CZ304002B6 - Analogy peptidu-1 podobného glukagonu - Google Patents

Analogy peptidu-1 podobného glukagonu Download PDF

Info

Publication number
CZ304002B6
CZ304002B6 CZ20024088A CZ20024088A CZ304002B6 CZ 304002 B6 CZ304002 B6 CZ 304002B6 CZ 20024088 A CZ20024088 A CZ 20024088A CZ 20024088 A CZ20024088 A CZ 20024088A CZ 304002 B6 CZ304002 B6 CZ 304002B6
Authority
CZ
Czechia
Prior art keywords
glu
glp
gly
val
lys
Prior art date
Application number
CZ20024088A
Other languages
English (en)
Other versions
CZ20024088A3 (cs
Inventor
Glaesner@Wolfgang
Lee Millican@Rohn
Original Assignee
Eli Lilly And Company
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Eli Lilly And Company filed Critical Eli Lilly And Company
Publication of CZ20024088A3 publication Critical patent/CZ20024088A3/cs
Publication of CZ304002B6 publication Critical patent/CZ304002B6/cs

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/22—Hormones
    • A61K38/26—Glucagons
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/04—Anorexiants; Antiobesity agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A61P5/48—Drugs for disorders of the endocrine system of the pancreatic hormones
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A61P5/48—Drugs for disorders of the endocrine system of the pancreatic hormones
    • A61P5/50—Drugs for disorders of the endocrine system of the pancreatic hormones for increasing or potentiating the activity of insulin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
    • C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/575—Hormones
    • C07K14/605—Glucagons

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Emergency Medicine (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Child & Adolescent Psychology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Vascular Medicine (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

Jsou popsány slouceniny Val.sup.8.n.-Glu.sup.22.n.-GLP-1(7-37)OH (SEQ ID NO: 5) a Val.sup.8.n.-Glu.sup.22.n.-GLP-1(7-36)NH.sub.2 .n.(SEQ ID NO: 32). Tyto slouceniny, patrící mezi analogy glukagonu podobného peptidu 1 (GLP-1), nacházejí pouzití jako lék, urcený zvláste pro lécení non-inzulin dependentního diabetu, pro profylaktické osetrování non-inzulin dependentního diabetu nebo pro pouzití pro lécení obezity, mrtvice, infarktu myokardu ci katabolických pooperacních zmen nebo syndromu drázdivého streva.

Description

Analogy peptidu-1 podobného glukagonu
Oblast techniky
Vynález se týká peptidů podobných glukagonu.
Dosavadní stav techniky
Peptid 1 podobný glukagonu (dále GLP podle anglického pojmenování „Glucagon-Like Peptide“) (GLP-1) obsahuje 37 aminokyselin, a je vylučován L-buňkami střeva podle množství přijímané potravy. Bylo zjištěno, že stimuluje vylučování inzulínu (inzulinotropní účinky), čímž způsobuje spotřebovávání glukózy buňkami a snižuje koncentraci glukózy v krevním séru (viz, např., Mojsov, S., Int. J. Peptide Protein Research, 40: 333 - 343 (1992)). Nicméně, GLP-1(137) je málo aktivní a proto byla zaměřena pozornost na vzdálenější analogy, označované jako „GLP“, což jsou sloučeniny, které mají vyšší biologický účinek podobný GLP-1. Příklady jsou GLP-l(7-37), GLP-1 (7-36)NH2, Gly8-GLP-1(7-37)OH a -Ser-34-GLP-l(7-37)OH. Vzhledem k dobré schopnosti těchto sloučenin stimulovat vylučování inzulínu, jsou sloučeniny GLP slibné jako účinné látky pro léčení diabetů, obezity a příbuzných potíží.
Sloučeniny GLP-1 mohou existovat nejméně ve dvou různých formách. První forma je fyziologicky aktivní a snadno se rozpouští ve vodných roztocích při fyziologickém pH (7,4). V kontrastu s tím má druhá forma slabý nebo žádný inzulinotropní účinek a je v podstatě nerozpustná ve vodě při pH = 7,4. Bohužel, inaktivní forma se dá snadno vyrobit, když se vodné roztoky GLP-1 míchají a vystaví se působení hydrofobních povrchů nebo mají velký povrch rozhraní vzduch/voda. Výrobu komerčních množství účinné GLP-1 sloučeniny silně komplikuje sklon k přeměně na nerozpustnou formu. Při výrobě větších množství se používá míchacích operací nebo kontinuálního čerpání čerpadlem. Tyto operace způsobují promísení na rozhraní vzduch/voda a/nebo kontakt s hydrofobními povrchy, což má za následek nerozpustnou formu. K přeměně na inaktivní formu může také dojít při skladování nebo po podání pacientovi, což jsou další komplikace použití těchto sloučenin jako účinných látek farmaceutických prostředků. Proto je potřeba nových biologicky aktivních analogů GLP-1, které se méně snadno mění na nerozpustnou formu, než dosud dostupné GLP-1 sloučeniny.
Nyní bylo zjištěno, že řada analogů GLP-1 s modifikacemi na jednom nebo více následujících pozicích: 11, 12, 16, 22, 23, 24, 26, 27, 30, 33, 34, 35, 36 nebo 37, vykazuje ve srovnání s GLP1(7-37)OH výrazně snížený sklon ke shlukování.
Mnoho z těchto analogů si udržuje aktivaci GLP-1 receptorů, která je srovnatelná a v některých případech i větší, než je aktivace GLP-1 sloučenin jako GLP-1(7-37)OH a Val8-GLP-1(737)OH. Například agregační doba Val8-Glu22-GLP-1(7-37)OH je více než dvacetkrát větší a působí aktivaci GLP-1 receptorů asi o 25 % větší, než GLP-1 (7-37)OH. Na základě těchto objevů byly nalezeny nové GLP-1 sloučeniny a způsoby léčení s jejich pomocí, které jsou zde uvedeny.
Podstata vynálezu
22
Předmětem tohoto vynálezuje GLP-1 sloučenina, kteráje vybrána z Val-Glu -GLP-1(737)OH (SEQ ID NO: 5) a Val8-Glu22-GLP-1(7-36)NH2(SEQ ID NO: 32).
Výhodným provedením tohoto vynálezuje svrchu uvedená GLP-1 sloučenina, kteráje v komplexu s dvojmocným kationtem kovu, účelně je v komplexu s dvojmocným kationtem zinku.
- 1 CZ 304002 B6
Předmětem tohoto vynálezu je také jakákoli ze svrchu uvedených GLP-1 sloučenin pro použití jako lék.
Výhodným provedením tohoto vynálezu je také jakákoli ze svrchu uvedených GLP-1 sloučenin 5 pro použití pro léčení non-inzulin dependentního diabetů, účelně pro použití pro profylaktické léčení non-inzulin dependentního diabetů, pro použití pro léčení obezity, mrtvice, infarktu myokardu, katabol ických pooperačních změn nebo syndromu dráždivého střeva.
Předmětem tohoto vynálezu je také jakákoli ze svrchu uvedených GLP-1 sloučenin pro výrobu ío léku pro léčení non-inzulin dependentního diabetů, účelně pro výrobu léku pro léčení obezity, mrtvice, infarktu, myokardu, katabolických pooperačních změn nebo syndromu dráždivého střeva.
Dále jsou uvedeny podrobnější údaje ilustrující předmět vynálezu. Údaje, které jdou nad rámec is tohoto předmětu, jsou uvedeny pro ilustraci celé šíře nalezeného řešení, stejně jako pro srovnání.
Svrchu popsané sloučeniny spadají mezi polypeptidy, kterými jsou GLP-1 sloučenin obsahující sekvenci aminokyselin vzorce I (SEQ ID NO:1)
His-Xaa8-Glu-Gly-Xaaii-Xaai2-Thr-Ser-Asp-Xaai6-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Glu-Xaa23Xaa24-Ala-Xaa26-Xaa27-Phe-Ile-Xaa3o-Trp-Leu-Xaa33-Xaa34-Xaa35-Xaa36-R
Vzorec i (SEQ ID NO: 1) ve kterém:
Xaa8 je: Gly nebo Val;
Xaan je: Asp, Glu, Arg, Thr, Ala, Lys nebo His;
Xaa]2 je: His, Trp, Phe nebo Tyr;
Xaai6 je: Leu, Ser, Thr, Trp, His, Phe, Asp, Val, Tyr, Glu nebo Ala;
Xaa23 je: His, Asp, Lys, Glu, Gin nebo Arg;
Xaa24 je: Glu, Arg, Ala nebo Lys;
Xaa26 je: Trp, Tyr, Phe, Asp, Lys, Glu nebo His;
Xaa27 je: Ala, Glu, His, Phe, Tyr, Trp, Arg nebo Lys;
Xaa30 je: Ala, Glu, Asp, Ser nebo His;
Xaa33 je: Asp, Arg, Val, Lys, Ala, Gly nebo Glu;
Xaa34 je: Glu, Lys nebo Asp;
Xaa35 je: Thr, Ser, Lys, Arg, Trp, Tyr, Phe, Asp, Gly, Pro, His nebo Glu;
Xaa36 je: Thr, Ser, Asp, Trp, Tyr, Phe, Arg, Glu nebo His;
R je: Lys, Arg, Thr, Ser, Glu, Asp, Trp, Tyr, Phe, His, -NH2, Gly, Gly-Pro nebo Gly-Pro-NH2 anebo je vypuštěn.
Ze svrchu uvedených polypeptidů se jako na zajímavé poukazuje na GLP-1 sloučeniny obsahující sekvenci aminokyselin vzorce II (SEQ ID NO: 2):
His-Xaa8-Glu-Gly-Thr-Xaai2-Thr-Ser-Asp-Xaa16-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Xaa22-Xaa23-AlaAIa-Xaa26-Glu-Phe-Ile-Xaa3o-Trp-Leu-Val-Lys-Xaa35-Arg-R
Vzorec II (SEQ ID NO: 2) ve kterém:
- 2 «Α»
Xaa8 je: Gly nebo Val;
Xaa]2 je: His, Trp, Phe nebo Tyr;
Xaaié je: Leu, Ser, Thr, Trp, His, Phe, Asp, Val, Glu nebo Ala;
Xaa23 je: Glu;
Xaa23 je: His, Asp, Lys, Glu nebo Gin;
Xaa26 je: Asp, Lys, Glu nebo His;
Xaa3o je: Ala, Glu, Asp, Ser nebo His;
Xaa35 je: Thr, Ser, Lys, Arg, Trp, Tyr, Phe, Asp, Gly, Pro, His nebo Glu;
R je: Lys, Arg, Thr, Ser, Glu, Asp, Trp, Tyr, Phe, His, -NH2, Gly, Gly-Pro, GIy-Pro-NH2 nebo je vypuštěn.
Jinou ze svrchu uvedených polypeptidů je GLP-1 sloučenina obsahující sekvenci aminokyselin vzorce III (SEQ ID NO: 3):
His-Xaa8-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Xaa22-Xaa23-Ala-Ala—
Lys-Xaa27-Phe-Ile-Xaa3o-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg-R
Vzorec III (SEQ ID NO: 3) ve kterém:
Xaa8 je: Gly nebo Val;
Xaa22 je: Glu;
Xaa23 je: His, Asp, Lys, Glu nebo Gin;
Xaa27 je: Ala, Glu, His, Phe, Tyr, Trp, Arg nebo Lys;
Xaa3oje: Ala, Glu, Asp, Ser nebo His;
R je: Lys, Arg, Thr, Ser, Glu, Asp, Trp, Tyr, Phe, His, -NH2, Gly, Gly-Pro, Gly-Pro-NH2 anebo je vypuštěn.
Možným ztělesněním je také polypeptid, který má sekvenci aminokyselin vzorce IV (SEQ ID NO: 4):
Xaa7-Xaa8-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Xaa22-Gln-Ala-AlaLys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg-R (SEQ ID NO: 4) ve kterém:
Xaa? je L-histidin, D-histidin, desaminohistidin, 2-aminohistidin, β-hydroxyhistidin, homohistidin, α-fluormethylhistidin nebo a-methylhistidin;
Xaa8 je glycin, alanin, valin, leucin, isoleucin, serin nebo threonin, výhodně Xaa8 je glycin, valin, leucin, isoleucin, serin nebo threonin;
Xaa22 je kyselina asparagová, kyselina glutamová, glutamin, asparagin, lysin, arginin, cystein nebo kyselina cysteová,
R je -NH2 nebo Gly(OH).
-3 CZ 304002 B6
Ještě jiným možným provedením je sloučenina GLP-1 (glukagonu podobný peptid—1), která obsahuje aminokyselinu jinou než alanin na pozici 8, a aminokyselinu jinou než glycin na pozici 22.
Jiným možným provedením je způsob stimulace GLP-1 receptoru v subjektu, který stimulaci GLP-1 receptoru potřebuje. Způsob zahrnuje krok, který spočívá v tom, že se podává účinné množství zde popsané GLP-1 sloučeniny nebo polypeptidu, obsahující sekvenci aminokyselin SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3, popřípadě SEQ ID NO: 4.
Ještě jiným možným provedením je zde popsaná GLP-1 sloučenina nebo polypeptid, obsahující sekvenci aminokyselin SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3, popřípadě SEQ ID NO: 4, pro použití ke stimulaci GLP-1 receptoru v subjektu, který stimulaci GLP-1 receptoru potřebuje.
GLP-1 sloučeniny podle vynálezu si uchovávají schopnost aktivace GLP-1 receptoru a navíc mají ve srovnání sjinými GLP-1 sloučeninami snížený sklon ke shlukování. Výsledkem jsou roztoky těchto sloučenin, které lze rozmíchávat při minimální konverzi na nerozpustnou inaktivní formu. Tato výhoda velice zjednodušuje postup přípravy. Kromě toho lze očekávat, že po podání pacientovi dojde jen k malému nebo k žádnému srážení in vivo, čímž se zvýší aktivita a minimalizuje se tendence k nežádoucím reakcím. Dále jsou tyto GLP-1 sloučeniny odolné vůči degradaci diaminopeptidázou IV a navázání zinku, a proto se dá očekávat prodloužená doba působení in vivo.
Přehled obrázků na výkresech
Obrázek 1 znázorňuje aminokyselinové sekvence Val8-Glu22-GLP-1(7-37)OH (SEQ ID NO: 5), Val8-Asp22-GLP-1(7-37)OH (SEQ ID NO: 6), Val8-Arg22-GLP-1(7-37)OH (SEQ ID NO: 7) a Val8-Lys22-GLP-1(7-37)OH (SEQ ID NO: 8).
Obrázek 2 znázorňuje aminokyselinové sekvence Gly8-Glu22-GLP-1(7-37)OH (SEQ ID NO: 9), Gly8-Asp22-GLP-1(7-37)OH (SEQ ID NO: 10), Gly8-Arg22-GLP-1(7-37)OH (SEQ ID NO: 11) a Gly8-Lys22-GLP-1(7-37)OH (SEQ ID NO: 12).
Obrázek 3 znázorňuje sekvenci aminokyselin Val8-Glu30-GLP-1(7-37)OH (SEQ ID NO: 13), Gly8-Glu30-GLP-1(7-37)OH (SEQ ID NO: 14), Val8-His37-GLP-1(7-37)OH (SEQ ID NO: 15) a Gly8-His37-GLP-1(7-37)OH (SEQ ID NO: 16).
Obrázek 4 znázorňuje sekvenci aminokyselin Val8-Glu22-Ala27-GLP-1(7-37)OH (SEQ ID NO: 17) a Val8-Lys22-Glu23-GLP-1(7-37)OH (SEQ ID NO: 18).
„GLP-1 sloučenina“ je polypeptid, který má od asi pětadvaceti do asi devětatřiceti přirozeně se vyskytujících nebo nepřirozeně se vyskytujících aminokyselin a má dostatečnou homologii s GLP-1(7-37)OH, takže vykazuje inzulinotropní aktivitu. Příklady nepřirozeně se vyskytujících aminokyselin jsou α-methylaminokyseliny (např. α-methylalanin), D-aminokyseliny, aminokyseliny podobné histidinu (např. 2-aminohistidin, β-hydroxyhistidin, homohistidin, a-fluormethylhistidin a α-methylhistidin), aminokyseliny, které mají přidanou methylenovou skupinu v postranním řetězci („homo“ aminokyseliny) a aminokyseliny, ve kterých je karboxylová funkční skupina v postranním řetězci nahrazena kyselou sulfonovou skupinou (např. kyselina cysteová). Nicméně výhodně obsahují GLP-1 sloučeniny podle vynálezu pouze přírodně se vyskytující aminokyseliny s dalšími podmínkami, které jsou zde uvedeny.
GLP-1 sloučenina obvykle obsahuje v molekule polypeptidový řetězec, který má sekvenci aminokyselin GLP-1 (7-37)OH, analog GLP-1 (7-37)OH, fragment GLP-1 (7-37)OH nebo fragment GLP-1(7-37)OH analogu. GLP-l(7-37)OH má sekvenci aminokyselin SEQ ID NO: 19:
. a.
7His-Ala-Glu-10Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-15Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-20Leu-Glu-Gly-Gln-Ala25Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-30Ala-Trp-Leu-Val-Lys35-Gly-Arg-37Gly (SEQ ID NO: 19)
V oboru těchto sloučenin je zavedena praxe, že aminová terminální skupina GLP-1(7-37)OH se označuje číslem zbytku 7 a karboxylová terminální skupina má číslo 37. Další aminokyseliny polypeptidu jsou číslovány podle pořadí, jak je vidět na SEQ ID NO: 19. Například, pozice 12 je fenylalanin a pozice 22 je glycin. Pokud není uvedeno jinak, C-terminální je v tradiční formě karboxyl.
„GLP-1 fřagmet“ je polypeptid, získaný zkrácením N-zakončení a/nebo C-zakončení GLP-1 (737)OH nebo GLP-1 (7-37)OH analogu o jednu nebo více aminokyselin. Použité názvosloví pro tyto deriváty vychází z GLP-1 (7-37)OH a specifikuje GLP-1 fragmenty. Například „GLP-1 (9— 36)OH“ znamená GLP-1 fragment, získaný zkrácením N-zakončení o dvě aminokyseliny a Czakončení o jednu aminokyselinu. Fragmenty aminokyselin jsou označovány stejným číslem jako odpovídající aminokyselina v GLP-1 (7-37)OH. Například N-terminální glutamová kyselina v GLP-1 (9-36)OH je na pozici 9; pozice 12 je obsazena fenylalaninem; a pozice 22 je obsazena glycinem, jako v GLP-1(7-37)OH.
Termín „GLP-1 sloučenina“ také zahrnuje polypeptidy, ve kterých je k N-zakončení a/nebo k Czakončení GLP-1(7-37)OH nebo jejích fragmentů přidána alespoň jedna aminokyselina. GLP-1 sloučeniny tohoto typu mají až asi třicet devět aminokyselin. Tyto aminokyseliny, „rozšiřující“ GLP-1 sloučeninu, jsou číslovány stejně jako odpovídající aminokyselina v GLP-1(7-37)OH. Například druhá aminokyselina přidaná k N-zakončení GLP-1 sloučeniny, aby se získala sloučenina s dvěma přidanými aminokyselinami k N-zakončení GLP-1 (7-37)OH, je na pozici 5; a aminokyselina v GLP-1 sloučenině, získané přidáním jedné aminokyseliny k C-zakončení GLP-1(7-37)OH je na pozici 38. Tudíž v obou těchto „rozšířených“ GLP-1 sloučeninách, stejně jako v GLP-1 (7-37)OH je pozice 12 obsazena fenylalaninem a pozice 22 je obsazena glycinem. Aminokyseliny 1-6 rozšířené GLP-1 sloučeniny jsou výhodně stejné nebo konzervativně nahrazené aminokyselinou na odpovídající pozici GLP-1(1-37)OH. Aminokyseliny 38-45 v rozšířené GLP-1 sloučenina jsou výhodně stejné nebo konzervativně nahrazené aminokyselinou na odpovídající pozici glukagonu nebo exendinu-4.
„GLP-1 analog“ má natolik dostatečnou homologii s GLP-1(7-37)OH nebo s fragmentem GLP— 1(7-37)OH, že analog má inzulinotropní aktivitu. Výhodně má GLP-1 analog sekvenci aminokyselin GLP-1(7-37)OH nebo jejího fragmentu, modifikováno že jedna, dvě, tri, čtyři nebo pět aminokyselin se liší od aminokyseliny, která je na odpovídající pozici v GLP-1(7-37)OH nebo v tomto jejím fragmentu. Při tvoření názvu, které se zde používá k označení GLP-1 sloučeniny, se uvádí náhradní aminokyselina a její pozice před základní strukturou. Například „GLu22-GLP1(7-37)OH“ znamená GLP-1 sloučeninu, ve které glycin, který se normálně nalézá na pozici 22 v GLP-1(7-37)OH byla nahrazena kyselinou glutamovou; „Val8-Glu22-GLP-1(7-37)OH“ znamená GLP-1 sloučeninu, ve které alanin, normálně se nalézající na pozici 8, a glycin, normálně se nalézající na pozici 22, v GLP-1 (7-37)OH, byly nahrazeny valinem a kyselinou glutamovou.
N-zakončení GLP-1 sloučeniny je většinou nesubstituované, ale může také být alkylováno nebo acylováno (výhodně C’-C20). C-zakončení může být nesubstituované, jako je u GLP-1 (737)OH, amidované -NH2, -NHR nebo NRR' nebo esterifikováno -OR. R a R' jsou nezávisle alkylová nebo acylová skupina (výhodně C'-C2o). R je alkyl (C'-C20). GLP-1 (7-36)NH2 je příkladem „amidované GLP sloučeniny“. Výhodně jsou GLP-1 sloučeniny podle vynálezu na Czakončení nesubstituované nebo substituované -NH2.
-5CZ 304002 B6
Výhodně jsou GLP-1 sloučeniny podle vynálezu GLP-1 analogy nebo fragmenty GLP-1 analogů, přičemž kostra těchto analogů nebo fragmentů obsahuje aminokyselinu jinou než alanin na pozici 8 (analogy na pozici 8). Tato kostra může také obsahovat na pozici 7 L-histidin, Dhistidin nebo modifikované formy histidinu jako je desaminohistidin, 2-aminohistidin, (βhydroxyhistidin, homohistidin, α-fluormethylhistidin nebo a-methylhistidin. Je výhodné, když tyto analogy na pozici 8 obsahují ve srovnání s původním řetězcem nativní GLP-1(7-37)OH sloučeniny jednu nebo více dalších obměn na pozicích 11, 12, 16, 22, 23, 29, 26, 27, 30, 33, 34, 35, 36 a 37. Je výhodnější, když analogy na pozici 8 obsahují jednu nebo více dalších obměn na pozicích 12, 16, 22, 23, 26, 30, 35 a 37. Je dokonce ještě výhodnější, když analogy na pozici 8 obsahují ve srovnání s původním řetězcem nativní GLP-1 (7-37)OH sloučeniny jednu nebo více dalších obměn na pozicích 22, 23, 27 a 37.
Je také výhodné, když mají tyto analogy ve srovnání s původním řetězcem nativní GLP-1 (737)OH sloučeniny 6 nebo méně změn. Výhodnější je, když mají tyto analogy ve srovnání s původním řetězcem nativní GLP-1 (7-37)OH sloučeniny 5 nebo méně, ještě výhodněji mají 4 nebo méně změn, ve srovnání s původním řetězcem nativní GLP-1 (7-37)OH sloučeniny. Je dokonce ještě výhodnější, když mají tyto analogy ve srovnání s původním řetězcem nativní GLP-1(737)OH sloučeniny 3 nebo méně změn. Je nej výhodnější, když mají tyto analogy ve srovnání s původním řetězcem nativní GLP-1 (7-3 7)OH sloučeniny 2 nebo méně změn.
Bylo zjištěno, že tyto substituce snižují sklon GLP-1 sloučeniny k agregaci a k tvoření nerozpustné formy. GLP-1 sloučeniny podle vynálezu obecně agregují minimálně asi 5krát méně rychle, než GLP-1 (7-37)OH. To lze doložit porovnávacím testem, například agregačním testem, popsaným v příkladu 3. Výhodně tyto sloučeniny podle vynálezu agregují minimálně 20krát méně rychle, výhodněji nejméně 40krát méně rychle, výhodněji nejméně asi 50krát méně rychle, dokonce výhodněji asi 60krát méně rychle, a dokonce výhodněji nejméně asi 65krát méně rychle. Výhodně jsou GLP-1 sloučeninami podle vynálezu, jak je zde popsáno, analogy GLP-1 (736)NH2 nebo GLP-1 (7-37)OH.
Ve výhodném provedení má v GLP-1 sloučenině podle vynálezu aminokyselina na pozici 22 postranní řetězec, který zahrnuje nejméně dva uhlíkové atomy a polární nebo iontovou funkční skupinu. Mezi tyto postranní řetězce patří kyselina asparagová, která obsahuje methylen a karboxylový uhlík. Výhodněji je na aminokyselině na pozici 22 postranní řetězec lineární nebo rozvětvená alkylová skupina, která má od dvou do šesti uhlíkových atomů a funkční skupinu se sklonem kdisociaci, například karboxylovou skupinu, aminoskupinu, guanidinoskupinu nebo sulfonovou skupinu. Příklady výhodných aminokyselin na pozici 22 jsou glutamová kyselina, asparagová kyselina, arginin a lysin. Když je na pozici 22 asparagová kyselina, glutamová kyselina, arginin nebo lysin, pak je výhodně na pozici 8 glycin, valin, leucin, isoleucin, serin, threonin nebo methionin a výhodněji valin nebo glycin. Příklad aminokyseliny se sulfonovou skupinou v postranním řetězci je kyselina cysteová (-NH-GH(CH2SO3)-Ť3O-, zkracovaná jako „Cya“). Když na pozici 22 je sulfonová kyselina jako je kyselina cysteová, pak na pozici 8 je výhodně glycin, valin, leucin, isoleucin, serin, threonin nebo methionin a výhodněji valin nebo glycin.
V jiném výhodném provedení, je aminokyselina na pozici 8 výhodně glycin, valin, leucin, isoleucin, serin, threonin nebo methionin a výhodněji valin nebo glycin a na pozici 30 je kyselina glutamová, asparagová, serin nebo histidin a výhodněji kyselina glutamová.
V jiném výhodném provedení je aminokyselinou na pozici 8 výhodně glycin, valin, leucin, isoleucin, serin, threonin nebo methionin a výhodněji valin nebo glycin a na pozici 37 je histidin, lysin, arginin, threonin, serin, kyselina glutamová, kyselina asparagová, tryptofan, tyrosin, fenylalanin a výhodněji histidin.
V jiném výhodném provedení je aminokyselinou v pozici 8 výhodně glycin, valin, leucin, isoleucin, serin, threonin nebo methionin a výhodněji valin nebo glycin a na pozici 22 je kyselina glutamová, lysin, kyselina asparagová nebo arginin a výhodněji kyselina glutamová nebo lysin a
a pozice 23 je lysin, arginin, kyselina glutamová, kyselina asparagová, a histidin a výhodněji lysin nebo kyselina glutamová.
V jiném výhodném provedení, aminokyselina na pozici 8 je výhodně glycin, valin, leucin, isoleucin, serin, threonin nebo methionin a výhodněji valin nebo glycin a pozice 22 je kyselina glutamová, lysin, kyselina asparagová nebo arginin a výhodněji kyselina glutamová nebo lysin a pozice 27 je alanin, lysin, arginin, tryptofan, tyrosin, fenylalanin nebo histidin a výhodněji alanin.
V jiném výhodném provedení GLP-1 sloučenin podle vynálezu je aminokyselina na pozici 8 a dvě nebo tři aminokyseliny vybrané ze souboru, do kterého patří aminokyselina na pozicích 11, 12, 16, 22, 23, 24, 26, 27, 30, 33, 34, 35, 36 a 37, jsou odlišné od původních aminokyselin na odpovídajících pozicích v nativní GLP-1(7-37)OH.
V jiném výhodném provedení, GLP-1 sloučeniny podle vynálezu mají kromě aminokyseliny na pozici 8 ještě jednu nebo dvě aminokyseliny, které jsou vybrány ze souboru, do kterého patří pozice 11, pozice 12, pozice 16, pozice 22, pozice 23, pozice 24, pozice 26, pozice 27, pozice 30, pozice 33, pozice 34, pozice 35, pozice 36 a pozice 37, která(é) se liší od aminokyseliny na odpovídající pozici nativní GLP-1 (7-37)OH.
Jak je popsáno shora, GLP-1 sloučeniny podle vynálezu mohou mít kromě aminokyselin na pozici 8, 11, 12, 16, 22, 23, 24, 26, 27, 30, 33, 34, 35, 36 a 37 ještě další obměněnou aminokyselinu, která se liší od aminokyseliny na odpovídající pozici GLP-1 (7-37) nebo fragmentu GLP1(7-37). Aminokyselinami, jinými než jsou ty na pozicích 8, 11, 12, 16, 22, 23, 24, 26, 27, 30, 33, 34, 35, 36 a 37 v původní GLP sloučenině, jsou výhodně takzvanými „konzervativními substitucemi“ a výhodněji jsou „vysoce konzervativními substitucemi“.
Výhodně mají GLP-1 sloučeniny podle vynálezu kromě aminokyselin na pozicích 8 a 22 ještě žádnou, jednu, dvě nebo tři další obměněné aminokyseliny, které se liší od aminokyselin na odpovídajících pozicích GLP-1(7-37)OH nebo GLP-1(7-37)OH fragmentu. Například se může, kromě obměn aminokyselin na pozicích 8 a 22, ještě alespoň jedna aminokyselina na pozicích 7, 21 a 27 GLP-1 sloučeniny lišit od odpovídajících aminokyselin v GLP-1(7-37)OH nebo v GLP1(7-37)OH fragmentu.
Výhodně se pouze aminokyseliny na pozicích 7, 8 a 22 liší od aminokyselin, které jsou na odpovídajících pozicích GLP—1(7-37)OH (nebo jeho fragmentu). Dá se očekávat, že lze ze známých, biologicky aktivních GLP-1 sloučenin získat další vylepšené GLP-1 sloučeniny se sníženou tendenci k agregaci, nahrazením glycinu na pozici 22 a výhodně alaninu na pozici 8 těchto sloučenin vhodnou aminokyselinou, jak je zde popsáno. Známé biologicky aktivní GLP-1 sloučeniny jsou uvedeny v patentu US 5 977 071 Hoffmanna, et al., patentu US 5 545 618 Buckleyho, et al., a v publikaci Adelhorst, et al., J. Biol. Chem. 269:6275 (1994). Celý obsah těchto publikací se začleňuje do popisu formou odkazu.
Termín „konzervativní substituce“ je nahrazení aminokyseliny jinou aminokyselinou, která má stejný elektrický náboj a přibližně stejnou velikost a tvar. Aminokyseliny s alifatickými nebo substituovanými alifatickými aminokyselinovými řetězci mají přibližně stejnou velikost, pokud celkový počet uhlíkových atomů a heteroatomů v jejích postranním řetězci se neliší o více než asi čtyři. Mají přibližně stejný tvar tehdy, když je počet větví v jejich postranních řetězcích odlišný o ne více než jednu. Aminokyselina s fenylovou nebo substituovanou fenylovou skupinou v postranním řetězci tam patří, neboť má zhruba stejnou velikost a tvar. Dále je uvedeno pět souborů aminokyselin. Nahrazení aminokyseliny vGLP-l sloučenině jinou aminokyselinou ze stejného souboru má za následek konzervativní substituci:
-7 CZ 304002 Β6
Soubor 1: glycin, alanin, valin, leucin, isoleucin, serin, threonin, cystein a nepřírodně se vyskytující aminokyseliny s C'-C9 alifatickým nebo C'-C4 hydroxylem substituovanými alifatickými postranními řetězci (lineárními nebo jednou rozvětvenými).
Soubor II: kyselina glutamová, kyselina asparagová a nepřírodně se vyskytující aminokyseliny sC'-C4 alifatickými postranními řetězci, (nerozvětvenými nebo jednou rozvětvenými) substituovanými karboxylovou skupinou.
Soubor III: lysin, omitin, arginin a nepřírodně se vyskytující aminokyseliny s C’-C4 alifatickými postranními řetězci (nerozvětvenými nebo jednou rozvětvenými), substituovanými aminem nebo guanidinoskupinou.
Soubor IV: glutamin, asparagin a nepřirozeně se vyskytující aminokyseliny s amidovanými C'-C4 alifatickými postranními řetězci (nerozvětvenými nebo jednou rozvětvenými).
Soubor V: fenylalanin, fenylglycin, tyrosin a tryptofan.
Pokud není uvedeno jinak v podmínce, konzervativní substituce jsou výhodně provedeny přírodně se vyskytující aminokyselinou.
„Vysoce konzervativní substituce“ je nahrazení aminokyseliny jinou aminokyselinou tak, že má stejnou funkční skupinu v postranním řetězci a téměř stejnou velikost a tvar. Aminokyseliny s alifatickými nebo substituovanými alifatickými postranními řetězci na aminokyselině mají téměř stejnou velikost tehdy, když celkový počet uhlíkových atomů a heteroatomů v jejich postranním řetězci se liší ne více než dvojnásobně. Mají téměř stejný tvar, když mají v postranních řetězcích stejný počet větví. Příklady vysoce konzervativních substitucí jsou valin místo leucinu, threonin místo šeřinu, kyselina asparagová místo kyseliny glutamové a fenylglycin místo fenylalaninu. Příklady substitucí, které jsou nepříliš vysoce konzervativní, jsou alanin místo valinu, alanin místo šeřinu a kyselina asparagová místo šeřinu.
Příkladem GLP-1 sloučeniny podle vynálezu je polypeptid, který obsahuje sekvenci aminokyselin SEQ ID NO:1. Ve výhodném příkladě je GLP-1 taková GLP-1 (7-37)OH sloučenina, ve které Xaa8 je Gly nebo Val, Xaa22 je Glu nebo Lys a Xaa23 je Glu nebo Lys. V jiném příkladě je GLP-1 sloučeninou GLP-1(7-37)OH kde Xaa8 je Gly nebo Val a Xaa30 je Glu. Další příklad je GLP-1 sloučenina, kterou je GLP-1 (7-37)OH, ve kterém Xaa8 je Gly nebo Val a Xaa37 je His.
Jiný příklad GLP-1 sloučeniny podle vynálezu je polypeptid, který obsahuje sekvenci aminokyselin SEQ ID. NO. 4. Ve výhodném příkladě pak Xaa7 je L-histidin, D-histidin, desaminohistidin, 2-aminohistidin, β-hydroxyhistidin, homohistidin, α-fluormethylhistidin a a-methylhistidin, Xaa8 je glycin, alanin, valin, leucin, isoleucin, serin nebo threonin, a výhodně, glycin, valin, leucin, isoleucin, serin nebo threonin, Rje -NH2 nebo Gly(OH) a Xaa22 je lysin, kyselina glutamová, kyselina asparagová nebo arginin v SEQ ID NO:4. Ve výhodnějším příkladě: Xaa7 je L-histidin, Xaa8 je glycin nebo valin, Xaa22 je lysin, kyselina glutamová, kyselina asparagová nebo arginin a Rje Gly(OH). Alternativně mají Xaa7, Xaa8 a R v SEQ ID NO: 4, jak je popsáno shora, následující významy: Xaa22 je aminokyselina s postranním řetězcem, obsahujícím sulfonovou skupinu, například kyselina cysteová.
V jiném příkladě GLP-1 sloučeniny podle vynálezu není aminokyselinou na pozici 8 Daminokyselina a postranní řetězec neobsahuje glycin, serin, threonin, cystein nebo beta-alanin a zároveň aminokyselina na pozici 22 má C‘-C2 alkylový postranní řetězec, C‘-C2 hydroxylovaný alkylový postranní řetězec, C‘-C2 hydroxylovaný alkylový postranní řetězec nebo C’-C2 thiolovaný alkylový postranní řetězec (např. cystein). Ve výhodném příkladě GLP-1 sloučeniny podle vynálezu aminokyselinou na pozici 8 není D-aminokyselina a postranní řetězec neobsahuje glycin, serin, threonin, cystein nebo beta-alanin přičemž zároveň aminokyselina na pozici 22 má
Q
C’-C4 alkylový postranní řetězec, C‘-C4 hydroxyalkylový postranní řetězec nebo C’-C4 thiolový alkylový řetězec.
V jiném příkladě GLP-1 sloučeniny podle vynálezu je aminokyselinou na pozici 8 glycin, valin, leucin, isoleucin, methionin, serin, threonin, cystein, kyselina asparagová, kyselina glutamová, lysin, arginin, asparagin, glutamin, fenylalanin, tyrosin, histidin nebo tryptofan; a aminokyselinou na pozici 22 je kyselina asparagová, kyselina glutamová, lysin, arginin, asparagin, glutamin nebo histidin.
Specifické příklady GLP-1 sloučenin podle vynálezu jsou Glu22-GLP-1(7-37)OH (SEQ ID NO: 20), Asp22-GLP-1(7-37)OH (SEQ ID NO: 21), Arg22-GLP-1(7-37)OH (SEQ ID NO: 22), Lys22-GLP-1(7-37)OH (SEQ ID NO: 23), Cya22-GLP-1(7-37)OH (SEQ ID NO: 24), Val8Glu22-GLP-1(7-37)OH (SEQ ID NO: 5), Val8-Asp22-GLP-1(7-37)OH (SEQ ID NO: 6), Val8Arg22-GLP-1(7-37)OH (SEQ ID NO: 7), Val8-Lys22-GLP-1(7-37)OH (SEQ ID NO: 8), Val8Cya22-GLP-1 (7-37)OH (SEQ ID NO: 25), Gly8-Glu22-GLP-1 (7-37)OH (SEQ ID NO: 9), Gly8-Asp22-GLP-1(7-37)OH (SEQ ID NO: 10), Gly8-Arg22-GLP-1(7-37)OH (SEQ ID
NO: 11), Gly8-Lys22-GLP-1(7-37)OH (SEQ ID NO: 12), Gly8-Cya22-GLP-1(7-37)OH (SEQ ID NO: 26), Glu22-GLP-1(7-36)NH2 (SEQ ID NO: 27), Asp22-GLP-1(7-36)NH2 (SEQ ID NO: 28), Arg22-GLP-1(7-36)NH2 (SEQ ID NO: 29), Lys22-GLP-1(7-36)NH2 (SEQ ID NO: 30), Cya22-GLP-1(7-36)NH2 (SEQ ID NO: 31), Val8-Glu22-GLP-1(7-36)NH2 (SEQ ID NO: 32), Val8-Asp22-GLP-1(7-36)NH2 (SEQ ID NO: 33), Val8-Arg22-GLP-1(7-36)NH2 (SEQ ID NO: 34), Val8-Lys22-GLP-1(7-36)NH2 (SEQ ID NO: 35), Val8-Cya22-GLP-1(7-36)NH2 (SEQ ID NO: 36), Gly8-Glu22-GLP-1(7-36)NH2 (SEQ ID NO: 37), Gly8-Asp22-GLP-1(7-36)NH2 (SEQ ID NO: 38), Gly8-Arg22-GLP-1(7-36)NH2 (SEQ ID NO: 39), Gly8-Lys22-GLP-1 (736)NH2 (SEQ ID NO: 40), Gly8-Cya22-GLP-1(7-36)NH2 (SEQ ID NO: 41), Val8-Lys23-GLP1(7-37)OH (SEQ ID NO: 42), Val8-Ala27-GLP-1(7-36)OH (SEQ ID NO: 43), Val8-Glu30GLP-1(7-37)OH (SEQ ID NO: 44), Gly8-Glu30-GLP-1(7-37)OH (SEQ ID NO: 45), Val8His35-GLP-1(7-37)OH (SEQ ID NO: 46), Val8-His37-GLP-1(7-37)OH (SEQ ID NO: 47), Val8-Glu22-Lys23-GLP-1(7-37)OH (SEQ ID NO: 48), Val8-Glu22-GIu23-GLP-l(7-37)OH (SEQ ID NO: 49), Val8-Glu22-AIa27-GLP-l(7-37)OH (SEQ ID NO: 50), Val8-Gly34-Lys35GLP-1(7-37)OH (SEQ ID NO: 51), Val-His37-GLP-1(7-37)OH (SEQ ID NO: 52), Gly8His37-GLP-1(7-37)OH (SEQ ID NO: 53).
Termín „GLP-1 sloučenina“, jak se zde používá, zahrnuje také farmaceuticky přijatelné soli sloučenin podle vynálezu. GLP-1 sloučenina podle vynálezu může mít dostatečně kyselé a dostatečně zásadité nebo i obojí funkční skupiny, a podle toho mohou reagovat s jakýmkoliv počtem anorganických bází a anorganických a organických kyselin, a tím tvořit soli.
Kyselinami, které se ktomu obvykle používají, a které tvoří adiční soli, jsou anorganické kyseliny, jako je kyselina chlorovodíková, kyselina bromovodíková, kyselina jodovodíková, kyselina sírová, fosforečná kyselina, a podobně a organické kyseliny jako je kyselina p-toluensulfonová, kyselina fosforečná, kyselina methansulfonová, kyselina šťavelová, kyselina p-bromfenylsulfonová, kyselina uhličitá, kyselina jantarová, kyselina citrónová, kyselina benzoová, kyselina octová a podobně. Příklady těchto solí pak jsou: síran, pyrosíran, hydrogensíran, siřičitan, hydrogensiřičitan, fosforečnan, monohydrogenfosforečnan, dihydrogenfosforečnan, metafosforečnan, pyrofosforečnan, chlorid, bromid, jodid, octan, propionan, dekanoát, kaprylát, akrylát, mravenčan, isobutyrát, kaproát, heptanoát, propiolát, šťavelan, malonát, jantaran, suberát, sebakát, fumarát, maleát, butin-l,4-dioát, hexin-l,6-dioát, benzoát, chlorbenzoát, methylbenzoát, dinitrobenzoát, hydroxybenzoát, methoxybenzoát, ftalát, sulfonát, xylensulfonát, fenylacetát, fenylpropionát, fenylbutyrát, citrát, laktát, gama-hydroxybutyrát, glykolát, vinan, methansulfonát, propansulfonát, naftalen-l-sulfonát, naftalen-2-sulfonát, mandelát a podobně.
Adiční soli se zásadami jsou soli odvozené od anorganických bází, jako jsou amonné soli, alkalické soli nebo soli kovů alkalických zemin, soli s hydroxidy kovů, uhličitany, hydrogenuhličita-9CZ 304002 B6 ny a podobně. Tyto báze, použitelné pro přípravu solí podle vynálezu jsou například hydroxid sodný, hydroxid draselný, hydroxid amonný, uhličitan amonný a podobně.
GLP-1 sloučeniny se dají používat k léčení subjektů se širokým rozsahem nemocí a stavů. Lze očekávat, že GLP-1 sloučeniny podle vynálezu budou projevovat biologické účinky, spočívající v působení na receptor, označovaný jako „GLP-1 receptor“ (viz patent US 5 670 360 Thorrens). Subjekty trpící chorobami a/nebo stavy, které jsou žádoucím způsobem ovlivnitelné stimulací GLP-1 receptorů nebo podáváním GLP-1 sloučeniny se tudíž mohou GLP-1 sloučeninami podle vynálezu léčit. Tyto subjekty jsou označovány jako že „potřebují léčení stimulací GLP-1 sloučeninami“ nebo „potřebují stimulaci GLP-1 receptorů“. Patří mezi ně subjekty s inzulínově nezávislým diabetem, na inzulínu závislý diabetes, mrtvice (viz WO 00/16 797 Efendic), infarkt myokardu (viz WO 98/08 531 Efendic), obezita (viz WO 98/19 698 Efendic), pooperační ketabolické změny (viz U.S. Patent 6 006 753 Efendic), funkční dyspepsie a syndrom dráždivého střeva (viz WO 99/64 060 Efendic). Patří sem také subjekty, které potřebují profylaktické léčení GLP-1 sloučeninou, například subjekty, kterým hrozí, že se u nich vyvine inzulínově nezávislý diabetes (viz WO 00/07 617). Subjekty s porušenou tolerancí ke glukóze nebo se změněnou hladinou glukózy na lačno, subjekty, jejichž tělesná hmotnost je asi o 25 % nad normální tělesnou hmotností podle výšky daného subjektu a jeho tělesné stavby, subjekty s parciální pankreatektomií, subjekty, které mají jednoho nebo více rodičů trpících inzulínově nezávislým diabetem, subjekty, které měly gestační diabetes a subjekty, které měly akutní nebo chronickou pankreatitidu jsou ohroženy tím, že se u nich vyvine inzulínově nezávislý diabetes.
Termín „účinné množství“ ve vztahu k GLP-1 sloučeninám znamená množství, které má, pokud je podáno subjektu, který stimulaci GLP-1 receptorů potřebuje, za následek terapeutický a/nebo profylaktický efekt bez nepřijatelných vedlejších účinků. Termín „požadovaný terapeutický účinek“ má alespoň jeden následující význam: 1) zlepšení příznaků, spojených s chorobou nebo stavem; 2) odložení nástupu příznaků, spojených s chorobou nebo stavem; 3) prodloužení délky života ve srovnání s absencí daného léčení; a 4) zlepšení kvality života ve srovnání s absencí daného léčení. Například „účinné množství“ GLP-1 sloučeniny při léčení cukrovky je množství, které způsobí větší kontrolu koncentrace glukózy v krvi, než by byla při absenci léčení, což vede k oddálení nástupu diabetických komplikací jako je retinopatie, neuropatie nebo choroba ledvin. „Účinné množství“ GLP-1 sloučeniny pro prevenci cukrovky je množství, které oddálí ve srovnání se stavem při absenci léčení, nástup zvýšených koncentrací glukózy v krvi na takové hodnoty, při kterých by bylo nutné léčení antihypoglykemickými léky jako jsou sulfonylmočoviny, thiazolidindiony, inzulín a/nebo bisguanidiny.
„Účinné množství“ GLP-1 sloučeniny, podávané subjektu bude také záviset na typu a závažnosti léčené choroby a na vlastnostech léčeného subjektu jako je všeobecné zdraví, věk, pohlaví, tělesná hmotnost a tolerance k lékům. Odborník v oboru bude již schopen stanovit potřebné dávkování v závislosti na těchto i jiných faktorech. Obvykle se může terapeuticky účinné množství GLP1 sloučeniny pohybovat v rozmezí od asi 0,01 mg denně do asi 1000 mg denně pro dospělého. Výhodně je dávka v rozmezí od asi 0,1 mg denně do asi 100 mg denně, výhodněji od asi 1,0 mg/den do asi 10 mg/den.
GLP-1 sloučeniny podle vynálezu se mohou podávat například orálně, nasálně, inhalačně nebo parenterálně. Parenterální podávání může být například systemické jako intramuskulámí, intravenózní, subkutánní nebo intraperitoneální injekcí. GLP-1 sloučeniny se mohou podat subjektu spolu s přijatelným farmaceutickým nosičem, ředidlem nebo excipientem jako součást farmaceutické kompozice k léčení shora diskutovaných nemocí. Farmaceutická kompozice může být roztok nebo, pokud se podává parenterálně, suspenze GLP-1 sloučeniny nebo suspenze GLP-1 sloučeniny v komplexu s dvojmocným kationtem kovu, jak je popsáno dále. Vhodné farmaceutické nosiče mohou obsahovat inertní přísady, které neinteragují s peptidem nebo peptidovým derivátem. Pro přípravu léků se dají použít standardní farmaceutické techniky tak, jak jsou popsány v „Remington's Pharmaceutical Sciences“, Mack Publishing Company, Easton, PA. Vhodné farmaceutické nosiče pro parenterální podávání jsou například sterilní voda, fysiologický roztok, bakteriostatická solanka (solanka obsahující asi 0,9 mg/ml benzylalkoholu), fosfátem pufrovaná solanka, Hankův roztok, Ringerův mléčnan a podobně. Některé příklady vhodných excipientů jsou laktóza, dextróza, sacharóza, trehalóza, sorbitol a manitol.
Termín „subjekt“ znamená savce, výhodně člověka, ale může jít o zvířata, například domácí zvířata (např. psi, kočky a podobně), hospodářská zvířata (např. krávy, ovce, prasata, koně a podobně) a laboratorní zvířata (např. krysy, myši, morčata a podobně).
GLP-1 sloučeniny podle vynálezu se dají uvést do komplexu s vhodným dvojmocným kationtem kovu. Dvojmocné kovové komplexy GLP-1 sloučenin jsou obecně ve vodném roztoku s pH kolem fyziologického nerozpustné. Tudíž tyto komplexy mohou být podávány subkutánně jako suspenze a vykazují sníženou rychlost uvolňování účinné látky in vivo, čímž se prodlouží doba jejího působení. Příklady vhodných dvojmocných iontů kovů jsou Zn++, Mn++, Fe++, Ca++, Co++, Cd++, Ni++ a podobně. Výhodný je Zn++.
Aby se připravily komplexy GLP-1 sloučenin podle vynálezu s dvojmocným kationtem kovu, rozpustí se GLP-1 ve vhodném pufru a v přítomnosti soli kovu. Směs se nechá inkubovat za okolní teploty, čímž se umožní srážení komplexu. Vhodné pufry jsou ty, které udržují pH směsi na hodnotě pH v rozmezí asi 3,0 až asi 9,0 a neruší komplexační reakci. Příklady jsou fosfátové pufry, acetátové pufry, citrátové pufry a Goodeovy pufry, např. HEPES, Tris a Tris acetát. Vhodné soli kovů jsou ty, ve kterých je kov vhodný pro komplexaci. Příklady vhodných zinkových solí jsou chlorid zinečnatý, octan zinečnatý, oxid zinečnatý a síran zinečnatý. Výhodnou solí s dvojmocným kationtem kovu je chlorid zinečnatý, pokud se přidává v přebytku, aby se dosáhl molární poměr do asi 50 molekul dvojmocného kationtu kovu na každou molekulu GLP-1 sloučeniny.
„Inzulinotropní aktivita“ znamená stimulaci vylučování inzulínu jako odpověď na zvýšení hladiny glukózy, což pak způsobí odebírání glukózy buňkami a snížení její hladiny. Inzulinotropní aktivita se dá posoudit metodami, které jsou v oboru známé, včetně použití experimentů in vivo a in vitro testů, které měří vázací aktivitu GLP-l receptorů nebo aktivaci receptorů, např. test používající pankreatické buňky Langerhansových ostrůvků nebo buňky inzulinomu, jak je popsáno v EP 619 322 Gelfand, et al., a patentu US 5 120 712. Celé obsahy těchto referencí jsou začleněny do tohoto popisu.
GLP-1 sloučeniny podle vynálezu se dají připravit s použitím standardních způsobů syntézy peptidů v pevné fázi. Peptidové syntezátory jsou komerčně dostupné například od firmy Applied Biosystems ve Foster City, CA. Reakční činidla pro syntézu v pevné fázi jsou komerčně dostupná například od Midwest Biotech (Fishers, V). Syntezátory peptidů v pevné fázi se dají používat podle instrukcí výrobce k blokování rušících skupin, přičemž se uvádí do reakce chráněná aminokyselina, provádí se kopulace, odštěpení kopulované kyseliny a zakončení nezreagované aminokyseliny.
Obvykle se na N-koncovou aminokyselinu na prodlužovaném peptidovém řetězci, který je navázán na pryskyřici, kopuluje při pokojové teplotě další aminokyselina chráněná na a-Nkarbamoylu, což se provádí v inertním rozpouštědle jako je dimethylformamid, N-methylpyrrolidon nebo methylenchlorid za přítomnosti kopulačních činidel jako je dicyklohexylkarbodiimid a 1-hydroxybenzotriazol a báze jako je diisopropylethylamin, α-N-karbamoylová chránící skupina se z výsledného peptidů na pryskyřici odštěpí pomocí reakčního činidla jako je kyselina trifluoroctová nebo piperidin a kopulační reakce se opakuje s další požadovanou N-chráněnou aminokyselinou, která se má do řetězce přidat. Vhodné skupiny chránící aminoskupinu jsou v oboru dostatečně známé a jsou popsány například v publikaci Green a Wuts, „Protecting Groups v Organic Synthesis“, John Wiley and Sons, 1991, jejíž veškeré údaje jsou začleněny tímto odkazem do popisu. Příklady jsou t-butyloxykarbonyl (tBoc) a fluorenylmethoxykarbonyl (Fmoc).
- 11 CZ 304002 B6
Peptidy se také syntetizují standardními automatizovanými protokoly syntézy v pevné fázi, při čemž se používají t-butoxykarbonyl- nebo fluorenylmethoxykarbonyl-alfa-aminokyseliny s vhodnou ochranou postranního řetězce. Po dokončení syntézy se peptid odštěpí od pevného podkladu a současně se provede odstranění skupin, chránících postranních řetězce standardní fluorovodíkovou metodou. Surové peptidy se pak dále čistí s použitím chromatografie na reversní fázi na kolonách Vydac C]g přičemž se používá acetonitrilových gradientů v 0,1% kyselině trifluoroctové (TFA). Acetonitril se pak odstraní tak, že se peptidy lyofilizují z roztoku, který obsahuje 0,1 % TFA, acetonitril a vodu. Čistota produktu se dá ověřit analytickou chromatografií na reverzní fázi. Identita peptidů se dá ověřit hmotnostní spektrometrií. Peptidy se dají solubilizovat ve vodných pufrech při neutrálním pH.
Vynález je dále ilustrován příklady, které nejsou míněny v žádném směru jako omezující.
Příklady provedení vynálezu
Příklad 1 - Příprava GLP-1 sloučenin podle vynálezu „t-Boc chemií“ v pevné fázi
Do 60 ml standardní reakční nádoby bylo naváženo přibližně 0,5 až 0,6 gramů (0,38 až 0,45 mmol) pryskyřice Boc-Gly-PAM a byla provedena dvojí kopulace na syntezátoru peptidů Applied Biosystems ABI430A. K chránění postranních řetězců byly použity Boc aminokyseliny ve 2 milimolových kazetách, které byly získány od Midwest Biotech (Fishers, V), přičemž byly syntetizovány:
Arg-Tosyl (TOS), Asp-ó-cyklohexylester (CHXL), Glu-5-cyklohexylester (CHXL), Hisbenzyloxymethyl (BOM), Lys-2-chlorbenzyloxykarbonyl (2C1-Z), Met-sulfoxid (O), Ser-Obenzyléter (OBzl), Thr-O-benzyléter (OBzl), Trp-formyl (CHO) a Tyr-2-brombenzyIoxykarbonyl (2Br-Z) a pryskyřice Boc-Gly-PAM. Kyselina trifluoroctová (TFA), diisopropylethylamin (DIEA), 0,5M hydroxybenzotriazol (HOBt) v DMF a 0,5M dicyklohexylkarbodiimid (DCC) v dichlormethanu byly získány od PE-Applied Biosystems (Foster City, CA). Dimethylformamid (DMF-Burdick a Jackson) a dichlormethan (DCM-Mailinkrodt) byly získány od Mays Chemical Co. (Indianapolis, V).
Byla prováděna standardní dvojitá kopulace buď pomocí symetrického anhydridu nebo pomocí HOBt-esterů, v obou případech s použitím DCC. Druhá dvojitá kopulace (bez odstranění TFA chránící skupiny) byla provedena s Trp31, Thr13 a Thr11. Při ukončení syntéz byla N-koncová Boc skupina odstraněna a peptidylové pryskyřice byly ošetřeny 20% piperidinem v DMF, aby se deformyloval postranní řetězec Trp. Po promytí DCM, byly pryskyřice přemístěny do teflonové reakční nádoby a sušeny ve vakuu.
Pro přípravu analogů obsahujících Met byly postupem „na pryskyřici“ prováděny redukce pomocí TFA/10% dimethylsulfídu (DMS)/2% konc. HCI. Odštěpování bylo prováděno připojením reakční nádoby k zařízení na aplikaci HF (kyselina fluorovodíková) od Pennisula Laboratories. Vždy byl přidán 1 ml m-kresolu na 1 gram pryskyřice a v předchlazené nádobě bylo zkondenzováno 10 ml HF (získán od firmy AGA, Indianapolis, IN). Za přítomnosti methioninu byl pak vždy přidán 1 ml DMS na gram pryskyřice. Reakční směsi byly pak vždy hodinu míchány na ledové lázni a pak z nich byl pod vakuem odstraněn HF. Odparky byly rozmíchávány v ethyléteru a pevné podíly byly odfiltrovány a promývány éterem. Každý peptid byl extrahován do vodné kyseliny octové a buď sušen za mrazu nebo přímo nanášen na kolonu s náplní pro reverzní fázi a chromatografován.
Čištění bylo prováděno na 5cm koloně VYDAC Cig v pufru A (0,1% kyselina trifluoroctová ve vodě, B: 0,1% TFA v acetonitrilu). Chromatografie byla A: gradientová od 20% do 90%, B: HPLC (Waters) v průběhu 120 minut při rychlosti 10 ml/minutu, přičemž obsah látek byl sledo1 ván UV zářením při 280 nm (4,0 A) a frakce byly odebírány vždy po 1 minutě. Frakce s obsahem požadovaných látek byly spojeny, zmrazený a lyofilizovány. Vysušené produkty byly analyzovány HPLC (0,46 x 15 cm METASIL AQ C18) a hmotnostní spektrometrií (MALDI).
Příklad 2 - Příprava GLP-1 sloučenin podle vynálezu F-Moc chemií v pevné fázi
Do jamek 96jamkového reakčního bloku na programovatelném syntezátoru peptidů „Advanced ChemTech 396“ bylo umístěno přibližně 119 mg (50 mmol) pryskyřice FMOC-Gly WANG (získána od NovaBiochem, LaJolla, CA) a byly provedeny dvojí kopulace. Analogy s C-koncovým amidem byly připraveny s použitím 75 mg (50 mol) pryskyřice „Rink Amide AM“ (NovaBiochem, LaJolla, CA).
Následující FMOC aminokyseliny byly získány od Advanced ChemTech (Lousville, KY), NovaBiochem, (La Jolla, CA), a Midwest BioTech (Fishers, V): Arg-2,2,4,6,7-pentamethyldihydrobenzofuran-5-sulfonyl (Pbf), Asn-trityl (Trt), Asp-{3-t-Butylester (tBu), Glu-6-tbutylester (tBu), Gin—trityl (Trt), His—trityl (Trt), Lys-t-butyloxykarbonyl (Boc), Ser-t-butyléter (OtBu), Thr-t-butyléter (OtBu), Trp-t-butyloxykarbonyl (Boc), Tyr-t-butyléter (OtBu).
Rozpouštědla dimethylformamid (DMF-Burdick and Jackson), N-methylpyrrolidon (NMPBurdick a Jackson), dichlormethan (DCM-Mallinkrodt) byla získána od Mays Chemical Co. (Indianapolis, V).
Hydroxybenzotriazol (HOBt), diisopropylkarbodiimid (DIC), diisopropylethylamin (DIEA) a piperidin (Pip) byly získány od firmy Aldrich Chemical Co (Milwaukee, WI).
Všechny aminokyseliny byly rozpuštěny v 0,45M HOBt vNMP a 50 minut aktivovány DIC/HOBt, kopulace byly prováděny po 20 minutách, odstraňování chránících skupin s použitím 20% Pip/DMF. Každá pryskyřice byla po odstranění chránících skupin a kopulačních činidel promyta DMF. Po poslední kopulaci a odstranění chránících skupin byly peptidylové pryskyřice promyty DCM a sušeny pod vakuem ještě v reakčním bloku.
Do každé jamky bloku sestavy pro provádění reakcí a štěpení byly umístěny 2 ml „Reagentu K“ a štěpící reakční směs byla míchána 2 hodiny [„Reagent K“ = 0,75 g fenolu, 0,5 ml thioanisolu, 0,25 ml ethandithiolu, 0,5 ml vody s 10 ml trifluoroctovou kyselinou (TFA), přičemž všechny tyto chemikálie byly získány od firmy Aldrich Chemical Co., Milwaukee, WI], TFA filtráty byly přidány k 40 ml ethyléteru a sraženiny byly odstředěny po dobu 2 minut při 2000 otáčkách za minutu. Supematanty byly dekantovány, pelety byly opět rozmíchány ve 40 ml éteru, opět odstředěny, opět dekantovány, sušeny pod dusíkem a pak in vacuo.
Dávky po 0,3 až 0,6 mg každého produktu byly rozpuštěny v 1 ml 0,1% směsi TFA/acetonitril (ACN) a 20 μΐ získaného roztoku bylo analyzováno HPLC [0,46 x 15 cm METASIL AQ C,8, 1 ml/min, 45 °C, 214 nM (0,2A), A=0,l% TFA, B=0,l% TFA/50%ACN. Gradient = 50% B až 90% B v průběhu 30 minut].
Čisticí operace byly prováděny na koloně 2,2 x 25 cm VYDAC C|8 v pufru A (0,1% kyselina trifluoroctová ve vodě, B: 0,1% TFA v acetonitrilu). Byl použit gradient od 20% do 90% B na HPLC (Waters) v průběhu 120 minut při rychlosti průtoku 10 ml/minutu přičemž vymývané látky byly monitorovány UV zářením o vlnové délce 280 nm (4,0A) a frakce byly odebírány po 1 minutě. Požadované frakce byly spojeny, zmrazený a lyofilizovány. Sušené produkty byly analyzovány HPLC (0,46 x 15 cm METASIL AQ Ci8) a hmotnostní spektrometrií MALDI.
- 13 CZ 304002 B6
Příklad 3 - Test agregace GLP:
GLP peptidy podle tohoto vynálezu byly analyzovány z hlediska jejich sklonu k agregaci v roztoku. Obecně byly peptidy v roztoku míchány při zvýšené teplotě ve vhodném pufru, přičemž byl zaznamenáván zákal, zjišťovaný při světle o vlnové délce 350 nm jako funkce času. Byla také měřena doba, která uplynula do začátku agregace, aby se kvantitativně vyjádřil sklon daných GLP molekul ke shlukování za těchto obtížných podmínek.
Typový protokol při provádění měření:
GLP-1 sloučenina byla nejprve rozpuštěna za alkalických podmínek (pH 10,5), přičemž byla míchána 30 minut, aby se rozpustil veškeré před tím agregované podíly. Získaný roztok byl pak upraven na pH 7,4 a zfiltrován. Konkrétně bylo použito 4 mg lyofilizované GLP-1 sloučeniny ve 3 ml pufru s obsahem lOmM fosfátu/lOmM citrátu. pH pak bylo upraveno na 10,0 až 10,5 a udržováno 30 minut. Roztok pak byl upraven přidáním HC1 na pH 7,4 a filtrován na vhodném filtru, například filtru pro injekční stříkačky Millex GV (Millipore Corporation, Bedford, MA). Tento roztok pak byl ředěn na finální vzorek, obsahující 0,3 mg/ml proteinu v pufru s obsahem lOmM citrátu, lOmM fosfátu, 150mM NaCl, a upraven na pH 7,4 až 7,5. Vzorek byl inkubován při 37 °C v řemenné kyvetě. Každých pět minut pak byl stanovován zákal roztoku při 350 nm na spektrofotometru AVI V Model 14DS UV-VIS (Lakewood, NJ). Po dobu 30 vteřin před měřením a v průběhu měření byl roztok míchán pomocí magnetického míchadla od firmy Stama Cells, lne. (Atascadero, CA). Zvyšování zákalu (OD) při 350 nm indikuje agregaci GLP-peptidu. Doba po kterou se dostaví určitá agregace byla mezi měřeními odhadnuta lineární interpolací a byla stanovena předrůstová a růstová fáze metodou Drakea (Arvinte T, Cudd A a Drake AF. (1993) J. Bio. Chem. 268, 6415-6422).
Kyveta byla mezi experimenty čištěna roztokem zásaditého mýdla (např. Contrad-70).
Výsledky pro řadu GLP-1 sloučenin podle vynálezu jsou uvedeny v tabulce 1 jako doba v hodinách, potřebná k agregaci sloučeniny do shluku. Jak lze vidět z této tabulky, sloučeniny podle vynálezu vykazují výrazně zvýšenou agregační dobu oproti GLP-1 sloučeninám, které byly známy podle stavu techniky před vynálezem.
Příklad 4 - Aktivace GLP-1 receptoru GLP-1 sloučeninami podle vynálezu
Schopnost GLP-1 sloučenin podle vynálezu aktivovat GLP-1 receptor byla posouzena in vitro testem, který je popsán v EP 619 322 autorů Gelfand, et al., a v Patentu US 5 120 712. Celý obsah těchto odkazů je začleněn do tohoto popisu formou odkazu. Aktivita těchto sloučenin ve srovnání s aktivitou GLP-1 (7-37)OH je uvedena v tabulce 1. Jak je vidět z těchto výsledků, účinek GLP-1 sloučenin podle vynálezu je obecně asi stejně dobrý nebo lepší než GLP-1(7-37)OH.
Λ
Tabulka 1
GLP-1 Sloučenina Agregace Čas v hodinách Aktivace GLP-1 receptorů
GLP-1(7-37)OH 1 1,0
Val8-GLP-1(7-37)OH 0,9±0,2 (n=6) 0,47
Gly8-His1:L-GLP-l (7-37) OH 9* 0,282
Val8-Alan-GLP-1(7-37)OH 10 0,021
Val8-Lys11-GLP-1(7-37)OH 13 0,001
Val8-Tyr12-GLP-1(7-37)OH 6 0,81
Val8-Glu16-GLP-1(7-37)OH 12 0,047
Val8-Ala16-GLP-1(7-37)OH 16 0,112
Val8-Tyr16-GLP-1(7-37)OH 5 1,175
Val8-Lys20-GLP-l(7-37)OH 5 0,33
Gln22-GLP-1(7-37)OH 7 0,42
Val8-Ala22-GLP-1{7-37}OH 19 0,56
Val8-Ser22-GLP-1(7-37)OH 22 0,50
Val8-Asp22-GLP-1(7-37)OH >90 0,40
Val8-Glu22-GLP-2(7-37)OH 72 1,29
Val8-Lys22-GLP-1(7-37)OH 100,54 0,58
Val8-Pro22-GLP-1(7-37)QH >75 0,01
Val8-His22-GLP-1(7-37)OH >75 0,14
Val8-Lys22-GLP-1(7-36)NH2 24 0,53
Val8-Glu22-GLP-1(7-36)NH2 >65 1,0
Gly8-Glu22-GLP-1(7-37)OH 19 1,07
- 15CZ 304002 B6
Tabulka 1 pokračování
Val8-Glu23-GLP-1 (7-36) OH 65 0,28
Val8-Lys23-GLP-1(7-37)OH >45 0,18
Val8-His24-GLP-1(7-37)OH 3 0,007
Val8-Lys24-GLP-1(7-37)OH 22 0,02
Ala8-His26-GLP-1(7-37)OH >24 0,8
Ala8-Glu26-GLP-1(7-37)OH >24 0,7
Val8-His27-GLP-1(7-37)OH 10 0,37
Val8-Ala27-GLP-1(7-37)OH 2 0,47
Gly8-Glu30-GLP-l(7-37)OH >40 0,29
Val8-Glu30-GLP-l(7-37)OH 30 0,29
Val8-Asp30 -GLP-1(7-37)OH >45 0,15
Val8-Ser3&-GLP-1(7-37)OH 8 0,19
Val8-His30-GLP-l(7-37)OH 13 0,19
Val8-Glu33-GLP-1(7-37)OH >70 0,039
Val8-Ala33-GLP-1(7-37)OH 20 0,1
Val8-Gly33-GLP-1(7-37)OH 9 0,01
Val8-Glu34-GLP-1(7-37)OH >40* 0,17
Val8-Pro35-GLP-1(7-37)OH 14 0,094
Val8-His35-GLP-1(7-37)OH >45,30 0,41
Val8-Glu35-GLP-1(7-37)OH 63 0,15
Val8-Glu36-GLP-1(7-37)OH >45 0,11
Val8-His36-GLP-1(7-37)OH 8 0,22
Val8-His37-GLP-1(7-37)OH >40 0,3.3
Val8-Leul6-Glu26-GLP-1(7-37)OH >20 0,23
Val8-Lys22-Glu30-GLP-l(7-37)OH 4 0,37
Val8-Lys22-Glu23-GLP-1(7-37)OH >30 0,35
Val8-Glu22-Gln23-GLP-1(7-37)OH >20 0,47
Val8-Glu22-Ala27-GLP-1(7-37)OH >45 1,02
ifi
Β·**
Tabulka 1 pokračování
Val8-Glu22-Lys23-GLP-1(7-37)OH >65 1,43
Vale-Lys33-Val34-GLP-1(7-37)OH 22 0, 08
Val8-Lys33-Asn39-GLP-1(7-37)OH >48 0,09
Val8-Gly34-Lys35-GLP-1(7-37)OH 27 0,34
Val8-Gly36-Pro37-GLP-1(7-37)NH2 2 0,53
* = Agregační doba stanovená při 30 °C
Příklad 5 - Srážení GLP-1 sloučeniny zinkem
Jednotlivé GLP-1 sloučeniny byly připraveny, jak je popsáno v příkladech 1 nebo 2. 3 mg jednotlivých lyofilizovaných látek sGLP molekulou bylo vždy rozmícháno v 3 ml 0,1 M pufru HEPES spH 10,5. Pak bylo pH výsledného roztoku upraveno na hodnotu mezi 10,0 a 10,5 pomocí 0,2N NaOH. Roztok byl míchán při teplotě okolí po dobu 30 minut a pak bylo jeho pH upraveno na 7,4 pomocí 0,2N HCI. Tento roztok byl pak přefiltrován přes vhodný filtr pro injekční stříkačku, například přes filtr injekční stříkačky Millex GV (Millipore Corporation, Bedford, MA) a koncentrace GLP-1 sloučeniny byla odhadnuta měřením absorpce při 280 nm ve spektrofotometru, například značky Beclanan DU540. Koncentrace proteinu pak byla upravena na 200μΜ v HEPES při pH 7,4.
Přefiltrované roztoky GLP-1 (po 100 μΐ) pak byly zředěny na destičkách ELISA (např. Falcon Microtest™ 96) přídavky 100 μΐ 0,lM HEPES pH 7,4 s různou koncentrací chloridu zinečnatého, čímž byly získány 200μ1 vzorky roztoku s různým obsahem chloridu zinečnatého a s koncentrací 100μΜ GLP-1 sloučeniny. Tyto roztoky byly pak inkubovány při teplotě okolí (22 °C) po dobu 18 hodin a pak odstředěny, například na odstředivce Jouan CR412 s mikrodestičkovými adaptéry. 150 μΐ supematantů, získaných po odstředění, bylo pak přeneseno do UV-čtečky pro mikrotitrové destičky ELISA (např. UV destičky Costar) a bylo vyhodnoceno OD při 280, stanovitelné v čtečce mikrodestiček (např. Molecular Devices SPECTRAmax PLUS, SOFTmax PRO).
Výsledky experimentu jsou znázorněny v tabulce 2. Hodnoty A 280 jsou průměrné hodnoty ze dvou nezávislých stanovení.
- 17CZ 304002 B6
Tabulka 2
molární GLP-1- Gly8 Val8 Gin22- Val8- Val8-
poměr (7-- GLP-1 GLP- -GLP- -Glu22 -Ala22
-37)- (7- -1 (7- -1 (7- GLP-1(7- GLP-1-
Zn/ OH -37)OH -37)OH -37)OH -37)-OH (7-37)OH
GLP-1 A 280 A 280 A 280 A 280 A 280 A 280
0 0,337 0,32 0,3 0,290 0,295 0,289
0,3 0,318 0,166 0,27 0,390 0,291 0, 202
0,5 0,329 0, 151 0,26 0,123 0,292 0,107
0,7 0,253 0,156 0,129 0,076 0,293 0,104
1 0,148 0,119 0,06 0, 074 0,26 0,110
2 0,092 0,089 0,025 0, 095 0,078 0,110
3 0,081 0,085 0,021 0, 095 0,052 0,104
5 0,074 0,078 0, 019 0,097 0,035 0,119
Tabulka 2 pokračování
molární poměr Zn/GLP-1 Val8- -Ser22- -GLP-1- (7-37)OH A 280 Val8- -Phe22- -GLP-1- (7-37)OH A 280 Val8- -Pro22- -GLP-1- (7-37)OH A 280 Val8- -Lys22- -GLP-1- (7-37)OH A 280 Val8- -Asp22- -GLP-1- (7-37)OH A 280
0 0,2855 0,31 0,2595 0,299 0,288
0,3 0,2805 0,1485 0,2455 0,0825 0,2785
0,5 0,2665 0,1165 0,2325 0,0905 0, 2845
0,7 0,1825 0,1015 0,219 0,1195 0,287
1 0, 149 0,1265 0,1905 0,1225 0,291
2 0,0935 0,092 0,1695 0,1675 0,184
3 0,101 0,061 0,1615 0,1475 0,1485
5 0,0615 0,00795 0,171 0,142 0,1675
o
Tyto výsledky ukazují, že ke vzniku komplexu a k vysrážení signifikantního množství různých GLP-1 sloučenin ze zředěných roztoků jsou potřebná jen malá množství zinku.
Ekvivalenty
Přestože byl vynález konkrétně ukázán a popsán s odkazem na jeho výhodná provedení, je třeba tomu rozumět tak, že odborník v oboru může uskutečnit různé změny v formě a detailech, aniž by se odchýlil od myšlenky vynálezu a aniž by se tím dostal mimo rozsah vynálezu, jak je definován připojenými nároky. Odborník v oboru rozpozná nebo je schopen zjistit pomocí pouhých rutinních experimentů mnoho ekvivalentů popsaných konkrétních provedení vynálezu. Takovéto ekvivalenty jsou zahrnuty do rozsahu nároků.
PŘEHLED SEKVENCÍ <110> Eli Lilly and Company <120> „Glucagon-like peptide-1 analogs“ CZ „Analogy peptidu-1 podobného glukagonu“ <130> X-l3989 CZ: 24 85124 <160> 53 <170> „Patentln“ verze 3.0 <210> 1 <211> 31 <212> PRT <213> umělá <220>
<223> syntetický konstrukt <220>
<221> Varianta <222> (2)..(2) <223> Xaa na pozici 2 je Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Ser nebo Thr;
<220>
<221> Varianta <222> (5)..(5) <223> Xaa na pozici 5 je Asp, Glu, Arg, Thr, Ala, Lys nebo His;
<220>
<221> Varianta <222> (6)..(6) <223> Xaa na pozici 6 je His, Trp, Phe nebo Tyr;
<220>
<221> Varianta <222> (10)..(10) <223> Xaa na pozici 10 je Leu, Ser, Thr, Trp, His, Phe, Asp, Val, Glu nebo Ala;
<220>
<221> Varianta <222> (16)..(16)
-19CZ 304002 B6 <223> Xaa na pozici 16 je Gly, Asp, Glu, Gin, Asn, Lys, Arg nebo Cys;
<220>
<221> Varianta <222> (17)..(17) <223> Xaa na pozici 17 je His, Asp, Lys, Glu nebo Gin;
<220>
<221> Varianta <222> (18)..(18) <223> Xaa na pozici 18 je Glu, His, Ala nebo Lys;
<220>
<221> Varianta <222> (20)..(20) <223> Xaa na pozici 20 je Asp, Lys, Glu nebo His;
<220>
<221> Varianta <222> (21)..(21) <223> Xaa na pozici 21 je Ala, Glu, His, Phe, Tyr, Trp, Arg nebo Lys;
<220>
<221> Varianta <222> (24)..(24) <223> Xaa na pozici 24 je Ala, Glu, Asp, Ser nebo His;
<220>
<221> Varianta <222> (27)..(27) <223> Xaa na pozici 27 je Asp, Arg, Val, Lys, Ala, Gly nebo Glu;
<220>
<221> Varianta <222> (28)..(28) <223> Xaa na pozici 28 je Glu, Lys nebo Asp;
<220>
<221> Varianta <222> (29)..(29) <223> Xaa na pozici 29 je Thr, Ser, Lys, Arg, Trp, Tyr, Phe, Asp, Gly, Pro, His nebo Glu;
<220>
<221> Varianta <222> (30)..(30) <223> Xaa na pozici 30 je Arg, Glu nebo His;
<220>
<221> Varianta <222> (31)..(31) <223> Xaa na pozici 31 je Lys, Arg, Thr, Ser, Glu, Asp, Thr, Tyr, Phe, His, -NH2, Gly, GlyPro nebo Gly-Pro-NH2 neboje vypuštěna.
<400> 1
His Xaa Glu Gly Xaa Xaa Thr Ser Asp Xaa Ser Ser Tyr Leu Glu 15 10 15
Xaa Xaa Xaa Ala Xaa Xaa Phe Ile Xaa Trp Leu Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 20 25 30
<210> 2
<211> 31
<212> PRT
<213> umělá
<220>
<223> syntetický konstrukt
<220>
<221> Varianta
<222> (2)..(2)
<223> Xaa na pozici 2 je Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Ser nebo Thr;
<220>
<221> Varianta
<222> (6)..(6)
<223> Xaa na pozici 6 je His, Trp, Phe nebo Tyr;
<220>
<221> Varianta
<222> (10)..(10)
<223> Xaa na pozici 10 je Leu, Ser, Thr, Trp, His, Phe, Asp, Val, Glu nebo Ala;
<220>
<221> Varianta
<222> (16)..(16)
<223> Xaa na pozici 16 je Gly, Asp, Glu, Gin, Asn, Lys, Arg nebo Cys;
<220>
<221> Varianta
<222> (17)-(17)
<223> Xaa na pozici 17 je His, Asp, Lys, Glu nebo Gin;
<220>
<221> Varianta
<222> (20)..(20)
<223> Xaa na pozici 20 je Asp, Lys, Glu nebo His;
<220>
<221> Varianta
<222> (24)..(24)
<223> Xaa na pozici 24 je Ala, Glu, Asp, Ser nebo His;
<220>
<221> Varianta
<222> (29)..(29)
-21 CZ 304002 Β6 <223> Xaa na pozici 29 je Thr, Ser, Lys, Arg, Trp, Tyr, Phe, Asp, Gly, Pro, His nebo Glu;
<220>
<221> Varianta <222> (31)..(31) <223> Xaa na pozici 31 je Lys, Arg, Thr, Ser, Glu, Asp, Trp, Tyr, Phe, His, -NH2, Gly, Gly Pro nebo Gly-Pro-NH2 neboje vypuštěna.
<400> 2
His Xaa Glu Gly Thr Xaa Thr Ser Asp Xaa Ser Ser Tyr Leu Glu 15 10 15
Xaa Xaa Ala Ala Xaa Glu Phe lle Xaa Trp Leu Val Lys Xaa Arg Xaa 20 25 30 <210> 3 <211> 31 <212> PRT <213> umělá <220>
<223> syntetický konstrukt <220>
<221> Varianta <222> (2)..(2) <223> Xaa na pozici 2 je Gly, Ala, Val, Leu, lle, Ser nebo Thr;
<220>
<221> Varianta <222> (16)..(16) <223> Xaa na pozici 16 je Gly, Asp, Glu, Gin, Asn, Lys, Arg nebo Cys;
<220>
<221> Varianta <222> (17)..(17) <223> Xaa na pozici 17 je His.. Asp, Lys, Glu nebo Gin;
<220>
<221> Varianta <222> (21)..(21) <223> Xaa na pozici 21 je Ala, Glu, His, Phe, Tyr, Trp, Arg nebo Lys;
<220>
<221> Varianta <222> (24)..(24) <223> Xaa na pozici 24 je Ala, Glu, Asp, Ser nebo His;
<220>
<221> Varianta <222> (31)..(31) <223> Xaa na pozici 31 je Lys, Arg, Thr, Ser, Glu, Asp, Trp, Tyr, Phe, His, -NH2, Gly, Gly Pro nebo Gly-Pro-NH2 neboje vypuštěna.
- 99 MHM <400> 3
His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu 1.5 10 15
Xaa Xaa Ala Ala Lys Xaa Phe Ile Xaa Trp Leu Val Lys Gly Arg Xaa 20 25 30 <210> 4 <211> 31 <212> PRT <213> umělá <220>
<223> syntetický konstrukt <220>
<221> Varianta <222> (1)..(1) <223> Xaa na pozici 1 je L-histidin, D-histidin, desaminohistidin, 2-aminohistidin, betahydroxyhistidin, homohistidin, alfa—fluormethylhistidin nebo alfa—methylhistidin;
<220>
<221> Varianta <222> (2)..(2) <223> Xaa na pozici 2 je Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Ser nebo Thr, <220>
<221> Varianta <222> (16)..(16) <223> Xaa na pozici 16 je Asp, Glu, Gin, Asp, Lys, Arg nebo Cys;
<220>
<221> Varianta <222> (31)..(31) <223> Xaa na pozici 31 je -NH2 nebo Gly.
<400> 4
Xaa Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Xaa 15 io 15
Gin Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Arg Xaa 20 25 30
<210> 5
<211> 31
<212> PRT
<213> umělá
<220>
<223> , syntetický konstrukt
-23CZ 304002 B6 <400> 5
His Val Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu 15 10 15
Glu Gin Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Arg Gly 20 25 30
<210> 6
<211> 31
<212> PRT
<213> umělá
<220>
<223> syntetický konstrukt
<400> 6
His Val Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu 1 5 10 15
Asp Gin Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Arg Gly <210> 7 <211> 31 <212> PRT <213> umělá <220>
<223> syntetický konstrukt <400> 7
His Val Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu 15 10 15
Arg Gin Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Arg Gly 20 25 30
<210> 8
<211> 31
<212> PRT
<213> umělá
<220>
<223> syntetický konstrukt
24CZ 304002 B6 <400> 8
His Val Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu 15 10 15
Lys Gin Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Arg Gly 20 25 30 <210> 9 <211> 31 <212> PRT <213> umělá <220>
<223> syntetický konstrukt <400> 9
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu 15 10 15
Glu Gin Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Arg Gly 20 25 30
<210> 10
<211> 31
<212> PRT
<213> umělá
<220>
<223> syntetický konstrukt
<400> 10
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu 15 10 15
Asp Gin Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Arg Gly 20 25 30 <210> 11 <211> 31 <212> PRT <213> umělá <220>
<223> syntetický konstrukt
-25CZ 304002 B6 <400> 11
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu 15 10 15
Arg Gin Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Arg Gly 20 25 30 <210> 12 <211> 31 <212> PRT <213> umělá <220>
<223> syntetický konstrukt <400> 12
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu 15 10 15
Lys Gin Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Arg Gly 20 25 30 <210> 13 <211> 31 <212> PRT <213> umělá <220>
<223> syntetický konstrukt <400> 13
His Val Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu 15 10 15
Gly Gin Ala Ala Lys Glu Phe Ile Glu Trp Leu Val Lys Gly Arg Gly 20 25 30
<210> 14
<211> 31
<212> PRT
<213> umělá
<220>
<223> syntetický konstrukt
<400> 14
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val 10
1 5
Gly Gin Ala Ala Lys Glu Phe lle Glu Trp
20 25
<210> 15
<211> 31
<212> PRT
<213> umělá
<220>
<223> syntetický konstrukt
<400> 15
His Val Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val
1 5 10
Gly Gin Ala Ala Lys Glu Phe x xo Ala Trp
20 25
<210> 16
<211> 31
<212> PRT
<213> umělá
<220>
<223> syntetický konstrukt
<400> 16
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val
1 5 10
Gly Gin Ala Ala Lys Glu Phe lle Ala Trp
20 25
<210> 17
<211> 31
<212> PRT
<213> umělá
<220>
<223> syntetický konstrukt
-27CZ 304002 B6 <400> 17
His Val Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu 1 5 10 15
Glu Gin Ala Ala Lys Ala Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Arg His
<210> <211> <212> <213> 20 25 30 18 31 PRT umělá
<220> <223> syntetický konstrukt
<400> 18
His Val Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu 15 10 15
Lys Glu Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Arg His
20 25 30
<210> <211> <212> <213> 19 31 PRT Homo sapiens
<220> <223> syntetický konstrukt
<400> 19
His Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu 15 10 15
Gly Gin Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Arg Gly 20 25 30
<210> <211> <212> <213> 20 31 PRT umělá
<220> <223> syntetický konstrukt
OO <400> 20
His Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu
10 15
Glu Gin 711a Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Arg Gly 20 25 30
<210> 21
<211> 31
<212> PRT
<213> umělá
<220>
<223> syntetický konstrukt
<400> 21
His Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu 15 10 15
Asp Gin Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Arg Gly 20 25 30
<210> 22
<211> 31
<212> PRT
<213> umělá
<220>
<223> syntetický konstrukt
<400> 22
His Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu 15 10 15
Lys Gin Ala Ala Lys Glu Phe Ile Tkla Trp Leu Val Lys Gly Arg Gly 20 25 30 <210> 23 <211> 31 <212> PRT <213> umělá <220>
<223> syntetický konstrukt
-29CZ 304002 B6 <400> 23
His Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu 15 10 15
Lys Gin Ala Ala Lys Glu Phe Ile xAla Trp Leu Val Lys Gly Arg Gly 20 25 30 <210> 24 <211> 31 <212> PRT <213> umělá <220>
<223> syntetický konstrukt <220>
<221> Varianta <222> (16)..(16) <223> Xaa na pozici 16 je kyselina cysteová.
<400> 24
His Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu
1 5 10 15
Xaa Gin Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Arg Gly
20 25 30
<210> 25
<211> 31
<212> PRT
<213> umělá
<220>
<223> syntetický konstrukt
<220>
<221> Varianta
<222> (16)..(16)
<223> Xaa na pozici 16 je kyselina cysteová.
<400> 25
His Val Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu
1 5 10 15
Xaa < Gin Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Arg Gly
25 30
<210> 26
<211> 31
<212> PRT
<213> umělá
2Λ <220>
<223> syntetický konstrukt <220>
<221> Varianta <222> (16)..(16) <223> Xaa na pozici 16 je kyselina cysteová.
10 <400> 26
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr
1 5
Xaa Gin Ala Ala Lys Glu Phe
20
<210> 27
15 <211> 30
<212> PRT
<213> umělá
<220>
20 <223> syntetický konstrukt
<400> 27
His Ala Glu Gly Thr Phe Thr
1 5
Glu Gin Ala Ala Lys Glu Phe
20
25
<210> 28
<211> 30
<212> PRT
<213> umělá
30
<220>
<223> syntetický konstrukt
<400> 28
35
His Ala Glu Gly Thr Phe Thr
1 5
Asp Gin Ala Ala Lys Glu Phe
20
<210> 29
<211> 30
40 <212> PRT
<213> umělá
Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu 10 15
Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Arg Gly 25 30
Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu 10 15
Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Arg 25 30
Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu 10 15
Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Arg 25 30
-31 CZ 304002 B6
<220> <223> syntetický konstrukt
<400> 29
His Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu 15 10 15
Arg Gin Ala Ala Lys Glu Phe lle Ala Trp Leu Val Lys Gly Arg
<210> <211> <212> <213> 20 25 30 30 30 PRT umělá
<220> <223> syntetický konstrukt
<400> 30
His Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu 15 10 15 Lys Gin Ala Ala Lys Glu Phe lle Ala Trp Leu Val Lys Gly Arg
<210> <211> <212> <213> 20 25 30 31 30 PRT umělá
<220> <223> syntetický konstrukt
<220> <221> <222> <223> Varianta (16)-(16) Xaa na pozici 16 je kyselina cysteová.
<400> 31
His Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu 1 5 10 15
Xaa Gin Ala Ala Lys Glu Phe lle Ala Trp Leu Val Lys Gly Arg
<210> <211> <212> <213> 20 25 30 32 30 PRT umělá
-32CZ 304002 B6 <220>
<223> syntetický konstrukt
<400> 32
His Val Glu Gly Thr Phe
1 5
Glu Gin Ala Ala Lys Glu
20
<210> 33
<211> 30
<212> PRT
<213> umělá
<220>
<223> syntetický konstrukt
<400> 33
His Val Glu Gly Thr Phe
1 5
Asp Gin Ala Ala Lys Glu
20
<210> 34
<211> 30
<212> PRT
<213> umělá
<220>
<223> syntetický konstrukt
<400> 34
His Val Glu Gly Thr Phe
1 5
Arg Gin Ala Ala Lys Glu
20
<210> 35
<211> 30
<212> PRT
<213> umělá
<220>
<223> syntetický konstrukt
Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu 10 15
Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Arg
30
Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu 10 15
Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Arg 25 ^0
Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu 10 15
Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Arg 25 30
-33CZ 304002 B6 <400> 35
His Val Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu 15 10 15
Lys Gin Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Arg 20 25 30
<210> 36
<211> 30
<212> PRT
<213> umělá
<220>
<223> syntetický konstrukt
<220>
<221> Varianta
<222> (16)..(16)
<223> Xaa na pozici 16 je kyselina cysteová.
<400> 36
His Val Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu
1 5 10 15
Xaa Gin Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Arg 20 25 30 <210> 37 <211> 30 <212> PRT <213> umělá <220>
<223> syntetický konstrukt <400> 37
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu 15 10 15
Glu Gin Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Arg 20 25 30 <210> 38 <211> 30 <212> PRT <213> umělá <220>
<223> syntetický konstrukt
- 34 CZ 304002 B6 <400> 38
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu 15 10 15
Asp Gin Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Arg 20 25 30 <210> 39 <211> 30 <212> PRT <213> umělá <220>
<223> syntetický konstrukt <400> 39
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu 15 10 15
Arg Gin Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Arg 20 25 30 <210> 40 <211> 30 <212> PRT <213> umělá <220>
<223> syntetický konstrukt <400> 40
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu 15 10 15
Lys Gin Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Arg 20 25 30
<210> 41
<211> 30
<212> PRT
<213> umělá
<220>
<223> syntetický konstrukt
<220>
<221> Varianta
<222> (16)..(16)
<223> Xaa na pozici 16 je kyselina cysteová.
-35CZ 304002 B6 <400> 41
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr 1 5
Xaa Gin Ala Ala Lys Glu Phe 20
Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu
15
Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Arg 25 30
<210> 42
<211> 31
<212> PRT
<213> umělá
<220>
<223> syntetický konstrukt
<400> 42
His Val Glu Gly Thr Phe Thr 1 5
Gly Lys Ala Ala Lys Glu Phe 20
Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu 10 15
Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Arg Gly 25 30
<210> 43
<211> 31
<212> PRT
<213> umělá
<220>
<223> syntetický konstrukt
<400> 43
His Val Glu Gly Thr Phe Thr 1 5
Gly Gin Ala Ala Lys Ala Phe 20
Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu 10 15
Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Arg Gly 25 30
<210> 44
<211> 31
<212> PRT
<213> umělá
<220>
<223> syntetický konstrukt
- 36 CZ 304002 B6 <400> 44
His Val Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu
1 5 10 15
Gly Gin Ala Ala Lys Glu Phe lle Glu Trp Leu Val Lys Gly Arg Gly
20 25 30
<210> 45
<211> 31
<212> PRT
<213> umělá
<220>
<223> syntetický konstrukt
<400> 45
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu
1 5 10 15
Gly Gin Ala Ala Lys Glu Phe lle Glu Trp Leu Val Lys Gly Arg Gly 20 25 30
<210> 46
<211> 31
<212> PRT
<213> umělá
<220>
<223> syntetický konstrukt
<400> 46
His Val Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu 15 10 15
Gly Gin Ala Ala Lys Glu Phe lle Ala Trp Leu Val Lys His Arg Gly 20 25 30
<210> 47
<211> 31
<212> PRT
<213> umělá
<220>
<223> syntetický konstrukt
-37CZ 304002 B6 <400> 47
His Val Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly 15 10 15
Gin Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Arg His 20 25 30 <210> 48 <211> 31 <212> PRT <213> umělá <220>
<223> syntetický konstrukt <400> 48
His Val Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu 15 10 25
Glu Lys Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Arg Gly
25 30
<210> 49
<211> 31
<212> PRT
<213> umělá
<220>
<223> syntetický konstrukt
<400> 49
His Val Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu
10 15
Glu Glu Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Arg Gly 20 25 30 <210> 50 <211> 31 <212> PRT <213> umělá <220>
<223> syntetický konstrukt
SBaásaKsíř*
<400> 50
His Val Glu Gly Thr
1 5
Glu Gin Ala Ala Lys
5 <210> 20 51
<211> 31
<212> PRT
<213> umělá
10 <220>
<223> syntetický konstrukt
<400> 51
His Val Glu Gly Thr
1 5
Gly Gin Ala Ala Lys
15 <210> 20 52
<211> 31
<212> PRT
20 <213> umělá
<220> <223> syntetický konstrukt
25 <400> 52
His Val Glu Gly Thr
1 5
Gly Gin Ala Ala Lys
<210> 20 53
30 <211> 31
<212> PRT
<213> umělá
35 <220> <223> syntetický konstrukt
Phe Thr
Ala Phe
Phe Thr
Glu Phe
Phe Thr
Glu Phe
Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu 10 15
Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Arg Gly 25 30
Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu 10 15
Ile Ala Trp Leu Val Gly Lys Arg Gly 25 30
Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu 10 15
Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Arg His 25 30
-39CZ 304002 B6 <400> 53
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu 1 5 10 15
Gly Gin Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Arg His 20 25 30

Claims (9)

1. GLP-1 sloučenina, která je vybrána z Val8-Glu22-GLP-1 (7-37)OH (SEQ ID NO: 5) a Val8G1u22-GLP-1(7-36)NH2 (SEQ ID NO: 32).
2. GLP-l sloučenina podle nároku 1, přičemž uvedená GLP-1 sloučenina je v komplexu s dvojmocným kationtem kovu.
3. GLP-1 sloučenina podle nároku 1, přičemž uvedená GLP-1 sloučenina je v komplexu s dvojmocným kationtem zinku.
4. GLP-1 sloučenina podle jakéhokoli z nároků 1 až 3 pro použití jako lék.
5. GLP-1 sloučenina podle jakéhokoli z nároků 1 až 3 pro použití pro léčení non-inzulin dependentního diabetů.
6. GLP-1 sloučenina podle jakéhokoli z nároků 1 až 3 pro použití pro profylaktické léčení non-inzulin dependentního diabetů.
7. GLP-1 sloučenina podle jakéhokoli z nároků 1 až 3 pro použití pro léčení obezity, mrtvice, infarktu myokardu, katabolických pooperačních změn nebo syndromu dráždivého střeva.
8. Použití GLP-1 sloučeniny jaká je nárokována v jakémkoli z nároků 1 až 3 pro výrobu léku pro léčení non-inzulin dependentního diabetů.
9. Použití GLP-l sloučeniny jaká je nárokována v jakémkoli z nároků 1 až 3 pro výrobu léku pro léčení obezity, mrtvice, infarktu myokardu, katabolických pooperačních změn nebo syndromu dráždivého střeva.
4 výkresy
-4ΩCZ 304002 B6
Obr. 1
His-Val-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr
Leu-Glu-Glu-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu
Val-Lys-Gly-Arg-Gly
Val8-Glu22-GLP-1 (7-37) OH
His-Val-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr
Leu-Glu-Asp-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu
Val-Lys-Gly-Arg-Gly
Val8-Asp22-GLP-1 (7-37) OH
His-Val-Glu-Gly-Thr-^he-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr
Leu-Glu-Arg-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu
Val-Lys-Gly-Arg-Gly
Val8-Arg22-GLP-1 (7-37) OH
His-Val-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr
Leu-Glu-Lys-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu
Val-Lys-Gly-Arg-Gly
Val8-Lys22-GLP-1 (7-37) OH
-41 CZ 304002 B6
Obr. 2
His-Gly-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr
Leu-Glu-Glu-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu
Val-Lys-Gly-Arg-Gly
Gly8-Glu22-GLP-1 (7-37) OH
His-Gly-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr
Leu-Glu-Asp-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-T.rp-Leu
Val-Lys-Gly-Arg-Gly
Gly8-Asp22-GLP-1 (7-37) OH
His-Gly-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr Leu-Glu-Axg-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu Val-Lys-Gly-Arg-Gly
Gly8-Arg22-GLP-1 (7-37) OH
His-Gly-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr
Leu-Glu-Lys-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu
Val-Lys-Gly-Arg-Gly
Gly8-Lys22-GLP-1 (7-37) OH
Obr. 3
His-Val-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-TyrLeu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Glu-Trp-LeuVal-Lys-Gl y-Arg-Gl y
Val8-Glu30-GLP-l (7-37) OH
His-Gly-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-TyrLeu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Glu-Trp—LeuVal-Lys-Gly-Arg-Gly
Gly8-Glu30-GLP-l (7-37) OH
His-Val-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Serr-TyrLeu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-LeuVal-Lys -G1 y-Arg-Hi s
Val8-His37-GLP-1 (7-37) OH
His-Gly-Glu-Gly-Thr-Phe-Ťhr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-TyrLeu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-LeuVal-Lys-Gly-Arg-His
Gly8-His37-GLP-1 (7-37) OH
-43 CZ 304002 B6
Obr. 4
His-Val-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr
Leu-Glu-Glu-Gln-Ala-Ala-Lys-Ala-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu
Val-Lys-Gly-Arg-His
Val8-Glu22-Ala27-GLP-1 (7-37) OH
His-Val-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr
Leu-Glu-Lys-Glu-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu
Val-Lys-Gly-Arg-His
Val8-Lys22-Glu23-GLP-1 (7-37) OH
CZ20024088A 2000-06-16 2001-06-01 Analogy peptidu-1 podobného glukagonu CZ304002B6 (cs)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US21217100P 2000-06-16 2000-06-16
US24034900P 2000-10-13 2000-10-13

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CZ20024088A3 CZ20024088A3 (cs) 2003-05-14
CZ304002B6 true CZ304002B6 (cs) 2013-08-14

Family

ID=26906843

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CZ20024088A CZ304002B6 (cs) 2000-06-16 2001-06-01 Analogy peptidu-1 podobného glukagonu

Country Status (32)

Country Link
US (2) US7084243B2 (cs)
EP (2) EP1695983B1 (cs)
JP (1) JP4716641B2 (cs)
KR (1) KR100847615B1 (cs)
CN (1) CN100469791C (cs)
AR (1) AR031701A1 (cs)
AT (2) ATE424413T1 (cs)
AU (2) AU6479101A (cs)
BR (1) BR0111562A (cs)
CA (1) CA2412004C (cs)
CY (2) CY1105917T1 (cs)
CZ (1) CZ304002B6 (cs)
DE (2) DE60124710T2 (cs)
DK (2) DK1294757T3 (cs)
DZ (1) DZ3388A1 (cs)
EA (1) EA008837B1 (cs)
EG (1) EG24755A (cs)
ES (2) ES2321439T3 (cs)
HR (1) HRP20020996B1 (cs)
HU (2) HU229108B1 (cs)
IL (2) IL153453A0 (cs)
MX (1) MXPA02012203A (cs)
MY (1) MY137350A (cs)
NO (1) NO330686B1 (cs)
NZ (1) NZ522330A (cs)
PE (1) PE20011363A1 (cs)
PL (1) PL206302B1 (cs)
PT (2) PT1695983E (cs)
SI (1) SI1695983T1 (cs)
SK (1) SK287757B6 (cs)
TW (1) TWI321134B (cs)
WO (1) WO2001098331A2 (cs)

Families Citing this family (162)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR2686899B1 (fr) 1992-01-31 1995-09-01 Rhone Poulenc Rorer Sa Nouveaux polypeptides biologiquement actifs, leur preparation et compositions pharmaceutiques les contenant.
US9006175B2 (en) 1999-06-29 2015-04-14 Mannkind Corporation Potentiation of glucose elimination
EP2280004B1 (en) 1999-06-29 2016-04-20 MannKind Corporation Pharmaceutical formulations comprising insulin complexed with a diketopiperazine
EP2067488A1 (en) 2000-04-12 2009-06-10 Human Genome Sciences, Inc. Albumin fusion proteins
SI1695983T1 (sl) * 2000-06-16 2009-08-31 Lilly Co Eli Analogi glukagonu podobnega peptida-1
DE60134251D1 (de) 2000-09-18 2008-07-10 Sanos Bioscience As Verwendung von glp-2-peptiden
US7371721B2 (en) 2000-09-18 2008-05-13 Sanos Bioscience A/S Use of GLP-2 and related compounds for the treatment, prevention, diagnosis, and prognosis of bone-related disorders and calcium homeostasis related syndromes
US7186683B2 (en) 2000-09-18 2007-03-06 Sanos Bioscience A/S Use of GLP for the treatment, prevention, diagnosis, and prognosis of bone-related and nutrition-related disorders
PT1412384E (pt) * 2001-06-28 2008-03-28 Novo Nordisk As Formulação estável de glp-1 modificado
CN1363654A (zh) 2001-07-19 2002-08-14 上海华谊生物技术有限公司 生产促胰岛素分泌肽glp－1(7－36)的基因工程菌以及生产glp－1(7－36)的方法
AU2002322403A1 (en) * 2001-08-23 2003-03-10 Eli Lilly And Company Glucagon-like peptide-1 analogs
GB0121709D0 (en) * 2001-09-07 2001-10-31 Imp College Innovations Ltd Food inhibition agent
GEP20063908B (en) * 2001-10-18 2006-08-25 Bristol Myers Squibb Co Human glucagon-like-peptide-1 mimics and their use in the treatment of diabetes and related conditions
WO2003060071A2 (en) 2001-12-21 2003-07-24 Human Genome Sciences, Inc. Albumin fusion proteins
WO2005003296A2 (en) 2003-01-22 2005-01-13 Human Genome Sciences, Inc. Albumin fusion proteins
JP2005516968A (ja) * 2001-12-29 2005-06-09 ノボ　ノルディスク　アクティーゼルスカブ Ｇｌｐ−１化合物と糖尿病後期合併症モジュレーターの組み合わせ使用
CN1332711C (zh) * 2002-02-20 2007-08-22 埃米球科技有限公司 施用glp－1分子的方法
ATE385193T1 (de) 2002-03-20 2008-02-15 Mannkind Corp Inhalationsgerät
EP1575490A4 (en) * 2002-06-04 2007-08-08 Lilly Co Eli MODIFIED ANALOGUES OF GLUCAGON-LIKE PEPTIDE-1 (GLP-1)
US8377869B2 (en) * 2007-10-24 2013-02-19 Mannkind Corporation Method of preventing adverse effects by GLP-1
US20080260838A1 (en) * 2003-08-01 2008-10-23 Mannkind Corporation Glucagon-like peptide 1 (glp-1) pharmaceutical formulations
US7790681B2 (en) * 2002-12-17 2010-09-07 Amylin Pharmaceuticals, Inc. Treatment of cardiac arrhythmias with GLP-1 receptor ligands
US7731947B2 (en) 2003-11-17 2010-06-08 Intarcia Therapeutics, Inc. Composition and dosage form comprising an interferon particle formulation and suspending vehicle
WO2004067548A2 (en) * 2003-01-31 2004-08-12 Theratechnologies Inc. Chemically modified metabolites of regulatory peptides and methods of producing and using same
CN1750842A (zh) * 2003-02-19 2006-03-22 研究及应用科学协会股份有限公司 Glp－1的类似物
WO2004103390A2 (en) 2003-05-15 2004-12-02 Trustees Of Tufts College Stable analogs of peptide and polypeptide therapeutics
US8008255B2 (en) 2003-05-30 2011-08-30 Amylin Pharmaceuticals, Inc. Methods and compositions for enhanced transmucosal delivery of peptides and proteins
CN102940879B (zh) * 2003-06-03 2017-06-06 诺沃挪第克公司 稳定化的药物肽组合物
WO2004105790A1 (en) * 2003-06-03 2004-12-09 Novo Nordisk A/S Stabilized pharmaceutical peptide compositions
US7452966B2 (en) 2003-06-12 2008-11-18 Eli Lilly And Company GLP-1 analog fusion proteins
CA2545034C (en) 2003-11-20 2013-03-05 Novo Nordisk A/S Propylene glycol-containing peptide formulations which are optimal for production and for use in injection devices
DE602004031455D1 (de) 2003-12-09 2011-03-31 Novo Nordisk As Regulierung der nahrungspräferenz mit glp-1-agonisten
CA2551039C (en) * 2003-12-16 2013-01-29 Societe De Conseils De Recherches Et D'applications Scientifiques (S.C.R Analogues of glp-1
JP2007514752A (ja) * 2003-12-16 2007-06-07 ソシエテ・ドゥ・コンセイユ・ドゥ・ルシェルシュ・エ・ダプリカーション・シャンティフィック・エス・ア・エス Ｇｌｐ−１医薬組成物
JP2007537149A (ja) 2004-01-08 2007-12-20 セラテクノロジーズ インコーポレイテッド 長時間作用性のグルカゴン様ペプチド−１類似体
EP2308976B2 (en) 2004-04-30 2017-05-10 Dow AgroSciences LLC Novel herbicide resistance gene
US20090069226A1 (en) * 2004-05-28 2009-03-12 Amylin Pharmaceuticals, Inc. Transmucosal delivery of peptides and proteins
WO2005120492A1 (en) 2004-06-11 2005-12-22 Novo Nordisk A/S Counteracting drug-induced obesity using glp-1 agonists
BRPI0514263B8 (pt) 2004-08-20 2021-05-25 Mannkind Corp método para a síntese de bis-3,6-[4-aminobutil]-2,5-dicetopiperazina n-protegida
HUE025151T2 (en) 2004-08-23 2016-01-28 Mannkind Corp Diceto-piperazine salts for drug delivery
EP1789434B1 (en) * 2004-08-31 2013-11-20 Novo Nordisk A/S Use of tris(hydroxymethyl) aminomethane for the stabilization of peptides, polypeptides and proteins
US7893017B2 (en) 2004-10-07 2011-02-22 Novo Nordisk A/S Protracted GLP-1 compounds
WO2006037811A2 (en) 2004-10-07 2006-04-13 Novo Nordisk A/S Protracted exendin-4 compounds
WO2006051110A2 (en) 2004-11-12 2006-05-18 Novo Nordisk A/S Stable formulations of insulinoptropic peptides
EP2505207B1 (en) 2005-01-14 2015-04-22 Wuxi Grandchamp Pharmaceutical Technology Co., Ltd. Modified exendins and uses thereof
WO2006083761A2 (en) 2005-02-03 2006-08-10 Alza Corporation Solvent/polymer solutions as suspension vehicles
US11246913B2 (en) 2005-02-03 2022-02-15 Intarcia Therapeutics, Inc. Suspension formulation comprising an insulinotropic peptide
EP1864661A1 (en) * 2005-03-18 2007-12-12 Ajinomoto Co., Inc. Prophylactic/therapeutic agent for stress-induced bowel disease
MX2007014052A (es) * 2005-05-13 2008-02-05 Lilly Co Eli Compuestos glp-1 pegilados.
EP1904525A4 (en) * 2005-06-30 2009-10-21 Ipsen Pharma GLP-1 PHARMACEUTICAL COMPOSITIONS
CA2621806C (en) 2005-09-14 2016-08-02 Mannkind Corporation Method of drug formulation based on increasing the affinity of crystalline microparticle surfaces for active agents
AU2006308959B2 (en) 2005-10-28 2012-09-06 Corteva Agriscience Llc Novel herbicide resistance genes
EP2570133B1 (en) 2005-11-07 2016-03-23 Indiana University Research and Technology Corporation Glucagon analogs exhibiting physiological solubility and stability
CN100374462C (zh) * 2005-11-21 2008-03-12 大连帝恩生物工程有限公司 截短胰高血糖素样肽1(sGLP-1)、制法及其应用
US20130172274A1 (en) 2005-12-20 2013-07-04 Duke University Methods and compositions for delivering active agents with enhanced pharmacological properties
CN101384272B (zh) 2005-12-20 2013-05-01 杜克大学 用于递送具有增强的药理性质的活性剂的方法和组合物
US8841255B2 (en) 2005-12-20 2014-09-23 Duke University Therapeutic agents comprising fusions of vasoactive intestinal peptide and elastic peptides
WO2008063203A2 (en) * 2006-01-27 2008-05-29 Whitehead Institute For Biomedical Research Compositions and methods for efficient gene silencing in plants
CN101389348A (zh) 2006-02-22 2009-03-18 曼金德公司 用于改善包含二酮哌嗪和活性剂的微粒的药物性质的方法
WO2007124461A2 (en) 2006-04-20 2007-11-01 Amgen Inc. Glp-1 compounds
ES2351527T3 (es) 2006-05-30 2011-02-07 Intarcia Therapeutics, Inc Modulador de flujo en dos piezas con conducto interno para un sistema osmótico de administración.
CN101466399B (zh) * 2006-06-09 2015-05-13 诺华股份有限公司 稳定的胰岛素样生长因子多肽
US20100009907A1 (en) * 2006-07-06 2010-01-14 Amylin Pharmaceuticals, Inc. Glucagon-Like Peptides and Uses Thereof
EP2049567A2 (en) 2006-07-18 2009-04-22 Centocor, Inc. Human glp-1 mimetibodies, compositions, methods and uses
CN102274557B (zh) 2006-08-09 2014-12-03 精达制药公司 渗透性递送系统和活塞组件
KR100851560B1 (ko) * 2006-12-27 2008-08-11 고려대학교 산학협력단 새로운 글루카곤 유사 펩타이드-1 (ｇｌｐ-1) 작용제 및 그용도
CA2674354A1 (en) 2007-01-05 2008-07-17 Indiana University Research And Technology Corporation Glucagon analogs exhibiting enhanced solubility in physiological ph buffers
CN101041693B (zh) * 2007-02-06 2011-08-17 珠海联邦制药股份有限公司 一种降血糖多肽及其应用
EP2487184A1 (en) 2007-02-15 2012-08-15 Indiana University Research and Technology Corporation Glucagon/GLP-1 receptor co-agonists
DK2157967T3 (da) 2007-04-23 2013-04-08 Intarcia Therapeutics Inc Suspensionsformuleringer af insulinotropiske peptider og anvendelser deraf
GB2448895A (en) * 2007-05-01 2008-11-05 Activotec Spp Ltd GLP-1 like compounds and uses thereof
US8464239B2 (en) * 2007-06-11 2013-06-11 Red Hat, Inc. Real-time installation and/or configuration assistant
EP2185178B1 (en) * 2007-08-03 2017-08-23 Eli Lilly And Company Use of an fgf-21 compound and a glp-1 compound for the treatment of obesity
CN101969928B (zh) * 2007-10-24 2014-05-07 曼金德公司 活性剂的递送
US8785396B2 (en) 2007-10-24 2014-07-22 Mannkind Corporation Method and composition for treating migraines
WO2009058662A2 (en) 2007-10-30 2009-05-07 Indiana University Research And Technology Corporation Glucagon antagonists
MX2010004298A (es) 2007-10-30 2010-05-03 Univ Indiana Res & Tech Corp Compuestos que exhiben actividad antagonista de glucagon y agonista de glp-1.
EP2240155B1 (en) 2008-02-13 2012-06-06 Intarcia Therapeutics, Inc Devices, formulations, and methods for delivery of multiple beneficial agents
US8485180B2 (en) 2008-06-13 2013-07-16 Mannkind Corporation Dry powder drug delivery system
KR101655053B1 (ko) 2008-06-13 2016-09-07 맨카인드 코포레이션 건조 분말 흡입기 및 약물 투여 시스템
WO2009155257A1 (en) 2008-06-17 2009-12-23 Indiana University Research And Technology Corporation Glucagon analogs exhibiting enhanced solubility and stability physiological ph buffers
JP6108659B2 (ja) 2008-06-17 2017-04-05 インディアナ ユニバーシティー リサーチ アンド テクノロジー コーポレーションＩｎｄｉａｎａ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ 代謝疾患および肥満の治療のためのｇｉｐに基づいた混合アゴニスト
CN102123723B (zh) 2008-06-17 2016-05-25 印第安纳大学研究及科技有限公司 胰高血糖素/glp-1受体共激动剂
CA2728523C (en) 2008-06-20 2020-03-10 Mannkind Corporation An interactive apparatus and method for real-time profiling of inhalation efforts
EP2926825A1 (en) 2008-06-27 2015-10-07 Duke University Therapeutic agents comprising elastin-like peptides
TWI532497B (zh) 2008-08-11 2016-05-11 曼凱公司 超快起作用胰島素之用途
CN101337989B (zh) * 2008-08-28 2012-10-24 中国药科大学 一类新型胰高血糖素样肽-1(glp-1)类似物及其应用
CN101367873B (zh) * 2008-10-08 2011-05-04 南开大学 一种改构的胰高血糖素样肽-1的类似物和修饰物及其应用
US8889618B2 (en) 2008-11-07 2014-11-18 The General Hospital Corporation C-terminal fragments of glucagon-like peptide-1 (GLP-1)
AU2009327418A1 (en) 2008-12-19 2010-06-24 Indiana University Research And Technology Corporation Amide based glucagon superfamily peptide prodrugs
US8314106B2 (en) 2008-12-29 2012-11-20 Mannkind Corporation Substituted diketopiperazine analogs for use as drug delivery agents
DK2405963T3 (da) 2009-03-11 2013-12-16 Mannkind Corp Apparat, system og fremgangsmåde til at måle modstand i en inhalator
TWI547487B (zh) 2009-06-12 2016-09-01 曼凱公司 具限定比表面積之二酮基哌微粒子
SG176858A1 (en) 2009-06-16 2012-02-28 Univ Indiana Res & Tech Corp Gip receptor-active glucagon compounds
PL2454282T3 (pl) 2009-07-13 2015-08-31 Zealand Pharma As Acylowane analogi glukagonu
MX339031B (es) * 2009-08-14 2016-05-05 Phasebio Pharmaceuticals Inc Peptidos intestinales vasoactivos modificados.
EP3323423B1 (en) 2009-09-28 2020-06-17 Intarcia Therapeutics, Inc Rapid establishment and/or termination of substantial steady-state drug delivery
RU2012122162A (ru) * 2009-10-30 2013-12-10 Глитек,Инк. Гликолизированная форма аналога антигенного glp-1
JP5784622B2 (ja) 2009-11-03 2015-09-24 マンカインド コーポレ−ション 吸入活動をシミュレートするための装置及び方法
CN102770152B (zh) 2009-11-25 2016-07-06 阿瑞斯根股份有限公司 肽类的粘膜递送
WO2011075393A2 (en) 2009-12-18 2011-06-23 Indiana University Research And Technology Corporation Glucagon/glp-1 receptor co-agonists
KR20120123443A (ko) 2010-01-27 2012-11-08 인디애나 유니버시티 리서치 앤드 테크놀로지 코퍼레이션 대사 장애 및 비만 치료용 글루카곤 길항제-ｇｉｐ 항진제 콘쥬게이트
US9168288B2 (en) 2010-04-09 2015-10-27 Mount Sinai Hospital Methods for treating disorders of the gastrointestinal tract using a GLP-1 agonist
KR20130062931A (ko) 2010-05-13 2013-06-13 인디애나 유니버시티 리서치 앤드 테크놀로지 코퍼레이션 핵 호르몬 수용체 활성을 나타내는 글루카곤 슈퍼패밀리 펩티드
RU2012153753A (ru) 2010-05-13 2014-06-20 Индиана Юниверсити Рисерч Энд Текнолоджи Корпорейшн Пептиды глюкагонового суперсемейства, обладающие активностью в отношении сопряженных с g-белком рецепторов
JP5819946B2 (ja) * 2010-05-17 2015-11-24 ベータ ファーマシューティカルズ カンパニー リミテッド 新規のグルカゴン様ペプチド類似体、組成物、および使用方法
AU2011271097B2 (en) 2010-06-21 2014-11-27 Mannkind Corporation Dry powder drug delivery system and methods
KR20130102470A (ko) 2010-06-24 2013-09-17 인디애나 유니버시티 리서치 앤드 테크놀로지 코퍼레이션 아미드계 글루카곤 슈퍼패밀리 펩티드 프로드러그
JP2013530993A (ja) 2010-07-02 2013-08-01 アンジオケム インコーポレーテッド 治療用コンジュゲートのための短く且つｄ−アミノ酸を含有するポリペプチドおよびその使用
US9040481B2 (en) 2010-11-02 2015-05-26 The General Hospital Corporation Methods for treating steatotic disease
WO2012088116A2 (en) 2010-12-22 2012-06-28 Indiana University Research And Technology Corporation Glucagon analogs exhibiting gip receptor activity
US20120208755A1 (en) 2011-02-16 2012-08-16 Intarcia Therapeutics, Inc. Compositions, Devices and Methods of Use Thereof for the Treatment of Cancers
BR112013025395B1 (pt) 2011-04-01 2022-02-01 Mannkind Corporation Embalagem de bolha e método de fabricação de uma embalagem de bolhas
CN102180963B (zh) * 2011-04-22 2014-06-25 中国药科大学 胰高血糖素样肽-1(glp-1)类似物及其应用
CN102219850A (zh) * 2011-05-03 2011-10-19 上海格尼生物技术有限公司 新的长效glp-1化合物
CA2873553C (en) 2011-06-06 2020-01-28 Phasebio Pharmaceuticals, Inc. Use of modified vasoactive intestinal peptides in the treatment of hypertension
WO2012174472A1 (en) 2011-06-17 2012-12-20 Mannkind Corporation High capacity diketopiperazine microparticles
JP6179864B2 (ja) 2011-06-22 2017-08-16 インディアナ ユニヴァーシティ リサーチ アンド テクノロジー コーポレイション グルカゴン／ｇｌｐ−１レセプタコ−アゴニスト
RU2014101697A (ru) 2011-06-22 2015-07-27 Индиана Юниверсити Рисерч Энд Текнолоджи Корпорейшн Коагонисты рецепторов глюкагона/glp-1
EP2729157B1 (en) 2011-07-06 2019-01-16 The General Hospital Corporation A pentapeptide derived from the c-terminus of glucagon-like peptide 1 (glp-1) for use in treatment
RU2610175C2 (ru) * 2011-09-23 2017-02-08 Ново Нордиск А/С Новые аналоги глюкагона
WO2013063160A1 (en) 2011-10-24 2013-05-02 Mannkind Corporation Methods and compositions for treating pain
MX2014003579A (es) 2011-11-17 2015-04-10 Univ Indiana Res & Tech Corp Peptidos de la superfamilia de glucagon que presentan actividad del receptor de glucocorticoide.
US9340600B2 (en) 2012-06-21 2016-05-17 Indiana University Research And Technology Corporation Glucagon analogs exhibiting GIP receptor activity
SG10201605800UA (en) 2012-07-12 2016-09-29 Mannkind Corp Dry powder drug delivery system and methods
WO2014066856A1 (en) 2012-10-26 2014-05-01 Mannkind Corporation Inhalable influenza vaccine compositions and methods
CN103087178A (zh) * 2012-11-30 2013-05-08 中国药科大学 长效化胰高血糖素样肽-1(glp-1)类似物及其应用
CN103087179A (zh) * 2012-11-30 2013-05-08 中国药科大学 长效化胰高血糖素样肽-1(glp-1)类似物及其应用
CN103087177A (zh) * 2012-11-30 2013-05-08 中国药科大学 一类长效化胰高血糖素样肽-1(glp-1)类似物及其应用
CN103087175A (zh) * 2012-11-30 2013-05-08 中国药科大学 新型长效化胰高血糖素样肽-1(glp-1)类似物及其应用
CN103087176A (zh) * 2012-11-30 2013-05-08 中国药科大学 长效化胰高血糖素样肽-1(glp-1)类似物及其应用
EP2970149B1 (en) 2013-03-15 2019-08-21 MannKind Corporation Microcrystalline diketopiperazine compositions and methods
BR112015025464A2 (pt) 2013-04-18 2017-10-10 Novo Nordisk As coagonistas do receptor de glp-1/glucagon estáveis, prolongados para uso médico
US9925144B2 (en) 2013-07-18 2018-03-27 Mannkind Corporation Heat-stable dry powder pharmaceutical compositions and methods
US11446127B2 (en) 2013-08-05 2022-09-20 Mannkind Corporation Insufflation apparatus and methods
CN104262481B (zh) * 2013-08-09 2018-02-09 天津药物研究院有限公司 一种侧链修饰的长效glp‑1类似物的制备方法及其应用
CN103405753B (zh) * 2013-08-13 2016-05-11 上海仁会生物制药股份有限公司 稳定的促胰岛素分泌肽水针药物组合物
US10307464B2 (en) 2014-03-28 2019-06-04 Mannkind Corporation Use of ultrarapid acting insulin
WO2015172046A1 (en) 2014-05-08 2015-11-12 Phasebio Pharmaceuticals, Inc. Methods and compositions for treating cystic fibrosis
JP2017525656A (ja) 2014-06-04 2017-09-07 ノヴォ ノルディスク アー／エス 医療用のｇｌｐ−１／グルカゴン受容体コアゴニスト
US9889085B1 (en) 2014-09-30 2018-02-13 Intarcia Therapeutics, Inc. Therapeutic methods for the treatment of diabetes and related conditions for patients with high baseline HbA1c
US10561806B2 (en) 2014-10-02 2020-02-18 Mannkind Corporation Mouthpiece cover for an inhaler
TW201625672A (zh) * 2014-10-24 2016-07-16 默沙東藥廠 升糖素及ｇｌｐ－１受體之共促效劑
CN107427556B (zh) 2015-02-09 2022-02-25 费斯生物制药公司 用于治疗肌肉疾病和病症的方法和组合物
KR20240042548A (ko) 2015-06-03 2024-04-02 인타르시아 세라퓨틱스 인코포레이티드 임플란트 배치 및 제거 시스템들
TWI807580B (zh) * 2015-12-31 2023-07-01 南韓商韓美藥品股份有限公司 三重升糖素/glp-1/gip 受體促效劑
EP3733694A1 (en) 2016-05-16 2020-11-04 Intarcia Therapeutics, Inc Glucagon-receptor selective polypeptides and methods of use thereof
USD840030S1 (en) 2016-06-02 2019-02-05 Intarcia Therapeutics, Inc. Implant placement guide
USD860451S1 (en) 2016-06-02 2019-09-17 Intarcia Therapeutics, Inc. Implant removal tool
US10835580B2 (en) 2017-01-03 2020-11-17 Intarcia Therapeutics, Inc. Methods comprising continuous administration of a GLP-1 receptor agonist and co-administration of a drug
MX2020001525A (es) 2017-08-24 2020-03-20 Novo Nordisk As Composiciones de peptido similar al glucagon tipo 1 (glp-1) y sus usos.
WO2019140021A1 (en) 2018-01-12 2019-07-18 Eli Lilly And Company Combination therapy
CN120554480A (zh) 2018-04-05 2025-08-29 太阳医药工业有限公司 新型glp-1类似物
TWI705820B (zh) 2018-06-22 2020-10-01 美商美國禮來大藥廠 Gip/glp1促效劑組合物
US12018059B2 (en) 2018-10-11 2024-06-25 I2O Therapeutics, Inc. Human amylin analog polypeptides and methods of use
KR102786259B1 (ko) * 2018-10-30 2025-03-26 지아닝 리우 Glp-1 수용체 작용제 활성을 갖는 glp-1 폴리펩티드 및 그의 용도
CA3177693A1 (en) 2019-04-05 2020-10-05 Eli Lilly And Company Therapeutic uses of dulaglutide
CN110845601B (zh) * 2019-10-12 2021-01-19 广东药科大学 不同构型的glp-1类似肽修饰二聚体及其制备方法在治疗ii型糖尿病中的应用
CN115322794A (zh) 2020-01-11 2022-11-11 北京质肽生物医药科技有限公司 Glp-1和fgf21的融合蛋白的缀合物
EP4106724A1 (en) 2020-02-18 2022-12-28 Novo Nordisk A/S Glp-1 compositions and uses thereof
US11981718B2 (en) * 2020-05-27 2024-05-14 Ampsource Biopharma Shanghai Inc. Dual-function protein for lipid and blood glucose regulation
EP4288461A4 (en) 2021-07-14 2025-07-02 Beijing Ql Biopharmaceutical Co Ltd FUSION POLYPEPTIDES FOR METABOLIC DISORDERS

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1998019698A1 (en) * 1996-11-05 1998-05-14 Eli Lilly And Company Use of glp-1 analogs and derivatives administered peripherally in regulation of obesity
WO1999030731A1 (en) * 1997-12-16 1999-06-24 Eli Lilly And Company Glucagon-like peptide-1 crystals
WO2000007617A1 (en) * 1998-07-31 2000-02-17 Novo Nordisk A/S Use of glp-1 and analogues for preventing type ii diabetes
EP1294757A2 (en) * 2000-06-16 2003-03-26 Eli Lilly And Company Glucagon-like peptide-1 analogs

Family Cites Families (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP3262329B2 (ja) * 1990-01-24 2002-03-04 アイ． バックレイ，ダグラス 糖尿病治療に有用なｇｌｐ―１アナログ
US5545618A (en) 1990-01-24 1996-08-13 Buckley; Douglas I. GLP-1 analogs useful for diabetes treatment
US5424286A (en) 1993-05-24 1995-06-13 Eng; John Exendin-3 and exendin-4 polypeptides, and pharmaceutical compositions comprising same
US5705483A (en) * 1993-12-09 1998-01-06 Eli Lilly And Company Glucagon-like insulinotropic peptides, compositions and methods
PT1019077E (pt) 1997-08-08 2008-02-21 Amylin Pharmaceuticals Inc Novos compostos agonistas de exendina
DK1032587T4 (da) 1997-11-14 2013-04-08 Amylin Pharmaceuticals Llc Hidtil ukendte exendinagonist-forbindelser
AU757748B2 (en) 1997-11-14 2003-03-06 Amylin Pharmaceuticals, Inc. Novel exendin agonist compounds
DE69942306D1 (de) 1998-02-27 2010-06-10 Novo Nordisk As Abkömmlinge von glp-1 analogen
AU2610799A (en) 1998-02-27 1999-09-15 Novo Nordisk A/S Glp-1 derivatives with helix-content exceeding 25 per cent, forming partially structured micellar-like aggregates
US6429197B1 (en) * 1998-10-08 2002-08-06 Bionebraska, Inc. Metabolic intervention with GLP-1 or its biologically active analogues to improve the function of the ischemic and reperfused brain
ATE437891T1 (de) * 2000-12-07 2009-08-15 Lilly Co Eli Glp-1 fusionsproteine
EP2022505B1 (en) * 2001-07-31 2011-12-14 The Government of the United States of America, as represented by the Secretary of the Department of Health and Human Services GLP-1, exendin-4, peptide analogs and uses thereof
CA2770388A1 (en) * 2009-08-07 2011-02-10 Perry Felix Method and apparatus for surface and subsurface sanitizing of food products in a cooking appliance using ultraviolet light

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1998019698A1 (en) * 1996-11-05 1998-05-14 Eli Lilly And Company Use of glp-1 analogs and derivatives administered peripherally in regulation of obesity
WO1999030731A1 (en) * 1997-12-16 1999-06-24 Eli Lilly And Company Glucagon-like peptide-1 crystals
WO2000007617A1 (en) * 1998-07-31 2000-02-17 Novo Nordisk A/S Use of glp-1 and analogues for preventing type ii diabetes
EP1294757A2 (en) * 2000-06-16 2003-03-26 Eli Lilly And Company Glucagon-like peptide-1 analogs

Also Published As

Publication number Publication date
ATE424413T1 (de) 2009-03-15
DE60124710D1 (de) 2007-01-04
US7084243B2 (en) 2006-08-01
HU229208B1 (en) 2013-09-30
SK17782002A3 (sk) 2003-07-01
US20030220243A1 (en) 2003-11-27
SI1695983T1 (sl) 2009-08-31
CZ20024088A3 (cs) 2003-05-14
NO20025949D0 (no) 2002-12-11
DE60137876D1 (de) 2009-04-16
EP1695983A2 (en) 2006-08-30
KR20030009537A (ko) 2003-01-29
CA2412004C (en) 2010-12-21
ES2275685T3 (es) 2007-06-16
HUP0301212A2 (hu) 2003-08-28
AR031701A1 (es) 2003-10-01
PT1695983E (pt) 2009-05-05
PT1294757E (pt) 2007-02-28
ES2321439T3 (es) 2009-06-05
NZ522330A (en) 2004-11-26
MY137350A (en) 2009-01-30
NO20025949L (no) 2002-12-11
PL206302B1 (pl) 2010-07-30
DZ3388A1 (fr) 2001-12-27
AU6479101A (en) 2002-01-02
EA008837B1 (ru) 2007-08-31
EA200300026A1 (ru) 2003-04-24
US20060263849A1 (en) 2006-11-23
IL153453A0 (en) 2003-07-06
EG24755A (en) 2010-07-26
TWI321134B (en) 2010-03-01
HRP20020996B1 (hr) 2011-09-30
EP1294757A2 (en) 2003-03-26
AU2001264791B2 (en) 2006-11-23
KR100847615B1 (ko) 2008-07-21
WO2001098331A3 (en) 2003-01-03
JP4716641B2 (ja) 2011-07-06
CN100469791C (zh) 2009-03-18
HRP20020996A2 (en) 2004-02-29
EP1695983A3 (en) 2007-02-21
HU229108B1 (en) 2013-09-30
IL153453A (en) 2009-11-18
DE60124710T2 (de) 2007-09-13
CA2412004A1 (en) 2001-12-27
NO330686B1 (no) 2011-06-06
EP1695983B1 (en) 2009-03-04
EP1294757B1 (en) 2006-11-22
PE20011363A1 (es) 2002-01-15
BR0111562A (pt) 2003-04-15
WO2001098331A2 (en) 2001-12-27
HK1055121A1 (en) 2003-12-24
ATE346093T1 (de) 2006-12-15
CN1468258A (zh) 2004-01-14
PL360406A1 (en) 2004-09-06
CY1105917T1 (el) 2011-04-06
HUP0301212A3 (en) 2004-09-28
US7498308B2 (en) 2009-03-03
DK1294757T3 (da) 2007-03-19
MXPA02012203A (es) 2003-06-06
SK287757B6 (sk) 2011-08-04
DK1695983T3 (da) 2009-05-18
CY1109061T1 (el) 2014-07-02
JP2004501162A (ja) 2004-01-15

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP4716641B2 (ja) グルカゴン様ペプチド−１類似体
KR100593348B1 (ko) 글루카곤-유사 펩티드-1 유사체
AU2001264791A1 (en) Glucagon-like peptide-1 analogs
CN100540565C (zh) 修饰的Exendins及其应用
ZA200210098B (en) Glucagon-like peptide-1 analogs.
HK1055121B (en) Glucagon-like peptide-1 analogs
US20060252693A1 (en) Glucagon-like peptide-1 analogs
HK1095045B (en) Modified exendins and uses thereof

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A Patent lapsed due to non-payment of fee

Effective date: 20140601