CZ299141B6 - Zpusob syntézy peptidu LHRH - Google Patents
Zpusob syntézy peptidu LHRH Download PDFInfo
- Publication number
- CZ299141B6 CZ299141B6 CZ20031634A CZ20031634A CZ299141B6 CZ 299141 B6 CZ299141 B6 CZ 299141B6 CZ 20031634 A CZ20031634 A CZ 20031634A CZ 20031634 A CZ20031634 A CZ 20031634A CZ 299141 B6 CZ299141 B6 CZ 299141B6
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- boc
- trp
- gly
- protected
- resin
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 30
- 101000904173 Homo sapiens Progonadoliberin-1 Proteins 0.000 title abstract 2
- 102100024028 Progonadoliberin-1 Human genes 0.000 title abstract 2
- 101000996723 Sus scrofa Gonadotropin-releasing hormone receptor Proteins 0.000 title abstract 2
- XLXSAKCOAKORKW-UHFFFAOYSA-N gonadorelin Chemical compound C1CCC(C(=O)NCC(N)=O)N1C(=O)C(CCCN=C(N)N)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)CNC(=O)C(NC(=O)C(CO)NC(=O)C(CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)C(CC=1NC=NC=1)NC(=O)C1NC(=O)CC1)CC1=CC=C(O)C=C1 XLXSAKCOAKORKW-UHFFFAOYSA-N 0.000 title abstract 2
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 title description 7
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims abstract description 32
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 claims abstract description 15
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 claims abstract description 8
- 230000007017 scission Effects 0.000 claims abstract description 8
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 claims abstract description 7
- 125000000430 tryptophan group Chemical group [H]N([H])C(C(=O)O*)C([H])([H])C1=C([H])N([H])C2=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C12 0.000 claims abstract description 6
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims abstract description 4
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 60
- 229920005989 resin Polymers 0.000 claims description 55
- 239000011347 resin Substances 0.000 claims description 55
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 31
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 30
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 28
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 claims description 27
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 claims description 27
- -1 Boc group Chemical group 0.000 claims description 18
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 13
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 claims description 12
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 12
- VXKHXGOKWPXYNA-PGBVPBMZSA-N triptorelin Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)NCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@H](CC=1N=CNC=1)NC(=O)[C@H]1NC(=O)CC1)C1=CC=C(O)C=C1 VXKHXGOKWPXYNA-PGBVPBMZSA-N 0.000 claims description 12
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 11
- QIVBCDIJIAJPQS-SECBINFHSA-N D-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-SECBINFHSA-N 0.000 claims description 9
- QUSNBJAOOMFDIB-UHFFFAOYSA-N Ethylamine Chemical compound CCN QUSNBJAOOMFDIB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- 238000001816 cooling Methods 0.000 claims description 9
- 125000002485 formyl group Chemical group [H]C(*)=O 0.000 claims description 8
- 125000002088 tosyl group Chemical group [H]C1=C([H])C(=C([H])C([H])=C1C([H])([H])[H])S(*)(=O)=O 0.000 claims description 8
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 8
- HSQIYOPBCOPMSS-ZETCQYMHSA-N (2s)-5-(diaminomethylideneamino)-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]pentanoic acid Chemical class CC(C)(C)OC(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N HSQIYOPBCOPMSS-ZETCQYMHSA-N 0.000 claims description 7
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 7
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 7
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 claims description 7
- 239000003880 polar aprotic solvent Substances 0.000 claims description 6
- 150000003335 secondary amines Chemical class 0.000 claims description 6
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 claims description 5
- 150000004702 methyl esters Chemical class 0.000 claims description 5
- 239000012026 peptide coupling reagents Substances 0.000 claims description 5
- 150000003141 primary amines Chemical class 0.000 claims description 5
- NQIHMZLGCZNZBN-PXNSSMCTSA-N Trp-Trp Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](NC(=O)[C@H](CC=3C4=CC=CC=C4NC=3)N)C(O)=O)=CNC2=C1 NQIHMZLGCZNZBN-PXNSSMCTSA-N 0.000 claims description 4
- 150000003946 cyclohexylamines Chemical class 0.000 claims description 4
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 claims description 4
- 239000012047 saturated solution Substances 0.000 claims description 4
- 125000003941 D-tryptophan group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C2C(C([C@@](N([H])[H])(C(=O)[*])[H])([H])[H])=C([H])N([H])C2=C1[H] 0.000 claims description 3
- 229920005990 polystyrene resin Polymers 0.000 claims description 3
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 3
- AYMLQYFMYHISQO-QMMMGPOBSA-N (2s)-3-(1h-imidazol-3-ium-5-yl)-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]propanoate Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CN=CN1 AYMLQYFMYHISQO-QMMMGPOBSA-N 0.000 claims description 2
- JLLYLQLDYORLBB-UHFFFAOYSA-N 5-bromo-n-methylthiophene-2-sulfonamide Chemical compound CNS(=O)(=O)C1=CC=C(Br)S1 JLLYLQLDYORLBB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 125000002252 acyl group Chemical group 0.000 claims description 2
- 239000012964 benzotriazole Substances 0.000 claims description 2
- 230000005587 bubbling Effects 0.000 claims description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 2
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 claims description 2
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 claims 1
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 claims 1
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 claims 1
- 125000001041 indolyl group Chemical group 0.000 abstract description 2
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 54
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 51
- 239000000047 product Substances 0.000 description 21
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 108700012941 GNRH1 Proteins 0.000 description 15
- 239000000579 Gonadotropin-Releasing Hormone Substances 0.000 description 13
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 11
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 10
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 238000009833 condensation Methods 0.000 description 8
- 230000005494 condensation Effects 0.000 description 8
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 8
- ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 1-Hydroxybenzotriazole Chemical compound C1=CC=C2N(O)N=NC2=C1 ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N hydroxybenzotriazole Substances O=C1C=CC=C2NNN=C12 NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 6
- HBAHZZVIEFRTEY-UHFFFAOYSA-N 2-heptylcyclohex-2-en-1-one Chemical compound CCCCCCCC1=CCCCC1=O HBAHZZVIEFRTEY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 229920001367 Merrifield resin Polymers 0.000 description 5
- BDNKZNFMNDZQMI-UHFFFAOYSA-N 1,3-diisopropylcarbodiimide Chemical compound CC(C)N=C=NC(C)C BDNKZNFMNDZQMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- BGRWYRAHAFMIBJ-UHFFFAOYSA-N diisopropylcarbodiimide Natural products CC(C)NC(=O)NC(C)C BGRWYRAHAFMIBJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 4
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- VRPJIFMKZZEXLR-UHFFFAOYSA-N 2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]acetic acid Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)NCC(O)=O VRPJIFMKZZEXLR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- ODHCTXKNWHHXJC-VKHMYHEASA-N 5-oxo-L-proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCC(=O)N1 ODHCTXKNWHHXJC-VKHMYHEASA-N 0.000 description 3
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- QUOGESRFPZDMMT-UHFFFAOYSA-N L-Homoarginine Natural products OC(=O)C(N)CCCCNC(N)=N QUOGESRFPZDMMT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- QUOGESRFPZDMMT-YFKPBYRVSA-N L-homoarginine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCCCNC(N)=N QUOGESRFPZDMMT-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 3
- NFVNYBJCJGKVQK-ZDUSSCGKSA-N N-[(Tert-butoxy)carbonyl]-L-tryptophan Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](NC(=O)OC(C)(C)C)C(O)=O)=CNC2=C1 NFVNYBJCJGKVQK-ZDUSSCGKSA-N 0.000 description 3
- ODHCTXKNWHHXJC-GSVOUGTGSA-N Pyroglutamic acid Natural products OC(=O)[C@H]1CCC(=O)N1 ODHCTXKNWHHXJC-GSVOUGTGSA-N 0.000 description 3
- ODHCTXKNWHHXJC-UHFFFAOYSA-N acide pyroglutamique Natural products OC(=O)C1CCC(=O)N1 ODHCTXKNWHHXJC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229960002885 histidine Drugs 0.000 description 3
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 3
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 3
- 229960004799 tryptophan Drugs 0.000 description 3
- NFVNYBJCJGKVQK-CYBMUJFWSA-N (2r)-3-(1h-indol-3-yl)-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]propanoic acid Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@@H](NC(=O)OC(C)(C)C)C(O)=O)=CNC2=C1 NFVNYBJCJGKVQK-CYBMUJFWSA-N 0.000 description 2
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 2
- 102000012673 Follicle Stimulating Hormone Human genes 0.000 description 2
- 108010079345 Follicle Stimulating Hormone Proteins 0.000 description 2
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- FXHOOIRPVKKKFG-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylacetamide Chemical compound CN(C)C(C)=O FXHOOIRPVKKKFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N N-Butanol Chemical compound CCCCO LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 2
- DKGAVHZHDRPRBM-UHFFFAOYSA-N Tert-Butanol Chemical compound CC(C)(C)O DKGAVHZHDRPRBM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- MUMGGOZAMZWBJJ-DYKIIFRCSA-N Testostosterone Chemical compound O=C1CC[C@]2(C)[C@H]3CC[C@](C)([C@H](CC4)O)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 MUMGGOZAMZWBJJ-DYKIIFRCSA-N 0.000 description 2
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000556 agonist Substances 0.000 description 2
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 2
- 229960003121 arginine Drugs 0.000 description 2
- TVFDJXOCXUVLDH-UHFFFAOYSA-N caesium atom Chemical class [Cs] TVFDJXOCXUVLDH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FJDQFPXHSGXQBY-UHFFFAOYSA-L caesium carbonate Chemical compound [Cs+].[Cs+].[O-]C([O-])=O FJDQFPXHSGXQBY-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 229910000024 caesium carbonate Inorganic materials 0.000 description 2
- RICFWCXESOWLSS-UHFFFAOYSA-M cesium;2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]acetate Chemical compound [Cs+].CC(C)(C)OC(=O)NCC([O-])=O RICFWCXESOWLSS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000013058 crude material Substances 0.000 description 2
- 239000012043 crude product Substances 0.000 description 2
- 125000000118 dimethyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 2
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 2
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 2
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 2
- 229940028334 follicle stimulating hormone Drugs 0.000 description 2
- 239000000543 intermediate Substances 0.000 description 2
- JXDYKVIHCLTXOP-UHFFFAOYSA-N isatin Chemical compound C1=CC=C2C(=O)C(=O)NC2=C1 JXDYKVIHCLTXOP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZXEKIIBDNHEJCQ-UHFFFAOYSA-N isobutanol Chemical compound CC(C)CO ZXEKIIBDNHEJCQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 2
- FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N ninhydrin Chemical compound C1=CC=C2C(=O)C(O)(O)C(=O)C2=C1 FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 2
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 2
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 2
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 2
- WROMPOXWARCANT-UHFFFAOYSA-N tfa trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F.OC(=O)C(F)(F)F WROMPOXWARCANT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZQEBQGAAWMOMAI-ZETCQYMHSA-N (2s)-1-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonyl]pyrrolidine-2-carboxylic acid Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O ZQEBQGAAWMOMAI-ZETCQYMHSA-N 0.000 description 1
- CNMAQBJBWQQZFZ-LURJTMIESA-N (2s)-2-(pyridin-2-ylamino)propanoic acid Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC1=CC=CC=N1 CNMAQBJBWQQZFZ-LURJTMIESA-N 0.000 description 1
- HOBACDWMUXDSHY-QMMMGPOBSA-N (2s)-2-(quinolin-2-ylamino)propanoic acid Chemical compound C1=CC=CC2=NC(N[C@@H](C)C(O)=O)=CC=C21 HOBACDWMUXDSHY-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- LAKPFBJORILZSA-ILDUYXDCSA-N (2s)-2-amino-3-[4-(pyrazine-2-carbonylamino)cyclohexyl]propanoic acid Chemical compound C1CC(C[C@H](N)C(O)=O)CCC1NC(=O)C1=CN=CC=N1 LAKPFBJORILZSA-ILDUYXDCSA-N 0.000 description 1
- DCLJSEPKYJSEHW-HNNXBMFYSA-N (2s)-3-[1-(4-methylphenyl)sulfonylimidazol-4-yl]-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]propanoic acid Chemical group C1=CC(C)=CC=C1S(=O)(=O)N1C=C(C[C@H](NC(=O)OC(C)(C)C)C(O)=O)N=C1 DCLJSEPKYJSEHW-HNNXBMFYSA-N 0.000 description 1
- JLIWGTMHYWJUPM-JEDNCBNOSA-N (2s)-3-hydroxy-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]propanoic acid;hydrate Chemical compound O.CC(C)(C)OC(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O JLIWGTMHYWJUPM-JEDNCBNOSA-N 0.000 description 1
- 125000004206 2,2,2-trifluoroethyl group Chemical group [H]C([H])(*)C(F)(F)F 0.000 description 1
- AYMLQYFMYHISQO-UHFFFAOYSA-N 2-[(Tert-butoxycarbonyl)amino]-3-(1H-imidazol-4-yl)propanoic acid Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)NC(C(O)=O)CC1=CN=CN1 AYMLQYFMYHISQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QCQCHGYLTSGIGX-GHXANHINSA-N 4-[[(3ar,5ar,5br,7ar,9s,11ar,11br,13as)-5a,5b,8,8,11a-pentamethyl-3a-[(5-methylpyridine-3-carbonyl)amino]-2-oxo-1-propan-2-yl-4,5,6,7,7a,9,10,11,11b,12,13,13a-dodecahydro-3h-cyclopenta[a]chrysen-9-yl]oxy]-2,2-dimethyl-4-oxobutanoic acid Chemical compound N([C@@]12CC[C@@]3(C)[C@]4(C)CC[C@H]5C(C)(C)[C@@H](OC(=O)CC(C)(C)C(O)=O)CC[C@]5(C)[C@H]4CC[C@@H]3C1=C(C(C2)=O)C(C)C)C(=O)C1=CN=CC(C)=C1 QCQCHGYLTSGIGX-GHXANHINSA-N 0.000 description 1
- 125000001255 4-fluorophenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C(*)=C([H])C([H])=C1F 0.000 description 1
- 239000004925 Acrylic resin Substances 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-MRVPVSSYSA-N D-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-MRVPVSSYSA-N 0.000 description 1
- 201000009273 Endometriosis Diseases 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 125000002059 L-arginyl group Chemical group O=C([*])[C@](N([H])[H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])N([H])C(=N[H])N([H])[H] 0.000 description 1
- 125000002066 L-histidyl group Chemical group [H]N1C([H])=NC(C([H])([H])[C@](C(=O)[*])([H])N([H])[H])=C1[H] 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- 102000009151 Luteinizing Hormone Human genes 0.000 description 1
- 108010073521 Luteinizing Hormone Proteins 0.000 description 1
- MDXGYYOJGPFFJL-QMMMGPOBSA-N N(alpha)-t-butoxycarbonyl-L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)OC(C)(C)C MDXGYYOJGPFFJL-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- RHGKLRLOHDJJDR-UHFFFAOYSA-N Ndelta-carbamoyl-DL-ornithine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=O RHGKLRLOHDJJDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 1
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 description 1
- 150000001483 arginine derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 229960003589 arginine hydrochloride Drugs 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- YCNIBOIOWCTRCL-UHFFFAOYSA-N azane;2,2,2-trifluoroacetic acid Chemical class [NH4+].[O-]C(=O)C(F)(F)F YCNIBOIOWCTRCL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CBHOOMGKXCMKIR-UHFFFAOYSA-N azane;methanol Chemical compound N.OC CBHOOMGKXCMKIR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 1
- QRUDEWIWKLJBPS-UHFFFAOYSA-N benzotriazole Chemical compound C1=CC=C2N[N][N]C2=C1 QRUDEWIWKLJBPS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000001797 benzyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 230000000975 bioactive effect Effects 0.000 description 1
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 1
- 238000010511 deprotection reaction Methods 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- MYRTYDVEIRVNKP-UHFFFAOYSA-N divinylbenzene Substances C=CC1=CC=CC=C1C=C MYRTYDVEIRVNKP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 1
- 210000002149 gonad Anatomy 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 239000011261 inert gas Substances 0.000 description 1
- 239000012442 inert solvent Substances 0.000 description 1
- 229940040129 luteinizing hormone Drugs 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- OFYAYGJCPXRNBL-LBPRGKRZSA-N naphthalen-2-yl-3-alanine Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CC=CC2=C1 OFYAYGJCPXRNBL-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 1
- 239000002858 neurotransmitter agent Substances 0.000 description 1
- 125000003854 p-chlorophenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C(*)=C([H])C([H])=C1Cl 0.000 description 1
- 230000002028 premature Effects 0.000 description 1
- 238000004237 preparative chromatography Methods 0.000 description 1
- 229960002429 proline Drugs 0.000 description 1
- BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N propan-1-ol Chemical compound CCCO BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 239000012429 reaction media Substances 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 238000004366 reverse phase liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 125000003607 serino group Chemical group [H]N([H])[C@]([H])(C(=O)[*])C(O[H])([H])[H] 0.000 description 1
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 1
- 239000003270 steroid hormone Substances 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 125000005931 tert-butyloxycarbonyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(OC(*)=O)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 229960003604 testosterone Drugs 0.000 description 1
- 125000001493 tyrosinyl group Chemical group [H]OC1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- JPZXHKDZASGCLU-LBPRGKRZSA-N β-(2-naphthyl)-alanine Chemical compound C1=CC=CC2=CC(C[C@H](N)C(O)=O)=CC=C21 JPZXHKDZASGCLU-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
- C07K1/04—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length on carriers
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
- C07K1/06—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length using protecting groups or activating agents
- C07K1/061—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length using protecting groups or activating agents using protecting groups
- C07K1/068—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length using protecting groups or activating agents using protecting groups for heterocyclic side chains
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
- C07K7/23—Luteinising hormone-releasing hormone [LHRH]; Related peptides
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
- Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
- Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
- Y02P20/55—Design of synthesis routes, e.g. reducing the use of auxiliary or protecting groups
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biophysics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Indole Compounds (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
Abstract
Zpusob syntézy peptidu LHRH v pevné fázi, který obsahuje nejméne jeden tryptofanový zbytek, zahrnující docasnou ochranu indolového kruhu z tohoto tryptofanového zbytku pomocí postranní retezec chránicí skupiny, která snadno podléhá bázi, kdy je chránicí skupina odstranena behem odštepení uvedeného peptidu od pevného nosice.
Description
Oblast techniky
Vynález se týká způsobu syntézy peptidu LHRH, obsahujícího Trp zbytek, za použití pevné fáze.
Dosavadní stav techniky
Luteinizující hormon - uvolňující hormon (LHRH) je hypotalamem produkovaný neuropřenašeč, stabilizující sekreci luteinizujícího hormonu (LHRH) a hormonu (FSH) stimulujícího folikuly z hypoíyzy, který zase stimuluje syntézu steroidních hormonů, jako je testosteron, z pohlavních žláz. Mnoho analogů peptidů LHRH (např. agonisté a antagonisté) je běžně prodáváno pro léčení endometriózy, rakoviny prostaty, předčasné puberty a jiných hormonálně zprostředkovaných poruch. Syntézy takových analogů LHRH jsou obtížné a drahé.
Syntéza peptidů v pevné fázi byla zavedena v roce 1963 se záměrem překonat mnohé z problémů s čištěním meziproduktů, spojených se syntézou peptidů v kapalné fázi. Stewart a kol., Solid
Phase Peptide Synthesis, Pierce Chemical Co., 2. vydání (1984). Během syntézy v kapalné fázi se do peptidu v jakékoli požadované sekvenci zabudovávají (tj. zakondenzují) aminokyseliny, zatímco jeden konec řetězce (tj. C-zakončení) je ukotven k nerozpustnému nosiči. Jakmile je požadovaná sekvence na nosiči spojena dohromady, je peptid potom odpojen (tj. odštěpen) od nosiče.
Patent USA 4 010 125 (1977) popisuje syntézu [D-Trp6]- LHRH, při které jsou postranní řetězce čtyř z deseti zbytků agonistů LHRH chráněné (např. L-histidyl(tosyl), seryl(benzyl), tyrosyl(2,6di-Cl-Bzl) a L-arginyl(tosyl)). Avšak Coy a kol., Int. J. Peptide Protein Res., 14, 359 (1979) později popsal syntézu řady jiných analogů LHRH, při které minimální ochrana postranního řetězce, např. ochrana argininu pouze ve formě soli (tj. sůl argininu s kyselinou chlorovodíkovou (Arg.HCl)), poskytuje lepší výtěžek vzhledem k odpovídajícím syntézám s ochranou. Předkládaný vynález je orientován ke zjištění, že navzdory tendenci v oboru nechránit postranní řetězce aminokyselin při syntéze analogů LHRH, ochrana tryptofanové skupiny během syntézy v pevné fázi skutečně zvyšuje výtěžek analogů LHRH, které obsahují tryptofanový zbytek (např. [D-Trp6]LHRH).
Patent USA 4 569 927 popisuje peptidy, včetně dekapeptidů. U těchto peptidů je požadováno, aby D-Phe byla druhou aminokyselinou v sekvenci. Nejsou zde zveřejněny žádné bioaktivní LHRH deriváty, které mají histidin ve druhé poloze zbytku.
Patentový spis DE 3931731 zveřejňuje syntézu v tuhé fázi [D-Trp6]- LHRH na polyakrylové pryskyřici. Při této syntéze se využívají výhodné hydrofilní vlastnosti polyakrylových pryskyřic, na rozdíl od polystyrénových pryskyřic.
Patentový spis BE 904 458 zveřejňuje syntézu v tuhé fázi [D-Trp6]- LHRH, kde indolová skupina tryptofanu je chráněna formylem, a ve které je peptid vázán na benzhydrylaminopolymer kopolymeru benzhydrylaminopolystyren - 1% - divinylbenzen. Benzhydrylaminopolymer má hydrofilní vlastnosti.
Podstata vynálezu
Předmětem vynálezu je způsob přípravy peptidu vzorce pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Trp-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2j
-1 CZ 299141 B6 kde zbytek His je chráněn tosylovou skupinou a indol-NH skupina jakéhokoli zbytku Trp je chráněna, který zahrnuje kroky:
(a) připojení česné soli Boc-Gly na chlormethylovanou polystyrénovou pryskyřici pro získání Boc-Gly-pryskyřice;
(b) zbavení Boc-Gly-pryskyřice ochrany smícháním Boc-Gly-pryskyřice se směsí organické kyseliny odstraňující skupinu Boc pro získání soli organické kyseliny ITN-Gly10 pryskyřice;
(c) neutralizace soli organické kyseliny H2N-Gly-pryskyřice bází pro získání H2N-Glypryskyřice;
(d) kondenzace H2N-Gly-pryskyřice s aminokyselinou chráněnou Boc-a-aminem, přičemž uvedená chráněná aminokyselina odpovídá aminokyselině definované pro pGlu-His-Trp15 Ser-Tyr-D-Trp-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2 v pořadí uvedeném od C-zakončení do Nzakončení, která zahrnuje (i) reakci H2N-Gly-pryskyřice s aminokyselinou chráněnou Boc-a-aminem za přítomnosti kondenzačního činidla pro peptid k získání skupinou Boc chráněného kondenzovaného produktu;
(ii) odstranění skupiny Boc z kondenzovaného produktu chráněného skupinou Boc smícháním kondenzovaného produktu chráněného skupinou Boc s organickou kyselinou odstraňující skupinu Boc pro získání kondenzovaného produktu;
(iii) reakci kondenzovaného produktu s další amino-kyselinou chráněnou Boc-a-aminem za přítomnosti kondenzačního činidla pro peptid k získání skupinou Boc chráněného kondenzovaného produktu;
(iv) odstranění skupiny Boc z kondenzovaného produktu chráněného skupinou Boc smícháním kondenzovaného produktu chráněného skupinou Boc s organickou kyselinou odstraňující zbytek Boc pro získání dalšího kondenzovaného produktu;
(v) opakování kroků (d) (iii) a (d) (iv), dokud N-zakončení aminokyseliny z peptidu pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Trp-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2 je možno kondenzovat, odstra ňovat Boc zbytek z N-zakončení aminokyseliny a odstraňovat tosylový postranní řetězec chránící skupinu zbytku His pro získání chráněného dokončeného produktu peptid-pryskyřice;
(e) odštěpení a zbavení ochrany chráněného dokončeného produktu peptid-pryskyřice pro získání peptidu pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Trp-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2,což zahrnuje (i) vytvoření roztoku chráněného dokončeného produktu peptid-pryskyřice ve směsi metanol/ inertní polární aprotické rozpouštědlo;
(ii) ochlazení roztoku na teplotu v oblasti od 0 do 10 °C;
(iii) pomalé probublávání roztoku plynným amoniakem nebo ethylaminem a pokračování v chlazení, dokud roztok není plně nasycen amoniakem pro získání nasyceného roztoku;
(iv) míchání nasyceného roztoku bez chlazení po dobu v oblasti 15 až 36 hodin, dokud >95 % volného methylesteru není přeměněno na odpovídající amid, když je používán plynný amoniak, nebo odpovídající ethylamid, když je používán plynný ethyl45 amin; a (f) izolaci peptidu z uvedeného roztoku.
-2CZ 299141 B6
Výhodným způsobem podle bezprostředně předcházejícího postupu je, když jsou následující Boc-a-aminované aminokyseliny postupně kondenzovány od C-zakončení do N-zakončení, Ν-α-Boc-L-prolin, sůl N-a-Boc-L-argininu s kyselinou chlorovodíkovou (N-a-Boc-L-arginin.HC1), N-a-Boc-L-leucin, N-a-Boc-D-trypto-fan(N’-indolformyl), N-a-Boc-L-tyrosin, hydrát
N-a-Boc-L-serinu, N-a-Boc-tryptofan(N’-indolformyl), cyklohexylaminová sůl N-a-Boc-L-histidinu(tosylu) a pyroglutamová kyselina.
Výhodným způsobem podle bezprostředně předcházejícího postupu dále je, když formylová skupina chránící tryptofanový (Trp) postranní řetězec je odstraněna zpracováním s roztokem obsahujícím amoniak, primární amin nebo sekundární amin a alkohol.
Výhodným způsobem podle bezprostředně předcházejícího postupuje také, když uvedený roztok obsahuje amoniak a methanol.
Výhodným způsobem podle bezprostředně předcházejícího postupu je ten, při kterém krok izolace uvedeného peptidu z uvedeného roztoku zahrnuje:
(i) filtrování uvedeného roztoku pro získání filtrátu; a (ii) koncentrování uvedeného filtrátu.
Výhodným způsobem podle bezprostředně předcházejícího postupu je ten, při kterém je také používán 1-hydroxy-benzotriazol (HOBT), když je kondenzován N-a-Boc-D-trypto-fan(N’indolformyl), Ν-α-Boc-L-tyrosin, hydrát Ν-α-Boc-L-serinu a N-a-Boc-tryptofan(N’-indolformyl).
Předložený vynález dále poskytuje způsob pro syntézu v pevné fázi peptidu vzorce pGlu-HisTrp-Ser-Tyr-D-Trp-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2 který zahrnuje dočasnou ochranu jakéhokoliv tryptofanového zbytku pomocí chránící skupiny postranního řetězce, která snadno podléhá bázi, a kde se uvedená chránící skupina odstraňuje během štěpení peptidu pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Trp-LeuArg-Pro-Gly-NH2 od pevného nosiěe reakcí s bází.
Výhodným způsobem podle bezprostředně předcházejícího postupu je dále ten, při kterém uvedenou skupinou chránící Trp nebo D-Trp postranní řetězec je acylová skupina.
Výhodným způsobem podle bezprostředně předcházejícího postupu je rovněž ten, při kterém uvedená skupina chránící Trp nebo D-Trp postranní řetězec je odstraněna zpracováním s roztokem, který obsahuje amoniak, primární amin nebo sekundární amin a alkohol.
Dalším výhodným způsobem podle bezprostředně předcházejícího postupu je ten, při kterém uvedenou skupinou chránící postranní řetězec je formyl a uvedenou bází je metanolový roztok, obsahující amoniak.
Výklad zkratek
BOC = terc-butoxykarbonyl
Cit - citrullin
CPzACAla = cis-3-(4-pyrazinylkarbonylaminocyklohexyl)alanin hArg(Bu) = N-guanidino(dimethyl)homoarginin hArg(Et)2 = N,N’-guanidino(dimethyl)homoarginin hArg(CH2CF3)2 = N,N’-guanidino-bis-(2,2,2-trifluorethyl) homoarginin
HOBT = 1-hydroxybenzotriazol Lys(iPr) = Nr-isopropyllysin β-Nal = β-1-naftylalanin nebo β-2-naftylalanin pokud není uvedeno jinak NicLys = NE-nicotinoyllysin Pal = pyridylalanin
-3CZ 299141 B6 p-Cl-Phe = 3-(4-chlorfenyl)alanin p-F-Phe = 3-(4-fluorfenyl)alanin PicLys = NE-pikolinoyllysin Qal = chinolylalanin.
Pokud není stanoveno jinak, mají všechny technické a vědecké termíny zde použité stejný význam, jak je běžně chápán odborníkem v oboru.
Peptid vzorce pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Trp-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2 může být připraven syntézou peptidu v pevné fázi za použití Boc chemie na Merrifieldově pryskyřici, po které následuje odštěpení peptidu od pryskyřice amoniakem, primárním aminem nebo sekundárním aminem v alkoholu pro získání peptidu pojmenovaného v názvu.
Prvním krokem v takovém postupu podle tohoto vynálezu je napojit česnou sůl aminokyseliny z C-zakoněení, Boc-Gly, na Merrifieldovu pryskyřici přes esterové spojení. Česná sůl Boc-Gly je vytvářena přidáním Boc-Gly k uhličitanu česnému ve směsi methanolu a vody. Česná sůl BocGly je sušena ve vakuu a potom ponechána reagovat s chlormethylbenzylovými skupinami na polystyrenu v bezvodém polárním aprotickém rozpouštědle jako je dimethylformamid (DMF). Tato reakce probíhá od asi 24 do 48 hodin, výhodně po asi 36 hodin při teplotě od asi 45 do
60 °C, s výhodou 50 °C. Zreagovaná pryskyřice se potom filtruje, promyje vodou, polárním aprotickým rozpouštědlem, jako je DMF, a alkoholem, jako je methanol, a potom se suší do konstantní hmotnosti výhodně za sníženého tlaku. Vysušená pryskyřice může být testována na stanovení obsahu Boc-Gly, který je vyjádřen v mmol Gly na gram suché pryskyřice. Vypočtená hodnota je používána k stanovení měřítka sestavné reakce pokud jde o spotřebu následně vstupující látky a výpočtů teoretického výtěžku.
Syntéza peptidu vzorce pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Trp-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2 může být prováděna na Boc-Gly-pryskyřici obsažené ve skleněném reaktoru se sintrovanými skleněnými diskovými filtry u dna reaktoru. Reaktor je míchán mechanickým míchadlem a sušen působením tlaku inertního plynu, například dusíku, pro protlačení kapalin sintrovaným diskem u dna, zatímco pryskyřice je zadržována v reaktoru. Nejprve skupina Boc z Boc-Gly je odstraněna (např. zbavením ochrany) z Gly-pryskyřice smícháním Gly-pryskyřice dvakrát se směsí organické kyseliny v chlorovaném rozpouštědle, výhodně 25% kyselině trifluoroctové (TFA) v dichlormethanu (DCM), nejprve po asi 2 minuty a potom po asi 25 minut a poté následuje sušení podporované tlakem dusíku. Gly-pryskyřice je promyta třikrát DCM a dvakrát alkoholem, např.isopropylalkoholem (IPA), a výsledná aminová sůl s TFA je dvakrát neutralizována bází v inertním rozpouštědle, výhodně 10% triethylaminovou bází v DCM po asi 5 minut pokaždé a znovu třikrát promyta DCM. Pryskyřice je potom kondenzována s 2,5 molámím ekvivalentem směsí aminokyselin chráněných Boc-a-aminem, odpovídající aminokyselinám popsanými pro vzorec pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Trp-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2 postupně od C-zakončení po N-zakončení za použití kondenzačního činidla pro peptid, výhodně diisopropyl-karbodiimidu (DIC), v polárním aprotickém rozpouštědle, s výhodou směsích DMF/DCM jako reakčním prostředí. Každá kondenzace je následována promytími DMF a DCM. Pryskyřice může být testována pomocí Kaiserova ninhydrinu pokud jde o úplné dokončení každé kondenzace kromě kondenzace argininu, který může být testován použitím isatinu pro zjištění sekundárního aminu ze zbytkového nezkondenzovaného prolinu. Skupina Boc je odstraněna z každé kondenzované aminokyseliny po testování podle výše uvedeného popisu.
Následující chráněné aminokyseliny, odpovídající aminokyselinám podle vzorce pGlu-His-Trp50 Ser-Tyr-D-Trp-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2 jsou s výhodou používány při syntéze podle tohoto vynálezu: Ν-α-Boc-L-prolin, sůl s kyselinou chlorovodíkovou N-a-Boc-L-argininu (N-a-Boc-Larginin.HCl), N-a-Boc-L-leucin, N-a-Boc-D-tryptofan(N’-indolformyl), N-a-Boc-L-tyrosin, hydrát N-a-Boc-L-serinu, cyklohexylaminová sůl N-a-Boc-L-histidinu(tosylu) a pyroglutamová kyselina.
-4CZ 299141 B6
1-Hydroxybenzotriazol (HOBT) může být také použit (3 až 5 ekv.), když jsou kondenzovány chráněné deriváty D-Trp, Tyr, Ser a Trp. Tosylová postranní řetězec chránící skupina histidinu je odstraněna dvěma zpracováními s HOBT v DMF po jednu hodinu (každé) po kondenzaci závěrečné aminokyseliny. Boc-D-tryptofan a Boc-L-tryptofan jsou postranní řetězce chráněné formylem na dusíku indolového kruhu. Formyl je později odstraněn během odštěpení peptidu od pryskyřice za použití báze.
Dokončený peptid-pryskyřice je vymyt do tárované nálevky ze sintrovaného skla pomocí inertního chlorovaného rozpouštědla jako je DCM, promyt dvakrát alkoholem jako je metanol a ío sušen ve vakuu. Vysušený peptid-pryskyřice je převeden do jednolitrové tříhrdlé baňky s kulatým dnem. Směs 9 : 1 metanol/DMF při asi 15 ml na gram peptid-pryskyřice je přidána do baňky s kulatým dnem. Roztok je ochlazen na teplotu asi <10 °C, a jestliže je na C-zakončení žádoucí amidová forma peptidu, je pomalu probubláván plynným amoniakem za silného chlazení, dokud není plně nasycen (asi 1 hodina navíc), ve kterém je peptid uvolněn od pryskyřice ve formě volného metylesterového meziproduktu. Roztok se nechá dále promíchávat bez chlazení po dobu asi 15 až 36 hodin, přičemž během této doby přibližně >95 % volného metylesteru zkonvertuje na odpovídající amidový produkt. Postup reakce může být sledován např. použitím vysokotlaké kapalinové chromatografie (HPLC) a může být ukončen, když je dosažen žádoucí stupeň dokončení reakce. Tento produkt je filtrován v roztoku nálevkou ze sintrovaného skla a prysky20 řiče je několikrát vymyta metanolem a DMF. Všechny výplachy a filtráty jsou kondenzovány na velmi hustý olej. Přidá se etyl-acetát a roztok se trituruje pro solidifikaci produktu, dekantuje se a triturace s etyl-acetátem se znovu opakuje. Surový produkt je rozpuštěn v metanolu a je přidán stejný objem 4N kyseliny octové. Roztok se odpařuje pro odstranění veškerého methanolu. Produkt se zředí s 4N kyselinou octovou.
Etylamidová forma na C-zakončení peptidu se může získat nahrazením amoniaku etylaminem v postupu podle bezprostředně předcházejícího odstavce, při kterém se teplota roztoku během saturace etylaminem udržuje pod asi <16 °C a výhodně v rozsahu od přibližně 5 do asi 15 °C.
Surový materiál může být čištěn opakovanými cykly preparativní chromatografie s opačnými fázemi a lyofilizován pro získání konečného produktu.
Pro odborníka v oboru je zřejmé, že mohou být použity jiné rozpouštědlové systémy, včetně, ale bez omezení, alkoholů s nízkou molekulovou hmotností jako je etanol, propanol, isopropanol, butanol, isobutanol, terc-butanol a podobná, jiná polární aprotická rozpouštědla a jejich směsi.
Příklady provedení vynálezu
Syntéza p-Glu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Trp-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2([D-Trp6]LHRH-NH2) ([D-Trp6]LHRH-NH2) se připraví syntézou peptidu v pevné fázi za využití Boc chemie na Merrifieldově pryskyřici, po které následuje odštěpení peptidu od pryskyřice pomocí metanolového amoniaku pro získání peptidu pojmenovaného v názvu.
Prvním krokem je připojení česné soli C-zakončení aminokyseliny, Boc-glycinu, k Merrifieldově pryskyřici přes esterové spojení. Česná sůl Boc-glycinu se vytváří reakcí Boc-glycinu (40,9 g) s uhličitanem česným (37,9 g) ve směsi metanolu a vody (80 ml/40 ml). Česná sůl Boc-glycinu se suší ve vakuu a potom se nechá reagovat s chlormetylbenzylovými skupinami na polystyreno50 vých kuličkách (Merrifieldova pryskyřice; Advanced Chemtech, 88,2 g) v bezvodém dimetylformamidu (DMF; 200 ml). Tato reakce se provádí po asi 36 hodin při asi 50 °C v rotační odparce Buchi™ Model 110. Zreagovaná pryskyřice se potom filtruje, promyje vodou, DMF a metanolem a potom se suší na konstantní hmotnost při teplotě T<35 °C ve vakuu. Vysušená pryskyřice se potom testuje na stanovení obsahu Boc-glycinu, který se vyjadřuje v mmol glycinu na gram suché pryskyřice. Zjištěná vypočtená hodnota 0,872 mmol/g se používá pro stanovení
-5CZ 299141 B6 přesného měřítka sestavné reakce pokud jde o spotřebu následně vstupující látky a výpočty teoretického výtěžku.
Syntéza peptidu se provádí na Boc-glycin-pryskyřici (12,5 g), vložené do 500ml skleněného reaktoru se sintrovanými skleněnými diskovými filtry jak u dna, tak i v horní části reaktoru. Reaktor se plní ode dna a protřepává se převracením (otočením o 180 stupňů ve 3 sekundách). Nejprve se odštěpí skupina Boc (tj. odstraní se) od glycin-pryskyřice smícháním pryskyřice dvakrát se 175 ml 25% trifluoroctové kyseliny (TFA) v dichlormetanu (DCM) (2 minuty a 25 minut), po kterém následuje sušení podporované tlakem dusíku. Pryskyřice se třikrát promyje ío 125 ml DCM a dvakrát 125 ml isopropylalkoholu (1PA) a potom třikrát 125 ml DCM. Výsledná aminová sůl s kyselinou trifluorocotovou se dvakrát neutralizuje 125 ml 10% triethylaminové báze v DCM po 5 minut pokaždé a znovu se třikrát promyje DCM.
Pryskyřice se potom kondenzuje a odstraňuje pomocí 2,5 molámího ekvivalentu směsi z násle15 dující Boc chráněné amino-kyseliny s 4,2 ml diisopropylkarbodiimidu (DIC) v 16 ml DMF a 47 ml DCM; 5,84 g Boc-L-Prolinu, 8,93 g soli s kyselinou chlorovodíkovou Boc-L-Argininu (Boc-L-Arginin.HCl), 6,77 g Boc-L-Leucinu, 9,0 g Boc-D-Tryptofan(formylu), 7,64 g Boc-LTyrosinu, 9,0 g Boc-L-Tryptofan(formylu), 6,06 g hydrátu Boc--L-Serinu, 16 g cyklohexylaminové soli Boc-L-Histidin(tosylu) a 13,5 g kyseliny pyroglutamové. Také se používá 1-hydroxy20 benzotriazol (HOBT) (3 až 5 ekv.) při kondenzacích D-Trp, Tyr, Ser a Trp. Při kondenzaci Arg se namísto DMF a DCM používá 75 ml dimethylacetamidu (DMA). Pryskyřice se promyje DMF a DCM a zkouší se Kaiserovým ninhydrinem na stupeň dokončení kondenzace. Skupina Boc se odstraní z každé kondenzované aminokyseliny podle výše uvedeného popisu. Histidin je postranní řetězec chráněný tosylem, který se odstraní pomocí dvou zpracování 4,16 g HOBT v 105 ml DMF po jednu hodinu (každé) po kondenzaci konečné aminokyseliny. Boc-DTryptofan a Boc-L-Tryptofan jsou postranní řetězce chráněné formylem, který se odstraní v průběhu štěpení peptidu od pryskyřice.
Dokončený peptid-pryskyřice se vymyje do tárované nálevky ze sintrovaného skla pomocí DCM, promyje se dvakrát metanolem a suší se ve vakuu. Vysušený peptid-pryskyřice se převede do jednolitrové, tříhrdlé baňky s kulatým dnem. Do baňky se přidá 15 ml směsi 9 : 1 metanol/DMF (380 ml pro 10,9 mM množství) na gram peptid-pryskyřice. Roztok se ochladí na asi <10 °C a pomalu se probublává plynným amoniakem za silného chlazení, dokud není plně nasycen (asi 1 hodina navíc). Roztok se dále míchá bez chlazení po asi od 15 do 36 hodin, dokud se >95 % volného metylesteru nekonvertuje na amidový produkt podle stanovení sledováním pomocí vysokotlaké kapalinové chromatografie (HPLC). Produkt se fdtruje v roztoku pomocí nálevky ze sintrovaného skla a pryskyřice se několikrát vymývá metanolem a DMF. Všechny výplachy a filtráty se v rotační odparce při teplotě T<40 °C kondenzují na velmi hustý olej. Přidá se etylacetát (0,08 litru) a roztok se trituruje pro solídifikaci produktu, dekantuje se a znovu se trituruje s 0,08 litru etyl-acetátu. Tvrdý gumovitý produkt se nechá nasáknout v etyl-acetátu přes noc a kapalina se dekantuje. Surový produkt se rozpustí v metanolu (0,07 litru) a přidá se stejný objem 4N kyseliny octové. Roztok se odpařuje pro odstranění veškerého metanolu v rotační odparce při teplotě T<40 °C. Produkt se zředí 4N kyselinou octovou na přibližně 35 gramů produktu na litr.
Surová látka se potom čistí opakovanými cykly chromatografie s opačnými fázemi a lyofilizuje se pro získání konečného produktu (8,4 mg, 59% výtěžek) jako bílé pevné látky při >99% čistotě.
Claims (9)
- PATENTOVÉ NÁROKY5 1. Způsob přípravy peptidu vzorce pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Trp-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2; kde zbytek His je chráněn tosylovou skupinou a indol-NH skupina jakéhokoli zbytku Trp je chráněna, ío který zahrnuje kroky:(a) připojení česné soli Boc-Gly na chlormethylovanou polystyrénovou pryskyřici pro získání Boc-Gly-pryskyřice;(b) zbavení Boc-Gly-pryskyřice ochrany smícháním Boc-Gly-pryskyřice se směsí organické kyseliny odstraňující skupinu Boc pro získání soli organické kyseliny H2N-Gly15 pryskyřice;(c) neutralizace soli organické kyseliny H2N-Gly-pryskyřice bází pro získání H2N-Glypryskyřice;(d) kondenzace H2N-Gly-pryskyřice s aminokyselinou chráněnou Boc-a-aminem, přičemž uvedená chráněná aminokyselina odpovídá aminokyselině definované pro pGlu-His-Trp20 Ser-Tyr-D-Trp-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2 v pořadí uvedeném od C-zakončení do N-zakončení, která zahrnuje (i) reakci H2N-Gly-pryskyřice s aminokyselinou chráněnou Boc-a-aminem za přítomnosti kondenzačního činidla pro peptid k získání skupinou Boc chráněného kondenzovaného produktu;25 (ii) odstranění skupiny Boc z kondenzovaného produktu chráněného skupinou Boc smícháním kondenzovaného produktu chráněného skupinou Boc s organickou kyselinou odstraňující skupinu Boc pro získání kondenzovaného produktu;(iii) reakci kondenzovaného produktu s další amino-kyselinou chráněnou Boc-a-aminem za přítomnosti kondenzačního činidla pro peptid k získání skupinou Boc chráněného30 kondenzovaného produktu;(iv) odstranění skupiny Boc z kondenzovaného produktu chráněného skupinou Boc smícháním kondenzovaného produktu chráněného skupinou Boc s organickou kyselinou odstraňující zbytek Boc pro získání dalšího kondenzovaného produktu;(v) opakování kroků (d) (iii) a (d) (iv), dokud N-zakončení aminokyseliny z peptidu35 pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Trp-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2 je možno kondenzovat, odstraňovat Boc zbytek z N-zakončení aminokyseliny a odstraňovat tosylový postranní řetězec chránící skupinu zbytku His pro získání chráněného dokončeného produktu peptid-pryskyřice;(e) odštěpení a zbavení ochrany chráněného dokončeného produktu peptid-pryskyřice pro40 získání peptidu pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Trp-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2,což zahrnuje (i) vytvoření roztoku chráněného dokončeného produktu peptid-pryskyřice ve směsi metanol/ inertní polární aprotické rozpouštědlo;(ii) ochlazení roztoku na teplotu v oblasti od 0 do 10 °C;(iii) pomalé probublávání roztoku plynným amoniakem nebo ethylaminem a pokračování45 v chlazení, dokud roztok není plně nasycen amoniakem pro získání nasyceného roztoku;(iv) míchání nasyceného roztoku bez chlazení po dobu v oblasti 15 až 36 hodin, dokud >95 % volného methylesteru není přeměněno na odpovídající amid, když je-7CZ 299141 B6 používán plynný amoniak, nebo odpovídající ethylamid, když je používán plynný ethylamin; a (f) izolaci peptidu z uvedeného roztoku.5
- 2. Způsob podle nároku 1, vyznačující se tím, že následující Boc-a-aminované aminokyseliny jsou postupně kondenzovány od C-zakončení do N-zakončení, N-a-Boc-L-prolin, sůl N-a-Boc-L-argininu s kyselinou chlorovodíkovou (N-a-Boc-L-arginin.HCl), N-a-Boc-Lleucin, N-a-Boc-D—tryptofan(N’-indolformyl), N-a-Boc-L-tyrosin, hydrát N-a-Boc-L-serinu, N-a-Boc-tryptofan(N’-indolformyl), cyklohexylaminová sůl N-a-Boc-L-histidinu(tosylu) a pyroio glutamová kyselina.
- 3. Způsob podle nároku 2, vyznačující se tím, že formylová chránící skupina Trp postranního řetězce se odstraní zpracováním s roztokem, obsahujícím amoniak, primární amin nebo sekundární amin a alkohol.
- 4. Způsob podle nároku 3, vy z n a č uj í c í se t í m , že uvedený roztok obsahuje amoniak a methanol.
- 5. Způsob podle některého z nároků laž4, vyznačující se tím, žel -hydroxy20 benzotriazol (HOBT) se rovněž použije, když je kondenzován N-a-Boc-D-tryptofan(N’-indolformyl), N-a-Boc-L--tyrosin, hydrát Ν-α-Boc-L-serinu a N-a-Boc-tryptofan(N’-indolformyl).
- 6. Způsob podle nároku 1 pro syntézu v tuhé fázi peptidu pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Trp-LeuArg-Pro-Gly-NH2, definovaného v nároku 1, který zahrnuje dočasnou ochranu jakéhokoliv25 tryptofanového zbytku pomocí chránící skupiny postranního řetězce, která snadno podléhá bázi, vyznačující se tím, že se uvedená chránící skupina odstraňuje během štěpení peptidu pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Trp-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2 od pevného nosiče reakcí s bází.
- 7. Způsob podle nároku 6, vyznačující se tím, že uvedenou Trp nebo D-Trp30 postranní řetězec chránící skupinou je acylová skupina.
- 8. Způsob podle nároku 7, vyznačující se tím, že uvedená ochranná skupina Trp nebo D-Trp postranního řetězce se odstraní zpracováním s roztokem, obsahujícím amoniak, primární amin nebo sekundární amin a alkohol.
- 9. Způsob podle nároku 6, vyznačující se tím, že uvedenou ochrannou skupinou postranního řetězce je formyl a uvedenou bází je methanolový roztok obsahující amoniak.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| IE20001079 | 2000-12-22 | ||
| PCT/IE2001/000159 WO2002051861A2 (en) | 2000-12-22 | 2001-12-19 | Process for the synthesis of a peptide having a tryptophan residue |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ20031634A3 CZ20031634A3 (cs) | 2003-09-17 |
| CZ299141B6 true CZ299141B6 (cs) | 2008-04-30 |
Family
ID=11042704
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ20031634A CZ299141B6 (cs) | 2000-12-22 | 2001-12-19 | Zpusob syntézy peptidu LHRH |
Country Status (24)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US7122628B2 (cs) |
| EP (1) | EP1343808B1 (cs) |
| JP (1) | JP4064817B2 (cs) |
| KR (1) | KR100591832B1 (cs) |
| CN (2) | CN1481389A (cs) |
| AT (1) | ATE339442T1 (cs) |
| AU (1) | AU2002222439C1 (cs) |
| BR (1) | BR0116447B1 (cs) |
| CA (1) | CA2432708C (cs) |
| CZ (1) | CZ299141B6 (cs) |
| DE (1) | DE60123115T2 (cs) |
| DK (1) | DK1343808T3 (cs) |
| ES (1) | ES2266104T3 (cs) |
| HU (2) | HU230601B1 (cs) |
| IE (1) | IES20011090A2 (cs) |
| IL (2) | IL156258A0 (cs) |
| MX (1) | MXPA03005678A (cs) |
| NO (1) | NO325038B1 (cs) |
| NZ (1) | NZ526990A (cs) |
| PL (1) | PL205949B1 (cs) |
| PT (1) | PT1343808E (cs) |
| RU (1) | RU2276156C2 (cs) |
| WO (1) | WO2002051861A2 (cs) |
| ZA (1) | ZA200304809B (cs) |
Families Citing this family (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7091311B2 (en) | 1996-06-07 | 2006-08-15 | Smithkline Beecham Corporation | Peptides and compounds that bind to a receptor |
| EA010759B1 (ru) | 2002-09-18 | 2008-10-30 | Орто-Макнейл Фармасьютикал, Инк. | Способы увеличения продукции тромбоцитов и гематопоэтических стволовых клеток |
| EA009286B1 (ru) * | 2003-08-28 | 2007-12-28 | Орто-Макнейл Фармасьютикал, Инк. | Пептиды и соединения, которые связываются с рецептором |
| WO2007077112A1 (en) * | 2005-12-30 | 2007-07-12 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Methods for the synthesis of arginine-containing peptides |
| CN103517915B (zh) * | 2012-09-27 | 2015-11-25 | 深圳翰宇药业股份有限公司 | 一种制备布舍瑞林的方法 |
| US10308677B2 (en) | 2014-12-19 | 2019-06-04 | Cem Corporation | Coupling method for peptide synthesis at elevated temperatures |
| US9969769B2 (en) | 2014-12-19 | 2018-05-15 | Cem Corporation | Coupling method for peptide synthesis at elevated temperatures |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4569927A (en) * | 1984-02-23 | 1986-02-11 | The Salk Institute For Biological Studies | GnRH Antagonists IV |
| DE3931731A1 (de) * | 1988-09-24 | 1990-03-29 | Expansia Sa | Festphasenpeptidsynthese |
Family Cites Families (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4211693A (en) * | 1977-09-20 | 1980-07-08 | The Salk Institute For Biological Studies | Peptides with para-substituted phenylalanine |
| IL74827A (en) | 1984-05-21 | 1989-06-30 | Salk Inst For Biological Studi | Peptides active as gnrh antagonists and pharmaceutical compositions containing them |
| IT1203600B (it) * | 1985-12-06 | 1989-02-15 | Phidea Srl | Metodo per preparare il (d-trp6)-lhrh |
| US5175254A (en) * | 1988-09-24 | 1992-12-29 | Societe D'expansion Scientifque Expansia | Solid phase peptide synthesis using a polyacrylic support in aqueous solution |
| RU2043362C1 (ru) * | 1991-08-12 | 1995-09-10 | Синтекс (Ю-Эс-Эй) Инк. | Способ твердофазного синтеза пептидов |
| JPH05331188A (ja) | 1992-05-28 | 1993-12-14 | Nippon Chemiphar Co Ltd | トリペプチド、その製造方法及びエンドセリン拮抗剤 |
| RU2086561C1 (ru) * | 1995-09-25 | 1997-08-10 | Тихонов Александр Васильевич | Способ получения нонапептидэтиламида |
-
2001
- 2001-12-19 JP JP2002552954A patent/JP4064817B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 2001-12-19 PL PL361993A patent/PL205949B1/pl unknown
- 2001-12-19 CZ CZ20031634A patent/CZ299141B6/cs not_active IP Right Cessation
- 2001-12-19 RU RU2003122779/04A patent/RU2276156C2/ru not_active IP Right Cessation
- 2001-12-19 DK DK01272223T patent/DK1343808T3/da active
- 2001-12-19 AT AT01272223T patent/ATE339442T1/de active
- 2001-12-19 DE DE60123115T patent/DE60123115T2/de not_active Expired - Lifetime
- 2001-12-19 CA CA2432708A patent/CA2432708C/en not_active Expired - Lifetime
- 2001-12-19 IL IL15625801A patent/IL156258A0/xx active IP Right Grant
- 2001-12-19 HU HUP1400157A patent/HU230601B1/hu unknown
- 2001-12-19 PT PT01272223T patent/PT1343808E/pt unknown
- 2001-12-19 CN CNA018210384A patent/CN1481389A/zh active Pending
- 2001-12-19 EP EP01272223A patent/EP1343808B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2001-12-19 WO PCT/IE2001/000159 patent/WO2002051861A2/en active IP Right Grant
- 2001-12-19 CN CNA2007100047879A patent/CN101003563A/zh active Pending
- 2001-12-19 US US10/451,486 patent/US7122628B2/en not_active Expired - Lifetime
- 2001-12-19 AU AU2002222439A patent/AU2002222439C1/en not_active Expired
- 2001-12-19 BR BRPI0116447-3B1A patent/BR0116447B1/pt active IP Right Grant
- 2001-12-19 HU HU0302633A patent/HU229701B1/hu unknown
- 2001-12-19 ES ES01272223T patent/ES2266104T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2001-12-19 NZ NZ526990A patent/NZ526990A/xx not_active IP Right Cessation
- 2001-12-19 MX MXPA03005678A patent/MXPA03005678A/es active IP Right Grant
- 2001-12-19 KR KR1020037008232A patent/KR100591832B1/ko not_active Expired - Lifetime
- 2001-12-20 IE IE20011090A patent/IES20011090A2/en not_active IP Right Cessation
-
2003
- 2003-06-02 IL IL156258A patent/IL156258A/en unknown
- 2003-06-20 ZA ZA200304809A patent/ZA200304809B/en unknown
- 2003-06-20 NO NO20032852A patent/NO325038B1/no not_active IP Right Cessation
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4569927A (en) * | 1984-02-23 | 1986-02-11 | The Salk Institute For Biological Studies | GnRH Antagonists IV |
| DE3931731A1 (de) * | 1988-09-24 | 1990-03-29 | Expansia Sa | Festphasenpeptidsynthese |
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP1115739B1 (en) | Auxiliary for amide bond formation | |
| US7148195B2 (en) | LHRH antagonists having improved solubility properties | |
| CN105408344B (zh) | 肽-树脂结合物及其用途 | |
| JP5445456B2 (ja) | ジベンゾフルベンの除去方法 | |
| CZ299141B6 (cs) | Zpusob syntézy peptidu LHRH | |
| Ruczyński et al. | Problem of aspartimide formation in Fmoc‐based solid‐phase peptide synthesis using Dmab group to protect side chain of aspartic acid | |
| CN111770930A (zh) | 制备肽的方法 | |
| AU735939B2 (en) | Peptide synthesis with sulfonyl protecting groups | |
| RU2360921C2 (ru) | Получение пептидов соматостатина | |
| AU2002222439A1 (en) | Process for the synthesis of a peptide having a tryptophan residue | |
| CN113614100A (zh) | 用于制备地加瑞克的方法 | |
| CN115181158B (zh) | Fmoc基团裂解方法 | |
| HK1055749B (en) | Process for the synthesis of an lhrh peptide | |
| KR0152276B1 (ko) | Lh-rh 유사체의 일시적 최소 보호합성 방법 | |
| CN119823209A (zh) | 一种含马来酰亚胺酸的环肽合成方法 | |
| AU2005202990A1 (en) | Process for the synthesis of a peptide having a tryptophan residue | |
| US20220024971A1 (en) | Method for synthesizing peptides | |
| Perlman | The syntheses and binding studies of fourteen peptide analogs of the C-terminal segments of avian pancreatic polypeptide and neuropeptide [gamma] |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MK4A | Patent expired |
Effective date: 20211219 |