CZ298534B6

CZ298534B6 - Lécivo k lécbe maligních nádoru

Info

Publication number: CZ298534B6
Application number: CZ20021293A
Authority: CZ
Inventors: Hedlund@Gunnar; Jansson@Karl; Jönsson@Stig; Björk@Anders
Original assignee: Active Biotech Ab
Priority date: 1999-10-25
Filing date: 2000-10-24
Publication date: 2007-10-31
Also published as: HRP20020353A2; KR100597938B1; AU1185101A; KR20020043646A; KR100674160B1; CA2386775C; JP2003512454A; JP3950337B2; EP1224172A1; DE60034240T2; NO323320B1; ES2280258T3; CZ20021293A3; EE200200207A; NO20021932L; HU229072B1; UA73748C2; DE60034240D1; DK1224172T3; CA2386775A1

Abstract

Použití sloucenin obecného vzorce (I) k výrobe farmaceutického prípravku k lécbe tuhých maligních nádoru. Jsou též popsány nové slouceniny, farmaceutické prípravky a postupy prípravy sloucenin obecného vzorce (I').

Description

Léčivo k léčbě maligních nádorů

Oblast techniky

Předložený vynález se týká využívání chinolinových derivátů k výrobě medikamentu ke klinické léčbě četných, zvláště tuhých maligních nádorů. Dále se předložený vynález týká strukturně nových chinolinových derivátů, postupů k jejich přípravě a přípravků, které je obsahují. Mezi určité typy rakoviny, které jsou inhibovány zvláště chinolinovými deriváty podle předloženého vynálezu, například patří rakovina prsu, rakovina střev, Kaposiho sarkom, rakovina plic, rakovina vaječníků, rakovina prostaty a rakovina kůže. Předložený vynález se zvláště týká chinolinových derivátů vhodných k léčbě a prevenci vyvíjející se rakoviny prostaty a k prevenci a léčbě metastáz rakoviny prostaty.

Dosavadní stav

Primární tuhé nádory či metastázy se skládají z několika typů buněk; tyto nádorové buňky mají klíčivý charakter a jsou řídicí silou. Pokud mikronádor dosáhne určité velikosti, nemůže jeho požadavkům na výživu postačit prostá difúze. V mikroprostředí tvořícího se nádoru začne prolínáním vznikat oblast způsobující nádor vyžadující k další proliferaci a růstu optimální výživu. Tento nádor vyvolaný angiogenezí způsobuje proliferaci, migraci a diferenciaci normálních endoteliálních buněk z okolních malých oblastí krevního řečiště, což je předpoklad k růstu tuhých nádorů. Ve shodě s tím inhibice angiogeneze vede k účinné inhibici růstu tuhých nádorů.

Tuhé nádory penetrací rozšiřují hranice tkáně a dávají vznik koloniím dceřinných buněk či metastáz. Jednotlivé nádorové buňky či malé agregáty buněk se krví či lymfatickým systémem šíří do vzdálených míst. V tomto procesu jsou nádorové buňky napadnutelné a mohou se zničit přirozenými buňkami - zabíječi (NK), což jsou výrazné typy cytotoxických lymfocytů. Zvýšená aktivita nebo zvýšený počet NK buněk omezuje nebo inhibuje metastázový proces v nemocných tuhých nádorech. Rakovina prostaty je maligní nádorové onemocnění, které se šíří do vzdálených míst jako nádorové metastázy a vytváří nádory s velkou neovaskularizační závislostí. Rakovina prostaty byla u mužů dlouho pohromou a stárnutím se stává běžnější a nebezpečnější. Adenokarcinom je po rakovině plic druhou nejčastější příčinou úmrtí. V samotných Spojených státech má rakovina prostaty na svědomí ročně okolo 35 000 mrtvých. Až dosud neexistují žádné preventivní či léčebné postupy proti rakovině prostaty. Pokud je ještě rakovina v časném stadiu závislém na hormonu, léčí se obvykle orchidektomií nebo chemickou kastrací. V pozdějších stadiích se rakovina prostaty stává onemocněním nezávislým na hormonech a silně metastázuje, nejprve obvykle do kostry. Léčba pokročilého onemocnění se provádí nejprve hormonální manipulací a paliativní radioterapií nebo cytostatiky. Bylo prokázáno, že tato strategie má významný klinický účinek co se týká symptomatické úlevy, avšak neexistují žádné účinné metody, které by v této fázi uvedly rakovinu prostaty k dočasnému vymizení onemocnění. Využití cytostatik na hormonálně odolnou postupující rakovinu prostaty je nedokonale vymezeno.Několik jednotlivých látek se stalo „standardní terapií“, i když chybí prokázání jejich účinnosti podle současných norem. Rakovina prostaty je tedy nejen relativně běžná, ale odolná léčbě, pokud už jednou onemocnění dosáhlo stádia nezávislosti na hormonech.

V americkém patentu US 4 547 511 a EP 59 698 jsou jako látky zprostředkující zlepšení imunity buněk nárokovány některé deriváty _V-aryl-l,2-dihydro-4-amino-l-alkyl-2-oxychinolin-3karboxamidu a A-aryl-l,2-dihydro-4-hydroxy-l-alkyl-2-oxychinolin-3-karboxamidu. Bylo oznámeno, že Roquinimex (Měrek Index 12. vyd., č. 8414; Linomide®, jV-methyl-V-feny 1-1,2dihydro-4-hydroxy-l-methyl-2-oxychinolin-3-karboxmaid) má protinádorové účinky na rakovinu prostaty Dunning R-3327 u krys (1).

Některé A-aryl-1,2-dihydro-4-hydroxy-l-alkyl-2-oxychinolin-3-karboxamidy substituované v poloze 5 známé z WO-A-9955678, WO-A-0003991 a WO-A-0003992 jsou účinné při léčbě onemocnění, která jsou důsledkem autoimunity a patologických zánětů.

-1 CZ 298534 B6

Roquinimex - sloučenina vykazující antiangiogenní a proNK lymfocytové účinky - vyvolává také vedlejší prozánětlivé účinky, které jsou při jeho podávání zdůrazněny u pacientů s renální rakovinou buněk (2). V této studii byl Roquinimex špatně tolerován, a u 40 % pacientů byl vysazen nebo sníženy dávky pro nepříznivé příhody, většinou typu podobnému chřipkovým symptomům myalgie, arthralgie a únavy. Byly také pozorovány četné případy perikarditidy a neuropatie.

Prozánětlivé účinky vyvolané roquinimexem se dobře sledují na psech beaglech. Roquinimex vyvolává u beaglů syndrom bolestivosti charakterizovaný horečkou, myalgií, arthralgií, rovněž tak jako arteritidu (3, 4).

Podstata vynálezu

Základním předmětem předloženého vynálezu je použití chinolinových derivátů k výrobě léčiva k léčbě četných maligních nádorů, zvláště tuhých. Dalším předmětem je zajištění strukturně nových derivátů chinolinů majících farmakologický profil odlišující se na pokusných modelech vysokou potencí a nízkou úrovní vedlejších účinků. Mezi typy rakoviny, které jsou těmito chinolinovými deriváty zvláště inhibovány, patří například rakovina prsu, rakovina střev, Kaposiho sarkom, rakovina plic, rakovina vaječníků, rakovina prostaty a rakovina kůže. Předložený vynález se týká chinolinových derivátů vhodných zvláště k prevenci vývoje maligních nádorů, zvláště rakoviny prostaty a k prevenci a léčbě metastáz maligních nádorů, zvláště rakoviny prostaty. Ke zvýšení rychlosti léčebných účinků na metastázové maligní nádory, zvláště rakoviny prostaty, je nutná účinná terapie maligních nádorových buněk, zvláště maligních nádorových buněk nezávislých na androgenu. Zjištěným přínosem je inhibice nádory vyvolané angiogeneze a stimulace hostitelského imunitního systému k vyvolání a zlepšení protinádorové odezvy. V předloženém vynálezu byla zkoušena schopnost chinolinových sloučenin vykázat protinádorové účinky proti rakovině prostaty Dunning R-3327 u krys nezávislé na androgenu.

Nyní bylo překvapivě zjištěno, že sloučeniny obecného vzorce (I),

kde

A se vybírá z OR₄i a NR42R43, kde

R41 se vybírá z vodíku a farmaceuticky přijatelných anorganických kationtů jako je sodík, draslík a vápník a organických kationtů jako je monoethanolamin, diethanolamin, dimethylaminoethanol, morfolin; a COR_A, kde se

Ra vybírá z alkylových a arylových skupin jako je methyl, ethyl, n-propyl, izopropyl, tercbutyl, neopentyl, fenyl, benzyl, fenethyl;

R42 a R43 jsou stejné nebo různé a vybírají se z vodíku, methylu, ethylu, n-propylu, izopropylu, n-butylu, cyklopropylu, cyklopentylu a cyklohexylu; nebo se

R42 vybírá zbenzylu a fenethylu, případně mono či disubstituovaných skupin vybíraných z methylu, izopropylu, methoxylu, fluoru, chloru, bromu, dimethylaminové, trifluormethylové a nitro skupiny a R43 je vodík; nebo

-2CZ 298534 B6

R42 a R43 jsou společně s dusíkem, na který jsou vázány, 5 nebo 6 členný kruh; nebo R42 je COR_B, kde se

R_b vybírá z alkylových a arylových skupin jako je C1-C4 alkyl, fenyl, benzyl a podobných; nebo z -CH₂N(CH₃)₂ a -CH₂CH₂COOH; nebo

COR_b je 2-acyloxymethylbenzoylová skupina,

O kde se Rc vybírá z methylu, ethylu, fenylu a benzylu; nebo

R42 je COOR_d, kde se

Rd vybírá z Ci-C4-alkylu, fenylu a benzylu; nebo

R42 je -CH₂OCO-terc-butyl; nebo

R42 je CONR_f.R_G, kde

R_f a Rq jsou stejné nebo různé, a to Ci-C₄-alkyl; nebo

Ri₂ je CXNHR_e, kde se

X vybírá z O nebo S a R_E se vybírá z Ci-C₄-alkylu, C₂-C₄-alkylu s funkční terciární aminoskupinou a fenylu, případně s chlor- funkční skupinou v para poloze; nebo

R4₂ je CH₂NR_hRi, kde

Rh a Ri jsou stejné nebo různé, a to C|-C₄-alkyl nebo Rh a R| společně s dusíkem, na který jsou vázány vytvářejí morfolinový kruh; a

R₄₃ se vybírá z vodíku, methylu, ethylu a cyklopropylu;

R se vybírá z vodíku, methylu, ethylu n-propylu, izopropylu, n-butylu, izobutylu, sek-butylu a allylu; s tou výjimkou, že pokud R není vodík, pokud A je OR41;

R' se vybírá z vodíku, methylu, methoxylu, fenylu, fluoru, chloru, bromu, kyanoskupiny, nitroskupiny, azidoskupiny, trifluormethylu a OCH_xF_y, kde x = 0 až 2 y = 1 až 3 s tou výjimkou, kdy x + y = 3;

a s výjimkou, že R' není vodík, pokud R je methyl a A je OR_4];

R se vybírá z vodíku, fluoru a chloru s výjimkou, kdy se R vybírá z fluoru a chloru pokud se R' vybírá pouze z fluoru a chloru;

R₅ se vybírá z vodíku, methylu, ethylu, n-propylu, izopropylu, methoxylu, ethoxylu, thiomethylu, thioethylu, thio-n-propylu, thioizopropylu, fluoru, chloru, bromu, trifluormethylu, nitroskupiny, aminoskupiny, diethylaminoskupiny a OCH_xF_y a OCH₂CH_xF_y, kde x = 0 až 2, y = 1 až 3 s tou výjimkou, kdy x + y = 3, a

-3 CZ 298534 B6 s další výjimkou, že R₅ není fluor nebo aminoskupina, když A je OR»; a že R₅ je vodík pouze pokud A je NR42R43 a R' je trifluormethyl;

Rí je vodík; nebo

R₅ a R₆ tvoří společně methylendioxylovou skupinu;

jsou neočekávaně účinné a specifické při léčbě jedinců postižených pokročilou rakovinou.

Sloučeniny obecného vzorce (I) mohou existovat v různých tautomemích formách a v takových případech, kdy takové formy mohou existovat, sem všechny tyto formy patří. Zahrnuty sem jsou také ty optické izomery a racemáty sloučenin obecného vzorce (I), které mohou existovat.

U řešení, kterému se ve vynálezu dává přednost, se R₅ vybírá z methylu, ethylu, methoxylu, ethoxylu, thiomethylu, thioethylu, chloru a bromu, nebo mohou R5 a R₆ společně tvořit methylendioxylovou skupinu, A se vybírá z OR41 a NR42R43, kde se R41 vybírá z vodíku a sodíku a kde R42 a R43 jsou stejné i různé a vybírají se z vodíku, methylu a ethylu, R se vybírá z vodíku, ethylu a n-propylu, zvláště pak methylu a ethylu, a R' se vybírá z vodíku, p-methylu, fenylu, methoxylu, chloru, trifluormethylu a azidoskupiny, zvláště pak z methoxylu, chloru a trifluormethylu, pokud je R vodík, a R se vybírá z fluoru vázaného v meta a para poloze, za předpokladu, že R' je fluor v ortho poloze.

Vynález také zahrnuje nové sloučeniny obecného vzorce (Γ)

CHj

kde

R42 a R43 jsou stejné nebo různé a vybírají se z vodíku, methylu, ethylu, n-propylu, izopropylu a cyklopropylu; nebo

R42 je COR_b, kde se

Rb vybírá z C]-C4-alkyl; nebo

CORb je 2-acyloxymethylbenzoylová skupina

O kde se

Rc vybírá z methylu, ethylu, fenylu a benzylu;

R se vybírá z vodíku, methylu, ethylu, n-propylu, izopropylu, n-butylu, izobutylu, sek-butylu a allylu;

R' se vybírá z vodíku, methylu, methoxylu, fluoru, chloru, bromu, kyanoskupiny, trifluormethylu a OCH_xF_y, kde x = 0 až 2 y = 1 až 3 s výjimkou, kdy x + y = 3;

R” se vybírá z vodíku, fluoru a chloru s výjimkou, kdy se R” vybírá z fluoru a chloru pouze pokud se R' vybírá z fluoru a chloru;

R₅ se vybírá z vodíku, methylu, ethylu, n-propylu, izopropylu, methoxylu, ethoxylu, fluoru, chloru, bromu, dimethylaminoskupiny a OCH_xF_y a OCH2CH_xF_y, kde x = 0 až 2, y = 1 až 3 s výjimkou, kdy x + y = 3, a s další výjimkou, že R₅ je vodík pouze pokud R' je trifluormethyl;

Re je vodík; nebo

R5 a Re tvoří společně methylendioxyl;

nebo kterýkoliv její tautomer.

Mezi sloučeniny, kterým se dává zvláště přednost, patří: ÍV-ethyl-2V-fenyl-l,2-dihydro-4-hydroxy-1,5-dimethyl-2-oxychinolin-3-karboxamid, /V-ethyl-2V-fenyl-l ,2-dihydro-4-hydroxy-5ethyl-l-methyl-2-oxychinolin-3-karboxamid, 2V-ethyl-JV-fenyl-l,2-dihydro-4-hydroxy-5methoxy-l-methyl-2-oxychinolin-3-karboxamid, 7V-ethyl-jV-fenyl-l,2-dihydro-4-hydroxy5-chlor-l-methyl-2-oxychinolin-3-karboxamid nebo jeho sodná sůl, ÝV-ethyl-AMenyl-l,2-dihydro-4-hydroxy-5-brom-l-methyl-2-oxychinolin-3-karboxamid, TV-ethyl-AMenyl-l^-dihydro-4-hydroxy-5,6-methylendioxy-l-methyl-2-oxychinolin-3-karboxamid, N-ethyl-ÍVfenyl-1,2-dihydro-4-hydroxy-5-dimethylam ino-1 -methyl-2-oxychinolin-3-karboxamid, ÝV-ethyl-JV-(3-fluorfenyl)-l,2-dihydro-4-hydroxy-5-chlor-l-methyl-2-oxychinolin-3karboxamid, 2V-methyl-7V-(4-chlorfenyl)-l,2-dihydro-4-hydroxy-5-chlor-l-methyl-2-oxychinol in-3-karboxamid, 7V-methyl-JV-(4-methylfenyl)-l,2-dihydro-4-hydroxy-5-chlor-lmethyl-2-oxychinolin-3-karboxamid, jV-methyl-/V-(4-fenylfenyl)-l,2-dihydro-4-hydroxy-5chlor-1-methy l-2-oxychinolin-3-karboxamid, jV-methyl-/V-(2,4-difluorfenyl)-l,2-diíiydro-4hydroxy-5-chlor-l-methyl-2-oxychinolin-3-karboxamid, A^f-methyl-2V-(2,5-difluorfenyl)l,2-dihydro-4-hydroxy-5-chlor-l-methyl-2-oxychinolin-3-karboxamid, 7V-ethyl-/V-(3methoxyfenyl)-l,2-dihydro-4-hydroxy-5-ethyl-l-methyl-2-oxychinolin-3-karboxamid, iV-methyl-7V-(2,4-difluorfenyl)-l,2-dihydro-4-hydroxy-5-methoxy-l-methyl-2-oxychinolin3-karboxamid, A—methyl-Y—(2,5—difluorfenylj-1,2-dihydro-4-hydroxy-5-methoxy-l-methy 12-oxychinolin-3-karboxamid, 7V-methyl-2V-(4-trifluormethylfenyl)-l,2-dihydro-4-hydroxy5-methoxy-l-methyl-2-oxychinolin-3-karboxamid, jV-methyl-7V-(2,4-difluorfenyl)-l,2-dihydro-4-hydroxy-5,5-methylendioxy-l-methyl-2-oxychinolin-3-karboxamid, A-methyl-TV(4-chlorfenyl)-1,2-dihydro-4-hydroxy-1,5-dimethyl-2-oxychinolin-3-karboxamid, 7V-methyl-7V-(2,4-difluorfenyl)-l,2-dihydro-4-hydroxy-5-ethyl-l-methyl-2-oxychinolin-3karboxamid, 7V-n-propyl-/V-fěnyl-1,2-dihydro-4-hydroxy-5-thiomethyl-l -methyl-2-oxychinolin-3-karboxamid, /V-methyl-7V-(4-chlorfenyl)-l,2-dihydro-4-hydroxy-5-thiomethyl-lmethyl-2-oxychinolin-3-karboxamid, jV-methyl-/V-(4-trifluormethylfenyl)-l,2-dihydro-4hydroxy-5-thiomethyl-l-methyl-2-oxychinolin-3-karboxamid, A'-methyl-/V-(2,4-difluorfenyl)-l,2-dihydro-4-hydroxy-5-thiomethyl-l-methyl-2-oxychinolin-3-karboxamid, 2V-methyl-7V-(2,5-difluorfenyl)-l,2-dihydro-4-hydroxy-5-thiomethyl-l-methyl-2-oxy-5CZ 298534 B6 chinolin-3-karboxamid, A-methyl-A-(4-methoxyfenyl)-l,2-dihydro-5-dimethylamino-4hydroxy-l-methyl-2-oxychinolin-3-karboxamid, A-methyl-A-fenyl-T-amino—1,2—dihydro-

1.5- dimethyl-2-oxychinolin-3-karboxamid, A-methyl-ŤV-feny l^l-amino-1 ,2-dihydro-5methoxy-l-methyl-2-oxychinolin-3-karboxamid, A-methyl-A-fenyl-5-chlor-l,2-dihydro-4(A-methylamino)-l-methyl-2-oxychinolin-3-karboxamid, A-methyl-A-fenyl-l,2-dihydro-

1.5- dimethyl^l-{A-methylamino)-2-oxychinolin-3-karboxamid, A-methyl-A-fenyl-1,2-dihydro- 5-methoxy-A-(N-methylamino)-1-methyl-2-oxychinolin-3-karboxamid, A-methyl-A(4-trifluormethylfenyl)-4-amino-í,2-dihydro-í-methyl-2-oxychinolin-3-karboxamid.

Vysoká mřížková energie krystalu pevných sloučenin má za důsledek slabou rozpustnost, například ve vodě. Snaha o snížení této energie vyústí ve zlepšenou rozpustnost ve vodě. Prekurzor léčiva per se je inaktivní látkou. Základním požadavkem na úspěch prekurzoru léčiva je jeho opětné převedení na mateřskou látku in vivo. Konverze prekurzoru léčiva na léčivo může nastat před absorpcí, během ní, nebo po absorpci. Nezbytná konverze prekurzoru na molekuly mateřského léčiva v těle může nastávat různými reakcemi. Nejobvyklejšími prekurzory jsou ty, které vyžadují hydrolytické štěpení zprostředkované enzymatickou hydrolýzou. V jiných případech se molekuly léčiva regenerují z jejich prekurzorů biochemickým redukčním nebo oxidačním procesem.

Estery léčiva obsahující hydroxylovou funkční skupinu se považují za prekurzorové typy hlavně z toho důvodu, že organizmus je bohatý na enzymy schopné estery hydrolyzovat. Sloučeniny podle předloženého vynálezu obsahují enolizovanou karbonylovou skupinu jakožto význačnou funkční skupinu. Za určitých podmínek může být enolická forma zachycena acylací enolové skupiny. Stérické a elektronové působení v acylové skupině má podstatný vliv na rychlost jak hydrolýzy vodou, tak enzymy. Vedle fyzikálně-chemických vlastností jako je rozpustnost ve vodě, lze upravovat i lipofílitu a rychlost rozpouštění mateřské sloučeniny.

Sloučeniny podle předloženého vynálezu obsahují funkční 4-aminoskupinu. N-acylace aminů na aktivované amidy může být slibným prostředkem k získání prekurzorové formy léčiva. 2-hydroxymethylbenzamidy procházejí cyklizací (laktonizace) ve vodném roztoku za vzniku ftalidu a volného aminu. Substituce dvou methylenových vodíkových atomů 2-hydroxymethylbenzamidu například methylovou a fenylovou skupinou velmi ovlivní rychlost laktonizace. Také blokování laktonizace acylací 2-hydroxymethylbenzamidů na 2-acyloxymethylbenzamidy ovlivní laktonizaci, které musí předcházet hydrolýza esterové skupiny. Acylace také umožní řízení lipofilicity a hydrofilicity prekurzoru léčiva podle příslušného výběru acylové skupiny. Použití různých karbamátových derivátů, rovněž tak jako A-Mannichových bází lze také považovat za prostředek pro tvorbu prekurzorů léčiva.

Sloučeniny obecného vzorce (I) byly zkoumány na schopnost inhibovat růst nádoru Dunning R-3327 AT-1 rakoviny prostaty krys. Jako kontrolní látka pro zkoušky byl použit Roquinimex, který vykázal 30% inhibiční účinek při dávce 4 mg.kg¹.

Sloučeniny obecného vzorce (I), kde A je NR42R43 se připravují tímto způsobem:

Způsob A

R.

CH.

J

II

ch₃

I'

-6CZ 298534 B6

Sloučeniny obecného vzorce (Γ) lze připravovat známými způsoby, například reakcí 4-chlor-l,2-dihydro-2-oxychinolin-3-karboxamidových derivátů (X = Cl; II) známých z patentu US 4 547 511 s amino sloučeninami ve vhodném rozpouštědle jako je alkohol, například ethanol. Všechny sloučeniny mají uspokojující 'H—NMR a hmotnostní spektra, i když jsou NMR spektra komplikována přítomností E a Z amidových izomerů. Dále jsou popsány pouze posuny NMR hlavního izomerů.

Sloučeniny obecného vzorce (I) lze připravovat způsoby známými z patentu US 6 077 851 a například tak, jak to je uvedeno výše reakcí esterových derivátů chinolinkarboxylové kyseliny s anilinem ve vhodném rozpouštědle jako je toluen, xylen a podobných. Obecné způsoby přípravy esterových derivátů kyseliny chinolinkarboxylové obecného vzorce (III) jsou známy z patentu US 4 547 511. A-alkylované aniliny obecného vzorce (IV) jsou komerčně dostupné nebo známé z literatury, např. v Johnstone, et al., J. Chem. Soc., 2223 - 2224, 1969. Sloučeniny spadající do rozsahu obecného vzorce (IV) mohou být připravovány způsoby, které jsou obecně analogické s postupy známými z literatury.

Rozsah vynálezu je definován v patentových nárocích, na které zde odkazujeme a jsou dále uvedeny.

Následující příklady jsou uvedeny jako ilustrace, aniž by nějak omezovaly rozsah vynálezu.

Příklad 1

A^/'-methyl-A'-fenyl-4-chlor-l,2-dihydro-l,5-dimethyl-2-oxychinolin-3-karboxamid

ÍV-methyl-7V-fenyl-l,2-dihydro-4-hydroxy-l,5-dimethyl-2-oxychinolin-3-karboxamid (3,5 g) byl po dobu 2 hodin zahříván v chloridu fosforitém (7 ml) při 100 °C. Směs byla zkoncentrována, rozpuštěna v dichlormethanu a promyta vodou. Organická fáze byla vysušena (Na₂SO₄) a zkoncentrována. Zbytek byl rozetřen s ethylaceíátem, zfiltrován a získána sloučenina uvedená v nadpisu (2,3 g).

'H-NMR (CDC1₃): δ 7,50 - 7,00 (8H, aromatické protony), 3,60 (N-Me, s), 3,48 (N-Me, s), 2,80 (PhMe, s).

Hmotnostní spektrum (ESI, m/z) [M + H]⁺: 341.

Zcela stejným způsobem byly z odpovídajících výchozích látek získány následující sloučeniny:

7V-methyl-A-fenyl-4,5-dichlor-l,2-dihydro-l-methyl-2-oxychinolin-3-karboxamid;

’Η-NMR (CDCI3 + TFA): δ 7,55 - 7,15 (8H, aromatické protony), 3,60 (N-Me, s), 3,47 (N-Me, s).

Hmotnostní spektrum (ESI, m/z) [M + H]⁺: 361.

A-methyl-A-(4-trifluormethylfenyl)-4-chlor-l,2-dihydro-l-methyl-2-oxychinolin-3-karboxamid;

’Η-NMR (CDCI3): δ 8,10 - 7,22 (8H, aromatické protony), 3,60 (N-Me, s), 3,47 (N-Me, s). Hmotnostní spektrum (ESI, m/z) [M + H]⁺: 395.

Příklad 2

V-methyl-jV-fenyl-l,2-dihydro-4-(N,/V-dimethylamino)-l,5-dimethyl-2-oxychinolin-3karboxamid

TV-methyl-TV-fenyl^l-chlor-l ,2-dihydro-l ,5-dimethyl-2-oxychinolin-3-karboxamid (0,52 g) ve směsi s dimethylaminem a ethanolem byly zahřívány v tlustostěnné skleněné baňce uzavřené šroubovacím uzávěrem. Reakce byla sledována TLC (jako eluční činidlo byly použity směs dichlormethanu s methanolem). Po 8 hodinách zahřívání byla baňka ochlazena, otevřena a směs zředěna vodou. Výsledný precipitát byl zfíltrován, promyt vodou, ve vakuu vysušen a získána sloučenina uvedená v nadpisu (0,39 g).

'H-NMR (CDCI3 + TFA): δ 7,50- 6,70 (8H, aromatické protony), 3,70 (N-Me, s), 3,58 (N-Me, s), 3,50 (N-Me, s), 3,43 (N-Me, s).

Hmotnostní spektrum (ESI, m/z) [M + H]⁺: nalezeno 350, předpokládáno 350.

Zcela stejným způsobem byly z odpovídajících výchozích látek získány následující sloučeniny: /V-methyl-A^/-fenyl-l,2-dihydro-l,5-dimethyl-4-(.V-methylamino)-2-oxychinolin-3-karboxamid, 'H-NMR (CDCI3 + TFA): δ 7,80 -6,80 (8H, aromatické protony), 3,82 (N-Me, s), 3,59 (N-Me, s), 3,10 (N-Me, s), 1,85 (PhMe, s).

Hmotnostní spektrum (ESI, m/z) [M + H]⁺: 336.

A-methyl-/V-fenyl-4-amino-l,2-dihydro-l,5-dimethyl-2-oxychinolin-3-karboxamid, 'H-NMR (CDCI3 + TFA): δ 7,80 - 6,40 (8H, aromatické protony), 3,80 (N-Me, s), 3,57 (N-Me, s), 2,28 (PhMe, s).

Hmotnostní spektrum (ESI, m/z) [M + H]⁺: 332.

V-methyl—jV-fenyl-5—chlor-l ,2—dihydro-4—(V/V—dimethylamino)-l-methyl-2—oxychinolin-3karboxamid, ’Η-NMR (CDCI3 + TFA): δ 7,70 -7,00 (8H, aromatické protony), 3,68 (N-Me, s), 3,50 (N-Me, s), 3,18 (N-Me₂, s).

Hmotnostní spektrum (ESI, m/z) [M + H]⁺: 370.

TV-methyl—A—fenyl—5—chlor—1,2—dihydro—4—(V—methylamino)—1—methyl—2—oxychinolin—3— karboxamid, ’Η-NMR (CDCI3 + TFA): δ 7,60 - 7,00 (8H, aromatické protony), 3,73 (N-Me, s), 3,57 (N-Me, s), 3,15 (N-Me, s).

Hmotnostní spektrum (ESI, m/z) [M + H]⁺: 356.

V—methyl—A/-fenyl-4-amino—5-chlor-l,2—dihydro-l-methyl—2—oxychinolin-3-karboxamid, ’Η-NMR (CDCI3 + TFA): δ 7,62 - 7,23 (8H, aromatické protony), 3,63 (N-Me, s), 3,50 (N-Me, s).

Hmotnostní spektrum (ESI, m/z) [M + H]⁺: 342.

-8CZ 298534 B6

A^ř-ethyl-7V-fenyl-5-brom-l,2-dihydro-4-(Á^,-ethylamino)-l-methyl-2-oxychinolin-3-karboxamid,

TV-ethyl-A-fenyl-S-chlor-A-ýA-cyklopentylaminoj-l^-dihydro-l-methyl^-oxychinolin-Skarboxamid,

7V-ethyl-2V-fenyl-5-chlor-l,2-dihydro-4-(N-methylamino)-l-methyl-2-oxychinolin-3karboxamid,

7V-ethyl-A-fenyl-l,2-dihydro-5-ethyM-(N-ethylamino)-l-methyl-2-oxychinolin-3-karboxamid,

TV-ethy l-AMenyl-1,2-di hydro-4-(A/ JV-dimethy lamino)-5-methoxy-1 -methy 1-2-oxych inolin3-karboxamid,

TV-ethyl-AMenyl-4-(/V,A-diethylarnino)-l,2-dihydro-l-methyl-5-trifluormethyl-2-oxychinolin-3-karboxamid,

TV-methyl-Y—fenyl-1,2—dihydro—5-fluor-l-methyl-4-(l-pyrrolidinyl)-2—oxychinolin-3karboxamid, yV-methyl-TV-feny I-1,2-dihydro-5-ethyl-l -methyM-( I -piperidiny l)-2-oxychinol in-3karboxamid,

A-methyl-A-fenyl-l,2-dihydro-l,5-dimethyl^l-(7V-ethylamino)-2-oxychinolin-3-karboxamid,

TV-methy l-/V-feny I-1,2—d i hydro-4-(A/ 7V-di methy lam ino)-5-methoxy-1 -methy 1-2-oxychinolin-3-karboxamid,

7V-methyl-jV-fenyl-4-(A-benzylamino)-l,2-dihydro-5-methoxy-l-methyl-2-oxychinolin-3karboxamid,

TV-methyl-jV-fenyl-l^-dihydro-S-methoxy-l-methyl^l-ýJV-methylamino^-oxychinolin^karboxamid,

A^,-methyl-<V-fenyl-l,2-dihydro-4-(A^ř,jV-dimethylamino)-l-methyl-5-trifluonnethyl-2-oxychinolin-3-karboxamid,

7V-methyl-7V-fenyl-4-[(4-chlorfenyl)amino]-l,2-dihydro-l-methyl-5-trifluormethyl-2-oxychinolin-3-karboxamid,

A^/-(M-propyl)-A^ř-fenyl-5-fluor-l,2-dihydro-4-(?/-methylamino)-l-methyl-2-oxychinolin-3karboxamid, jV-izopropyl-A-fenyl-l ,2-dihydro-5-ethyl-4-(7V-ethylamino)-l-methyl-2-oxychinolin-3karboxamid.

Následující dva 4-aminoderiváty byly připraveny malou úpravou postupu uvedeného výše. Po ochlazení byla reakční směs zkoncentrována a rozpuštěna v dichlormethanu. Organická fáze byla extrahována vodou, vysušena a pro získání produktu zkoncentrována.

7V-methyl-7V-(4-trifluormethylfenyl)-l,2-dihydro-l-methyM-(/V-methylamino)-2-oxychinolin-3-karboxamid, ’Η-NMR (CDC1₃ + TFA): δ 7,82 - 7,24 (8H, aromatické protony), 3,85 (N-Me, s), 3,52 (N-Me, s), 3,18 (N-Me, s).

Hmotnostní spektrum (ESI, m/z) [M + H]⁺: 390.

<V-methyl-A-(4-trifluormethylfenyl)-l,2-dihydro-4-(A,A-dimethylamino)-l-methyl-2-oxychinolin-3-karboxamid,

-9CZ 298534 B6 'H-NMR (CDC1₃ + TFA): δ 7,80 - 6,87 (8H, aromatické protony), 3,78 (N-Me, s), 3,58 (N-Me, s), 3,25 (N-Me, s).

Hmotnostní spektrum (ESI, m/z) [M + H]⁺: 404.

Příklad 3

Ethylester kyseliny l,2-dihydro-4-hydroxy-5-dimethylamino-l-methyl-2-oxychinolin-3karboxylové

Roztok 2,6-difluorbenzonitrilu (35,7 g, 0,26 mol) a dimethylaminu (17,5 g, 0,39 mol) ve 100 ml bezvodého izopropanolu byl v autoklávu zahříván na 110 °C po dobu 18 hodin. Po ochlazení bylo rozpouštědlo odpařeno a na zbytek působeno vodou a diethyletherem za vzniku nažloutlé olejovité hmoty 2-dimethylamino-6-fluorbenzonitrilu (41 g) znečištěného 2 až 4 % 2,6—di(dimethylamino)benzonitrilu. Tato surová směs byla rozpuštěna ve 40% vodném methylaminu (130 ml, 1,5 mol) a ethanolu (100 ml) a v autoklávu zahřívána na 110°C po dobu 18 hodin. Produkt byl zpracován stejně jako výše a získáno 44 g 2-dimethylamino-6-methylaminobenzonitrilu (>95 % čistoty). Tato látka byla hydrolyzována koncentrovanou kyselinou sírovou (170 ml) a vodou (34 ml) při 120 °C po dobu 3 hodin. Hnědý roztok byl ochlazen a zneutralizován 5 M NaOH. Výsledná zakalená směs byla zfiltrována přes celit a promyta 30 ml diethyletheru. Vodný roztok byl extrahován dichlormethanem (3 x 50 ml), extrakty promyty vodou a odpařeny na kyselinu 6-dimethylamino-A-methyl-anthranilovou. Kyselina anthranilová (21,5 g, 0,11 mol) byla rozpuštěna v 250 ml 1,4-dioxanu. Za chlazení v ledové lázni byl pomalu přidáván fosgen (25 ml, 0,45 mol). Směs byla zahřívána při 40 °C po dobu 1 hodiny, ochlazena na 15 °C a produkt oddělen filtrací. Ten byl zpracován vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a dichlormethanu, organická fáze pečlivě vysušena a odpařena za získání čistého anhydridu kyseliny 5-dimethylamino-N-methyl-izatoové. Anhydrid (22 g, 0,10 mol) byl rozpuštěn v bezvodém methanolu (150 ml) a přidán methoxid sodný (5,4 g, 0,10 mol). Po míchání po dobu 3 hodin při 50 °C bylo rozpouštědlo odstraněno a na zbytek působeno vodou a etherem za získání žlutého oleje (15 g). Olej - methylester kyseliny 6-dimethylamino-JV-methylanthranilové (10,4 g, 0,05 mol) byl rozpuštěn v dichlormethanu (100 ml) a ochlazen v ledové lázni. Byl přidán malonylchlorid (10 g, 0,07 mol). Po zamíchání po dobu 1 hodiny při laboratorní teplotě byla zakalená směs promyta vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného. Organická fáze byla opatrně vysušena a ve vakuu zkoncentrována. Zbytek byl rozpuštěn v suchém ethanolu (100 ml) a přidán methoxid sodný (9 g, 0,16 mol). Směs byla míchána po dobu 1 hodiny a zneutralizována kyselinou chlorovodíkovou. Rozpouštědlo bylo odstraněno a zbytek zpracován vodou a dichlormethanem. Organická fáze byla vysušena a po odstranění rozpouštědla získány čisté našedlé krystalky sloučeniny uvedené v nadpise (11 g).

’Η-NMR (CDC1₃): δ 1,36 (3H, t), 2,78 (6H, s), 3,59 (3H, s), 4,39 (2H, q), 7,17 (IH, d), 7,21 (IH, d), 7,54 (lH,t), 17,1 (IH, s).

Příklad 4 /V-ethyl-V-fenyl-l,2-dihydro-5-dimethylamino-4-hydroxy-l-methyl-2-oxychinolin-3karboxamid (způsob B) /V-ethylanilin (4,4 g, 0,036 mol) byl rozpuštěn v 80 ml toluenu. K získání bezvodého roztoku bylo přibližně 30 ml rozpouštědla oddestilováno. Ke vřícímu roztoku byl přidán ethylester kyseliny l,2-dihydro-4-hydroxy-5-dimethylamino-l-methyl-2-oxychinolin-3-karboxylové (3,5 g, 0,012 mol). Ethanol vytvořený během reakce byl společně s částí toluenu po dobu 10 hodin oddestilováván. Směs byla ochlazena na laboratorní teplotu. Sraženina byla shromážděna, promyta studeným toluenem a hexanem a vysušena za získání sloučeniny uvedené v nadpisu s výtěžkem 71 % (3,1 g).

-10CZ 298534 B6 ‘H-NMR (CDC1₃): δ 1,25 (3H, t), 2,63 (3H, s), 2,78 (3H, s), 3,51 (3H, s), 3,87-4,07 (2H, m),

7,07 - 7,19 (5H, m), 7,39 - 7,48 (3H, m).

¹³C NMR (CDCh): δ 13,2 (CH₃), 29,4 (CH₃), 43,7 (CH₂), 45,2 (CH₃, 46,5 (CH₃), 109,6 (C), 110,4 (C), 113,0 (CH), 114,0 (CH), 127,3 (CH), 127,5 + 127,5 (CH), 128,3 + 128,3 (CH), 130,8 (CH), 140,7 (C), 142,3 (C), 150,6 (C), 159,7 (C), 160,6 (C=O), 165,0 (C=O).

Hmotnostní spektrum (ESI, m/z) [M + H]⁺: 366, fragment 245.

Příklad 5 /V-methyM-aminodifenyl

K chlazenému roztoku 4-bromanilinu (3,4 g, 0,02 mol) a triethylaminu (5,5 ml, 0,04 mol) v dichlormethanu (50 ml) se pomalu přidával anhydrid kyseliny trifluoroctové (3,4 ml, 0,024 mol). Po 1 hodinovém míchání se směs zpracovala vodnou kyselinou chlorovodíkovou (0,5 M) a vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného. Organická fáze byla vysušena a odpařena do sucha. Vytvořené krystaly (5,2 g) byly rozpuštěny v suchém tetrahydrofuranu (40 ml), ochlazeno a na roztok se působilo terc-butoxidem draselným (3,4 g, 0,03 mol). Po 1 hodinovém míchání byl přidán methyljodid (3,8 ml, 0,06 mol) a směs ponechána stát přes noc. Potom byla směs zpracována stejným způsobem vodnou kyselinou chlorovodíkovou (0,5 M), vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného, vysušena, odpařena k suchu a získáno 4,6 g meziproduktu /V-(4-bromfenyl)-2,2,2-trifluor-jV-methylacetamidu. Pro Suzukiho kopulační reakci byla tato látka (4,6 g, 0,016 mol) opatrně naplněna do pečlivě dusíkem vypláchnuté reakční nádoby společně s toluenem (40 ml), hydrogenuhličitanem sodným (5,4 g, 0,064 mol), tetrakis(trifenylfosfín)palladíem(0) (0,6 g, 0,048 mol) a vodou (15 mol). Do reakční nádoby byla přidána kyselina benzenboritá (2,2 g, 0,017 mol) rozpuštěná v ethanolu (8 ml) a černá směs zahřívána pod refluxem za silného míchání po dobu 10 hodin. Směs byla ochlazena, zfdtrována přes celit a organická fáze odpařena k suchu. Zbytek byl zrekrystalizován z ethanolu za získání béžových krystalů (2,4 g, výtěžek 54 %). Krystaly byly zhydrolyzovány ve směsi methanolu a amoniaku 1 : 1 (50 ml) při krátkém zahřátí (1 hodinu). Rozpouštědla byla odpařena a zbytek rozpuštěn v dichlormethanu (25 ml), vysušen, odpařen k suchu a získáno 1,3 g sloučeniny označené v nadpisu jako sirupovitá látka.

*H-NMR (CDCI3): δ 2,88 (3H, s), 6,70 (2H, d), 7,27 (IH, t), 7,41 (2H, t), 7,48 (2H, d), 7,57 (2H, d).

Příklad 6

N-(4-fenylfenyl)-/V-methyl-5-chlor-l,2-dihydro-4-hydroxy-l-methyl-2-oxychinolin-3karboxamid

K ledem chlazenému roztoku kyseliny 5-chlor-l,2-dihydro-4-hydroxy-l-methyl-2-oxychinolin-3-karboxylové (1,6 g, 6,5 mol), triethylaminu (3 ml, 22,7 mmol), /V-methyl-4-aminofenylu (1,3 g, 7 mmol) v methylenchloridu (25 ml) byl během 10 minut po kapkách přidáván roztok thionylchloridu (1,0 g, 8,4 mmol) v methylenchloridu (10 ml). Vmíchání se při 4 °C pokračovalo po dobu 4 hodin. Roztok byl zředěn methylenchloridem (10 ml), promyt studenou 1M kyselinou sírovou a potom extrahován 1 M hydroxidem sodným. pH vodného roztoku bylo nastaveno na hodnotu 8 až 8,5, roztok vyčiřen filtrací a potom dále okyselen roztokem kyseliny chlorovodíkové na pH 4. Po stání se vytvořená krystalická sraženina odfiltrovala, promyla vodou, vysušila a byla získána sloučenina uvedená v nadpisu (1,9 g).

‘H-NMR (CDCI3): δ 3,33 (3H, s), 3,52 (3H, s), 7,13 (IH, d), 7,20- 7,35 (4H, m), 7,36-7,56 (7H, m).

V této specifikaci jsou uvedena všechna řešení vynálezu, jak jsou popsána v nárocích.

-11 CZ 298534 B6

Farmakologické metody

Primární postupy a metody

Rakovina prostaty R-3327 AT-1 u mužů je tuhý nádor angiogenního typu. Dunning R-3327 5 AT-1 je rakovina prostaty krys a hodí se jako pokusný zvířecí model tohoto onemocnění. Nádor

AT-1 je sériově subkutánně (sc) transplantován syngenickým krysám chovu Copenhagen. Malé kousky nádoru jsou sc transplantovány krysím příjemcům a léčba vývoje nádoru u krysy začne v okamžiku, kdy jsou nádory snadno měřitelné, tedy přibližně 10. den po transplantaci. Dávky sloučeniny se podávají jak orálně nebo parenterálně 5 dnů v týdnu po dobu 4 týdnů. Během 10 pokusu se sleduje růst nádoru a změna tělesné hmotnosti.

Tabulka 3. Inhibice růstu nádoru v modelu R-3327 AT-1

R5	R6	A	R	R'	R	Dávka (mg.kg·¹)	% zmenšení hmotnosti nádoru
OMe	H	OH	Me	o-F	m'-F	2(po)	32
OMe	H	OH	Me	p-cf₃	H	2(po)	41
Cl	H	OH	Me	p-Me	H	2(po)	38
N(CH₃)₂	H	OH	Me	p-OMe	H	10(po)	38
och₂o	OH	Me	o-F	P-F	10(po)	40
H	H	nh₂	Me	p-CF₃	H	2(sc)	36
Me	H	nhch₃	Me	H	H	20(sc)	34
OMe	H	nh₂	Me	H	H	2(sc)	33
OMe	H	nhch₃	Me	H	H	2(sc)	28

Antiangiogenní testy

Sloučeniny podle předloženého vynálezu byly zkoušeny antiangiogenním testem, tj. zkouškou na myších Matrigelovými peletami porovnáváním se sloučeninou roquinimex. V tomto testu byl athymickým nahým myším (N = 5 ve skupině) předem orálně nebo sondou podáváno po dobu 20 5 dnů buď vehikulum, nebo zkoušený analog v denní dávce 5 mg.kg ¹ ve dvou dávkách (BID).

Šestý den bylo zvířatům oboustranně injikováno 0,5 ml Matrigelu obsahujícího 1.10⁶ endoteliálních buněk hovězí aorty (BAEC) a 75 ng vaskulámího endoteliálního růstového faktoru (VEGF). Zvířata obdržela opět BID buď s vehikulem nebo zkoušeným analogem. Po 7 dnech byly Matrigelové pelety (10 pelet u každé skupiny) odstraněny a inkubovány přes noc v 0,5 ml vody 25 při 37 °C. Další den byly pelety rozmixovány v nástavcích Eppendorfových pipet. Po odstředění bylo 20 μΐ supematantu smíseno se 100 μΐ Drabkinova roztoku a obsah hemoglobinu (Hb) stanoven spektrofotometricky. Procento inhibice Matrigelové angiogeneze pro každý na zvířatech zkoušený analog bylo stanoveno podle vzorce: 100 - (obsah Hb zvířete zkoumaného odpovídající sloučeninou/střední obsah Hb skupiny s vehikulem x 100). Hodnoty jsou uloženy v níže uvedené 30 tabulce 1.

-12CZ 298534 B6

Tabulka 1. Antiangiogenní účinek

Sloučenina	R5	R6	A	R	R'	R	% inhibice Matrigelové angiogeneze
Roquinimex	H	H	OH	Me	Η	H	35±4
dle vynálezu	OMe	H	OH	Me	o-F	m'-F	55±6
dle vynálezu	OMe	H	OH	Me	p-cf₃	H	65+9
dle vynálezu	Cl	H	OH	Me	p-Me	H	60+9
dle vynálezu	N(CH₃)₂	H	OH	Me	p-OMe	H	50±3
dle vynálezu	och₂o	OH	Me	o-F	p-F	45±7
dle vynálezu	OMe	H	nh₂	Me	H	H	58±9

Jak je z tabulky vidět, sloučeniny podle vynálezu vykazují značně zvýšenou antiangiogenní schopnost v porovnání s předchozí dosud známou sloučeninou roquinimex.

Zkoušky k hodnocení prozánětlivých účinků

Syndrom bolestivosti u beaglů

Syndrom bolestivosti u beaglů (BPS) se odráží v klinických a laboratorních projevech, např. horečce, zvýšené rychlosti sedimentace erytrocytů (ESR), alkalických fosfátech (AP), navození akutní fáze proteinů a vaskulitidy, dává oprávnění považovat BPS jako model syndromu podobného chřipce vyvolaného u člověka roquinimexem. Onemocnění BPS je původem akutním zánětem. Nastávají četné změny v hematologickém složení a klinických chemických hodnotách. Sloučeniny byly beaglům podávány intravenózně. Dávky byly podávány po dobu 5 po sobě jdoucích dnů. Psi byli hodnoceni na prozánětlivou reakci, tj. zvýšenou ESR a AP. Byly stanoveny procentuální změny laboratorních hodnot mezi 8. dnem a počátkem.

Neurofilní zánět

Neurofilní zánět (NI) je vyvolán intradermální injekcí karrageninu nebo zymosanu. Akumulace neurofílů se hodnotí měřením aktivity neutrofilního enzymu myeloperoxidázy zčelenžované kůže.

Tvorba edému

Tvorba edému je vyvolána intradermální injekcí karrageninu. Rozsah edému se hodnotí měřením extravazace plazmy intravenózně injikované Evansovy modře do čelenžované kůže.

Hypersenzitivita opožděného typu

Typ reakce opoždění hypersenzitivity (DTH) je zánětlivá reakce specifická na antigen a zprostředkovaná T-buňkami, která je vhodná ke studiu modulace imunologických a zánětlivých příhod. Myši jsou senzitizovány kutánním podáváním oxazolonu. Čelenžování se provádí lokálně na uších a zánětlivá reakce se kvantifikuje měřením změn tloušťky ucha.

K ilustraci vynálezu jsou uvedeny následující příklady, které však nijak neomezují jeho rozsah.

Mezi sloučeniny, kterým se dává přednost patří A-ethyl-A-fenyl-l,2-dihydro-4-hydroxy-5chlor-l-methyl-2-oxychinolin-3-karboxamid, A-methyl-A-(4-chlorfenyl)-l,2-dihydro-4

- 13 CZ 298534 B6 hydroxy-5-chlor-l-methyl-2-oxychinolin-3-karboxamid, JV-methyl-A-(2,4-difluorfenyl)1,2-dihydro-4-hydroxy-5-thiomethyl-1 -methyl-2-oxychinolm-3-karboxamid a A-methyl-Afenyl-4-amino-l,2-dihydro-l,5-dimethyl-2-oxychinolin-3-karboxamid, zde nazývané sloučenina A, B, C a D. Do toho je zahrnut i roquinimex jako referenční sloučenina zde nazvaná sloučenina E. Vedle toho byly jako referenční sloučeniny použity antineoplastické látky vinblastin (Měrek index 12. vyd., č. 10119) a doxorubicin (Měrek index 12. vyd., č. 3495).

Inhibiee růstu nádoru

Sloučenina	dávka (mg.kg'¹)	% snížení hmotnosti nádoru
A (vynález)	2 (sc)	37
B (vynález)	2 (po)	28
C (vynález)	2 (po)	39
D (vynález)	2 (sc)	38
E (referenční)	4 (sc)	30
vinblastin (referenční)	1 (iv)^a>	0
vinblastin (referenční)	4ČV)⁵¹	toxický
doxorubicin (referenční)	w	0
doxorubicin (referenční)	8 (ipj®	31^Ď)

^a) léčba zahájena 11. den, ^b) 8 mg.kg¹ doxorubicinu způsobilo ztrátu tělesné hmotnosti.

Syndrom bolestivosti u beaglů - procentuální změny (8. den proti počátku)

dávka, mg.kg'¹ p.o.	sloučenina A (vynález)	sloučenina E (referenční)
ESR	AP	ESR	AP
1	177	25	700	103
10	515	109

Podávání sloučenin obecného vzorce I podle praktik předloženého způsobu terapie se provádí podáváním účinného množství zvolené sloučeniny pacientům, kteří takovou léčbu nebo profýlaxi potřebují. Účinné množství jednotlivé sloučeniny stanoví lékař a závisí na takových faktorech, jako je onemocnění, které má být léčeno, závažnosti onemocnění nebo stavu, kterým pacient trpí a dalšími faktory podle lékařovy úvahy. Zjišťuje se, že sloučeniny jsou aktivní v nízkých dávkových hladinách a tudíž umožňují účinnou léčbu nebo profylaxi s malou pravděpodobností vedlejších účinků nebo zkřížených reakcí s další léčbou či léčivy. Uvažuje se o pohybu vhodné denní dávky k použití pro léčbu onemocnění mezi 0,002 mg.kg¹ a přibližně 100 mg.kg ¹ tělesné hmotnosti, zvláště pak mezi 0,02 mg.kg¹ a 10 mg.kg¹ tělesné hmotnosti, v závislosti na specifických podmínkách, např. u rakoviny prostaty, která má být léčena, na stáří a hmotnosti určitého pacienta a určité pacientovy odezvy na medikaci. Přesné individuální dávky, rovněž tak jako denní dávky se stanoví podle standardních lékařských principů podle pokynů lékaře.

Účinná množství sloučenin obecného vzorce (I) se přednostně podávají pacientům, kteří takovou léčbu potřebují obvyklými způsoby a připravené jako obvyklé farmaceutické přípravky obsahující účinné množství účinné složky a vhodný farmaceuticky přijatelný nosič. „Farmaceuticky přijatelným“ se míní takový nosič, ředidlo či excipient, který musí být kompatibilní s dalšími

- 14CZ 298534 B6 složkami přípravku a nepoškozující jejich příjemce. Takové přípravky mohou mít různou formu, mohou být např. v roztocích, suspenzích, emulzích, tabletách, tobolkách a prášcích, připravených k orálnímu podávání, jako sterilní roztoky k parenterálnímu podávání, čípky k rektálnímu zavádění nebo jako vhodné lokální přípravky. Při přípravě přípravků podle předloženého vynálezu je obvykle účinná složka přimíšena k nosiči, nebo nosičem zředěna, či do nosiče vložena, což může být forma tobolky, sáčku, papíru nebo jiného zásobníku. Pokud nosič slouží jako ředicí látka, může to být tuhá, polotuhá či kapalná látka, která působí jako vehikulum, excipient nebo médium pro účinnou složku. Je možno též počítač s různými aditivy ke zlepšení stability či ke snadnějšímu podávání léčiva. Přípravek tedy může mít formu tablet, pilulek, prášků, pastilek, sáčků, prášků v oplatce, elixírů, suspenzí, emulgovaných roztoků, sirupů, aerosolů (jako pevných či v kapalném médiu), měkkých či tvrdých želatinových tobolek, čípků, sterilních injikovatelných roztoků, sterilně balených prášků a podobně. Běžné postupy pro výběr a přípravu vhodných farmaceutických přípravků jsou popsány například ve „Pharmaceuticals - The Science of Dosage Form Design“ od Aultona, Μ. B., Churchil Livingstone, 1988. Farmaceutické přípravky mohou také obsahovat přídavné terapeuticky vhodné látky jiné než je sloučenina obecného vzorce (I).

Literatura

1. Ichikawa, T., et al., The antitumor effects of the quinoline-3-carboxamide Linomide on Dunning R-3327 rat prostatic cancers. Cancer Research 52, 3022 - 3028, 1992

2. de Wit, R., et al., EORTC phase II study of daily oral linomide in metastatic renal cell carcinoma patients with good prognostic factors. Eur. J. Cancer, 33, 493 - 495, 1997

3. Kelly, D. F., Grimsell, C. S. G. a Kenyon, C. J., Polyarteritis in the dog: A čase report. Vet Record, 92,363-366, 1973

4. Harcourt, R. A., Polyarteritis in a colony of beagles. Vet Record, 102, 519 - 522, 1978

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY

1. Použití sloučenin obecného vzorce (I) kde

A se vybírá z ORn a NR42R43, kde se

Rn vybírá z vodíku a farmaceuticky přijatelných anorganických kationtů jako je sodík, draslík a vápník a organických kationtů jako je monoethanolamin, diethanolamin, dimethylaminoethanol, morfolin; a COR_A, kde se

Ra vybírá z alkylových a aiylových skupin jako je methyl, ethyl, n-propyl, izopropyl, terc-butyl, neopentyl, fenyl, benzyl, fenethyl;

R42 a R43 jsou stejné nebo různé a vybírají se z vodíku, methylu, ethylu, n-propylu, izopropylu a cyklopropylu; nebo

R42 je COR_b, kde

R_b se vybírá C1-C4 alkyl, nebo

- 15 CZ 298534 B6

COR_B je 2-acyloxymethylbenzoylová skupina kde se Rc vybírá z methylu, ethylu, fenylu a benzylu;

R se vybírá z vodíku, methylu, ethylu, n-propylu, izopropylu, n-butylu, izobutylu, sek-butylu a allylu; s tou výjimkou, že R není vodík, pokud A je OR»;

R' se vybírá z vodíku, methylu, methoxylu, fluoru, chloru, bromu, kyanoskupiny, trifluormethylu a OCH_xF_y, kde x = 0 až 2 y = 1 až 3 s tou výjimkou, kdy x + y = 3;

a s výjimkou, že R' není vodík, pokud R je methyl a A je OR41;

R se vybírá z vodíku, fluoru a chloru s výjimkou, kdy se R” vybírá z fluoru a chloru pouze pokud se R' vybírá z fluoru a chloru;

Rs se vybírá z vodíku, methylu, ethylu, n-propylu, izopropylu, methoxylu, ethoxylu, fluoru, chloru, bromu, trifluormethylu, diethylaminoskupiny a OCH_xF_y a OCH₂CH_xF_y, kde x = 0 až 2, y = 1 až 3 s výjimkou, kdy x + y = 3, a s dalšími výjimkami, kdy R₅ není fluor, pokud A je OR41; a že R₅ je vodík pouze pokud A je NR4₂R43 a R' je trifluormethyl;

Re je vodík; nebo

R5 a R₍, tvoří společně methylendioxyskupinu;

nebo kteréhokoliv jejich tautomeru;

k výrobě léčivého přípravku k léčbě tuhých maligních nádorů.
2. Použití podle nároku 1, kde sloučeniny obecného vzorce I podle nároku 1 se použijí k výrobě léčivého přípravku k léčbě rakoviny prsu, rakoviny střev, Kaposiho sarkomu, rakoviny plic, rakoviny vaječníků, rakoviny prostaty a kůže.
3. Použití podle nároku 2, kde sloučeniny obecného vzorce I podle nároku 1 se použijí k výrobě léčivého přípravku k léčbě rakoviny prsu, nebo prostaty.
4. Použití sloučenin podle nároků 1 až 3, kde A je OR41.
5. Použití sloučenin podle nároků 1 až 3, kde A je NR₄₂R₄3.
6. Použití sloučenin podle nároků 1 až 4, kde R5 je methyl, ethyl, methoxyl, chlor, brom, a R₅ a

R$ jsou společně methylendioxyl.
7. Použití sloučenin podle nároků 1 až 4 a 6, kde R je methyl a ethyl.
8. Použití sloučenin podle nároků 1 až 4 a 7 kde R je ethyl a R' je vodík.

-16CZ 298534 B6
9. Použití sloučenin podle nároků 1 až 4 a 6, kde R' se vybírá z paramethylu, methoxylu, chloru a trifluormethylu.
10. Použití sloučenin podle nároků 1 až 4 a 6, kde se R” vybírá z meta- a parafluoru za předpokladu, že R' je orthofluor.
11. Použití sloučenin podle nároku 4, kde se R41 vybírá z vodíku a sodíku.
12. Použití podle nároku 4, kde sloučeninou je jV-ethyl-jV-fenyl-l,2-dihydro-4-hydroxy-l,5dimethyl-2-oxychinolin-3-karboxamid.
13. Použití podle nároku 4, kde sloučeninou je jV-ethyl-/V-fenyl-l,2-dihydro-4-hydroxy-5ethyl-l-methyl-2-oxychinolin-3-karboxamid.
14. Použití podle nároku 4, kde sloučeninou je /V-ethyl-jV-fenyl-l,2-dihydro-4-hydroxy-5methoxy-l-methyl-2-oxychinolin-3-karboxamid.
15. Použití podle nároku 4, kde sloučeninou je 7V-ethyl-jV-fenyl-l,2-dihydro-4-hydroxy-5chlor-l-methyl-2-oxychinolin-3-karboxamid nebo její sodné soli.
16. Použití podle nároku 4, kde sloučeninou je V-ethyl-V-fenyl-l,2-dihydro-4-hydroxy-5brom-l-methyl-2-oxychinolin-3-karboxamid.
17. Použití podle nároku 4, kde sloučeninou je A-ethyl-jV-fenyl-l,2-dihydro-4-hydroxy-5,6methylendioxy-l-methyl-2-oxychinolin-3-karboxamid.
18. Použití podle nároku 4, kde sloučeninou je N-ethyl-7V-feny 1-1,2-dihydro-4-hydroxy-5dimethylamino-l-methyl-2-oxychinolin-3-karboxamid.
19. Použití podle nároku 4, kde sloučeninou je 2V-ethyl-jV-(3-fluorfenyl)-l,2-dihydro-4hydroxy-5-chlor-l-methyl-2-oxychinolin-3-karboxamid.
20. Použití podle nároku 4, kde sloučeninou je N—methyl-A—(4-chlorfenyl)-1,2-dihydro-4hydroxy-5-chlor-l-methyl-2-oxychinolin-3-karboxamid.
21. Použití podle nároku 4, kde sloučeninou je A^r-methyl-ÝV-(4-methylfenyl)-l,2-dihydro-4hydroxy-5-chlor-l-methyl-2-oxychinolin-3-karboxamid.
22. Použití podle nároku 4, kde sloučeninou je 7V-methyl-7V-fenyl-(2,4—difluorfenyl)-l,2dihydro-4-hydroxy-5-chlor-l-methyl-2-oxychinolin-3-karboxamid.
23. Použití podle nároku 4, kde sloučeninou je jV-methyl-7V-(2,5-difluorfenyl)-l ,2-dihydro-4hydroxy-5-chlor-l-methyl-2-oxychinolin-3-karboxamid.
24. Použití podle nároku 4, kde sloučeninou je 7V-ethyI-jV-(3-methoxyfenyl)-l,2-dihydro-4hydroxy-5-ethyl-l-methyl-2-oxychinolin-3-karboxamid.
25. Použití podle nároku 4, kde sloučeninou je jV-ethyl-jV-(4-chlorfenyl)-l,2-dihydro-4hydroxy-1,5-dimethy 1-2-oxychinol in-3-karboxamid.
26. Použití podle nároku 4, kde sloučeninou je /V-methyl-7V-(2,4-difluorfenyl)-l,2-dihydro-4hydroxy-5-ethyl-l-methyl-2-oxychinolin-3-karboxamid.
27. Použití podle nároku 4, kde sloučeninou je jV-methyl—/V—(2,4—difluorfenyl)—1,2-dihydro—4hydroxy-5-methoxy-1 -methyI-2-oxychinolin-3-karboxamid.

- 17CZ 298534 B6
28. Použití podle nároku 4, kde sloučeninou je TV-methy 1—TV—(2,5-difluorfenyl)-l ,2-dihydro-4hydroxy-5-methoxy-l-methyl-2-oxychinolin-3-karboxamid.
29. Použití podle nároku 4, kde sloučeninou je jV-methyl-V-(4-trifluormethylfenyl)-l,2dihydro-4-hydroxy-5-methoxy-l-methyl-2-oxychinolin-3-karboxamid.
30. Použití podle nároku 4, kde sloučeninou je V-methyi-V-(2,4-difluorfenyl)-l ,2-dihydro-4hydroxy-5,6-methylendioxy-l-methyl-2-oxychinolin-3-karboxamid.
31. Použití podle nároku 4, kde sloučeninou je 7V-methyl-V-(4-methoxyfenyl)-l,2-dihydro-5dimethylamino-4-hydroxy-l-methyl-2-oxychinolin-3-karboxamid.
32. Použití podle nároků 1 až 3 a 5, kde R₅ se vybírá z methylu, ethylu, methoxylu, ethoxylu, chloru a bromu, nebojsou R5 a R₆ společně methy lendioxyl.
33. Použití podle nároků 1 až 3, 5 a 32, kde se R vybírá z methylu, ethylu a n-propylu.
34. Použití podle nároků 1 až 3, 5 a 32, kde R je vodík.
35. Použití podle nároků 1 až 3, 5 a 32, kde R je methyl a R' je vodík.
36. Použití podle nároků 1 až 3, 5 a 32, kde R42 a R43 je vodík.
37. Použití podle nároků 1 až 3, 5 a 32, kde R' se vybírá z vodíku, p-methylu, methoxylu, chloru a trifluormethylu.
38. Použití podle nároků 1 až 3, 5 a 32, kde se R vybírá z m-fluoru a p-fluoru, za předpokladu, že R' je o-fluor.
39. Použití podle nároku 5, kde sloučeninou je V-methyl-/V-fenyl-4-amino-l,2-dihydro-l,5dimethyl-2-oxychinolin-3-karboxamid.
40. Použití podle nároku 5, kde sloučeninou je TV-methyl-AMenyM-amino-l,2-dihydro-5methoxy-l-methyl-2-oxychinolin-3-karboxamid.
41. Použití podle nároku 5, kde sloučeninou je V-methyl-V-fenyl-4-amino-l,2-dihydro-l,5dimethyl-4-(7V-methylamino)-2-oxychinolin-3-karboxamid.
42. Použití podle nároku 5, kde sloučeninou je 2V-methyl-7V-fenyl-4-amino-l,2-dihydro-5methoxy-4-(V-methylamino)-l-methyl-2-oxychinolin-3-karboxamid.
43. Použití podle nároku 5, kde sloučeninou je 7V-methyl-V-(4-trifluormethyl)fenyM-aminol,2-dihydro-l-methyl-2-oxychinolin-3-karboxamid.
44. Sloučenina obecného vzorce (Γ),

R,

R'

- 18CZ 298534 B6 kde

R42 a R43 jsou stejné nebo různé a vybírají se z vodíku, methylu, ethylu, n-propylu, izopropylu a cyklopropylu; nebo

R42 je COR_b, kde se

Rb se vybírá C1-C4 alkyl; nebo

CORb je 2-acyloxymethylbenzoylová skupina

O kde se

Rc vybírá z methylu, ethylu, fenylu a benzylu;

R se vybírá z vodíku, methylu, ethylu, n-propylu, izopropylu, n-butylu, izobutylu, AéÁ-butylu a allylu;

R' se vybírá z vodíku, methylu, methoxylu, fluoru, chloru, bromu, kyanoskupiny, trifluormethylu a OCH_xF_y, kde x = 0 až 2 y = 1 až 3 s výjimkou, kdy x + y = 3;

R” se vybírá z vodíku, fluoru a chloru s výjimkou, kdy se R vybírá z fluoru a chloru pouze pokud se R' vybírá z fluoru a chloru;

R₅ se vybírá z vodíku, methylu, ethylu, n-propylu, izopropylu, methoxylu, ethoxylu, fluoru, chloru, bromu, diethylaminoskupiny a OCH_xF_y a OCH₂CH_xF_y, kde x = 0 až 2, y = 1 až 3 s tou výjimkou, kdy x + y = 3, a s další výjimkou, že R₅ je vodík pouze pokud R' je trifluormethyl;

Re je vodík; nebo

R₅ a Re tvoří společně methylendioxyl;

nebo kterýkoliv její tautomer.
45. Sloučenina podle nároku 44, kde se R₅ vybírá z methylu, ethylu, methoxylu, ethoxylu, a R₅ a Re jsou společně methylendioxyl.
46. Sloučenina podle nároků 44 a 45, kde se R vybírá z methylu, ethylu a n-propylu.
47. Sloučenina podle nároků 44 a 45, kde R je vodík.
48. Sloučenina podle nároků 44 a 45, kde R je methyl a R' je vodík.
49. Sloučenina podle nároků 44 a 45, kde R42 a R43 jsou vodík.

-19CZ 298534 B6
50. Sloučenina podle nároků 44 a 45, kde R' se vybírá z vodíku a trifluormethylu.
51. Sloučenina podle nároku 44, kterou je ÍV-methyl-AMěnyl^l-amino-l,2-dihydro-l,5-dimethyl-2-oxychinolin-3-karboxamid.
52. Sloučenina podle nároku 44, kterou je 7V-methyl-jV-fenyl-4-amino-l,2-dihydro-5-methoxy-l-methyl-2-oxychinolin-3-karboxamid.
53. Sloučenina podle nároku 44, kterou je 7V-methyl-2V-fenyM-amino-l,2-dihydro-l,5-dimethyl-4-(/V-methylamino)-2-oxychinolin-3-karboxamid.
54. Sloučenina podle nároku 44, kterou je JV-methyl-/V-fenyl-4-amino-l,2-dihydro-5-methoxy-A-(jV-methylamino)-l-methyl-2-oxychinolin-3-karboxamid.
55. Sloučenina podle nároku 44, kterou je 2V-methyl-Y-(4-trifluormethyl)fenyl^l-amino-l,2dihydro-l-methyl-2-oxychinolin-3-karboxamid.
56. 7V-ethyl-/V-fenyl-l,2-dihydro-4-hydroxy-5-dimethylamino-l-methyl-2-oxychinolin-3karboxamid.
57. /V-methyl-iV-(4-methoxy-fenyl)-l ,2-dihydro-5-dimethylamino-4-hydroxy-l -methyl-2oxychinolin-3-karboxamid.
58. Sloučeniny podle kteréhokoliv nároku 44 až 57 pro použití jako léčivo.
59. Farmaceutické přípravky, vyznačující se tím, že obsahují jako účinnou látku sloučeninu podle kteréhokoliv nároku 44 až 57 společně s farmaceuticky vhodným nosičem.
60. Farmaceutické přípravky podle nároku 59, vyznačující se tím, že obsahují další terapeutické aktivní látky.
61. Farmaceutické přípravky podle nároku 59, vyznačující se tím, že denní dávka přípravku obsahuje účinnou látku v množství 0,002 mg/kg až 100 mg/kg tělesné váhy pacienta, s výhodou 0,02 mg/kg až 10 mg/kg.
62. Postup přípravy sloučeniny podle kteréhokoliv z nároků 44 až 55, vyznačující se tím, že se na 4-chlor-l,2-dihydro-2-oxychinolin-3-karboxamidový derivát obecného vzorce (Π)

II působí aminosloučeninou ve vhodném rozpouštědle jako je alkohol, například v ethanolu.