RU2003122779A

RU2003122779A - Способ синтеза пептида, содержащего остаток триптофана

Info

Publication number: RU2003122779A
Application number: RU2003122779/04A
Authority: RU
Inventors: Стивен Аллен ДЖЕКСОН (US); Стивен Аллен ДЖЕКСОН
Original assignee: Кинертон Лимитед (IE); Кинертон Лимитед
Priority date: 2000-12-22
Filing date: 2001-12-19
Publication date: 2005-02-20
Also published as: NZ526990A; AU2002222439C1; WO2002051861A3; BR0116447A; CN1481389A; EP1343808A2; HUP0302633A2; AU2002222439B2; ZA200304809B; PL205949B1; NO20032852L; PL361993A1; RU2276156C2; ATE339442T1; NO20032852D0; DE60123115T2; BR0116447B1; IL156258A; HUP0302633A3; US20040077827A1

Claims

1. Способ получения пептида с формулой (I)

где А¹ - это pGlu или N-Ac-D-β-Nal;

А² - это His, D-p-Cl-Phe или D-p-F-Phe;

А³ - это Trp или D-Trp;

А⁵ - это Tyr, NicLys, cPzACAla или PicLys;

А⁸ - это Arg, hArg(Et)₂, hArg(Bu), hArg(СН₂CF₃)₂ или Lys(iPr);

А¹⁰ - это Gly, D-Ala, или этот остаток отсутствует; и

R¹ - это NH₂ или NHEt;

который включает стадии:

(а) присоединения цезиевой соли Вос-А¹⁰, если А¹⁰ имеется, или Вос-Pro, если А¹⁰ отсутствует, к хлорметилированной полистирольной смоле с получением Вос-А¹⁰-смолы или Вос-Pro-смолы, соответственно;

(б) деблокирования Вос-А¹⁰-смолы или Вос-Pro-смолы посредством смешивания Вос-А¹⁰-смолы или Вос-Pro-смолы с Вос-деблокирующей органической кислотой с получением соли органической кислоты и H₂N-А¹⁰-смолы или соли органической кислоты и H₂N-Pro-смолы, соответственно;

(в) нейтрализации соли органической кислоты и Н₂N-А¹⁰-смолы или соли органической кислоты и H₂N-Pro-смолы основанием с получением H₂N-А¹⁰-смолы или H₂N-Pro-смолы, соответственно;

(г) соединения H₂N-A¹⁰-смолы или (H₂N-Pro-смолы с аминокислотой, содержащей Вос-защищенную α-аминогруппу, причем указанная аминокислота соответствует аминокислоте, определенной в формуле (1) по порядку, указанному с С-конца к N-концу, которое включает

(1) реагирование (H₂N-А¹⁰-смолы или H₂N-Pro-смолы с аминокислотой содержащей Вос-защищенную α-аминогруппу, в присутствии пептидобразующего агента с получением Вос-блокированного продукта соединения;

(2) отделение Вос-группы от Вос-блокированного продукта соединения посредством смешивания Вос-блокированного продукта соединения с Вос-деблокирующей органической кислотой с получением продукта соединения;

(3) реагирование продукта соединения со следующей аминокислотой, содержащей Вос-защищенную α-аминогруппу, в присутствии пептидобразующего агента с получением Вос-блокированного продукта соединения;

(4) отделение Вос-группы от Вос-блокированного продукта соединения посредством смешивания Вос-блокированного продукта соединения с Вос-деблокирующей органической кислотой с получением следующего продукта соединения;

(5) повторение стадий (г)(3) и (г)(4) до тех пор, пока не будет присоединена N-терминальная аминокислота пептида с формулой (1), а Вос-группа N-терминальной аминокислоты не будет деблокирована с получением защищенного законченного комплекса пептид-смола;

(д) расщепления и снятия защиты с защищенного законченного комплекса пептид-смола и снятия защиты с получением пептида с формулой (1), причем указанное расщепление и снятие защиты включает

(1) приготовление раствора защищенного законченного комплекса пептид-смола в смеси спирта и инертного полярного апротонного растворителя;

(2) охлаждение раствора до температуры примерно от 0 до 10°С;

(3) медленное пропускание пузырьков газообразного аммиака или газообразного этиламина через раствор и продолжение охлаждения до тех пор, пока раствор не будет хорошо насыщен аммиаком, с получением насыщенного раствора;

(4) перемешивание насыщенного раствора без охлаждения в течение примерно 15-36 ч до тех пор, пока более 95% свободного метилового эфира не преобразуется в соответствующий амид, если используется газообразный аммиак, или в соответствующий этиламид, если используется газообразный этиламин; и

(е) выделения указанного пептида из раствора.

2. Способ по п.1, отличающийся тем, что А¹⁰ является Gly.

3. Способ по п.2, отличающийся тем, что следующие аминокислоты, содержащие Вос-защищенную α-аминогруппу, присоединяют последовательно от С-конца к N-концу: N-α-Boc-L-пролин, N-α-Boc-L-аргинин HCl, N-α-Boc-L-лейцин, N-α-Вос-D-триптофан(N’-индол-формил), N-α-Boc-L-тирозин, N-α-Boc-L-серина гидрат, N-α-Вос-триптофан(N’-индол-формил), соль N-α-Вос-L-гистидин(тозил)-циклогексил-амина и пироглутаминовую кислоту.

4. Способ по п.3, отличающийся тем, что формильную защитную группу боковой цепи Trp удаляют посредством обработки раствором, содержащим аммиак, первичный амин или вторичный амин и спирт.

5. Способ по п.4, отличающийся тем, что указанный раствор содержит аммиак и метанол.

6. Способ по п.5, отличающийся тем, что указанный пептид с формулой (I) представляет собой pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Trp-Leu-Arg-Pro-Gly-NH₂.

7. Способ по п.6, отличающийся тем, что при присоединении N-a-Boc-D-триптофан(N’-индол-формила), N-α-Boc-L-тирозина, N-α-Boc-L-серина гидрата и N-α-Вос-триптофан(N’-индол-формила) также используется 1-гидроксибензотриазол (НОВТ).

8. Способ твердофазного синтеза пептида с формулой (II)

где А¹ - это pGlu или N-Ac-D-β-Nal;

А² - это His, D-p-Cl-Phe или D-p-F-Phe;

А³ - это Trp, D-Trp, D-β-Nal или D-Pal;

А⁵ - это Tyr, NicLys, cPzACAla или PicLys;

А⁶ - это D-β-Nal, D-hArg(Et)₂, D-Lys(iPr), D-hArg(Bu), D-hArg(CH₂CF₃)₂, D-His(Bzl), D-Leu, D-Pal, D-Ser(tBu), D-Trp, D-Cit, D-Arg, D-NicLys, D-PicLys или D-Qal;

A⁸ - это Arg, hArg(Et)₂, hArg(Bu), hArg(СН₂CF₃)₂ или Lys(iPr);

A¹⁰ - это Gly, NHNHCO, или D-Ala, или этот остаток отсутствует; и

R¹ - это NH₂ или NHEt;

причем, по меньшей мере, один из остатков А³ или А⁶ является Trp или D-Trp, и указанный способ включает временную защиту всех остатков триптофана защитной группой для боковой цепи, которая лабильна по отношению к основанию, и указанную защитную группу удаляют при отделении пептида с формулой (II) от твердой основы посредством реакции с основанием.

9. Способ по п.8, отличающийся тем, что защитной группой боковой цепи Trp или D-Trp является ацильная группа.

10. Способ по п.9, отличающийся тем, что защитную группу боковой цепи Trp или D-Trp удаляют посредством обработки раствором, содержащим аммиак, первичный амин или вторичный амин и спирт.

11. Способ по п.8, отличающийся тем, что указанная защитная группа боковой цепи является формильной группой, а указанное основание является раствором метанола, содержащим аммиак.

12. Способ по п.11, отличающийся тем, что А³ является Trp.

13. Способ по п.8, отличающийся тем, что А¹ представляет собой pGlu, A²представляет собой His, А⁵ представляет собой Tyr, А⁶ представляет собой D-Trp, А⁸представляет собой Arg, А¹⁰ представляет собой Gly и R¹ представляет собой NH₂.

14. Способ твердофазного синтеза пептида с формулой pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Trp-Leu-Arg-Pro-Gly-NH₂, включающий стадии последовательного присоединения к твердой основе следующих защищенных аминокислот: Boc-Gly, Вос-Pro, Вос-Arg·HCl, Boc-Leu, Boc-D-Trp(PG-1), Вос-Tyr Boc-Ser, Boc-Trp(PG-l), Boc-His(PG-2) и Boc-pGlu, где PG-1 является защитной группой, лабильной по отношению к основанию, a PG-2 является защитной группой для His, и указанный способ включает отделение пептида от основы и отделение PG-1 от остатков триптофана с помощью раствора, содержащего основание.

15. Способ по п.14, отличающийся тем, что PG-1 группа является ацильной группой.

16. Способ по п.15, отличающийся тем, что раствор содержит аммиак, первичный амин или вторичный амин.

17. Способ по п.16, отличающийся тем, что PG-2 группа является тозильной группой.

18. Способ по п.14, отличающийся тем, что PG-1 группа является формильной группой, а указанный раствор содержит аммиак.