CZ410099A3 - Sloučeniny pro imunoléčbu a diagnostikování tuberkulózy a způsoby jejich použití - Google Patents

Description

Tento vynález se týká detekce, léčby a prevence infekce způsobené Mycobacterium tuberculosis. Vynález se podrobně týká polypeptidů antigenu pro Mycobacterium tuberculosis, nebo jejich částí či variantami a jejich použití pro diagnostiku a vakcinaci proti infekci.

DOSAVADNÍ STAV TECHNIKY

Tuberkulosa je chronická, infekční choroba, obecně způsobena infekcí Mycobacterium tuberculosis. Toto onemocnění se hojně vyskytuje především v rozvojových zemích a je stále rostoucím problémem (ročně 8 milionů nových případů a 3 miliony úmrtí). Infekce může být dlouhou dobu bez příznaků, nejčastěji se projevuje akutním zápalem plic, horečkami a kašlem. Pokud není pacient zavčasu léčen, přidávají se další komplikace a případ často končí smrtí. Ačkoliv tuberkulosa může být léčena podáváním antibiotik, nezabraňuje to rozšiřování onemocnění. Nakažení jedinci nemusejí vykazovat příznaky onemocnění a přesto mohou být přenašeči. V průběhu léčby je velmi důležité dodržovat přísnou dietu (což je problém kontrolovat). Mnoho pacientů přeruší nebo nedodrží dietu, což může vést k neefektivní léčbě a k vzniku lékové resistence. Potlačení rozšíření tuberkulosy vyžaduje efektivní vakcinaci, přesnou a včasnou diagnostiku choroby. Obecně, vakcinace živými bakteriemi je pro vytvoření imunity nejúčinnější. K tomuto účelu nejpoužívanější mykobakterie je Bacillus Calmette-Guerin (BCG), nevirulentní kmen Mycobacterium bovis. Avšak bezpečnost a účinnost BCG je předmětem mnoha sporů a některé země, jako např. USA, neprovádí vakcinaci obyvatelstva. Běžná diagnostika se provádí pomocí kožního testu, který představuje intradermální působení tuberkulinu PPD (protein-purified derivative). Výsledná odpověď antigen-specifických T buněk je dána rozměrem ztvrdnuté oblasti kolem místa vpichu po 48 až 72 hodinách. Problémem tohoto testu je jeho citlivost a specifita, jedinci, kteří absolvovali vakcinaci BCG, nelze tímto způsobem rozlišit od jedinců infikovaných. Zatímco makrofágy se ukázaly být efektorem imunity proti M. tuberculosis, T buňky jsou převládajícími induktory této imunity. Ukázkou základní role T buněk v ochraně proti infekci způsobené M. tuberculosis je častý výskyt M.tuberculosis u pacientů nemocných AIDS, v důsledku vyčerpání CD4 T buněk (HIV interaguje s receptory CD4 T buněk). Mykobakterium-reaktivní CD4 T buňky ukázaly, že jsou potenciálními producenty gamma-interferonů (IFN-γ), které spouštějí antimikrobiální efekty makrofágů u • · tuberculosis, T buňky jsou převládajícími induktory této imunity. Ukázkou základní role T buněk v ochraně proti infekci způsobené M. tuberculosis je častý výskyt M.tuberculosis u pacientů nemocných AIDS, v důsledku vyčerpání CD4 T buněk (HIV interaguje s receptory CD4 T buněk). Mykobakterium-reaktivní CD4 T buňky ukázaly, že jsou potenciálními producenty gamma-interferonů (IFN-γ), které spouštějí antimikrobiální efekty makrofágů u myší. Zatímco role lidských EFN-γ není zcela jasná, studie ukazují, že 1,25-dihydroxy-vitamin D3, sám nebo v kombinaci s EFN-γ nebo s tumor necrosis factorem-alpha, aktivuje lidské makrofágy, které inhibují infekci {M.tuberculosis). Dále je známo, že IFN-γ stimuluje výrobu 1,25-dihydroxy-vitamin D3 u lidských makrofágů. Obdobně, EL-12 má důležitou funkci při stimulaci resistence vůči napadení M.tuberculosis. Podrobnější informace o imunologii infekce způsobné M.tuberculosis lze nalézt: Chán and Kaufmann in Tuberculosis: Pathogenesis, čwWCčw/zo/, Bloom (ed.) ASM Press, Washington, DC, 1994. Je zřejmé, že je třeba zlepšit způsoby vakcinací, metody prevence, léčení a detekce tuberkulosy. Tento vynález doplňuje současné metody,uvádí výhody a další zlepšení.

Tento vynález uvádí látky a metody pro prevenci a diagnostiku tuberkulosy. Polypeptidy jsou součástí imunogenní části M. tuberculosis antigenu, nebo variant takových antigenů, lišící se pouze v konzervativních substitucích a/nebo modifikacích. Antigen obsahující sekvenci aminokyselin kódovaných v DNA vybraných ze skupiny konsistentních sekvencí má pořadí. Sekvence č.: 1, 11, 12,83, 103-108, 125, 127, 129-137, 139 a 140, komplementy uvedených sekvencí, a DNA hybridní sekvence v sekvencích č.: 1, 1 1, 12,83, 103-108, 125, 127, 129-137, 139 a 140, nebo komplementy, které vznikly za mírných podmínek. Tento vynález dále popisuje polypeptidy obsažené v antigenu M. tuberculosis majících aminokyselinovou sekvenci ve skupině konsistentních sekvencích č.:16 až 33, 109, 126, 138, 141, 142 a jejich varianty. Dále jsou uvedeny DNA sekvence kódující výše zmíněné polypeptidy, expresní vektory obsahující tyto DNA sekvence a hostitelské buňky transformované nebo transfektované takovými expresními vektory.V neposlední řadě, tento vynález popisuje fúzi proteinů obsahujících první a druhé objevené polypeptidy, nebo, alternativně fúzi objevených polypeptidů a známého antigenu M. lubrculosis. Vycházeje s těchto aspektů, tento vynález uvádí farmaceutické zpracování, které zahrnuje jeden nebo více výše zmíněných polypeptidů nebo molekulu DNA kódující takovéto polypeptidy a fyziologicky akceptovatelný nosič. Vynález také uvádí vakcíny obsahující jeden nebo více z výše popsaných polypeptidů a na imunitní odpověd nespecifický nosič, společně s vakcínami zahrnujícími jednu nebo více DNA sekvencí kódující takovéto polypeptidy a nespecifický imunitní nosič. Uváděné metody umožňují indukci protektivní imunity u pacienta, zahrnují dávkování efektivního množství jednoho nebo více uváděných polypeptidů. V tomto • · • · patentu jsou uvedeny metody a diagnostické kity pro určení diagnosy pacientů. Metody jsou založeny na kontaktu kožních buněk pacienta a jednoho nebo více uvedených polypeptidů. Vyhodnocuje se rekce pacientovy pokožky. Diagnostické kity obsahují jeden nebo více z uvedených polypeptidů a látku, umožňující dostatečný kontakt polypeptidů s kožními buňkami pacienta. Jsou zde uvedeny metody jak pro detekci tuberkulosy u pacientů, tak metody zahrnující kontakt kožních buněk pacienta s jedním nebo více polypeptidy, kódovaných DNA sekvencí, které pochází ze skupiny sekvencí č.: 2 až 10, 102, 128, komplementy jmenovaných sekvencí, a hybridizované DNA sekvence č.: 2-10, 102, 128; dále pak detekce imunitní odpovědi na pacientově pokožce. Je zde také uveden popis diagnostického setu. Tyto a další aspekty tohoto vynálezu jsou podrobně popsány v referencích uvedených v detailním popisu vynálezu a na přiložených obrázcích a schématech. Kompletní citace je uvedena vždy na místě, kde se na ni odkazuje.

Obrázky 1A a 1B ilustrují stimulaci proliferace a produkcei interferonu-γ vT-buňkách odvozených rekombinací ORF-2 a syntetických peptidů od prvního PPD-positivního donoru (označovaný jako D7). Obrázky 2A a 2B ilustrují stimulaci proliferace a produkci interferonu-γ v T-buňkách odvozených rekombinací ORF-2 a syntetických peptidů od druhého PPDpositivního donoru (označovaný jako Dl60).

PODSTATA VYNÁLEZU

Jak je popsáno výše, vynález uvádí metody prevence, léčby a stanovení diagnosy tuberkulosy. Předmětem vynálezu jsou polypeptidy, které obsahují nejméně jednu imunogenní část antigenu M. tuberculosis, nebo část variace takových antigenů lišící se pouze konzervativní substitucí a/nebo modifikací. Termínem „polypeptid“ se rozumí aminokyselinový řetězec bílkovinové povahy jakékoli délky (např. antigeny), v níž jsou aminokyseliny spojeny kovalentní peptidovou vazbou. Polypeptidy mohou obsahovat úplnou imunogenní část jednoho z výše uvedených antigenů nebo obsahují nějaké doplňkové sekvence. Tyto doplňkové sekvence mohou být odvozeny od nativních antigenů M. tuberculosis a mohou mít, ale nemusí mít imunogenní charakter. Termínem „imunogenní“ se rozumí schopnost vyvolat imunitní odpověď (např. buněčnou) a to jak u jedinců tak u biologických vzorků. Antigeny, které mají imunogenní vlastnosti (a imunogenní části nebo varianty takových antigenů), jsou schopny stimulovat buněčnou proliferaci, produkci interleukinu 12 a/nebo produkci interferonu-γ v biologických vzorcích obsahujících jednu nebo více buněk ze skupiny T buněk, NK buněk, B buněk nebo makrofágů získaných z jedinců imunních vůči M. tuberculosis. Polypeptidy, obsahující jednu • · • · • · nebo více imunogenních částí, mohou být obecně použity k detekci tuberkulosy nebo mohou být použity pro imunizaci pacienta. Přípravky a metody popsané v tomto vynálezu mohou také obsahovat varianty výše zmíněných polypeptidů. „Polypeptidovou variantou“ je rozuměno to, že polypeptid se liší od původního polypeptidů jen v konzervativní substituci a/nebo také modifikaci, tak že terapeutické, antigenní a/nebo imunogenní vlastnosti zůstanou zachovány. Polypeptidové varianty obvykle vykazují 70 % shodnost, lépe 90 %, ideální je pak 95 % shoda s původním polypeptidem. Varianty polypeptidů s imunoreaktivními vlastnostmi mohou být také identifikovány pomocí modifikace aminokyselinové sekvence na jednom zvýše uvedených polypeptidů a vyhodnocením imunoreaktivity tohoto modifikovaného polypeptidů. Pro polypeptidy vhodné do diagnostických setů, mohou být jejich varianty identifikovány vyhodnocením modifikovaných polypeptidů v souvislosti se schopností vyvolat produkci protilátek, které signalizují přítomnost nebo nepřítomnost tuberkulosy. Obdobně,varianty požadovaných antigenů, jež mohou být úspěšně použity ve výzkumných metodách, mohou být identifikovány vyhodnocením schopnosti modifikovaných polypeptidů reagovat na protilátky přítomné v séru tuberkulosou nakažených pacientů. Také modifikované sekvence mohou být připraveny a testovány užitím zde popsaných metod. „Konzervativní substituce“ je taková, kde jedna aminokyselina je nahrazena jinou aminokyselinou s podobnými vlastnostmi tak, že zůstane zachována sekundární struktura polypeptidů a podstatně se nezmění ani jeho hydrofilní(fobní) vlastnosti. Příklady takových zaměnitelných aminokyselin: (1) ala, pro, gly, glu, asp, gin, asn, ser, thr; (2) cys, ser, tyr, thr; (3) val, ile, leu, met, ala, phe; (4) lys, arg, his; a (5) phe, tyr, trp, his. Dalším způsobem modifikace je delece nebo adice aminokyseliny, jež má minimální vliv na imunogenní vlastnosti, sekundární strukturu a hydrofilitu(fobitu) polypeptidů. Například, polypeptid může být konjugován se signální (nebo vedoucí) sekvencí na A-terminálním konci proteinu, který kotranslačně nebo posttranslačně řídí přenos proteinu. Pro usnadnění syntézy, purifikace a identifikace, případně pro vylepšení navázání polypeptidů na pevný nosič, může být polypeptid také konjugován s linkrem nebo jinou sekvencí (např. poly-His, konjugace s Fc oblastí imunoglobulinu). Antigeny M. íuberculosis a sekvence kódující tyto antigeny, mohou být připraveny užitím různých metod. Např. genomová nebo cDNA knihovna získaná z M. íuberculosis, může být screenována přímo použitím PBMC nebo T buněk získaných z jedinců imunních vůči M. íuberculosis. Tato knihovna může být přímo použita jako zásobárna rekombinovaných proteinů se schopností indukovat proliferaci a/nebo produkci interferonu-γ v T buňkách získaných z jedinců imunních vůči M. íuberculosis. T Buněčné antigeny mohou být selektovány na základě protilátkové reaktivity, jak je posáno výše. Alternativně, DNA sekvence kódující antigeny mohou být identifikovány screeningem příslušné genomové nebo cDNA (M.

• · ·· ·· ťuberculosis} získané ze séra pacienta infikovaného M. tuberculosis. Metody jsou detailně popsány: Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratories, Cold Spring Harbor, NY, 1989. Čisté antigeny jsou hodnoceny podle svých schopností vyvolat příslušnou imunitní odpověď (např. buněčnou), typická metoda je popsána výše. Antigeny mohou být částečně sekvenovány dle tradičních metod: Edman and Berg, Eur. J. Biochem. 80\ 116-132, 1967. Imunogenní antigeny mohou být také připraveny rekombinací užitím příslušné DNA, která se inkorpuje do expresního vektoru a je exprimována do příslušného hostitele. DNA sekvence kódující objevené antigeny může být také získána screeningem příslušné M. tuberculosis cDNA nebo genomové DNA, hledá se hybridizovanádegenerovaná sekvence, která by mohla kódovat aminokyselinovou sekvenci isolovaného antigenu. Degenerované oligonukleotidové sekvence pro takovéto použití mohou být navrženy a syntetizovány např. podle: Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratories, Cold Spring Harbor, NY, 1989 (a citace uvedené zde). Dále může být použita např. metoda PCR (polymerase chain reaction) - potřebná matrice nukleových kyselin se isoluje z cDNA nebo se získá z genomové knihovny. Bez ohledu na metodu přípravy, mají výše uvedené antigeny schopnost vyvolat imunitní odpověď. Konkrétněji, antigeny mají schopnost vyvolat proliferaci a/nebo produkci cytokinů (např. interferonu-γ a/nebo interleukinu 12) v T buňkách, B buňkách a/nebo makrofázích získaných od jedinců imunních vůči infekci M. tuberculosis. Výběr typu buněk pro imunitní odpověď na antigen bude samozřejmě záviset na požadované odpovědi. Např. produkce interleukinu-12 je snadno vyhodnocena užitím preparátů obsahující B.buňky a/nebo makrofágy. Jedinec imunní vůči infekci M. tuberculosis je někdo kdo má resistenci k tuberkulose, má dostatečné množství efektivních T buněk. Takovýto jedinci pozitivně reagují na podkožní vpich PPD (tuberculosis protein) - vytvoří se skvrna kolem vpich, cca 10 mm v průměru, jedinec dále nevykazuje žádné symptomy onemocnění tuberkulosou. T Buňky, NK buňky, B buňky a makrofágy od imunních jedinců jsou připravovány běžně užívanými metodami. PBMC mohou být získány bez separace dílčích buněk, např. gradientovou centrifugací (Ficoll^1M, Withrop Laboratories, NY). T Buňky, pro zde popsané použití, mohou být izolovány přímo z PBMC. Alternativně může být získána obohacená řada T buněk reaktivní proti mykobakteriálním proteinům, nebo klony T buněk reaktivní proti jednotlivým mykobakteriálním proteinům. Takovéto klony T buněk mohou být generovány např. kultivací PBMC z jedinců imunních vůči tuberkulose, s mykobakteriálními proteiny po dobu 2 až 4 týdnů. To umožní expanzi T buněk specifických pouze k mykobakteriálním proteinům. Získané buňky mohou být klonovány a testovány s jednotlivými proteiny, aby byla detailně definována jejich specifita. Obecně, antigeny positivně testované na proliferaci a/nebo produkci cytokinů (např.

interferonu-γ a/nebo interleukinu 12) získané pomocí T buněk, NK buněk, B buněk a/nebo makrofágů z imunních jedinců jsou imunogenní. Takováto analýza může být např. provedena metodami popsanými dále. Imunogenní části mohou být testovány obdobně, polypeptidy zde popisované mohou být jejich součástí. Schopnost polypeptidů (imunogenních antigenů, jejich částí, případně variant) indukovat buněčnou proliferaci je hodnocena na základě kontaktu buněk (T buněk a/nebo NK buněk) s polypeptidy a měření následné proliferace. Dostatečné množství proteinu pro vyhodnocení asi 10⁵ buněk je 10 ng až 100gg/ml, optimální hodnota je 10pg/ml. Inkubace polypeptidů s buňkami je standartně prováděna při 37 ° C, po dobu 6 dnů. Výsledky jsou vyhodnocovány standartními metodami, jako je např. vystavení buněk značenému thymidinu a měření jeho inkorporace do celulámí DNA. Polypeptid, který vykazuje nejméně trojnásobný nárůst množení ve srovnaní se slepým pokusem (např. množení buněk kultivovaných bez polypeptidů), je schopen indukovat množení. Schopnost polypeptidů stimulovat produkci interferonu-γ nebo interleukinu 12 v buňkách může být vyhodnocována spojením buněk s polypeptidem a měření úrovně jejich produkce. Dostatečné množství proteinu pro vyhodnocení asi 10⁵ buněk je 10 ng až 100 pg/ml, optimální hodnota je 10 pg/ml. Polypeptid může, ale nemusí být imobilizován na pevném nosiči, loži nebo biodegradovatelných kuličkách, podle patentu: US Patent 4 8 268 a 5 75 109. Inkubace polypeptidů s buňkami je standartně prováděna při teplotě 37 °C, 6 dnů. Při inkubaci buněk s polypeptidem je produkce interferonu-γ a/nebo interleukinu 12 sledována běžnými metodami, jako např. ELIS A (enzyme-linked immunosorbent assay) nebo v případě IL-12 heterodimeru P70 se měří proliferace T buněk. Obecně, polypeptid, jež vykazuje produkci nejméně 50 pg interferonu-γ na ml supernatantu (10⁴10⁵ T buněk na 1 ml) je považován za schopný stimulovat produkci interferonu-γ. Polypeptid, jež stimuluje produkci nejméně 50 pg/mL IL-12 P70 podjednotky nebo také 100 pg/mL IL-12 P40 podjednotky na 10⁵ makrofágů nebo B buněk (nebo na 3 x 10⁵ PBMC) je považován za vhodný pro stimulaci produkce IL-12. Imunogenní antigeny jsou takové antigeny, které stimulují proliferaci a/nebo produkci cytokinů (interferonu-γ a interleukinu-12) v T buňkách, NK buňkách, B buňkách a/nebo makrofágách získaných z nejméně 25 % jedinců imunních vůči tuberkulosové infekci. Množství těchto imunogenních antigenů, polypeptidů majících významné terapeutické vlastnosti, může být určeno jak bylo uvedeno výše a na základě procentuálního počtu jedinců, u kterých byla odpověď pozorována. Antigeny mající významné terapeutické vlastnosti nebudou stimulovat růst a produkci cytokinů in viíro v buňkách získáných z více než 25 % jedinců, kteří nejsou imunní vůči infekci tuberkulosy. Odpověď AY. íuberculosis buněk není v tomto případě specifická. Tyto antigeny, jež indukují odpověď T buněk, NK buněk, B buněk a/nebo makrofágů připravených z jedinců imunních vůči M. íuberculosis ve vysoké procentuální hodnotě (a

s malou pravděpodobností odpovědí v buňkách z jiných jedinců), mají velký terapeutický význam. Pokud antigen zásadně zeslabuje průběh infekce u experimentálních zvířat, může být použit jako součást vakcín. Vhodný postup pro přípravu vakcín pro použití na experimentálních zvířatech, je popsán níže. Účinnost vakcíny je určena schopností antigenu poskytovat nejméně 50 %ní snížení bakterií, nebo nejméně 40 %ní snížení úmrtnosti. Vhodnými experimentálními zvířaty jsou: myši, guinejská prasata a primáti, Antigeny mající diagnostické vlastnosti mohou být identifikovány na základě schopnosti vyvolat odpověď při intradermální aplikaci u jedinců s aktivní tuberkulosou, ale ne u neinfikovaných jedinců. Kožní testy se provádějí, jak je uvedeno níže, s pozitivní odpovědí vytvoření skvrny o minimálním průměru 5 mm kolem vpichu. Imunogenní části výše popsaných antigenů mohou být připraveny a identifikovány užitím dobře známých technik, které jsou shrnuty: Paul, Fundamental Immunology, 3d ed., Raven Press, 1993, p.. 243-247 a v referencích zde uvedených. Takovéto techniky zahrnují screening imunogenních vlastností polypeptidové částí nativního antigenu. Representativní růst a produkce cytokinů, jak jsou zde citovány, může být použit v tomto screeningu. Imunogenní část polypeptidu je ta část, která během representativní analýzy vykazuje téměř shodnou imunitní odpověď jako antigen (proliferaci, růst produkce interferonu-γ a/nebo interleukinu 12). Jinými slovy, imunigenní část antigenu může vyvolat nejméně 20 %ní (nejlépe 100 %ní) růst ve srovnání s modelovým růstem indukovaným antigenem. Imunogenní část může také stimulovat 20 % (nejlépe 100 %) produkce interferonu-γ nebo interleukinu 12, ve srovnání s jejich produkcí stimulovanou antigenem. Části a další varianty antigenu M. íuberculosis mohou být generovány syntetickým nebo rekombinantním způsobem. Syntetické polypeptidy mají obvykle méně než 100 aminokyselin, ještě častěji méně než 50 aminokyselin a jsou připravovány běžnými metodami peptidové chemie, např. syntéza na pevné fázi, metody podle Merrifielda: Merrifíeld, J. Am. Chem. Soc. 85'. 2149-2146, 1963. Vybavení pro automatické syntézy polypeptidu je komerčně dostupné, dodavateli jsou např. Perkin Elmer/Applied BioSystems Division, Foster City, CA . Varianty nativních antigenů mohou být připraveny užitím standartnich mutagenních technik (oligonucleotide-directed site-specific mutagenesis). Části DNA sekvencí mohou být odstraněny užitím standartnich technik užívaných ke zkrácení polypeptidů. Rekombinované polypeptidy, obsahující části nebo varianty nativních antigenů mohou být snadno připraveny z DNA sekvencí kódující polypeptid užitím standartnich technik. Např. supernatant, po kultivaci vhodného hostitelského vektorového systému, který sekretuje rekombinantní protein do kultivačního media, je v prvním kroku zakoncentrován pomocí komerčně dostupných filtrů. Pro další koncentraci a purifikaci jsou standartně používány postupy jako: afinitní chromatografie, iontoměniče a v závěrečné fázi HPLC na reversní fázi. Exprese může být dosaženo ve vhodné • · · · • · · · · · • · · ·· ·♦ • · · • · · • · · ·· ··· · hostitelské buňce, jež byla transformována nebo transfektována s expresním vektorem obsahující DNA molekulu kódující rekombinantní polypeptid. Vhodné hostitelské buňky jsou: prokaryota, kvasinky nebo vyšší eukaryotické buňky. Čatěji se používjí E. coli, kvasinky nebo savčí buňky jako jsou COS nebo CHO. Expresní DNA sekvence mohou kódovat v přírodě se vyskytující antigeny nebo jejich části nebo další jejich varianty. Bez ohledu na metody přípravy, polypeptidy zde uvedené, jsou připravovány v čisté formě (minimálně 80 %ní čistota, lépe 90 %ní, optimální je 99 %ní čistota polypeptidu). Výše uvedené syntetické polypeptidy nalezly široké využití ve farmaceutickém průmyslu při výrobě vakcín. Předmětem tohoto vynálezu jsou polypeptidy obsahující imunogenní část antigenu M. tuberculosis (nebo jeho variant), který obsahuje jednu nebo více aminikyselinových sekvencí kódovaných (a) na DNA sekvencích č.: 1 až 12, 83,102-108,125,127-137,139 a 140; (b) komplementy těchto sekvencí, nebo (c) DNA sekvence do značné míry homologní s (a) nebo (b). Tento vynález uvádí polypeptidy obsahující imunogenní část antigenu M. tuberculosis mající aminokyselinovou sekvenci kódovanou v sekvencích č.: 16 až 33,109,126,138,141,142 a jejich variantách. Antigeny M. tuberculosis zde uvedené obsahují varianty jež jsou kódované DNA sekvencemi, které jsou homologní s jednou nebo více DNA sekvencemi detailně zde citovanými. Termínem homologní se rozumí DNA sekvence, které jsou schopné hybridizace za mírných podmínek. Těmito podmínkami se rozumí: předmytí roztoky: 5X SSC, 0.5 % SDS, 1.0 mM EDTA (pH 8.0); hybridizace za teploty 50 °C až 65 °C, v 5X SSC přes noc nebo v případě mezidruhové homologie za teploty 45 °C, v 5X SSC; následné promytí při teplotě 65 °C po dobu 20 minut roztokem 2X, 0.5X a 0.2X SSC obsahující 0.1% SDS, a to dvakrát každým. Tyto hybridizované DNA sekvence, jako jsou nukleotidové sekvence, způsobené degenarací kódu, se promítnou ve struktuře imunogenních peptidů, popsaných v tomto vynálezu. Obdobně, tento vynález uvádí sloučení proteinů obsahujících první a druhý zkoumaný polypeptid, případně polypeptid známého antigenu M. tuberculosis, jako je antigen 38 kDa, popsaný v: Andersen and Hansen, Infecl. Immun, 57\ 2481-2488,1989, (Genbank Accession No. M30046), nebo antigen ESAT-6 již dříve objevený vM. bovis (Accession No. Ό34848) a vM. tuberculosis (Sorensen et al., Infecl Immun. 63: 1710-1717, 1995). Rovněž jsou zde uvedeny varianty takovýchto fúzí. Fúze proteinů může zahrnovat i peptidový linker mezi prvním a druhým polypeptidem. DNA sekvence kódující sloučení proteinu je, v tomto projektu, konstruována užitím známých DNA rekombinačních technik tak, aby se získala separátní DNA sekvence kódující první a druhý polypeptid ve shodném expresním vektoru. 3' Konec DNA sekvence kódující první polypeptid je připojen peptidovým linkrem (a nebo bez něho) k 5' konci DNA sekvenci kódující druhý polypeptid tak, že Čtecí rámce sekvencí jsou ve fázi pro uskutečnění mRNA translaci těchto dvou DNA sekvencí za «4 •· · · ·· ·· ·«·· · · · · · · « · • · · · · · · · · · · • ·«···· · · ·· » · ft • · · ··· ···· ·· *· ·· ···· ·« ·· vzniku jednoho proteinu, jež si zachová biologické vlastnosti jak prvního, tak i druhého polypeptidu. Sekvence peptidového linkeru zajistí dostatečnou vzdálenost prvního a druhého polypeptidu, tak aby zůstala zachována jejich sekundární a terciální struktura. Inkorporace tohoto linkeru do spojených proteinů patří mezi známé metody. Vhodné sekvence peptidového linkeru se vybírají s ohledem na následující faktory: (1) schopnost zaujímat flexibilní konformaci; (2) neschopnost zaujmout sekundární strukturu, jež by mohla interagovat s funkčními epitopy prvního nebo druhého polypeptidu; (3) nedostatek hydrofobních a nabitých zbytků, jež mohou reagovat s polypeptidovými funkčními epitopy. Použitelná sekvence peptidového linkru obsahuje: Gly, Asn a Ser zbytky, dále neutrální aminokyseliny jako Thr a Ala. Aminokyselinové sekvence použitelné pro peptidové linkry byly popsány: Maratea et al., Gene 40: 39-46, 1985; Murphy et al., Proč. Nati. Acad. Sci. USA 83: 8258-8262, 1986; US Patent 4 751 180. Linkerová sekvence má obvykle délku od 1 do asi 50 aminokyselin. Polypeptidové sekvence nevyžadují, aby první a druhý polypeptid měly neesenciální N-terminální aminokyselinovou oblast, kterou lze použít pro separaci funkčních domén a k ochraně sterické interference. Spojené DNA sekvence jsou směrovány k vhodnému translačnímu nebo transkripčnímu prvku. Regulační prvky, odpovědné za expresi DNA se nalézají na 5' konci DNA sekvence kódující první polypeptid. Podobně, u stop kodonů se požaduje, aby tyto ukončující signály pro transkripci a translaci byly přítomné pouze na 3' konci DNA kódující druhý polypeptid. Tento objev nabízí metody pro použití jednoho nebo více polypeptidů nebo sloučených polypeptidu (nebo DNA molekul kódující tyto polypeptidy) k indukci ochranné imunity u tuberkulosou napadených jedinců. Jak zde bylo již uvedeno, termín „pacient“ znamená jakýkoliv teplokrevný organismus, zejména pak člověk. Pacient může, ale nemusí být postižen nemocí. Ochranná imunita může být indukována z preventivních důvodů. Z tohoto hlediska, polypeptid, sloučený protein nebo DNA molekula jsou přítomny ve farmaceutické směsi nebo vakcíně. Farmaceutický přípravek se může skládat z jednoho nebo více polypeptidů, kde každý z nich může obsahovat jednu nebo více výše zmíněných sekvencí (nebo jejich varianty), a fyziologicky akceptovatelný nosič. Vakcíny se mohou skládat z jednoho nebo více výše zmíněných polypeptidů a nespecifického zesilovače imunitní odpovědi, což může být např. adjuvant nebo lipozom (do kterých jsou polypeptidy inkorporovány). Farmaceutické směsi a vakcíny mohou také obsahovat další antigeny M. tuberculosis, buď inkorporované do kombinace peptidů, nebo přítomné v separovaném polypeptidu. Alternativně, vakcína může obsahovat DNA kódující jeden nebo více polypeptidů, jež byly popsány výše, tak že polypeptid je syntetizován in šitu. V takových vakcínách může být DNA přítomna v jakékoli z variant transportního systému, obsahující expresní systém nukleových kyselin, bakteriální a viriální systémy. Vhodný expresní systém nukleových kyselin • · · · · · * • · ♦ · · · • · >···· » • · · · · · • · · * · · ·« ·· ·· • * ♦ ♦

obsahuje DNA sekvence pro expresi v pacientovi (vhodný promotor a terminální signál). Cílový bakteriální systém (jako např. Bacillus-Calmette-Guerriri) umožňuje expresi imunogenních částí polypeptidů na buněčný povrch. DNA může být zavedena užitím virového expresního systému (vakcína nebo virus neštovic, retrovirus nebo adenovirus), který může obsahovat nepatogenní (defektivní), replikačně vhodný virus. Techniky pro vkládání DNA do expresních systémů jsou běžně užívanými technikami. DNA může být „obnažena“, jak je podrobně popsáno v: Ulner et al., Science 259: 1745-1749, 1993 a nebo vreview: Cohen, Science 259: 1691-1692, 1993. Životnost „obnažené“ DNA může být zvýšena zabalením do biodegradovatelných částic, které jsou účinně transportovány do buněk. DNA vakcína, jak již bylo výše popsáno může být podávána současně s polypeptidem citovaným v tomto vynálezu, nebo s antigenem M. tuberculosis jako je např výše popsaný antigen 38 kD. Např. aplikace DNA kódující polypeptid uvedený v tomto vynálezu, a to buď samotného nebo v transportním systému, což bylo také popsáno, může být následována aplikací antigenu tak, aby se zvýšil ochranný imunitní efekt vakcíny. Způsob a frekvence aplikace, stejně tak jako dávkování je zcela individuální. Farmaceutické přípravky mohou být podávány injekcí (do kůže, do svalu, do žíly nebo subkutánně), do nosu (nosní dutinou) nebo ústy. Mezi první a třetí dávkou se doporučuje doba 1 až 36 týdnů. Optimální je, když 3 dávky jsou aplikovány do 3 až 4 měsíců. Po té by pravidelně mělo probíhat přeočkování. Každý pacient by měl mít vlastní lékařskou zprávu. Vhodná dávka je množství polypeptidů nebo DNA jež, když je aplikováno jak je výše popsáno, je schopné zvýšit imunitní odpověď v imunizovaném pacientovi tak, aby byl pacient úspěšně ochráněn před infekcí M. tuberculosis, a to po dobu 1 až 2 let. Množství polypeptidů přítomné v jedné dávce (nebo produkované in situ)\e, v rozsahu 1 pg až 100 mg na 1 kg hostitele, obvykle 10 pg až 1 mg na 1 kg hostitele, optimálně asi v rozsahu 1 pg až 1 pg na 1 kg hostitele. Vhodná velikost dávky je individuální v závislosti na pacientovi, obvykle 0,1 ml až 0,5 ml. Pokud je znám vhodný nosič, může být použit do farmaceutického přípravku. Pro parentální dávkování, jako je subkatenosní aplikace se jako nosič upřednostňuje voda, šalin, alkohol, tuky, vosk a pufry. Pro orální aplikace se používají pevné nosiče jako manitol, laktosa, škrob, stearát hořečnatý, sacharin sodný, mastek, celulosa, glukosa, sacharosa, uhličitan hořečnatý. Jako nosný materiál se také používají biodegradabilní kuličky (většinou sacharidového charakteru). Seznam vhodných materiálů je uveden v patentu: US Patent. 4 897 268 a 5 075 109. Jakékoliv varianty adjuvantů mohou být užity ve vakcínách, tak aby se zvýšila nespecifická imunitní odpověď. Většina adjuvantů obsahuje látky , které chrání antigeny od rychlého katabolismu, např. hydroxid hlinitý, minerální olej a nespecifické stimulátory imunitní odpovědi, jako lipid A, Bortadella pertussis nebo Mycobacterium tuberculosis. Vhodné adjuvanty jsou komerčně dostupné, např. Freundovo ·· »· »* *· ·· ·· • ·· · · · · · · · · · «··♦ · ♦ ♦ · · · · • ······ · * · · · · · • · · ··· «·«· • · ·· ·· · · * · · * ·· kompletní adjuvant a Freundovo nekompletní adjuvant (Difco Laboratories) a Merck Adjuvant 65 (Merck and Company. Inc., Rahway, NJ). Další adjuvanty obsahují kamenec, biodegradovatelné kuličky monofosforyl lipid A a quil A. Tento vynález uvádí metody pro použití jednoho nebo více polypeptidů popsaných výše, jež lze použít pro diagnosu tuberkulosy kožním testem. Jak je zde uvedeno, „kožní test“ je prováděn intradermálním vpichem jednoho nebo více výše popsaných polypeptidů, je sledována následná reakce (DTH) hypersensitivních jedinců (jako je červenání, svědění a zánět kůže). Injekce je připravena tak, aby bylo dosaženo vhodného kontaktu polypeptidů nebo polypeptidů s kožními buňkami pacientů (např. se používá tuberkulin syring nebo lml syringů). Reakce se obvykle sleduje po dobu 48 hodin po vpichu, častěji 48 až 72 hodin po vpichu. DHT reakce je reakce v buňkách s průměrnou imunitní odpovědí, může být odhalena již při předběžném testování antigenu (imunogenní části polypeptidů, nebo jeho variant), a je u pacientů nejrozšířenější. Odpověď lze měřit visuálně, použitím pravítka. Obecně, skvrna o průměru větším než je asi 0.5 cm, lépe větší než je asi 1.0 cm v průměru, je považována za positivní odpověď, indikuje infekci tuberkulosy, a může, ale nemusí znamenat aktivní chorobu. V rámci tohoto vynálezu jsou polypeptidy popsány tak, aby mohly být použity v kožním testu a výsledkem byl farmaceutický přípravek obsahující polypeptid a fyziologicky akceptovatelný nosič, jak bylo již popsáno drive. Takové přípravky standardně obsahují jeden nebo více výše zmíněných polypeptidů v množství okolo asi 1 pg až asi 100 pg, lépe asi 10 pg až asi 50 pg v objemu 0.1 mL. Nosič, který farmaceutický přípravek připravuje je obvykle roztok šalinu s příslušnými ochrannými složkami, jako např. fenol a/nebo Tween 80^IM. Polypetid používaný v kožním testu musí mít dostatečnou délku, tak aby mohl působit na místě vpichu po celou dobu reakce (podléhá samozřejmě katabolickým procesům). Obecně, polypeptid, mající nejméně 9 aminokyselin je postačující. Výhodou je , může-li být polypeptid přerušen makrofágem běhěm doby vpichu, umožní se tak vliv T buněk. Takovéto polypeptidy mohou obsahovat jednu nebo více repeticí v drive uvedených sekvencích a/nebo další imunogenní nebo neimunogenní sekvence.

PŘÍKLADY PROVEDENÍ VYNÁLEZU

Příklad 1

Purifikace a charakterizace polypeptidů z M. tuberculoso pomocí CD4+ buněčných linií generovaných z lidských PBMC ·* ·· ·· ·* ·· • · · · · · · · · · 4 · ··♦♦ ·· · ···· • ······ · · ·« » « · * · * · · · ·»·· ·· ·· ·· ···· ·» ··

Antigeny M. íuberculosis citované v tomto vynálezu byly isolovány expresním klonováním cDNA knihovny kmenů M. tuberculosis H37Rv a klasickými metodami podle Erdmana popsanými v Sanderson et al. (J. Exp. Med., 1995, 182: 1751-1757) a dále byla ukázána indukce proliferace PBMC a IFN-γ v imunoreaktivních T buněčných linií. Dvě CD4+ T buněčné linii, nazvané DC-4 a DC-5 byly generovány proti dendritickým buňkám infikovaných M. tuberculosis. Konkrétně, dendritické buňky byly připraveny z adherentních PBMC z jednoho donoru a následně infikovány tuberkulosou. Lymfofyty z téhož donoru byly kultivovány za limitního zředění s infikovanými dendritickými buňkami, aby se generovaly CD4+ T buněčné linie typu DC-4 a Dc-5. Ukázalo se, že tyto buněčné linie reagují s hrubým preparátem rozpuštěných proteinů zAí. tuberculosis, ale nereagují sTb38-l. Limitní zředění bylo zachováno, aby byla získána třetí linie CD4+ T buněk, označených DC-6, která, jak se ukázalo reaguje jak s proteiny M. tuberculosis, tak s Tb38-l._Genomová DNA byla isolována z kmene M. tuberculosis H37Rv a Erdman, a byla použita pro vytvoření expresní knihovny ve vektoru pBSK(-), použitím expresního Lambda ZAP expresního systému (Stratagene, La Jolla, CA). Tato knihovna byla transformována do E. coli, část indukovaných buněk byla inkubována s dendritickými buňkami a byla testována, jak je popsáno v příkladu 2, byla sledována schopnost inkubovaných dendritických buněk stimulovat buněčnou proliferaci a produkci IFN-γ v CD4+ T buňkách Dc-6. Positivní části byly znovu testovány s čistými M. tuberculosis klony. 19 Klonů bylo isolováno, u 9 bylo zjištěno, že obsahují již dříve identifikované antigeny M. tuberculosis, TbH-9 a Tb38-1, popsaných v patentu: US Patent Application NO. 08/533,634. Určení cDNA sekvencí pro zbylých 10 klonů zde uvedených (zde označených Tb224, Tb636, Tb424, Tb436, Tb398, Tb508, Tb441, Tb475, Tb488 a Tb465) je provedeno v sekvencích č.: 1 až 10. Odpovídající aminokyselinové sekvence pro Tb224 a Tb636 jsou uvedeny v sekvencích č.: 13 al4. Ukázalo se, že otevřené čtecí rámce pro dva antigeny jsou homologní s TbH-9, který je popsán výše. Zjistilo se také, že Tb224 a Tb636 se překrývají. Bylo zjištěno, že každý z Tb424, Tb436, Tb398, Tb508, Tb441, Tb475, Tb488 a Tb465 obsahuje dva malé otevřené čtecí rámce (označené ORF-1 a OR.F-2) nebo jejich obdobu s minoritními změnami v ORF-1 a ORF-2. Aminokyselinová sekvence ORF-1 a ORF-2 pro Tb424, Tb436, Tb398, Tb508, Tb441, Tb475, Tb488 a Tb465 je uvedena v sekvencích č.. 16 a 17, 18 a 19, 20 a21, 22 a 23, 24 a 25, 26 a 27, 28 a 29, 30 a 31. A konečně klony Tb424 a Tb436 obsahují třetí objevený čtecí rámec, označený jako ORF-U. Aminokyselinová sekvence ORF-U pro Tb424 a Tb436 je uvedena v sekvencích č. . 32 a 33. Bylo zjištěno, že Tb424 a Tb436 jsou překrývající se klony nebo dokonce duplikované/transposované kopie, jako Tb475 a Tb488. Tyto sekvence byly porovnány se známými sekvencemi v genomových knihovnách systémem BLASTN. Nebyly nalezeny ·· ·· ·» Φ· ·· • · · · · · · · · · · · • · · · · · · · · · · • · ··· · * · · · · · · * • · · · · · · · · · • φ Φ· ·· ···· ·· φ· homologní antigeny Tb226 a Tb431. Bylo zjištěno, že Tb636 je 100 % identický sjiž dříve nalezeným antigenem vM tuberculosis. Obdobně Tb508, Tb488, Tb398, Tb424, Tb436, Tb441, Tb465 a Tb475 jsou homologní sjiž známými klony M. tuberculosis. Konečně, Tb488 je 100 % homogní sA7. tuberculosis topoisomerasou I. Bylo syntetizováno 17 překrývajících se peptidů s otevřeným čtecím rámcem ORF-1 (označených 1-1 až 1-17, sekvence č.: 34 až 50) a 30 překrývajících se peptidů s otevřeným čtecím rámcem ORF-2 (označených 2-1 až 2-30, sekvence č.: 51 až 80), metodou popsanou níže v příkladu 3. Byla zkoumána schopnost syntetických peptidů a rekombinantních ORF-1 a ORF-2 indukovat proliferaci T buněk a produkci IFN-γ vPBMC z PPD-aktivních donorů, viz. příklad 2. Obrázky 1A-B a 2A-B ilustrují stimulaci proliferacec T buněk a produkce IFN-γ rekombinantním ORF-2 a syntézu peptidů 2-1 až 2-16 u dvou donorů, označených jako D7 a D160. Rekombinantní ORF-2 (také označovaný jako MTI) stimuluje proliferaci T buněk a produkci IFN-γ v PBMC u obou z donorů. Velikost stimulace PBMC je vidět na individuální syntéze peptidů, mění se v závislosti na donorů, to znamená, že každý donor rozhoduje o různosti epitopů na ORF-2. Proteiny kódované ORF-1, ORF-2 a ORFU byly dále nazývány MTS, MTI a MSF. Bylo syntetizováno a níže je popsáno 18 překrývajících se peptidů, ze sekvence MF (označených zde MSF-1 až MSF-18, sekvence č.: 84101), byla sledována jejich schopnost stimulovat proliferaci T buněk a produkci IFN-γ v CD4+ T buněčné linii generované z kultivačního media M. tuberculosis. Peptidy označené MSF-12 a MSF-13 (sekvence č.: 95 a 96) prokázaly nej vyšší reaktivitu. Dále byly syntetizovány dva překrývající se peptidy (sekvence č.: 81 a 82) s otevřeným čtecím rámem Tb224 a byla u nich prokázána indukce proliferaci T buněk a produkci IFN-γ v PBMC z PPD-positivních donorů. Dvě CD4+T buněčné linie u různých donorů byly generovány T.M. tuberculosis infikovaných dendritických buněk užitím výše zmíněných metod. Isolace dvou klonů označených jako Tb867 a Tb391 byla výsledkem screeningu knihovny cDNA M. tuberculosis. Určená sekvence Tb867 (sekvence č.: 102) byla shledána identickou sjiž dříve isolovaným klonem M. tuberculosis SCZ22G10 s 750 aminokyselinami velkou protein kinasou M. tuberculosis s otevřeným řetězcem. S porovnání určené sekvence cDNA pro Tb391 (SEQ ID NO. 103) s genomovou bankou nebyla nalezena homologie s dosud známou sekvencí. V dalších studií, CD4+T buněčné linie byly generovány z kultivačního media M. tuberculosis, jak je popsáno v podtržené části dříve. Bylo isolováno 5 reaktivních klonů, označených Tb431, Tb472, Tb470, Tb838 a Tb962. Určené sekvence cDNA pro Tb431, Tb472, Tb470 a Tb838 jsou uvedeny v sekvencích č.: 11, 12, 104 a 105, sekvence cDNA pro Tb962 jsou uvedeny v sekvencích č.: 106 a 107. Odpovídající předpokládaná aminokyselinová sekvence pro Tb431 je uvedena v sekvenci č.: 15. Následné studie vedly k isolaci celé sekvence cDNA pro Tb472 (sekvence č.: 108). Překřížené • · · · • · · • · · • · · · ·· • · « • · · ·· ··* · peptidy byly syntetizovány a použity pro identifikaci reaktivního otevřeného čtecího rámu. Předpokládaná aminokyselinová sekvence pro protein kódovaný Tb472 (označený jako MSL) je uvedena v sekvenci č. 109. Srovnání sekvencí Tb472 a MSL sgenomovou bankou, jak je popsáno výše, neukázalo, žádnou známou homologii. 15 Překřížených peptidů se sekvencí MSL (označených MSL-1 až MSL-15, sekvence č.: 110 až 124) bylo syntetizováno a testováno, jak je popsáno níže, pro schopnost stimulace proliferace T buněk a produkci IFN-γ vCD4+T buněčných linií získaných z kultivačního media M. tuberculosis. Peptidy označené jako MSL-10 (sekvence č.: 119) a MSL-11 (sekvence č.: 120) prokázaly vysokou reaktivitu. Srovnání určené cDNA sekvence Tb838 s genovou bankou ukázalo identitu s již dříve popsaným M. tuberculosis SCY07H7. Srovnání určené cDNA sekvence Tb962 s genovou bankou ukázalo homologii ke dvěma dříve popsaným M. tuberculosis, jeden kóduje část bakteroferritinu. Bylo však zjištěno, že rekombinantní bakteroferritin není reaktivní s T buněčnou linií. Klon Tb470, popsaný výše, byl použit pro získání celého řetězce (sekvence č.: 125), který vykázal homologii s TbH9 a bylo zjištěno, že kóduje 40 kDa antigen, označovaný jako Mtb40. Určená aminokyselinová sekvence pro Mtb40 je uvedena v sekvenci č.: 126. Obdobně, studie subsekvencí vedly k isolaci celého řetězce cDNA pro Tb431, uvedené v sekvenci č.: 83, bylo zjištěno, že tato sekvence kóduje otevřený čtecí rámec kódovaný Mtb40. Dále bylo zjištěno, že Tb470 a Tb431 obsahují potenciální otevřený čtecí rámec kódovaný U-ORF-like antigenem. Výsledkem screeningu expresní knihovny M. tuberculosis Erdman cDNA s multipletními CD4+ T buněčnými liniemi získanými z kultivačního media M. tuberculosis byla isolace tří klonů, označených jako Tb366,Tb433 a Tb439. Určené cDNA sekvence pro Tb366,Tb433 a Tb439 je uvedena v sekvencích č.: 127, 128 a 129. Srovnání těchto sekvencí s genovou bankou neukázalo odpovídající homologii kTb366. Naopak, Tb433 byl nalezen homologním sjiž dříve určeným antigenem M. tuberculosis MPT83. Tb439 byl shledán 100 % identický s dříve isolovaným M. tuberculosis SCY02B10. Linie CD4+ T buněk byla generována vůči M. tuberculosis PPD, podrobně popsáno výše, a použita pro screenování Erdmanovy cDNA expresní knihovny. Byl isolován reaktivní klon (označený jako Tb372), sekvence č.: 130 a 131. Při porovnáná těchto sekvencí s genovou bankou, nebyla nalezena žádná homologie. V dalších studích vedl screening M. tuberculosis cDNA expresní knihovny s CD4+ T buněčnou linií generovanou vůči dendritickým buňkám, které byly po dobu 8 dnů infikovány tuberkulosou, k isolaci dvou klonů, označených jako Tb390R5C6 a Tb390R2Cll. Určená sekvence pro Tb390R5C6 je uvedena v sekvenci č.: 132, sekvence pro Tb390R2Cll je uvedena v pod č.: 133 al34. Tb390R5C6 vykazuje 100 %ní identitu již dříve identifikovaným kosmidem M. tuberculosis. \ následujících studiích, byla výše popsaná metodologie použita pro screen genomové DNA knihovny M.

·· * · ·· ·· ·· · · ··«· ♦ · · · ···· • · · · ·· « ···' • · «·· · ' · ······ ·· ···· · · · · ·· *· ·« ···· ·· ·· tuberculosis, připravené následovně. Genomová DNA z M. tuberculosis (Erdmanův kmen) byla náhodně sestříhána na části o průměrné velikosti 2 kb, a ukončena Klenowovou polymerasou, následovanou přídavkem EciRI adaptoru. Insert byl následně ligován do screenovacího fágového vektoru (Novagen, Madison, Wi) a in vitro zabalen užitím fágového markrového extraktu (Novagen). Fágová knihovna (označovaná jako ErdÁScreen library) byla zvětšena a její části byly konvertovány do plasmidové expresní knihovny autosubklonovacím mechanismem pomocí

E. coli BM25.8 (Novagen). Plasmid DNA byl vyisolován z BM25.8 kultur obsahující pSCREEN rekombinanty a použit pro transformaci kompetentních buněk expresního hostitele - tj. kmen ML21 (DE3)pLysS. Transformované buňky byly alikvotně převedeny na mikrotittrační plotny (96 jamek), každá obsahovala místo pro přibližně 50 kolonií. Kopie takových ploten byly inkubovány s IPTG, aby došlo k expresi rekombinantních proteinů. Následovala indukce, plotny byly centrifugovány, aby se získaly pelety E. coli, které byly dále použity přímo v T buněčné expresi klonované CD4+T buněčné linie připravené z PPD-positivního donoru (donor 160), jak je popsáno výše. Část obsahující E. coli expresní antigeny M. tuberculosis byly následně rozděleny do dvou individuálních kolonií a opětovně analyzovány obdobným způsobem. Screening T buněčných linií z donoru 160 výše zmíněným způsobem vedl k získání 9 positivních odpovědí. Dřívější experimenty v rámci screeningu pBSK knihovny popsané výše s T buňkami z donoru 160 předpokládaly, že většina nebo všechny positivní klony by měly být TbH-9, Tb-381 nebo MTI (U.S.Patent pplication No. 08/533,634) nebo jejich varianty. Avšak, analýza (Southern) ukázala, že pouze 3 jamky hybridizovaly se směsí TbH-9, Tb-38-1 nebo MTI. Ze zbývajících 6 positivních jamek se dvě ukázaly identické. Určené sekvence 5' cDNA pro dva z isolovaných klonů (označených Y1-26C1 a Y1-86C11) jsou uvedeny v sekvencích č.: 135 a 136. Celá cDNA sekvence pro isolovaný klon označený hTcc#l je uvedena v sekvenci č.: 137 a odpovídající předpokládaná aminokyselinová sekvence je uvedena v sekvenci č.: 138. Porovnáním sekvence hTcc#l s genovou bankou popsanou výše, se ukázalo, že hTcc#l je homologní s již dříve popsaným klonem M. tuberculosis MTCY07H7B.06.

Příklad 2

Indukce T buněčné proliferace a interferonu-γ produkovaným antigeny M. tuberculosis

Schopnost rekombinantních antigenů M. tuberculosis indukovat T buněčnou proliferaci a produkci interferonu-γ, může být určena následovně. Proteiny mohou být indukovány IPTG a isolovány gelovou chromatografíí, jak bylo popsáno: Skeiky et al. Exp. Med., 1995, 18J:

·· ·· ·· ·· ·· ·· ···· ··♦♦ · *' · • · · · ·· · ···· • · ··· · · · ·«···» • · · · · · · · · · ·· ·· ·· ···· ·· t·

1527-1537. Purifíkované polypeptidy jsou dále testovány na schopnost indukce proliferace T buněk v PBMC preparátech. TBMC z donorů, u kterých je známa positivní reakce v PPD kožních testech, a které podporují T buněčnou proliferaci, jsou kultivovány v mediu obsahujícím RPMI 1640 s 10 % lidského sera a 50 pg/ml gentamicinu. Purifíkované polypeptidy jsou přidány v dvojnásobné koncentraci z 0.5 na 10 pg/mL. Po 6 dnech kultivace v 96 jamkových kruhových plotnách o objemu 200 μΐ, je 50 μΐ media z každé jamky odebráno pro stanovení IFN-γ hladiny, jak je popsáno níže. Dále je do každé jamky přidáno 1 pCi thimidinu značeného tritiem a za 18 hodin je výsledek analyzován na plynovém scintilátoru. Za positivní se považují frakce, kde proliferace ve dvou paralelách je třikrát větší než proliferace v normálním mediu. Produkce IFNγ je měřena pomocí ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay). Po dobu 4 hodin za pokojové teploty jsou na ELISA desky navázány monoklonální myšší protilátky proti lidskému IFN-γ (PharMingen, San Diego, CA). Jamky jsou blokovány PBS obsahujícím 5% (W/v) netučného sušeného mléka po dobu 1 hodiny za pokojové teploty. Desky jsou po té promyty a do každé jamky je přidáno polyklonální anti-human IFN-γ sérum, zředěné 1:3000 vPBS/10% normálním kozím šerem. Desky jsou inkubovány po dobu dvou hodin za pokojové teploty, omyty a dále je do každé jamky přidán anti-králičí IgG označen křenovou peroxidasou (Sigma Chemical So., St. Louis, MO), zředěný 1:2000 Pbs/5% netučným sušeným mlékem. Po dalších dvou hodinách inkubace při pokojové teplotě jsou desky omyty a je přidán TMB substrát. Reakce je zastavena po 20 minutách 1 N kyselinou sírovou. Je měřena optická hustota při 450 nm, vlnová délka 570 nm je použita jako referenční. Za positivní se považuje, když OD (ve dvou paralelách) je dvakrát větší než optická hustota z buněk kultivovaných v normálním mediu, plus 3 standardní odchylky.

Příklad 3

Purifíkace a charakterizace polypeptidů zAY. tuberculosis, používaných pro přípravu CD4+ T buněčných linií z myšší nakžených M. tuberculosis

M. tuberculosis infekce u myši C57BL/6 ukazuje, že k rozvoji progresivní choroby dochází přibližně v 2 až 3 týdnu po nákaze. Postup choroby je zastaven následkem vývoje T buněk. Tento model byl použit pro generování T beněčné linii schopné rozpoznat ochranné antigeny M. tuberculosis. Byly získány buňky ze sleziny C57BL/6 myši infikované M. tuberculosis po dobu 28 dní a tyto buňky byly použity pro přípravu anti- M. tuberculosis T buněčných linií, jak bylo popsáno dříve. Získané CD4+ T buněčné linie, byly spolu s normálními antigeny přítomnými v buňkách (ze sleziny) myši C57BL/6 použity pro testování knihovny M. tuberculosis ···· ·· · · · * · • ······ · · ·« · · · • · · · · · · · · · ·· ·· ·· *·«« «* «·

ErdXscreen, jak bylo popsáno dříve. Byl nalezen a isolován jeden aktivní klon (Y288C10) s vysokou stimulací T buněk. Sekvenování tohoto klonu Y288C10 ukázalo, že obsahuje dva geny v tandemu. Nalezená sekvence pro tyto dva geny (označené jako mTCC#l a mTCC#2) je uvedena v sekvencích č.: 139 a 140, odpovídající aminokyselinové sekvence jsou uvedeny v pod č.: 141 a 142. Srovnáním sekvencí s genovou bankou se zjistila identita s neznámou sekvencí dříve nalezeného klonu M. íuberculosis MTY21C12. Předpokládaná aminokyselinová sekvence mTCC#l a mTCC#2 jsou identické s dříve popsanými členy TbH9 proteinové skupiny.

Příklad 4

Syntéza syntetických polypeptidů

Polypeptidy mohou být syntetizovány na Millipore 9050 peptidovém syntetizátoru užitím FMOC chemie s HPTU aktivací (O-Benzotriazol-N,N,N',N'-tatramethyluronium hexafluorofosfát). Sekvence Gly-Cys-Gly může být připojena na konec peptidu metodou konjugace nebo značení peptidu. Odštěpení peptidů z pevného nosiče je prováděno užitím následující směsi: kyselina trifluoroctová : ethandiol : thioanisole : voda : fenol (40:1:2:2:3). Po dvou hodinách štěpení, mohou být peptidy precipitovány ve studeném methyl-t-butyl-etheru. Peptidové peletky mohou být rozpuštěny ve vodě obsahující 0.1% trifluoroctové kyseliny (TFA) a lyofilizovány před purifikací na Cl 8 reversní koloně na HPLC, v gradientu 0 % až 60 % acetonitrilu (obsahující 0.1% TFA) ve vodě (obsahující 0.1 % TFA). Následuje lyofilizace čistých frakcí, peptidy mohou být analyzovány pomocí hmotnostní spektrometrie nebo aminokyselinovou analýzou.

Jak stojí v předem uvedeném závěru, začlenění tohoto vynálezu, zde popsané, bylo z ilustračních důvodů, ale v duchu a oboru tohoto vynálezu mohou být provedeny různé modifikace.

<* • · '» · ·· ··· <· *♦ *· · · · » · · • · · · • · · • t ?>·· »♦ e· • · · · • » · · • · · · 9 • · · · ·· 9«

Seznam sekvencí

Sekvence č. 1 (i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 1886 párů bází (B) Typ: nukleová kyselina (C) Řetězec: dvojitý (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: DNA (genomová) (vi) Původ zdroje:

(A) Organismus: Mycobacterium tuberculosis (xi) Sekvence č. 1

• · ·· ·· ·· · · • · ···· · · · · ·· · · · ···· ·· · · · · · · · ·· · • ··· · · · · • · ·· ···· · · ··

WO 98/53075 PCT/US98/10407

CGCTCTGGTG ACCACCAACT TCTTCGGTGT CAACACCATC CCGATCGCCC TCAACGAGGC 60 CGACTACCTG CGCATGTGGA TCCAGGCCGC CACCGTCATG AGCCACTATC AAGCCGTCGC 120 GCACGAAATC TGGTGTCTCC ATGAATANGC CAGTTCGGGA AAGCCGTGGG CCAGTATCAC 180 CACGGGTGCG CCGGGCTCAC CGGCCTCGAC CACTCGCAGT CGCACGCCGT TGGTATCAAC 240 TAACCGTNCN GTANGTGCGC CCATCGTCTC ACCAAATCAC ACCGGGCACC GGCCTGAGAA 300 GGGCTTGGGG AGCANCCAGA GGCGATTGTC GCGGGTGCTG CCGCGCATCA TTGATCGGCC 360 GGCCGGACCA NTCGGGCCTC CCTTGACGTC CGGATCNCAC TTCCTGTGCA GCTGGCATGG 420 CTACAGCTCA CAGTGACTGC CCCACGATTG CCGGCCAGGT CCAGTTCAAA TTCCGGTGAA 480 TTCGCGGACA AAAGCAGCAG GTCAACCAAC CGCAGTCAGT CGAGGGTCCC AAACGTGAGC 540 CAATCGGTGA AATGGCTTGC TGCAGTGACA CCGGTCACAG GCTTAGCCGA CAGCACCGGA 600 ATAGCTCAGG CGGGCTATAG AGTCCTATAG AAACATTTGC TGATAGAATT AACCGCTGTC 660 TTGGCGTGAT CTTGATACGG CTCGCCGTGC GACCGGTTGG CTCAGTAGCT GACCACCATG 720 TAACCCATCC TCGGCAGGTG TCTACTAAGG CGAGACACCG CATTGGTGGG GCTGCATCGC 780 AAATCGGTCC GAGCATGTAG CACTGCCGTT ATCCCGGGAT AGCAAACCAC CCGGAACCAG 840 GGCTATCCCA GTCGCTCTCC GACGGAGGCC GTTTCGCTTT CCGTTGCCCG ATAACTCCCG 900 AGTGGATATC GGCGTTATCA NATTCAGGCT TTTCTTCGCA AGGTACCGGT GTTCGCTATA 960 TTCGGATATC TCGGACGGAT AATTACTAAA ACTTCAGTGG TTTAGATAAG GCCGCCGCAA 1020 TACTTCGCCG ATCTTGCCGA GCGCAACGGA TTTCCATCGT CGGTTTTCGT CGCCTTATCA 1080 AACÁTGATCG GAGATAATGA CAGATCGGCC TAGCTAGGTG TTTAGCGGAC GCGATTTAGG 1140 ACAACCGAGA TTTGCTTTGC CTCGCAACCA TGAGAGCGCC CCGCTTCGAC GCCGAATCGG 1200 GTGAGTGATG GTGGGTTAGC ACAGCCCTGA TTGCGCCACC GGCGAGGTGA TTGTGCCCGC 1260 CACGAGGCCG CCGCCGGCTA GCCCCATGAG CACGNTATAT AGACTCTCCT GCAACAGATC 1320 TCATACCGAT CGAAGGCGAA GCGCAGGCAT CGACGTCGGA GACACTGCCT TGGGATCGCG 1380 CCGCCTACAC GGCGGTTGGC GCATTGTCGC AGCGCAGTTG CAGGAGGGCA AATGTGCGCA 1440 GACGATGTAG TCGACAACAA GTGNACATGC CGTCTTCACG AACTCAAAAC TGACGATCTG 1500 CTTAGCATGA AAAAAACTGT TGACATCGGC CAAGCATGAC AGCCAGACTG TAGGCCTACG 1560 CGTGCAATGC AGAACCAAGG NTATGCATGG AATCGACGAC CGTTGAGATA GGCGGCAGGC 1620 ATGAGCAGAG CGTTCATCAT CGATCCAACG ATCAGTGCCA TTGACGGCTT GTACGACCTT 1680 CTGGGGATTG GAATACCCAA CCAAGGGGGT ATCCTTTACT CCTCACTAGA GTACTTCGAA 1740 AAAGCCCTGG AGGAGCTGGC AGCAGCGTTT CCGGGTGATG GCTGGTTAGG TTCGGCCGCG 1800 GACAAATACG CCGGCAAAAA CCGCAACCAC GTGAATTTTT TCCAGGAACT GGCAGACCTC 1860 GATCGTCAGC TCATCAGCCT GATCCA 1886

Sekvence c. 2 (i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 2305 párů bází (B) Typ: nukleová kyselina (C) Řetězec: dvojitý (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: DNA (genomová) (vi) Původ zdroje:

(A) Organismus: Mycobacterium tuberculosis (xi) Sekvence č. 2

GGCACGCGCT GGCCGCGCAA TACACCGAAA TTGCAACGGA ACTCGCAAGC GTGCTCGCTG 6 0

CGGTGCAGGC AAGCTCGTGG CAGGGGCCCA GCGCCGACCG GTTCGTCGTC GCCCATCAAC 120

CGTTCCGGTA TTGGCTAACC CACGCTGCCA CGGTGGCCAC CGCAGCAGCC GCCGCGCACN 1θ° * ·

WO 98/53075 PCT/US98/10407

Αΰ

AAACGGCCGC	CGCCGGGTAT	ACGTCCGCAT	TGGGGGGCAT	GCCTACGCTA	GCCGAGTTGG	240
CGGCCAACCA	TGCCATGCAC	GGCGCTCTGG	TGACCACCAA	CTTCTTCGGT	GTCAACACCA	300
TCCCGATCGC	CCTCAACGAG	GCCGACTACC	TGCGCATGTG	GATCCAGGCC	GCCACCGTCA	360
TGAGCCACTA	TCAAGCCGTC	GCGCACGAAA	GCGTGGCGGC	GACCCCCAGC	ACGCCGCCGG	420
CGCCGCAGAT	AGTGACCAGT	GCGGCCAGCT	CGGCGGCTAG	CAGCAGCTTC	CCCGACCCGA	480
CCAAATTGAT	CCTGCAGCTA	CTCAAGGATT	TCCTGGAGCT	GCTGCGCTAT	CTGGCTGTTG	540
AGCTGCTGCC	GGGGCCGCTC	GGCGACCTCA	TCGCCCAGGT	GTTGGACTGG	TTCATCTCGT	600
TCGTGTCCGG	TCCAGTCTTC	ACGTTTCTCG	CCTACCTGGT	GCTGGACCCA	CTGATCTATT	660
TCGGACCGTT	CGCCCCGCTG	ACGAGTCCGG	TCCTGTTGCC	TGCTGTGGAG	TTACGCAACC	720
GCCTCAAAAC	CGCCACCGGA	CTGACGCTGC	CACCTACCGT	GATTTTCGAT	CATCCCACTC	780
CCACTGCGGT	CGCCGAGTAT	GTCGCCCAGC	AAATGTCTGG	CAGCCGCCCA	ACGGAATCCG	840
GTGATCCGAC	GTCGCAGGTT	GTCGAACCCG	CTCGTGCCGA	ATTCGGCACG	AGTGCTGTTC	900
ATCAAATCCC	CCCGAGACCT	GCGGACACCC	GGCGCGCTTG	CCGACATCGA	GATGATGTCC	960
CGCGAGATAG	CAGAATTGCC	CAACATCGTG	ATGGTGCGGG	GCTTGACCCG	ACCGAACGGG	1020
GAACCTCTGA	AGGAGACCAA	GGTCTCGTTT	CAGGCTGGTG	AAGTGGGCGG	CAAGCTCGAC	1080
GAAGCGACCA	CCCTGCTCGA	AGAGCACGGA	GGCGAGCTGG	ACCAGCTGAC	CGGCGGTGCG	1140
CACCAGTTGG	CCGACGCCCT	CGCCCAAATA	CGCAACGAAA	TCAATGGGGC	CGTGGCCAGC	1200
TCGAGCGGGA	TAGTCAACAC	CCTGCAGGCC	ATGATGGACC	TGATGGGCGG	TGACAAGACC	1260
ATCCGACAAC	TGGAAAATGC	GTCCCAATAT	GTCGGGCGCA	TGCGGGCTCT	GGGGGACAAT	1320
CTGAGCGGGA	CCGTCACCGA	TGCCGAACAA	ATCGCCACTT	GGGCCAGCCC	TATGGTCAAC	1380
GCCCTCAACT	CCAGCCCGGT	GTGTAACAGC	GATCCCGCCT	GTCGGACGTC	GCGCGCACAG	1440
TTGGCGGCGA	TTGTCCAGGC	GCAGGACGAC	GGCCTGCTCA	GGTCCATCAG	AGCGCTAGCC	1500
GTCACCCTGC	AACAGACGCA	GGAATACCAG	ACACTCGCCC	GGACGGTGAG	CACACTGGAC	1560
GGGCAACTGA	AGCAAGTCGT	CAGCACCCTC	AAAGCGGTCG	ACGGCCTACC	CACCAAATTG	1620
GCTCAAATGC	AGCAAGGAGC	CAACGCTCTC	GCCGACGGCA	GCGCAGCGCT	GGCGGCAGGC	1680
GTGCAGGAAT	TGGTCGATCA	GGTCAAAAAG	ATGGGCTCAG	GGCTCAACGA	GGCCGCCGAC	1740
TTCCTGTTGG	GGATCAAGCG	GGATGCGGAC	AAGCCGTCAA	TGGCGGGCTT	CAACATTCCA	1800
CCGCAGATTT	TTTCGAGGGA	CGAGTTCAAG	AAGGGCGCCC	AGATTTTCCT	GTCGGCCGAT	1860
GGTCATGCGG	CGCGGTACTT	CGTGCAGAGC	GCGCTGAATC	CGGCCACCAC	CGAGGCGATG	1920
GATCAGGTCA	ACGATATCCT	CCGTGTTGCG	GATTCCGCGC	GACCGAATAC	CGAACTCGAG	1980
GATGCCACGA	TAGGTCTGGC	GGGGGTTCCG	ACTGCGCTGC	GGGATATCCG	CGACTACTAC	2040
AACAGCGATA	TGAAATTCAT	cgtcattgcg	ACGATCGTTA	TCGTATTCTT	gattctcgtc	2100
ATTCTGNTGC	GCGCACTTGT	GGNTCCGATA	TATCTGATAG	GCTCGGTGCT	gattt.cttac	2160
TTGTCGGCCC	TAGGCATAGG	AACTTTCGTT	TTCCAATTGA	TACTGGGCCA	ggaaatgcat	2220
TGGAGCCTGC	CGGGACTGTC	CTTCATATTA	TTGGTTGCCA	TCGGCGCTGA	CTACAACATG	2280
CTGCTCATTT	CACGCATCCG	CGACG				2305

Sekvence č. 3 (i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 1742 párů bází (B) Typ: nukleová kyselina (C) Řetězec: dvojitý (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: DNA (genomová) (vi) Původ zdroje:

(A) Organismus: Mycobacterium tuberculosis (xi) Sekvence č. 3

CCGCTCTCTT TCAACGTCAT AAGTTCGGTG GGCCAGTCGG CCGCGCGTGC ATATGGCACC 60

AATAACGCGT GTCCCATGGA TACCCGGACC GCACGACGGT AGAGCGGATC AGCGCAGCCG 120

GTGCCGAACA CTACCGCGTC CACGCTCAGC CCTGCCGCGT TGCGGAAGAT CGAGCCCAGG ISO • · · Λ • ·

WO 98/53075 PCT/US98/10407

Μ

TTCTCATGGT	CGTTAACGCC	TTCCAACACT	GCGACGGTGC	GCGCCCCGGC	GACCACCTGA	240
GCAACGCTCG	GCTCCGGCAC	CCGGCGCGCG	GCTGCCAACA	CCCCACGATT	GAGATGGAAG	300
CCGATCACCC	GTGCCATGAC	ATCAGCCGAC	GCTCGATAGT	ACGGCGCGCC	GACACCGGCC	360
AGATCATCCT	TGAGCTCGGC	CAGCCGGCGG	TCGGTGCCGA	ACAGCGCCAG	CGGCGTGAAC	420
CGTGAGGCCA	GCATGCGCTG	CACCACCAGC	ACACCCTCGG	CGATCACCAA	CGCCTTGCCG	480
GTCGGCAGAT	CGGGACNACN	GTCGATGCTG	TTCAGGTCAC	GGAAATCGTC	GAGCCGTGGG	540
TCGTCGGGAT	CGCAGACGTC	CTGAACATCG	AGGCCGTCGG	GGTGCTGGGC	ACAACGGCCT	600
TCGGTCACGG	GCTTTCGTCG	ACCAGAGCCA	GCATCAGATC	GGCGGCGCTG	CGCAGGATGT	660
CACGCTCGCT	GCGGTTCAGC	GTCGCGAGCC	GCTCAGCCAG	CCACTCTTGC	AGAGAGCCGT	720
TGCTGGGATT	AATTGGGAGA	GGAAGACAGC	ATGTCGTTCG	TGACCACACA	GCCGGAAGCC	780
CTGGCAGCTG	CGGCGGCGAA	CCTACAGGGT	ATTGGCACGA	CAATGAACGC	CCAGAACGCG	840
GCCGCGGCTG	CTCCAACCAC	CGGAGTAGTG	CCCGCAGCCG	CCGATGAAGT	ATCAGCGCTG	900
ACCGCGGCTC	AGTTTGCTGC	GCACGCGCAG	ATGTACCAAA	CGGTCAGCGC	CCAGGCCGCG	960
GCCATTCACG	AAATGTTCGT	GAACACGCTG	GTGGCCAGTT	CTGGCTCATA	CGCGGCCACC	1020
GAGGCGGCCA	ACGCAGCCGC	TGCCGGCTGA	ACGGGCTCGC	ACGAACCTGC	TGAAGGAGAG	1080
GGGGAACATC	CGGAGTTCTC	GGGTCAGGGG	TTGCGCCAGC	GCCCAGCCGA	TTCAGNTATC	1140
GGCGTCCATA	ACAGCAGACG	ATCTAGGCAT	TCAGTACTAA	GGAGACAGGC	AACATGGCCT	1200
CACGTTTTAT	GACGGATCCG	CATGCGATGC	GGGACATGGC	GGGCCGTTTT	GAGGTGCACG	1260
CCCAGACGGT	GGAGGACGAG	GCTCGCCGGA	TGTGGGCGTC	CGCGCAAAAC	ATTTCCGGTG	1320
CGGGCTGGAG	TGGCATGGCC	GAGGCGACCT	CGCTAGACAC	CATGACCTAG	ATGAATCAGG	1380
CGTTTCGCAA	CATCGTGAAC	ATGCTGCACG	GGGTGCGTGA	CGGGCTGGTT	CGCGACGCCA	1440
ACAANTACGA	ACAGCAAGAG	CAGGCCTCCC	AGCAGATCCT	GAGCAGNTAG	CGCCGAAAGC	1500
CACAGCTGNG	TACGNTTTCT	CACATTAGGA	GAACACCAAT	ATGACGATTA	ATTACCAGTT	1560
CGGGGACGTC	GACGCTCATG	GCGCCATGAT	CCGCGCTCAG	GCGGCGTCGC	TTGAGGCGGA	1620
GCATCAGGCC	ATCGTTCGTG	ATGTGTTGGC	CGCGGGTGAC	TTTTGGGGCG	GCGCCGGTTC	1680
GGTGGCTTGC	CAGGAGTTCA	TTACCCAGTT	GGGCCGTAAC	TTCCAGGTGA	TCTACGAGCA	1740

GG 1742

Sekvence č. 4 (i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 2836 párů bází (B) Typ: nukleová kyselina (C) Řetězec: dvojitý (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: DNA (genomová) (vi) Původ zdroje:

(A) Organismus: Mycobacterium tuberculosis (xi) Sekvence č. 4

GTTGATTCCG TTCGCGGCGC CGCCGAAGAC CACCAACTCC GCTGGGGTGG TCGCACAGGC 60

GGTTGCGTCG GTCAGCTGGC CGAATCCCAA TGATTGGTGG CTCNGTGCGG TTGCTGGGCT 120

CGATTACCCC CACGGAAAGG ACGACGATCG TTCGTTTGCT CGGTCAGTCG TACTTGGCGA 180

CGGGCATGGC GCGGTTTCTT ACCTCGATCG CACAGCAGCT GACCTTCGGC CCAGGGGGCA 240

CAACGGCTGG CTCCGGCGGA GCCTGGTACC CAACGCCACA ATTCGCCGGC CTGGGTGCAG 300

GCCCGGCGGT GTCGGCGAGT TTGGCGCGGG CGGAGCCGGT CGGGAGGTTG TCGGTGCCGC 3 60

CAAGTTGGGC CGTCGCGGCT CCGGCCTTCG CGGAGAAGCC TGAGGCGGGC ACGCCGATGT 420

CCGTCATCGG CGAAGCGTCC AGCTGCGGTC AGGGAGGCCT GCTTCGAGGC ATACCGCTGG 4 80

CGAGAGCGGG GCGGCGTACA GGCGCCTTCG CTCACCGATA CGGGTTCCGC CACAGCGTGA 540

TTACCCGGTC TCCGTCGGCG GGATAGCTTT CGATCCGGTC TGCGCGGCCG CCGGAAATGC 600

TGCAGATAGC GATCGACCGC GCCGGTCGGT AAACGCCGCA CACGGCACTA TCAATGCGCA 660

CGGCGGGCGT TGATGCCAAA TTGACCGTCC CGACGGGGCT TTATCTGCGG CAAGATTTCA 720 • ·

WO 98/53075

23.

· · « • · * • · · • · ·« • · » » »· · · » » · · · · · · i · 4 · « · · r · ······ ·· e<* ·· ···· ·* ··

PCT/US98/10407

TCCCCAGCCC

TCGATGCTCT

ACGCTGTTAC

AACGGGTGGC

GTTGCTGGGA

CCCTGGCAGC

CGGCCGCGGC

TGACCGCGGC

CGGCCATTCA

CCGAGGCGGC

AGGGGGAACA

TCGGCGTCCA

CTCACGTTTT

CGCCCAGACG

TGCGGGCTGG

GGCGTTTCGC

CAACAACTAC

GCCACAGCTG

TTCGGGGACG

GAGCATCAGG

TCGGTGGCTT

CAGGCCAACG

AGCGCCGTCG

GCCGGTGTGC

CAACAGAGTA

CTACTGGATA

TCCAATGACT

GTCAACGACG

CTTGAAGTCG

AACCAGCCGC

CGAGGCCAGC

ACGGTCTCGG

CACGCCGACC

ATTCGGCACG

GCCGGGATCC

CCATGGGTTC

Sekvence č. 5

GGTCGGTGGG

GGGCGCCCGC

TGTGGCGTTA

ATCGAAATCA

TTAATTGGGA

TGCGGCGGCG

TGCTCCAACC

TCAGTTTGCT

CGAAATGTTC

CAACGCAGCC

TCCGGAGTTC

TAACAGCAGA

ATGACGGATC

GTGGAGGACG

AGTGGCATGG

AACATCGTGA

GAACAGCAAG

CGTACGCTTT

TCGACGCTCA

CCATCGTTCG

GCCAGGAGTT

CCCACGGGCA

GCTCCAGCTG

TGCTGTGTCC

CCCGCACCGA

TCCGCCACGT

GGCTAAACGA

CGGTCAACGA

TCGCCCTGCT

CGGGTTCGCG

ACTGGGTGTC

ATAGCGCCTC

CAGCCGCGAT

AGGCACGAGG

TTGGCGATCT

TTCCCG

CCGATAAATA	CGCTGGTCAG	CGCGACTCTT	CCGGCTGAAT	780
TCGACGCCGA	GTATCTCGAG	TGGGCCGCAA	ACCCGGTCAA	840
CCACAGGTGA	ATTTGCGGTG	CCAACTGGTG	AACACTTGCG	900
ACTTGTTGCG	TTGCAGTGAT	CTACTCTCTT	GCAGAGAGCC	960
GAGGAAGACA	GCATGTCGTT	CGTGACCACA	CAGCCGGAAG	1020
AACCTACAGG	GTATTGGCAC	GACAATGAAC	GCCCAGAACG	1080
ACCGGAGTAG	TGCCCGCAGC	CGCCGATGAA	GTATCAGCGC	1140
GCGCACGCGC	AGATGTACCA	AACGGTCAGC	GCCCAGGCCG	1200
GTGAACACGC	TGGTGGCCAG	TTCTGGCTCA	TACGCGGCCA	1260
GCTGCCGGCT	GAACGGGCTC	GCACGAACCT	GCTGAAGGAG	1320
TCGGGTCAGG	GGTTGCGCCA	GCGCCCAGCC	GATTCAGCTA	1380
CGATCTAGGC	ATTCAGTACT	AAGGAGACAG	GCAACATGGC	1440
CGCATGCGAT	GCGGGACATG	GCGGGCCGTT	TTGAGGTGCA	1500
AGGCTCGCCG	GATGTGGGCG	TCCGCGCAAA	ACATTTCCGG	1560
CCGAGGCGAC	CTCGCTAGAC	ACCATGACCT	AGATGAATCA	1620
ACATGCTGCA	CGGGGTGCGT	GACGGGCTGG	TTCGCGACGC	1680
AGCAGGCCTC	CCAGCAGATC	CTGAGCAGCT	AGCGCCGAAA	1740
CTCACATTAG	GAGAACACCA	ATATGACGAT	TAATTACCAG	1800
TGGCGCCATG	ATCCGCGCTC	AGGCGGCGTC	GCTTGAGGCG	1860
TGATGTGTTG	GCCGCGGGTG	acttttgggg	CGGCGCCGGT	1920
CATTACCCAG	TTGGGCCGTA	ACTTCCAGGT	GATCTACGAG	1980
GAAGGTGCAG	GCTGCCGGCA	ACAACATGGC	GCAAACCGAC	2040
GGCCTAAAAC	TGAACTTCAG	TCGCGGCAGC	ACACCAACCA	2100
TGCAGTTAAC	TAGCACTCGA	CCGCTGAGGT	AGCGATGGAT	2160
CATCACCGTC	AACGTCGACG	gcttctggat	GCTTCAGGCG	2220
TGCGCCTGAG	TTACGTTGCC	GGCCGTACGT	CTCCACCGAT	2280
GCACCCGGGG	ATGGCGGTCA	TGCGCGAGCA	GGGCATTGTC	2340
ACAGGTCGCT	GCCCGGATGA	AGGTGCTTGC	CGCACCTGAT	2400
GTCACGCGGC	AAGTTGCTGT	ACGGGGTCAT	AGACGACGAG	2460
TGACATCCCT	GACAATGAGT	TCCGGGTGGT	GTTGGCCCGG	2520
GGCGGTACGG	GTTGGCAATG	ACATCACCGT	CGATGACGTG	2580
GATCGCCGCA	CTGGTAATGG	ACGGTCTGGA	GTCGATTCAC	2640
CAACGCGGTC	AACGTGCCAA	TGGAGGAGAT	CTCGTGCCGA	2700
CGGTGTCGGT	GACGACGGGA	TCGATCACGA	TCATCGACCG	2760
CGTTGAGCAC	GACCCGGGCC	CGCGGGAAGC	TCTGCGACAT	2820 2836

(i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 900 párů bází (B) Typ: nukleová kyselina (C) Řetězec: dvojitý (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: DNA (genomová) (ví) Původ zdroje:

(A) Organismus: Mycobacterium tuberculosis (xi) Sekvence č. 5

AACATGCTGC ACGGGGTGCG TGACGGGCTG GTTCGCGACG CCAACAACTA CGAGCAGCAA 6 0

GAGCAGGCCT CCCAGCAGAT CCTCAGCAGC TAACGTCAGC CGCTGCAGCA CAATACTTTT 120

ACAAGCGAAG GAGAACAGGT TCGATGACCA TCAACTATCA GTTCGGTGAT GTCGACGCTC 180 • · « ·

WO 98/53075 PCT/US98/10407 • · · · * · • · * « · · · · « » · · · · ♦ • · ··« · · · • < « » · · · ^3

ACGGCGCCAT GATCCGCGCT CAGGCCGGGT TGCTGGAGGC CGAACATCAG GCCATCATTC 240

GTGATGTGTT GACCGCGAGT GACTTTTGGG GCGGCGCCGG TTCGGCGGCC TGCCAGGGGT 300

TCATTACCCA ATTGGGCCGT AACTTCCAGG TGATCTACGA ACAGGCCAAC GCCCACGGGC 36 0

AGAAGGTGCA GGCTGCCGGC AACAACATGG CGCAAACCGA CAGCGCCGTC GGCTCCAGCT 420

GGGCCTGACA CCAGGCCAAG GCCAGGGACG TGGTGTACGA GTGAAGGTTC CTCGCGTGAT 480

CCTTCGGGTG GCAGTCTAGG TGGTCAGTGC TGGGGTGTTG GTGGTTTGCT GCTTGGCGGG 540

TTCTTCGGTG CTGGTCAGTG CTGCTCGGGC TCGGGTGAGG ACCTCGAGGC CCAGGTAGCG 600

CCGTCCTTCG ATCCATTCGT CGTGTTGTTC GGCGAGGACG GCTCCGACGA GGCGGATGAT 660

CGAGGCGCGG TCGGGGAAGA TGCCCACGAC GTCGGTTCGG CGTCGTACCT CTCGGTTGAG 72 0

GCGTTCCTGG GGGTTGTTGG ACCAGATTTG GCGCCAGATC TTCTTGGGGA AGGCGGTGAA 78 0

CGCCAGCAGG TCGGTGCGGG CGGTGTCGAN GTGCTCGGCC ACCGCGGGGA GTTTGTCGGT 84 0

CAGAGCGTCG AGTACCCGAT CATATTGGGC AACAACTGAT TCGGCGTTGG GCTGGTCGTA 900

Sekvence č. 6 (i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 1905 párů bází (B) Typ: nukleová kyselina (C) Řetězec: dvojitý (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: DNA (genomová) (vi) Původ zdroje:

(A) Organismus: Mycobacterium tuberculosis (xi) Sekvence Č. 6

GCTCGCCGGA	TGTGGGCGTC	CGCGCAAAAC	ATTTCCGGTG	CGGGCTGGAG	TGGCATGGCC	60
GAGGCGACCT	CGCTAGACAC	CATGGCCCAG	ATGAATCAGG	CGTTTCGCAA	CATCGTGAAC	120
ATGCTGCACG	GGGTGCGTGA	CGGGCTGGTT	CGCGACGCCA	ACAACTACGA	GCAGCAAGAG	180
CAGGCCTCCC	AGCAGATCCT	CAGCAGCTAA	CGTCAGCCGC	TGCAGCACAA	TACTTTTACA	240
AGCGAAGGAG	AACAGGTTCG	ATGACCATCA	ACTATCAGTT	CGGTGATGTC	GACGCTCACG	300
GCGCCATGAT	CCGCGCTCAG	GCCGGGTTGC	TGGAGGCCGA	GCATCAGGCC	ATCATTCGTG	360
ATGTGTTGAC	CGCGAGTGAC	TTTTGGGGCG	GCGCCGGTTC	GGCGGCCTGC	CAGGGGTTCA	420
TTACCCAGTT	GGGCCGTAAC	TTCCAGGTGA	TCTACGAACA	AGCCAACACC	CACGGGCAGA	480
AGGTGCAAGC	TGCCGGCAAC	AACATGGCGC	AAACCGACAG	CGCCGTCNGC	TCCAGCTGGG	540
CCTGACACCA	GGCCAAGGCC	AGGGACGTGG	TGTACNAGTG	AAGGTTCCTC	GCGTGATCCT	600
TCGGGTGGCA	GTCTAGGTGG	TCAGTGCTGG	GGTGTTGGTG	GTTTGCTGCT	TGGCGGGTTC	660
TTCGGTGCTG	GTCAGTGCTG	CTCGGGCTCG	GGTGAGGACC	TCGAGGCCCA	GGTAGCGCCG	720
TCCTTCGATC	CATTCGTCGT	gttgttcggc	GAGGACNGCT	CCGACGANGC	GGATGATCGA	780
GGCGCGGTCG	GGGAAGATGC	CCACGACGTC	GGTTCGGCGT	CGTACCTCTC	GGTTGAAGCG	840
TTCCTGGGGG	CCACCGCTTG	GCGCCNANGC	ACTCCACGCC	AATTCGTCNC	ACCTAACAGC	900
GGTGGCCAAC	GACTATGACT	ACGACACCGT	TTTTGCCAGG	GCCCTCNAAA	GGATCTGCGC	960
GTCCCGGCGA	CACGCTTTTT	GCGATAAGTA	CCTCCGGCAA	TTCTATGAGT	GTACTGCGGN	1020
CCGCGAAAAC	CGCAAGGGAG	TTGGGTGTGA	CGGTTNTTGC	AAATGACGGG	CGAATCCGGC	1080
GGCCAGCTGG	CAGAATTCGC	AGATTTCTTG	ATCAACGTCC	CGTCACGCGA	CACCGGGCGA	1140
ATCCAGGAAT	CTCACATCGT	TTTTATTCAT	GCGATCTCCG	AACATGTCGA	ACACGCGCTT	1200
TTCGCGCCTC	GCCAATAGGA	AAGCCGATCC	TTACGCGGCC	ATTCGAAAGA	TGGTCGCGGA	1260
ACGTGCGGGA	CACCAATGGT	GTCTCTTCCT	CGATAGAGAC	GGGGTCATCA	ATCGACAAGT	1320
GGTCGGCGAC	TACGTACGGA	ACTGGCGGCA	GTTTGAATGG	TTGCCCGGGG	CGGCGCGGGC	1380
GTTGAAGAAG	CTACGGGCAT	GGGCTCCGTA	catcgttgtc	GTGACAAACC	AGCAGGGCGT	1440
GGGTGCCGGA	TTGATGAGCG	CCGTCGACGT	GATGGTGATA	CATCGGCACC	TCCAAATGCA	1500
GCTTGCATCC	GATGGCGTGC	TGATAGATGG	ATTTCAGGTT	TGCCCGCACC	ACCGTTCGCA	1560
GCGGTGTGGC	TGCCGTAAGC	CGAGACCGGG	TCTGGTCCTC	GACTGGCTCG	GACGACACCC	1620

WO 98/53075 • * ·♦···· • i · » · ♦ · • · · · · * «· · ·

PCT/US98/10407

CGACAGTGAG

CACACAACGT

CTGGCGGTGT

ATGCGČGGGG

ACTNNGCGGT

Sekvence č. 7

CCATTGCTGA

CGCCGCTGCT

CGCTGACGCG

GGAGCGGGGC

GGCGGGACAG

GCATCGTGGT

GCCGGTGCAT

TCATTTGACT

TAATGGCGAT

ACGTGGAACC

TGGGGACAGC

GTGCCAGTGT

CGCTCTGGGA

CTTGCGCGGG

GTACTCGAGC

CTCAGCGATC

CCAGATAGGG

GTTCGCTGTC

CGAGCGCCGT

CAGTT

TTGACATTGG

GGCGCCAGTT

GCAGTCGGAC

NGCGGNTCGG

1680

1740

1800

1860

1905 (i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 2921 párů bází (B) Typ: nukleová kyselina (C) Řetězec: dvojitý (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: DNA (genomová) (vi) Původ zdroje:

(A) Organismus: Mycobacterium tuberculosis (xi) Sekvence č. 7

CGGGATGCCG TGGTGGTTGG TATTGCCCAA ACCCTGGCGC TGGTCCCCGG GGTATCCAGG 60

TCCGGGTCGA CCATCAGCGC TGGACTGTTT CTCGGACTCG ACCGTGAACT GGCCGCCCGA 120

TTCGGATTCC TGCTGGCCAT TCCAGCGGTG TTCGCCTCCG GGTTGTTCT0 GTTGCCCGAC 180

GCATTCCACC CGGTAACCGA GGGCATGAGC GCTACTGGCC CGCAGTTGCT GGTGGCCACC 240

CTGATCGCGT TCGTCCTCGG TCTGACCGCG GTGGCCTGGC TGCTGCGGTT TCTGGTGCGA 300

CACAACATGT ACTGGTTCGT CGGCTACCGG GTGCTCGTCG GGACGGGCAT GCTCGTGCTG 360

CTGGCTACCG GGACGGTAGC CGCGACATGA CCGTCATCTT GCTACGCCAT GCCCGTTCCA 420

CCTCGAACAC CGCGGGCGTG CTGGCCGGCC GGTCCGGCGT CGACCTCGAC GAGAAGGGGC 480

GCGAGCAGGC CACCGGGTTG ATCGATCGAA TTGGTGACCT GCCGATCCGG GCGGTCGCGT 540

CTTCTCCAAT GCTGCGGTGT CAACGCACCG TCGAACCGCT GGCCGAGGCG CTGTGCCTGG 600

AGCCGCTCAT CGATGACCGG TTCTCCGAAG TCGACTACGG CGAATGGACT GGCAGAAAAA 660

TCGGTGACCT GGTCGACGAG CCGTTGTGGC GGGTAGTCCA GGCCCACCCC AGCGCGGCGG 720

TGTTTCCCGG CGGTGAGGGT TTGGCGCAGG TGCAGACGTG GTTGTCCTGA CGGATTTCCA 780

TGCCGGGGAA CACCAAGACC GGATCGGCAC TGGCGGTCGC CGGCGAAAAC CCGGCCGCCA 840

ATAGGGCGAC CGTCGCTGCG AATGCGCGTG GTACCAGGCG GACCACCTTG AACTCCCATC 900

CGTCGGGGCC AAGCGCATCG CCCGCCGCCG GTTACGGCTA AGGCGTACCA AAACCCGACG 960

GTAATACTTC GGCAATGTCG GGTCNCGACG TTACCGAGAC GTGACCAGNG AGGCNGCGGC 1020

ATTGGATTTA TCGATGGTGC GCGGTTCCCA NCCCGGCGGT CCGAANACGT AGCCCAGCCG 1080

ATCCCGCAGA CGTGTTGCCG ACCGCCAGTC ACGCACGATC GCCACGTACT CGCGGGTCTG 1140

CAGCTTCCAG ATGTTGAACG TGTCGACCCG CTTGGTCAGG CCATAATGCG GTCGGAATAG 1200

CTCCGGCTGA AAGCTACCGA ACAGGCGGTC CCAGATGATG AGGATGCCGC CATAGTTCTT 1260

GTCCANATAC ACCGGGTCCA TTCCGTGGTG GACCCGGTGG TGCGACGGGG TATTGAAGAC 1320

GAATTCGAAC CACCGCGGCA GCCTGTCGAT CCGCTCGGTG TGCACCCAGA ACTGGTAGAT 1380

CAAGTTCAGC GACCAATTGC AGAACACCAT CCAAGGGGGA AGCCCCATCA GTGGCAGCGG 1440

AACCCACATG AGAATCTCGC CGCTGTTGTT CCANTTTCTG GCGCAGCGCG GTGGCGAAGT 1500

TGAAGTATTC GCTGGAGTGA TGCGCCTGGT GGGTAGCCCA GATCAGCCGA ACTCGGTGGG 1560

CGATGCGGTG ATAGGAGTAG TACAGCAGAT CGACACCAAC GATCGCGATC ACCCAGGTGT 1620

ACCACCGGTG GGCGGACAGC TGCCAGGGGG CAAGGTAGGC ATAGATTGCG GCATAACCGA 1680

GCAGGGCAAG GGACTTCCAG CCGGCGGTGG TGGCTATCGA AACCAGCCCC ATCGAGATGC . 1740 TGGCCACCGA GTCGCGGGTG AGGTAAGCGC CCGAGGCGGG CCGTGGCTGC CCGGTAGCAG 1800

CGGTCTCGAT GCTTTCCAGC TTGCGGGCCG CCGTCCATTC GAGAATCAGC AGCAATAGAA 1860

AACATGGAAT GGCGAACAGT ACCGGGTCCC GCATTTCCTC GGGCAGCGCT GAGAAGAATC 1920

CGGCGACGGC ATGGCCGAGG CGACCTCGNT AGACACCATG ACCCAGATGA ATCAGGCGTT 1980

TCGCAACATC GTGAACATGC TGCACGGGGT GCGTGACGGG CTGGTTCGCG ACGCCAACAA 2040 ·· *· »· «··» • · < • · · ι «» ·»

WO 98/53075

PCT/US98/10407

NTACGAACAG CAAGAGCAGG CCTCCCAGCA GATCCTCAGC AGCTGACCCG GCCCGACGAC 2100

TCAGGAGGAC ACATGACCAT CAACTATCAA TTCGGGGACG TCGACGCTCA CGGCGCCATG 2160

ATCCGCGCTC AGGCCGGGTC GCTGGAGGCC GAGCATCAGG CCATCATTTC TGATGTGTTG 2220

ACCGCGAGTG ACTTTTGGGG CGGCGCCGGT TCGGCGGCCT GCCAGGGGTT CATTACCCAG 2280

CTGGGCCGTA ACTTCCAGGT GATNTACGAG CAGGCCAACG CCCACGGGCA GAAGGTGCAG 2340

GCTGCCGGCA ACAACATGGC ACAAACCGAC AGCGCCGTCG GCTCCAGCTG GGCATAAAGN 2400

TGGCTTAAGG CCCGCGCCGT CAATTACAAC GTGGCCGCAC ACCGGTTGGT GTGTGGCCAC 2460

GTTGTTATCT GAACGACTAA CTACTTCGAC CTGCTAAAGT CGGCGCGTTG ATCCCCGGTC 2520

GGATGGTGCT GAACTGGGAA GATGGCCTCA ATGCCCTTGT TGCGGAAGGG ATTGAGGCCA 2580

TCGTGTTTCG TACTTTAGGC GATCAGTGCT GGTTGTGGGA GTCGCTGCTG CCCGACGAGG 2640

TGCGCCGACT GCCCGAGGAA CTGGCCCGGG TGGACGCATT GTTGGACGAT CCGGCGTTCT 2700

TCGCCCCGTT CGTGCCGTTC TTCGACCCGC GCAGGGGCCG GCCGTCGACG CCGATGGAGG 2760

TCTATCTGCA GTTGATGTTT GTGAAGTTCC GCTACCGGCT GGGCTATGAG TCGCTGTGCC 2820

GGGAGGTGGC TGATTCGATC ACCTGACGGC GGTTTTGCCG CATTGCGCTG GACGGGTCGG 2880

TGCCGCATCC GACCACATTG ATGAAGCTCA CCACGCGTTG C 2921

Sekvence č. 8 (i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 1704 párů bází (B) Typ: nukleová kyselina (C) Řetězec: dvojitý (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: DNA (genomová) (vi) Původ zdroje:

(A) Organismus: Mycobacterium tuberculosis (xi) Sekvence č. 8

CGCGATCGTC	GTCAACGANG	TCGACCGTCA	CCACGGACTG	ATCAACAAGT	TCGCAGGCGA	60
CGCCGCCCTG	GCCATCTTCG	GAGCCCCGAA	CCGCCTCGAC	CGTCCCGAAG	ACGCCGCGCT	120
GGCCGCCGCC	CGGGCCATAN	CCGANCGGCT	GGCCNACGAG	ATGCCCGAGG	TCCAAGCCGG	180
CATCGGGGTG	GCGGCAGGCC	ANATCGTCGC	CGGCAATGTC	GGCGCCAAGC	AAAGATTCNA	240
ATACACAGTG	GTCGGCAAGC	CGGTCAACCA	NGCGGCCCGA	TTGTGCGAAC	TGGCCAAATC	300
ACACCCCGCG	CGATTGGGTC	TCGCCCGCTC	GGCTCATGGT	CACCCAATTC	AAGGACTACT	360
TTGGCCTGGC	GCACGACCTG	CCGAAGTGGG	CGAGTGAAGG	CGCCAAAGCC	GCCGGTGAGG	420
CCGCCAAGGC	GTTGCCGGCC	GCCGTTCCGG	CCATTCCGAG	TGCTGGCCTG	AGCGGCGTTG	480
CGGGCGCCGT	CGGTCAGGCG	GCGTCGGTCG	GGGGATTGAA	GGTTC.CGGCC	GTTTGGACCG	540
CCACGACCCC	GGCGGCGAGC	CCCGCGGTGC	TGGCGGCGTC	CAACGGCCTC	GGAGCCGCGG	600
CCGCCGCTGA	AGGTTCGACA	CACGCGTTTG	GCGGGATGCC	GCTCATGGGT	ANCGGTGCCG	660
GACGTGCGTT	TAACAACTTC	GCTGCCCCTC	GATACGGATT	CAAGCCGACC	GTGATCGCCC	720
AACCGCCGGC	TGGCGGATGA	CCAACTACGT	TCGTTGATCG	AGGATCGAAT	TCNACGATTC	780
AAAGGGAGGA	ATTCATATGA	CCTCNCGTTT	TATGACGGAT	CCGCACGCNA	TNCGGGACAT	840
GGCGGGCCGT	TTTGAGGTGC	ACGCCCAGAC	GGTGGAGGAC	GAGGCTNGCN	GGATGTGGGC	900
GTCCGCGCAA	AACATTTCCG	GTGCGGGCTG	GAGTGGCATG	GCCGAGGCGA	CCTCGNTAGA	960
CACCATGGCC	CAGATGAATC	AGGCGTTTCN	CAACATCGTG	AACATGCTGC	ACGGGGTGNG	1020
TGACGGGCTG	GTTCGCGACG	CCAACAACTA	CGAACAGCAA	GAGCAGGCCT	CCCAGCAGAT	1080
CCTCAGCAGC	TGACCCGGCC	CGACGACTCA	GGAGGACACA	TGACCATCAA	CTATCAATTC	1140
GGGGACGTCG	ACGCTCATGG	CGCCATGATC	CGCGCTNTGG	CCGGGTTGCT	GGAGGCCGAG	1200
CATCAGGCCA	TCATTTCTGA	TGTGTTGACC	GCGAGTGACT	TTTGGGGCGG	CGCCGGTTCG	1260
GCGGCCTGCC	AGGGGTTCAT	TACCCAGTTG	GGCCGTAACT	TCCAGGTGAT	TTACGAGCAG	1320
GCCAACGCCC	ACGGGCAGAA	GGTGCAGGCT	GCCGGCAACA	ACATGGCACA	AACCGACAGC	1380
GCCGTNGGNT	CCAGCTGGGC	CTAACCCGGG	TCNTAAGTTG	GGTCCGCGCA	GGGCGGGCCG	1440

·« «· ·· • * · · ♦ « · · · · · · · ♦ · * • * «·· · · · · * · · · * • · « · · · * · · · ·· ·· ·· ·«· »» ··

WO 98/53075 PCT/US98/10407

ATCAGCGTNG ACTTTGGCGC CCGATACACG GGCATNTTNT NGTCGGGAAC ACTGCGCCCG 1500 CGTCAGNTGC CCGCTTCCCC TTGTTNGGCG ACGTGCTCGG TGATGGCTTT GACGACCGCT 1560 TCGCCGGCGC GGCCAATCAA TTGGTCGCGC TTGCCTNTAG CCCATTCGTG CGACGCCCGC 1620 GGCGCCGCGA GTTGTCCCTT GAAATAAGGA ATCACAGCAC GGGCGAACAG CTCATAGGAG 1680 TGAAAGGTTG CCGTGGCGGG GCCC 1704

Sekvence č. 9 (i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 2286 párů bází (B) Typ: nukleová kyselina (C) Řetězec: dvojitý (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: DNA (genomová) (vi) Původ zdroje:

(A) Organismus: Mycobacterium tuberculosis (xi) Sekvence č. 9

CCGTCTTGGC GTCTGGGCGC ATTGTGATCT GGGCCANTTG CCCCTCCACC CAGACCGCGC 60

CCAGCTTGTC GATCCAGCCC GCGACCCGGA TTGCCACCGC GCGAACCGGG AACGGATTCT 120

CCGCTGAATT CTGGGTCACT TCGCAGTCGC GCGGGTGATC CTGTTGGCGA NCAGCGTCTG 180

GAACGGGCGT CNAACGCGTG CCGTAAGCCC AGCGTGTACG CCGTCAGCCC GACGCCGATG 240

CCGAATGCCT TGCCGCCCAA GCTGAGCCGC GCGGGCTCCA CCAAGAGCGT CACGGTGAGC 300

CAGCCAACCA GATGCAAGGC GACGATCACC GCGAAGTGCC GAATTCGGCA CGAGAGGTGC 360

TGGAAATCCA GCAATACGCC CGCGAGCCGA TCTCGTTGGA CCAGACCATC GGCGACGANG 420

GCGACAGNCA GCTTGGCGAT TTCATCGAAA ACAGCGAGGC GGTGGTGGNC GTCGACGCGG 480

TGTCCTTCAC TTTGCTGCAT GATCAACTGC ANTCGGTGCT GGACACGCTC TCCGAGCGTG 540

AGGCGGGCGT GGTGCGGCTA CGCTTCGGCC TTACCGACGG CCAGCCGCGC ACCCTTGACG 600

AGATCGGCCA GGTCTACGGC GTGACCCGGG AACGCATCCG CCAGATCGAA TCCAAGACTA 660

TGTCGAAGTT GCGCCATCCG AGCCGCTCAC AGGTCCTGCG CGACTATCGT GCCGAATTCG 720

GCACGAGCCG TTTTGAGGTG CACGCCCAGA CGGTGGAGGA CGAGGCTCGC CGGATGTGGG 780

CGTCCGCGCA AAACATTTCC GGTGCGGGCT GGAGTGGCAT GGCCGANGCG ACCTCGCTAG 840

ACACCATGGC CCAGATGAAT CAGGCGTTTC GCAACATCGT GAACATGCTG CACGGGGTGC 900

GTGACGGGCT GGTTCGCGAC GCCAACAACT ACGAACAGCA AGAGCAGGCC TCCCAGCAGA 960

TCCTCAGCAG CTGACCCGGC CCGACGACTC AGGAGGACAC ATGACCATCA ACTATCAATT 1020

CGGGGACGTC GACGCTCATG GCGCCATGAT CCGCGCTCTG GCCGGGTTGC TGGAGGCCGA 1080

GCATCAGGCC ATCATTTCTG ATGTGTTGAC CGCGAGTGAC TTTTGGGGCG GCGCCGGTTC 1140

GGCGGCCTGC CAGGGGTTCA TTACCCAGTT GGGCCGTAAC TTCCAGGTGA TCTACGAGCA 1200

GGCCAACGCC CACGGGCAGA AGGTGCAGGC TGCCGGCAAC AACATGGCAC AAACCGACAG 1260

CGCCGTCGGC TCCAGCTGGG CCTAACCCGG GTCCTAAGTT GGGTCCGCGC AGGGCGGGCC 1320

GATCAGCGTC GACTTTGGCG CCCGATACAC GGGCATGTNG TNGTCGGGAA CACTGCGCCC 1380

GCGTCAGCTG CCCGCTTCCC CTTGTTCGGC GACGTGCTCG GTGATGGCTT TGACGACCGC 1440

TTCGCCGGCG CGGCCAATCA ATTGGTCGCG CTTGCCTCTA GCCTCGTGCC GAATTCGGCA 1500

CGAGGGTGCT GGTGCCGCGC TATCGGCAGC ACGTGAGCTC CACGACGAAC TCATCCCAGT 1560

GCTGGGTTCC GCGGAGTTCG GCATCGGCGT GTCGGCCGGA AGGGCCATCG CCGGCCACAT 1620

CGGCGCTCAA GCCCGCTTCG AGTACACCGT CATCGGCGAČ CCGGTCAACG AGGCCGCCCG 1680

GCTCACCGAA CTGGCCAAAG TCGAGGATGG CCACGTTCTG GCGTCGGCGA TCGCGGTCAG 1740

TGGCGCCCTG GACGCCGAAG CATTGTGTTG GGATGTTGGC GAGGTGGTTG AGCTCCGCGG 1800

ACGTGCTGCA CCCACCCAAC TAGCCAGGCC AATGAATNTG GCNGCACCCG AAGAGGTTTC 1860

CAGCGAAGTA CGCGGCTAGT CGCGCTTGGC TGCNTTCTTC GCCGGCACCT TCCGGGCAGC 1920

TTTCCTGGCT GGCCGTTTTG CCGGACCCCG GGCTCGGCGA TCGGCCAACA GCTCGGCGGC 1980

GCGCTCGTCG GTTATGGAAG CCACGTNGTC GCCCTTACGC AGGCTGGCAT TGGTCTCACC 2040 * · · · · · • «·« « * · · • · · » · • * ·« «··» ♦ » ♦ » • · « · • · · · • » » * • · » »

WO 98/53075

PCT/US98/10407

GTCGGTGACG TACGGCCCGA ATCGGCCGTC CTTGATGACC ATTGGCTTGC CAGACGCCGG 2100 ATNTGNTCCC AGCTCGCGCA GCGGCGGAGC CGAAGCGCTT TGCCGGCCAC GACNTTTCGG 2160 CTCTGNGTAG ATNTTCAGGG CTTCGTCGAG CGNGATGGTG AATATATGGT CTTCGGTGAC 2220 CAGTGATCGA GAATCGTTGC CGCGCTTTAG ATACGGTCNG TAGCGCCCGT TCTGCGCGGT 2280 GATNTC 2286

Sekvence č. 10 (i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 1136 párů bází (B) Typ: nukleová kyselina (C) Řetězec: dvojitý (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: DNA (genomová) (vi) Původ zdroje:

(A) Organismus: Mycobacterium tuberculosis (xi) Sekvence č. 10

GGGCATCTTC CCCGACCGCG CCTCGATCAT CCGCCTCGTC GGAGCCGTCC TCGCCGAACA 60

ACACGACGAA TGGATCGAAG GACGGCGCTA CCTGGGCCTC GAGGTCCTCA CCCGAGCCCG 120

AGCAGCACTG ACCAGCACCG AAGAACCGCC AAGCAGCAAA CCACCAACAC CCCAGCACTG 180

ACCACCTAGA CTGCCACCCG AAGGATCACG CGAGGAACCT TCACTCGTAC ACCACGTCCC 240

TGGCCTTGGC CTGGTGTCAG GCCCAGCTGG AGCCGACGGC GCTGTCGGTT TGCGCCATGT 300

TGTTGCCGGC AGCCTGCACC TTCTGCCCGT GGGCGTTGGC CTGCTCGTAG ATCACCTGGA 360

AGTTACGGCC CAACTGGGTA ATGAACCCCT GGCAGGCCGC CGAACCGGCG CCGCCCCAAA 420

AGTCACTCGC GGTCAACACA TCACGAATGA TGGCCTGATG CTCGGCCTCC AGCAACCCGG 480

CCTGAGCGCG GATCATGGCG CCGTGAGCGT CGACATCACC GAACTGATAG TTGATGGTCA 540

TCGAACCTGT TCTCCTTCGC TTGTAAAAGT ATTGTGCTGC AGCGGCTGAC GTTAGCTGCT 600

GAGGATCTGC TGGGAGGCCT GCTCTTGCCT CGTGCCGAAT TCGGCACGAG AGGCCGCCTT 660

CGAAGAAATC CTTTGAGAAT TCGCCAAGGC CGTCGACCCA GCATGGGGTC AGCTCGCCAG 720

CCGCGCCGGC TGGCAACCGT TCCCGCTCGA GAAAGACCTG GAGGAATACC AGTGACAAAC 780

GACCTCCCAG ACGTCCGAGA GCGTGACGGC GGTCCACGTC CCGCTCCTCC TGCTGGCGGG 840

CCACGCTTGT CAGACGTGTG GGTTTACAAC GGGCGGGCGT ACGACCTGAG TGAGTGGATT 900

TCCAAGCATC CCGGCGGCGC CTTNTTCATT GGGCGGACCA AGAACCGCGA CATCACCGCA 960

ATCGTCAAGT CCTACCATCG TGATCCGGCG ATTGTCGAGC GAATCCTGCA GCGGAGGTAC 1020

GCGTTGGGCC GCGACGCAAC CCCTAGGGAC ATCCACCCCA AGCACAATGC ACCGGCATTT 1080

CTGTTCAAAG ACGACTTCAA CAGCTGGCGG GACACCCCGA AGTATCGATT NGACGA 1136

Sekvence č. I I (i) Charakteristika sekvence.

(A) Délka: 967 párů bází (B) Typ: nukleová kyselina (C) Řetězec: dvojitý (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly. DNA (genomová) (vi) Původ zdroje:

(A) Organismus: Mycobacterium tuberculosis (xi) Sekvence č. 11

WO 98/53075 PCT/US98/10407

TGAGCGCCAA CCCTACCGTC GGTTCGTCAC ACGGACCGCA TGGCCTGCTC CGCGGACTGC 60

CGCTAGGGTC GCGGATCACT CGGCGTAGCG GCGCCTTTGC CCACCGATAT GGGTTCCGTC 120

ACAGTGTGGT TGCCCGCCCG CCATCGGCCG GATAACGCCA TGACCTCAGC TCGGCAGAAA 18 0

TGACAATGCT CCCAAAGGCG TGAGCACCCG AAGACAACTA AGCAGGAGAT CGCATGCCGT 240

TTGTGACTAC CCAACCAGAA GCACTGGCGG CGGCGGCCGG CAGTCTGCAG GGAATCGGCT 300

CCGCATTGAA CGCCCAGAAT GCGGCTGCGG CGACTCCCAC GACGGGGGTG GTCCGGCGGC 360

CGCCGATGAA NTGTCGGCGC TGACGGCGGC TCAGTTCGCG GCACACGCCC AGATCTATCA 420

GGCCGTCAGC GCCCAGGCCG CGGCGATTCA CGAGATGTTC GTCAACACTC TACAGATGAG 480

CTCAGGGTCG TATGCTGCTA CCGAGGCCGC CAACGCGGCC GCGGCCGGNT AGAGGAGTCA 54 0

CTGCGATGGA TTTTGGGGCG TTGCCGCCGG AGGTCAATTC GGTGCGGATG TATGCCGTTC 600

CTGGCTCGGC ACCAATGGTC GCTGCGGCGT CGGCCTGGAA CGGGTTGGCC GCGGAGCTGA 660

GTTCGGCGGC CACCGGTTAT GAGACGGTGA TCACTCAGCT CAGCAGTGAG GGGTGGCTAG 720

GTCCGGCGTC ÁGCGGCGATG GCCGAGGCAG TTGCGCCGTA TGTGGCGTGG ATGAGTGCCG 780

CTGCGGCGCA AGCCGAGCAG GCGGCCACAC AGGCCAGGGC CGCCGCGGCC GCTTTTGAGG 840

CGGCGTTTGC CGCGACGGTG CCTCCGCCGT TGATCGCGGC CAACCGGGCT TCGTTGATGC 900

AGCTGATCTC GACGAATGTC TTTGGTCAGA ACACCTCGGC GATCGCGGCC GCCGAAGCTC 960

AGTACGG 967

Sekvence č. 12 (i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 585 párů bází (B) Typ: nukleová kyselina (C) Řetězec: dvojitý (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: DNA (genomová) (vi) Původ zdroje:

(A) Organismus: Mycobacterium tuberculosis (xi) Sekvence č. 12

TGGATTCCGA	TAGCGGTTTC	GGCCCCTCGA	CGGGCGACCA	CGGCGCGCAG	GCCTCCGAAC	60
GGGGGGCCGG	GACGCTGGGA	TTCGCCGGGA	CCGCAACCAA	AGAACGCCGG	GTCCGGGCGG	120
TCGGGCTGAC	CGCACTGGCC	GGTGATGAGT	TCGGCAACGG	CCCCCGGATG	CCGATGGTGC	180
CGGGGACCTG	GGAGCAGGGC	AGCAACGAGC	CCGAGGCGCC	CGACGGATCG	GGGAGAGGGG	240
GAGGCGACGG	CTTACCGCAC	GACAGCAAGT	AACCGAATTC	CGAATCACGT	GGACCCGTAC	300
GGGTCGAAAG	GAGAGATGTT	ATGAGCCTTT	TGGATGCTCA	TATCCCACAG	TTGGTGGCCT	360
CCCAGTCGGC	GTTTGCCGCC	AAGGCGGGGC	TGATGCGGCA	CACGATCGGT	CAGGCCGAGC	420
AGGCGGCGAT	GTCGGCTCAG	gcgtttcacc	AGGGGGAGTC	GTCGGCGGCG	TTTCAGGCCG	480
CCCATGCCCG	GTTTGTGGCG	GCGGCCGCCA	AAGTCAACAC	CTTGTTGGAT	GTCGCGCAGG	540
CGAATCTGGG	TGAGGCCGCC	GGTACCTATG	TGGCCGCCGA	TGCTG		585
Sekvence č. 13

(i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 144 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: peptid (vi) Původ zdroje:

(A) Organismus: Mycobacterium tuberculosis • · · * • <» <· » • · · » · · ♦ · · «· ··*· ·· ·· ♦ · · * ♦ · · « * · · · · • · · · ♦» **

WO 98/53075 PCT/US98/10407

Μ (vi) ORIGINÁL SOURCE:

(A) ORGANISM: Mycobacterium tuberculosis (xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO:13:

Ala

Leu

Val

Thr

Thr

Asn

Phe

Phe

Gly

Val

Asn

Thr

Ile

Pro

Ile

Ala

1

5

10

15

Leu

Asn

Glu

Ala

Asp

Tyr

Leu

Arg

Met

Trp

Ile

Gin

Ala

Ala

Thr

Val

20

25

30

Met

Ser

His

Tyr

Gin

Ala

Val

Ala

His

Glu

Ile

Trp

Cys

Leu

His

Glu

35

40

45

Xaa

Ala

Ser

Ser

Gly

Lys

Pro

Trp

Ala

Ser

Ile

Thr

Thr

Gly

Ala

Pro

50

55

60

Gly

Ser

Pro

Ala

Ser

Thr

Thr

Arg

Ser

Arg

Thr

Pro

Leu

Val

Ser

Thr

65

70

75

80

Asn

Arg

Xaa

Val

Xaa

Ala

Pro

Ile

Val

Ser

Pro

Asn

His

Thr

Gly

His

85

90

95

Arg

Pro

Glu

Lys

Gly

Leu

Gly

Ser

Xaa

Gin

Arg

Arg

Leu

Ser

Arg

Val

100

105

110

Leu

Pro

Arg

Ile

Ile

Asp

Arg

Pro

Ala

Gly

Pro

Xaa

Gly

Pro

Pro

Leu

115

120

125

Thr

Ser

Gly

Ser

His

Phe

Leu

Cys

Ser

Trp

His

Gly

Tyr

Ser

Ser

Gin

130

135

140

Sekvence č. 14 (i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 352 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: peptid (vi) Původ zdroje:

(A) Organismus: Mycobacterium tuberculosis (xi) Sekvence č. 14

His 1

Ala

Leu

Ala

Ala 5

Gin

Tyr

Thr

Glu

Ile 10

Ala

Thr

Glu

Leu

Ala 15

Ser

Val

Leu

Ala

Ala

Val

Gin

Ala

Ser

Ser

Trp

Gin

Gly

Pro

Ser

Ala

Asp

20

25

30

Arg

Phe

Val

Val

Ala

His

Gin

Pro

Phe

Arg

Tyr

Trp

Leu

Thr

His

Ala

35

40

45

Ala

Thr

Val

Ala

Thr

Ala

Ala

Ala

Ala

Ala

His

Xaa

Thr

Ala

Ala

Ala

50

55

60

Gly

Tyr

Thr

Ser

Ala

Leu

Gly

Gly

Met

Pro

Thr

Leu

Ala

Glu

Leu

Ala

65

70

75

80

Ala

Asn

His

Ala

Met

His

Gly

Ala

Leu

Val

Thr

Thr

Asn

Phe

Phe

Gly

85

90

95

Val

Asn

Thr

Ile

Pro

Ile

Ala

Leu

Asn

Glu

Ala

Asp

Tyr

Leu

Arg

Met

100

105

110

Trp

Ile

Gin

Ala

Ala

Thr

Val

Met

Ser

His

Tyr

Gin

Ala

Val

Ala

His

115

120

125

«* ·♦ »· ♦· • · · · · · · · * · ♦ · • · · · · · 9 > · · » • ····«· · · » · · · · • · · · · · « · · · «· ·· >· »·«» *· ··

WO 98/53075 PCT/US98/10407

Glu

Ser 130

Val

Ala Ala

Thr

Pro 135

Ser Thr

Pro

Pro

Ala 140

Pro

Gin

Ile

Val

Thr

Ser

Ala

Ala

Ser

Ser

Ala

Ala

Ser

Ser

Ser

Phe

Pro

Asp

Pro

Thr

145

150

155

160

Lys

Leu

Ile

Leu

Gin

Leu

Leu

Lys

Asp

Phe

Leu

Glu

Leu

Leu

Arg

Tyr

165

170

175

Leu

Ala

Val

Glu

Leu

Leu

Pro

Gly

Pro

Leu

Gly

Asp

Leu

Ile

Ala

Gin

180

185

190

Val

Leu

Asp

Trp

Phe

Ile

Ser

Phe

Val

Ser

Gly

Pro

Val

Phe

Thr

Phe

195

200

205

Leu

Ala

Tyr

Leu

Val

Leu

Asp

Pro

Leu

Ile

Tyr

Phe

Gly

Pro

Phe

Ala

210

215

220

Pro

Leu

Thr

Ser

Pro

Val

Leu

Leu

Pro

Ala

Val

Glu

Leu

Arg

Asn

Arg

225

230

235

240

Leu

Lys

Thr

Ala

Thr

Gly

Leu

Thr

Leu

Pro

Pro

Thr

Val

Ile

Phe

Asp

245

250

255

His

Pro

Thr

Pro

Thr

Ala

Val

Ala

Glu

Tyr

Val

Ala

Gin

Gin

Met

Ser

260

265

270

Gly

Ser

Arg

Pro'

Thr

Glu

Ser

Gly

Asp

Pro

Thr

Ser

Gin

Val

Val

Glu

275

280

285

Pro

Ala

Arg

Ala

Glu

Phe

Gly

Thr

Ser

Ala

Val

His

Gin

Ile

Pro

Pro

290

295

300

Arg

Pro

Ala

Asp

Thr

Arg

Arg

Ala

Cys

Arg

His

Arg

Asp

Asp

Val

Pro

305

310

315

320

Arg

Asp

Ser

Arg

Ile

Ala

Gin

His

Arg

Asp

Gly

Ala

Gly

Leu

Asp

Pro

325

330

335

Thr

Glu

Arg

Gly

Thr

Ser

Glu

Gly

Asp

Gin

Gly

Leu

Val

Ser

Gly

Trp

340

345

350

Sekvence č. 15 (i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 141 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: peptid (ví) Původ zdroje:

(A) Organismus: Mycobacterium tuberculosis (xi) Sekvence č. 15

Met

Asp

Phe

Gly

Ala

Leu

Pro

Pro

Glu

Val

Asn

Ser

Val

Arg

Met

Tyr

1

5

10

15

Ala

Val

Pro

Gly

Ser

Ala

Pro

Met

Val

Ala

Ala

Ala

Ser

Ala

Trp

Asn

20

25

30

Gly

Leu

Ala

Ala

Glu

Leu

Ser

Ser

Ala

Ala

Thr

Gly

Tyr

Glu

Thr

Val

35

40

45

Ile

Thr

Gin

Leu

Ser

Ser

Glu

Gly

Trp

Leu

Gly

Pro

Ala

Ser

Ala

Ala

50

55

60

Met

Ala

Glu

Ala

Val

Ala

Pro

Tyr

Val

Ala

Trp

Met

Ser

Ala

Ala

Ala

65

70

75

80

Ala

Gin

Ala

Glu

Gin

Ala

Ala

Thr

Gin

Ala

Arg

Ala

Ala

Ala

Ala

Ala

* · # · * • » β t * * · * * « *>

WO 98/53075 PCT/US98/10407

85

90

95

Phe

Glu

Ala

Ala

Phe

Ala

Ala

Thr

Val

Pro

Pro

Pro

Leu

lle

Ala

Ala

100'

105

110

Asn

Arg

Ala

Ser

Leu

Met

Gin

Leu

lle

Ser

Thr

Asn

Val

Phe

Gly

Gin

115

120

125

Asn

Thr

Ser

Ala

lle

Ala

Ala

Ala

Glu

Ala

Gin

Tyr

Gly

130

135

140

Sekvence č. 16 (i) Charakteristika sekvence.

(A) Délka: 58 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: peptid (vi) Původ zdroje:

(A) Organismus: Mycobacterium tuberculosis (xi) Sekvence č. 16

Met

Ala

Ser

Arg

Phe

Met

Thr

Asp

Pro

His

Ala

Met

Arg

Asp

Met

Ala

1

5

10

15

Gly

Arg

Phe

Glu

Val

His

Al a

Gin

Thr

Val

Glu

Asp

Glu

Ala

Arg

Arg

20

25

30

Met

Trp

Ala

Ser

Ala

Gin

Asn

lle

Ser

Gly

Ala

Gly

Trp

Ser

Gly

Met

35

40

45

Ala

Glu

Ala

Thr

Ser

Leu

Asp

Thr

Met

Thr

50

55

Sekvence č. 17 (i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 67 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: peptid (vi) Původ zdroje:

(A) Organismus. Mycobacterium tuberculosis (xi) Sekvence č. 17

Met

Thr

lle

Asn

Tyr

Gin

Phe

Gly

Asp

Val

Asp

Ala

His

Gly

Ala

Met

1

5

10'

15

lle

Arg

Ala

Gin

Ala

Ala

Ser

Leu

Glu

Ala

Glu

His

Gin

Ala

lle

Val

20

25

30

Arg

Asp

Val

Leu

Ala

Ala

Gly

Asp

Phe

Trp

Gly

Gly

Ala

Gly

Ser

Val

35

40

45

Ala

Cys

Gin

Glu

Phe

lle

Thr

Gin

Leu

Gly

Arg

Asn

Phe

Gin

Val

lle

50

55

60

·♦ 99 ·· · * · · · • 9 · · ·· · · * · * • ·«··»* · · * · · · · «· « · 9 · « 9 9 9 *· «····♦ *· ··

WO 98/53075 PCT/US98/10407

32Tyr Glu Gin 65

Sekvence č. 18 (i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 58 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: peptid (vi) Původ zdroje:

(A) Organismus: Mycobacterium tuberculosis (xi) Sekvence ě. 18

Met

Ala

Ser

Arg

Phe

Met

Thr

Asp

Pro'

His

Ala

Met

Arg

Asp

Met

Ala

1

5

10

15

Gly

Arg

Phe

Glu

Val

His

Ala

Gin

Thr

Val

Glu

Asp

Glu

Ala

Arg

Arg

20

25

30

Met

Trp

Ala

Ser

Ala

Gin

Asn

Ile

Ser

Gly

Ala

Gly

Trp

Ser

Gly

Met

35

40

45

Ala

Glu

Ala

Thr

Ser

Leu

Asp

Thr

Met

Thr

50

55

Sekvence č. 19 (i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 94 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec, jednoduchý (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: peptid (vi) Původ zdroje:

(A) Organismus: Mycobacterium tuberculosis (xi) Sekvence č. 19

Met

Thr

Ile

Asn

Tyr

Gin

Phe

Gly

Asp

Val

Asp

Ala

His

Gly

Ala

Met

1

5

10

15

Ile

Arg

Ala

Gin

Ala

Ala

Ser

Leu

Glu

Ala

Glu

His

Gin

Ala

Ile

Val

20

25

30

Arg

Asp

Val

Leu

Ala

Ala

Gly

Asp

Phe

Trp

Gly

Gly

Ala

Gly

Ser

Val

35

40

45

Ala

Cys

Gin

Glu

'Phe

Ile

Thr

Gin

Leu

Gly

Arg

Asn

Phe

Gin

Val

Ile

50

55

60

Tyr

Glu

Gin

Ala

Asn

Ala

His

Gly

Gin

Lys

Val

Gin

Ala

Ala

Gly

Asn

65

70

75

80

Asn

Met

Ala

Gin

Thr

Asp

Ser

Ala

Val

Gly

Ser

Ser

Trp

Ala

85

90

• · · » • · · · a » a • · · a · · ·* ···* • · a· » · ♦ · « · · * • · t · · * · · « • · a ·

WO 98/53075

PCT/US98/10407

Sekvence č. 20 (i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 30 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: peptid (vi) Původ zdroje: , (A) Organismus: Mycobacterium tuberculosis (xi) Sekvence č. 20

Asn

Met

Leu

His

Gly

Val

Arg

Asp

Gly

Leu

Val

Arg

Asp

Ala

Asn Asn

1

5

10

15

Tyr

Glu

Gin

Gin

Glu

Gin

Ala

Ser

Gin

Gin

Ile

Leu

Ser

Ser

20

25

30

Sekvence

Č. 21

. .........

(i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 94 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: peptid (vi) Původ zdroje:

(A) Organismus: Mycobacterium tuberculosis (xi) Sekvence č. 21

Met

Thr

Ile

Asn

Tyr

Gin

Phe

Gly

Asp

Val

Asp

Ala

His

Gly

Ala

Met

1

5

10

15

Ile

Arg

Ala

Gin

Ala

Gly

Leu

Leu

Glu

Ala

Glu

His

Gin

Ala

Ile

Ile

20

25

30

Arg

Asp

Val

Leu

Thr

Ala

Ser

Asp

Phe

Trp

Gly

Gly

Ala

Gly

Ser

Ala

35

40

45

Ala

Cys

Gin

Gly

Phe

Ile

Thr

Gin

Leu

Gly

Arg

Asn

Phe

Gin

Val

Ile

50

55

60

Tyr

Glu

Gin

Ala

Asn

Ala

His

Gly

Gin

Lys

Val

Gin

Ala

Ala

Gly

Asn

65

70

75

80

Asn

Met

Ala

Gin

Thr

Asp

Ser

Ala

Val

Gly

Ser

Ser

Trp

Ala

85

90

Sekvence č. 22 (i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 69 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární

WO 98/53075 • · · · • · · * » • · · * • · · · * • « · · ·· ··· · ♦ · ·· * · · · • · · · • · · · • · * · •« ·*

PCT/US98/10407 (ii) Typ molekuly: peptid (vi) Původ zdroje:

(A) Organismus: Mycobacterium tuberculosis (xi) Sekvence Č. 22

Ala	Arg	Arg	Met	Trp	Ala	Ser	Ala
1 Ser	Gly	Met	Ala	5 Glu	Ala	Thr	Ser
Gin	Ala	Phe	20 Arg	Asn	Ile	Val	Asn
Leu	Val	35 Arg	Asp	Ala	Asn	Asn	40 Tyr
Gin 65	50 Ile	Leu	Ser	Ser		55

Gin	Asn 10	Ile	Ser	Gly	Ala	Gly 15	Trp
Leu 25	Asp	Thr	Met	Ala	Gin 30	Met	Asn
Met	Leu	His	Gly	Val 45	Arg	Asp	Gly
Glu	Gin	Gin	Glu 60	Gin	Ala	Ser	Gin

Sekvence č. 23 (i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 94 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: peptid (vi) Původ zdroje:

(A) Organismus: Mycobacterium tuberculosis (xi) Sekvence č. 23

Met

Thr

Ile

Asn

Tyr

Gin

Phe

Gly

Asp

Val

Asp

Ala

His

Gly

Ala

Met

1

5

10

15

Ile

Arg

Ala

Gin

Ala

Gly

Leu

Leu

Glu

Ala

Glu

His

Gin

Ala

Ile

Ile

20

2S

30

Arg

Asp

Val

Leu

Thr

Ala

Ser

Asp

Phe

Trp

Gly

Gly

Ala

Gly

Ser

Ala

35

40

45

Ala

Cys

Gin

Gly

Phe

Ile

Thr

Gin

Leu

Gly

Arg

Asn

Phe

Gin

Val

Ile

50

55

60

Tyr

Glu

Gin

Ala

Asn

Thr

His

Gly

Gin

Lys

Val

Gin

Ala

Ala

Gly

Asn

65

70

75

80

Asn

Met

Ala

Gin

Thr

Asp

Ser

Ala

Val

Xaa

Ser

Ser

Trp

Ala

85

90

Sekvence č. 24 (i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 52 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární

WO 98/53075 • · ♦ * • · · « · • · · · · • · «·· * · • « · · <9 · • · • · • · • · · · ·· »· • · ♦ * • · « · • · · · • · · « • « · *

PCT/US98/I0407 (ii) Typ molekuly, peptid (vi) Původ zdroje:

(A) Organismus: Mycobacterium tuberculosis (xi) Sekvence ě. 24

Gly

Met

Ala

Glu

Ala

Thr

Ser

Xaa

Asp

Thr

Met

Thr

Gin

Met

Asn

Gin

1

5

10

15

Ala

Phe

Arg

Asn

Ile

Val

Asn

Met

Leu

His

Gly

Val

Arg

Asp

Gly

Leu

20

25

30

Val

Arg

Asp

Ala

Asn

Xaa

Tyr

Glu

Gin

Gin

Glu

Gin

Ala

Ser

Gin

Gin

35

40

45

Ile

Leu

Ser

Ser

50

Sekvence č. 25 (i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 94 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: peptid (vi) Původ zdroje:

(A) Organismus: Mycobacterium tuberculosis (xi) Sekvence č. 25

Met

Thr

Ile

Asn

Tyr

Gin

Phe

Gly

Asp

Val

Asp

Ala

His

Gly

Ala

Met

1

5

10

15

Ile

Arg

Ala

Gin

Ala

Gly

Ser

Leu

Glu

Ala

Glu

His

Gin

Ala

Ile

Ile

20

25

30

Ser

Asp

Val

Leu

Thr

Ala

Ser

Asp

Phe

Trp

Gly

Gly

Ala

Gly

Ser

Ala

35

40

45

Ala

Cys

Gin

Gly

Phe

Ile

Thr

Gin

Leu

Gly

Arg

Asn

Phe

Gin

Val

Xaa

50

55

60

Tyr

Glu

Gin

Ala

Asn

Ala

His

Gly

Gin

Lys

Val

Gin

Ala

Ala

Gly

Asn

65

70

75

80

Asn

Met

Ala

Gin

Thr

Asp

Ser

Ala

Val

Gly

Ser

Ser

Trp

Ala

85

90

Sekvence č. 26 (i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 98 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: peptid

WO 98/53075 ·· ·* • · · · • · · * • · ··· · • t ·

9 9 9 · ♦ · • · ·

9· · · * 9 9 9 9 9

PCT/US98/10407 ··

9 * • · · • · ·

9 9

9 (vi) Původ zdroje:

(A) Organismus: Mycobacterium tuberculosis (xi) Sekvence č. 26

Met

Thr

Ser

Arg

Phe

Met

Thr

Asp

Pro

His

Ala

Met

Arg

Asp

Met

Ala

1

5

10

15

Gly

Arg

Phe

Glu

Val

His

Ala

Gin

Thr

Val

Glu

Asp

Glu

Ala

Arg

Arg

20

25

30

Met

Trp

Ala

Ser

Ala

Gin

Asn

Ile

Ser

Gly

Ala

Gly

Trp

Ser

Gly

Met

35

40

45

Ala

Glu

Ala

Thr

Ser

Leu

Asp

Thr

Met

Ala

Gin

Met

Asn

Gin

Ala

Phe

50

55

60

Arg

Asn

llé

Val

Asn

Met

Leu

His

Gly

Val

Arg

Asp

Gly

Leu

Val

Arg

65

70

75

80

Asp

Ala

Asn

Asn

Tyr

Glu

Gin

Gin

Glu

Gin

Ala

Ser

Gin

Gin

Ile

Leu

85

90

95

Ser

Ser

Sekvence č. 27 (i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 94 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: peptid (vi) Původ zdroje:

(A) Organismus: Mycobacterium tuberculosis (xi) Sekvence č. 27

Met

Thr

Ile

Asn

Tyr

Gin

Phe

Gly

Asp

Val

Asp

Ala

His

Gly

Ala

Met

1

5

10

15

Ile

Arg

Ala

Xaa

Ala

Gly

Leu

Leu

Glu

Ala

Glu

His

Gin

Ala

Ile

Ile

20

25

•

30

Ser

Asp

Val

Leu

Thr

Ala

Ser

Asp

Phe

Trp

Gly

Gly

Ala

Gly

Ser

Ala

35

40

45

Ala

Cys

Gin

Gly

Phe

Ile

Thr

Gin

Leu

Gly

Arg

Asn

Phe

Gin

Val

Ile

50

55

60

Tyr

Glu

Gin

Ala

Asn

Ala

His

Gly

Gin

Lys

Val

Gin

Ala

Ala

Gly

Asn

65

70

75

80

Asn

Met

Ala

Gin

Thr

Asp

Ser

Ala

Val

Gly

Ser

Ser

Trp

Ala

85

90

Sekvence č. 28 (i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 81 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie, lineární (ii) Typ molekuly, peptid

WO 98/53075

PCT/US98/10407 ·» · ♦ ► · · « » · · « • Φ φφ • · · · • · · · • φ φ · • · · (vi) Původ zdroje:

(A) Organismus: Mycobacterium tuberculosis (xi) Sekvence č. 28

Arg

Phe

Glu

Val

His

Ala

Gin

Thr

Val

Glu

Asp

Glu

Ala

Arg

Arg

Met

1

5

10

15

Trp

Ala

Ser

Ala

Gin

Asn

Ile

Ser

Gly

Ala

Gly

Trp

Ser

Gly

Met

Ala

20

25

30

Xaa

Ala

Thr

Ser

Leu

Asp

Thr

Met

Ala

Gin

Met

Asn

Gin

Ala

Phe

Arg

35

40

45

Asn

Ile

Val

Asn

Met

Leu

His

Gly

Val

Arg

Asp

Gly

Leu

Val

Arg

Asp

50

55

60

Ala

Asn

Asn

Tyr

Glu

Gin

Gin

Glu

Gin

Ala

Ser

Gin

Gin

Ile

Leu

Ser

65

70

75

60

Ser

Sekvence č. 29 (i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 94 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: peptid (vi) Původ zdroje:

(A) Organismus. Mycobacterium tuberculosis (xi) Sekvence č. 29

Met

Thr

Ile

Asn

Tyr

Gin

Phe

Gly

Asp

Val

Asp

Ala

His

Gly

Ala

Met

1

5

10

15

Ile

Arg

Ala

Leu

Ala

Gly

Leu

Leu

Glu

Ala

Glu

His

Gin

Ala

Ile

Ile

20

25

30

Ser

Asp

Val

Leu

Thr

Ala

Ser

Asp

Phe

Trp

Gly

Gly

Ala

Gly

Ser

Ala

35

40

45

Ala

Cys

Gin

Gly

Phe

Ile

Thr

Gin

Leu

Gly

Arg

Asn

Phe

Gin

Val

Ile

50

55

60

Tyr

Glu

Gin

Ala

Asn

Ala

His

Gly

Gin

Lys

Val

Gin

Ala

Ala

Gly

Asn

65

70

75

80

Asn

Met

Ala

Gin

Thr

Asp

Ser

Ala

Val

Gly

Ser

Ser

Trp

Ala

85

90

Sekvence č. 30 (i) Charakteristika sekvence.

(A) Délka. 11 aminokyselin (B) Typ. aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: peptid »·

WO 98/53075 ·« · · ·· ·· • · · · · · · · · • · · · · · · · • · · 9 · · · · · · • · · · · * · t ·# 99 9 9 99 9 9

PCT/US98/10407 (ví) Původ zdroje:

(A) Organismus: Mycobacterium tuberculosis (xi) Sekvence č. 30

Gin Glu Gin Ala Ser Gin Gin lle Leu Ser Ser 1 5 io

Sekvence č. 31 (i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 94 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: peptid (vi) Původ zdroje.

(A) Organismus: Mycobacterium tuberculosis (xi) Sekvence č. 31

Met

Thr

lle

Asn

Tyr

Gin

Phe

Gly

Asp

Val

Asp

Ala

His

Gly

Ala

Met

1

5

10

15

lle

Arg

Ala

Gin

Ala

Gly

Leu

Leu

Glu

Ala

Glu

His

Gin

Ala

lle

lle

20

25

30

Arg

Asp

Val

Leu

Thr

Ala

Ser

Asp

Phe

Trp

Gly

Gly

Ala

Gly

Ser

Ala

35

40

45

Ala

Cys

Gin

Gly

Phe

lle

Thr

Gin

Leu

Gly

Arg

Asn

Phe

Gin

Val

lle

50

55

60

Tyr

Glu

Gin

Ala

Asn

Ala

His

Gly

Gin

Lys

Val

Gin

Ala

Ala

Gly

Asn

65

70

75

80

Asn

Met

Ala

Gin

Thr

Asp

Ser

Ala

Val

Gly

Ser

Ser

Trp

Ala

85

90

Sekvence č. 32 (i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 99 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: peptid (vi) Původ zdroje:

(A) Organismus: Mycobacterium tuberculosis (xi) Sekvence č. 32

Met

Ser

Phe

Val

Thr

Thr Gin

Pro

Glu

Ala

Leu

Ala

Ala

Ala

Ala

Ala

1

5

10

15

Asn

Leu

Gin

Gly

lle

Gly Thr

Thr

Met

Asn

Ala

Gin

Asn

Ala

Ala

Ala

• · · « • · · · • · ··· ·· ··

WO 98/53075 PCT/US98/10407 • ·

20

25

30

Ala

Ala

Pro

Thr

Thr

Gly

Val

Val

Pro

Ala

Ala

Ala

Asp

Glu

Val

Ser

35

40

45

Ala

Leu

Thr

Ala

Ala

Gin

Phe

Ala

Ala

His

Ala

Gin

Met

Tyr

Gin

Thr

SO

55

60

Val

Ser

Ala

Gin

Ala

Ala

Ala

Ile

His

Glu

Met

Phe

Val

Asn

Thr

Leu

65

70

75

80

Val

Ala

Ser

Ser

Gly

Ser

Tyr

Ala

Ala

Thr

Glu

Ala

Ala

Asn

Ala

Ala

85

90

95

Ala

Ala

Gly

Sekvence č. 33 (i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 99 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: peptid (vi) Původ zdroje:

(A) Organismus. Mycobacterium tuberculosis (xi) Sekvence Č. 33

Met

Ser

Phe

Val

Thr

Thr

Gin

Pro

Glu

Ala

Leu

Ala

Ala

Ala

Ala

Ala

1

5

10

15

Asn

Leu

Gin

Gly

Ile

Gly

Thr

Thr

Met

Asn

Ala

Gin

Asn

Ala

Ala

Ala

20

25

30

Ala

Ala

Pro

Thr

Thr

Gly

Val

Val

Pro

Ala

Ala

Ala

Asp

Glu

Val

Ser

35

40

45

Ala

Leu

Thr

Ala

Ala

Gin

Phe

Ala

Ala

His

Ala

Gin

Met

Tyr

Gin

Thr

50

55

60

Val

Ser

Ala

Gin

Ala

Ala

Ala

Ile

His

Glu

Met

Phe

Val

Asn

Thr

Leu

65

70

75

80

Val

Ala

Ser

Ser

Gly

Ser

Tyr

Ala

Ala

Thr

Glu

Ala

Ala

Asn

Ala

Ala

85

90

95

Ala

Ala

Gly

Sekvence č. 34 (i) Charakteristika sekvence.

(A) Délka: 15 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly, peptid (vi) Původ zdroje:

(A) Organismus: Mycobacterium tuberculosis (xi) Sekvence č. 34

WO 98/53075

9 · · * • 9 · · · ·

9 9 9 · · • 9 99999 · • · 9 9 · ·· ·· ·· ·· • 9 9

9 9 9 9

9 9 9 9 « • · 9 9 9

9999 99 99

PCT/US98/10407

Asp Pro His Ala Met Arg Asp Met Ala Gly Arg Phe Glu Val His 15 10 15

Sekvence č. 35 (i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 15 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: peptid (vi) Původ zdroje:

(A) Organismus: Mycobacterium tuberculosis (xi) Sekvence č. 35

Arg Asp Met Ala Gly Arg Phe Glu Val His Ala Gin Thr Val Glu 15 10 15

Sekvence č. 36 (i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 15 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: peptid (vi) Původ zdroje:

(A) Organismus: Mycobacterium tuberculosis (xi) Sekvence č. 36

Arg Phe Glu Val His Ala Gin Thr Val Glu Asp Glu Ala Arg Arg 15 10 15

Sekvence č. 37 (i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 15 aminokyselin (B) Typ. aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: peptid (vi) Původ zdroje.

(A) Organismus: Mycobacterium tuberculosis (xi) Sekvence ě. 37

Ala Gin Thr Val Glu Asp Glu Ala Arg Arg Met Trp Ala Ser Ala

WO 98/53075 ··

9 9

9 9

999 9

9

99

9 9 9

9 9

9 9

9 9

99 9 9

99 • 9 9

9 9

9 9

9 9

9 9 9

PCT/US98/10407 ti s

Sekvence č. 38 (i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 15 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: peptid (vi) Původ zdroje:

(A) Organismus: Mycobacterium tuberculosis (xi) Sekvence č. 38

Asp Glu Ala Arg Arg Met Trp Ala Ser Ala Gin Asn Ile Ser Gly 1 5 10 . 15

Sekvence č. 39 (i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 15 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (ii) T yp molekuly: peptid (vi) Původ zdroje:

(A) Organismus: Mycobacterium tuberculosis (xi) Sekvence č. 39

Met Trp Ala Ser Ala Gin Asn Ile Ser Gly Ala Gly Trp Ser Gly 1 .5 10 · 15

Sekvence č. 40 (i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 15 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: peptid (vi) Původ zdroje:

(A) Organismus: Mycobacterium tuberculosis (xi) Sekvence č. 40

Gin Asn Ile Ser Gly Ala Gly Trp Ser Gly Met Ala Glu Ala Thr 15 10 15 ··

• · · * · ♦ · • · · ·

PCT/US98/10407

WO 98/53075

Sekvence č. 41 (i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka. 16 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: peptid (vi) Původ zdroje:

(A) Organismus. Mycobacterium tuberculosis (xi) Sekvence č. 41

Ala Gly Trp Ser Gly Met Ala Glu Ala Thr Ser Leu Asp Thr Met Thr 1 5 10 15

Sekvence č. 42 (i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 15 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: peptid (vi) Původ zdroje.

(A) Organismus: Mycobacterium tuberculosis (xi) Sekvence č. 42

Met Ala Glu Ala Thr Ser Leu Asp Thr Met Ala Gin Met Asn Gin 15 10 15

Sekvence č. 43 (i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 15 aminokyselin (13) Typ. aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly, peptid (vi) Původ zdroje:

(A) Organismus: Mycobacterium tuberculosis (xi) Sekvence č. 43

Ser Leu Asp Thr Met Ala Gin Met Asn Gin Ala Phe Arg Asn Ile 1 5 10 1S

WO 98/53075

• · · · · • · · * ·4 • · · · • · ♦ *

PCT/US98/10407

Sekvence č. 44 (i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 15 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: peptid (vi) Původ zdroje:

(A) Organismus: Mycobacterium tuberculosis (xi) Sekvence ě. 44

Ala Gin Met Asn Gin Ala Phe Arg Asn Ile Val Asn Met Leu His

Sekvence ě. 45 (i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 15 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec, jednoduchý (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: peptid (vi) Původ zdroje:

(A) Organismus: Mycobacterium tuberculosis (xi) Sekvence č. 45

Ala Phe Arg Asn Ile Val Asn Met Leu His Gly Val Arg Asp Gly 15 io 15

Sekvence č. 46 (i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 15 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly, peptid (vi) Původ zdroje:

(A) Organismus. Mycobacterium tuberculosis (xi) Sekvence č. 46

Val Asn Met Leu His Gly Val Arg Asp Gly Leu Val Arg Asp Ala

Sekvence č. 47 • · · · φ··* · ··· ·· · * ·· * · · φ» · Φ Φ Φ · Φ Φ · • · · · ΦΦΦΦΦΦΦ···

WO 98/53075 PCT/US98/10407 (i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 15 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: peptid (vi) Původ zdroje:

(A) Organismus: Mycobacterium tuberculosis (xi) Sekvence č. 47

Gly Val Arg Asp Gly Leu Val Arg Asp Ala Asn Asn Tyr Glu Gin 15 10 15

Sekvence č. 48 (i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 15 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: peptid (vi) Původ zdroje:

(A) Organismus: Mycobacterium tuberculosis (xi) Sekvence č. 48

Leu Val Arg Asp Ala Asn Asn Tyr Glu Gin Gin Glu Gin Ala Ser 15 10 15

Sekvence č. 49 (i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 16 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: peptid (vi) Původ zdroje:

(A) Organismus. Mycobacterium tuberculosis (xi) Sekvence č. 49

Asn Asn Tyr Glu Gin Gin Glu Gin Ala Ser Gin Gin Ile Leu Ser Ser 15 10 15

Sekvence č. 50

WO 98/53075 v·· ♦ ·

9 99 9 9

PCT/US98/10407 (i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 17 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: peptid (vl) Původ zdroje:

(A) Organismus: Mycobacterium tuberculosis (xi) Sekvence č. 50

Met Ala Ser Arg Phe Met Thr Asp Pro His Ala Met Arg Asp Met Ala ¹⁵ 10 15

Gly

Sekvence ě. 51 (i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 15 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly, peptid (vi) Původ zdroje:

(A) Organismus: Mycobacterium tuberculosis (xi) Sekvence č. 51

Met Thr Ile Asn Tyr Gin Phe Gly Asp Val Asp Ala His Gly Ala 15 10 15

Sekvence č. 52 (i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 15 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: peptid (vi) Původ zdroje:

(A) Organismus. Mycobacterium tuberculosis (xi) Sekvence č. 52

Gin Phe Gly Asp Val Asp Ala His Gly Ala Met Ile Arg Ala Gin 15 10 15

Sekvence č. 53

WO 98/53075 • ·

• · » · · · · *

PCT/US98/10407 (i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 15 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie, lineární (ii) Typ molekuly: peptid (vi) Původ zdroje:

(A) Organismus: Mycobacterium tuberculosis (xi) Sekvence Č. 53

Asp Ala His Gly Ala Met Ile Arg Ala Gin Ala Ala Ser Leu Glu 15 10 15

Sekvence č. 54 (i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 15 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: peptid (vi) Původ zdroje:

(A) Organismus: Mycobacterium tuberculosis (xi) Sekvence č. 54

Met Ile Arg Ala Gin Ala Ala Ser Leu Glu Ala Glu His Gin Ala 1 5 10 15

Sekvence č. 55 (i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 15 aminokyselin (B) Typ. aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie, lineární (ii) Typ molekuly: peptid (vi) Původ zdroje:

(A) Organismus: Mycobacterium tuberculosis (xi) Sekvence č. 55

Ala Ala Ser Leu Glu Ala Glu His- Gin Ala Ile val Arg Asp Val 1 5 10 15

Sekvence č. 56

WO 98/53075

PCT/US98/10407

• » • · ·

fa (i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 15 aminokyselin (B) Typ. aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie, lineární (ii) Typ molekuly: peptid (vi) Původ zdroje:

(A) Organismus. Mycobacterium tuberculosis (xi) Sekvence č. 56

Ala Glu His Gin Ala lle Val Arg Asp Val Leu Ala Ala Gly Asp ¹⁵ 10 15

Sekvence č. 57 (i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 15 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: peptid (vi) Původ zdroje:

(A) Organismus: Mycobacterium tuberculosis (xi) Sekvence č. 57 lle Val Arg Asp Val Leu Ala Ala Gly Asp Phe Trp Gly Gly Ala 15 10 15

Sekvence č. 58 (i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 16 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec jednoduchý (D) topologie: lineární (ii) Typ molekuly: peptid (vi) Původ zdroje:

(A) Organismus: Mycobacterium tuberculosis (xi) Sekvence ě. 58

Leu Ala Ala Gly Asp Phe Trp Gly Gly Ala Gly Ser Val Ala Cys Gin 15 10 15 (i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: I 5 aminokyselin

Sekvence č. 59

WO 98/53075 ·· ·· • * · * • · · * • · · · · • « « · <1 ·

PCT/US98/10407 ti (B) Typ. aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: peptid (vi) Původ zdroje:

(A) Organismus: Mycobacterium tuberculosis (xi) Sekvence Č. 59

Phe Trp Gly Gly Ala Gly Ser Val Ala Cys Gin Glu Phe Ile Thr 15 10 15

Sekvence č. 60 (i) Charakteristika sekvence.

(A) Délka: 15 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: peptid (vi) Původ zdroje:

(A) Organismus: Mycobacterium tuberculosis (xi) Sekvence č. 60

Gly Ser.Val Ala Cys Gin Glu Phe Ile Thr Gin Leu Gly Arg Asn

5 10 15

Sekvence č. 61 (i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 18 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: peptid (vi) Původ zdroje.

(A) Organismus: Mycobacterium tuberculosis (xi) Sekvence č. 61

Gin Glu Phe Ile Thr Gin Leu Gly Arg Asn Phe Gin Val Ile Tyr Glu ]_ 5 10 15

Gin Ala

Sekvence č. 62 (i) Charakteristika sekvence.

(A) Délka: 15 aminokyselin

WO 98/53075

PCT/US98/10407 (B) TYPE: amino acid (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: peptid (vi) Původ zdroje:

(A) Organismus: Mycobacterium tuberculosis (xi) Sekvence ě. 62

Arg Asn Phe Gin Val Ile Tyr Glu Gin Ala Asn Ala His Gly Gin 15 10 15

Sekvence č. 63 (i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 15 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: peptid (vi) Původ zdroje.

(A) Organismus: Mycobacterium tuberculosis (xi) Sekvence č. 63

Ile Tyr Glu Gin Ala Asn Ala His Gly Gin Lys Val Gin Ala Ala 15 10 15

Sekvence č. M (i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 15 aminokyselin (B) Typ. aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý (1)) Topologie: lineární (ii) '1 yp molekuly, peptid (vi) Původ zdroje:

(A) Organismus. Mycobacterium tuberculosis (xi) Sekvence č. 64

Asn Ala His Gly Gin Lys Val Gin Ala Ala Gly Asn Asn Met Ala 1 '5 10 15

Sekvence č. 65 (i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 15 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina

WO 98/53075

PCT/US98/10407 t * « *r-^w-x «.*««· — — ' (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: peptid (vi) Původ zdroje:

(A) Organismus: Mycobacterium tuberculosis (xi) Sekvence č. 65

Lys Val Gin Ala Ala Gly Asn Asn Met Ala Gin Thr Asp Ser Ala 1 S .10 15

Sekvence Č. 66 (i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 16 aminokyselin (B) Typ. aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly, peptid (vi) Původ zdroje:

(A) Organismus: Mycobacterium tuberculosis (xi) Sekvence č. 66

Gly Asn Asn Met Ala Gin Thr Asp Ser Ala Val Gly Ser Ser Trp Ala 15 10 15

Sekvence č. 67 (i) Charakteristika sekvence.

(A) Délka: 15 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (ii) l yp molekuly: peptid (vi) Původ zdroje:

(A) Organismus: Mycobacterium tuberculosis (xi) Sekvence č. 67

Asp Ala His Gly Ala Met Ile Arg Ala Leu Ala Gly Leu Leu Glu 15 10 15

Sekvence č. 68 (i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 15 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec jednoduchý ·

WO 98/53075

PCT/US98/10407 • · 9 9

9 9 9

9 9 9 • * · 9 9 « · · *· · · • 9 ·

• · • · ·· • 9 9

9 9 (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: peptid (vi) Původ zdroje:

(A) Organismus: Mycobacterium tuberculosis (xi) Sekvence č. 68

Asp Ala His Gly Ala Met Ile Arg Ala Gin Ala Gly Leu Leu Glu ¹⁵ 10 15

Sekvence č. 69 (i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 15 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: peptid (vi) Původ zdroje:

(A) Organismus: Mycobacterium tuberculosis (xi) Sekvence č. 69

Met Ile Arg Ala Leu Ala Gly Leu Leu Glu Ala Glu His Gin Ala io 15

Sekvence č. 70 (i) Charakteristika sekvence.

(A) Délka. 15 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: peptid (vi) Původ zdroje:

(A) Organismus: Mycobacterium tuberculosis (xi) Sekvence č. 70

Met Ile Arg Ala Gin Ala Gly Leu Leu Glu Ala Glu His Gin Ala ^{1 5} 10 15

Sekvence č. 71 (i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 15 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární

WO 98/53075 ·« ·· > « · · » · · ·' » * *«· v · ·

M « · • · ·· » ♦ « 1 k · · ’

PCT/US98/10407 (ii) Typ molekuly: peptid (vi) Původ zdroje:

(A) Organismus: Mycobacterium tuberculosis (xi) Sekvence ě. 71

Ala Gly Leu Leu Glu Ala Glu His Gin Ala Ile Ile Ser Asp Val 15 10 15

Sekvence ě. 72 (i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 15 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: peptid (vi) Původ zdroje:

(A) Organismus: Mycobacterium tuberculosis (xi) Sekvence č. 72

Ala Gly Leu Leu Glu Ala Glu His Gin Ala Ile Ile Arg Asp Val 15 10 15

Sekvence č. 73 (i) Charakteristika sekvence.

(A) Délka: 15 aminokyselin (B) Typ. aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: peptid (vi) Původ zdroje:

(A) Organismus: Mycobacterium tuberculosis (xi) Sekvence č. 73

Ala Glu His Gin Ala Ile Ile Ser Asp Val Leu Thr Ala Ser Asp 15 10 15

Sekvence č. 74 (i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka. 15 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární

WO 98/53075

PCT/US98/10407 (íi) Typ molekuly: peptid (vi) Původ zdroje:

(A) Organismus: Mycobacterium tuberculosis (xi) Sekvence č. 74

Ala Glu His Gin Ala Ile Ile Arg Asp Val Leu Thr Ala Ser Asp 15 10 15

Sekvence č. 75 (i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 15 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: peptid (vi) Původ zdroje:

(A) Organismus: Mycobacterium tuberculosis (xi) Sekvence ě. 75

Ile Ile Ser Asp Val Leu Thr Ala Ser Asp Phe Trp Gly Gly Ala 15 10 15

Sekvence č. 76 (i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 15 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: peptid (vi) Původ zdroje:

(A) Organismus: Mycobacterium tuberculosis (xi) Sekvence ě. 76

Ile Ile Arg Asp Val Leu Thr Ala Ser Asp Phe Trp Gly Gly Ala 1 5 -10 15

Sekvence č. 77 (i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 16 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly, peptid

WO 98/53075 • « φ « φ φφ φ · ·* · • · · φ φ φ · • Φ φ ♦ φ φ φ · • · · φ φ · φ «· · · φ » «· φφ

PCT/US98/10407 (vi) Původ zdroje:

(A) Organismus: Mycobacterium tuberculosis (xi) Sekvence č. 77

Leu Thr Ala Ser Asp Phe Trp Gly Gly Ala Gly Ser Ala Ala Cys Gin ¹ 5 10 15

Sekvence č. 78 (i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 15 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: peptid (vi) Původ zdroje:

(A) Organismus: Mycobacterium tuberculosis (xi) Sekvence č. 78

Phe Trp Gly Gly Ala Gly Ser Ala Ala Cys Gin Gly Phe Ile Thr 15 10 15

Sekvence č. 79 (i) Charakteristika sekvence.

(A) Délka: 15 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: peptid (vi) Původ zdroje:

(A) Organismus: Mycobacterium tuberculosis (xi) Sekvence č. 79

Gly Ser Ala Ala Cys Gin Gly Phe Ile Thr Gin Leu Gly Arg Asn 15 10 15

Sekvence č. 80 (i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 15 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly, peptid

WO 98/53075

PCT/US98/10407 ·· ·· • · · · • 9 9 · • · · · · « · · »» ·· ·· ·· ♦ · · • · · » · · • · · · • 9 99 (vi) Původ zdroje:

(A) Organismus: Mycobacterium tuberculosis (xi) Sekvence č. 80

Gin Gly Phe Ile Thr Gin Leu Gly Arg Asn Phe Gin Val Ile Tyr 15 10 15

Sekvence č. 81 (i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 25 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: peptid (vi) Původ zdroje:

(A) Organismus: Mycobacterium tuberculosis (xi) Sekvence č. 81

Val Thr Thr Asn Phe Phe Gly Val Asn Thr Ile Pro Ile Ala Leu Asn 15 10 15

Glu Ala Asp Tyr Leu Arg Met Trp Ile

25

Sekvence č, 82 (i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 25 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: peptid (vi) Původ zdroje:

(Λ) Organismus: Mycobacterium tuberculosis (xi) Sekvence č 82

Asn Glu Ala Asp Tyr Leu Arg Met Trp Ile Gin Ala Ala Thr Val Met 15 10 15

Ser His Tyr Gin Ala Val Ala His Glu

25

Sekvence č. 83 (i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 967 párů bází (B) Typ: nukleová kyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární

WO 98/53075

9 9

9 · « 9 * »

PCT/US98/I0407 (ii) Typ molekuly: cDNA (xi) Sekvence č. 83

TGAGCGCCAA CCCTACCGTC GGTTCGTCAC ACGGACCGCA TGGCCTGCTC CGCGGACTGC 60

CGCTAGGGTC GCGGATCACT CGGCGTAGCG GCGCCTTTGC CCACCGATAT GGGTTCCGTC 120

ACAGTGTGGT TGCCCGCCCG CCATCGGCCG GATAACGCCA TGACCTCAGC TCGGCAGAAA 180

TGACAATGCT CCCAAAGGCG TGAGCACCCG AAGACAACTA AGCAGGAGAT CGCATGCCGT 24 0

TTGTGACTAC CCAACCAGAA GCACTGGCGG CGGCGGCCGG CAGTCTGCAG GGAATCGGCT 300

CCGCATTGAA CGCCCAGAAT GCGGCTGCGG CGACTCCCAC GACGGGGGTG GTCCGGCGGC 360

CGCCGATGAA NTGTCGGCGC TGACGGCGGC TCAGTTCGCG GCACACGCCC AGATCTATCA 42 0

GGCCGTCAGC GCCCAGGCCG CGGCGATTCA CGAGATGTTC GTCAACACTC TACAGATGAG 480

CTCAGGGTCG TATGCTGCTA CCGAGGCCGC CAACGCGGCC GCGGCCGGNT AGAGGAGTCA 540

CTGCGATGGA TTTTGGGGCG TTGCCGCCGG AGGTCAATTC GGTGCGGATG TATGCCGTTC 600

CTGGCTCGGC ACCAATGGTC GCTGCGGCGT CGGCCTGGAA CGGGTTGGCC GCGGAGCTGA 660

GTTCGGCGGC CACCGGTTAT GAGACGGTGA TCACTCAGCT CAGCAGTGAG GGGTGGCTAG 720

GTCCGGCGTC AGCGGCGATG GCCGAGGCAG TTGCGCCGTA TGTGGCGTGG ATGAGTGCCG 780

CTGCGGCGCA AGCCGAGCAG GCGGCCACAC AGGCCAGGGC CGCCGCGGCC GCTTTTGAGG 840

CGGCGTTTGC CGCGACGGTG CCTCCGCCGT TGATCGCGGC CAACCGGGCT TCGTTGATGC 900

AGCTGATCTC GACGAATGTC TTTGGTCAGA ACACGTCGGC GATCGCGGCC GCCGAAGCTC 960

AGTACGG 967

Sekvence ě. 84 (i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 15 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: peptid (xi) Sekvence č. 84

Met Ser Phe Val Thr Thr Gin Pro Glu Ala Leu Ala Ala Ala Ala 15 10 15

Sekvence č. 85 (i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 15 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: peptid (xi) Sekvence č. 85

Thr Gin Pro Glu Ala Leu Ala Ala Ala Ala Ala Asn Leu Gin Gly

Sekvence č. 86

WO 98/53075

PCT/US98/10407 • · · · • * · · • 9 9 9

9 999

9 ·

9 9 9

99

9 9 9

9 9 9

9 9 9

9 9 9

9·

57(i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 15 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec, jednoduchý (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: peptid (xi) Sekvence č. 86

Leu Ala Ala Ala Ala Ala Asn Leu Gin Gly Ile Gly Thr Thr Met 15 10 15

Sekvence č. 87 (i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 15 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: peptid (xi) Sekvence č. 87

Ala Asn Leu Gin Gly Ile Gly Thr Thr Met Asn Ala Gin Asn Ala 15 10 15

Sekvence č. 88 (i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 15 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: peptid (xi) Sekvence č. 88

Ile Gly Thr Thr Met Asn Ala Gin Asn Ala Ala Ala Ala Ala Pro 15 10 15

Sekvence č. 89 (i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 1 5 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: peptid (xi) Sekvence č. 89

WO 98/53075 • · *· ► · · ·

I · * · » · »* · ·· ·· • · « « * « ··

PCT/US98/10407

Asn Ala Gin Asn Ala Ala Ala Ala Ala Pro Thr Thr Gly Val Val ^{1 ς} 10 15

Sekvence č. 90 (i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 15 aminokyselin (B) Typ. aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: peptid (xi) Sekvence č. 90

Ala Ala Ala Ala Pro Thr Thr Gly Val Val Pro Ala Ala Ala Asp 1 5 10 15

Sekvence č. 91 (i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 15 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: peptid (xi) Sekvence č. 91

Thr Thr Gly Val Val Pro Ala Ala Ala Asp Glu Val Ser Ala Leu 15 10 15

Sekvence č. 92 (i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 15 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie, lineární (ii) Typ molekuly: peptid (xi) Sekvence č. 92

Pro Ala Ala Ala Asp Glu Val Ser Ala Leu Thr Ala Ala Gin Phe 15 10 15

Sekvence č. 93 (i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 15 aminokyselin (B) Typ; aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární ·

999

WO 98/53075 ♦ ** • 4 ·· • 9 · 9

9 9 ♦ · · • · ·

9999

9 9

9 9

9 9

9 9

9 99

PCT/US98/10407 (ii) Typ molekuly: peptid (xi) Sekvence 6. 93

Glu Val Ser Ala Leu Thr Ala Ala Gin Phe Ala Ala His Ala Gin 15 10 15

Sekvence č. 94 (i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 15 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: peptid (xi) Sekvence č. 94

Thr Ala Ala Gin Phe Ala Ala His Ala Gin Met Tyr Gin Thr Val 15 10 15

Sekvence č. 95 (i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 15 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: peptid (xi) Sekvence č. 95

Ala Ala His Ala Gin Met Tyr Gin Thr Val Ser Ala Gin Ala Ala 1 5 10-15

Sekvence č. 96 (i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 16 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: peptid (xi) Sekvence č. 96

Met Tyr Gin Thr Val Ser Ala Gin Ala Ala Ala Ile His Glu Met Phe 15 10 15

Sekvence č. 97

WO 98/53075 ·· ·· • « · · · • · · · · • · ··· 9 · « · · · • » · · ♦ · ·· ···« ·« ·· • · · • · · • · · • · · * ·· ·«

PCT/US98/10407 (i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 15 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec, jednoduchý (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: peptid (xi) Sekvence č. 97

Ser Ala Gin Ala Ala Ala Ile His Glu Met Phe Val Asn Thr Leu 15 10 1S

Sekvence č. 98 (i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 15 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: peptid (xi) Sekvence č. 98

Ala Ile His Glu Met Phe Val Asn Thr Leu Val Ala Ser Ser Gly 15 10 15

Sekvence č. 99 (i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 15 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (ii) T yp molekuly: peptid (xi) Sekvence č. 99

Phe Val Asn Thr Leu Val Ala Ser Ser Gly Ser Tyr Ala Ala Thr 15 10 15

Sekvence č. 100 (i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka. 15 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: peptid (xi) Sekvence č. 100

WO 98/53075 • · • · • · • · • · • 9 ·» ··

··· • · • ·

PCT/US98/10407

Val Ala Ser Ser Gly Ser Tyr Ala Ala Thr Glu Ala Ala Asn Ala 15 10 1S

Sekvence č. 101 (i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 14 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: peptid (xi) Sekvence Č. 101

Ser Tyr Ala Ala Thr Glu Ala Ala Asn Ala Ala Ala Ala Gly 15 10

Sekvence č. 102 (i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 1784 párů bází (B) Typ: nukleová kyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: cDNA (xi) Sekvence č. 102

ATTCGTTGCT	GCCGCAGCTA	AATCCCGGGG	ACATCGTCGC	CGGCCAGTAC	GAGGTCAAAG	60
GCTGCATCGC	GCACGGCGGA	CTGGGCTGGA	TCTACCTCGC	TCTCGACCGC	AATGTCAACG	120
GCCGTCCGGT	GGTGCTCAAG	GGCCTGGTGC	ATTCCGGTGA	TGCCGAAGCG	CAGGCAATGG	180
CGATGGCCGA	ACGCCAGTTC	CTGGCCGAGG	TGGTGCACCC	GTCGATCGTG	CAGATCTTCA	240
ACTTTGTCGA	GCACACCGAC	AGGCACGGGG	ATCCGGTCGG	CTACATCGTG	ATGGAATACG	300
TCGGCGGGCA	ATCGGTCAAA	CGCAGCAAGG	GTCANAAACT	GCCCGTCGCG	GAGGCCATCG	360
CCTACCTGCT	GGAGATCCTG	CCGGCGCTGA	GCTACCTGCA	TTCCATCGGC	TTGGTCTACA	420
ACGACCTGAA	GCCGGAAAAC	ATCATGCTGA	CCGAGGAACA	GCTCAAGCTG	ATCGACCTGG	480
GCGCGGTATC	GCGGATCAAC	TCGTTCGGCT	ACCTCTACGG	GACCCCAGGC	TTCCAGGCGC	540
CCGAGATCGT	GCGGACCGGT	CCGACGGTGG	CCACCGACAT	CTACACCGTG	GGACGCACGC	600
TCGCGGCGCT	CACGCTGGAC	CTGCCCACCC	GCAATGGCCG	TTATGTGGAT	GGGCTACCCG	660
AAGACGACCC	GGTGCTGAAA	ACCTACGACT	CTTACGGCCG	GTTGCTGCGC	AGGGCCATCG	720
ACCCCGATCC	GCGGCAACGG	TTCACCACCG	CCGAAGAGAT	GTCCGCGCAA	TTGACGGGCG	780
TGTTGCGGGA	GGTGGTCGCC	CAGACACCGG	GGTGCCGCGG	GCAGGCTATC	AACGATCTTC	840
AGTCCCAGTC	GGTCGACATT	TGGAGTGGAC	TGCTGGTGGC	GCACACCGAC	GTGTATCTGG	900
ACGGGCAGGT	GCACGCGGAG	AAGCTGACCG	CCAACGAGAT	CGTGACCGCG	CTGTCGGTGC	960
CGCTGGTCGA	TCCGACCGAC	GTCGCAGCTT	CGGTCCTGCA	GGCCACGGTG	CTCTCCCAGC	1020
CGGTGCAGAC	CCTAGACTCG	NTGCGCGCGG	CCCGCCACGG	TGCGCTGGAC	GCCGACGGCG	1080
TCGATTNTCC	GAGTCAGTGG	AGCTGCCGCT	AATGGAAGTC	CGCGCGCTGC	TGGATCTCGG	1140
CGATGTGGCC	AAGGCCACCC	GAAAACTCGA	CGATCTGGCC	GAACGCGTTG	GCTGGCGATG	1200
GCGÁTTGGTC	TGGTACCGGG	CCGTCGCCGA	GCTGCTCACC	GGCGACTATG	ACTCGGCCAC	1260
CAAACATTTC	ACCGAGGTGC	TGGATACCTT	TCCCGGCGAG	CTGGCGCCCA	AGCTCGCCCT	1320
GGCCGCCACC	GCCGAACTAG	CCGGCAACAC	CGACGAACAC	AAGTTCTATC	AGACGGTGTG	1380
GAGCACCAAC	GACGGCGTGA	TCTCGGCGGC	TTTCGGACTG	GCCAGAGCCC	GGTCGGCCGA	1440
AGGTGATCGG	GTCGGCGCCG	TGCGCACGCT	CGACGAGGTA	CCGCCCACTT	CTCGGCATTT	1500

WO 98/53075 • I» • · · · · • · · · · » · · · · • · * · « ·· ·*

PCT/US98/10407

CACCACGGCA CGGCTGACCA GCGCGGTGAC TCTGTTGTCC GGCCGGTCAA CGAGTGAAGT 1560

CACCGAGGAA CAGATCCGCG ACGCCGCCCG AAGAGTGGAG GCGCTGCCCC CGACCGAACC 1620

ACGCGTGCTG CAGATCCGCG CCCTGGTGCT GGGTGGCGCG CTGGACTGGC TGAAGGACAA 1680

CAAGGCCAGC ACCAACCACA TCCTCGGTTT CCCGTTCACC AGTCACGGGC TGCGGCTGGG 1740

TGTCGAGGCG TCACTGCGCA GCCTGGCCCG GGTAGCTCCC ACTC 1784

Sekvence č. 103 (i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 766 párů bází (B) Typ: nukleová kyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: cDNA (xi) Sekvence č. 103

ACAARACACT CGGYGGCKGC CGMTCCGGCC TGATCGTCGC- TGATCAGCYT CGTGCCAAAY 60

TCGGCACAAG GTGCGCGCTR CCCAANGAGT TCTTCGCCGC RGTGCGMGCM KAACTGGCCT 120

ATCNTGGTTG GGTGCCGTCC CGCANAACCC GCGAACTTAA ACCCATTTTA ACCGGGCAGG 180

AAGTTTCCTA CATYTACCCN RGSMANCCAA CCGGGCCGCC NANAAMTCCG TCCTGGANTC 240

CGANCGGTTC CCGGTGTTCG CCGCACTGCT GACCGGCACG GARTATCCGC AGGCGGCGTT 300

GGCCAACGCG TGGGTGCAAC TGGCCTACGG TGCGCACCAS GACGCCATCA CCGGCTCGGA 360

GTCCGACCAG GTACTCAATG CTGGCGACCA CACCAGCCAG CAGACCAAAC TGGTGCACGC 420

CGATCTCCAG GCGCGCCGGC CCGGTGGCAT ACGGATTGGT CGAAACCAAT CCGAAGGAAT 480

TCATCACGGA CGGTCACGGA AAACGATCGC CCCAATGGGN GGACNACCCN AGCCAGGCGN 540

ATTNACCGTT NAACAAGTTG GNGTAGGTTC TTTGATATCG AKCAACCGAT ACGGAKCGGM 600

CCGCGGAATG GTAGACCACC ACCAGTGCCC NCAMGTMGTG CACCAGTTTG GTCATCGCCC 660

GCAGATCGGT GACCCCGCCA AGCGTTCCGG ATGCGGAGAT GASGGTGACC AGCCYGGTTG 720

ACCTGTTGAT CAGGTTNTCC CAGTGCCACG TCGGCAGCTG GCCGGT 766

Sekvence č. 104 (i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 1231 párů bází (B) Typ: nukleová kyselina í; (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: cDNA (xi) Sekvence č. 104

CGGCACGAGA ATGTCGCCTG TGCCTCGATA GCCACTTGCG TGTGGTCGCG CTGCCAGCGG 60 GTCAGCCAGG TCGCCTGGTC CAGGCCATCG GGCCGGCGCA GGAGCGCGAT GTTGGCCAGA 120 CCCGGTGTAC GAGAACCGGA CTCGACNAAG TGTCGGCGCT GACGGCGGCT CAGTTCGCGG 180 CACACGCCCA GATCTATCAG GCCGTCAGCG CCCAGGCCGC GGCGATTCAC GAGATGTTCG 240 TCAACACTCT ACAGATNANC TCAGGGTCGT ATGCTGCTÁC CGAGGCCGCC AACGCGGCCG 300 CGGCCGGCTA GAGGAGTCAC TGCGATGGAT TTTGGGGCGT TGCCGCCGGA GGTCAATTCG 360 GTGCGGATGT ATGCCGGTCC TGGCTCGGCA CCAATGGTCG CTGCGGCGTC GGCCTGGAAC 420 GGGTTGGCCG CGGAGCTGAG TTCGGCGGCC ACCGGTTATG AGACGGTGAT CACTCAGCTC 480 AGCAGTGAGG GGTGGCTAGG TCCGGCGTCA GCGGCGATGG CCGAGGCAGT TGCGCCGTAT 540 GTGGCGTGGA TGAGTGCCGC TGCGGCGCAA GCCGAGCAGG CGGCCACACA GGCCAGGGCC '600 GCCGCGGCCG CTTTTGAGGC GGCGTTTGCC GCGACGGTGC CTCCGCCGTT GATCGCGGCC 660

WO 98/53075

PCT/US98/10407 ·· ·· • « · ·

Λ · · * • · * · • · · · ·» ·*

AACCGGGCTT CGTTGATGCA GCTGATCTCG ACGAATGTCT TTGGTCAGAA CACCTCGGCG 720

ATCGCGGCCG CCGAAGCTCA GTACGGCGAG ATGTGGGCCC AAGACTCCGC GGCGATGTAT 780

GCCTACGCGG GCAGTTCGGC GAGCG.CCTCG GCGGTCACGC CGTTTAGCAC GCCGCCGCAG 840

ATTGCCAACC CGACCGCTCA GGGTACGCAG GCCGCGGCCG TGGCCACCGC CGCCGGTACC 900

GCCCAGTCGA CGCTGACGGA GATGATCACC GGGCTACCCA ACGCGCTGCA AAGCCTCACC 960

TCACNTCTGT TGCAGTCGTC TAACGGTCCG CTGTCGTGGC TGTGGCAGAT CTTGTTCGGC 1020

ACGCCCAATT TCCCCACCTC AATTTCGGCA CTGCTGACCG ACCTGCAGCC CTACGCGAGC 1080

TTNTTNTATA ACACCGAGGG CCTGCCGTAC TTCAGCATCG GCATGGGCAA CAACTTCATT 1140

CAGTCGGCCA AGACCCTGGG ATTGATCGGC TAGGCGGCAC CGGCTGCGGT CGCGGNTGCT 1200

GGGGATNCCG CCAAGGGCTT GCCTCGTGCC G 1231

Sekvence Č. 105 (i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 2041 párů bází (B) Typ: nukleová kyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: cDNA (xi) Sekvence č. 105

CGGCACGAGC	tcgtgccgat	CAGTGCCATT	GACGGCTTGT	ACGACCTTCT	GGGGATTGGA	60
ATACCCAACC	aagggggtat	CCTTTACTCC	TCACTAGAGT	ACTTCGAAAA	AGCCCTGGAG	120
GAGCTGGCAG	CAGCGTTTCC	GGGTGATGGC	TGGTTAGGTT	CGGCCGCGGA	CAAATACGCC	180
GGCAAAAACC	GCAACCACGT	gaattttttc	CAGGAACTGG	CAGACCTCGA	TCGTCAGCTC	24 0
ATCAGCCTGA	TCCACGACCA	GGCCAACGCG	GTCCAGACGA	CCCGCGACAT	CCTGGAGGGC	300
GCCAAGAAAG	GTCTCGAGTT	CGTGCGCCCG	GTGGCTGTGG	ACGTGACCTA	CATCCCGGTC	360
GTCGGGCACG	CCCTATCGGC	CGCCTTCCAN	GCGCCGTTTT	GCGCGGGCGC	GATGGCCGTA	420
GTGGGCGGCG	CGCTTGCCTA	CTTGGTCGTG	AAAACGCTGA	TCAACGCGAC	TCAACTCCTC	480
aaattgcttg	CCAAATTGGC	GGAGTTGGTC	GCGGCCGCCA	TTGCGGACAT	CATTTCGGAT	540
GTGGCGGACA	TCATCAAGGG	CATCCTCGGA	GAAGTGTGGG	AGTTCATCAC	AAACGCGCTC	600
AACGGCCTGA	AAGAGCTTTG	GGACAAGCTC	ACGGGGTGGG	TGACCGGACT	GTTCTCTCGA	66 0
GGGTGGTCGA	ACCTGGAGTC	CTTCTTTGCG	GGCGTCCCCG	GCTTGACCGG	CGCGACCAGC	720
GGCTTGTCGC	AAGTGACTGG	CTTGTTCGGT	GCGGCCGGTC	TGTCCGCATC	GTCGGGCTTG	780
GCTCACGCGG	ATAGCCTGGC	GAGCTCAGCC	AGCTTGCCCG	CCCTGGCCGG	CATTGGGGGC	840
GGGTCCGGTT	TTGGGGGCTT	GCCGAGCCTG	GCTCAGGTCC	ATGCCGCCTC	AACTCGGCAG	900
GCGCTACGGC	CCCGAGCTGA	TGGCCCGGTC	GGCGCCGCTG	CCGAGCAGGT	CGGCGGGCAG	960
TCGCAGCTGG	TCTCCGCGCA	GGGTTCCCAA	GGTATGGGCG	GACCCGTAGG	CATGGGCGGC	1020
ATGCACCCCT	CTTCGGGGGC	GTCGAAAGGG	ACGACGACGA	AGAAGTACTC	GGAAGGCGCG	1080
GCGGCGGGCA	CTGAAGACGC	CGAGCGCGCG	CCAGTCGAAG	CTGACGCGGG	CGGTGGGCAA	1140
AAGGTGCTGG	TACGAAACGT	CGTCTAACGG	CATGGCGAGC	CAAATCCATT	GCTAGCCAGC	1200
GCCTAACAAC	GCGCAATGCT	AAACGGAAGG	GACACGATCA	ATGACGGAAA	ACTTGACCGT	1260
CCAGCCCGAG	CGTCTCGGTG	TACTGGCGTC	GCACCATGAC	AACGGGGCGG	TCGATGCNTC	1320
CTCGGGCGTC	GAAGCTGCCG	CTGGCCTAGG	CGAATCTGTG	GCGATCACTC	ACGGTCCGTA	1380
CTGCTCACAG	TTCAACGACA	CGTTAAATGT	GTACTTGACT	GCCCACAATG	CCCTGGGCTC	1440
GTCCTTGCAT	ACGGCCGGTG	TCGATCTCGC	CAAAAGTCTT	CGAATTGCGG	CGAAGATATA	1500
TAGCGAGGCC	GACGAAGCGT	GGCGCAAGGC	TATCGACGGG	TTGTTTACCT	GACCACGTTT	1560
GCTGCCCGCA	GTGCAGGCCA	CGACGTAGCG	CAGGTCGTGT	CCCTCGTAGG	CGTGGATGCG	1620
ACCGGCCAGC	ACCAGCACCC	GGTGCGCACC	GATGGGCACG	GACAGTAGCT	CGCCCGCATG	1680
CCCGGCTGCG	GTTGGCGGCA	CAAACCCGGG	CAGTTCGGCC	TGCGGCAGCA	CGGTGGTNGG	1740
GGAGCCCAAC	GCCGCAACGG	CCGGTAACCA	TCCCGACCCG	AGCACGACCG	AGACGTCATG	1800
TTCGCCGATC	CCGGTGCGGT	CAGCGATGAC	CTGCGCCGCC	GGCCGGGCCA	GTTTGTCGGG	1^60
ATCGGGGCGC	GGGTCAGCČA	ČÁCŤGGGCGA	GCTTAÁČTGA	GCCGCTČGCČ	GGGGAGCGGG	1920

WO 98/53075 »· · • · • · • · • · • ·

PCT/US98/10407

TGCTNGTCGA TGAGATACTG CGAGCATGCC AGCAGCCAGC GCATCCGACC GCGTCGAGGA 1980 ATTGGTGCGG CGCCGTGGTG GCGAGCTGGT CGAGCTGTCC CATGCCATCC ACCTCGTGCC 2040 γΛ v 2041

Sekvence c. 106 (i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 1202 párů bází (B) Typ: nukleová kyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: cDNA (xi) Sekvence Č. 106

GAGCTCACCG	CTATCAACCA	ATACTTTCTG	CACTCCAAGA	TGCAGGACAA	CTGGGGTTTT	60
ACCGAGCTGG	CGGCCCACAC	CCGCGCGGAG	TCGTTCGACG	AAATGCGGCA	CGCCGAGGAA	120
ATCACCGATC	GCATCTTGTT	GCTGGATGGT	TTGCCGAACT	ACCAGCGCAT	CGGTTCGTTG	180
CGTATCGGCC	AGACGCTCCG	CGAGCAATTT	GAGGCCGATC	TGGCGATCGA	ATACGACGTG	240
TTGAATCGTC	TCAAGCCAGG	AATCGTCATG	TGCCGGGAGA	AACAGGACAC	CACCAGCGCC	300
GTACTGCTGG	AGAAAATCGT	TGCCGACGAG	GAAGAACACA	TCGACTACTT	GGAAACGCAG	360
CTGGAGCTGA	TGGACAAGCT	AGGAGAGGAG	CTTTACTCGG	CGCAGTGCGT	CTCTCGCCCA	420
CCGACCTGAT	GCCCGCTTGA	GGATTCTCCG	ATACCACTCC	GGGCGCCGCT	GACAAGCTCT	480
AGCATCGACT	CGAACAGCGA	TGGGAGGGCG	GATATGGCGG	GCCCCACAGC	ACCGACCACT	540
GCCCCCACCG	CAATCCGAGC	CGGTGGCCCG	CTGCTCAGTC	CGGTGCGACG	CAA.CATTATT	600
TTCACCGCAC	TTGTGTTCGG	GGTGCTGGTC	GCTGCGACCG	GCCAAACCAT	CGTTGTGCCC	660
GCATTGCCGA	CGATCGTCGC	CGAGCTGGGC	AGCACCGTTG	ACCAGTCGTG	GGCGGTCACC	720
AGCTATCTGC	TGGGGGGAAC	ACTSKYGKKK	KTGKKGKSKS	KSRMRMKCTC	GGTGATCTGC	780
TCGGCCGCAA	CAGGGTGCTG	CTAGGCTCCG	TCGTGGTCTT	CGTCGTTGGC	TCTGTGCTGT	840
GCGGGTTATC	GCAGACGATG	ACCATGCTGG	CGATCTCTCG	CGCACTGCAG	GGCGTCGGTG	900
CCGGTGCGAT	TTCCGTCACC	GCCTACGCGC	TGGCCGCTGA	GGTGGTCCCA	CTGCGGGACC	960
GTGGCCGCTA	CCAGGGCGTC	TTANGTGCGG	TGTTCGGTGT	CAACACGGTC	ACCGGTCCGC	102 0
TGCTGGGGGG	CTGGCTCACC	GACTATCTGA	GCTGGCGGTG	GGCGTTCCGA	CCACCAGCCC	1080
CATCACCGAC	CCGATCGCGG	TCATCGCGGC	GAACACCGCC	CTCGCGGCGT	TGCGGGCAGG	1140
TCCCTTGGGG	AACGTGGTCC	CACAGCGCCA	GAACGGTCGG	AAATGCGATG	GCCGACCCAC	1200
AC						1202

Sekvence č. 107 (i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 496 párů bází (B) Typ: nukleová kyselina (C) Řetězec, jednoduchý (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: cDNA (xi) Sekvence č. 107

GGCGGCGGCA GTTGGCCAGC AGTTNGGGCG GGGGAGCCGG TTCGGNGACC AAGAAATCGG 60

CCTGGGCAAG CAGCCGGGAC CGCGNACCGT GATCAGTTNG GATCGCCGGG ACCGCCGCCG 120

ACCAANGCCA TTCCGCCGNT GAGGAAGTCG GAANTNTGCG CAGTGATGAC GCCCTGCTGC 180

AACGCNTCCC GGATTGCCGA GCGQATCGCC.GCCGAACGGC GGTGCTCACC ACCGGCGAGC 240 accčctáčngačaggčccgcaťaGctgaat gaCgččgggť NACCGCCGŤC CCNTČCÁCCG '300 • · • ·» • · ·« «· • · ··» · e « *« *· • · * • ♦ ·· ·» »·*· ·· • « « · ·> · • · ··

WO ¢8/53075 PCT/US98/J0407 čr

NGANATCGGC CCGGANGCAA AAGATCCGTC GGCGCTCCGC CTCGGCGACG ACAGCCACGT 36

TCACCCGCGC GTTATCGGTG GCCGCGATCG CATACCAGGC GCCGTCAAGG TNGCCGTYGC 42

GGTAGTCACG CACCGACAAG GTGATYTGGT CCATCGCCTN GACGGCGGGG GTGACGCTGG 4£

GGGCGATCAM GTGCAC 4 c

Sekvence č. 108 (i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 849 párů bází (B) Typ: nukleová kyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: cDNA (xi) Sekvence Č. 108

TGGATTCCGA	TAGCGGTTTC	GGCCCCTCGA	CGGGCGACCA	CGGCGCGCAG	GCCTCCGAAC	60
GGGGGGCCGG	GACGCTGGGA	TTCGCCGGGA	CCGCAACCAA	AGAACGCCGG	GTCCGGGCGG	120
TCGGGCTGAC	CGCACTGGCC	GGTGATGAGT	TCGGCAACGG	CCCCCGGATG	CCGATGGTGC	180
CGGGGACCTG	GGAGCAGGGC	AGCAACGAGC	CCGAGGCGCC	CGACGGATCG	GGGAGAGGGG	240
GAGGCGACGG	CTTACCGCAC	GACAGCAAGT	AACCGAATTC	CGAATCACGT	GGACCCGTAC	300
GGGTCGAAAG	GAGAGATGTT	ATGAGCCTTT	TGGATGCTCA	TATCCCACAG	TTGGTGGCCT	360
CCCAGTCGGC	GTTTGCCGCC.	AAGGCGGGGC	TGATGCGGCA	CACGATCGGT	CAGGCCGAGC	420
AGGCGGCGAT	GTCGGCTCAG	GCGTTTCACC	AGGGGGAGTC	GTCGGCGGCG	TTTCAGGCCG	480
CCCATGCCCG	GTTTGTGGCG	GCGGCCGCCA	AAGTCAACAC	CTTGTTGGAT	GTCGCGCAGG	540
CGAATCTGGG	TGAGGCCGCC	GGTACCTATG	TGGCCGCCGA	TGCTGCGGCC	GCGTCGACCT	600
ATACCGGGTT	CTGATCGAAC	CCTGCTGACC	GAGAGGACTT	GTGA7GTCGC	AAATCATGTA	660
CAACTACCCC	GCGATGTTGG	GTCACGCCGG	GGATATGGCC	GGATATGCCG	GCACGCTGCA	720
GAGCTTGGGT	GCCGAGATCG	CCGTGGAGCA	GGCCGCGTTG	CAGAGTGCGT	GGCAGGGCGA	780
TACGGGGATC	ACGTATCAGG	CGTGGCAGGC	ACANTGGTAA	CCANGCCANG	GAAGATTTGG	840
TGCGGGCCT						849

' Sekvence č. 109 (i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 97 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: protein (xi) Sekvence č. 109

Met 1

Ser

Leu

Leu

Asp 5

Ala

His

Ile

Pro

Gin 10

Leu

Val

Ala

Ser

Gin 15

Ser

Ala

Phe

Ala

Ala

Lys

Ala

Gly

Leu

Met

Arg

His

Thr

Ile

Gly

Gin

Ala

20

2 5

30

Glu

Gin

Ala

Ala

Met

Ser

Ala

Gin

Ala

Phe

His

Gin

Gly

Glu

Ser

Ser

35

40

45

Ala

Ala

Phe

Gin

Ala

Ala

His

Ala

Arg

Phe

Val

Ala

Ala

Ala

Ala

Lys

50

55

60

Val

Asn

Thr

Leu

Leu

Asp

Val

Ala

Gin

Ala

Asn

Leu

.Gly

Glu

Ala

Ala

65

70

75

80

« · · · • · · · • · ··· · • · · ·· ·· • · * · • · · • ♦ · • · o ·· ·«·* ·· «*· « · * * • · · * • · · * · • · · · *· ··

WO 98/53075 PCT/US98/10407 &

Gly Thr Tyr Val Ala Ala Asp Ala Ala Ala Ala Ser Thr Tyr Thr Gly 85 90 95

Phe

Sekvence č. 110 (i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 15 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: peptid (xi) Sekvence č. 110

Met Ser Leu Leu Asp Ala His Ile Pro Gin Leu Val Ala Ser Gin ¹ 5 io 15

Sekvence č. 111 (i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 15 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: peptid (xi) Sekvence c. 111

Ala His Ile Pro Gin Leu Val Ala Ser Gin Ser Ala Phe Ala Ala 15 10 15

Sekvence č. 112 (i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 15 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina ((') Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: peptid (xi) Sekvence č. 112

Leu Val Ala Ser Gin Ser Ala Phe Ala Ala Lys Ala Gly Leu Met 1 5 10 15

Sekvence č. 113 (i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 15 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina ...

WO 98/53075

PCT/US98/10407 (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly , peptid (xi) Sekvence č. 113

Ser Ala Phe Ala Ala Lys Ala Gly Leu Met Arg His Thr Ile Gly 15 10 15

Sekvence č. 114 (i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 15 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: peptid (xi) Sekvence č. 114

Lys Ala Gly Leu Met Arg His Thr Ile Gly Gin Ala Glu Gin Ala 15 10 15

Sekvence č. 115 (i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 15 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: peptid (xi) Sekvence č. 115

Arg His Thr Ile Gly Gin Ala Glu Gin Ala Ala Met Ser Ala Gin 15 10 15

Sekvence č. 116 (i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 15 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: peptid (xi) Sekvence č. 116

Gin Ala Glu Gin Ala Ala Met Ser Ala Gin Ala Phe His Gin Gly í · - -5 - · ' 10’ ' · 15 • · · · · · · · · · · • · 4 4 4 4 4 · * 4 4'--4 44 4 · · 4

4* ·· · 4 4 · ί'Φ · ·

WO 98/53075 PCT/US98/10407 &

Sekvence č. 117 (i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 15 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: peptid (xi) Sekvence č. 117

Ala Met Ser Ala Gin Ala Phe His Gin Gly Glu Ser Ser Ala Ala 15 10 15

Sekvence č. 118 (i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 15 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: peptid (xi) Sekvence č. 118

Ala Phe His Gin Gly Glu Ser Ser Ala Ala Phe Gin Ala Ala His 15 10 15

Sekvence č. 119 (i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 15 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly peptid (xi) Sekvence č. 120

Glu Ser Ser Ala Ala Phe Gin Ala Ala His Ala Arg Phe Val Ala 15 10 15

Sekvenceč 120 (i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka. 15 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec, jednoduchý (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly:.peptid. . ......

WO 98/53075

4 ·· ♦·

PCT/US98/10407 (xi) Sekvence č. 120

Phe Gin Ala Ala His Ala Arg Phe Val Ala Ala Ala Ala Lys Val 15 10 is

Sekvence Č. 121 (i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 15 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: peptid (xi) Sekvence č. 121

Ala Arg Phe Val Ala Ala Ala Ala Lys Val Asn Thr Leu Leu Asp 15 io 15

Sekvence č. 122 (i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 15 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly, peptid (xi) Sekvence č. 122

Ala Ala Ala Lys Val Asn Thr Leu Leu Asp Val Ala Gin Ala Asn 15 10 15

Sekvence č. 123 (i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 15 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: peptid (xi) Sekvence č. 123

Asn Thr Leu Leu Asp Val Ala Gin Ala Asn Leu Gly Glu Ala Ala 1 S 10 15

Sekvence č. 124 (i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 18 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina « * • · • 9 ·

WO 98/53075 PCT/US98/10407 (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie, lineární (ii) Typ molekuly: peptid (xi) Sekvence Č. 124

Val Ala Gin Ala Asn Leu Gly Glu Ala Ala Gly Thr Tyr Val Ala Ala 15 10 15

Asp Ala

Sekvence č. 125 (i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 1752 párů bází (B) Typ: nukleová kyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: cDNA (xi) Sekvence č. 125

CGGCACGAGA	ATGTCGCCTG	TGCCTCGATA	GCCACTTGCG	TGTGGTCGCG	CTGCCAGCGG	60
GTCAGCCAGG	TCGCCTGGTC	CAGGCCATCG	GGCCGGCGCA	GGAGCGCGAT	GTTGGCCAGA	120
CCCGGTGTAC	GAGAACCGGA	CTCGACNAAG	TGTCGGCGCT	GACGGCGGCT	CAGTTCGCGG	180
CACACGCCCA	GATCTATCAG	GCCGTCAGCG	CCCAGGCCGC	GGCGATTCAC	GAGATGTTCG	240
TCAACACTCT	ACAGATNAMC	TCAGGGTCGT	ATGCTGCTAC	CGAGGCCGCC	AACGCGGCCG	300
CGGCCGGCTA	GAGGAGTCAC	TGCGATGGAT	TTTGGGGCGT	TGCCGCCGGA	GGTCAATTCG	360
GTGCGGATGT	ATGCCGGTCC	TGGCTCGGCA	CCAATGGTCG	CTGCGGCGTC	GGCCTGGAAC	420
GGGTTGGCCG	CGGAGCTGAG	TTCGGCGGCC	ACCGGTTATG	AGACGGTGAT	CACTCAGCTC	480
AGCAGTGAGG	C-GTGGGTAGG	TCCGGCGTCA	GCGGCGATGG	CCGAGGCAGT	TGCGCCGTAT	54 0
GTGGCGTGGA	TGAGTGCCGC	TGCGGCGCAA	GCCGAGCAGG	CGGCCACACA	GGCCAGGGCC	600
GCCGCGGCCG	CTTTTGAGGC	GGCGTTTGCC	GCGACGGTGC	CTCCGCCGTT	GATCGCGGCC	660
AACCGGGCTT	CGTTGATGCA	GCTGATCTCG	ACGAATGTCT	TTGGTCAGAA	CACCTCGGCG	720
ATCGCGGCCG	CCGAAGCTCA	GTACGGCGAG	ATGTGGGCCC	AAGACTCCGC	GGCGATGTAT	780
GGCTACGCGG	GCAGTTCGGC	GAGCGCCTCG	GCGGTCACGC	CGTTTAGCAC	GCCGCCGCAG	840
ATTGCCAACC	CGACCGCTCA	GGGTACGCAG	GCCGCGGCCG	TGGCCACCGC	CGCCGGTACC	900
GCCCAGTCGA	CGCTGACGGA	GATGATCACC	GGGCTACCCA	ACGCGCTGCA	AAGCCTCACC	960
TCACNTCTGT	TGCAGTCGTC	TAACGGTCCG	CTGTCGTGGC	TGTGGCAGAT	CTTGTTCGGC	1020
ACGCCCAATT	TCCCCACCTC	AATTTCGGCA	CTGCTGACCG	ACCTGCAGCC	CTACGCGAGC	1080
TTNTTNTATA	ACACCGAGGG	CCTGCGGTAC	TTCAGCATCG	GCATGGGCAA	CAACTTCATT	1140
CAGTCGGCCA	AGACCCTGGG	ATTGATCGGC	TAGGCGGCAC	CGGCTGCGGT	CGCGGCTGCT	1200
GGGGATGCCG	CCAAGGGCTT	GCCTGGACTG	GGCGGGATGC	TCGGTGGCGG	GCCGGTGGCG	1260
GCGGGTCTGG	GCAATGCGGC	TTCGGTTGGC	AAGCTGTCGG	TGCCGCCGGT	GTGGANTGGA	1320
CCGTTGCCCG	GGTCGGTGAC	TCCGGGGGCT	GCTCCGCTAC	CGGTGAGTAC	GGTCAGTGCC	1380
GCCCCGGAGG	CGGCGCCCGG	AAGCCTGTTG	GGCGGCCTGC	CGCTANCTGG	TGCGGGCGGG	1440
GCCGGCGCGG	GTCCACGCTA	CGGATTCCRT	CCCACCGTCA	TGGCTCGCCC	AGCCTTCGMC	1500
GGGATAGTCG	CTGCCGCAAC	GTATTAACGC	GGCGGCCTCG	GCTGGTGTGG	TCCGCTGCGG	1560
GTGGCAATTG	GTCNGCGCCG	AAATCTCSGT	GGGTTATTTR	CGGTGGGATT	TTTTCCCGAA	1620
GCCGGGTTCA	RCACCGGATT	TCCTAACGGT	CCCGCKACTC	TCGTGCCGAA	TTCSGCACTA	1680
AGTGACGTCC	GGCGGAAACC	CGTTGGGTNT	GAAAGCTTCA	GAAAGGCCCG	CTCCCAGGGG	1740
TTCGGCAAAC	GG					1752

• · · · • · · · • · · * « · · · · • · · »

WO 98/53075 PCT/US98/10407

Ή

Sekvence č. 126 (i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 400 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: protein (xi) Sekvence Č. 126

Met 1

Asp

Phe

Gly

Ala 5

Leu

Pro

Pro

Glu

Val 10

Asn

Ser

Val

Arg

Met 15

Tyr

Ala

Gly

Pro

Gly

Ser

Ala

Pro

Met

Val

Ala

Ala

Ala

Ser

Ala

Trp

Asn

20

25

30

Gly

Leu

Ala

Ala

Glu

Leu

Ser

Ser

Ala

Ala

Thr

Gly

Tyr

Glu

Thr

Val

35

40

45

lle

Thr

Gin

Leu

Ser

Ser

Glu

Gly

Trp

Leu

Gly

Pro

Ala

Ser

Ala

Ala

50

55

60

Met

Ala

Glu

Ala

Val

Ala

Pro

Tyr

Val

Ala

Trp

Met

Ser

Ala

Ala

Ala

65

70

75

80

Ala

Gin

Ala

Glu

Gin

Ala

Ala

Thr

Gin

Ala

Arg

Ala

Ala

Ala

Ala

Ala

85

90

95

Phe

Glu

Ala

Ala

Phe

Ala

Ala

Thr

Val

Pro

Pro

Pro

Leu

lle

Ala

Ala

100

105

110

Asn

Arg

Ala

Ser

Leu

Met

Gin

Leu

lle

Ser

Thr

Asn

Val

Phe

Gly

Gin

115

120

125

Asn

Thr

Ser

Ala

lle

Ala

Ala

Ala

Glu

Ala

Gin

Tyr

Gly

Glu

Met

Trp

130

135

140

Ala

Gin

Asp

Ser

Ala

Ala

Met

Tyr

1 a

Tyr

Ala

Gly

Ser

Ser

Ala

Ser

145

150

155

160

Ala

Ser

Ala

Val

Thr

Pro

Phe

Ser

Thr

Pro

Pro

Gin

lle

Ala

Asn

Pro

165

170

175

Thr

Ala

Gin

Gly

Thr

Gin

Ala

Ala

Ala

Val

Ala

Thr

Ala

Ala

Gly

Thr

160

185

190

Ala

Gin

Ser

Thr

Leu

Thr

Glu

Met

lle

Thr

Gly

Leu

Pro

Asn

Ala

Leu

195

200

205

Gin

Ser

Leu

Thr

Ser

Xaa

Leu

Leu

Gin

Ser

Ser

Asn

Gly

Pro

Leu

Ser

210

215

220

Trp

Leu

Trp

Gin

lle

Leu

Phe

Gly

Thr

Pro

Asn

Phe

Pro

Thr

Ser

lle

225

230

235

240

Ser

Ala

Leu

Leu

Thr

Asp

Leu

Gin

Pro

Tyr

Ala

Ser

Xaa

Xaa

Tyr

Asn

245

250

255

Thr

Glu

Gly

Leu

Pro

Tyr

Phe

Ser

lle

Gly

Met

Gly

Asn

Asn

Phe

lle

260

265

270

Gin

Ser

Ala

Lys

Thr

Leu

Gly

Leu

lle

Gly

Ser

Ala

Ala

Pro

Ala

Ala

275

280

285

Val

Ala

Ala

Ala

Gly

Asp

Ala

Ala

Lys

Gly

Leu

Pro

Gly

Leu

Gly

Gly

290

295

300

Met

Leu

Gly

Gly

Gly

Pro

Val

Ala

Ala

Gly

Leu

Gly

Asn

Ala

Ala

Ser

305

310

315

320

Val

Gly

Lys

Leu

Ser

Val

Pro

Pro

Val

Trp

Xaa

Gly

Pro

Leu

Pro

Gly

· _ -

325

'330

335

Ser

Val

ThX

Pro

Gly

Ala

Ala

• Pro

Leu

PZO

Val

Ser

.Thr

Val

Ser

Ala

.· «· ·· ·· ·· ’·. . .. . · ·♦ : : :: .

: i .: ·· _:

---i--,.» _ ... .·WO 98/53075

PCT/US98/10407

340	345	350
Ala Pro Glu Ala Ala Pro Gly	Ser Leu Leu Gly Gly	Leu Pro Leu Xaa
355	360	365
Gly Ala Gly Gly Ala Gly Ala	Gly Pro Arg Tyr Gly	Phe Xaa Pro Thr
370 375	380
Val Met Ala Arg Pro Pro Phe	Xaa Gly Ile Val Ala	Ala Ala Thr Tyr
385 390	395	400

Sekvence Č. 127 (i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 475 párů bázi (B) Typ: nukleová kyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: cDNA (xi) Sekvence č. 127

GGCACGAGCA CCAGTTGACC CGCGAAGAAC CTGACCGCGC CACCCAGCGC CGCCCGCATC ACCGGCCCCG TCCCACGAAC CTTTTCGGTA AACGAGCCAC TCCAGCGGAG ATCGGTACCG CCCGACGCAT TTGGTGTAAG GACCACCTCG CCGAAGTAGT CCTGGACGGG TGTCCTCGCG CCAACCAGCT TGTAGACGTG GCGACGGTCC TGCTCATACT CGACGGTCTC TTCCTGCACG AACACCGGCC ACATGCCTAG TTTGCGGATG GCCCCGATGC CGCCGGGCGC GGGATCACCG CGTCGCGCCC AACTCGATTG AGCAACGATG GGCTTGGCCC AGGTCGCCCA GTTGCCACCG TCTGTCACGA GCCGAAACAA GGTTGCAGCC GGCGCGCTGC TGGTCTTGGT GACCTCGAAC GAAAATTTCC GACCCGACAT GCGCGACTCC CGAAACGACA ACTGAAGCTC GTGC

Sekvence č. 128 (i) Charakteristika sekvence.

(A) Délka. 1431 párů bází (B) Typ. nukleová kyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: cDNA (xi) Sekvence č. 128

CTGCGCGCCG GAAAAAANTA TTACTGGCAG GACCGGCAGA ATGCATGGTG ATATTCCGGT GATGAGGCCG CCGAGGAACC GACTAGTGCG AGGGTCAACA CATCGGTTAT TCGTTGCCGT TTAGGTCTTG GATCTGCCGG GACGGCAACG AGTTGGCAGG ACCGCTCACG CGAGCGCTGT TGACAGAGTC GGTTCACGTC GAACTCGCCA CCCGTCAGAT GCGAATGATA GCCACATCGG CCACACCATC GACGGCGTCG AAGTCGCCGT CGTGGGTCAC GACCGGCACC CCTTGCGACG TGGCAACGGC AGCGGCCCTC ACCGGACGGG ACCGAGATCG TCGGTGGTGT CGCCAGTGAG CGTTGCGAGG TCGCGGGTGC AATCCCGCAT CTGCTTGCGT ATGCCGAAGC CGCCGCAGCA GCTCGTCTCG ACTCAACCAT CGGCGCCGTG CGGGCTGCCT GCGGTCAGCA GCGCAACGGG TTTGCCGTTG GCAGTGATGG TGATGTCTTC GCCGGCCTGC ACGCGCCGTA GCAGCCCGGC GGTGTTGTTG CGCAGTTCGC GAGACGCGAC TTCAGCAGGC ATGCTGCGGG GATCGGCTTG CGCTGGGCGC GGTGTCACCG TCATGCGCTT GGGATATCAC GTGATCTATC GGCACGAAGC CGCCGGATGA GCGAGGCAAA CCGCCTACAC GGGCTGCCTC GCCTTGACCG CGCCGAACGT , TACTGTGCCG GGGGCATCAG CACCGTATCG ATCATGTACA CCGTCGCGTG GGCGGTGTGA CTČCGCCACA ťáccáaacgg gcgttgttga ccatgagtčg tcgcgggcgc ctatcaccgt

120

180

240

300

360

420

474

120

180

240

300

360

420

480

S40

600

660

720

78Q

840

WO 98/53075

9 »1 » « · » · ·

PCT/US98/10407

CAGGTCGGCA CCTTGCAGGT CTGATGGGTG CCGTCGATCC TGCTCGGACT CGCCTGGCCG GCTATCACGT GGTAGGTCAG GATGCTGCTG AGCAGCTTGG CGTCAGTCTT GAGTTGATCG ATAGTGGCCG CCGGCAGCTT GTCGAATGCG GCGTTGGTGG GGGCGAAAAC GGTGTACTCG CCGCCGTTGA GGGTGTCGAC CAGATTCACA TCCGGGTTCA GCTTGCCCGA CAGAGCCGAG GTCAGGGTAC TGAGCATCGG GTTGTTGGAA GCCGCGGTAG CGACCGGGTC TTGCGCCATT CCGGCCACCG ATCCGGGACC GGTGGGATTT TGCGCCGCGT ATTGCGCGCA CCCACGACCA ATCAGGTCCG CTGCGGTCAG CCATTGCCGC CGTGGTAACG GGCGCCGCCG GGCTGGTCGC CGGTTTCGGG CTGGTGTCTT GCGACACGGG TTTGGTGCTC GAACAACCCG CTAAGAACGC AATCGCGATG GCTGCGAGGC TCGCTGCTGC GGCCGGTTTG GCCTGAACGT TGATCATCGC TTCGATTCCT TTGCTTCTGC GGCGGCGTTG AACGCCGTCC TCCTGGGTGG A (2) Sekvence Č. 129 (i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 279 párů bází (B) Typ: nukleová kyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: cDNA (xi) Sekvence č. 129

GCACGAGAGT CGTATCTTTG CACCCAGCGC CCGTAGGAAA CCGCTGGCCT GGCTAACTCA GATGCGGGCG GCCGTCGATT CGAGAGGTAA CCGATCGCCC GCCGACAATG GGTTACCCAC CGAGACTGAT TGCCGCGCAG CCGCCTTCGA CGTGTAAGCG CCGGTTCGTG CATGCCCGGA ACGGCTGCAC TCACGGACCT TCTACGTAGT ACGTGACGGA CTTTTACGCA TTATCGCTGA CGATCTTTGC CTCCCAGGAC TCCAGAATCT ACTCGTGCC (2) Sekvence č. 130 (i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 1470 párů bází (B) Typ: nukleová kyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly. cDNA (xi) Sekvence č. 130

ACCGCCACCC GCAGCCCGGA ATCACCGTCG GTAACCTGCG AATACAATTT CTTCATCGAC GACTTCGCGA ACAGCGAACC CGAGCCCACC GCCTGATAGC CTTCTTCCTC GATGTTCCAA CCGCCGGCGG CGTCGAACGA AACGATACGA CCCGCGCTCT GCGGGTCAGA CGCATGAATG TCGTAGCCCG CCAGCAACGG CAACGCCAGC AGACCCTGCA TCGCGGCCGC CAGATTGCCA CGCACCATAA TCGCCAGCCG GTTGATTTTG CCGGCAAACG TCAGCGGCAC ACCCTCGAGC TTCTCGTAGT GCTCAAGTTC CACGGCATAC AGCCGGGCAA ACTCAACCGC GACCGCAGCC GTGCCAGCGA TGCCGGTAGC GGTGTAGTCA TCGGTGATAT ACACCTTGCG CACATCACGC CCAGAAATCA TGTTGCCCTG CGTCGAACGC CGGTCACCCG CCATGACAAC ACCGCCGGGG TATTTCAGCG CGACAATGGT GGTGCCGTGC GGCAGTTGCG CATCGCCGCC TGCGAGTGGC GCACCGCCGC TGATGCTTGC CGGCAGCAAC TCCGGCGCCT GGCGGCGCAG GAAGTCAAGT GAAAGAAGAT AGGTCTACAG CGGGTGTTCC AGAGAGTGAA TTAATGGACA GGCGATCGGG CAACGGCCAG GTCACTGTCC GCCCTTTTGG ACGTATGCGC GGACGAAGTC CTCGGCGTTC TCCTCGAGGA CGTCGTCGAT TTCGTCGAGC AGATCGTCGG TCTCCTCGGT CAGCTTTTCG CGACGCTCCT GGCCCGCGGC GGTGCTGCCG GCGATGTCGT CATCATCGCC GCCGCCACCG

900

960

1020 1080 1140 1200 1260 132 0 1380 1431

120

180

240

279

120

160

240

300

360

420

480

540

600

660

720

780

840 • ·

WO 98/53075

PCT/US98/10407

CCACGCTTGG TCTGCTCTTG CGCCATCGCC GCCTCCTGCT TCCTCATGGC CTTTCAAAAG GCCGCGGGTG CGCGTCACAC GCCCGCTGTC TTTCTCTCAC CTACCGGTCA ACACCAACGT TTCCCGGCCT AACCAGGCTT AGCGAGGCTC AGCGGTCAGT TGCTCTACCA gctccacggc actgtccacc gaatccagca acgcaccaac atgcgcctta ctaccccgca acggctccag cgtcgggatg cgaaccagcg agtcgccgcc aggtcgaaga tcaccgagtc ccagctagcc gcggcgatat cagccccgaa ccggcgcagg catttcgccg cggaaatacg cgcgggtgtc ggtcggcggt tctccaccgc actcagcacc tggtgtttcg gtgactaaac gctttatcga GCCGCGCGCG ACCAGCCGGT TGTACAGGCC CTTGTCCAGC CGGACATCGG AGTACTGCAG GTTGACGAGG TGCAGCCGGG GCGCCGACCA GCTCAGGTTC TCCCGCTGCC GGAAACCGTC GAGCAGCCGC AGTTTGGCCG GCCAGTCCAG CAGCTCCGCG CAATCCATCG GGTCACGCTC GAGCTGATCC AGCACGTGTG CCCAGGTTTC

Sekvence č. 131

900

960

1020

1080

1140

1200

1260

1320

1380

1440

1470 (i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 1059 párů bází (B) Typ: nukleová kyselina $ (C) Řetězec, jednoduchý (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: cDNA (xi) Sekvence <5.131

ATTCCCATCG	CTCCGGCACC	TATCACCAGG	TAGTCGGTTT	CGATGGTTTT	CGCCGGCCCT	60
TGCGTTGGCC	TGGGCCACGG	GTCGTTCATG	GGCCCTCCTG	TGCGGATTGG	AATTTGTGAC	120
AACGAAATCG	GGCGATCGGT	GAGCAATCGT	CGCCGATGCA	AGACACGCTT	TCGCTGCCGC	180
GGCGTCAGGT	GGAGTTTAGG	CCAGCGTAAC	AACGTAGACC	GGCCACTGAC	CAAACCCCAA	24 0
ACCCACAAAC	CCTGGACGCA	TGCGGGTCTC	GGGCGTCAAA	TTCCGGGTAG	ATATCGTATA	300
CCGATATCGG	ATGCCGTAGC	CTTATCGAGG	CATGAGACGC	CCGCTAGACC	CACGCGATAT	360
TCCAGATGAG	CTGCGGCGAC	GGCTGGGC-CT	CTTGGATGCG	GTGGTGATCG	GGCTTGGGTC	420
CATGATCGGT	GCCGGAATCT	TTGCTCGTGC	CGAATTCGGC	ACGAGCTCGT	GCCGAATTCG	4 80
GCACGAGATT	CCAATCCCCA	GAAGGTCGTA	CAAGCCGTCA	ATGGCACTTG	ATCGTTGGAT	540
CGATGATGAA	CGCTCTGCTC	ATGCCTGCCG	CCTATCTCAA	CGGTCGTCGA	TTCCATGCAT	600
TAGCCTTC-GT	TCTGCATTGC	ACGCGTAGGG	CCTACAGTCT	GGCTGTCATG	CTTGGCCGAT	660
GTCAACAGTT	TTTTTCATGC	TAAGCAGATC	GTCAGTTTTG	AGTTCGTGAA	GACGGCATGT	720
TCACTTGTTG	TCGACTACAT	CGTCTGCGCA	CATTTGCCCT	CCTGCAACTG	CGCTGCGACA	780
ATGCGCCAAC	CGCCGTGTAG	CTCGTGCCGA	ATTCGGCACG	AGGATCCACC	GGAGATGGCC	840
GACGACTACG	ACGAGGCCTG	GATGCTCAAC	ACCGTGTTCG	ACTATCACAA	CGAGAACGCA	900
AAAGAAGAGG	TCATCCATCT	CGTGCCCGAC	GTGAACAAGG	AGAGGGGGCC	CATCGAACTC	960
GTAACCAAGG	TAGACAAAGA	GGGACATCAG	ACTCGTCTAC	GATGGGGAGC	CACGTTTTCA	1020
TACAAGGAAC	ATCCTAAGTT	TTGATTCGGG	AACATCCTA			1059

Sekvence č. 132 (i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 153 párů bází (B) Typ: nukleová kyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: cDNA (xi) Sekvence č. 132

WO 98/53075 « ·

·· ·· ·· • 4 * · · · • » · · · • · · · · * • « · · · • · · · · » · »

PCT/US98/10407

GCACGAGGCA TTGGCGGGCA TCTGCATAAA GAACAACATG CGATCAGAAC GTCTCCGGTG GGTGTATTTC GACGACTCGC ACGACTCGTG

Sekvence č. 133

CGGTGACGTA ŤCAGCACAAA ACAGCGGAGA 60 GCTGGTAGCC GCAGAAGGTC CGTTCGCCTC 12 0 CCG 153 (i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 387 párů bází (B) Typ: nukleová kyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: cDNA (xi) Sekvence č. 133

CCGCGCGGTC

CCCGGCGCAG

GGGCGCGGTA

GCACCCGCAG

CGTGGTCGCC

GCTGCCGCTT

TGATCTTGTA

GATCAGCGAG

CATCTGGCGA

GACCTCCTGG

CACCTCATGC

ATCGGAGAGC

GGAGATCTTG

GAACCGCTCG

CCAGGCAAAA

ACGATCACCT

ACCTCGCGAA

GGGTCGGCCG

ACCCGTTCGG

TCGTAGACCA

CCGTCCT

ACTCCGTCGA	GCCCGAGTCG	ATGATGGTCA	60
CGATGTGCTT	GTCGTGGATC	GACACACCTT	120
CCAGGTGTAT	CTGCACCTCG	CGGGGGCCCT	180
AGCCTTCCAT	CAGCTGCTGG	CCCACCTCGA	240
AACCGTCTTC	GTGCTTGAAC	ACCCGCAGCC	300
CTTCCTCACC	GCCGTCGTCA	GGAACGATGG	360 387

Sekvence č. 134 (i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka. 389 párů bází (B) Typ: nukleová kyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: cDNA

Sekvence č. 134 (xi) GTTCAGCACG ATCGTGCTCG CTCGGCACCA CCCGAACGGC CAAGCCGACG GGCATCGAGC CTCTTGCGCT

GCTATCCGAT

ACAACGAATC

AAGACGGTCC

AGTATTACTG

ATAACGCCGC

TGATGCTGGC

CGGACGCCTA

TGTGCCGTTC

CCCACTGCTG

GGCGCTGGTC

GTTCGGCGAG

ACGCAGGGTG

CGAGCGCGCA

AGGCGCCCC

GCTTCGGTGG	GTGCTGAACA	CGGCATCGAC	60
GCACCGGTCC	AGTTCCTCGC	CGAGAAGCTG	120
CGTGGTGTCG	GACTGACACC	GGTACCGCGC	180
CCAACCGACA	CCACAGAGTT	TATGGGGCAG	240
CGCGAGCGTG	CCGCCGCCGC	TATCGAACAC	300
GCCGATCCAA	ATCGATCCCT	GGTCGGACGG	360 383

Sekvence č. 135 (i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 480 párů bází (B) Typ: nukleová kyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: cDNA (xi) Sekvence ě. 135

WO 98/53075 PCT/US98/10407 • · φ φ ·· · ·<·· • ····»· · · · φ · ♦ · • * φ φ φ » · · φ · • * « · φ φ ···· φ φ φφ

CCCGCGGTCG GAATGATCCC CGTCTCGTCG CGCGCCCATT TGATGCTGTT GATGAGCTGT 60 TTGGAGAAGC CCGGTTGGCG TACCGGTGAG CCGGAATATC TGTTGGAAGC GTCACCGGAT 120 GTNCACATGA ANTNCNTTGN CCCNGTNGCG GTNTTGGNTG NGGNAAACAC GTGTTGTNTA 180 AGCCTTGNTG GNCTCGNAAG NGCCGTNGAC GCCTGTGTCG CCGAAGATAA TGAGCACCTG 240 ACGGTTGGCG GGATCGCCGT TATCCCAAGG AATTCCGAGG TCGGTCCCGG AGATGCCGAA 300 GCGTTCCAGG GTCTTGTTGG GGCTGTCCGG TCCGGTCACC CACTCGGCGA GGGATGTGGN 360 AGCCCCGGCG AGCGTGGCAC CAGGATCCGG CGCCGCCGCC GGAGCAGGGT CGGNNGCTGN 420 NCTGNNTTCC TNNNGCCNAA TTNNACTCCN NCNACAANCT TGNNNCCGAC TCNNACCCGN 480

Sekvence č. 136 (i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 587 párů bází (B) Typ: nukleová kyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: cDNA (xi) Sekvence Č. 136

GCACGAGGCT	ACCGGCGCGT	CGCCCGCCAT	GCCCTGGATG	CACGCGTAGC	CACCCGTNCA	60
TNCAGCGGGT	CAGCCGCCGC	GTCCGGGCTT	AACGCTATAG	CAGCTGCAAA	CAACCCAGCG	120
CCGGCAATTA	CTTTGATGTT	GAACCGATGA	CCATNGCCTN	CGNGTNCAAT	CTCNTCTCTT	180
NGCGCGCCNC	TATTTNNGCC	ATANATTTGG	TTNNANNCGN	AACGCTAGAC	GTATCGAGTT	24 0
CCTTTTCGAC	CACCGGCTCA	ATTGTCAGCA	TCCTATGGGG	AACATGAGCC	CCGCCGCACC	30C
GGGCCGTTTC	CAAATGGTGA	CGTCACAACG	GTGTCACAAG	CCAGCGCAAT	GTCCGCGGTA	360
GGGACGCGGC	GGCTGGGATC	GGTGGGGTGA	GCGCCCGGCT	TCTCAAAGCG	AGGGGAGCCC	420
CGGGACTCTT	ACCGGCCGAA	GGCGGCGGGT	GTCACTGATC	TAGGCTGACG	GCCAGTGGTT	480
GNTNAGCCAA	CAAGGATGAC	NACAAATAAN	CCGAGGANAG	ACANGNGACG	GNCCGANANG	540
CTNANCCGGN	NTTGNNCNAA	NNNNACNCAC	TTNTACCGNN	CTTATGN		587
Sekvence č. 13	7

(i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 1200 párů bázi (B) Typ: nukleová kyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: cDNA (xi) Sekvence č. 137

CAGGCATGAG CAGAGCGTTC ATCATCGATC CAACGATCAG TGCCATTGAC GGCTTGTACG 60

ACCTTCTGGG GATTGGAATA CCCAACCAAG GGGGTATCCT TTACTCCTCA CTAGAGTACT 120

TCGAAAAAGC CCTGGAGGAG CTGGCAGCAG CGTTTCCGGG TGATGGCTGG TTAGGTTCGG 180

CCGCGGACAA ATACGCCGGC AAAAACCGCA ACCACGTGAA TTTTTTCCAG GAACTGGCAG 240

ACCTCGATCG TCAGCTCATC AGCCTGATCC ACGACCAGGC CAACGCGGTC CAGACGACCC 300

GCGACATCCT GGAGGGCGCC AAGAAAGGTC TCGAGTTCGT GCGCCCGGTG GCTGTGGACC 360

TGACCTACAT CCCGGTCGTC GGGCACGCCC TATCGGCCGC CTTCCAGGCG CCGTTTTGCG 420

CGGGCGCGAT GGCCGTAGTG GGCGGCGCGC TTGCCTACTT GGTCGTGAAA ACGCTGATCA 480

ACGCGACTCA ACTCCTCAAA TTGCTTGCCA AATTGGCGGA GTTGGTCGCG GCCGCCATTG 540

CGGACATCAŤ TTCGGATGTG' GCGGACATCA TCAAGGGCAC'CCTCGGAGAAGTéTGGGAGT 60Ό «I · ·· ·· • · ·

Í ♦ « • · « » · * « «· ·♦

WO 98/53075 PCT/US98/10407

TCATCACAAA CGCGCTCAAC GGCCTGAAAG AGCTTTGGGA CAAGCTCACG GGGTGGGTGA 660

CCGGACTGTT CTCTCGAGGG TGGTCGAACC TGGAGTCCTT CTTTGCGGGC GTCCCCGGCT 720

TGACCGGCGC GACCAGCGGC TTGTCGCAAG TGACTGGCTT GTTCGGTGCG GCCGGTCTGT 780

CCGCATCGTC GGGCTTGGCT CACGCGGATA GCCTGGCGAG CTCAGCCAGC TTGCCCGCCC 840

TGGCCGGCAT TGGGGGCGGG TCCGGTTTTG GGGGCTTGCC GAGCCTGGCT CAGGTCCATG 900

CCGCCTCAAC TCGGCAGGCG CTACGGCCCC GAGCTGATGG CCCGGTCGGC GCCGCTGCCG 960

AGCAGGTCGG CGGGCAGTCG CAGCTGGTCT CCGCGCAGGG TTCCCAAGGT ATGGGCGGAC 1020

CCGTAGGCAT GGGCGGCATG CACCCCTCTT CGGGGGCGTC GAAAGGGACG ACGACGAAGA 1080

AGTACTCGGA AGGCGCGGCG GCGGGCACTG AAGACGCCGA GCGCGCGCCA GTCGAAGCTG 1140

ACGCGGGCGG TGGGCAAAAG GTGCTGGTAC GAAACGTCGT CTAACGGCAT GGCGAGCCAA 1200

Sekvence č. 138 (i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 392 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (íi) Typ molekuly: protein (xi) Sekvence č. 138

Met

Ser

Arg

Ala

Phe

Ile

Ile

Asp

Pro

Thr

Ile

Ser Ala

Ile

Asp

Gly

1

5

10

15

Leu

Tyr

Asp

Leu

Leu

Gly

Ile

Gly

Ile

Pro

Asn

Gin Gly

Gly

Ile

Leu

20

25

30

Tyr

Ser

Ser

Leu

Glu

Tyr

Phe

Glu

Lys

Ala

Leu

Glu Glu

Leu

AI a

Ala

35

40

45

Ala

Phe

Pro

Gly

Asp

Gly

Trp

Leu

Gly

Ser

Ala

Ala Asp

Lys

Tyr

Ala

50

55

60

Gly

Lys

Asn

Arg

Asn

His

Val

Asn

Phe

Phe

Gin

Glu Leu

Ala

Asp

Leu

65

70

75

80

Asp

Ara

Gin

Leu

Ile

Ser

Leu

Ile

His

Asp

Gin

Ala Asn

Ala

Val

Gin

85

90

95

Thr

Thr

Arg

Asp

Ile

Leu

Glu

Gly

Ala

Lys

Lys

Gly Leu

Glu

Phe

Val

100

105

110

Arg

Pro

Val

Ala

Val

Asp

Leu

Thr

Tyr

Ile

Pro

Val Val

Gly

His

Ala

115

120

125

Leu

Ser

Ala

Ala

Phe

Gin

Ala

Pro

Phe

Cys

Ala

Gly Ala

Met

Ala

Val

130

135

140,

Val

Gly

Gly

Ala

Leu

Ala

Tyr

Leu

Val

Val

Lys

Thr Leu

Ile

Asn

Ala

145

150

155

160

Thr

Gin

Leu

Leu

Lys

Leu

Leu

Ala

Lys

Leu

Ala

Glu Leu

Val

Ala

Ala

165

170

175

Ala

Ile

Ala

Asp

Ile

Ile

Ser

Asp

Val

Ala

Asp

Ile Ile

Lys

Gly

Thr

180

185

190

Leu

Gly

Glu

Val

Trp

Glu

Phe

Ile

Thr

Asn

Ala

Leu Asn

Gly

Leu

Lys

195

200

205

Glu

Leu

Trp

Asp

Lys

Leu

Thr

Gly

Trp

Val

Thr

Gly Leu

Phe

Ser

Arg

210

215

220

Gly

Trp

Ser

Asn

Leu

Glu

Ser

Phe

Phe

Ala

Gly

Val Pro

Gly

Leu

Thr

225

230

235

240

Gly

AI

Thr

„Ser

Gly

. Leu

Ser

Gin

Val

Thr

Gly

.Leu Phe Gly

Ala

Ala

245 .. 250 ... .255 »· • » ► · · « > · · <

» · · 4 • · · « f · · *

WO 98/53075 PCT/US98/10407

Gly

Leu Ser

Ala 260

Ser

Ser

Gly Leu Ala 265

His

Ala

Asp

Ser

Leu 270

Ala

Ser

Ser

Ala

Ser

Leu

Pro

Ala

Leu

Ala

Gly

Ile

Gly

Gly

Gly

Ser

Gly

Phe

275

280

285

Gly

Gly

Leu

Pro

Ser

Leu

Ala

Gin

Val

His

Ala

Ala

Ser

Thr

Arg

Gin

290

295

300

Ala

Leu

Arg

Pro

Arg

Ala

Asp

Gly

Pro

Val

Gly

Ala

Ala

Ala

Glu

Gin

305

'310

315

320

Val

Gly

Gly

Gin

Ser

Gin

Leu

Val

Ser

Ala

Gin

Gly

Ser

Gin

Gly

Met

325

330

335

Gly

Gly

Pro

Val

Gly

Met

Gly

Gly

Met

His

Pro

Ser

Ser

Gly

Ala

Ser

340

345

350

Lys

Gly

Thr

Thr

Thr

Lys

Lys

Tyr

Ser

Glu

Gly

Ala

Ala

Ala

Gly

Thr

5 *

355

360

365

Glm

Asp

Ala

Glu

Arg

Ala

Pro

Val

Glu

Ala

Asp

Ala

Gly

Gly

Gly

Gin

.<

370

375

380

Lyš>’

Val

Leu

Val

Arg

Asn

Val

Val

385 390

Sekvence č. 139 (i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 439 párů bází (B) Typ: nukleová kyselina (C) Řetězec, jednoduchý (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: cDNA (xi) Sekvence č. 139

ACGTTTACCC	ATGCCGTCGG	TGCAGAGCAA	CGCCAGACAA	CACAAAGTAG	TGTAATTCCG	60
TTATAAAGCA	GACATTTCCG	TGGTTATGTA	GAAGATGTCG	ACCGATCAGA	TGAAGCGATC	120
CGCGTCAGGT	GGTATCCGAT	GTCTTTTGTG	ACCATCCAGC	CGGTGGTCTT	GGCAGCCGCG	180
ACGGGGGACT	TGCCGACGAT	CGGTACCGCC	GTGAGTGCTC	GGAACACAGC	CGTCTGTGCC	240
CCGACGACGG	GGGTGTTACC	CCCTGCTGCC	AATGACGTGT	CGGTCCTGAC	GGCGGCCCGG	300
TTCACCGCGC	ACACCAAGCA	CTACCGAGTG	GTGAGTAAGC	CGGCCGCGCT	GGTCCATGGC	360
ATGTTCGTGG	CCCTCCCGGC	GGCCACCGCC	GATGCGTATG	CGACCACCGA	GGCCGTCAAT	420
GTGGTCGCGA	CCGGTTAAG					439

Sekvence č. 140 (i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 1441 párů bází (B) Typ: nukleová kyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: cDNA (xi) Sekvence č. 140

GAGGTTGCTG GCAATGGATT TCGGGCTTTT ACCTCCGGAA GTGAATTCAA GCCGAATGTA 6 0

TTCCGGTCCG GGGCCGGAGT CGATGCTAGC CGCCGCGGCC GCCTGGGACG GTGTGGCCGC 120 GGAGTTGÁČT TCCGCCGCGG TČTCGTATGG ATCGGTGGTG TCGAGGCTGÁ TCGTTQAGCČ 18 0

WO 98/53075 «· 44

4 4 4 « 4 4 4 « 4 4 4 4 • 4 · • · 4 4

4 4 ·

4 * *

4 · 4

4 4 4

44

PCT/US98/I0407

7^

GTGGATGGGG CCGGCGGCGG CCGCGATGGC GGCCGCGGCA ACGCCGTATG TGGGGTGGCT 240 GGCCGCCACG GCGGCGCTGG CGAAGGAGAC GGCCACACAG GCGAGGGCAG CGGCGGAAGC 300 GTTTGGGACG GCGTTCGCGA TGACGGTGCC ACCATCCCTC GTCGCGGCCA ACCGCAGCCG 360 GTTGATGTCG CTGGTCGCGG CGAACATTCT GGGGCAAAAC AGTGCGGCGA TCGCGGCTAC 420 CCAGGCCGAG TATGCCGAAA TGTGGGCCCA AGACGCTGCC GTGATGTACA GCTATGAGGG 460 GGCATCTGCG GCCGCGTCGG CGTTGCCGCC GTTCACTCCA CCCGTGCAAG GCACCGGCCC 540 GGCCGGGCCC GCGGCCGCAG CCGCGGCGAC CCAAGCCGCC GGTGCGGGCG CCGTTGCGGA 600 TGCACAGGCG ACACTGGCCC AGCTGCCCCC GGGGATCCTG AGCGACATTC TGTCCGCATT 660 GGCCGCCAAC GCTGATCCGC TGACATCGGG ACTGTTGGGG ATCGCGTCGA CCCTCAACCC 720 GCAAGTCGGA TCCGCTCAGC CGATAGTGAT CCCCACCCCG ATAGGGGAAT TGGACGTGAT 780 CGCGCTCTAC ATTGCATCCA TCGCGACCGG CAGCATTGCG CTCGCGATCA CGAACACGGC 84 0 CAGACCCTGG CACATCGGCC TATACGGGAA CGCCGGCGGG CTGGGACCGA CGCAGGGCCA 900 TCCACTGAGT TCGGCGACCG ACGAGCCGGA GCCGCACTGG GGCCCCTTCG GGGGCGCGGC 960 GCCGGTGTCC GCGGGCGTCG GCCACGCAGC ATTAGTCGGA GCGTTGTCGG TGCCGCACAG 1020 CTGGACCACG GCCGCCCCGG AGATCCAGCT CGCCGTTCAG GCAACACCCA CCTTCAGCTC 1080 CAGCGCCGGC GCCGACCCGA CGGCCCTAAA CGGGATGCCG GCAGGCCTGC TCAGCGGGAT 1140 GGCTTTGGCG AGCCTGGCCG CACGCGGCAC GACGGGCGGT GGCGGCACCC GTAGCGGCAC 1200 CAGCACTGAC GGCCAAGAGG ACGGCCGCAA ACCCCCGGTA GTTGTGATTA GAGAGCAGCC 1260 GCCGCCCGGA AACCCCCCGC GGTAAAAGTC CGGCAACCGT TCGTCGCCGC GCGGAAAATG 1320 CCTGGTGAGC GTGGCTATCC GACGGGCCGT TCACACCGCT TGTAGTAGCG TACGGCTATG 1380 GACGACGGTG TCTGGATTCT CGGCGGCTAT CAGAGCGATT TTGCTCGCAA CCTCAGCAAA 1440 G 1441

Sekvence č. 141 (i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 99 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: protein

(xi) Sekvence c.

141

Gin

Pro

Val

Val

Leu

Ala

Ala

Ala

Thr

Gly

Met

Ser

Phe

Val

Thr

Ile

1

5

10

15

Asp

Leu

Pro

Thr

Ile

Gly

Thr

Ala

Val

Ser

Ala

Arg

Asn

Thr

Ala

Val

20

25

30

Cys

Ala

Pro

Thr

Thr

Gly

Val

Leu

Pro

Pro

Ala

Ala

Asn

Asp

Val

Ser

35

40

45

Val

Leu

Thr

Ala

Ala

Arg

Phe

Thr

Ala

His

Thr

Lys

His

Tyr

Arg

Val

50

55

60

Val

Ser

Lys

Pro

Ala

Ala

Leu

Val

His

Gly

Met

Phe

Val

Ala

Leu

Pro

65

70

75

80

Ala

Ala

Thr

Ala

Asp

Ala

Tyr

Ala

Thr

Thr

Glu

Ala

Val

Asn

Val

Val

85

90

95

Ala

Thr

Gly

Sekvence č. 142 (i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 423 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina • 9

9999

9 9 9

9 9 9

9 · ·

9 9 9

9 9 9

9 9·

WO 98/53075

PCT/US98/10407 (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: protein (xi) Sekvence Č. 142

Met

Asp

Phe

Gly

Leu

Leu

Pro

Pro

Glu

Val

Asn

Ser Ser

Arg

Met

Tyr

1

5

10

15

Ser

Gly

Pro

Gly

Pro

Glu

Ser

Met

Leu

Ala

Ala

Ala Ala

Ala

Trp

Asp

20

25'

30

Gly

Val

Ala

Ala

Glu

Leu

Thr

Ser

Ala

Ala

Val

Ser Tyr

Gly

Ser

Val

35

40

45

Val

Ser

Thr

Leu

Ile

Val

Glu

Pro

Trp

Met

Gly

Pro Ala

Ala

Ala

Ala

50

55

60

Met

Ala

Ala

Ala

Ala

Thr

Pro

Tyr

Val

Gly

Trp

Leu Ala

Ala

Thr

Ala

65

70

75

80

Ala

Leu

Ala

Lys

Glu

Thr

Ala

Thr

Gin

Ala

Arg

Ala Ala

Ala

Glu

Ala

85

90

95

Phe

Gly

Thr

Ala

Phe

Ala

Met

Thr

Val

Pro

Pro

Ser Leu

Val

Ala

Ala

100

105

110

Asn

Arg

Ser

Arg

Leu

Met

Ser

Leu

Val

Ala

Ala

Asn Ile

Leu

Gly

Gin

115

120

125

Asn

Ser

Ala

Ala

Ile

Ala

Ala

Thr

Gin

Ala

Glu

Tyr Ala

Glu

Met

Trp

130

135

140

Ala

Gin

Asp

Ala

Ala

Val

Met

Tyr

Ser

Tyr

Glu

Gly Ala

Ser

Ala

Ala

145

150

155

160

Ala

Ser

Ala

Leu

Pro

Pro

Phe

Thr

Pro

Pro

Val

Gin Gly

Thr

Gly

Pro

165

170

175

Ala

Gly

Pro

Ala

Ala

Ala

Ala

Ala

Ala

Thr

Gin

Ala Ala

Gly

Al a

Gly

ISO

18 5

190

Ala

Val

Ala

Asp

Ala

Gin

Ala

Thr

Leu

Ala

Gin

Leu Pro

Pro

Gly

Ile

195

200

205

Leu

Ser

Asp

Ile

Leu

Ser

Ala

Leu

Ala

Ala

Asn

Ala Asp

Pro

Leu

Thr

210

215

220

Ser

Gly

Leu

Leu

Gly

Ile

Ala

Ser

Thr

Leu

Asn

Pro Gin

Val

Gly

Ser

225

230

235

240

Ala

Gin

Pro

Ile

Val

Ile

Pro

Thr

Pro

Ile

Gly

Glu Leu

Asp

Val

Ile

245

250

255

Ala

Leu

Tyr

Ile

Ala

Ser

Ile

Ala

Thr

Gly

Ser

Ile Ala

Leu

Ala

Ile

260

265

270

Thr

Asn

Thr

Ala

Arg

Pro

Trp

His

Ile

Gly

Leu

Tyr Gly

Asn

Ala

Gly

275

280

285

Gly

Leu

Gly

Pro

Thr

Gin

Gly

His

Pro

Leu

Ser

Ser Ala

Thr

Asp

Glu

290

295

300

Pro

Glu

Pro

His

Trp

Gly

Pro

Phe

Gly

Gly

Ala

Ala Pro

Val

Ser

Ala

305

310

315

320

Gly

Val

Gly

His

Ala

Ala

Leu

Val

Gly

Ala

Leu

Ser Val

Pro

His

Ser

325

330

335

Trp

Thr

Thr

Ala

Ala

Pro

Glu

Ile

Gin

Leu

Ala

Val Gin

Ala

Thr

Pro

340

345

350

Thr

Phe

Ser

Ser

Ser

Ala

Gly

Ala

Asp

Pro

Thr

Ala Leu

Asn

Gly

Met

355

360

365

Pro

. Ala

Gly

Leu

Leu

Ser

Gly

Met

Ala

Leu

Ala

Ser Leu

.· Ala

Ala

.Arg

370

375

380 .

WO 98/53075 ·· ·* • · * · • · · * • · ·♦· · • · · · « * · * • » · · • · · · ·· ·· ·· »««·

PCT/US98/10407

Gly	Thr	Thr	Gly	Gly	Gly	Gly Thr
385					390
Gin	Glu	Asp	Gly	Arg	Lys	Pro Pro
				405
Pro	Pro	Gly	Asn	Pro	Pro	Arg
			420
Sekvence č.	. 143

Arg	Ser Gly Thr 395	Ser	Thr	Asp	Gly 400
Val	Val	Val	Ile	Arg	Glu	Gin	Pro
	410					415

(i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 97 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: protein

(xi) Sekvence č.	143
Met Ser Leu Leu	Asp Ala His Ile
1	5
Ala Phe Ala Ala	Lys Ala Gly Leu
20
Glu Gin Ala Ala	Met Ser Ala Gin
3 5	40
Ala Ala Phe Gin	Ala Ala His Ala
50	55
Val Asn Thr Leu	Leu Asp Val Ala
65	70
Gly Thr Tyr Val	Ala Ala Asp Ala
	85
Phe

Pro	Gin 10	Leu	Val	Ala	Ser	Gin 15	Ser
Met 25	Arg	His	Thr	Ile	Gly 30	Gin	Ala
Ala	Phe	His	Gin	Gly 45	Glu	Ser	Ser
Arg	Phe	Val	A i 3 60	Ala	Ala	Ala	Lys
Gin	Ala	Asn 75	Leu	Gly	Glu	Al a	Ala 80
Ala	Ala 90	Ala	Ser	Thr	Tyr	Thr 95	Gly

Sekvence č. 144 (i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 99 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: protein (xi) Sekvence č. 144

Cys 1	Arg	Leu	Cys	Leu 5	Asp	Ser	His
Gly	Gin	Pro	Gly 20	Arg	Leu	Val	Gin
Asp	Val	Gly 35	Gin	Thr	Arg	Cys	Thr 40
Ala	Leu 5 0	Thr	Ala	Ala	Gin	Phe 55	Ala
Val.	Ser·	Ala.	Gin	Ala.	Ala.	Ala	• Ile

Leu	Arg 10	Val	Val	Ala	Leu	Pro 15	Ala
Ala	Ile	Gly	Pro	Ala	Gin	Glu	Arg
25 Arg	Thr	Gly	Leu	Asp	30 Xaa	Val	Ser
Ala	His	Ala	Gin	45 Ile	Tyr	Gin	Ala
His	Glu	Met·	60 Phe	Val	Asn	•Thr	Leu

WO 98/53075

Claims (29)

1. Polypeptid obsahující imunogenní část antigenu A/. tuberculosis nebo odlišné formy uvedeného antigenu, která se liší pouze v konzervativních substitucích a/nebo modifikacích, kde uvedený antigen obsahuje aminokyselinovou sekvenci kódovanou DNA sekvencí vybranou ze skupiny skládající se ze sekvencí uvedených v Sekvencích číslo: 1, 11, 12, 83, 103-108, 125, 127, 129-137, 139 a 140; komplementy uvedených sekvencí a DNA sekvence, které hybridizují se sekvencí jsou uvedenou v Sekvencích číslo: 1, 11, 12, 13, 103-108, 125, 127, 129-137, 139 a 140 nebo jejich komplement za nepatrně zpřísněných podmínek.

2. Polypeptid obsahující imunogenní část antigenu M. tuberculosis nebo odlišné formy uvedeného antigenu, která se liší pouze v konzervativních substitucích a/nebo modifikacích, kde uvedený antigen uvedený antigen obsahuje aminokyselinovou sekvenci vybranou ze skupiny skládající se ze sekvencí uvedených v Sekvencích číslo: 16-33, 109, 126, 138, 141, 142 a jejich kombinací.

3. Molekula DNA obsahující nukleotidovou sekvenci kódující polypeptid podle kteréhokoliv z nároků la2.

4. Expresní vektor obsahující DNA molekulu podle nároku 3.

5. Hostitelská buňka transformována expresním vektorem podle nároku 4.

6. Hostitelská buňka podle nároku 5, kde hostitelská buňka je vybrána ze skupiny skládající se z buněk E: coli, savčích a kvasinkových buněk.

7. Farmaceutický přípravek vyznačující se tím, že obsahuje nejméně jeden polypeptid podle kteréhokoliv z nároků 1 a 2 a fyziologicky přijatelný přenašeč.

8. Farmaceutický přípravek vyznačující se tím, že obsahuje nejméně jednu molekulu DNA podle nároku 3 fyziologicky přijatelný přenašeč.

9. Farmaceutický přípravek vyznačující se tím, že obsahuje nejméně jednu molekulu DNA mající sekvenci uvedenou v Sekvencích číslo: 2-10, 102, 128 a fyziologicky přijatelný přenašeč.

10. Vakcína obsahující nejméně jeden polypeptid podle kteréhokoliv z nároků la 2 a zesilovač nespecifické imunitní odpovědi.

11. Vakcína obsahující nejméně jeden polypeptid kódovaný DNA sekvencí vybranou ze skupiny skládající se z Sekvencí číslo: 2-10, 102, 128; komplementy uvedených sekvencí a DNA sekvence hybridizující se sekvencí uvedenou v Sekvencích číslo: 2-10, 102, 128 a zesilovače nespecifické imunitní odpovědi.

• 9

99 99 99 99 • 9 · · · 9 9 9 9 9 9 9

9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9

9 9 999 9 9 9 9 9 9 ·· 9

9 9 9 999 999«

99 99 99 9999 99 99

12. Vakcína podle nároků 10 a 11, kde zesilovač nespecifické imunitní odpovědi je adjuvant.

13. Vakcína obsahující nejméně jednu DNA molekulu podle nároku 3 a zesilovač nespecifické imunitní odpovědi.

14. Vakcína obsahující nejméně jednu DNA molekulu mající sekvenci uvedenou v Sekvencích číslo: 2-10, 102, 128 a zesilovače nespecifické imunitní odpovědi.

15. Vakcína podle nároků 13 nebo 14, kde zesilovače nespecifické imunitní odpovědi je adjuvant.

16. Způsob indukce ochrany imunity pacienta vyznačující se tím, že obsahuje podání farmaceutického přípravku pacientovi podle kteréhokoliv z nároků 7 až 9.

17. Způsob indukce ochrany imunity pacienta vyznačující se tím, že obsahuje podání vakcíny pacientovi podle kteréhokoliv z nároků 10 až 13.

18. Fúzní protein obsahující nejméně dva polypeptidy podle kteréhokoliv z nároků 1 a 2.

19. Fúzní protein obsahující polypeptid podle kteréhokoliv z nároků 1 a 2 známý jako antigen M. tuberculosis.

20. Farmaceutický přípravek vyznačující se tím, že obsahuje fúzní protein podle kteréhokoliv z nároků 18 a 19 a fyziologicky přijatelný přenašeč.

21. Vakcína obsahující fuzní protein podle kteréhokoliv z nároků 18 a 19 a zesilovač nespecifické imunitní odpovědi.

22. Vakcína podle nároku 21, kde zesilovač nespecifické imunitní odpovědi je adjuvant

23. Způsob indukce ochrany imunity pacienta obsahuje podání farmaceutického přípravku pacientovi podle nároku 20.

24. Způsob indukce ochrany imunity pacienta vyznačující se tím, že obsahuje podání vakcíny pacientovi podle kteréhokoliv z nároků 21 a 22.

25. Způsob detekce tuberkulózy u pacienta vyznačující se tím, že obsahuje.

(a) kontaktní kožní buňky pacienta s nejméně jedním polypeptidem podle kteréhokoliv z nároků 1 a 2, (b) detekce imunitní odpovědi na pacientově kůži a detekci tuberkulózy u pacienta

26. Způsob detekce tuberkulózy u pacienta vyznačující se tím, že obsahuje:

(a) kontaktní kožní buňky pacienta s nejméně jedním polypeptidem kódovaným DNA sekvencí vybranou ze skupiny skládající se ze Sekvencí číslo: 2-10, 102, 128; a komplementy uvedených sekvencí, a DNA sekvence, které hybridizuji se sekvencí uvedenou v Sekvencích číslo: 2-10, 102, 128, (b) detekce imunitní odpovědi na pacientově kůži a detekci tuberkulózy u pacienta.

» · • · · · · · · · · · · • · ··· · · · · 9 9 99 9

9 9 9 9 9 9 9 9 9 9

99 99 99 9999 99 99

27. Způsob podle kteréhokoliv z nároků 25 a 26 vyznačující se tím, že imunitní odpověď je trvalá.

28. Diagnostický kit vyznačující se tím, že obsahuje:

(a) polypeptid podle kteréhokoliv z nároků 1 a 2, (b) dostatečný aparát ke kontaktu polypeptidů s kožními buňkami pacienta.

29. Diagnostický kit vyznačující se tím, že obsahuje:

(a) polypeptid kódovaný DNA sekvencí vybranou ze skupiny skládající se ze Sekvencí číslo

2-10, 102, 128; komplementy uvedených sekvencí, a DNA sekvence, které hybridizují se sekvencí uvedenou v Sekvencích číslo: 2-10, 102, 128 (b) dostatečný aparát ke kontaktu polypeptidů s kožními buňkami pacienta.