sales de iones metalicos de serie de primera transicion. Cada uno de estos se puede utilizar conjuntamente con otros agentes protectores de la misma categorfa o diferente. Ejemplos de agentes protectores alcalinos son silicatos de metal alcalino, carbonatos o bicarbonatos. Ejemplos de agentes protectores reductores son las sales de sulfito, tiosulfito, tioulfato o MnSO4 mientras ejemplos de antioxidantes son metionina, hidroxitolueno butilado (BHT) o hidroxianisol butilado (BHA). En particular agentes estabilizadores pueden ser sales de tiosulfatos, por ejemplo tiosulfato de sodio o metionina. Todavfa otros ejemplos de estabilizadores utiles son gelatina, urea, sorbitol, glicerol, casefna, polivinil pirrolidona (PVP), hidroxipropilmetilcelulosa (HPMC), carboximetilcelulosa (CMC), hidroxietilcelulosa (HEC), polvo de leche desnatada y/o aceites comestibles, tal como aceite de soja o aceite de canola. Agentes estabilizadores particulares en los granulos de pienso son una fuente de acido lactico o almidon. En una forma de realizacion particular de la presente invencion el granulo comprende una fuente de acido lactico segun solicitud de patente no.EP 1.117.771 que es por la presente incorporada como referencia. Una fuente de acido lactico preferida es licor de maceracion del mafz. Es tambien bien conocido en la tecnica que sustratos enzimaticos como el almidon, lfpidos, protefnas etc pueden actuar como estabilizadores para enzimas.

Agentes de solubilizacion

[0108] Como se conoce por el experto en la tecnica, muchos agentes, a traves de una variedad de metodos, sirven para aumentar la solubilidad de formulaciones, y agentes tfpicos conocidos por la tecnica se pueden encontrar en la Farmacopea nacional.

Esferas ligeras:

[0109] Las esferas ligeras son partfculas pequenas con baja densidad real. Tfpicamente, son partfculas esfericas huecas con aire o gas en su interior. Tales materiales son normalmente preparados por expansion de un material solido.

Estas esferas ligeras pueden ser de naturaleza inorganica u organica. Polisacaridos son preferidos, como el almidon o derivados de los mismos. Biodac® es un ejemplo de material ligero no hueco hecho de celulosa (residuos de fabricacion de papel), disponible de GranTek Inc. Estos materiales se pueden incluir en los granulosde la invencion bien solos o como una mezcla de diferentes materiales ligeros.

Agentes de suspension:

[0110] Agentes de suspension, mediadores y/o solventes pueden ser incorporados.

Agentes de regulacion de viscosidad:

[0111] Agentes de regulacion de viscosidad pueden estar presentes.

Plastificantes:

[0112] Los plastificantes de la presente invencion incluyen, por ejemplo: polioles tales como azucares, polialcoholes, glicerina, glicerol trimetilol propano, neopentilglicol, trietanolamina, mono-, di- y trietilenglicol o politilenglicoles (PEG) teniendo un peso molecular inferior a 1000; urea y agua.

Lubricantes:

[0113] Como se usa en el presente contexto, el termino "lubricante" se refiere a cualquier agente, que reduce la friccion de superficie, lubrica la superficie del granulo, reduce la tendencia al incremento de electricidad estatica, y/o reduce la friabilidad de los granulos. Los lubricantes pueden servir como agentes de antiaglomeracion y agentes humectantes.

Ejemplos de lubricantes adecuados son politilenglicoles (PEGs) inferiores y aceites minerales. El lubricante es particularmente un aceite mineral o un surfactante no ionico, y mas particularmente el lubricante no es miscible con los otros materiales.

Recubrimientos

[0114] Los granulos de la presente invencion pueden comprender una, dos o mas capas de recubrimiento adicionales. Los recubrimientos se pueden aplicar al granulo para proporcionar caracterfsticas o propiedades adicionales. Asf, por ejemplo, un recubrimiento adicional puede conseguir uno o varios de los siguientes efectos:

(i) reduccion de la tendencia a la formacion de polvo de un granulo;

(ii) proteccion de la enzima en el granulo contra los compuestos hostiles en el entorno.

(iii) disolucion a un fndice deseado en la introduccion del granulo en un medio lfquido (tal como un medio acido);

(iv) proporcion de una mejor fuerza ffsica del granulo.

[0115] Los recubrimientos de la presente invencion generalmente se aplican como una o varias capas que rodean el nucleo. Formas de realizacion incluyen una, dos, tres o cuatro capas de recubrimiento protectoras. Materiales de recubrimiento adecuados son polfmeros, carbohidratos, protefnas, lfpidos, grasas y aceites, acidos grasos, sales inorganicas, y gomas y sus mezclas derivadas.

[0116] Los recubrimientos incluyen recubrimientos de barrera contra la humedad y recubrimientos hidratantes de humedad. Los recubrimientos de barrera contra la humedad funcionan excluyendo la humedad, por ejemplo formando una capa de cubierta que tfpicamente no absorbe la humedad y previene o retarda el fndice de migracion de humedad en el granulo. Los recubrimientos hidratantes de humedad en el granulo absorben o enlazan la humedad bien como agua libre o agua de hidratacion, actuando asf para impedir o retardar la extension o fndice de transporte de humedad externa en el granulo. Los recubrimientos hidratantes de humedad tfpicamente constituyen al menos aproximadamente 35% p/p del granulo. Los materiales hidratantes de humedad en los recubrimientos afslan termicamente las enzimas y absorberan una cantidad determinada de humedad y la retendran en el material hidratante sin permitir que pase a la porcion del granulo que tiene la enzima. Para recubrimientos hidratantes de humedad en granulos estables que no contienen cantidades apreciables de agua antes del tratamiento con vapor, tales recubrimientos pueden constituir aproximadamente 25% p/p del granulo. Recubrimientos de barrera contra la humedad tfpicamente comprenden materiales hidrofobicos, tales como polfmeros hidrofobicos, por ejemplo PVA, HPMC, almidones de hidroxipropilo diluido en acido y almidon oxidado; protefnas, por ejemplo concentrados de suero de leche y protefna de suero de leche; lfpidos, por ejemplo, lecitina; grasas y aceites, acidos grasos, latex y gomas, por ejemplo, goma arabiga.

Determinados recubrimientos de barrera de humedad, tal como PVA y goma arabiga, no son facilmente oxidados y encuentran particularmente aplicabilidad en la provision de estabilidad qufmica cuando los granulos de la invencion se almacenan en mezclas no granuladas o no comprimidas, por ejemplo, en premezclas que contienen cloruro de colina.

Materiales de recubrimiento hidratantes de humedad tfpicamente son materiales hidrofflicos, tales como carbohidratos y sales inorganicas, incluyendo sales hidratadas.

Ejemplos de materiales hidratantes de humedad son sulfato de magnesio, sulfato de sodio, maltodextrina, sulfato amonico, azucares, por ejemplo, sacarosa, y almidon de mafz nativo.

Polfmeros usados para los recubrimientos de proteccion son alcohol polivinflico (PVA), polietilenglicol, polivinilpirrolidona, poliacrilatos, oxidos de polietileno (PEO), acido polilactico, polivinilcloruro, acetato de polivinilo, polivinil pirrolidonas (PVP), eteres de celulosa, alginatos, gelatina, almidones modificados y derivados sustituidos, hidrolizados y copolfmeros de los mismos, tales como almidon de hidroxipropilo diluido en acido, tal como, hidroxipropilmetilcelulosa Pure cote™ (HPMC), metilcelulosa (MC), carboximetilcelulosa (CMC), y etilcelulosa.

Muchos polfmeros preferidos para los recubrimientos de proteccion son PVA, PVA modificado, como se describe en la Pat. de EEUU N° 6,872,696, y celulosa modificada, tal como metilcelulosa y celulosa de hidroxilpropilmetilo, como se describe en la publicacion PCT No. WO 99/51210. Los carbohidratos usados para los recubrimientos de proteccion son maltodextrina hidroxilmetil celulosa, almidones modificados o nativos hechos de mafz, sorgo, arrurruz, arroz, trigo, centeno, cebada, avena, patata, batata, tapioca, mandioca, sagu, y azucares incluyendo sacarosa, solidos de jarabe de mafz, melaza, glucosa, fructosa, y lactosa. Las protefnas usadas para los recubrimientos protectores son polvo de suero de leche, concentrado de protefna de suero de leche, aislado de protefna de suero, caseinatos, concentrado y aislado de protefna de soja, cefna, albumina y gelatina.

[0117] Lfpidos simples, compuestos y derivados que se pueden utilizar en los recubrimientos de proteccion son ceras (por ejemplo, vegetal, mineral y sintetica, tal como carnauba, candelilla, cera de abejas, cerumen, carnuba, goma laca, parafina, y ceras microcristalinas); lecitina (por ejemplo mono- y digliceridos); acidos grasos (por ejemplo, acidos estearico, palmftico, linoleico, oleico, butfrico, y acidos grasos araquidonicos y sus sales de sodio, potasio, calcio y zinc); y grasas y aceites (por ejemplo, grasas y aceites hidrogenados o parcialmente hidrogenados, tales como soja, mafz, semilla de algodon, sebo, canola, y aceite de linaza).

Un lfpido preferido para los recubrimientos protectores es la lecitina.

[0118] Sales inorganicas usadas para los recubrimientos de proteccion incluyen sales de sulfato, citrato, cloruro, carbonato, sulfito, fosfato, fosfonato, y sales de bicarbonato de sodio, amonio, potasio, calcio, magnesio y zinc. Sales preferidas son magnesio, sodio y sulfatos de amonio.

[0119] Gomas que se pueden utilizar en los recubrimientos protectores incluyen goma arabiga, goma guar, agar, goma tragacanto, goma de karya, goma garroffn, carragenina, goma xantana, y alginatos.

[0120] Los recubrimientos protectores de la presente invencion pueden incluir ademas plastificantes, lubricantes, pigmentos y polvos, tales como talco, bentonita, caolfn, almidon de mafz, silicato de magnesio, carbonato calcico, y quitosano.

[0121] Formas de realizacion determinadas de la presente invencion tfpicamente tienen una unica capa de un material hidratante de humedad que es aproximadamente al menos 55% p/p del granulo.

Debido a que la capacidad de recubrimientos hidratantes de humedad para llenar y secuestrar agua tiene un lfmite, niveles relativamente altos de recubrimientos de capa unica son aplicados.

Alternativamente, material(es) hidratantes de humedad se pueden aplicar en dos capas.

Otras formas de realizacion de la presente invencion tienen recubrimientos protectores que utilizan ambos materiales hidratantes de humedad y materiales de barrera contra la humedad.

En estas formas de realizacion, la cantidad de material hidratante de humedad puede ser inferior, al menos aproximadamente 25% p/p del granulo y el material de barrera contra la humedad es aproximadamente 2% a 25% p/p del granulo.

La utilizacion de ambos materiales hidratantes de humedad y materiales de barrera contra la humedad combina mecanismos protectores y reduce tfpicamente coste, particularmente de los materiales de barrera contra la humedad.

[0122] Materiales de barrera contra la humedad, particularmente materiales que forman pelfculas pueden ser sometidos a dano mecanico que, si estos materiales se usan solo como un recubrimiento fino, puede llevar a perdida de proteccion para la enzima.

La combinacion permite el uso de menos de ambos materiales que serfan requeridos si los materiales fueran usados solos.

La combinacion permite algun dano en la capa de barrera contra la humedad vista la presencia del material hidratante de humedad.

[0123] Cualquier recubrimiento(s) convencional de propiedades deseadas se puede aplicar y ejemplos de materiales de recubrimiento convencionales y metodos de revestimiento son, entre otras cosas, descritos en US 4,106,991, EP 170360, EP 304332, EP 304331, EP 458849, EP 458845, WO 97/39116, WO 92/12645, WO 89/08695, WO 89/08694, WO 87/07292, WO 91/06638, WO 92/13030, WO 93/07260, WO 93/07263, WO 96/38527, WO 96/16151, WO 97/23606, US 5,324,649, US 4,689,297, EP 206417, EP 193829, DE 4344215, DE 4322229 A, DD 263790, JP 61162185 A, JP 58179492 o PCT/DK/01/00628.

En una forma de realizacion particular de la presente invencion el recubrimiento adicional es un recubrimiento de cera, de acuerdo con US 4,106,991 o EP 0,569,468. Para ceras adecuadas ver la seccion "Ceras" mas arriba.

En una forma de realizacion particular de la presente invencion un recubrimiento adicional puede comprender PVA, PEG, sebo de bovino y/o aceite de palma. Opcionalmente, los granulos pueden ser recubiertos con una mezcla de recubrimiento. En una forma de realizacion particular de la presente invencion el granulo es revestido con un revestimiento de sal. La sal puede ser seleccionada de la seccion “sales”.

Materiales de recubrimiento adicionales

[0124] El recubrimiento puede comprender materiales de recubrimiento adicionales tales como ligantes, productos de relleno, materiales fibrosos, agentes estabilizadores de enzimas, sales, agentes solubilizantes, agentes suspensores, agentes reguladores de viscosidad, esferas ligeras, plastificantes, sales, lubricantes y fragancias tal y como se menciona en la seccion "agentes de granulacion adicionales" mas arriba.

Otros ingredientes de recubrimiento pueden ser pigmentos.

[0125] Pigmentos

[0126] Los pigmentos adecuados incluyen, pero de forma no limitativa, blanqueadores finamente divididos, tales como dioxido de titanio o caolfn, pigmentos coloreados, colorantes solubles en agua, al igual que combinaciones de uno o varios pigmentos y colorantes solubles en agua.

Preparación del nucleo enzimatico

[0127] El nucleo enzimatico comprende una enzima y una sal de zinc de un acido organico.

[0128] Metodos para preparar un nucleo enzimatico pueden ser encontrados en el Handbook of Powder Technology; Particle size enlargement by C. E. Capes; volumen 1,1980; Elsevier. Los metodos de preparacion incluyen tecnologfas de formulacion de granulos y piensos conocidas, es decir:

a) productos secados atomizados, donde una solucion conteniendo enzima lfquida se atomiza en una torre de secado por atomizacion para formar gotitas pequenas que durante su bajada por la torre de secado se secan para formar un material en partfculas que contiene enzimas.

Partfculas muy pequenas se pueden producir de esta manera (Michael S. Showell (editor); Powdered detergents; Surfactant Science Series; 1998; vol. 71; page 140-142; Marcel Dekker).

b) productos estratificados, donde la enzima es recubierta como una capa alrededor de una partfcula de nucleo inerte preformada, donde una solucion conteniendo enzimas es atomizada, tfpicamente en un equipo de lecho fluido donde las partfculas de nucleo preformadas son fluidificadas, y la solucion con enzimas se adhiere a las partfculas de nucleo y se secan hasta dejar una capa de enzima seca en la superficie de la partfcula del nucleo.

Partfculas de un tamano deseado se pueden obtener de esta manera si una partfcula del nucleo util del tamano deseado puede ser encontrada. Este tipo de producto es descrito en por ejemplo WO 97/23606

c) partfculas de nucleo absorbidas, donde antes que recubrir la enzima como una capa alrededor del nucleo, la enzima se absorbe sobre y/o en la superficie del nucleo. Tal proceso es descrito en WO 97/39116.

d) productos de extrusion o granulados, donde una pasta conteniendo enzimas se prensa hasta hacer granulos o se extrude bajo presion a traves de una abertura pequena y se corta en partfculas que son posteriormente secadas. Tales partfculas normalmente tienen un tamano considerable debido al material en donde se hace la abertura de extrusion (normalmente una placa con agujeros perforados) establece un lfmite en la cafda de presion admisible sobre la abertura de extrusion. Tambien, presiones de extrusion muy altas cuando se usa una pequena abertura aumentan la generacion de calor en la pasta de enzimas, que es nociva para la enzima. (Michael S. Showell (editor); Powdered detergents; Surfactant Science Series; 1998; vol. 71; pagina 140-142; Marcel Dekker)

e) productos comprimidos, donde un polvo enzimatico se suspende en cera fundida y la suspension es pulverizada, por ejemplo a traves de un atomizador de disco rotativo, en una camara de enfriamiento donde las gotitas rapidamente se solidifican (Michael S. Showell (editor); Powdered detergents; Surfactant Science Series; 1998; vol. 71; pagina 140-142; Marcel Dekker). El producto obtenido es uno donde la enzima es uniformemente distribuida en todo un material inerte en vez de ser concentrado en su superficie. Tambien US 4,016,040 y US 4,713,245 son documentos relativos a esta tecnica

f) productos de granulacion mezcladores, donde se anade un lfquido conteniendo enzimas a una composicion en polvo seca de componentes de granulacion convencionales. El lfquido y el polvo se mezclan en una proporcion adecuada y cuando la humedad del lfquido se absorbe en el polvo seco, los componentes del polvo seco empezaran a adherirse y a aglomerarse y se desarrollaran partfculas, formando granulados que comprenden la enzima. Tal proceso es descrito en US 4,106,991 (NOVO NORDISK) y documentos relacionados EP 170360 B1 (NOVO NORDISK), EP 304332 B1 (NOVO NORDISK), EP 304331 (NOVO NORDISK), WO 90/09440 (NOVO NORDISK) y WO 90/09428 (NOVO NORDISK). En un producto particular de este proceso donde varios mezcladores de alta cizalladura se pueden usar como granuladores, granulados consistentes en enzima, productos de relleno y ligantes etc. se mezclan con fibras de celulosa para reforzar las partfculas para dar el denominado granulado T. Las partfculas reforzadas, siendo mas robustas, liberan menos polvo enzimatico.

g) reduccion de tamano, donde los nucleos se producen por fresado o trituracion de partfculas mayores, granulos, comprimidos, briquetas etc. que contienen la enzima. La fraccion de partfcula del nucleo deseada se obtiene por tamizado del producto molido o triturado. Partfculas sobre y subdimensionadas pueden ser recicladas.La reduccion de tamano es descrita en (Martin Rhodes (editor); Principles of Powder Technology; 1990; Capftulo 10; John Wiley & Sons).

h) granulacion en lecho fluido. La granulacion en lecho fluido implica suspender partfculas en un flujo de aire y pulverizar un lfquido sobre las partfculas fluidificadas por medio de boquillas. Las partfculas tocadas por gotitas de spray se vuelven mojadas y se vuelven pegajosas. Las partfculas pegajosas chocan con otras partfculas y se adhieren y forman un granulo.

i) los nucleos se pueden someter a secado, tal como en un secador de lecho fluido. Otros metodos conocidos para secar granulos en la industria de piensos o enzimas se pueden usar por el experto. El secado preferiblemente tiene lugar a una temperatura de producto de 25 a 90°C. Para algunas enzimas es importante que los nucleos que comprenden la enzima contengan una cantidad baja de agua antes de recubrirse con la sal. Si enzimas hidrosensibles son recubiertas con una sal antes de que el agua excesiva sea quitado, sera retenido en el nucleo y esto puede afectar a la actividad de la enzima negativamente. Tras el secado, los nucleos preferiblemente contienen 0.1-10 % p/p agua.

Recubrimiento de los granulos

[0129] Recubrimientos y metodos convencionales como se conocen en la tecnica pueden ser usados adecuadamente, tales como los recubrimientos descritos en la patente danesa PA 200200473, WO 89/08694, WO 89/08695, 270608 B1 y/o WO 00/01793. Otros ejemplos de materiales de recubrimiento convencionales pueden ser descubiertos en US 4,106,991, EP 170360, EP 304332, EP 304331, EP 458849, EP 458845, WO 97/39116, WO 92/12645A, WO 89/08695, WO 89/08694, WO 87/07292, WO 91/06638, WO 92/13030, WO 93/07260, WO 93/07263, WO 96/38527, WO 96/16151, WO 97/23606, WO 01/25412, WO 02/20746, WO 02/28369, US 5879920, US 5,324,649, US 4,689,297, US 6,348,442, EP 206417, EP 193829, DE 4344215, DE 4322229 A, DE 263790, JP 61162185 A y/o JP 58179492.

[0130] El recubrimiento se puede preparar por los mismos metodos como se ha mencionado anteriormente en la seccion "Preparación del nucleo enzimatico".

[0131] Los granulos obtenidos se pueden someter a redondeo (por ejemplo esferonizacion), tal como en un Marumeriser™, o compactacion.

[0132] Los granulos pueden ser secados, tal como en un secador de lecho fluido. Otros metodos conocidos para secar granulos en la industria de piensos o de enzimas se pueden usar por la persona experta. El secado preferiblemente tiene lugar a una temperature de producto de 25 a 90°C.

Fabricacion de granulos de pienso

[0133] En la fabricacion de granulos de pienso de la presente invencion se prefiere implicar tratamiento de vapor antes de la granulacion, un proceso llamado acondicionamiento. En el paso de granulacion posterior el pienso se fuerza a traves de un molde y las cadenas resultantes son cortadas en granulos adecuados de longitud variable. Durante este paso de acondicionamiento la temperatura del proceso puede elevarse a 60-100°C.

[0134] La mezcla de pienso (pienso triturado) se prepara mediante la mezcla de los granulos comprendiendo la enzima del pienso con los componentes de pienso deseados.

La mezcla se conduce a un acondicionador por ejemplo un mezclador de cascada con inyeccion de vapor.

El pienso es calentado en el acondicionador hasta una temperatura especffica, 60-100°C, por ejemplo 60°C, 70°C, 80°C, 90°C o 100°C inyectando vapor, medido en la salida del acondicionador.

El periodo de permanencia puede variar de segundos a minutos e incluso horas.

Tal como 5 segundos, 10 segundos, 15 segundos, 30 segundos, 1 minuto, 2 minutos, 5 minutos, 10 minutos, 15 minutos, 30 minutos y 1 hora.

En una forma de realizacion particular de la presente invencion la temperatura es 100°C y el periodo de permanencia es 60 segundos.

[0135] En una forma de realizacion particular de la presente invencion la temperatura del proceso durante el tratamiento con vapor es al menos 60°C.

En una forma de realizacion mas particular de la presente invencion la temperatura de proceso durante el tratamiento de vapor es al menos 70°C.

En una forma de realizacion aun mas particular de la presente invencion la temperatura del proceso durante el tratamiento con vapor es al menos 80°C.

En una forma de realizacion mas particular de la presente invencion la temperatura del proceso durante el tratamiento con vapor es al menos 90°C.

[0136] Despues del acondicionamiento el pienso se conduce a una prensa por ejemplo una prensa de Simon Heesen, y prensar hasta obtener granulos con longitud variable por ejemplo 15 mm.

Despues de la prensa los granulos se colocan en un refrigerador de aire y se enfrfan durante un tiempo especffico por ejemplo 15 minutos.

[0137] Una forma de realizacion particular de la presente invencion es un metodo para fabricar una composicion de pienso que incluye las etapas de:

i. mezclar componentes de pienso con granulos de la invencion,

ii. tratar con vapor dicha composicion (i), y

iii. granular dicha composicion (ii).

[0138] En una forma de realizacion particular de la presente invencion el granulo de la presente invencion se trata con vapor y/o se granula.

Pienso para animales

[0139] El granulo de la presente invencion es adecuado para el uso en las composiciones de pienso para animales. El granulo se mezcla con componentes de pienso, tal composicion de pienso se llama el pienso triturado.

Las caracterfsticas del granulo permiten su uso como un componente de una composicion que es bien adecuada como un pienso para animales, que es tratado con vapor y posteriormente granulado.

En una forma de realizacion particular la invencion es una composicion de pienso granulada y tratada con vapor que comprende un granulo que comprende una enzima de pienso y una sal de zinc de un acido organico.

[0140] El termino animal incluye todos los animales. Ejemplos de animales son no rumiantes, y rumiantes, tales como vacas, oveja y caballos. En una forma de realizacion particular, el animal es un animal no rumiante. Animales no rumiantes incluyen animales monogastricos, por ejemplo cerdos o puercos (incluyendo, pero no limitado a, lechones, cerdos en crecimiento, y cerdas); aves tales como pavos y pollo (incluyendo pero no limitado a pollos de engorde, gallinas ponedoras); terneros jovenes; y peces (incluyendo pero no limitado a salmon).

[0141] El pienso de la presente invencion puede comprender protefnas vegetales. El termino protefnas vegetales como se utiliza en este caso se refiere a cualquier compuesto, composicion, preparacion o mezcla que incluye al menos una protefna derivada de u originada de un vegetal, incluyendo protefnas modificadas y derivados de protefna. En formas de realizacion particulares, el contenido de protefna de las protefnas vegetales es al menos 10, 20, 30, 40, 50, o 60% (p/p).

[0142] Las protefnas vegetales pueden derivar de fuentes de protefna vegetal, tales como leguminosas y cereales, por ejemplo materiales de plantas de las familias Fabaceae (Leguminosae), Cruciferaceae, Chenopodiaceae, y Poaceae, tal como harina de soja, harina de lupino y comida de semilla de colza.

[0143] En una forma de realizacion particular, la fuente de protefna vegetal es material de una o varias plantas de la familia Fabaceae, por ejemplo semilla de soja, altramuz, guisante, o judfa.

[0144] En otra forma de realizacion particular, la fuente de protefna vegetal es material de una o varias plantas de la familia Chenopodiaceae, por ejemplo remolacha, remolacha azucarera, espinaca o quinoa.

[0145] Otros ejemplos de fuentes de protefna vegetal son semilla de colza, y repollo.

[0146] Semilla de soja es una fuente de protefna vegetal preferida.

[0147] Otros ejemplos de fuentes de protefna vegetal son cereales tales como cebada, trigo, centeno, avena, mafz (grano), arroz, y sorgo.

[0148] Aditivos de pienso adecuados son inhibidores enzimaticos, vitaminas liposolubles, vitaminas solubles en agua, oligoelementos y macrominerales.

[0149] Ademas, ingredientes opcionales de aditivo de pienso son agentes colorantes, compuestos de aroma, estabilizadores, peptidos antimicrobianos, y/o al menos otra enzima seleccionada de entre fitasas EC 3.1.3.8 o 3.1.3.26; xilanasas EC 3.2.1.8; galactanasas EC 3.2.1.89; y/o beta-glucanasas EC 3.2.1.4.

[0150] Ejemplos de peptidos antimicrobianos (AMP) son CAP18, Leucocina A, Tritrpticina, Protegrina-1, Tanatina, Defensina, ovispirina tal como novispirina (Robert Lehrer, 2000), y variantes, o fragmentos de los mismos que retienen actividad antimicrobiana.

[0151] Ejemplos de polipeptidos antifungicos (AFP) son el Aspergillus giganteus, y peptidos de Aspergillus niger, al igual que variantes y fragmentos de los mismos que retienen actividad antifungica, como se describe en WO 94/01459 y PCT/DK02/00289.

[0152] Normalmente, vitaminas normalmente lipo e hidrosolubles, al igual que oligoelementos forman parte de la llamada premezcla destinada para la adicion al pienso, mientras que macrominerales son normalmente anadidos por separado al pienso.

[0153] Las siguientes son listas no exclusivas de ejemplos de estos componentes:

Ejemplos de vitaminas liposolubles son vitamina A, vitamina D3, vitamina E, y vitamina K, por ejemplo vitamina K3.

[0154] Ejemplos de vitaminas hidrosolubles son vitamina B12, biotina y colina, vitamina B1, vitamina B2, vitamina B6, niacina, acido folico y pantotenato, por ejemplo ca-D-pantotenato.

[0155] Ejemplos de oligoelementos son manganeso, zinc, hierro, cobre, yodo, selenio, y cobalto.

Ejemplos de macrominerales son calcio, fosforo y sodio.

[0156] En todavfa otras formas de realizacion particulares, la composicion de pienso para animales de la presente invencion contiene 0-80% mafz; y/o 0-80% sorgo; y/o 0-70% trigo; y/o 0-70% cebada; y/o 0-30% avena; y/o 0-40% harina de soja; y/o 0-10% harina de pescado; y/o 0-20% suero de leche.

[0157] La presente invencion es posteriormente descrita por los siguientes ejemplos.

Metodos y materiales

Prueba de vapor

[0158] Una prueba de tratamiento con vapor a escala de laboratorio ha sido desarrollada para simular las actividades residuales que son encontradas despues de la granulacion con vapor a gran escala.

[0159 La prueba de tratamiento con vapor a escala de laboratorio comprende un mezclador Lodige de 5 litros equipado con una envoltura.

El mezclador tambien tiene una abertura en el fondo, que se puede usar para un termopar o introduccion de vapor a traves de un tubo.

Flujo de vapor para el tratamiento de los granulados son controlados dejando el vapor a 1.5 bar pasando un agujero de 2.0 mm.

El mezclador se precalienta por vapor a traves de la envoltura mezcladora para alcanzar una temperatura de 100°C. Para evitar el condensado en conexiones de vapor y tubo para ser insertado en el mezclador, un flujo de vapor es permitido antes de la introduccion del granulado.

Las condiciones de pruebas comprenden una serie de acciones controladas con precision en el tiempo para buena reproducibilidad.

A tiempo cero, 1 kg de granulados de enzima se anade al mezclador mientras giran las herramientas mezcladoras a toda velocidad.

Inmediatamente despues el tubo de vapor se inserta en el mezclador para que los granulados alcancen 100°C, y despues de precisamente 30 segundos el vapor es desactivado.

La mezcla se mantiene a 100°C durante otros 30 segundos tras lo cual aprox 200 gramos se vierten en una red de tamizado de 75 micras.

Para enfriar inmediatamente el granulado caliente una red es situada encima de la red de muestra y la muestra se enfrfa durante 60 segundos usando una tapa conectada a la ventilacion de aire.

Una muestra de referencia es tomada antes y despues del tratamiento con vapor y enviada a la medicion de actividad FYT para calcular la actividad residual.

Mediciones de estabilidad de qranulacion

Confiquracion experimental en el ejemplo 5, 8 y 11:

[0160] Aproximadamente 50 g de granulado enzimatico fue premezclado con 10 kg de pienso durante 10 minutos en un mezclador horizontal pequeno.

Esta premezcla fue mezclada con 90 kg de pienso durante 10 minutos en un mezclador horizontal mas grande. Del mezclador el pienso fue conducido al acondicionador (un mezclador de cascada con inyeccion de vapor) a razon de aproximadamente 300 kg/hora.

El acondicionador calento el pienso a 100°C (medido en la salida) por inyeccion de vapor.

El periodo de permanencia en el acondicionador fue 60-70 segundos.

Del acondicionador el pienso fue conducido a una prensa de Simon Heesen equipada con un cuno horizontal de 3.0x35 mm y prensado hasta granulos con una longitud de alrededor de 15 mm.

Despues de la prensa los granulos fueron colocados en un refrigerador de aire y enfriados durante 15 minutos. Formulacion de pienso:

[0161]

74.0% mafz molido

20.7% semola de soja tostada

5.0% Aceite de soja

0.3% premezcla Solivit Mikro 106 de minerales y vitaminas

12% Contenido de agua

Analisis de actividad de fitasa

[0162] Metodo: fitasa divide acido fftico en fosfato, el fosfato liberado se reacciona con vanadio y oxidos de molibdeno en un complejo coloreado (amarillo). La absorbancia se mide a 415 nm.

[0163] Unidad: 1 FTU = cantidad de enzima que a condiciones estandar (como se da debajo) libera fosfato equivalente a 1 pM de fosfato por minuto.

Tampones:

[0164]

Tampon de extraccion: 0.01% Tween 20 (polioxietileno sorbitan monolaurato)

Sustrato: 5 mM acido fftico, 0.22M acetato (acetato de sodio/acido acetico), pH 5.5.

Reactivo: 5 mM de vanadato de amonio, 20 mM de heptamolibdato de amonio tetrahidrato, 40 mM amonfaco, 2.4M acido nftrico

Procedimiento:

[0165] Extraccion de pienso: 50 g de pienso son extrafdos en un tampon de extraccion de 500 ml durante 1 hora. Otra dilucion eventual en el tampon de extraccion si la actividad es superior a 2.5 FTU/g de pienso. (nivel de deteccion es 0.1 FTU/g de pienso). La muestra es centrifugada (15 minutos a 4000 r.p.m.). 300 pl de sobrenadante se mezclan con 3 ml sustrato y se reacciona durante 60 minutos a 37 grados C. 2 ml de reactivo se anade. Las muestras son centrifugadas (10 minutos a 4000 rpm.). La absorbancia a 415 nm es medida. La actividad se determina con respecto a una curva estandar preparada con KH²PO⁴.

[0166] Se hace referencia a WO 2003/66847.

Formas de realizacion preferidas

[0167] Las formas de realizacion preferidas de la invencion se describen en el conjunto de elementos a continuacion.

ELEMENTOS

[0168]

1. Un granulo adecuado para PIENSO que comprende una enzima y una sal de zinc de un acido organico. 2. El granulo del elemento 1, en el que el granulo se trata con vapor.

3. El granulo del elemento 1 o 2, en el que la enzima y la sal de zinc de un acido organico estan presentes como una mezcla en el granulo.

4. El granulo de cualquier elemento precedente, en el que el granulo comprende un nucleo y una capa que rodea al nucleo.

5. El granulo del elemento 4, en el que la enzima y la sal de zinc de un acido organico estan presentes en el nucleo del granulo.

6. El granulo del elemento 4, en el que la enzima y la sal de zinc de un acido organico estan presentes en la capa que rodea el nucleo.

7. El granulo de los elementos 1 a 6, en el que la cantidad de sal de zinc de un acido organico anadido esta entre el 0,01 y el 15% p /p en base al nucleo de la enzima.

8. El granulo de los elementos 1 a 6, en el que la cantidad de sal de zinc de un acido organico anadido esta entre el 0,05 y el 10% p/p en el nucleo de la enzima.

9. El granulo de acuerdo con cualquiera de los elementos anteriores, en el que la sal de zinc de un acido organico se selecciona del grupo que consiste en sales de zinc de citrato, malato, maleato, malonato, metionato, succinato, lactato, formato, acetato, butirato, propionato, benzoato, tartrato, ascorbato, gluconato, quelatos de zinc o combinaciones de los mismos.

10. El granulo segun el elemento 9, en el que los quelatos de zinc se seleccionan del grupo que consiste en quelato de metionina de zinc, quelato de lisina de zinc y combinaciones de los mismos.

11. El granulo segun el elemento 9, en el que la sal de zinc de un acido organico se selecciona del grupo que consiste en acetato de zinc, citrato de zinc y metionina de zinc.

12. El granulo segun cualquiera de los elementos anteriores, en el que la enzima se selecciona del grupo que consiste en amilasas, fosfotasas, fitasas, celulasas, p-glucanasas, hemicelulasas, proteasas, peptidasas, galatosidasas, pectinasas, esterasas, lipasas, glucosa oxidasa y mezclas de las mismas.

13. El granulo segun cualquiera de los elementos 1 a 11, en el que la enzima se selecciona del grupo que consiste en amilasas, proteasas, beta-glucanasas, fitasas, xilanasas, fosfolipasas, glucosa oxidasas y mezclas de las mismas.

14. El granulo segun cualquiera de los elementos anteriores, en el que la enzima es de calidad alimentaria. 15. El granulo de acuerdo con cualquiera de los elementos anteriores, en el que la sal de zinc de un acido organico es de calidad alimentaria.

16. El granulo de acuerdo con cualquiera de los elementos anteriores, en el que los granulos tienen un tamano de partfcula inferior a 700 pm.

17. El granulo de acuerdo con cualquiera de los elementos anteriores, en el que el tamano del granulo esta entre 210 y 390 pm.

18. El granulo segun cualquiera de los elementos anteriores, en el que la enzima es termolabil.

19. El granulo segun cualquiera de los elementos anteriores, en el que el granulo comprende un revestimiento de sal.

20. El granulo segun cualquiera de los elementos anteriores, en el que el granulo comprende un recubrimiento de polfmero.

21. El granulo segun cualquiera de los elementos anteriores, en el que el granulo comprende un revestimiento de cera.

22. El granulo segun cualquiera de los elementos anteriores, en el que el granulo comprende una fuente de acido lactico.

23. Un proceso de preparacion de los granulos de los elementos 1-22, que comprende los pasos de:

a) preparar un nucleo que comprende una sal de zinc de un acido organico y una enzima b) recubrir el nucleo con un material de recubrimiento

24. El proceso segun el elemento 23, en el que el granulo se prepara en un mezclador, un lecho fluido, un secador por pulverizacion fluidizado, un fluidizador por pulverizacion, un secador por pulverizacion o un extrusor.

25. El proceso de acuerdo con los elementos 23 a 24, en el que la sal de zinc de un acido organico se agrega al proceso como un lfquido.

26. El proceso de acuerdo con los elementos 23 a 24, en el que la sal de zinc de un acido organico se agrega como un polvo.

27. El proceso de acuerdo con los puntos 23 a 26, en el que el nucleo comprende una partfcula inerte.

28. Una composicion de pienso que comprende componentes de pienso y el granulo de cualquiera de los puntos 1 a 22.

29. La composicion de pienso del elemento 28, en donde los componentes del alimento se seleccionan del grupo que consiste en protefnas vegetales, vitaminas solubles en grasa, vitaminas solubles en agua, oligoelementos, macro minerales y combinaciones de los mismos.

30. Una composicion de pienso granulado que comprende cualquiera de los granulos de los puntos 1 a 22. 31. Una composicion alimenticia tratada con vapor que comprende cualquiera de los granulos de los puntos 1 a 22.

32. Un metodo para alimentar animales que comprende administrar la composicion de pienso del punto 28 a 31 a un animal.

33. Un metodo para fabricar una composicion de pienso que comprende los pasos de:

i. mezclar los componentes de pienso con cualquiera de los granulos de los elementos 1 a 22, ii. tratar con vapor dicha composicion (i), y

iii. Peletizar dicha composicion (ii).

34. El uso de cualquiera de los granulos del elemento 1 a 22 para composiciones de piensos granulados tratados con vapor.

EJEMPLOS

Ejemplo 1

[0169] Un polvo consistente en:

I .5 Kg de celulosa fibrosa, Arbocel BC200

0.75 Kg de ligante de carbohidrato, Avedex W80

I I . 362 kg de sulfato de sodio finamente molido

es granulado en un mezclador Lodige FM 50 con un lfquido de granulacion consistente en:

0.75 kg de ligante de carbohidrato, Avedex W80

0.3 Kg de almidon de trigo

1.7 Kg de concentrado de fitasa

1.275 Kg de agua

[0170] La granulacion fue realizada como se describe en la patente de EE. UU. n° 4,106,991, Ejemplo 1.

[0171] El granulado obtenido es secado en un lecho fluido hasta un contenido de agua por debajo de 1% y tamizado para obtener un producto con la gama de partfcula 250 pm a 850 pm.

Finalmente, el producto es recubierto con 11,5% de aceite de palma y 22% de carbonato calcico en un modo segun se describe en la patente de EE. UU. n° 4,106,991, Ejemplo 22.

Ejemplo 2

[0172] Un polvo consistente en:

I , 5 Kg de celulosa fibrosa, Arbocel BC200

0,75 Kg de ligante de carbohidrato, Avedex W80

I I , 287 kg de sulfato de sodio finamente molido

es granulado en un mezclador Lodige FM 50 con un lfquido de granulacion consistente en:

0,75 Kg de ligante de carbohidrato, Avedex W80

0,3 Kg de almidon de trigo

0,075 Kg de acetato de Zn x 2 H²O

1,7 Kg de concentrado de fitasa

0,215 Kg de H²SO⁴10%

0,975 Kg de agua

[0173] La granulacion es realizada segun se describe en la patente de EE. UU. n° 4,106,991, Ejemplo 1.

[0174] El granulado es secado en un lecho fluido hasta un contenido de agua por debajo de 1% y tamizado para obtener un producto con la gama de partfcula 250 pm a 850 pm.

Finalmente, el producto es recubierto con 11% aceite de palma y 22% de carbonato calcico en un modo segun se describe en la patente de EE. UU. n° 4,106,991, Ejemplo 22.

Ejemplo 3

[0175] Un polvo consistente en:

I , 5 Kg de celulosa fibrosa, Arbocel BC200

0,75 Kg de ligante de carbohidrato, Avedex W80

I I , 122 kg de sulfato de sodio finamente molido

es granulado en un mezclador Lodige FM 50 con un lfquido de granulacion consistente en:

0,75 Kg de ligante de carbohidrato, Avedex W80

0,3 Kg de almidon de trigo

0,240 Kg de acetato de Zn x 2 H²O

1,7 Kg de concentrado de fitasa

0,419 Kg de H²SO⁴10%

0,75 Kg de agua

[0176] La granulacion es realizada en un modo segun se describe en la patente de EE. UU. n° 4.106.991, Ejemplo 1.

[0177] El granulado es secado en un lecho fluido hasta un contenido de agua por debajo de 1% y tamizado para obtener un producto con la gama de partfcula 250 pm a 850 pm. Finalmente, el producto es recubierto con 11,0% de aceite de palma y 22% de carbonato calcico en cierto modo como se describe en la patente de EE. UU. n° 4.106.991, ejemplo 22.

Ejemplo 4

[0178] Un polvo consistente en:

1.5 Kg de celulosa fibrosa, Arbocel BC200

0,75 Kg ligante de carbohidrato, Avedex W80

10,957 kg de sulfato de sodio finamente molido

es granulado en un mezclador Lodige FM 50 con un lfquido de granulacion consistente en:

0,75 Kg de ligante de carbohidrato, Avedex W80

0,3 Kg de almidon de trigo

0,405 Kg de acetato de Zn x 2 H²O

1,7 Kg de concentrado de fitasa

0,438 Kg de H²SO⁴2M

0,75 Kg de agua

[0179] La granulacion es realizada en un modo segun se describe en la patente de EE. UU. n° 4,106,991, Ejemplo 1.

[0180] El granulado es secado en un lecho fluido hasta un contenido de agua por debajo de 1% y tamizado para obtener un producto con la gama de partfcula 250 pm a 850 pm.

Finalmente, el producto es recubierto con 11% aceite de palma y 22% de carbonato calcico en un modo como se describe en la patente de EE. UU. n° 4,106,991, Ejemplo 22.

Ejemplo 5

[0181] Las muestras producidas en el ejemplo 1 a ejemplo 4 fueron evaluadas en una prueba de granulacion a 100°C en la salida del acondicionador. El contenido de fitasa fue medido utilizando el metodo analftico EB-SM 0559.02 version 01 (disponible de Novozymes contra pedido) antes de la granulacion y en los granulos de pienso despues de la granulacion.

Las siguientes actividades residuales de la fitasa fueron descubiertas:

[0182] La conclusion es que el acetato de Zn x 2 H2O mejora significativamente la estabilidad de la granulacion comparado con el Ejemplo 1 de referencia sin sal de zinc anadida de un acido organico.

Ejemplo 6

[0183] Un polvo consistente en:

I , 5 Kg de celulosa fibrosa, Arbocel BC200

0,75 Kg de ligante de carbohidrato, Avedex W80

I I , 267 kg de sulfato de sodio finamente molido

es granulado en un mezclador Lodige FM 50 con un lfquido de granulacion consistente en:

0,45 Kg de ligante de carbohidrato, Avedex W80

0,3 Kg de almidon de trigo

0,375 Kg de citrato de Zn x 2 H²O

1,8 Kg de concentrado de fitasa

0,033 kg de H²SO⁴1 N

1.025 Kg de agua

[0184] La granulacion es realizada en un modo segun se describe en la patente de EE. UU. n° 4,106,991, Ejemplo 1.

[0185] El granulado fue secado en un lecho fluido hasta un contenido de agua por debajo de 1% y tamizado para obtener un producto con la gama de partfcula 250 pm a 850 pm. Finalmente, el producto fue recubierto con 10% de aceite de palma y 14% de caolfn en un modo segun se describe en la patente de EE. UU. n° 4,106,991, Ejemplo 22.

Ejemplo 7

[0186] Un polvo consistente en:

I , 5 Kg de celulosa fibrosa, Arbocel BC200

0,75 Kg de ligante de carbohidrato, Avedex W80

I I , 342 kg de sulfato de sodio finamente molido

es granulado en un mezclador Lodige FM 50 con un lfquido de granulacion consistente en:

0,6 Kg de ligante de carbohidrato, Avedex W80

0,3 Kg de almidon de trigo

0,150 Kg de citrato de Zn x 2 H²O

1,8 Kg de concentrado de fitasa

0,027 Kg de H²SO⁴1 N

1.025 Kg de agua

[0187] La granulacion fue realizada en un modo segun se describe en la patente de EE. UU. n° 4.106.991, Ejemplo 1.

[0188] El granulado fue secado en un lecho fluido hasta un contenido de agua por debajo de 1% y tamizado para obtener un producto con la gama de partfcula 250 pm a 850 pm. Finalmente, el producto fue recubierto con 10,0% de aceite de palma y 14% de carbonato calcico en un modo como se describe en la patente de EE. UU. n° 4.106.991, Ejemplo 22.

Ejemplo 8

[0189] Las muestras producidas en el Ejemplo 6 y Ejemplo 7 fueron testadas en un ensayo de granulacion a 100°C, en la salida del acondicionador. El contenido de fitasa fue medido usando el metodo analftico EB-SM 0559.02 version 01 (disponible por Novozymes bajo pedido) antes de la granulacion y en los granulos de pienso despues de la granulacion. Las siguientes actividades residuales de la fitasa fueron encontradas:

[0190] La conclusion es que el citrato de Zn x 2 H2O mejora significativamente la estabilidad de la granulacion en comparacion con el Ejemplo 1 de referencia.

Ejemplo 9

[0191] Un polvo consistente en:

I , 5 Kg de celulosa fibrosa, Arbocel BC200

0,75 Kg de ligante de carbohidrato, Avedex W80

I I , 212 kg de sulfato de sodio finamente molido

es granulado en un mezclador Lodige FM 50 con un lfquido de granulacion consistente en:

0,75 Kg de ligante de carbohidrato, Avedex W80

0,3 Kg de almidon de trigo

0,150 Kg de quelato de metionina de Zn

1,7 Kg de concentrado de fitasa

1,125 Kg de agua

[0192] La granulacion fue realizada en un modo segun se describe en la patente de EE. UU. n° 4,106,991, Ejemplo 1.

[0193] El granulado fue secado en un lecho fluido hasta un contenido de agua por debajo de 1% y tamizado para obtener un producto con la gama de partfcula 250 pm a 850 pm. Finalmente, el producto fue recubierto con 11% de aceite de palma y 22% de carbonato calcico en un modo segun se describe en la patente de EE. UU. n° 4,106,991, Ejemplo 22.

Ejemplo 10

[0194] Un polvo consistente en:

I , 5 Kg de celulosa fibrosa, Arbocel BC200

0,75 Kg de ligante de carbohidrato, Avedex W80

I I , 062 kg de sulfato de sodio finamente molido

es granulado en un mezclador Lodige FM 50 con un lfquido de granulacion consistente en:

0,75 Kg de ligante de carbohidrato, Avedex W80

0,3 Kg de almidon de trigo

0,3 Kg de quelato de metionina de Zn

1,7 Kg de concentrado de fitasa

1,2 Kg de agua

[0195] La granulacion es realizada como se describe en la patente estadounidense N° 4.106.9911, Ejemplo 1.

[0196] El granulado fue secado en un lecho fluido a un contenido de agua inferior a 1% y tamizado para obtener un producto con la gama de partfcula 250 pm a 850 pm. Finalmente, el producto fue recubierto con 11,0% de aceite de palma y 22% de carbonato de calcio en un modo como se describe en la patente estadounidense N° 4.106.991, Ejemplo 22.

Ejemplo 11

[0197] Las muestras producidas en el Ejemplo 9 y Ejemplo 10 fueron evaluadas en una prueba de granulacion a 100°C en la salida del acondicionador.

El contenido de fitasa fue medido utilizando el metodo analftico EB-SM 0559.02 version 01 (disponible de Novozymes bajo pedido) antes de la granulacion y en los granulos de pienso despues de la granulacion.

Las siguientes actividades residuales de la fitasa fueron encontradas:

[0198] La conclusion es que quelato de metionina de Zn mejora significativamente la estabilidad de granulacion en comparacion con la referencia, Ejemplo 1.

Ejemplo 12

[0199] La estabilidad per se fue evaluada. Actividad Residual de la fitasa en [%]:

[0200] Se muestra que especialmente citrato de zinc y metionina de zinc tienen estabilidad per se muy buena.

Ejemplo 13

[0201] Dos granulos fueron preparados: un granulo que comprende acetato de zinc y un granulo que comprende sulfato de zinc.

Granulo 1:

[0202] Un polvo consistente en:

1.5 Kg de celulosa fibrosa, Arbocel BC200

0,75 Kg de ligante de carbohidrato, Avedex W80

11,042 kg de sulfato de sodio finamente molido

se granula en un mezclador Lodige FM 50 con un lfquido de granulacion consistente en:

0,75 Kg de ligante de carbohidrato, Avedex W80

0,3 Kg de almidon de trigo

0,36 Kg de acetato de zinc x 2H2O

1.475 Kg de concentrado de fitasa

1,10 Kg de agua

Granulo 2:

[0203] Un polvo consistente en:

1.5 Kg de celulosa fibrosa, Arbocel BC200

0,75 Kg de ligante de carbohidrato, Avedex W80

10,868 kg de sulfato de sodio finamente molido

fue granulado en un mezclador Lodige FM 50 con un lfquido de granulacion consistente en:

0,75 Kg de ligante de carbohidrato, Avedex W80

0,3 Kg de almidon de trigo

0,534 Kg de sulfato de zinc x 7H2O

1.475 Kg de concentrado de fitasa

1,20 Kg de agua

[0204] La granulacion fue realizada en cierto modo como se describe en la patente estadounidense n° 4,106,991, Ejemplo 1.

[0205] El granulado obtenido fue secado en un lecho fluido hasta un contenido de agua por debajo de 1% y tamizado para obtener un producto con la gama de partfcula 250 pm a 700 pm.

[0206] La actividad residual despues de la granulacion y secado de las muestras producidas en comparacion con la cantidad dosificada de unidades de fitasa fue calculada. El contenido de fitasa fue medido utilizando el metodo analftico EB-SM 0511 (disponible de Novozymes bajo pedido). La siguiente actividad residual de la fitasa fue descubierta:

[0207] La conclusion es que acetato de Zn x 2H2O esta suministrando mejor estabilizacion de la fitasa durante la granulacion que sulfato de Zn x 7H2O.

Ejemplo 14

[0208] Dos granulos fueron preparados: un granulo que comprende acetato de zinc y un granulo que comprende sulfato de zinc.

Granulo 1:

[0209] Un polvo consistente en:

1.5 Kg de celulosa fibrosa, Arbocel BC200

0,75 Kg de ligante de carbohidrato, Avedex W80

10,592 kg de sulfato de sodio finamente molido

fue granulado en un mezclador Lodige FM 50 con un lfquido de granulacion consistente en:

0,75 Kg de ligante de carbohidrato, Avedex W80

0,3 Kg de almidon de trigo

0,45 Kg de polvo de "licor de maceracion del mafz"

0,36 Kg de acetato de zinc x 2H2O

1.475 Kg de concentrado de fitasa

0,850 Kg de agua

Granulo 2:

[0210] Un polvo consistente en:

1.5 Kg de celulosa fibrosa, Arbocel BC200

0,75 Kg de ligante de carbohidrato, Avedex W80

10,418 kg de sulfato de sodio finamente molido

fue granulado en un mezclador Lodige FM 50 con un lfquido de granulacion consistente en:

0,75 Kg de ligante de carbohidrato, Avedex W80

0,3 Kg de almidon de trigo

0,45 Kg de polvo de "licor de maceracion del mafz"

0,534 Kg de sulfato de zinc x 7H2O

1.475 Kg de concentrado de fitasa

1,20 Kg de agua

[0211] La granulacion fue realizada en cierto modo como se describe en la patente estadounidense n° 4.106.991, ejemplo 1.

[0212] Los granulos obtenidos fueron secados en un lecho fluido hasta un contenido de agua por debajo de 1% y tamizados para obtener un producto con la gama de partfcula 250 pm a 700 pm.

[0213] Actividad residual despues de la granulacion y secado de las muestras producidas en comparacion con la cantidad dosificada de unidades de fitasa fueron calculadas.

El contenido de fitasa fue medido utilizando el metodo analftico EB-SM 0511 (disponible por Novozymes bajo pedido).

La siguiente actividad residual de la fitasa fue descubierta:

[0214] La conclusion es que acetato de Zn x 2H2O esta proporcionando mejor estabilizacion de la fitasa durante la granulacion que sulfato de Zn x 7H2O.

[0215] Granulo 1 y 2 fueron recubiertos con 9-10% aceite de palma y 22% de carbonato calcico en cierto modo como se describe en la patente estadounidense n° 4.106.991, Ejemplo 22.

[0216] Los granulos recubiertos fueron luego evaluados en una prueba de vapor de laboratorio que expone los granulados durante 30 segundos a tratamiento de vapor y continua durante otros 30 segundos a 100°C antes del enfriamiento inmediato por aire.

Estas condiciones se asemejan a las condiciones de granulacion a gran escala.

El contenido de fitasa fue medido utilizando el metodo analftico EB-SM 0511 (disponible por Novozymes bajo pedido).

Las siguientes actividades residuales de la fitasa fueron descubiertas:

[0217] La conclusion fue que acetato de Zn x 2H2O muestra mejor estabilizacion de la enzima durante alta temperatura y humedad en comparacion con sulfato de Zn x 7H2O.

Claims (13)

REIVINDICACIONES

1. Granulo tratado con vapor adecuado para una composicion de pienso que comprende una enzima y una sal de zinc de un acido organico, donde el granulo comprende un nucleo y una capa de recubrimiento que rodea el nucleo, y donde la mezcla de la enzima y la sal de zinc de un acido organico esta presente en el nucleo del granulo.

2. Granulo segun la reivindicacion 1, donde la enzima y la sal de zinc de un acido organico esta presente en la capa que rodea al nucleo.

3. Granulo segun las reivindicaciones 1 a 2, donde la cantidad de la sal de zinc de un acido organico anadido es de entre 0,01-15% p/p basado en el nucleo enzimatico.

4. Granulo segun las reivindicaciones 1 a 2, donde la cantidad de la sal de zinc de un acido organico anadido es de entre 0,05-10% p/p basado en el nucleo enzimatico.

5. Granulo segun cualquiera de las reivindicaciones anteriores, donde la sal de zinc de un acido organico es seleccionada del grupo consistente en sales de zinc de citrato, malato, maleato, malonato, metionato, succinato, lactato, formato, acetato, butirato, propionato, benzoato, tartrato, ascorbato, gluconato, quelatos de zinc o combinaciones de las mismas.

6. Granulo segun la reivindicacion 5, donde los quelatos de zinc se seleccionan del grupo consistente en quelato de metionina de zinc, quelato de lisina de zinc y combinaciones de los mismos.

7. Granulo segun la reivindicacion 5, donde la sal de zinc de un acido organico es seleccionada del grupo consistente en acetato de zinc, citrato de zinc y metionina de zinc.

8. Granulo segun cualquiera de las reivindicaciones anteriores, donde la enzima es seleccionada del grupo consistente en amilasas, fosfotasas, fitasas, celulasas, p-glucanasas, hemicelulasas, proteasas, peptidasas, galactosidasas, pectinasas, esterasas, lipasas, glucosa-oxidasa, xilanasas, fosfolipasas y mezclas de las mismas.

9. Granulo segun cualquiera de las reivindicaciones anteriores, donde los granulos tienen un tamano de partfcula inferior a 700 pm.

10. Granulo segun cualquiera de las reivindicaciones anteriores, donde el tamano de los granulos es de entre 210 y 390 pm.

11. Granulo segun cualquiera de las reivindicaciones anteriores, donde el granulo comprende un recubrimiento de sal, un recubrimiento de polfmero, o un recubrimiento de cera.

12. Proceso de preparacion de los granulos segun las reivindicaciones 1-12, que incluye las etapas de:

a) preparar un nucleo que comprende una mezcla de una sal de zinc de un acido organico y una enzima, y b) recubrir el nucleo con un material de recubrimiento.

13. Composicion de pienso que comprende elementos de pienso y el granulo de las reivindicaciones 1 a 11.