CZ295194B6

CZ295194B6 - Orální prostředky s řízeným uvolňováním obsahující levosimendan

Info

Publication number: CZ295194B6
Application number: CZ20003780A
Authority: CZ
Inventors: Ilkka Larma; Maarit BÄCKMAN; Saila Antila; Lasse Lehtonen
Original assignee: Orion Corporation
Priority date: 1998-04-23
Filing date: 1999-04-23
Publication date: 2005-06-15
Also published as: MXPA00010367A; HUP0101458A2; AU3524699A; IL138951A0; WO1999055305A2; JP4566402B2; NO329809B1; DK1071397T3; JP2010083900A; SK15542000A3; AU756641B2; CZ20003780A3; CA2329234A1; HRP20000704A2; PL197447B1; ID27987A; YU63900A; EP1071397B1; RS49962B; AR019096A1

Abstract

Řešení se týká orálních farmaceutických prostředků, které uvolňují levosimendan řízeným způsobem se sníženým výskytem nežádoucích účinků. Levosimendan, neboli (-)-[[4-(1,4,5,6-tetrahydro-4-methyl-6-oxo-3-pyridazinyl)fenyl]hydrazono]propandinitril, je použitelný pro léčbu městnavého srdečního selhání.ŕ

Description

Oblast techniky

Předkládaný vynález se týká orálních farmaceutických prostředků, které uvolňují levosimendan řízeným způsobem se sníženým výskytem nežádoucích účinků. Levosimendan, neboli (-)-[[4(1,4,5,6-tetrahydro-4—methyl-6-oxo-3-pyridazinyl)fenyl]hydrazono]propandinitril, je použitelný pro léčbu městnavého srdečního selhání.

Dosavadní stav techniky

Levosimendan, což je (-)-enantiomer [[4-(1,4,5,6-tetrahydro-4-methyl-6-oxo-3-pyridazinyl)fenyl]hydrazono]propandinitrilu, a způsob jeho přípravy je popsán v EP 565546 Bl. Levosimendan je účinný při léčbě městnavého srdečního selhání a má významnou vazbu na troponin závislou na vápníku. Levosimendan má vzorec I

Hemodynamické účinky levosimendanu u lidí jsou popsány vSundberg, S., et al., Am. J. Cardiol., 1995, 75: 1061-1066. Farmakokinetika levosimendanu u člověka po i.v. a orálním podání je popsána v Sandell, E. P. et al., J. Cardiovasc. Pharmacol. 26(Supll.l), S57-S62, 1995. Použití levosimendanu při léčbě myokardiální ischemie je popsáno ve WO 93/21921. Klinické studie potvrdily příznivé účinky levosimendanu u pacientů s městnavým srdečním selháním.

Orální podání levosimendanu se ukázalo jako obtížné, zejména tehdy, je-li cílem dosažení terapeutického účinku na delší období. Za prvé, eliminační poločas levosimendanu u člověka je krátký, přibližně 1 hodina. Proto by při použití běžných orálních prostředků s okamžitým uvolňováním obsahujících levosimendan bylo nutné podávat takové prostředky mnohokrát denně. Za druhé, absorpce levosimendanu v gastrointestinálním systému je rychlá. Proto jsou při použití běžných orálních prostředků s okamžitým uvolňováním dosaženy vrcholové plazmatické koncentrace levosimendanu rychle a dočasně, obvykle během 1 hodiny. Vysoké plazmatické koncentrace levosimendanu zvyšují srdeční puls, což není žádoucí u pacientů se srdečním selháním.

Dlouhodobě působící orální prostředky mají mnoho výhod proti běžným orálním prostředkům s rychlým uvolňováním. Mezi takové výhody patří menší variace v plazmatických koncentracích léku, a proto stabilnější terapeutická odpověď, nižší frekvence dávkování a snížení nežádoucích účinků. Obvykle jsou dlouhodobě působící prostředky připraveny smísením léku, činidla kontrolujícího uvolňování a vhodných přísad, a stlačením směsi do formy tablet. Typické dlouhodobě působící prostředky uvolňují lék jak v horním, tak v dolním gastrointestinálním traktu.

Pokusy o podání levosimendanu v běžných dlouhodobě působících prostředcích byly zklamáním. Při podání levosimendanu v dlouhodobě působících prostředcích, které jsou v oboru běžně používány pro dosažení dlouhodobého terapeutického účinku, byly často pozorovány nežádoucí účinky jako silná bolest hlavy, palpitace a zrychlený tep. Proto existuje potřeba nových způsobů a prostředků pro orální podání levosimendanu, konkrétně prostředků a způsobů, které umožní

-1 CZ 295194 B6 dosažení dlouhodobého terapeutického účinku levosimendanu bez nevýhod spojených s podáním levosimendanu v běžných dlouhodobě působících prostředcích.

Podstata vynálezu

Bylo zjištěno, že levosimendan je citlivý na metabolizaci v dolním gastrointestinálním traktu, zejména v tlustém střevu, působením střevních bakterií. Tato metabolizace vede nakonec k tvorbě aktivního metabolitu prvního průchodu, (R)-N-[4-l,4,5,6-tetrahydro-4-methyl-6-oxo-3pyridazinyl)fenyl]acetamidu (II), který má eliminační poločas významně vyšší než levosimendan. Bylo zjištěno, že akumulace aktivního metabolitu je příčinou nežádoucích účinků spojených s použitím dlouhodobě působících levosimendanových prostředků. Objev aktivního metabolitu a způsobu jeho vzniku umožňuje nyní navrhnout prostředky s řízeným uvolňováním, které mají nižší výskyt nežádoucích účinků a které jsou vhodné pro léčbu pacientů se srdečním selháním.

Proto jsou předmětem předkládaného vynálezu orální prostředky, zejména prostředky umožňující dosažení dlouhodobého terapeutického účinku, ze kterých se levosimendan uvolňuje rovnoměrně a výhodně úplně před dosažením dolní části gastrointestinálního traktu, přesněji tlustého střeva, takže tvorba aktivního metabolitu zůstává na nízké úrovni. Proto zůstává koncentrace aktivního metabolitu v plazmě na dostatečně nízké úrovni, takže nedochází ke vzniku nežádoucích účinků spojených s akumulací aktivního metabolitu, zatímco je dosaženo dlouhodobého terapeutického účinku.

Přehled obrázků na výkresech

Obr. 1 ukazuje kalibrační vzorek analyzovaný na aktivní metabolit II od dobrovolníka, jak byl analyzován kapalinovou chromatografíí v tandemu s hmotnostní spektrometrií.

Obr. 2 ukazuje vzorek plazmy po podání dávky analyzovaný na aktivní metabolit II od dobrovolníka, jak byl analyzován kapalinovou chromatografíí v tandemu s hmotnostní spektrometrií.

Obr. 3 ukazuje křivku rozpouštění in vitro pro prostředek 1 příkladu ve fosfátovém pufru, pH 5,8.

Obr. 4 ukazuje křivku rozpouštění in vitro pro prostředek 2 příkladu ve fosfátovém pufru, pH 5,8.

Obr. 5 ukazuje křivku rozpouštění in vitro pro prostředek 3 příkladu ve fosfátovém pufru, pH 5,8.

Obr. 6 ukazuje křivku rozpouštění in vitro pro referenční prostředek příkladu 3 ve fosfátovém pufru, pH 5,8.

Předkládaný vynález obsahuje zlepšený orální systém pro levosimendan, ve srovnání s běžnými dlouhodobě působícími prostředky a prostředky s okamžitým uvolňováním. Mezi jeho výhody patří:

- nižší vrcholové plazmatické koncentrace, které snižují výskyt nežádoucích účinků vysokých koncentrací levosimendanu, jako je zrychlený tep;

- nižší frekvence dávkování; a

- snížení akumulace aktivního metabolitu II, což znamená lepší tolerovatelnost léku, tj. méně nežádoucích účinků způsobených aktivním metabolitem, jako je silná bolest hlavy, palpitace a zrychlený tep.

-2CZ 295194 B6

Plazmatické koncentrace metabolitu II dobře korelují s výskytem nežádoucích účinků, jako je silná bolest hlavy, palpitace a zrychlený tep. Při optimální léčbě pacientů se srdečním selháním levosimendanem by měly být rovnovážné plazmatické koncentrace metabolitu II nižší než 20 ng/ml, lépe nižší než lOmg/ml.

Těchto výhod je v předkládaném vynálezu dosaženo pomocí prostředku s řízeným uvolňováním, který obsahuje: (a) terapeuticky účinné množství levosimendanu; a (b) složku kontrolující uvolňování léku, která způsobuje uvolňování levosimendanu během dlouhého období a umožňuje dosažení stejnoměrných plazmatických koncentrací metabolitu II, které jsou nižší než 20 ng/ml, lépe nižší než 10 mg/ml.

Termín „dlouhé časové období“ znamená období delší než alespoň jedna hodina, lépe alespoň dvě hodiny, po podání. Stejnoměrná plazmatická koncentrace metabolitu II, jak je definována výše, znamená průměrnou hodnotu pro skupinu pacientů.

Výhodně umožňuje složka kontrolující uvolňování léku v podstatě úplné uvolnění levosimendanu před tím, než prostředek dosáhne tlustého střeva.

Termín „složka kontrolující uvolňování léku“ označuje obecně různé technologie, které mohou být použity pro kontrolování a prodloužení uvolňování levosimendanu v prostředku podle předkládaného vynálezu. Mezi takové technologie patří matricové prostředky (například matricové tablety, granule nebo pelety) nebo potažené prostředky (například potažené tablety, granule nebo pelety nebo mikrokapsle). Složky kontrolující uvolňování léku, jakojsou potahy a matrice, a způsoby přípravy matricových a potažených prostředků jsou v oboru dobře známé. Volba materiálu a použitého množství závisí na požadovaném charakteru uvolňování a je rutinní pro odborníky. Jako složka kontrolující uvolňování léku mohou být použity jakékoliv kontrolující materiály, například matricové nebo potahové materiály, nebo jejich kombinace, které jsou vhodné pro dosažení požadovaného charakteru uvolňování v předkládaném vynálezu. Mezi typické složky kontrolující uvolňování použitelné v předkládaném vynálezu patří, například, hydrofilní gelotvorné polymery jako je hydroxypropylmethylcelulóza, hydroxypropylcelulóza, karboxymethylcelulózy, kyselina alginová a jejich směsi; rostlinné tuky a oleje včetně pevných rostlinných olejů, jako je hydrogenovaný sojový olej, ztužený ricinový olej nebo olej z ricinových semen (prodávaný pod obchodním názvem Cutina HR), olej z bavlníkových semen (prodávaný pod obchodním názvem Sterotex nebo Lubritab) nebo jejich směsi; estery mastných kyselin, jako jsou triglyceridy nebo nasycené mastné kyseliny nebo jejich směsi, například glyceryltristearaty, glyceryltripalmitaty, glyceryltrimyristaty, glyceryltribehenaty (prodávané pod obchodním názvem Compritol) a glycerylové estery kyseliny palmitostearové.

Podle předkládaného vynálezu je také možno použít prostředky, které jsou navržené tak, aby měly delší dobu setrvám v horním gastrointestinálním traktu, například v žaludku. Toto snižuje riziko metabolizace levosimendanu v tlustém střevu a následnou tvorbu aktivního metabolitu II. Takové prostředky, například plovoucí nebo bobtnající prostředky, mají tu výhodu, že celková doba uvolňování léku může být podstatně delší, protože trvá podstatně déle, než prostředek dosáhne dolní části gastrointestinálního traktu. Prostředky setrvávající delší dobu v žaludku jsou popsány například v US 4 126 672, US 4 814 178, US 4 777 033, US 5 232 704 a EP 539059.

Tak může být podle předkládaného vynálezu použit jakýkoliv prostředek s řízeným/prodlouženým uvolňováním obsahující levosimendan, který umožňuje dosažení rovnovážné plazmatické koncentrace metabolitu II nižší než 20 ng/ml, lépe nižší než 10 mg/ml.

Rovnovážné plazmatické koncentrace metabolitu II mohou být měřeny pro jakýkoliv prostředek pomocí podávání - jedenkrát nebo několikrát za den - prostředku obsahujícího levosimendan dobrovolníkovi nebo skupině dobrovolníků do té doby, než je dosaženo rovnovážné koncentrace metabolitu II. Plazmatické koncentrace aktivního metabolitu II mohou být potom měřeny postupem podrobně popsaným v příkladu 2.

-3 CZ 295194 B6

Jedním aspektem vynálezu je prostředek s řízeným uvolňováním obsahující levosimendan určený pro orální podání, který má charakteristický charakter rozpouštění in vitro.

Přesněji, vynález se týká prostředku s řízeným uvolňováním pro orální podání, který obsahuje: (a) terapeuticky účinné množství levosimendanu; a (b) složku kontrolující uvolňování léku umožňující dosažení uvolňování levosimendanu během delšího časového období, kde tento prostředek vykazuje celkový čas rozpouštění in vitro, stanovený USP XXII košíčkovou metodou ve fosfátovém pufru o pH 5,8 (při 50 nebo 100 rpm), mezi 1 a 4 hodnotami, alespoň pro 90 % obsahu levosimendanu.

Přesněji, prostředky podle předkládaného vynálezu vykazují celkový čas rozpouštění in vitro v podstatě mezi 1 a 3 hodinami, alespoň pro 90 % obsahu levosimendanu.

Složka kontrolující uvolňování léku může být vybrána způsobem uvedeným výše. Opět, mezi typické složky kontrolující uvolňování použitelné v předkládaném vynálezu patří, například, hydrofílní gelotvomé polymery jako je hydroxypropylmethylcelulóza, hydroxypropylcelulóza, karboxymethylcelulózy, kyselina alginová a jejich směsi; rostlinné tuky nebo oleje nebo estery mastných kyselin, jako je hydrogenovaný sojový olej, ztužený ricinový olej nebo glycerylpalmitostearát.

Způsob pro stanovení charakteru rozpouštění prostředků podle předkládaného vynálezu in vitro je popsán v příkladu 3.

Prostředky podle předkládaného vynálezu mohou být, například, ve formě tablet, kapslí, granulátů nebo prášku.

Zejména výhodné provedení předkládaného vynálezu je získáno kombinováním složky srychlým uvolňováním levosimendanu, volitelně s přísadami, se složkou s řízeným uvolňováním obsahující levosimendan a složku kontrolující uvolňování léku. Složka kontrolující uvolňování léku může být vybrána způsobem uvedeným výše, ale výhodně jí je hydrofílní gelotvomý polymer. Zejména výhodný je prostředek obsahující (a) část s rychlým uvolňováním ve formě prášku obsahujícího levosimendan spolu s alespoň jednou přísadou; a (b) část s řízeným uvolňováním ve formě granulátu obsahujícího levosimendan a hydrofílní gelotvomý polymer kontrolující uvolňování. Část s rychlým uvolňováním ve formě prášku a část s řízeným uvolňováním ve formě granulátu jsou výhodně ve volně tekuté směsi, která může být plněna do kapslí, jako jsou želatinové kapsle nebo HPMC kapsle.

Zejména výhodný prostředek podle předkládaného vynálezu obsahuje 0,05 až 20 %, lépe 0,1 až 10 %, ještě lépe 0,2 až 3 % levosimendanu vzhledem k hmotnosti prostředku. Dávka léku je rozdělena mezi části s rychlým uvolňováním a řízeným uvolňováním. Obvykle je přibližně 25 až 75 %, lépe přibližně 30 až 70 % a nejlépe přibližně 40 až 60 % hmotnosti léku v části s řízeným uvolňováním.

Obvykle je denní dávka levosimendanu u člověka při orálním podání od přibližně 0,1 do 20 mg, lépe od přibližně 0,5 do 10 mg, v jedné denní dávce nebo v několika dávkách za den. Dávka závisí například na věku, tělesné hmotnosti a stavu pacienta. Prostředky podle výhodného provedení obsahují přibližně 0,1 až 5 mg, lépe přibližně 0,2 až 2 mg, levosimendanu rozdělené mezi části s rychlým uvolňováním a řízeným uvolňováním. Výhodné vrcholové plazmatické koncentrace levosimendanu v rovnovážném stavu při léčbě městnavého srdečního selhání jsou v rozmezí od přibližně 1 do přibližně 100 ng/ml, lépe od přibližně 5 do přibližně 60 ng/ml, a nejlépe od přibližně 10 do přibližně 50 ng/ml.

Vhodnou přísadou v části s rychlým uvolňováním je plnivo, jako je mikrokrystalická celulóza nebo laktóza. Mikrokrystalická celulóza je výhodnou přísadou a je dostupná v různých stupních

-4CZ 295194 B6 jako Avicel PH101, Avicel PH102 nebo Avicel PH200. Množství přísad v části s rychlým uvolňováním je přibližně 20 až 70 %, lépe přibližně 30 až 60 %, hmotnosti prostředku. Vhodným kluzným činidlem je kyselina stearová nebo stearan hořečnatý, které mohou být přidány do části s rychlým uvolňováním. Výhodným kluzným činidlem je kyselina stearová.

Mezi hydrofilní gelotvorné polymery kontrolující uvolňování patří, například, hydroxypropylmethylcelulóza, hydroxypropylcelulóza, karboxymethylcelulóza, kyselina alginová a jejich směsi. Výhodná je směs kyseliny alginové s jiným hydrofílním gelotvomým polymerem, konkrétně směs kyseliny alginové s hydroxypropylmethylcelulózou. Komerčně jsou dostupné různé typy hydroxypropylmethylcelulózy, například Methocel K100 (m.h. 26000g/mol), Methocel K4M (m.h. 86000g/mol), Methocel K15M (m.h. 120000g/mol) a Methocel K100M. Viskozita těchto typů ve 2% vodném roztoku (20 °C) je 100 cP, 4000 cP, 15000 cP a 100000 cP, v příslušném pořadí. Výhodná je viskozita hydroxypropylmethylcelulózy mezi 50 až 2000 cP. Výhodným typem hydroxypropylmethylcelulózy je Methocel K100.

K části s řízeným uvolňováním mohou být přidána kluzná činidla, jako je kyselina stearová nebo stearan hořečnatý. Výhodným kluzným činidlem je kyselina stearová.

Množství hydrofílního gelotvomého polymeru ve výhodných provedeních předkládaného vynálezu je přibližně 20 až 80%, lépe 30 až 70%, vzhledem k hmotnosti prostředku. Výhodným hydrofilním gelotvorným polymerem je směs kyseliny alginové s hydroxypropylmethylcelulózou. Výhodné množství kyseliny alginové je od přibližně 10 do 50 %, lépe od přibližně 20 do 40 %, vzhledem k celkovému objemu hydrofílního gelotvomého polymeru.

Množství části s rychlým uvolňováním ve výhodných provedeních předkládaného vynálezu je přibližně 20 až 80 %, lépe přibližně 30 až 70 %, ještě lépe přibližně 40 až 60 %, vzhledem k hmotnosti prostředku. Množství kluzného činidla, pokud je přítomno, je přibližně 0,3 až 10 %, lépe přibližně 0,5 až 5 %, vzhledem k hmotnosti prostředku.

Jiné výhodné provedení vynálezu je získáno smísením složky kontrolující uvolňování léčiva, levosimendanu a přísad, například ve formě prášků, a plnění směsi do kapslí, jako jsou želatinové kapsle nebo HPMC kapsle. Složka kontrolující uvolňování léku může být vybrána způsobem uvedeným výše. Výhodně je složkou kontrolující uvolňování léku hydrofilní gelotvomý polymer, který je v tomto provedení použit v množství přibližně 10 až 70 %, lépe přibližně 15 až 60 %, nejlépe přibližně 20 až 40 %, vzhledem k hmotnosti prostředku. Mezi hydrofilní gelotvorné polymery kontrolující uvolňování patří, například, hydroxypropylmethylcelulóza, hydroxypropylcelulóza, karboxymethylcelulózy, kyselina alginová a jejich směsi. Nejvýhodnější složkou kontrolující uvolňování léku je hydroxypropylmethylcelulóza, zejména hydroxypropylmethylcelulóza s viskozitou mezi 50 až 2000 cP, jako je Methocel K100, a kyselina alginová nebo jejich směs. Množství přísady (například mikrokrystalické celulózy nebo laktózy) je v tomto provedení přibližně 30 až 90 %, lépe přibližně 40 až 80 %, nejlépe přibližně 50 až 70 %, vzhledem k celkové hmotnosti prostředku. Levosimendan je použit v množstvích uvedených pro předešlá výhodná provedení.

Ještě jiné výhodné provedení vynálezu je prostředek ve formě matricové tablety, která je získána smísením složky kontrolující uvolňování léčiva, levosimendanu a přísad, jako je mikrokrystalická celulóza, laktóza a/nebo kyselina stearová, a stlačením směsi do formy tablety za použití vhodného tabletovacího lisu. Složka kontrolující uvolňování léku může být opět vybrána způsobem uvedeným výše. Výhodně je složkou kontrolující uvolňování léku hydrofilní gelotvomý polymer nebo rostlinný tuk nebo oleje nebo ester mastné kyseliny, jak byly popsány výše. V tomto provedení je složka kontrolující uvolňování léčiva použita v množství přibližně 0,5 až 60 %, vzhledem ke hmotnosti prostředku, a množství přísad (například mikrokrystalické celulózy) je přibližně 30 až 99 %, vzhledem k hmotnosti prostředku. Pokud je složkou kontrolující uvolňování léčiva hydrofilní gelotvomý polymer, například hydroxypropylmethylcelulóza, zejména hydroxypropylmethylcelulóza s viskozitou mezi 50 až 2000 cP, jako je Methocel K100, a kyselina alginová

-5CZ 295194 B6 nebo jejich směsi, tak je použita v množství přibližně 5 až 60, lépe přibližně 10 až 50 %, nejlépe přibližně 15 až 40 %, vzhledem k hmotnosti prostředku, a množství přísad (například mikrokrystalické celulózy) je přibližně 30 až 99 %, lépe přibližně 50 až 90 %, nejlépe přibližně 60 až 85 %, vzhledem k hmotnosti prostředku. Pokud je složkou kontrolující uvolňování léčiva rostlinný tuk nebo oleje nebo ester mastné kyseliny, například hydrogenovaný sojový olej, ztužený ricinový olej nebo glycerylpalmitostearát, tak je složka kontrolující uvolňování léčiva použita v množství přibližně 0,5 až 30 %, lépe přibližně 2 až 20 %, nejlépe přibližně 3 až 15 %, vzhledem k hmotnosti prostředku, a množství přísad (například mikrokrystalické celulózy) je přibližně 70 až 99 %, lépe přibližně 80 až 98 %, nejlépe přibližně 85 až 97 %, vzhledem k hmotnosti prostředku. Levosimendan je použit v množstvích uvedených pro předešlá výhodná provedení.

Následující příklady dokreslují předkládaný vynález a nijak neomezují jeho rozsah.

Příklady provedení vynálezu

Příklad 1: Příklady prostředků

Prostředek 1:

Část ve formě	Levosimendan	1,0 mg
granulí	Kyselina alginová	18,0 mg
	Methocel K100LV	37,0 mg
	Kyselina stearová	0,6 mg
Část ve formě	Levosimendan	1,0 mg
prášku	AvicelPHIOl	84,0 mg
	Kyselina stearová	1,5 mg

Prostředek 2:
Část ve formě	Levosimendan	1,0 mg
granulí	Kyselina alginová	23,0 mg
	Methocel K100LV	46,0 mg
	Kyselina stearová	...
Část ve formě	Levosimendan	1,0 mg
prášku	AvicelPHIOl	69,5 mg
	Kyselina stearová	1,5 mg

Prostředek 3:
Část ve formě	Levosimendan	1,0 mg
granulí	Kyselina alginová	28,0 mg
	Methocel K100LV	56,0 mg
	Kyselina stearová	0,9 mg
Část ve formě	Levosimendan	1,0 mg
prášku	AvicelPHIOl	56,0 mg
	Kyselina stearová	1,5 mg

-6CZ 295194 B6

Prostředek 4: Část ve formě granulí

Levosimendan

Kyselina alginová

Methocel K100LV

Kyselina stearová

1,0 mg

33,0 mg

66,0 mg

0,6 mg

Část ve formě prášku

Levosimendan

Avicel PH101

Kyselina stearová

1,0 mg

43,0 mg

1,5 mg

V příkladech uvedených výše byl materiál pro část ve formě granulí proset a smísen do homogenity ve vhodné míchačce, jako je Turbula míchačka nebo Zanchetta kontejnerová míchačka. Směs ve formě prášku se prosela přes 0,6 mm síto. Hmota se granulovala za sucha rozdrcením (byla lisována pomocí tabletovacího lisu). V tomto postupu byla hmota zhutněna za použití Bepex Pharapactor L200/50P, s lisovací silou přibližně 45 kN. Zhutněná hmota se prosela a získaly se granule o průměru 0,7 až 1,7 mm.

Materiál pro část ve formě prášku bez kyseliny stearové se prosel a smísil se do homogenity ve vhodné míchačce, jako je Turbula míchačka nebo Zanchetta kontejnerová míchačka. Část ve formě granulí a část ve formě prášku a kyselina stearová se smísily do homogenity ve vhodné míchačce, jako je Turbula míchačka nebo Zanchetta kontejnerová míchačka. Získaná hmota se plnila do kapslí z tuhé želatiny č. 3. Místo kapslí z tuhé želatiny mohou být také použity HPMC kapsle č. 3.

Příklad 2: Stanovení koncentrace aktivního metabolitu II v lidské plazmě pomocí kapalinové chromatografie v tandemu s hmotnostní spektrometrií.

Příprava kalibračních vzorků

Aktivní metabolit II byl přidán ve 20 μΐ fosfátového pufru, pH 7,2, do 0,5 ml plazmy neobsahující analyt. Množství přidaného analytu byly 0,100, 0,250, 0,500, 1,00, 2,50, 3,75, 5,0, 7,50 a 12,5 ng. Po důkladném promísení během 20 sekund a odstání po dobu 10 minut se přidalo 2500 pg vnitřního standardu, (R)-N-[4-l,4,5,6-tetrahydro-4-methyl-6-oxo-3-pyridazinyl)fenyljacetamidu, ve 20 μΐ fosfátového pufru, pH 7,2. Směs se důkladně promísila během 1 minuty a nechala se ustát během 15 minut. Kalibrační vzorky se alkalizovaly 50 μΐ 0,1 M hydroxidu sodného a mísily se po dobu 20 sekund, kalibrační vzorky se extrahovaly 5 ml ethylacetátu: hexanu (8:2) pomocí míšení po dobu 3 minut. Po odstředění během 7 minut se organická vrstva separovala a zahustila se při 40 °C za použití TurboVap odparky. Po usušení kalibračních vzorků se přidalo 200 μΐ ethylacetátu: hexanu, provedlo se míšení po dobu 1 minuty a zahuštění při 40 °C za použití TurboVap odparky. Potom se přidalo 200 μΐ methanolu-2 mM octanu amonného (1:1), kalibrační vzorky se promísily během 1 minuty a nechaly se ustát po dobu 5 minut. Po 7 minutovém odstředění se supematant přenesl do nepoužité konické zkumavky pro analýzu kapalinovou chromatografíí v kombinaci s hmotnostní spektrometrií.

Příprava vzorků

Vzorky byly připraveny způsobem popsaným výše, s tou výjimkou, že první přidání pufru je bez analytu.

Kapalinová chromatografie v kombinaci s hmotnostní spektrometrií

Analýzy se provedly za použití PE Sciex API 300 kombinovaného kvadrupólového hmotnostního spektrometru vybaveného zahřívaným nebulizačním rozhraním. Pro HPLC byl použit Hawlett

-7CZ 295194 B6

Packard HP1090L systém. Byla použita kolona LiChrosorb RP-18 s reverzní fází (250 x 4 mm ID, 10 pm částice, E. Měrek). Mobilní fáze se skládá z methanolu-2 mM octanu amonného, pH 5 (60:40 obj./obj.). Průtok je 1 ml/min. Podíl 100 μΐ extraktu byl nastříknut do kolony pro kapalinovou chromatografii.

Eluent z kolony byl přímo zaveden do hmotnostního spektrometru. Vybíjecí proud jehly byl nastaven na 4 kV. Tlak plynu v nebulizátoru (dusíku) byl 5 barů. Teplota rozhraní byla 500 °C. Napětí na vstupní cloně bylo 25 V. Kladné ionty byly vzorkovány do kvadrupólového hmotnostního analyzátoru.

Měření byla provedena za použití vybrané techniky pro sledování reakce. První kvadrupólový filtr hmotnostního spektrometru, Ql, byl nastaven tak, aby propouštěl protonizované molekuly při m/z 246 pro aktivní metabolit (II) a m/z 260 pro vnitřní standard, pro kolizemi indukovanou fragmentaci na Q2. Příslušné vzniklé ionty, při m/z 204 a m/z 218, se potom nechají procházet do Q3 pro monitorování. Použila se klidová doba 200 ms a pauza 100 ms. Chromatogramy pro vybrané reakce byly zaznamenány pomocí PE Sciex API 300 Data Systému.

Kvantifikace a výpočty

Poměry plochy píků analytu a jeho vnitřního standardu byly vneseny do grafu v závislosti na koncentraci. Stanovení rovnic kalibrační křivky a koncentrací neznámých vzorků byly provedeny za použití PE Sciex API 300 Data Systému a PE Sciex MacQuan 1.4 programu. Limit kvantifikace byl 0,200 ng/ml. Byla připravena kalibrační křivka pro aktivní metabolit (II).

Specificita

Ionty produkované aktivním metabolitem II a jeho vnitřním standardem byly sledovány za použití vybrané techniky pro monitorování reakce. Metoda je specifická s ohledem na pozadí způsobené plazmou. V prázdných plazmatických extraktech nebyly pozorovány interferující píky. Obr. 1 a 2 ukazují kalibrační vzorek plazmy a vzorek od dobrovolníka po podání dávky.

Příklad 3: Testy prostředků podle předkládaného vynálezu in vitro a in vivo

Prostředky 1, 2 a 3 z příkladu 1 byly testovány v testu rozpouštění. Rychlost rozpouštění prostředků byla testována způsobem podle US lékopisu XXII (košíčková metoda) ve fosfátovém pufru, pH 5,8, při 50 rpm. Výsledky pro prostředky 1, 2 a 3 jsou uvedeny na obr. 3, 4 a 5, v příslušném pořadí.

Prostředky 1, 2 a 3 z příkladu 1 byly potom podány zdravým dobrovolníkům jako jediná orální dávka obsahující 2 mg levosimendanu. Každá skupina se skládala z 9 jedinců. Plazmatické koncentrace metabolitu II byly určeny 12 hodin po podání. Výsledky jsou uvedeny v tabulce 1.

-8CZ 295194 B6

Tabulka 1: Plazmatické koncentrace (pg/ml) metabolitu II u zdravých dobrovolníků 12 hodin po jediné orální dávce levosimendanu (n = 9). Klinická studie 3001047.

Jedinec	Prostředek 1	Prostředek 2	Prostředek 3
1	<	<	<
2	<	205	<
3	298	295	347
4	214	240	262
5	<	<	<
6	249	572	1300
7	<	<	<
8	<	<	<
9	<	392	<
Průměr	85	189	212
SD	129	208	429

SD - standardní odchylka < - pod detekčním limitem (200 pg/ml)

Příklad 4: Testy referenčního prostředku in vitro a in vivo

Referenční prostředek obsahující

Levosimendan 2,0mg

Methocel K4M 35,0mg

AvicelPHIOl 101,6mg

Kyselinu stearovou 1,4 mg byl testován v testu rozpouštění. Prostředek byl připraven prosetím a smísením materiálu ve 15 formě prášku do homogenní směsi a plněním tohoto materiálu do kapslí ztuhé želatiny č. 3.

Rychlost rozpouštění prostředku byla testována způsobem podle US lékopisu XXII (košíčková metoda) ve fosfátovém pufru, pH 5,8, při 100 rpm. Výsledky jsou uvedeny na obr. 6.

Referenční prostředek byl potom podán 8 zdravým dobrovolníkům jako jediná orální dávka obsahující 2 mg levosimendanu. Plazmatická koncentrace metabolitu II byla určena 12 hodin po podání. Výsledky jsou uvedeny v tabulce 2.

-9CZ 295194 B6

Tabulka 2: Plazmatická koncentrace (pg/ml) metabolitu II u zdravých dobrovolníků 12 hodin po jediné orální dávce levosimendanu (n = 8). Klinická studie 3001047.

Jedinec	Refer. prostředek
1	<
2	283
3	1330
4	1260
5	253
6	268
7	492
8	833
Průměr	590
SD	496

SD - standardní odchylka < - pod detekčním limitem (200 pg/ml)

Prostředky podle předkládaného vynálezu mající celkový čas rozpouštění in vitro, jak je stanoven podle USP XXII (košíčkovou metodou) ve fosfátovém pufru, pH 5,8, mezi 1 a 4 hodinami alespoň pro 90 % obsahu levosimendanu způsobují významně nižší plazmatickou koncentraci metabolitu II in vivo, ve srovnání s referenčním prostředkem, který má pomalejší rychlost rozpouštění.

Příklad 5: Plazmatické koncentrace levosimendanu a aktivního metabolitu II po 7denním levosimendanu

Ve studii rovnovážného stavu byl 1 mg levosimendanu podáván orálně zdravým dobrovolníkům třikrát denně po dobu 7 dnů. Během léčby byly sledovány plazmatické koncentrace levosimendanu a aktivního metabolitu II. Byl použit prostředek 3 z příkladu 1 s tou výjimkou, že celkové množství levosimendanu bylo 1 mg a mikrokrystalické celulózy (Avicel PH-200) bylo 51,0 mg. Plazmatické koncentrace levosimendanu 1 a 4 hodiny po poslední dávce (den 7) a metabolitu II 8 hodin po poslední dávce (den 7) jsou uvedeny v tabulce 3.

-10CZ 295194 B6

Tabulka 3: Průměrné plazmatické koncentrace levosimendanu a aktivního metabolitu II po 7denním podávání levosimendanu

	Levosimendan (den 7)	Metabolit II (den 7)
	1, hodina	4. hodina	8. hodina
Plasmatická koncentrace	15,4	8,9	3,44
SD (ng/ml)	8,9	4,9	1,84
N	14	14	13

SD = standardní odchylka

N = počet jedinců

Výsledky ukazují, že prostředky podle předkládaného vynálezu umožňují dosažení rovnovážné a terapeuticky účinné plazmatické koncentrace levosimendanu po dlouhou dobu, zatímco rovnovážné plazmatické koncentrace metabolitu II zůstávají na přijatelných hodnotách.

Příklad 6: Další příklady prostředků

Prostředek 6 (kapsle)

Levosimendan Methocel K100LV Avicel PH-200 Kyselina stearová

1,0 mg 35,0 mg 80,5 mg

6,4 mg

Levosimendan, Methocel K100LV a mikrokrystalická celulóza (Avicel) se prosejí a smísí se ve vhodné míchačce (Turbula nebo ekvivalentní přístroj). Potom se proseje kyselina stearová a smísí se s hmotou ve vhodné míchačce (Turbula nebo ekvivalentní přístroj). Získaný materiál se plní do bílých želatinových kapslí č. 3 za použití přístroje pro plnění kapslí Harro Hofliger, MG2, nebo ekvivalentního přístroje.

Data rozpouštění výše uvedeného prostředku (USP XXII, fosfátový pufr, pH 5,8, 100 rpm) jsou uvedeny v Tabulce 4.

-11 CZ 295194 B6

Tabulka 4: Křivka rozpouštění in vitro pro prostředek 6 ve fosfátovém pufru pH 5,8, při lOOrpm.

Min.	% rozpouštění
5	12,1
15	43,7
30	65, 0
45	77,4
60	88,3
120	95, 7
160	97,4
240	97,8
300	98,1
360	98,1

Prostředek 7 (matricová tableta)

Levosimendan 1,0mg

Methocel K100LV 30,0mg

Kroskarmellosa sodná 0,27 mg

AvicelPH-200 100,0mg

Kyselina stearová 4,0mg

Levosimendan, Methocel K100LV, kroskarmellosa sodná a mikrokrystalická celulóza (Avicel) se smísí ve vhodné míchačce (Turbula nebo ekvivalentní přístroj). Získaný prášek se potom proseje a smísí se ve vhodné míchačce (Turbula nebo ekvivalentní přístroj). Potom se proseje kyselina stearová a smísí se se směsí ve formě prášku ve vhodné míchačce (Turbula nebo ekvivalentní ío přístroj). Získaný materiál se potom stlačí na tablety za použití vhodného tabletovacího lisu (průměr razidla 7 mm a poloměr konkávní strany 10,5 mm, tvrdost 60 N) plní do bílých želatinových kapslí č. 3 za použití přístroje pro plnění kapslí Harro Hofliger, MG2, nebo ekvivalentního přístroje.

Data rozpouštění výše uvedeného prostředku (USP XXII, fosfátový pufr, pH 5,8, 100 rpm) jsou uvedena v Tabulce 5.

-12CZ 295194 B6

Tabulka 5: Křivka rozpouštění in vitro pro prostředek 7 ve fosfátovém pufru pH 5,8, při lOOrpm.

Min.	% rozpouštění
10	33, 7
20	47,8
30	60, 9
40	72,6
50	78,5
60	82,5
90	88,5
120	90,0
180	92,2
240	94,8
300	96, 9

Prostředek 8 (matricová tableta)

Levosimendan Kroskarmellosa sodná Akofíne NF Avicel PH-200

1,0 mg 0,11 mg 10,0 mg 100,0 mg

Levosimendan, kroskarmellosa sodná a mikrokrystalická celulóza (Avicel) se smísí ve vhodné míchačce (Turbula nebo ekvivalentní přístroj). Získaný prášek se potom proseje a smísí se ve vhodné míchačce (Turbula nebo ekvivalentní přístroj). Potom se proseje Akofíne NF (hydrogenovaný rostlinný olej) a smísí se se směsí ve formě prášku ve vhodné míchačce (Turbula 10 nebo ekvivalentní přístroj). Získaný materiál se potom stlačí na tablety za použití vhodného tabletovacího lisu (průměr razidla 7 mm a poloměr konkávní strany 10,5 mm, tvrdost 60 N).

Claims

1. Prostředek s řízeným uvolňováním pro orální podání, vyznačující se tím, že obsahuje: (a) terapeuticky účinné množství levosimendanu; a (b) složku kontrolující uvolňování léku umožňující uvolňování levosimendanu během delšího časového období a způsobující rovnovážnou plazmatickou koncentraci metabolitu II nižší než 20 ng/ml, výhodně nižší než 10 ng/ml.

2. Prostředek podle nároku 1,vyznačující se tím, že složka kontrolující uvolňování léku umožňuje v podstatě úplné uvolnění levosimendanu před tím, než prostředek dosáhne tlustého střeva.

3. Prostředek podle nároku 1 nebo 2, vyznačující se tím, že složka kontrolující uvolňování léku je hydrofilní gelotvomý polymer nebo rostlinný tuk nebo olej nebo ester mastné kyseliny.

4. Prostředek s řízeným uvolňováním pro orální podání, vyznačující se tím, že obsahuje: (a) terapeuticky účinné množství levosimendanu; a (b) složku kontrolující uvolňování léku umožňující uvolňování levosimendanu během delšího časového období, kde celkový čas rozpouštění prostředku in vitro, stanovený košíčkovou metodou podle USP XXII ve fosfátovém pufru o pH 5,8, je v rozmezí 1 až 4 hodin alespoň pro 90 % obsahu levosimendanu.

5. Prostředek s řízeným uvolňováním pro orální podání, vyznačující se tím, že obsahuje: (a) část s rychlým uvolňováním obsahující levosimendan, volitelně alespoň s jednou přísadou; a (b) část s řízeným uvolňováním obsahující levosimendan a složku kontrolující uvolňování léku.

6. Prostředek podle nároku 5, vyznačující se tím, že obsahuje (a) část srychlým uvolňováním ve formě prášku skládajícího se z levosimendanu a alespoň jedné přísady; a (b) část s řízeným uvolňováním ve formě granulátu skládajícího se z levosimendanu a hydrofilního gelotvomého polymeru kontrolujícího uvolňování.

7. Prostředek podle nároku 5 nebo 6, vyznačující se tím, že část s rychlým uvolňováním obsahuje levosimendan a mikrokrystalickou celulózu.

8. Prostředek podle nároku 6 nebo 7, vyznačující se tím, že hydrofilní gelotvomý polymer kontrolující uvolňování je hydroxypropylmethylcelulóza, kyselina alginová nebo jejich směs.

9. Prostředek podle jakéhokoliv z nároků 5 až 8, vyznačující se tím, že přibližně 25 až 75 %, lépe přibližně 30 až 70 %, nejlépe přibližně 40 až 60 % hmotnosti léku je v části s řízeným uvolňováním.

10. Prostředek podle jakéhokoliv z nároků 5 až 9, vyznačující se tím, že množství hydrofilního gelotvorného polymeruje přibližně 20 až 80 %, lépe přibližně 30 až 70 %, vzhledem k hmotnosti prostředku.