BRPI0915284B1

BRPI0915284B1 - composição farmacêutica oral, e, uso de uma composição farmacêutica

Info

Publication number: BRPI0915284B1
Application number: BRPI0915284A
Authority: BR
Inventors: J Jolly Douglas; e gruber Harry; Olmstead Kay
Original assignee: Tocagen Inc
Priority date: 2008-06-30
Filing date: 2009-06-30
Publication date: 2020-01-14
Also published as: IL209385A0; KR20110039544A; KR20180004279A; KR101813721B1; US9889133B2; IL246473B; MX337213B; CA2724740A1; US20110268720A1; AU2009267052B2; MX2010014256A; WO2010002937A1; JP2017214398A; US20200281929A1; JP2011526918A; EP2306823A4; CN107029220A; JP6170896B2; CN102076215A; EP2306823A1

Abstract

composição farmacêutica oral, e, uso de uma composição farmacêutica a revelação fornece uma formulação de liberação prolongada de 5-fluorocitosina. em um outro aspecto é fornecido um método para tratar uma doença fúngica. o método compreende administrar a um indivíduo que necessita deste uma quantidade eficaz de tratamento de fungo de uma composição compreendendo 5-fluorocitosina. ainda em um outro aspecto é fornecido um método para tratar um câncer. o método compreende administrar a um indivíduo que necessita deste uma quantidade suficiente de um vetor de expressão para induzir expressão de citosina desaminase que é capaz de converter 5-fluorocitosina em 5-fluoruracila em células do câncer e uma quantidade eficaz de tratamento de câncer de uma composição compreendendo 5-fluorocitosina.

Description

“COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA ORAL, E, USO DE UMA COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA”

REFERÊNCIA CRUZADA A PEDIDOS RELACIONADOS

Este pedido reivindica prioridade para Pedido provisório U.S. série No. 61/077,142, depositado em 30 de junho de 2008, a revelação do qual está incorporado aqui pela referência.

CAMPO DA INVENÇÃO

A invenção diz respeito a formulações de 5-fluorocitosina, e a métodos de usar formulações de 5-fluorocitosina para tratar doenças fúngicas, pneumonia por Pneumocystis carinii e outras doenças infecciosas ou câncer.

FUNDAMENTOS DA INVENÇÃO

A 5-fluorocitosina análogo de pirimidina (5-FC) é um medicamento sintético (Ancobon®) que tem atividade antimicótica e pode também ser usado para tratamento de câncer. Ancobon® é uma formulação de cápsula de liberação imediata com uma meia vida pequena de medicamento é rapidamente depurada do corpo e, assim, dosagem frequente alta de 4 a 16 vezes ao dia é exigida para manter o nível de eficácia do medicamento.

Além disso, 5-FC é eficaz em um nível mínimo ou acima deste de concentração do medicamento no sangue e mesmo com dosagem frequente de Ancobon, em virtude de sua natureza de liberação imediata, existem períodos de tempo quando a concentração do medicamento cai abaixo desta concentração eficaz.

5-FC foi primeiro sintetizada em 1957. Ela não tem nenhuma capacidade antifúngica intrínseca, mas depois ela ter sido captada pelas células fúngicas suscetíveis é convertida em 5-fluoruracila (5-FU), que é adicionalmente convertida nos mesmos metabólitos de que interferem com síntese RNA e DNA fúngicos. Monoterapia com 5-FC é limitada em virtude

Petição 870190102169, de 11/10/2019, pág. 7/11 do desenvolvimento frequente de resistência. Em combinação com anfoterícina B, 5-FC pode ser usada para tratar micoses sistêmicas graves, tais como criptococose, candidose, cromoblastomicose e aspergilose. Recentemente, 5-FC foi combinada com agentes antifungicos de azol mais novos; ela também desempenha um importante papel em uma nova abordagem para o tratamento de câncer. Os efeitos colaterais graves de 5-FC incluem hepatotoxicidade e depressão da medula óssea. Náusea temporária ocorre no tempo da dosagem que pode ser melhorado espalhando-se a dose em alguns minutos durante uma dose particular. Sintomas gastrintestinais são também observados. Na maioria dos pacientes, esses efeitos colaterais são dependentes de concentração, previsível, possivelmente evitáveis com monitoramento rigoroso para manter concentrações de 5-FC a <100 pg/mT., e reversíveis com interrupção do medicamento ou redução da dose. 5-FC é bem absorvida depois da administração oral, penetra bem nos tecidos do corpo, incluindo o cérebro, e é expelida principahnente pelos rins. Em falência renal, ajustes de dose principal têm que ser feito. A interação de medicamento mais importante de 5-FC ocorre com administração concomitante de 5-FC e medicamentos nefrotóxicos, especialmente anfoterícina B.

SUMÁRIO DA INVENÇÃO

A revelação diz respeito a uma formulação de liberação prolongada/prolongada (algumas vezes referida como uma “lenta”) de uma pró-droga usada em doença fungica, de câncer, infecciosa e outras terapias de doença. A formulação de liberação prolongada é usada para melhorar aquiescência do paciente com administração reduzindo-se a frequência de dosagem e reduzindo-se efeitos colaterais. A formulação de liberação prolongada da revelação fornece um T_max prolongado comparado atualmente a formulações de dose imediata (por exemplo, Ancobon®).

A revelação fornece uma formulação de 5-FC de liberação prolongada. Quando dosada apropriadamente, a formulação de 5-FC de liberação prolongada fornece níveis sanguíneos de pico de 5-FC entre cerca de 1-200 μg/π)L (por exemplo, entre cerca de 1-100 pg/mL, cerca de 20-90 pg/mL, cerca de 30-80 pg/mL, cerca de 40-70 pg/mL ou cerca de 80-120 pg/mL). Deve-se entender que qualquer valor entre cerca de 1-200 pg/mL é contemplado pela revelação. Em uma modalidade, os níveis de 5-FC são obtidos administrando-se uma formulação de dose de liberação prolongada de cerca de 1 a 5 g por dose 3 a 4 vezes por dia (por exemplo, 3 vezes por dia). Em uma modalidade, os níveis de 5-FC são obtidos usando uma formulação de dose de liberação prolongada da revelação administrada 1 a 4 vezes por dia (cerca de 50 a 200 mg/kg/dia). Em uma modalidade, os níveis de 5-FC são obtidos usando uma formulação de dose de liberação prolongada da revelação administrada 1 a 3 vezes por dia (cerca de 50 a 200 mg/kg/dia). Em uma modalidade, os níveis de 5-FC são obtidos usando uma formulação de dose de liberação prolongada da revelação administrada 1 a 2 vezes por dia (cerca de 50 a 250 mg/kg/dia). Em uma modalidade, os níveis de 5-FC são obtidos usando uma formulação de dose de liberação prolongada da revelação administrada 2 a 4 vezes por dia (cerca de 50 a 250 mg/kg/dia). Em uma modalidade, os níveis de 5-FC são obtidos usando uma formulação de dose de liberação prolongada (isto é, uma liberação prolongada) da revelação administrada 2 a 3 vezes por dia (cerca de 50 a 250 mg/kg/dia). Em uma modalidade, a formulação de 5-FC da revelação é usada para tratar um indivíduo por 7 dias a cada mês por meses ou anos. Em uma outra modalidade, a dose pode ser cerca de 1 a 5 g administrada 3 a 4 doses por dia. Ainda em uma outra modalidade, a formulação de 5-FC da revelação é administrada cerca de 2 a 8 g (por exemplo, cerca de 6 a 7 g) 2 ou mais vezes por dia. Em uma modalidade adicional, a dose é administrada 1 vez por dia a 50 a 200 mg/kg, 2 vezes por dia a 25 a 100 mg/kg, três vezes por dia a cerca de 16-67 mg/kg, ou 4 vezes por dia a 12 a 50 mg/kg. Novamente será percebido que qualquer dose entre 1 a 250 (por exemplo, 75 a 175) mg/kg por dia pode ser incluída, a programação de dosagem ajustada para obter a quantidade desejada e níveis de soro ou para menor função renal. Ainda em uma outra modalidade, a formulação de 5-FC fornece um ou mais do seguinte em um indivíduo humano alimentado após uma dose única de 500 mg de 5FC em uma formulação de liberação prolongada: (i) um C_max de 5-FC entre cerca de 2,0 pg/mL e cerca de 10,0 pg/mL (por exemplo, entre cerca de 2,0 a

9,5 pg/mL, entre cerca de 3,0 a 8,0 pg/mL, entre cerca de 3,0 a 6,0 pg/mL, entre cerca de 3,5 a 8,0 pg/mL, ou entre cerca de 2,5 a 4,5 pg/mL); (ii) um tmediano de cerca de 3 horas ou mais, (por exemplo, entre cerca de 3 a 12 horas, entre cerca de 3 a 10 horas, entre cerca de 4 a 12 horas, entre cerca de 4 a 10 horas, entre cerca de 5 a 12 horas, entre cerca de 5 a 10 horas, entre cerca de 6 a 12 horas, ou entre cerca de 6 a 10 horas, ou entre cerca de 6 a 8 horas); (iii) uma AUC de cerca de 20 a 80 pg*hr/mL (por exemplo, entre cerca de 25 a 75 pg*hr/mL, entre cerca de 30 a 70 pg*hr/mL, entre cerca de 30 a 65 pg*hr/mL, entre cerca de 30 a 60 pg*hr/mL, ou entre cerca de 35 a 65 pg*hr/mL); e (iv) um ti/₂ entre cerca de 3 a 8 horas (por exemplo, entre cerca de 3 a 7 horas, entre cerca de 4-8 horas, ou entre cerca de 4-7 horas). Em uma modalidade, a dose de 5-FC é ajustada com base na atividade de atividade de citosina desaminase em um indivíduo, tecido ou célula. Ainda em uma outra modalidade, a formulação de 5-FC fornece um ou mais do seguinte em um indivíduo humano alimentado após uma dose única de 100 a 1000 mg de 5FC em uma formulação de liberação prolongada: (i) um 5-FC de C_max entre cerca de 2,0 pg/mL e cerca de 10,0 pg/mL escalado linearmente para os múltiplos da dose de 500 mg; (ii) um de cerca de 3 horas ou mais, (por exemplo, entre cerca de 3 a 12 horas, entre cerca de 3 a 10 horas, entre cerca de 4 a 12 horas, entre cerca de 4 a 10 horas, entre cerca de 5 a 12 horas, entre cerca de 5 a 10 horas, entre cerca de 6 a 12 horas, ou entre cerca de 6 a 10 horas, ou entre cerca de 6 a 8 horas); (iii) uma AUC de cerca de 20 a 80 pg*hr/mL escalado linearmente para os múltiplos da dose de 500 mg; e (iv) um ti/2 entre cerca de 3 a 8 horas (por exemplo, entre cerca de 3 a 7 horas, entre cerca de 4 a 8 horas, ou entre cerca de 4 a 7 horas). Em uma modalidade, a revelação fornece uma composição farmacêutica oral compreendendo 5-FC, em que a composição farmacêutica é uma forma de liberação modificada (por exemplo, uma forma monolítica sólida de comprimido) e libera 5-FC no trato gastrintestinal superior de um indivíduo over um período prolongado de tempo. A composição pode compreender adicionalmente um polímero de formação de matriz hidrofilica tai como um ou mais de carbopol (por exemplo, carbopol 71-G), acetato de polivinila e 10 copolímero de povidona (Kollidon-SR®) hidroxipropil celulose (HPC), hidroximetil celulose (HPMC), e óxido de polietileno (PolíOx). Os polímeros hidrofílicos podem constitui cerca de 10 porcento em peso a cerca de 40 porcento em peso (ou mais) da composição. Em uma modalidade, a 5-FC está presente em uma quantidade de cerca de 100 mg a cerca de 1.000 mg por 15 comprimido ou dose. Em uma outra modalidade, a composição exibe taxa de liberação de 5-FC maior que cerca de 80 % em cerca de 4 a cerca de 12 horas (por exemplo, cerca de 6 a 10 horas) da maneira medida pelo aparelho de dissolução USP Tipo II (método de pá) a 75 rpm em 900 mL de água deionizada a 3 7 °C usando método USP de 5-FC com detecção UV a cerca de 20 275 nm. Ainda em uma outra modalidade, a 5-FC está presente na composição farmacêutica em uma quantidade de cerca de 500 mg e em que depois da administração oral da composição farmacêutica a um indivíduo alimentado (por exemplo, um indivíduo humano alimentado), a composição exibe um ou mais de: (i) um C_max de 5-FC entre cerca de 2,0 pg/mL e cerca de 25 10,0 pg/mL (por exemplo, entre cerca de 2,0 a 9,5 pg/mL, entre cerca de 3,0 a

8,0 pg/mL, entre cerca de 3,0 a 6,0 pg/mL, entre cerca de 3,5 a 8,0 pg/mL, ou entre cerca de 2,5 a 4,5 pg/mL); (ii) um tmediano de cerca de 3 horas ou mais, (por exemplo, entre cerca de 3 a 12 horas, entre cerca de 3 a 10 horas, entre cerca de 4 a 12 horas, entre cerca de 4 a 10 horas, entre cerca de 5 a 12 horas, entre cerca de 5 a 10 horas, entre cerca de 6 a 12 horas, ou entre cerca de 6 a 10 horas, ou entre cerca de 6 a 8 horas); (iii) uma AUC de cerca de 20 a 80 pg*hr/mL (por exemplo, entre cerca de 25 a 75 pg*hr/mL, entre cerca de 30 a 70 pg*hr/mL, entre cerca de 30 a 65 pg*hr/mL, entre cerca de 30 a 60 pg*hr/mL, ou entre cerca de 35 a 65 pg*hr/mL); e (iv) um ti_/2 entre cerca de 3 a 8 horas (por exemplo, entre cerca de 3 a 7 horas, entre cerca de 4 a 8 horas, ou entre cerca de 4 a 7 horas). Ainda em uma outra modalidade, depois de 7 dias de dosagem de administração oral da composição farmacêutica 5-FC a um indivíduo alimentado a cerca de 150 mg/Kg/dia de programação de dosagem, a composição exibe (i) uma concentração plasmática média de 5-FC entre cerca de 20 e 100 pg/mL, cerca de 30 e 80 pg/mL cerca de 20 e 70 pg/mL, cerca de 30 e 80 pg/mL, cerca de 5 e 50 pg/mL, cerca de 5 e 40 pg/mL, cerca de 5 e 30 pg/mL, ou cerca de 5 e cerca de 20pg/mL. Ainda em uma outra modalidade, depois de 7 dias de dosagem de administração oral da composição farmacêutica 5-FC a um indivíduo alimentado a cerca de 175 mg/Kg/dia de programação de dosagem, a composição exibe uma concentração plasmática média de 5-FC entre cerca de 40 e 120 pg/mL, cerca de 50 e 110 pg/mL, cerca de 50 e cerca de 110 pg/mL, ou cerca de 60 e cerca de 100 pg/mL. Em uma modalidade, o AUC total em um humano alimentado é bioequivalente com a formulação de liberação imediata atual de 5-FC ou em cerca de 70 a 120 % da formulação de liberação imediata atual.

A revelação também fornece uma composição com uma formulação compreendendo 5-FC para liberação prolongada. Em uma modalidade, a formulação compreende cerca de 40 a 50 % em peso/peso de 5flurocitosina, cerca de 10 a 20 % em peso/peso de polímero hidrofílico, cerca de 5 a 15 % em peso/peso de agente de ligação, cerca de 10 a 30 % em peso/peso de diluentes, e cerca de 0,5 a 1,5 % de lubrificante. Em algumas modalidades, um comprimido do núcleo compreendendo a formulação anterior pode adicionalmente incluir um revestimento de cerca de 1 a 3 % em peso/peso. Formulações da maneira apresentada anteriormente exibem uma taxa de liberação de 5-FC por dissolução in vitro maior que cerca de 80 % em cerca de 4 a cerca de 12 horas da maneira medida pelo aparelho de dissolução USP Tipo II (método de pá) a 75 rpm em 900 mL de água deionizada a 37 °C usando método USP de 5-FC com detecção UV a cerca de 275 nm. Em uma outra modalidade, a formulação exibe, depois uma administração oral de dose única a um indivíduo alimentado (por exemplo, um indivíduo humano alimentado), a composição exibe um ou mais de: (i) um C_max5-FC entre cerca de 2,0 pg/mL e cerca de 10,0 pg/mL (por exemplo, entre cerca de 2,0 a 9,5 pg/mL, entre cerca de 3,0 a 8,0 pg/mL, entre cerca de 3,0 a 6,0 pg/mL, entre cerca de 3,5 a 8,0 pg/mL, ou entre cerca de 2,5 a 4,5 pg/mL); (ii) um t_mediano de cerca de 3 horas ou mais, (por exemplo, entre cerca de 3 a 12 horas, entre cerca de 3 a 10 horas, entre cerca de 4 a 12 horas, entre cerca de 4 a 10 horas, entre cerca de 5 a 12 horas, entre cerca de 5 a 10 horas, entre cerca de 6 a 12 horas, ou entre cerca de 6 a 10 horas, ou entre cerca de 6 a 8 horas); (iii) uma AUC de cerca de 20 a 80 pg*hr/mL (por exemplo, entre cerca de 25 a 75 pg*hr/mL, entre cerca de 30 a 70 pg*hr/mL, entre cerca de 30 a 65 pg*hr/mL, entre cerca de 30 a 60 pg*hr/mL, ou entre cerca de 35 a 65 pg*hr/mL); e (iv) um ti/₂ entre cerca de 3 a 8 horas (por exemplo, entre cerca de 3 a 7 horas, entre cerca de 4 a 8 horas, ou entre cerca de 4 a 7 horas).

A revelação fornece uma formulação de liberação prolongada oral compreendendo 5-fluorocitosina (5-FC), em que a dita formulação fornece melhor biodisponibilidade com alimento e em que mediante administração, a razão da AUC no estado alimentado para o AUC no estado em jejum tem um valor selecionado do grupo que consiste em: (i) cerca de 1,5 a cerca de 3,0; (ii) cerca de 1,8 a cerca de 2,5; e (iii) cerca de 1,9 a cerca de 2,3. Em uma modalidade, a formulação compreende adicionalmente pelo menos um polímero de formação de matriz hidrofílica (por exemplo, um ou mais de carbopol, acetato de polivinila e polímero a base de povidona, hidroxipropil celulose (HPC), hidroximetil celulose (HPMC), e óxido de polietileno (PoliOx)). Ainda em uma outra modalidade, os polímeros de formação de matriz hidrofilica constituem cerca de 10 porcento em peso a cerca de 40 porcento em peso da composição. Em uma modalidade adicional, 5-FC está presente em uma quantidade de cerca de 100 mg a cerca de 2.000 mg. Ainda em uma outra modalidade, os polímeros hidrofílicos constituem cerca de 10 porcento em peso a cerca de 40 porcento em peso da composição e 5-FC está presente em uma quantidade de cerca de 100 mg a cerca de 2.000 mg. Em uma modalidade, a composição exibe uma taxa de dissolução in vitro de 5-FC maior que cerca de 80 % em cerca de 4 a cerca de 12 horas da maneira medida pelo aparelho de dissolução USP Tipo II (método de pá) a 75 rpm em 900 mL de água a 37 °C usando método USP de 5-FC com detecção UV a cerca de 275 - 285 nm.

A revelação também fornece uma formulação de liberação prolongada oral compreendendo 5-fluorocitosina em que, mediante administração a razão de C_max alimentado /em jejum C_max tem um valor selecionado do grupo que consiste em (i) cerca de 1,5 a cerca de 3,0 e (ii) cerca de 1,8 a cerca de 2,4. Em uma modalidade, a formulação compreende adicionalmente pelo menos um polímero de formação de matriz hidrofilica (por exemplo, um ou mais de carbopol, acetato de polivinila e polímero a base de povidona, hidroxipropil celulose (HPC), hidroximetil celulose (HPMC), e óxido de polietileno (PoliOx)). Ainda em uma outra modalidade, os polímeros de formação de matriz hidrofilica constituem cerca de 10 porcento em peso a cerca de 40 porcento em peso da composição. Em uma modalidade adicional, 5-FC está presente em uma quantidade de cerca de 100 mg a cerca de 2.000 mg. Ainda em uma outra modalidade, os polímeros hidrofílicos constituem cerca de 10 porcento em peso a cerca de 40 porcento em peso da composição e 5-FC está presente em uma quantidade de cerca de 100 mg a cerca de 2.000 mg. Em uma modalidade, a composição exibe uma taxa de dissolução in vitro de 5-FC maior que cerca de 80 % em cerca de 4 a cerca de 12 horas da maneira medida pelo aparelho de dissolução USP Tipo II (método de pá) a 75 rpm em 900 mL de água a 37 °C usando método USP de 5-FC com detecção UV a cerca de 275 - 285 nm.

A revelação também fornece uma formulação de liberação prolongada oral compreendendo 5-fluorocitosina em que a dita formulação fornece maior biodisponibilidade com alimento e em que, mediante administração do AUC₀-i_nf no estado alimentado é maior que cerca de 70 % da AUC no estado em jejum de liberação imediata de flucitosina. Em uma modalidade, a formulação compreende adicionalmente pelo menos um polímero de formação de matriz hidrofílica (por exemplo, um ou mais de carbopol, acetato de polivinila e polímero a base de povidona, hidroxipropil celulose (HPC), hidroximetil celulose (HPMC), e óxido de polietileno (PoliOx)). Ainda em uma outra modalidade, os polímeros de formação de matriz hidrofílica constituem cerca de 10 porcento em peso a cerca de 40 porcento em peso da composição. Em uma modalidade adicional, 5-FC está presente em uma quantidade de cerca de 100 mg a cerca de 2.000 mg. Ainda em uma outra modalidade, os polímeros hidrofílicos constituem cerca de 10 porcento em peso a cerca de 40 porcento em peso da composição e 5-FC está presente em uma quantidade de cerca de 100 mg a cerca de 2.000 mg. Em uma modalidade, a composição exibe uma taxa de dissolução in vitro de 5-FC maior que cerca de 80 % em cerca de 4 a cerca de 12 horas da maneira medida pelo aparelho de dissolução USP Tipo II (método de pá) a 75 rpm em 900 mL de água a 37 °C usando método USP de 5-FC com detecção UV a cerca de 275 - 285 nm. Ainda em uma outra modalidade, o AUC no estado alimentado é menos que cerca de 125 % da AUC no estado em jejum de liberação imediata de flucitosina. Ainda em uma modalidade adicional, o AUC no estado alimentado é cerca de 80 a 100 % da AUC no estado em jejum para liberação imediata de flucitosina. Ainda em uma modalidade adicional, o AUC no estado alimentado é cerca de 83 a 95 % da AUC no estado em jejum para liberação imediata de flucitosina.

A revelação também fornece uma formulação de liberação prolongada oral compreendendo 5-fluorocitosina em que mediante administração, o C_max no estado alimentado é menos que cerca de 90 % do C_max no estado em jejum de liberação imediata de flucítosína. Em uma modalidade, o C_max no estado alimentado é maior que cerca de 30 % do C_maxno estado em jejum de liberação imediata de flucitosina. Ainda em uma modalidade adicional, o C_max no estado alimentado é cerca de 50 a 85 % do C_mEK no estado em jejum para liberação imediata de flucitosina. Em uma modalidade, a formulação compreende adicionalmente pelo menos um polímero de formação de matriz hidrofílica (por exemplo, um ou mais de carbopol, acetato de polivinila e polímero a base de povidona. hidroxipropil celulose (HPC), hidroximetil celulose (HPMC), e óxido de polietileno (PoliOx)). Ainda em uma outra modalidade, os polímeros de formação de matriz hidrofílica constituem cerca de 10 porcento em peso a cerca de 40 porcento em peso da composição. Em uma modalidade adicional, 5-FC está presente em uma quantidade de cerca de 100 mg a cerca de 2.000 mg. Ainda em uma outra modalidade, os polímeros hidrofílicos constituem cerca de 10 porcento em peso a cerca de 40 porcento em peso da composição e 5-FC está presente em uma quantidade de cerca de 100 mg a cerca de 2.000 mg. Em uma modalidade, a composição exibe uma taxa de dissolução in vitro de 5-FC maior que cerca de 80 % em cerca de 4 a cerca de 12 horas da maneira medida pelo aparelho de dissolução USP Tipo II (método de pá) a 75 rpm em 900 ml, de água a 37 °C usando método USP de 5-FC com detecção UV a cerca de 275 - 285 nm.

A revelação fornece um método para tratar uma infecção füngica administrando-se uma formulação de liberação modificada (por exemplo, um comprimido sólido monolítico) da revelação.

A revelação também fornece um método para tratar câncer, doença infecciosa ou outra doença em um mamífero administrando-se uma composição farmacêutica da revelação junto com um polipeptídeo compreendendo atividade de citosina desaminase para tratar câncer em um mamífero. Em uma modalidade, o polipeptídeo é local no câncer ou tumor (por exemplo, o polipeptídeo não é sistemicamente ou amplamente dispensado em um indivíduo).

A revelação fornece um método para tratar câncer, doença infecciosa ou outra doença em um mamífero administrando-se uma composição da formulação farmacêutica da revelação junto com um polinucleotídeo que codifica uma citosina desaminase para tratar câncer em um mamífero. Neste contexto, um polinucleotídeo pode ser compreendido de nucleotídeos naturais ou sintéticos, pode ser um oligonucleotídeo, pode ser RNA ou DNA, e pode ser de fita simples ou dupla. Em um aspecto, o polinucleotídeo é dispensado usando um sistema de distribuição de gene (GDS). Um sistema de distribuição de gene é qualquer procedimento ou formulação que pode distribuir um polinucleotídeo heterólogo para alvejar células cancerígenas ou outras células doentes ou associadas com doença. Exemplos de sistema de distribuição de genes são: um polinucleotídeo sozinho dispensado por injeção, com um carreador inerte tais como partículas de ouro, por eletroporação, por tensão hidrodinâmica, sonoporação ou outros métodos físicos; como um polinucleotídeo formulado com um sistema de distribuição sintético não viral e dispensado por várias vias tal como injeção ou infusão, todas as quais são bem conhecidas pelos versados na técnica (ver, por exemplo, Li and Huang, Gene Therapy, 13:1313 a 1319, 2006). O GDS pode distribuir um polinucleotídeo ou polinucleotídeos para células de um tumor, outras células doentes ou células associadas com doença em um mamífero antes da dosagem com uma composição farmacêutica da revelação. Em um outro aspecto, o polinucleotídeo que codifica uma citosina desaminase é dispensado com um GDS que é uma bactéria tais como vários tipos bacterianos de Salmonella, Clostridium ou Listeria que são conhecidos por ser capazes de infectar tumores ou tecido doente. Em um outro aspecto, o polinucleotídeo que codifica uma citosina desaminase é dispensado com um GDS que é um vetor viral ou derivado de viral. O vetor viral pode ser replicante ou não replicante, pode ser dispensado como uma partícula viral ou como polnucleotídeo(s) que codifica o vetor viral, e pode ser um vetor adenoviral, um vetor de sarampo, um vetor de herpes, um vetor retroviral (incluindo um vetor lentiviral), um viral rabdovetor tais como um vetor viral Vesicular Stomatitis, um vetor reovírus, um vetor Seneca Valley Vírus, um vetor poxvirus (incluindo vetores derivados de animal pox ou vaccinia), um vetor parvovirus (incluindo um vetor AAV), um vetor alfavírus ou outro vetor viral conhecido pelos versados na técnica (ver também, por exemplo, Concepts in Genetic Medicine, ed. Boro Dropulic and Barrie Carter, Wiley, 2008, Hoboken, NJ.; The Development of Human Gene Therapy, ed. Theodore Friedmann, Cold Springs Harbor Laboratory Press, Cold springs Harbor, New York, 1999; Gene an Cell Therapy, ed. Nancy Smyth Templeton, Marcel Dekker Inc., New York, New York, 2.000 and Gene Therapy: Therapeutic Mechanism and Strategies, ed. Nancy Smyth Templetone and Danilo D Lasic, Marcel Dekker, Inc., New York, New York, 2000; as revelações das quais são incorporados aqui pela referência).

Em uma modalidade, o vetor viral pode ser um vetor retroviral competente de replicação capaz de infectar somente células mamíferas replicantes. Retrovirus foram classificados de várias maneiras, mas a nomenclatura foi padronizada na última década (ver ICTVdB - The Universal Vírus Database, v 4 on the World Wide Web (www) em ncbi.nlm.nih.gov/ICTVdb/ICTVdB/ e o livro texto “Retroviruses” Eds Coffin, Hughs and Varmus, Cold Spring Harbor Press 1997; a revelação do qual está incorporada aqui pela referência). O vetor retroviral competente de replicação pode compreender um vetor Orthoretrovirus ou mais tipicamente um retrovirus gama. Em um aspecto, um vetor retroviral competente de replicação compreende um local de entrada ribossomal interno (IRES) 5’ para o polinucleotídeo que codifica uma citosina desaminase. Em uma modalidade, o polinucleotídeo que codifica uma citosina desaminase é 3’ para um polinucleotídeo ENV de um vetor retroviral.

Em uma outra modalidade é fornecido um método para tratar uma doença fungica. O método compreende administrar a um indivíduo que necessita deste uma quantidade eficaz de tratamento de fungo de uma formulação de liberação prolongada compreendendo 5-fluorocitosina.

Ainda em uma outra modalidade é fornecido um método para tratar um câncer. O método compreende administrar a um indivíduo que necessita deste uma quantidade suficiente de um vetor de expressão para induzir expressão de uma citosina desaminase que desamina 5-FC em 5fluoruracila (5-FU) em células cancerígenas e uma quantidade eficaz de tratamento de câncer de uma formulação de liberação prolongada compreendendo 5-fluorocitosina, de maneira tal que os níveis de soro entre cerca de 1 a 200 pg/mL são obtidos (por exemplo, entre cerca de 30 a 120, 20 a 90 pg/mL, 30 a 80 pg/mL, e tipicamente cerca de 40 a 70 pg/mL). Deve-se entender que qualquer valor entre cerca de 1 a 200 pg/mL é contemplado pela revelação. Em uma modalidade, os níveis de soro de 5-FC são obtidos usando uma formulação de liberação prolongada da revelação administrada 1 a 4 vezes por dia (cerca de 50 a 250 mg/kg/dia). Em uma modalidade adicional, a dose é administrada uma vez por dia a 50 a 200 mg/kg, 2 vezes por dia a 25 a 100 mg/kg, três vezes por dia a cerca de 16 a 67 mg/kg, ou quatro vezes por dia a 12 a 50 mg/kg. Novamente percebe-se que qualquer dose entre 1 a 200 (por exemplo, 10 a 100) mg/kg por dia pode ser incluída, a programação de dosagem ajustada para obter a quantidade desejada e níveis de soro. Em uma modalidade, a formulação de 5-FC da revelação é usada para tratar um indivíduo por 7 dias a cada mês por meses ou anos. Em uma outra modalidade, a dose pode ser cerca de 1 a 5 g administrada 3 a 4 doses por dia. Ainda em uma outra modalidade, a formulação de 5-FC da revelação é administrada cerca de 2 a 8 g (por exemplo, 6 a 7 g) 2 ou mais vezes por dia. Em um aspecto, a dose de 5-FC é ajustada com base na atividade de atividade de citosina desaminase em um indivíduo, tecido ou célula. Por exemplo, podem ser gerados polinucleotídeos que fornecem transcrição ou tradução mais eficaz ou maior atividade de citosina desaminase. Em tais exemplos, uma dose mais baixa de 5-FC pode ser fornecida a um indivíduo para obter uma quantidade de tratamento efetivo de 5-FC comparado a um indivíduo que recebe uma citosina desaminase padrão ou menos eficaz.

Em uma outra modalidade, a revelação fornece um método para tratar um indivíduo tendo células infectadas, ou outras células doentes tal como um distúrbio proliferativo celular. O método compreende: a) colocar em contato o indivíduo com uma quantidade terapeuticamente eficaz de um retrovirus competente de replicação compreendendo: uma sequência de ácido nucleico que codifica uma proteína GAG retroviral; uma sequência de ácido nucleico que codifica uma proteína retroviral POL; uma sequência de ácido nucleico que codifica um envelope retroviral; uma sequência de polinucleotídeo retroviral compreendendo sequências de Repetição de terminal longo (LTR) na extremidade 5' ou 3' ou 5' e 3' do retroviral (por exemplo, um Ortoretroviral) sequência de polinucleotídeo ou uma sequência promotora heteróloga; um cassete compreendendo um local de entrada de ribossomo interno (IRES) ligado operacionalmente a uma sequência heteróloga de ácido nucleico que codifica um polipeptídeo compreendendo atividade de citosina desaminase, em que o cassete é posicionado 5' para a sequência LTR 3' e/ou 3' para a sequência que codifica o envelope retroviral; e sequências de ação cis para transcrição reversa, embalagem e integração em uma célula alvo; b) administrar ao indivíduo uma quantidade eficaz de 5-FC que é convertida em um medicamento tóxico por uma citosina desaminase no sítio de um distúrbio proliferative celular (por exemplo, um câncer cerebral, câncer de pulmão, câncer cólon-reto, câncer de mama, câncer de próstata, câncer do trato urinário, linfoma de câncer uterino, câncer oral, câncer pancreático, leucemia, melanoma, câncer de estômago e câncer de ovário, uma população de célula infectada por HIV, outra população de célula infectada viralmente ou bacterianamente, ou uma população de célula autoimune). Em uma outra modalidade, o retrovirus competente de replicação pode conter um promotor específico de tecido (por exemplo, um probasina, probasina recombinante ou promotor de reposta andrógena tais como um promotor de elemento de resposta andrógeno duplo) tomando o retrovirus capaz de replicar somente em células nas quais este promotor é ativo. Em uma outra modalidade, o retrovirus competente de replicação não incluem um elemento IRES. Em uma outra modalidade, o retrovirus competente de replicação pode conter um sequência alvo microRNA tomando o retrovirus capaz de replicar somente ou predominantemente em células que são cancerígenas. Em uma outra modalidade, o retrovirus é específico de tecido por inclusão de sequências “alvos” para miRNA’s que são específicos para certos tecidos tais como células hematopoiéticas, células do fígado ou células musculares. (Bell and Kirin, Nature Biotech., 26:1347, 2008, incorporado aqui pela referência) de forma que o vírus não expressa nesses tecidos. Altemativamente, o vírus pode incluir um alvo que é expresso ubiquitosamente, mas é baixo em células do tumor, tal como let-7.

A revelação fornece composições e métodos para tratar um câncer, doença infecciosa, doença hiperproliferativa ou doença fungica. Em uma modalidade, o método inclui pelo menos uma primeira dose de carregamento de 5-FC suficiente para obter uma concentração sérica de cerca de 1 a 200 (por exemplo, 10 a 100) pg/mL em 1 a 2 dias e uma pluralidade de doses de liberação prolongada de 5-FC suficiente para manter uma concentração sérica de cerca de 1 a 200 pg/mL. A pluralidade de doses de liberação prolongada é tipicamente administrada para obter níveis sanguíneos de pico de 5-FC entre cerca de 1 a 200 pg/mL (por exemplo, entre cerca de 30 a 120 ug/mL, 20 a 90 pg/mL, 30 a 80 pg/mL, e tipicamente cerca de 40 a 70 pg/mL). Deve-se entender que qualquer valor entre cerca de 1 a 200 pg/mL é contemplado pela revelação. Em uma modalidade, os níveis de soro de 5-FC são obtidos usando uma formulação de dose da revelação administrada 1 a 4 vezes por dia (cerca de 50 a 250 mg/kg/dia dada em doses divididas). Em uma modalidade adicional, a dose é administrada 1 vez por dia a cerca de 50 a 200 mg/kg, duas vezes por dia a cerca de 25 a 100 mg/kg, três vezes por dia a cerca de 16 a 67 mg/kg, ou quatro vezes por dia a cerca de 12 a 50 mg/kg. Novamente percebe-se que qualquer dose entre 1 a 250 (por exemplo, 10 a 100) mg/kg por dia pode ser incluída a programação de dosagem ajustada para obter a quantidade desejada e níveis de soro. Em uma outra modalidade, a pluralidade de doses de liberação prolongada mantém uma concentração sérica de 75 % a 125 % da área sob o nível da curva do estado estacionário ou a primeira dose de carregamento.

Os detalhes de uma ou mais modalidades da revelação são apresentados nos desenhos anexos e na descrição a seguir. Outros recursos, objetivos, e vantagens ficarão aparentes pela descrição e desenhos, e pelas reivindicações.

DESCRIÇÃO RESUMIDA DOS DESENHOS

A Figura 1A-D mostra as taxas de dissolução de formulações de protótipos em meio de dissolução do pH 7.

A Figura 2 mostra as concentrações médias para cães machos que recebem doses únicas de 500 mg de 5-fluorocitosina (gráfico linear).

A Figura 3 mostra concentrações médias para cães machos que recebem doses únicas de 500 mg de 5-fluorocitosina (gráfico semilog).

A Figura 4 mostra concentrações médias para cães machos que recebem 500 mg de 5-FC XR TED (gráfico linear).

A Figura 5 mostra concentrações projetadas e reais para cães que recebem 500 mg de 5-FC ITD com alimento (gráfico linear).

DESCRIÇÃO DETALHADA

Da maneira aqui usada e nas reivindicações anexas, as formas singulares “um,” “e,” e “o” incluem referentes plurais a menos que o contexto dite claramente de outra forma. Assim, por exemplo, referência a “um agente” inclui uma pluralidade de tais agentes e referência a” célula cancerígena” inclui referência a uma ou mais células cancerígenas, e assim por diante.

A menos que definido de outra forma, todos os termos técnicos e científicos usados aqui têm o mesmo significado entendido pelos versados na técnica aos quais a revelação pertence. Embora métodos e materiais e similares ou equivalentes aos descritos aqui possam ser usados na prática dos métodos e composições revelados, os métodos, dispositivos e materiais exemplares são descritos aqui.

Também, o uso de “ou” significa “e/ou” a menos que de outra forma declarada. Similarmente, “compreendem”, “compreende”, “compreendendo”, “incluem,” “inclui,” e “incluindo” são permutáveis e não devem ser limitantes.

Adicionalmente deve-se entender que onde descrições de várias modalidades usam o termo “compreendendo,” versados na técnica perceberão que em alguns exemplos específicos, uma modalidade pode ser altemativamente descrita usando linguagem “que consiste essencialmente em” ou “que consiste em.”

Quaisquer publicações discutidas anteriormente e o texto são fornecido apenas para sua revelação antes da data de depósito do presente pedido. Nada aqui deve ser interpretado como uma admissão de que os inventores não estão habilitados a antecipar tal revelação em virtude da revelação anterior.

O termo área sob a curva (AUC) refere-se a um gráfico de concentração de medicamento em plasma versus tempo. AUC é normalmente dada para o intervalo de tempo zero até infinito. A AUC (de zero até infinito) representa a quantidade total de medicamento absorvida pelo corpo, sem restrição da taxa de absorção. Isto é usado quando se tenta determinar se duas formulações da mesma dose liberam a mesma dose de medicamento do corpo. A AUC de uma forma de dosagem liberação não prolongada comparada àquela de uma dosagem de liberação prolongada serve com a base para uma medição de biodisponibilidade.

O termo “biodisponibilidade de porcentagem” representa a fração de medicamento absorvida de uma formulação de liberação prolongada comparada com o mesmo medicamento dispensado em uma forma de liberação não prolongada. E tipicamente calculada a partir da AUC» da formulação de liberação prolongada versus a AUC» para o mesmo medicamento em uma formulação de liberação não prolongada.

O termo “pró-droga” da maneira usada neste pedido refere-se a uma forma precursora ou derivada de uma substância farmaceuticamente ativa que é menos citotóxica para células comparado ao medicamento pai e é capaz de ser enzimaticamente ativada ou convertida na mais forma mãe ativa. Ver, por exemplo, Wilman, “Prodrugs in Cancer Chemotherapy” Biochemical Society Transactions, 14, pp. 375-382,615th Meeting Belfast (1986); Stella et al., “Prodrugs: A Chemical Approach to Targeted Drug Delivery,” Directed Drug Delivery, Borchardt et al., (ed.), pp. 247-267, Human Press (1985); and Dachs et al. “From bench to bedside for gene-directed enzyme Prodrug therapy of cancer” Anticancer Drugs 16:349-359 2005. As pró-drogas desta revelação incluem, mas sem limitações, pró-drogas contendo sulfato, pródrogas contendo peptídeo, pró-drogas modificadas por D-aminoácido, pródrogas glicosiladas, pró-drogas contendo β-lactam, opcionalmente pró-drogas contendo fenoxiacetamida substituído ou pró-drogas contendo fenilacetamida opcionalmente substituído, 5-fluorocitosina e outras pró-drogas 5-fluoruridina que podem ser convertidos no medicamento sem citotóxico mais ativo. Exemplos de medicamentos citotóxicos que podem ser derivados em uma forma de pró-droga para uso nesta revelação incluem, mas sem limitações, os agentes quimioterapêuticos descritos anteriormente.

Qualquer composto que será convertido in vivo para fornecer uma forma biologicamente, farmaceuticamente ou terapeuticamente ativa de 5-FC da revelação é uma pró-droga. Vários exemplos e formas de pró-drogas são bem conhecidos na técnica. Exemplos de pró-drogas são encontrados, inter alia, em Design of Prodrugs, editado por H. Bundgaard, (Elsevier, 1985), Methods in Enzymology, Vol. 42, at pp. 309-396, editado por K. Widder, et. Al. (Academic Press, 1985); A Textbook of Drugs Design and Development, editado por Krosgaard-Larsen and H. Bundgaard, Chapter 5, “Design and Application of Prodrugs,” por H. Bundgaard, at pp. 113 a 191, 1991); H. Bundgaard, Advanced Drug Delivery Reviews, Vol. 8, p.l a 38 (1992); H. Bundgaard, et al., Journal of Pharmaceutical Sciences, Vol. 77, p. 285 (1988); and Nogrady (1985) Medicinal Chemistry A Biochemical Approach, Oxford University Press, New York, pages 388-392). Exemplos de pró-drogas de 5-FC incluem, mas sem limitações, monofosfato, difosfato, ou trifosfato de 5-fluorcitidina; 5-fluorcitidina; 5-flúor-2'deoxifluorocitosina; ou citidina ou uma citidina com 1, 2 ou 3 fosfatos. 5-FC fotoativável, sais ou ésteres desse são também contemplados. Tais compostos fotoativáveis podem compreender um ligante fotossensível que é clivável mediante irradiação, por exemplo, com uma luz UV (incluindo luzes implantadas em um sítio do tumor que pode ser remotamente ou temporariamente ativado).

O termo “C_max” da maneira aqui usada significa a concentração plasmática máxima observada depois da administração de um medicamento.

O termo “T_max” da maneira aqui usada significa o ponto de tempo de concentração plasmática máxima observada.

O termo “T_mediano” da maneira aqui usada significa o ponto de tempo quando um Vi de AUC é atingido.

A meia vida plasmática de um medicamento (T./₂) é o tempo necessário para dividir a concentração plasmática, por exemplo, para diminuir de 100 para 50 mg/L.

Pílulas de liberação prolongada ou liberação lenta (SR), liberação prolongada (ER, XR, ou XL), liberação no tempo ou liberação cronometrada, liberação controlada (CR), ou liberação contínua (CR) são comprimidos ou cápsulas formulados para dissolver lentamente e liberar um medicamento por um tempo. Neste pedido os termos “liberação prolongada” ou “liberação prolongada” descrevem todos esses tipos de formulações. As vantagens de comprimidos ou cápsulas de liberação prolongada são que eles pode ser tomados frequentemente menos frequentemente do que formulações de liberação imediata do mesmo medicamento, e que eles fornecem níveis do medicamento na atual sanguínea que são bastante regulares. Comprimidos e formulações de liberação prolongada são formulados de forma que o ingrediente ativo é embutido ou encapsulado em uma matriz de substância insolúvel ou em compartimentos vesiculares de forma que o medicamento dissolvido é lentamente dispensado a partir da matriz ou dispensado por ruptura ou degradação compartimental da vesícula. Em algumas formulações SR a matriz fisicamente dilata para formar um gel, de forma que o medicamento tem primeiro que dissolver na matriz, então sair direto da superfície externa.

5-FC comercializado atualmente é uma formulação de cápsula de liberação imediata (Ancobon®, cápsulas de 250 mg e 500 mg) que tem uma meia vida de 2,4 a 4,8 horas na atual sanguínea depois da dosagem oral. Esses pacientes necessitam de dosagem 4 x por dia (QID) para manter níveis terapêuticos. Os níveis terapêuticos conhecidos são recomendados ser 30 a 80 pg/mL em soro para infecção criptococal (ou 40 a 60 pg/mL para Candida) 2 horas após a dosagem durante dosagem crônica (isto é a concentração de pico). Toxicidade ocorre geralmente se 100 pg/mL forem excedidos (Vermes et al., Chemotherapy, pp. 86-94, 2.000).

A farmacocinética de 5-FC foi investigada e revista extensivamente. 5-FC é absorvida muito rapidamente e quase completamente: 76 a 89 % estão biodisponíveis depois da administração oral. Em pacientes com função renal normal, concentrações de pico são atingidas em soro e outros fluidos corpóreos em 1 a 2 horas. Em virtude de seu pequeno tamanho e solubilidade em água e o fato de que é não ligada por proteínas do soro a uma grande extensão, 5-FC é rapidamente depurada nos rins. 5-FC é metabolizada apenas minimamente no fígado. A eliminação renal é por meio de filtração glomerular; não ocorreu nenhuma reabsorção ou secreção tubular. A meia vida de 5-FC no soro é cerca de 2 a 5 horas em pacientes com função renal normal, mas pode ser prolongada até 85 horas em pacientes com insuficiência renal grave.

Biodisponibilidade depois da administração oral foi estimada comparando-se as concentrações da área sob a curva de soro depois da administração oral e intravenosa. Os resultados mostraram 76 % a 89 % de absorção por administração oral. Concentrações séricas de pico de 30 a 40 pg/mL foram atingidas em 2 horas de administração de uma dose oral de 2 gramas em indivíduos normais. Outros estudos revelaram concentrações séricas médias de aproximadamente 70 a 80 pg/mL, 1 a 2 horas depois uma dose em pacientes com função renal normal que recebem um regime de 6 semanas de 5-FC (150 mg/kg/dia dada em doses divididas a cada 6 horas) em combinação com anfotericina B. A maioria de 5-FC é expelida por meio dos rins por meio de filtração glomerular sem reabsorção tubular significativa. 5FC é desaminada (na ausência de vetores virais heterólogos da revelação) por citosina desaminase bacteriana do intestino para 5-fluoruracil. A razão da área sob a curva (AUC) de 5-fluoruracila para 5-FC é cerca de 4 %.

A meia vida de 5-FC é prolongada em pacientes com insuficiência renal; a meia vida média em pacientes nefrectomizados ou anúricos foi 85 horas (faixa: 29,9 a 250 horas). Uma correlação linear foi encontrada entre a constante da taxa de eliminação de 5-FC e depuração de creatinina. Em pacientes adultos com uma depuração de creatinina de >40 mL/minutos, uma dose padrão de 37,5 mg/kg a cada 6 horas de 5-FC IR é tipicamente usada. Se a depuração de creatinina for entre 20 e 40 mL/minutos, a dose recomendada é 37,5 mg/kg a cada 12 horas. Em pacientes com uma depuração de creatinina de <20 mL/ minuto, a dose de 5-FC é cerca de 37,5 mg/kg uma vez diariamente.

Estudos in vitro mostraram que 2,9 % a 4 % de 5-FC estão ligados a proteína na faixa de concentrações terapêuticas encontradas no sangue. 5-FC penetra rapidamente na barreira sangue-cérebro, alcançando concentrações clinicamente significativas no fluido cerebroespinhal.

Dessa maneira, terapia convencional com 5-fluorocitosina exige alta dosagem diariamente devido a depuração rápida do medicamento do corpo. A dosagem convencional típica para humanos é cerca de 8 gramas de 5-fluorocitosina por dia, geralmente tomada em doses iguais 4 vezes por dia (por exemplo, cerca de 2 gramas por dose e esta dose tomada cerca de 250 mg a cada 15 minutos, para evitar náusea). E difícil de obter aquiescência de indivíduos que necessitam de tal tratamento de infecção fungica ou em combinação com terapias de câncer.

A revelação fornece composições incluindo 5-FC em uma formulação para liberação prolongada (um 5-FC-SR; usada altemadamente com 5-FC-ER ou 5-FC-XR). A composição 5-FC-ER inclui pelo menos um composto hidrofilico, pelo menos um ligante, e pelo menos um diluente farmacêutico. A 5-FC-ER fornece uma ou mais das seguintes características quando administrada a um indivíduo humano alimentado em uma única dose de FC de 500 mg: (i) um C_max de 5-FC entre cerca de 2,0 pg/mL e cerca de

10,0 pg/mL (por exemplo, entre cerca de 2,0 a 9,5 pg/mL, entre cerca de 3,0 a 8,0 pg/mL, entre cerca de 3,0 a 6,0 pg/mL, entre cerca de 3,5 a 8,0 pg/mL, ou entre cerca de 2,5 a 4,5 pg/mL); (ii) um t_mediano de cerca de 3 horas ou mais, (por exemplo, entre cerca de 3 a 12 horas, entre cerca de 3 a 10 horas, entre cerca de 4 a 12 horas, entre cerca de 4 a 10 horas, entre cerca de 5 a 12 horas, entre cerca de 5 a 10 horas, entre cerca de 6 a 12 horas, ou entre cerca de 6 a 10 horas, ou entre cerca de 6 a 8 horas); (iii) uma AUC de cerca de 20 a 80 pg*hr/mL (por exemplo, entre cerca de 25 a 75 pg*hr/mL, entre cerca de 30 a 70 pg*hr/mL, entre cerca de 30 a 65 pg*hr/mL, entre cerca de 30 a 60 pg*hr/mL, ou entre cerca de 35 a 65 pg*hr/mL); e (iv) um t_1/2 entre cerca de 3 a 8 horas (por exemplo, entre cerca de 3 a 7 horas, entre cerca de 4 a 8 horas, ou entre cerca de 4 a 7 horas). Em uma modalidade, a formulação mediante administração a um indivíduo alimentado permanece no estômago entre cerca de 4 a cerca de 8 horas.

A 5-FC pode ser homogeneamente dispersa na 5-FC-ER. Em algumas modalidades, a 5-FC está presente na composição em uma quantidade de cerca de 100 mg a cerca de 2.000 mg; cerca de 100 mg a cerca de 1500 mg; cerca de 100 mg a cerca de 1200 mg; cerca de 100 mg a cerca de 1000 mg; cerca de 100 mg a cerca de 900 mg; cerca de 100 mg a cerca de 800 mg; cerca de 100 mg a cerca de 700 mg; cerca de 100 mg a cerca de 600 mg; cerca de 100 mg a cerca de 500 mg; ou cerca de 100 mg a cerca de 250 mg. Em algumas modalidades, a 5-FC está presente na composição em uma quantidade de cerca de 200 mg a cerca de 2.000 mg. Em uma outra modalidade, a 5-FC está presente na composição em uma quantidade de cerca de 250 mg, 500 mg, 750 mg, 1000 mg, 1250 mg, 1500 mg, 1.750 mg ou 2.000 mg.

Em uma modalidade, pelo menos um composto hidrofílico está presente em a 5-FC-ER em uma quantidade de cerca de 5 % a cerca de 40 % em peso; pelo menos um ligante está presente em a 5-FC-ER em uma quantidade de cerca de 0,5 % a cerca de 30 % em peso; e pelo menos um diluente farmacêutico está presente na 5-FC-ER em uma quantidade de cerca de 10 % a cerca de 40 % em peso. Em uma outra modalidade, pelo menos um composto hidrofílico está presente na 5-FC-ER em uma quantidade de cerca de 8 % a cerca de 31 % em peso; pelo menos um ligante está presente na 5FC-ER em uma quantidade de cerca de 5 % a cerca de 25 % em peso; e pelo menos um diluente farmacêutico está presente na 5-FC-ER em uma quantidade de cerca de 15 % a cerca de 30 % em peso. Em uma outra modalidade, pelo menos um composto hidrofílico está presente na 5-FC-ER em uma quantidade de cerca de 10 % a cerca de 20 % em peso; pelo menos um ligante está presente na 5-FC-ER em uma quantidade de cerca de 10 % a cerca de 25 % em peso; e pelo menos um diluente farmacêutico está presente na 5-FC-ER em uma quantidade de cerca de 15 % a cerca de 30 % em peso. Em algumas modalidades, pelo menos um composto hidrofílico está presente na 5-FC-ER em uma quantidade de cerca de 8 %, cerca de 9 %, cerca de %, cerca de 11 %, cerca de 12 %, cerca de 13 %, cerca de 14 %, cerca de %, cerca de 16 %, cerca de 17 %, cerca de 18 %, cerca de 19 %, cerca de %, cerca de 22 %, cerca de 24 %, cerca de 26 %, cerca de 28 %, ou cerca de 30 % em peso; pelo menos um ligante está presente na 5-FC-ER em uma quantidade de cerca de 4 %, cerca de 5 %, cerca de 6 %, cerca de 7 %, cerca de 8 %, cerca de 9 %, cerca de 10 %, cerca de 11 %, cerca de 12 %, cerca de 13 %, cerca de 14 %, cerca de 15 %, cerca de 16 %, cerca de 17 %, cerca de 18 %, cerca de 19 %, cerca de 20 %, ou cerca de 22 %, por peso; e pelo menos um diluente farmacêutico está presente na 5-FC-ER em uma quantidade de cerca de 10 %, cerca de 20 %, cerca de 30 % ou cerca de 40 % em peso. Em uma modalidade, pelo menos um composto hidrofílico está presente na 5-FC-ER em uma quantidade de cerca de 8 %, cerca de 12 %, ou cerca de 20 % em peso; pelo menos um ligante está presente na 5-FC-ER em uma quantidade de cerca de 5 %, cerca de 10 %, ou cerca de 15 % em peso; e pelo menos um diluente farmacêutico está presente na 5-FC-ER em uma quantidade de cerca de 10 %, cerca de 25 %, cerca de ou 30 % em peso.

A 5-FC-ER inclui pelo menos um composto hidrofilico. O composto hidrofilico forma uma matriz de gel que libera a 5-FC a uma taxa prolongada mediante exposição a líquidos. A taxa de liberação da 5-FC da matriz de gel depende do coeficiente partição do medicamento entre os componentes da matriz de gel e a fase aquosa no trato gastrintestinal. Nas composições da revelação, a razão em peso de 5-FC para composto hidrofilico é geralmente na faixa de cerca de 2:1, cerca de 3:1, cerca de 4:1, cerca de 5:1 ou cerca de 6:1.

O composto de formação de matriz polimérica hidrofílica é qualquer composto conhecido na técnica para ser hidrofilico. Os compostos hidrofilicos exemplares incluem, sem limitação, gomas, éteres de celulose, resinas acrílicas, polivinil pirrolidona, compostos derivados de proteína, e misturas desses. As gomas exemplares incluem, sem limitação, gomas de heteropolissacarídeo e gomas de homopolissacarídeo, tais como xantana, tragacanto, pectinas, acácia, caraioa, alginatos, ágar, guar, hidroxipropil guar, carragenana, gomas de alfarroba, e gomas gelana. Os éteres de celulose exemplares incluem, sem limitação, hidroxialquil celuloses e carboxialquil celuloses. Em algumas modalidades, éteres de celulose incluem hidroxietil celuloses, hidroxipropil celuloses, hidroxipropilmetil celuloses, carbóxi metilceluloses, e misturas desses. As resinas acrílicas exemplares incluem, sem limitação, polímeros e copolímeros de ácido acrílico, ácido metacrílico, metil acrilato e metil metacrilato. Em algumas modalidades, o composto hidrofilico é uma goma. Em outras modalidades, o composto hidrofilico é uma goma heteropolissacarídeo. Em modalidades adicionais, o composto hidrofilico é uma goma xantana ou derivado desse. Derivados de goma xantana incluem, sem limitação, por exemplo, goma xantana deacilada, o carboximetil ésteres de goma xantana, e os propilenos glicóis ésteres de goma xantana. Em modalidades específicas, o composto de formação de matriz polimérica hidrofílica é Carbopol-71G, Kollidon SR ou uma combinação desses.

Em um outro aspecto, a 5-FC-ER adicionalmente inclui pelo menos um ligante. Em uma modalidade, o ligante é um composto que é capaz de reticular o composto hidrofílico para formar uma matriz de gel na presença de líquidos. Da maneira aqui usada, “líquidos” inclui, por exemplo, fluidos gastrintestinais e soluções aquosas, tais como as usadas para teste de dissolução in vitro. A 5-FC-ER geralmente inclui o ligante em uma quantidade de cerca de 3 % a cerca de 20 % em peso. Em uma modalidade, a 5-FC-ER geralmente inclui o ligante em uma quantidade de cerca de 3 % a cerca de 10 % em peso. Em algumas modalidades, pelo menos um ligante está presente na 5-FC-ER em uma quantidade de cerca de 3 %, cerca de 4 %, cerca de 5 %, cerca de 6 %, cerca de 7 %, cerca de 8 %, cerca de 9 %, cerca de 10 %, cerca de 11 %, cerca de 12 %, ou cerca de 13 % em peso. Em uma modalidade, a 5-FC-ER inclui o ligante em uma quantidade de cerca de 6 % a cerca de 7 % em peso (e qualquer número intermediário).

Os ligantes exemplares incluem homopolissacarídeos. Os homopolissacarídeos exemplares incluem, sem limitação, gomas galactomanana, tais como goma guar, hidroxipropil guar goma, hidroxipropilcelulose (HPC; por exemplo, Klucel EXF) e goma alfarroba. Em outras modalidades, o ligante é um derivado de ácido algínico, HPC ou micro celulose cristalizada (MCC).

Em algumas modalidades, quando a 5-FC-ER inclui pelo menos um composto hidrofílico e pelo menos um ligante, a razão em peso de composto hidrofílico para ligante é cerca de 1:9 a cerca de 9:1, cerca de 1:8 a cerca de 8:1, cerca de 1:7 a cerca de 7:1, cerca de 1:6 a cerca de 6:1, cerca de 1:5 a cerca de 5:1, cerca de 1:4 a cerca de 4:1, cerca de 1:3 a cerca de 3:1, ou cerca de 1:2 a cerca de 2:1.

Quando a 5-FC-ER inclui pelo menos um composto hidrofílico e pelo menos um ligante, a razão em peso da 5-FC para a soma de pelo menos um composto hidrofílico e pelo menos um ligante é cerca de 1:1 a cerca de 12:1, cerca de 1:1 a cerca de 4:1, cerca de 1:1 a cerca de 3:1, ou cerca de 1:1 a cerca de 2:1.

A 5-FC-ER pode adicionalmente incluir um ou mais diluentes farmacêuticos conhecidos na tecnologia. Os diluentes farmacêuticos exemplares incluem, sem limitação, monossacarídeos, dissacarídeos, álcoois poliídricos e misturas desses. Em algumas modalidades, diluentes farmacêuticos incluem, por exemplo, amido, manitol, lactose, dextrose, sacarose, celulose microcristalina, sorbitol, xilitol, frutose, e misturas desses. Em algumas modalidades, o diluente farmacêutico é solúvel em água. Exemplos não limitantes de diluentes farmacêuticos solúveis em água incluem lactose, dextrose, sacarose, ou misturas desses. Em outras modalidades, o diluente farmacêutico é insolúvel em água. Exemplos não limitantes de diluentes farmacêuticos insolúveis em água incluem fosfato de dicálcio ou fosfato de tricálcio. Em algumas modalidades, a razão em peso de diluente farmacêutico para composto hidrofílico é geralmente cerca de 1:1 a cerca de 4:1, cerca de 1:1 a cerca de 3:1, cerca de 1:1 a cerca de 2:1 e quaisquer faixas intermediárias. Em algumas modalidades, a razão em peso de diluente farmacêutico para composto hidrofílico é geralmente cerca de 1:1 a cerca de 2:1.

Em algumas modalidades, a 5-FC-ER geralmente inclui um ou mais diluentes farmacêuticos em uma quantidade de cerca de 15 % a cerca de 30 %. Em algumas modalidades, a 5-FC-ER inclui um ou mais diluentes farmacêuticos em uma quantidade de cerca de 15 %, cerca de 20 %, cerca de 25 %, ou cerca de 30 % em peso.

Em outras modalidades, um revestimento, por exemplo, Opadry®, pode ser adicionado nas composições descritas aqui embora não seja uma exigência.

Em algumas modalidades, as composições descritas aqui incluem adicionalmente um segundo composto hidrofílico.

As formulações de liberação prolongada de 5-FC são formulações de dosagem sólidas administráveis oralmente. Exemplos não limitantes de formulações de dosagem sólidas oral incluem comprimidos matrizes, comprimidos revestidos por barreira, e comprimidos e cápsulas incluindo uma pluralidade de grânulos. Em algumas modalidades, comprimidos têm um revestimento hidrofílico.

Para a maioria dos ingredientes de medicamento ativo, existe uma concentração de produto terapêutico do medicamento ativo que deve ser atingida em um tecido alvo, se o efeito terapêutico desejado ocorrer. Uma forma de dosagem farmacêutica de liberação prolongada geralmente toma um ingrediente de medicamento ativo disponível para absorção e/ou usa no corpo do paciente um pouco menos em um momento por um período de tempo prolongado. Se o medicamento ativo for metabolizado ou de outra forma eliminado pelo corpo do paciente, ele pode levar um longo tempo antes de o ingrediente do medicamento atingir tal concentração de produto terapêutico mínima no(s) tecido(s) alvo(s) do paciente. A fim de superar isto, ele pode ser usado para fornecer uma dose de liberação rápida inicial do ingrediente de medicamento ativo para obter rapidamente tal concentração de produto terapêutico mínima. Uma vez que tal concentração de produto terapêutico mínima é superada no(s) tecido(s) alvo(s), a forma de dosagem de liberação prolongada pode mantê-la distribuindo-se o ingrediente de medicamento ativo em quantidades suficientes para compensar a quantidade de medicamento ativo que é metabolizado ou de outra forma eliminado do(s) tecido(s) alvo(s).

Uma outra modalidade da revelação é uma cápsula de produto farmacêutico liberação prolongada/liberação rápida em combinação que ambas podem fornecer a liberação rápida do ingrediente de medicamento ativo a fim de obter rapidamente a concentração de produto terapêutico mínima do medicamento ativo no(s) tecido(s) alvo(s) de um paciente, junto com uma dose de liberação prolongada do ingrediente de medicamento ativo a fim de reter tal concentração de produto terapêutico mínimo ou maior no(s) tecido(s) alvo(s) em um período prolongado. A porção de liberação rápida desta cápsula de liberação prolongada/liberação rápida em combinação da revelação pode ser obtida incluindo-se uma forma de dosagem única intacta separada para a porção de liberação rápida na casca cápsula, por exemplo, um precipitado, comprimido, cápsula pequena, e similares.

Em uma modalidade, os comprimidos ou cápsulas de produto farmacêutico de liberação prolongada/liberação rápida para administração oral da revelação podem compreender pelo menos duas camadas: (1) uma primeira camada de uma primeira mistura particulada, a dita primeira mistura particulada sendo a mesma da composição de liberação prolongada descrita anteriormente; e (2) uma segunda camada de uma segunda mistura particulada compreendendo o mesmo ingrediente de medicamento ativo como na dita primeira mistura particulada. A primeira camada dos comprimidos de produto farmacêutico de liberação prolongada/liberação rápida em combinação fornece uma liberação prolongada do ingrediente de medicamento ativo da mesma maneira como para as composições de produto farmacêutico de liberação prolongada descritas anteriormente. Uma segunda camada fornece uma porção do ingrediente de medicamento ativo de liberação rápida fornecendo uma segunda mistura particulada compreendendo o ingrediente de medicamento ativo, a segunda mistura particulada sendo formulada de maneira tal que ela disperse rapidamente mediante dissolução de camada no trato gastrintestinal. A segunda mistura é uma mistura do ingrediente de medicamento ativo e um ou mais carreadores farmacêuticos formulados para obter tal dispersão rápida no trato gastrintestinal.

Os comprimidos de liberação prolongada/liberação rápida combinados da revelação podem fornecer, em uma forma de dosagem única, uma liberação rápida de um ingrediente de medicamento ativo e uma liberação prolongada de um segundo ingrediente de medicamento ativo, se desejado, incorporando-se ingredientes de medicamento ativo diferentes na primeira e segunda mistura particulada descritas anteriormente.

O comprimido de liberação prolongada/liberação rápida em combinação da revelação é feito de maneira tal que ele dissolva na porção do trato gastrintestinal onde a mistura do ingrediente de medicamento ativo da liberação rápida (segunda particulada) é facilmente utilizada, absorvida, ou de outra forma transportada para o(s) tecido(s) alvo(s) onde esta atividade é utilizada.

O comprimido ou cápsula pode compreender uma forma multicamadas. Em alguma modalidade, as composições e formulações de 5FC podem incluir uma camada de liberação imediata e uma camada de liberação prolongada em um comprimido ou cápsula. Uma combinação como essa da terapia IR/ER pode ser usada para melhorar o perfil de 5-FC. A 5-FC presente na camada de liberação imediata está geralmente presente em uma quantidade variando cerca de 1 mg a cerca de 500 mg (por exemplo, cerca de 200 mg).

Em algumas modalidades, a forma de dosagem de multicamadas adicionalmente inclui um desintegrante de produto farmacêutico. O desintegrante promove a dissolução e absorção de 5-FC da camada de liberação imediata. Exemplos não limitantes de farmacêutico desintegrantes incluem croscarmelose sódica, glicolato de amido, crospovidona, e amido não modificado. Em uma modalidade, o desintegrante está na primeira camada (isto é, na camada de liberação imediata), da forma de dosagem.

Em algumas modalidades, os comprimidos de multicamadas da revelação são preparados preparando-se primeiro as misturas da camada de liberação imediata e camada de liberação prolongada separadamente. Os comprimidos do núcleo de liberação prolongada são compactados de uma maneira usual para produzir um núcleo ou camada de comprimido matriz. A camada de liberação imediata da revelação é preparada misturando-se primeiro a 5-FC com um ou mais diluentes (por exemplo, celulose microcristalina). Esta mistura é então opcionalmente misturada com um ou mais desintegrantes. A mistura é misturada com estearato de magnésio. Finalmente, a mistura da camada de liberação imediata e a mistura da camada de liberação prolongada são compactadas em comprimidos multicamadas (por exemplo, bi-camada). Em uma outra modalidade, a camada de liberação imediata pode ser revestida em tomo do comprimido do núcleo de liberação prolongada.

Quando dosada apropriadamente (por exemplo, administração diária de 50 a 250 mg/Kg/dia dividida e administrada 1 a 4 vezes para pelo menos 5 meias vidas), uma formulação 5-FC-ER fornece níveis sanguíneos médios de 5-FC entre cerca de 1 a 200 pg/mL (por exemplo, entre cerca de 20 a 120 pg/mL, 30 a 80 pg/mL, ou cerca de 40 a 70 pg/mL). Deve-se entender que qualquer valor entre cerca de 1 a 200 pg/mL é contemplado pela revelação. Em uma modalidade, os níveis de 5-FC são obtidos usando uma formulação de dose de liberação prolongada da revelação administrada 1 a 4 vezes por dia (cerca de 50 a 200 mg/kg/dia). Em uma modalidade adicional, a dose é administrada uma vez por dia a 50 a 200 mg/kg, duas vezes por dia a 25 a 100 mg/kg, três vezes por dia a cerca de 16 a 67 mg/kg, ou quatro vezes por dia a 12 a 50 mg/kg. Novamente percebe-se que qualquer dose entre 1 a 200 (por exemplo, 10 a 100) mg/kg por dia pode ser incluída, a programação de dosagem ajustada para obter a quantidade desejada e níveis de soro. Em uma modalidade, a dose de 5-FC é ajustada com base na atividade de atividade de citosina desaminase em um indivíduo, tecido ou célula.

A revelação fornece uma composição farmacêutica oral compreendendo 5-FC, em que a composição farmacêutica é uma forma de liberação modificada (por exemplo, um comprimido sólido monolítico, um precipitado, grânulos e similares) e libera 5-FC no trato gastrintestinal superior de um indivíduo por um período prolongado de tempo. A composição pode compreender adicionalmente um polímero hidrofílico tais como um ou mais de carbopol (por exemplo, carbopol 71-G), hidroxipropil celulose (HPC), hidroximetil celulose (HPMC), colidon, e óxido de polietileno (PoliOx). Os polímeros hidrofílicos podem constituir cerca de 10 porcento em peso a cerca de 40 porcento em peso da composição. Em uma modalidade, a 5-FC está presente em uma quantidade de cerca de 100 mg a cerca de 2.000 mg por comprimido ou dose. Em uma outra modalidade, a composição exibe taxa de dissolução in vitro de 5-FC maior que cerca de 80 % em cerca de 4 a cerca de 12 horas da maneira medida pelo aparelho de dissolução USP Tipo II (método de pá) a 75 rpm em 900 mL de água Dl a 37 °C usando método USP de 5-FC com detecção UV a cerca de 275 nm. Ainda em uma outra modalidade, a 5-FC está presente na composição farmacêutica em uma quantidade de cerca de 500 mg e em que depois da administração oral da composição a um indivíduo alimentado, a composição exibe: (i) um C_max de 5-FC entre cerca de 2,0 pg/mL e cerca de 10,0 pg/mL (por exemplo, entre cerca de 2,0 a 9,5 pg/mL, entre cerca de 3,0 a 8,0 pg/mL, entre cerca de 3,0 a 6,0 pg/mL, entre cerca de 3,5 a 8,0 pg/mL, ou entre cerca de 2,5 a 4,5 pg/mL); (ii) um t_mediano de cerca de 3 horas ou mais, (por exemplo, entre cerca de 3 a 12 horas, entre cerca de 3 a 10 horas, entre cerca de 4 a 12 horas, entre cerca de 4 a 10 horas, entre cerca de 5 a 12 horas, entre cerca de 5 a 10 horas, entre cerca de 6 a 12 horas, ou entre cerca de 6 a 10 horas, ou entre cerca de 6 a 8 horas); (iii) uma AUC de cerca de 20 a 80 pg*hr/mL (por exemplo, entre cerca de 25 a 75 pg*hr/mL, entre cerca de 30 a 70 pg*hr/mL, entre cerca de 30 a 65 pg*hr/mL, entre cerca de 30 a 60 pg*hr/mL, ou entre cerca de 35 a 65 pg*hr/mL); e (iv) um tj/2 entre cerca de 3 a 8 horas (por exemplo, entre cerca de 3 a 7 horas, entre cerca de 4 a 8 horas, ou entre cerca de 4 a 7 horas).

Ainda em uma outra modalidade, a 5-FC na composição farmacêutica em que depois de administração oral de 2 gm da composição farmacêutica a um indivíduo alimentado, a composição exibe (i) um C_max 5FC entre cerca de 5 e 80 pg/mL, cerca de 5 e 70 pg/mL, cerca de 5 e 60 pg/mL, cerca de 5 e 50 pg/mL, cerca de 5 e 40 pg/mL, cerca de 5 e 30 pg/mL, ou cerca de 5 e cerca de 20pg/mL, e (ii) um tempo máximo (t_max) entre cerca de 4 e cerca de 10 horas (por exemplo, 3 a 7 horas para atingir liberação de pico de 5-FC).

Onde a formulação compreende tanto uma liberação rápida quanto liberação prolongada/prolongada, a porção de liberação rápida compreenderá um t_max de cerca de 1 a 2 horas e a porção de liberação prolongada compreenderá um t_max entre 3 a 12 horas. Em métodos de tratamento compreendendo uma combinação de liberação rápida-liberação prolongada, uma concentração de produto terapêutico pode ser rapidamente obtida e prolongada por um período de 1 a 12 horas.

Administração de uma 5-FC-ER da revelação permite liberação prolongada de 5-fluorocitosina e, portanto, uma redução no número de doses dado por dia para 1, 2, ou 3 e/ou uma redução na dose diária total, sem precisar tomar uma dose em porções divididas para evitar náusea ou sintomas gastrintestinais. Isto permite melhor aquiescência do paciente com a terapia de medicamento e menores efeitos colaterais.

Além do mais, as formulações monolíticas descritas aqui e outros carreadores de liberação lenta comumente usados (ou algumas vezes referidos como liberação prolongada) e agentes de distribuição são contemplados.

Uma formulação liberação modificada (liberação prolongada), (por exemplo, comprimido, grânulo, precipitado, cápsula ou e similares) da revelação tipicamente compreende cerca de 25, 50, 100, 200, 250, 300, 400,

500, 750, 1.000, 1.250, 1500, 1.750, ou 2.000 mg de agente ativo (por exemplo, 5-FC) por forma de dosagem única. Onde uma composição compreende 5-FC e um segundo agente ativo (por exemplo, leucovorina), a quantidade de agente ativo para cada qual pode ser modificada para cair com uma faixa desejada (por exemplo, 25 a 500 mg/composição para cada agente ativo).

Em uma modalidade, a composição da revelação é otimizada com um revestimento para promover absorção no trato gastrintestinal superior incluindo o estômago. Tal absorção pode prevenir metabolismo de 5-FC por citosina desaminase bacteriana no intestino grosso.

Em um outro aspecto, a composição pode compreender um siRNA ou molécula antissentido que inibe especificamente expressão de citosina desaminase de uma fonte sem ser a fonte desejada. Tais moléculas siRNA ou antissentido podem ser facilmente projetadas examinando-se a diferença nas sequências de codificação para citosina desaminase. Por exemplo, onde a citosina desaminase de um vetor retroviral competente de replicação é uma citosina desaminase ou humanizada uma citosina desaminase de levedura um siRNA que especificamente inibir uma citosina desaminase bacteriana pode prevenir metabolismo indesejado no cólon por bactérias e fungos em o cólon.

O uso da formulação de liberação prolongada pode ser em forma de um comprimido, cápsula, trochar, emulsão, suspensão, e variará de acordo com a via de administração selecionada. Para soluções ou emulsões, carreadores adequados incluem, por exemplo, soluções aquosas ou alcoólicas/aquosas, emulsões ou suspensões, incluindo salina e meio tamponado. Da maneira descrita aqui em outro lugar uma composição farmacêutica da revelação pode incluir um aditivo convencional, tais como um estabilizador, tampão, sal, conservante, carga, melhorador de sabor e similares, conhecidos pelos versados na técnica. Os tampões exemplares incluem fosfatos, carbonates, citratos e similares. Os conservantes exemplares incluem EDTA, EGTA, BHA, BHT e similares. Os veículos parenterais podem incluir solução de cloreto de sódio, dextrose de Ringer, dextrose e cloreto de sódio, óleos de Ringer ou fixos lactados. Veículos intravenosos podem incluir vários aditivos, conservantes, ou fluido, nutriente ou reabastecedores de eletrólito (Ver, geralmente, Remington's Pharmaceutical Science, 16th Edition, Mack, Ed. 1980).

Da maneira aqui usada o termo “quantidade terapeuticamente eficaz” significa a quantidade de uma pró-droga e/ou outra substância biológica necessária para induzir um efeito farmacológico desejado. A quantidade pode variar bastante de acordo com a efetividade de uma substância ativa particular, da idade, peso, e resposta do indivíduo hospedeiro bem como a natureza e gravidade dos sintomas do hospedeiro. Outros fatores que podem ser levados em conta incluem a taxa de expressão de uma citosina desaminase polinucleotídeo de um vetor e a atividade de uma citosina desaminase para 5-FC. Dessa maneira, não existe nenhuma limitação crítica superior ou inferior mediante a quantidade da pró-droga ou substância ativa. A quantidade terapeuticamente eficaz a ser empregada nos métodos da revelação pode facilmente ser determinada pelos versados na técnica.

Em um outro aspecto é fornecido um método para tratar uma doença fungica. Em uma modalidade, o método compreende administrar a um indivíduo que necessita deste uma quantidade eficaz de tratamento de fungo de formulação de liberação prolongada compreendendo a 5-FC (por exemplo, uma forma de dosagem de liberação modificada monolíticas (MMR) compreendendo a 5-FC com maior tempo de residência gástrica). O método pode ser usado para tratar qualquer doença fungica aplicável, incluindo uma doença fungica que é uma doença fungica cerebral, uma doença fungica de órgão interno, doença fungica vaginal, doença fungica boca, doença fungica alimentar e/ou que é uma infecção por um fungo selecionado de Candida spp., Criptococcus spp., Sporothrix spp., Aspergillus spp., Cladosporium spp., Exophila spp. e Phialophora spp.

Tratar uma doença fungica com uma formulação de liberação prolongada compreendendo 5-fluorocitosina, pode ser benéfico para coadministar um outro agente antifóngico. Qualquer agente antifungico apropriado pode ser coadministrado com a formulação de liberação prolongada contendo 5-fluorocitosina, incluindo anfotericina B e antifóngicos azol tais como fluconazol e itraconazol. Tais agentes adicionais podem ser compartimentalizados na formulação de liberação prolongada, como parte de uma forma de liberação modificada (por exemplo, em camadas ou em um sólido monolítico) ou administrada separadamente.

Em uma outra modalidade é fornecido um método para tratar uma doença infecciosa. O método compreende administrar a um indivíduo que necessita deste uma quantidade suficiente de um vetor de expressão para induzir expressão de citosina desaminase em células infectadas, e uma quantidade eficaz para tratar infecção de uma formulação de liberação prolongada compreendendo 5-fluorocitosina. O método pode ser usado para tratar qualquer doença infecciosa não fungica aplicável, incluindo viral, bacteriana e doenças a base de micoplasma. Exemplos de tais doenças incluem infecção por HIV, HBV infecção, infecção por HCV, infecção por HPV, infecção viral de herpes, Tuberculose, pneumocystis carinii. Como com tratamento de doenças füngicas, administração da formulação de liberação prolongada compreendendo 5-fluorocitosina permite a liberação prolongada de 5-fluorocitosina para tratamento de doença infecciosa e, portanto, uma redução no número de doses dada por dia para 1, 2 ou 3. Também pode ser obtida uma redução na dose diária total devido a melhor formulação ou devido a maior atividade de citosina desaminase para converter 5-FC em 5FU. Isto permite melhor aquiescência do paciente com terapia de medicamento e menores efeitos colaterais. Em uma modalidade, a dose de 537

FC usada para tratar um indivíduo com doença infecciosa, em que as células infectadas do indivíduo compreende uma citosina desaminase heteróloga, pode ser reduzida de 1 a 1.000 vezes comparada com a dose usada para o tratamento de uma infecção fúngica sem o gene de citosina desaminase.

Tratar uma doença infecciosa com uma formulação de liberação prolongada compreendendo 5-fluorocitosina, pode ser benéfico para coadministrar um outro agente de doença anti-infecciosa. Qualquer agente de doença anti-infecciosa apropriado pode ser coadministrado com a formulação de liberação prolongada contendo 5-fluorocitosina, incluindo, mas não limitada a antibióticos, e antivirais tais como valciclovir, neverapina, combos de medicamento antiHIV, ribovirina e outros. Tais agentes adicionais podem ser compartimentalizados na formulação de liberação prolongada, em camadas ou administrada separadamente.

Em uma outra modalidade é fornecido um método para tratar uma doença hiperproliferativa. O método compreende administrar a um indivíduo que necessita deste uma quantidade suficiente de um vetor de expressão para induzir expressão de citosina desaminase em células hiperproliferativas, e uma quantidade eficaz de tratar proliferação de uma formulação de liberação prolongada compreendendo 5-fluorocitosina. O método pode ser usado para tratar qualquer doença hiperproliferativa aplicável tais como vários distúrbios autoimunes incluindo artrite reumatóide, doença de Crohn, doença pulmonária obstrutiva crônica, hiperplasia de próstata benigna, e outros. Como com tratamento de doenças fungicas, administração da formulação de liberação prolongada compreendendo 5fluorocitosina permite a liberação prolongada de 5-fluorocitosina para tratamento de doença hiperproliferativa e, portanto, uma redução no número de doses dada por dia para 1, 2 ou 3. Também pode ser obtida uma redução na dose diária total devido a melhor formulação ou devido a maior atividade de citosina desaminase para converter 5-FC em 5-FU. Isto permite melhor aquiescência do paciente com terapia de medicamento e maiores efeitos colaterais. Em uma modalidade, a dose de 5-FC usada para tratar um indivíduo com doença hiperproliferativa, em que as células hiperproliferativas do indivíduo compreendem uma citosína desaminase heteróloga, pode ser reduzida de 1 a 1.000 vezes comparado com a dose usada para o tratamento de uma doença hiperproliferativa sem o gene de citosina desaminase.

Tratar uma doença hiperproliferativa com uma formulação de liberação prolongada compreendendo 5-fluorocitosina, pode ser benéfico para coadministrar um outro agente de doença antiproliferativa. Qualquer agente de doença anti-proliferativo apropriado pode ser co administrado com a formulação de liberação prolongada contendo 5-fluorocitosina, incluindo, mas não limitada a metotrexato, ciclofosfamida, outros medicamentos de câncer, leucovorina e esteróides. Tais agentes adicionais podem ser compartimentalizados na formulação de liberação prolongada, (por exemplo, em camadas em uma forma monolítica) ou administrada separadamente.

Ainda em uma outra modalidade é fornecido um método para tratar um câncer. O método compreende administrar a um indivíduo que necessita deste uma quantidade suficiente de um vetor de expressão para induzir expressão de citosina desaminase em células do câncer e uma quantidade eficaz de tratamento de câncer de uma formulação de liberação prolongada compreendendo 5-fluorocitosina. O método pode ser usado para tratar qualquer câncer aplicável, incluindo cânceres da glândula adrenal, bexiga, osso, medula óssea, cérebro (por exemplo, glioblastoma multiforme), mama, nuca, vesícula, ganglia, trato gastrintestinal (por exemplo, cânceres de cólon e reto), coração, rim, fígado, pulmão, músculo, ovário, pâncreas, paratireóide, pênis, próstata, glândulas salivares, pele (por exemplo, melanoma), baço, testículo, timo, tireóide, e útero. Cânceres a ser tratados incluem tumores sólidos incluindo metástase de um câncer cerebral, câncer de pulmão, câncer de cólon-reto, câncer de mama, câncer de próstata, câncer do trato urinário, linfoma de câncer uterino, câncer oral, câncer pancreático, leucemia, melanoma, câncer de estômago e câncer de ovário. A formulação pode ser usada também para tratar doença de animais de companhia e agrícolas incluindo cães. Em cães, câncer cerebral, linfomas, tumores de mastócito e fibrosarcomas podem ser tratados com a formulação de 5FC com a coadministração de um vetor contendo um gene para citosina desaminase. Como com tratamento de doenças fungicas, administração de uma formulação de liberação prolongada compreendendo 5-fluorocitosina permite liberação prolongada de 5-fluorocitosina para tratamento de câncer e, portanto, um redução no número de doses dada por dia para 1, 2 ou 3. Também pode ser obtida uma redução na dose diária total devido a melhor formulação ou devido a maior atividade de citosina desaminase para converter 5-FC em 5FU. Isto permite melhor aquiescência do paciente com terapia de medicamento e maiores efeitos colaterais. Em uma modalidade, a dose de 5-FC usada para tratar um indivíduo com câncer, em que o câncer do indivíduo compreende uma citosina desaminase heteróloga, pode ser reduzida de 1 a 1.000 vezes comparado com a dose usada para o tratamento de um câncer sem o gene de citosina desaminase.

Tratar um câncer com uma formulação de liberação prolongada compreendendo 5-fluorocitosina, pode ser benéfico para coadministrar um outro agente anticâncer. Qualquer agente anticâncer apropriado pode ser coadministrado com a formulação de liberação prolongada contendo 5-fluorocitosina, incluindo, mas sem limitações, leucovorina, bussulfano, cis-platina, mitomicina C carboplatina; agentes antimitóticos, tais como colquicina, vinblastina, paclitaxel, e docetaxel; inibidores topo I, tais como camptotecina e topotecano; inibidores topo II, tais como doxorrubicina e etoposide; RNA/DNA antimetabólitos, tais como 5azacitidina, 5-fluoruracila e metotrexato; DNA antimetabólitos, tais como 5flúor-2'-deóxi-uridina, ara-C, hidroxiuréia e tioguanina; inibidores EGFR, tais como Iressa® (gefitinib) e Tarceva® (erlotinib); inibidores proteossomo; anticorpos, tais como campath, Herceptin® (trastuzumab), Avastin® (bevacizumab), ou Rituxan® (rituximab); esteróides e agentes alcalinizantes tais como temodar, melfalan, clorambucil, ciclofosamida, ifosfamida, vincristina, mitoguazona, epirubicina, aclarubicina, bleomicina, mitoxantrona, eliptinio, fludarabina, octreotida, ácido retinóico, tamoxifen, Gleevec® (mesilato de imatinib) e alanosina. Tais agentes adicionais podem ser compartimentalizados na formulação de liberação prolongada (por exemplo, em camadas em uma formulação monolítica) ou administrada separadamente.

A pró-droga 5-FC é convertida em um medicamento citotóxico pela ação de enzimas inerentes em um micro-organismo ou que foram de outra forma recombinantemente introduzidas em um organismo. Por exemplo, a levedura, ou citosina desaminase bacteriana, converte a pró-droga de antibiótico inócuo 5-FC no agente quimioterapêutico citotóxico 5-fluoruracila (5-FU). Humanos (e mamíferos no geral) não são conhecidos por ter um gene de ocorrência natural que codifica uma enzima com atividade de citosina desaminase significativa. Levedura e citosina desaminase bacteriana têm sido reconhecidos no tratamento de cânceres usando distribuição genética e vetores virais para a distribuição da enzima seguido por tratamento com 5-FC, que é então convertida pela enzima em um medicamento citotóxico (Miller et al., Can Res 62:773 - 780 2002; Kievit et al., Can Res 59:1417-1421 1999).

Um mecanismo de distribuição para o tratamento de câncer é baseado em vetores retrovirais competente de replicação (por exemplo, vetores ortoretrovírusretrovirais de mamífero) compreendendo uma citosina desaminase localizada a jusante de um local de entrada de ribossomo interno (IRES). Por exemplo, patente U.S. No. 6.899.871 a Kasahara et al. descreve um vetor usado para o tratamento de distúrbios proliferativos celulares incluindo cânceres cerebrais (a revelação de patente U.S. No. 6.899.871 está incorporada aqui pela referência).

O gene citosina desaminase usado para transfecção das células cancerígenas pode codificar qualquer citosina desaminase aplicável que catalisará a conversão de 5-fluorocitosina em 5-fluoruracil. O 5-fluoruracila é então convertido em monofosfato de 5-flúor-deoxiuridina (FdUMP) (bem como outros metabólitos ativos tal como 5-FdUTP) dentro da célula cancerígena e resulta em inibição de timidilato sintase ou por incorporação de 5-FU em monofosfato de 5-flúor-uridina (FUMP) 5-FUTP e adicionalmente em RNA, rompendo por meio disso estruturas RNA e processos e, finalmente, levando a morte celular. Citosina desaminases apropriadas incluem aquelas das bactérias e fungos, tais coma citosina desaminase de E.coli (Huber et al. PNAS 91 8302-8306 1994, Candida kefyr (ver, por exemplo, patente U.S. No. 7.141.404) ou Saccharomyces cerevisiae (Kievit et al. op.cit.) bem como melhor citosina desaminase recombinante (por exemplo, CD's códon humanizados e/ou CD's códon estabilizados) pode ser usada

O vetor de expressão usado para transfectar a célula cancerígena com a citosina desaminase pode ser qualquer vetor de expressão aplicável, incluindo um plasmídeo de DNA, um vetor de expressão de polinucleotídeo formulado com um agente ou agentes sintéticos, um vetor bacteriano, ou um vetor viral (por exemplo, Concepts in Genetic Medicina, ed. Boro Dropulic and Barrie Carter, Wiley, 2008, Hoboken, NJ.; The Desenvolvimento of Human Gene Therapy, ed. Theodore Friedmann, Cold Springs Harbor Laboratory Press, Cold springs Harbor, New York, 1999; Gene and Cell Therapy, ed. Nancy Smyth Templeton, Marcel Dekker Inc., New York, New York, 2.000 and Gene Therapy: Therapeutic Mechanism and Strategies, ed. Nancy Smyth Templetone e Danilo D Lasic, Marcel Dekker, Inc., New York, New York, 2.000). Em um aspecto da invenção, vetores retrovirais podem ser usados. Vetores retrovirais incluem um vetor retroviral competente de replicação (ver, por exemplo, patentes U.S. Nos. 6.410.313 e 6.899.871) e um vetor retroviral defectivo de replicação (ver, por exemplo, patente U.S. Nos. 5.716.826, 5.830.458, 5.997.859, 6,133.029, 6.241.982, 6.410.326, 6.495.349, 6.531.307 e 6.569.679). Transdução de células cancerígenas pode ser, por exemplo, por injeção direta, implantação ou administração sistêmica de um vetor de expressão com um gene de citosina desaminase. Alvejamento de expressão de citosina desaminase na célula cancerígena pode ser facilitado incluindo um promotor de específico de tecido apropriado ou microRNA no vetor de expressão. Em uma outra modalidade o retrovirus é específico de tecido por inclusão de sequências “alvos” para miRNA’s que são específicos para certos tecidos tais como células hematopoiéticas, células do fígado ou células musculares. (Bell and Kirina, Nature Biotech., 26:1347, 2008, incorporados aqui pela referência) de forma que o vírus não se expressa nesses tecidos. Altemativamente, o vírus pode incluir um alvo que é expresso ubiquitosamente mas é baixo em células do tumor, tal como let-7.

Os métodos descritos aqui podem ser usados em qualquer espécie de mamífero, incluindo humano, macaco, vaca, ovelha, porco, cabra, cavalo, camundongo, rato, cão, gato, coelho, porquinho-da-índia, hamster e cavalo. Humanos são preferidos.

De acordo com os métodos descritos aqui, uma formulação de liberação prolongada compreendendo 5~fluorocitosina pode ser administrada ao hospedeiro por uma via apropriada, tanto sozinha quanto em combinação com um outro medicamento. Uma quantidade eficaz de formulação de liberação prolongada compreendendo 5-fluorocitosina é administrada. Uma quantidade eficaz é uma quantidade suficiente para obter o efeito terapêutico desejado nas condições de administração, tal como uma quantidade suficiente para reduzir ou eliminar uma infecção fungica, reduzir ou eliminar uma doença infecciosa não fungica, ou diminuir o crescimento, reduzir ou eliminar células cancerígenas ou células de uma doença híperproliferativa.

Em uma outra modalidade, a dose de uma composição compreendendo a 5-FC ou 5-FC e leucovorina pode ser modificada baseada na atividade de citosina desaminase. Por exemplo é possível modificar a atividade de citosina desaminase e expressão modificando-se o tipo de promotor, microRNA ou sequência da citosina desaminase. Em tais modalidades, a dose de 5-FC pode ser ajustada (por exemplo, onde a atividade e/ou expressão são altas, a 5-dose de FC pode ser reduzido).

Em uma outra modalidade, uma composição de 5-FC da revelação é usada em combinação com um retrovirus competente de replicação compreendendo citosina desaminase; tituladores virais podem ser determinados de um indivíduo compreendendo o retrovirus competente de replicação e a dose de 5-FC modificada com base em inúmeras infecções ou unidades de transformação e/ou na expressão de citosina desaminase. Ainda em uma modalidade adicional, a dose de um 5-FC ou uma composição de 5FC e leucovorina da revelação pode ser determinada baseado em um tamanho do tumor. Por exemplo, injeção de tumores com um retrovirus competente de replicação compreendendo um IRES ligado a um gene de citosina desaminase pode resultar em cerca de 75 % eficiência de transdução depois de cerca de 49 dias de propagação. Com esta informação pode ser determinada uma diretriz de dosagem para tratar tumores de tamanho maior, tais como aqueles que ocorrem em animais maiores, incluindo humanos. Por exemplo, uma dose de *2

6x10 pfu em tumores de 1,0 a 1,5 cm em volume resulta consistentemente em transdução da maioria das células. Em uma outra modalidade, a dose de vetor viral é cerca de 10 a 10 unidades de transformação (TU) por grama de peso cerebral. Onde a atividade de um gene de citosina desaminase e expressão são conhecidos, uma dose adequada pode ser determinada e ajustada em um indivíduo individual baseado em células do tumor em combinação com inúmeras unidades de transformação.

Modificações dos modos supradescritos para realizar a invenção que são óbvios aos versados na tecnologia devem estar no escopo das reivindicações seguintes. Todas as patentes e publicações mencionadas na especificação são indicativos dos níveis dos versados na técnica aos quais a invenção diz respeito. Todas as referências citadas nesta revelação estão incorporadas pela referência como se cada qual referência tivesse sido incorporada pela referência na sua íntegra individualmente.

EXEMPLOS

EXEMPLO 1

Materiais. Os materiais usados para preparar a forma de dosagem da maneira descrita aqui foram obtidos da maneira a seguir. Flucitosina (5-FC), USP é adquirida pela Scinopharm (Formosa); Carbopol 71-G foi adquirida pela Noveon (Cleveland, Ohio, USA); HPMC, NF (Benecel® MP874, hidroxipropilmetilcelulose) e HPC, NF (Klucel®-HXF, hidroxipropil celulose) foi adquirida pela Aquaion (Wilmington, Delaware, USA); Kollidon®-SR (PVA-PVP copolímero, acetato de polivinila e polímero retardante matriz a base de povidona) foi adquirida pela BASF (Ludwigshafen am Rheina, Rhineland-Palatinate, Alemanha); Fosfato de dicálcio compressível diretamente, NF (Emcompress®) foi adquirida pela JRS Pharma (Patterson, New York, USA); Maltodextrina foi adquirida pela Grains Processing Corp. (GPC, Muscatina, Iowa); Estearato de magnésio NF é adquirido pela Spectrum Chemicals (Gardena, Califórnia, USA) e Lactose anidro diretamente compressível (DCL-21) é adquirida pela DMV (Veghel, Holanda). Bicarbonato de sódio (USP-2 grade) foi adquirido pela Church and Dwight (Princeton, NJ). Avicel® brand de celulose microcristalina-NF é adquirida pela FMC (Filadélfia, PA).

Em uma modalidade é descrita uma forma de dosagem de liberação modificada monolítica (MMR) compreendendo a 5-FC com maior tempo de residência gástrica. A combinação de tamanho e forma junto com bioadesividade e flotação foram usados para restringir o MMR no trato gastrintestinal superior (por exemplo, o estômago).

As formas de dosagem foram preparadas por métodos formação de comprimido comuns, de acordo com o seguinte procedimento geral: Flucitosina (5-FC) e diluente (lactose, celulose microcristalina, maltodextrina ou fosfato de dicálcio) foram misturados seguido pela mistura 5 em uma misturadora devidamente dimensionada. Os polímeros hidrofílicos ou bioadesivos (Carbopol, HPC, HPMC, PoliOx, e similares) foram adicionados e misturados bem por pelo menos 15 minutos. Se usado, estearato de magnésio foi adicionado e misturado por 3 minutos. As misturas resultantes foram compactadas usando uma prensa de comprimido semiautomática de 10 dez estações para formar um côncavo de forma de ferramenta com borda redonda, dando um comprimido modelado em forma de pílula ligeiramente plano. A forma de dosagem resultante foi ensaiada para dissolução in vitro, taxa de captação média, e bioadesividade, da maneira descrita a seguir.

Ingrediente	mg/dose	%
Flucitosina (5-FC)	500	58,14%
Carbopol (71G)	150	17,44 %
Fosfato de dicálcio	200	23,26 %
Estearato de Mg	10	1,16%
Total	860	100,0 %

EXEMPLO 2

O método anterior foi repetido usando os seguintes componentes:

Ingrediente	mg/dose	%
Flucitosina (5-FC)	500	58,14%
HPMC	150	17,44 %
Fosfato de dicálcio	200	23,26 %
Estearato de Mg	10	1,16%
Total	860	100,0%

EXEMPLO 3

O método anterior foi repetido usando os seguintes componentes:

Ingrediente	mg/dose	%
Flucitosina (5-FC)	500	58,14%
HPC (Klucel ΗΧΡ)	150	17,44%
Fosfato de dicálcio	200	23,26 %
Estearato de Mg	10	1,16%
Total	860	100,0 %

EXEMPLO 4

O método anterior foi repetido usando os seguintes componentes:

Ingrediente	mg/dose	%
Flucitosina (5-FC)	500	58,14%
Kollidone SR	150	17,44 %
Fosfato de dicálcio	200	23,26 %
Estearato de Mg	10	1,16%
Total	860	100,0 %

EXEMPLO 5

O método anterior foi repetido usando os seguintes componentes:

Ingrediente	mg/dose	%
Flucitosina (5-FC)	500	58,14 %
Eudragid RLPO	150	17,44 %
Fosfato de dicálcio	200	23,26 %
Estearato de Mg	10	1,16%
Total	860	100,0 %

EXEMPLO 6

O método anterior foi repetido usando os seguintes componentes:

Ingrediente	mg/dose	%
Flucitosina (5-FC)	500	58,82 %
Carbopol (71G)	150	17,65 %
Nusilina US2	100	11,76%
Lubritab	100	11,76%
Total	850	100,0 %

EXEMPLO 7

O método anterior foi repetido usando os seguintes componentes:

Ingrediente	mg/dose	%
Flucitosina (5-FC)	500	56,82 %
Carbopol (71 G)	120	13,64 %
HPC (Klucel-H)	50	5,68 %
Lactose	200	22,73 %
Estearato de Mg	10	1,14%
Total	880	100,0 %

EXEMPLO 8

O método anterior foi repetido usando os seguintes componentes:

Ingrediente	mg/tab	% em peso/peso
5-flurocitosina	500	44,6
Carbopol® 71G NF	175	15,6
HPC (Klucel® EXF)	67	6,0
Lactose	120	10,7
Fosfato de dicálcio (Emcompress®) NF	250	22,3
Estearato de magnésio NF	10	0,9
Total	1122	100,0

EXEMPLO 9

O método anterior foi repetido usando os seguintes componentes:

Material	mg/tab	% em peso/peso
5-flurocitosina	500	44,6
Kollidon® SR	175	15,6
HPC (Klucel® EXF)	67	6,0
Lactose	120	10,7
Fosfato de dicálcio (Emcompress®) NF	250	22,3
Estearato de magnésio NF	10	0,9
Total	1122	100,0

EXEMPLO 10

O método anterior foi repetido usando os seguintes componentes:

Material	mg/tab	% em peso/peso
5-flurocitosina	500	44,6
HPC (Klucel® HXF)	175	15,6
HPC (Klucel® EXF)	67	6,0
Lactose	120	10,7
Fosfato de dicálcio (Emcompress®) NF	250	22,3
Estearato de magnésio NF	10	0,9
Total	1122	100,0

EXEMPLO 11

O método anterior foi repetido usando os seguintes componentes:

Material	mg/tab	% em peso/peso
5-flurocitosina	500	44,6
Methocel® Kl 00M	175	15,6
HPC (Klucel® EXF)	67	6,0
Lactose	120	10,7
Fosfato de dicálcio (Emcompress®) NF	250	22,3
Estearato de magnésio NF	10	0,9
Total	1,122	100,0

EXEMPLO 12

O método anterior foi repetido usando os seguintes componentes:

Material	mg/tab	% em peso/peso
5-flurocitosina	500	54,7
Eudragit® RLPO	100	10,9
Ethocel® 10 cp	100	10,9
HPC (Klucel® EXF)	55	6,0
Lactose	50	5,5
Fosfato de dicálcio (Emcompress®) NF	100	10,9
Estearato de magnésio NF	9	1,0
Total	1.122	100,0

EXEMPLO 13

O método anterior foi repetido usando os seguintes componentes:

Material	mg/tab	% em peso/peso
5-flurocitosina	500	44,1
Kollidon® SR	185	16,3
HPC (Klucel® EXF)	68	6,0
Maltodextrin	120	10,6
Fosfato de dicálcio (Emcompress®) NF	250	22,1
Estearato de magnésio NF	10	0,9
Total	1133	100,0

EXEMPLO 14

O método anterior foi repetido usando os seguintes componentes:

Material	mg/tab	% em peso/peso
5-flurocitosina	500	50,1
Carbopol® 71GNF	110	11,0
HPC (Klucel® EXF)	60	6,0
Maltodextrin M510	180	18,0
Fosfato de dicálcio (Emcompress®) NF	140	14,0
Estearato de magnésio NF	9	0,9
Total	999	100

EXEMPLO 15

O método anterior foi repetido usando os seguintes componentes:

Material	mg/tab	% em peso/peso
5-flurocitosina	500	50,1
Carbopol® 71G NF	110	11,0
HPC (Klucel® EXF)	60	6,0
Celulose microcristalina (Avicel® PH102)	180	18,0
Fosfato de dicálcio (Emcompress®) NF	140	14,0
Estearato de magnésio NF	9	0,9
Total	999	100,0

EXEMPLO 16

O método anterior foi repetido usando os seguintes componentes:

Material	mg/tab	% em peso/peso
5-flurocitosina	500	49,6
Methocel® Kl 00M	80	7,9
HPC (Klucel® EXF)	60	5,9
Maltodextrin M510	200	19,8
Fosfato de dicálcio (Emcompress®) NF	160	15,9
Estearato de magnésio NF	9	0,9
Total	1009	100,0

EXEMPLO 17

O método anterior foi repetido usando os seguintes componentes:

Material	mg/tab	% em peso/peso
5-flurocitosina	500	49,6
Methocel® Kl 00M	80	7,9
HPC (Klucel® EXF)	60	5,9
Celulose microcristalina (Avicel® PH102)	200	19,8
Fosfato de dicálcio (Emcompress®) NF	160	15,9
Estearato de magnésio NF	9	0,9
Total	1009	100,0

EXEMPLO 18

O método anterior foi repetido usando os seguintes componentes:

Material	mg/tab	% em peso/peso
5-flurocitosina	500	50,1
Eudragit® RLPO	77	7,7
Ethocel® 100 cp*	77	7,7
HPC (Klucel® EXF)	60	6,0
Maltodextrina M510	138	13,8
Fosfato de dicálcio (Emcompress®) NF	138	13,8
Estearato de magnésio NF	9	0,9
Total	999	100,0

EXEMPLO 19

O método anterior foi repetido usando os seguintes componentes:

Material	mg/tab	% em peso/peso
5-flurocitosina	500	55,31
Carbopol-71G	110	12,17
HPC (Klucel EXF)	55	6,08
Celulose microcristalina (Avicel PH102)	100	11,06
Di-idrato de fosfato de dicálcio	130	14,38
Estearato de magnésio (Derivado de Veg)	9	1,00
Comprimido do núcleo-total	904	100,00

estudos de cão.

Comprimidos não revestidos com Carbopol foram usados em

Comprimidos revestidos com Carbopol foram usados em estudos humanos.

EXEMPLO 20

Os comprimidos do Exemplo 1 a 19 podem ser revestidos com material de revestimento a base de HPMC de liberação imediata tais como Opadry (Colorcon) com propósito estético. Um exemplo de revestidos comprimidos de comprimidos do núcleo preparados no Exemplo 19 é mostrado aqui.

Ingrediente	mg/tab	% em peso/peso
Comprimido do núcleo	904	97,1
Opadry II Clear YS-1-7006	27,1	2,9
Água Purificada	*	*
Comprimido Revestido Total	931	100

Os comprimidos do Exemplo 20 foram usados em um estudo PK humana de dose única e também mostrados como formulação “Carbopol”.

EXEMPLO 21

Os comprimidos revestidos de comprimidos do núcleo preparados no Exemplo 13 são mostrados aqui.

Ingrediente	mg/tab	% em peso/peso
Comprimido do núcleo	1.133	97,1
Opadry II Clear YS-1-7006	34	2,9
Água purificada	*	*
Comprimido Revestido Total	1.167	100

Os comprimidos do Exemplo 21 foram usados em um estudo PK humano de dose única e também mostrados como formulação “Kollidon”.

EXEMPLO 22

Teste de dissolução USP de Flucitosina. Para a medição de taxa de liberação in vitro, o método de dissolução para Ancobon® descrito em USP 31 foi usado somente com uma pequena modificação. Todos os dados reportados neste relatório são taxa de dissolução média em um ponto de tempo específico (n=4 ou 8).

Os parâmetros de medição de dissolução in vitro usados para avaliar taxa de liberação de medicamento in vitro em formas de dosagem inéditas são mostrado na Tabela A.

Tabela A. Método de Dissolução Usado no Desenvolvimento da Formulação

Aparelho de dissolução VK 7000	Especificação
Aparelho	aparelho IIUSP (Pá)
Temperatura	37 °C
RPM	75 rpm
Vasos	Capacidade de um litro
Meio de dissolução	900 mL de água deionizada
Amostragem	Manual
Volume da Amostragem	10,0 mL
Intervalo da amostra	T=0,5 h, 1 h, 1,5 h, 3 h, 5 h, 7 h, 9 h, 11 h, e 12 h
Substituição do Volume	Nenhuma substituição de volume
Filtração da Amostra	Filtro PVDF de 0,45 pm
Análise da Amostra	espectrofotômetro UV-Vis a 275 nm

Os resultados da taxa de dissolução média (% de medicamento liberado) usando o método descrito anteriormente são mostrados na Tabela B e a compilação das curvas de dissolução é mostrada na figura 1.

Tabela B. Taxa de dissolução média dos Primeiros doze Protótipos

Tempo (Hr)	Exemplo 8 Carbopol	Exemplo 9 Kollidon	Exemplo 10 HPC	Exemplo 11 HPMC	Exemplo 12 Eudragit/EC
0	0	0	0	0	0
0,5	8	31	9	10	17
1	11	43	13	15	29
1,5	16	52	16	19	44
2	19	59	20	22	53
3	26	71	26	28	71
5	40	87	35	38	92
7	52	98	43	48	103
8	58	100	47	53	104
10	68	104	53	61	106

Tempo	Exemplo 18 Eud/EU/ Maltrin 0	Exemplo 13 Kollidon/ Maltrin 0	Exemplo 14 Carbopol/ Maltrin 0	Exemplo HPMC/ Maltrin 0	Exemplo 17 HPMC/ MCC 0	Exemplo 15 Carbopol/ MCC 0
0
0,5	23	23	7	15	23	7
1,5	49	39	17	26	34	14
3	75	55	28	39	46	24
5	91	69	43	53	57	38
7	99	78	56	65	67	52
9	103	86	75	76	75	84
11	102	92	75	91	82	102

Time	Exemplo 19
Carbopol/MCC
0	0
0,5	7
1,5	14
3	25
5	38
7	52
9	90
11	101

Os resultados de dissolução mostraram que todas as formulações apresentaram perfis de liberação prolongada de 5-FC com o tempo.

EXEMPLO 23

Método de Teste de Taxa Expansão e Erosão. A retenção gástrica de um comprimido matriz conta com o comprimido para expandir rapidamente absorvendo o fluido gástrico mediante ingestão tendo ao mesmo tempo um resistência mecânica aceitável com o tempo de maneira a não quebrar em pedaços pequenos no estômago. A taxa de captação do meio no comprimido (isto é, taxa de expansão) e taxa de erosão do comprimido (isto é, medição de resistência mecânica) foram determinados depois de imersão no pH 4,1 meio SGF, que simula o pH do estômago alimentado. Amostras pesadas foram colocadas em vasos de dissolução (aparelho de dissolução USP tipo I ou II) contendo pH 4,1 tampão a 37 ± 0,2 °C. Depois de um intervalo de tempo selecionado (por exemplo, 1 h, 2 h, 3 h, 5 h, 8 h, 12 h, e 24 h) cada cesta de dissolução foi extraída, colocada em gráfico para remover excesso de água dos comprimidos, e a dimensão (comprimento e largura) foram medidos em triplicata. Os comprimidos foram então pesados (a 10 minutos da extração do meio de maneira a prevenir de secagem) em um equilíbrio analítico. As amostras úmidas foram então secas em um forno a >100 °C por pelo menos 24 horas, deixadas resfriar em um dessecador, e finalmente pesadas até o peso constante ser obtido (peso seco final). O aumento no peso da massa úmida representa a captação do meio. O aumento no peso devido ao líquido absorvido (Q) foi estimado de acordo com a equação 1.

Equação 1: Q = 100 ( W_w - W_f) / W_f

Onde W_w e W_f são a massa da amostra hidratada antes da secagem e massa final de mesma amostra seca e parcialmente corroída, respectivamente.

A porcentagem de erosão (E) do dispositivo foi estimada usando equação 2.

Equação 2: E = 100 (Wi - W_f) / W_t

Onde Wi é o seco de partida inicial. Três diferentes amostras foram medidas para cada ponto de tempo, e amostras frescas foram usadas para cada ponto de tempo individual. Todos os experimentos foram feitos em triplicata usando três comprimidos de cada medicamento comparador.

Com base no perfil de dissolução, as composições do Exemplo 18 (protótipo Eudragit/EC com Maltodextrina), Exemplo 13 (Kollidon), e Exemplo 19 (protótipo Carbopol) foram selecionados para estudo adicional. Quanto rápido o comprimidos dilata mediante ingestão, tanto maior a probabilidade de o comprimido matriz ser retido no trato GI superior. Dos três protótipos, protótipo Carbopol dilatou mais rápido do que os outros dois absorvendo cerca de 50 % de seu peso seco em água em 30 minutos, e continuou a absorver a água até quase 250 % de seu peso seco em 8 horas. Os protótipos Kollidon e Eudragit comportaram de maneira muito similar em que ambos absorveram água muito lentamente com o tempo a cerca de 50 % de seu peso seco em oito horas. A partir desses resultados, os comprimidos de Carbopol são a matriz tipo dilatação, enquanto os outros dois protótipos não dilatam muito. A taxa de erosão para esses três protótipos foi formulação de protótipo Carbopol>Kollidon~ Eudragit.

Desde que o tamanho do comprimido é um fator para retenção no estômago, uma menor taxa de erosão é preferida para este tipo de formulação. A taxa de erosão de comprimidos sob as condições de dissolução (USP I, cesta) é expressa pela razão E (% de perda de peso o comprimido, peso seco).

Os dados mostraram que Carbopol protótipo foi o mais baixo para corroer em 8 horas (perda de ~30 % peso do comprimido em 8 horas) nas condições de dissolução de USP I enquanto os outros dois protótipos corroeram mais rápido. A taxa de erosão para esses três protótipos foi formulação de protótipo Carbopol<Kollidon<Eudragit.

Um comprimido de HPMC também pode servir como um comprimido matriz de liberação lenta para 5-FC, mas Carbopol tem o benefício adicionado de ser um comprimido bioadesivo. Os comprimidos menores têm uma vantagem de dilatabilidade mais fácil fornecendo ao mesmo tempo bastante tempo de retenção no GI superior.

EXEMPLO 24

Dissolução em várias condições de pH. Todos os testes de dissolução para ranking de vários protótipos no desenvolvimento da formulação rounds foram· realizados usando água deionizada como o meio de dissolução da maneira descrita no monográfico Ancobon’s USP. A fim de testar se existe quaisquer mudanças no perfil de dissolução de protótipos do comprimido de Flucitosina-XR, os três candidatos finais foram testados para dissolução em duas diferentes condições de pH -a pH 1,2 (SGF) e pH 4,1 (tampão de acetato de USP). Os resultados são listados na Tabela C e mostram os perfis de dissolução dos três protótipos em várias condições de pH.

Tabela C Taxa de dissolução média de três formulações recomendadas em vários pHs

Tempo	Exl8	Ex 13	Ex 19
Eud/EU/Matrin	Kollidon/Maltrin	Carbopol/MCC
hora	pH7	pH4,l	pHl,2	pH7	pH4,l	pHl,2	pH7	PH4,1	pHl,2
0	0	0	0	0	0	0	0	0	0
0,5	23	24	33	23	22	28	7	8	12
1,5	49	55	74	39	45	52	14	15	23
3	75	87	102	55	63	71	25	25	41
5	91	101	103	69	78	84	38	39	66
7	99	102	103	78	87	93	52	53	85
9	103	103	105	86	93	97	90	88	98
11	102	103	105	92	98	101	101	102	104

O efeito de pH no perfil de dissolução dos três protótipos foi ligeiramente diferente, mas no geral a taxa de liberação de medicamento aumentou em meio ácido mais. O comportamento do comprimido matriz individual é sumarizado a seguir:

Exemplo 18 (comprimido a base de Eudragit/Ethocel): O efeito do pH foi maior neste protótipo. Uma vez que o pH foi menor, a taxa de liberação de medicamento aumentou de 7 horas (>95 % de liberação) a pH 7 para 5 horas a pH 4,1 a 3 horas a pH 1,2. Isto é incomum considerando que os componentes do comprimido matriz são destinados a ser insensível a faixas de pH.

Exemplo 13 (comprimidos matriz a base de Kollidon): Liberação completa do medicamento aumentou ligeiramente quando o pH do meio de dissolução mudou de pH 7 para pH 4,1, e então para pH 1.2. Liberação completa de medicamento foi obtida a cerca de 9 horas no pH 1,2 enquanto levou >11 horas no pH 7.

Exemplo 19 (comprimidos matriz a base de Carbopol): O perfil de dissolução permaneceu o mesmo no pH 7 e pH 4,1 em sobreposição virtual para o perfil total. No pH 1,2, a taxa de liberação foi ligeiramente mais rápida e ela teve uma taxa mais linear de liberação do que tanto no pH 4,1 quanto no pH 7.

EXEMPLO 25

Um teste clínico foi realizado para determinar as propriedades das duas formulações, Exemplo 20 (Carbopol revestido) e Exemplo 21 (Kollidon revestido) comparados com Ancobon® (formulação de referência) em humanos, da maneira descrita a seguir. A formulação A é Carbopol com formulação mostrada no Exemplo 20, a formulação B é Kollidon com formulação mostrada no Exemplo 21.

título	Um Estudo Piloto para Avaliar a Farmacocinética de Dose única de Duas Formulações Teste de Flucitosina em Condições Alimentadas e em Jejum
Objetivo do Estudo	0 objetivo deste estudo avaliou a biodisponibilidade de dose única de duas formulações de liberação prolongada teste de comprimidos de flucitosina 500 mg em condições de jejum e alimentado comparado a cápsulas de flucitosina de liberação imediata Ancobon® 500 mg em condições em jejum. Segurança foi monitorada.
Projeto do Estudo	Estudo aberto, randomizado, cruzado de 5 variáveis.
Número de Indivíduos	8 indivíduos foram arrolados no estudo.
Duração de Participação por Indivíduos	A duração de participação para cada indivíduo foi aproximadamente 11 dias, não incluindo o período de classificação. Os indivíduos foram confinados começando no Dia -1 até o término dos procedimentos na manhã do Dia 10.
Estudo Produtos	Formulação de Teste A (Carbopol): comprimidos de liberação prolongada de flucitosina 500 mg para administração oral Formulação de Teste B (Kollidon): comprimidos de liberação prolongada de flucitosina 500 mg para administração oral Formulação de Referência: cápsulas de liberação imediata de flucitosina 500 mg (Ancobon®, Valeant Pharmaceuticals) para administração oral

Tratamentos do Estudo	Tratamento A = Formulação de Teste A em jejum Tratamento B = Formulação de Teste A alimentado Tratamento C = Formulação de Teste B em jejum Tratamento D = Formulação de Teste B alimentado Tratamento E = Produto de Referência em jejum
Farmacocinética da Coleta de Amostra e Análise	Amostras de sangue em série foram coletadas pré-dose e a 1, 3, 4, 5, 6, 9, 12, 18 e 24 horas pós-dose durante Tratamentos A, B, C, e D e pré-dose e a 0,5, 1, 2, 3, 4, 6, 8,10, e 12 horas pós-dose durante o Tratamento E para determinar a concentração de flucitosina e fluoruracila em plasma. Os parâmetros farmacocinéticos não compartimental padrão (PK), incluindo ΑυΟθ.,, AUCo^, AUC₀._t/AUCq_i^£, Cm^x, tmav. kei, e tj/2, foram calculados a partir das concentrações plasmáticas individuais de flucitosina e fluoruracila. Comparações de parâmetros PK selecionados e a razão fluoruracila AUC para flucitosina AUC foram feitas entre os tratamentos. Modelagem foi realizada para explorar como as formulações testes são dosadas clinicamente (isto é, número de doses diárias) para obter concentrações de flucitosina em estado estável entre 40 e 100 pg/mL.
Avaliações de Segurança	Exames físicos, altura e peso corpóreo, sinais vitais, perfis de laboratório clínico e eventos adversos (AEs) foram avaliados nos ponto de tempos projetados.

Tratamentos em “jejum” incluem indivíduos que tiveram de fazer jejum (definido como na ingestão calórica) por um mínimo de 10 horas por toda a noite antes de estudar a administração de medicamento e continuar fazer jejum por pelo menos 4 horas em seguida. Água (exceto aquela administrada com dosagem) não foi permitida a partir de 1 hora até 1 hora depois da dosagem. Água foi permitida como desejado em todas outras vezes e foi encorajada hidratação adequada. Alimentos padrões foram fornecidos de forma uniforme aproximadamente 4 e 9 horas depois da dosagem, e um lanche da tarde foi fornecido aproximadamente 12 a 13 horas depois da dosagem.

Tratamentos “alimentados” incluíram indivíduos que tiveram de fazer jejum por toda a noite por pelo menos 10 horas. Trinta (30) minutos antes de seus tempos de dosagem programados eles receberam um café da manhã de alta gordura padrão que foi substancialmente ou completamente consumido em 30 minutos. O café da manhã consistiu em 2 pedaços de torrada amanteigada, 2 ovos fritos, 2 tiras de bacon, 1 porção de batatas assadas, e 240 mL de leite integral. Indivíduos foram solicitador fazer jejum por pelo menos 4 horas após a dosagem. Água (exceto aquela que administrada com dosagem) foi não permitida a partir de 1 hora antes até 1 hora depois da dosagem. Água foi permitida como desejado em todas as outras vezes e foi encorajada hidratação adequada. Alimentos padrões foram fornecidos de forma uniforme aproximadamente 4 e 9 horas depois da dosagem, e um lanche da tarde foi fornecido aproximadamente 12 a 13 horas depois da dosagem.

Sangue foi tirado em tubos evacuados resfriados (5 mL) contendo K₃ EDTA e armazenado em um banho gelado até ser centrifugado (~ 2500 rpm a 4 °C por 10 minutos). Depois da centrifugação, duas alíquotas de plasma (a primeiro contendo pelo menos 1 mL e o segundo contendo o restante) foram removidas e colocadas em frascos de polipropileno apropriadamente rotulado. Em 60 minutos de coleta da amostra, as alíquotas foram armazenadas em um conjunto de congelador a -20 °C ± 10 °C ou menos até ser enviado para análise em um contrator.

5-fluorocitosina foi quantificada a partir do plasma humano extraindo-se uma alíquota da amostra contra calibradores padrões conhecidos. Depois de adicionar um padrão interno marcado com isótopo estável, as amostras foram processadas com precipitação de proteína em acetonitrila. Uma porção de o sobrenadante foi removida e selada em uma placa de 96 poços. As amostras foram analisadas por meio de LC-MS/MS utilizando Cromatografia Líquida de Interação Hidrofílica (FULIC) em tandem com um espectrômetro de massa quadrupolo triplo AB | MDS Sciex API 4000 usando uma fonte APCI. Os íons negativos foram monitorados no modo de monitoramento de reação múltipla (MRM). Resultados são sumarizados na Tabela D (baseado nas tabelas Psubi-s).

Tabela D: Formulações de 5-FC ER vs Ancobon - Parâmetros PK de Dose Única

	Ancobon em jejum	Carbopol em jejum	Carbopol alimentado	Kollidon em jejum	Kollidon alimentado
Cmax (pg/ml)	7,30	2,56	6,14	1,98	3,63
CV	10	29	28	22	15
Tmax(h)	1,63	3,88	5,62	3,58	7,86
CV	0,5	17	31	22	34
AUC (0-inf) gg.h/ml	57,3	28,1	54,3	20,8	47,7
CV	4	28	14	26	25
Tl/2 (h)	4,80	6,55	5,61	5,93	5,55
CV	15	30	23	22	18

Cd (D

Esses dados mostram que, ao passo que a AUC para Ancobon em indivíduos em jejum (57,3 pg.h/mL) é aproximadamente inalterado comparado a indivíduos alimentados com as formulações de Carbopol (54,3 pg.h/mL) e Kollidon (47,7pg.h/mL), o T_max muda de 1,63 horas (Ancobon) para 5,62 horas (Carbopol) e 7, 86 horas (Kollidon).

EXEMPLO 26

Estudos adicionais foram realizados em animais para avaliar terapias de dose única e multidoses. Três cães beagle machos foram usados para o estudo. No Dia 1, os cães receberam 500 mg de 5-fluorocitosina com a formulação mostrada no Exemplo 19, na formulação de referência, Ancobon® como uma dose oral única depois de um jejum por toda a noite. No Dia 5, os cães receberam 500 mg de 5-fluorocitosina na formulação de comprimido de liberação prolongada (5-FC-ER) (mostrada no Exemplo 19) como um dose oral única depois de um jejum por toda a noite. Nos Dias 1 e 5, o jejum continuou por 4 horas depois da dosagem. NO Dia 8, os cães receberam uma dose oral única de 500 mg de 5-FC-ER, e a partir do Dia 9 até o Dia 12, os cães receberam três doses diárias de 500 mg de 5-FC-ER com intervalos de 7 horas entre as três doses. No Dia 14, os cães receberam 500 mg de 5fluorocitosina na formulação de referência, Ancobon®, com uma dose oral única 30 minutos ou mais depois de ser alimentados. Todas as doses foram administradas com aproximadamente 25 mL de água.

Amostras de sangue, 2 mL, foram coletadas da veia jugular por venipuntura direta. Heparina foi usada como o anticoagulante. Depois da centrifugação, o plasma foi armazenado a -70 ± 10 °C até a análise.

No dia 1, as amostras foram coletadas pré-dose e a 0,25, 0,5, 0,75, 1, 2, 4, 8, 12 e 24 horas pós-dose. No dia 5, as amostras foram coletadas pré-dose e a 0,25, 0,5, 1, 2, 4, 8, 12, 24 e 48 horas pós-dose. No dia 8, as amostras foram coletadas pré-dose e a 0,5, 1, 2, 4, 8, 12 e 24 horas. No dias 9 até o 12, as amostras foram coletadas antes de cada dose a 0, 7, 14, 24, 31, 38,

48, 55, 62, 72, 82, 86 horas e a 96 e 120 horas depois da primeira dose no dia 9 (10 e 48 horas depois da última dose no dia 12.

Determinação de 5-fluorocitosina. As concentrações de 5fluorocitosina nas amostras de plasma foram determinadas usando um método de cromatografia líquida de alta pressão (HPLC). A faixa de calibração foi de 1 a 100 pg/mL para um volume de amostra de 0,2 mL. O limite mais baixo de quantificação foi 1 pg/mL.

Parâmetros Farmacocinéticos não compartimentais foram calculados usando WinNonlin 5.0.1. Excel 2003 foi usado para calcular os valores médios e preparar os gráficos. A concentração máxima, C_max, e tempo de concentração máxima, T_max, foram determinados como a concentração de medida máxima e seu tempo associado. As áreas sob a curva de concentração plasmática de 0 a 24 horas, AUCo _a 24, e de 0 hora até a última concentração mensurável (AUCo__t), foram calculadas usando estimação trapezoidal linear. Todos os valores reportados abaixo do limite de quantificação, 1 pg/mL, foram considerados zero para os cálculos. Os valores para a meia vida, ti_/2, foram calculados usando os três a cinco últimos valores não zero. Os valores para AUCo-οο foram estimados usando uma extrapolação de AUCo-t e o inverso de ti/2- Resultados para AUCo-οο e ti/₂ foram considerados confiáveis se o coeficiente de correlação para o ajuste para os dados foi > 0,8.

Os dados da fase de dosagem múltipla (Dias 9 a 12) foram comparados com uma projeção usando os valores médios para a dose única no dia 8 de 500 mg de 5-FC ER depois de uma refeição. Usando Excel, concentrações intermediárias para uma dose única foram interpeladas, e as concentrações depois de 24 horas foram determinadas por extrapolação usando uma meia vida de 4,95 horas (ke = 0,140 horas'¹). As concentrações de dose única estimadas foram desencontradas por 7 horas e somadas para atingir as concentrações projetadas durante a dosagem múltipla.

Um cão tratado com Ancobon® vomitou logo depois da administração oral. Nenhum dos cães tratados com 5-FC XR vomitou. Níveis plasmáticos de 5-fluorocitosina. As tabelas E F mostram as concentrações médias e desvios padrões associados para 5-fluorocitosina depois das doses únicas e durante a dosagem múltipla, respectivamente. As figuras 2 e 3 mostram gráficos lineares e semilog das concentrações médias para cães que recebem doses únicas de 5-fluorocitosina.

Para Ancobon®, os perfis plasmáticos de concentrações de 5fluorocitosina foram similares depois da administração com e sem alimento. Entretanto, para 5-FC ER, administração com alimento aumentou o concentrações plasmáticas de pico substancialmente. Comparado a Ancobon®, as concentrações médias de pico de 5-fluorocitosina ocorreram mais tarde para 5-FC ER, quer administradas com alimento quer no estado de jejum. Com alimento, as concentrações plasmáticas médias de 5-FC ER foram similares às concentrações plasmáticas médias de Ancobon®; entretanto, no estado de jejum, as concentrações plasmáticas médias tenderam a ser mais baixas com 5-FC ER do que com Ancobon® até as 8 horas do tempo da amostragem quando as concentrações médias foram similares para ambas formulações.

Parâmetros Farmacocinéticos para 5-fluorocitosina. A tabela G mostra os valores médios e desvios padrões associados para os Parâmetros Farmacocinéticos para 5-fluorocitosina depois das doses orais únicas.

A presença de alimento teve efeito mínimo ou nenhum nos valores C_max para Ancobon®. A C_max média com alimento foi somente 5 % maior que a C_max média sem alimento. Entretanto, a C_max média para 5-FC ER foi aproximadamente duas vezes tão alta quanto a C_max média sem alimento.

O efeito de alimento nos valores de AUC foi similar para ambas formulações. Com alimento, a AUCo-t média, AUCq _a 24 θ AUCo-οο para Ancobon foram 32 %, 16 % e 33 % maiores, respectivamente, do que os valores correspondentes sem alimento. Para 5-FC ER, os valores de AUCo-t média, AUCo _a24 e AUCo.» com alimento foram 34 %, 34 % e 25 % maiores, respectivamente, do que os valores correspondentes sem alimento.

Com alimento, T_max médio foi 25 % menor para Anconbon® e 20 % maior para 5-FC ER comparado com os valores correspondentes em jejum. Dada o pequeno número de animais e o espaço entre os tempos de amostragem (particularmente depois de 2 horas), os resultados com e sem alimento pode ser considerado similar sem nenhum efeito aparente de alimento no T_max.

Com alimento comparado a jejum, o valor de ti/₂ médio foi maior para Ancobon® e menor para 5-FC ER. Dado o pequeno número de animais e o espaço entre os tempos de amostragem, essas mudanças aparentes em ti/₂ podem ou não refletir em mudanças reais devido ao alimento. Para Ancobon®, com muito pouca mudança na C_max com alimento, o aumento no ti^ aparente é provavelmente responsável pelos aumentos nos valores de AUC. Para 5-FC ER, a diminuição aparente em tj/₂ com alimento deslocou parte da contribuição da AUC pelo grande aumento em C_max com alimento.

Esses resultados indicam que o alimento aumentou a exposição ao máximo, da maneira medida por C_max, para 5-fluorocitosina depois da administração de 5-FC ER, mas teve pouco ou nenhum efeito na C_max depois da administração de Ancobon®. A exposição total, da maneira medida por AUCo-t, aumentou com alimento para aproximadamente l/3^rdtanto para Ancobon® quanto para 5-FC ER.

A tabela H mostra as razões que comparam 5-FC ER com Ancobon para C_max, T_max, AUC₀._t e AUCo-_ro. Essas são medidas de biodisponibilidade relativa das formulações. Para a extensão geral de biodisponibilidade, da maneira medida por AUC₀-t, 5-FC ER foi 88 % de Ancobon® quando ambas formulações foram administradas no estado em jejum, e 5-FC ER foi 85 % de Ancobon® quando ambas formulações foram administradas no estado alimentado. C_max e T_max são medidos da taxa de liberação e absorção de 5-fluorocitosina das formulações. No estado em jejum, C_max para 5-FC ER foi 48 % de C_max para Ancobon®, e T_max ocorreu a 2 ou 4 horas para 5-FC ER e a 2 horas para Ancobon. No estado alimentado, C_max para 5-FC ER foi 88 % de C_max para Ancobon®, e T_max ocorreu a 4 horas para 5-FC ER e a 1 ou 2 horas para Ancobon®. Esses resultados indicaram uma liberação prolongada e absorção de 5-fluorocitosina de 5-FC ER comparado com Ancobon®, particularmente no estado alimentado.

As concentrações médias para 5-fluorocitosina no dia 5 (5-FC ER administrada depois do alimento) foram usadas para projetar as concentrações que podem ser esperadas com a programação de dosagem TID usada nos dias 9 até 12. Os resultados da projeção são mostrados na figura 5. Houve uma excelente correlação entre as concentrações observadas e a concentrações projetadas para as amostras tiradas antes das primeiras doses administradas no dias 9 até 12. As correlações foram também muito boas para os valores intra-dia mínimos pré-dose no dia 9 e as amostras pós-dosagem tiradas nos dias 13 e 14 (96 e 120 horas). Intra-dia nos dias 10, 11 e 12, as concentrações medidas tenderam a ser mais baixas do que as concentrações projetadas. Uma vez que o alimento afeta a liberação de 5-fluorocitosina de 5FC ER é possível que variações na quantidade e horário de alimento com relação à dosagem podem ser responsáveis pelas concentrações medidas mais baixas. Além de tudo, as concentrações projetadas estiveram em concentrações medidas bastante boas durante a dosagem de TID.

Alimento aumentou a exposição máxima, medida por C_max, para 5-fluorocitosina depois da administração de 5-FC ER, mas teve pouco ou nenhum efeito na C_max depois da administração de Ancobon. A exposição total, da maneira medida por AUC₀.t, aumentou com alimento por aproximadamente l/3^rd tanto para Ancobon quanto para 5-FC ER. Para biodisponibilidade relativa, da maneira medida por AUCo-t, 5-FC ER foi 88 % de Ancobon quando ambas formulações foram administradas no estado em jejum, e 5-FC ER foi 85 % de Ancobon quando ambas formulações foram administradas no estado alimentado. Houve uma liberação prolongada e absorção de 5-fluorocitosina de 5-FC ER comparado com Ancobon, particularmente no estado alimentado. Além de tudo, as concentrações 5 projetadas de uma dose única estiveram em concentrações medidas bastante boas durante a dosagem de TID.

g Η -Η Η Ή +| -H ~ -e oo o, „ _

Tabela E. Concentrações plasmáticas médias de 5-fluorocitosina para Cães machos ____________________Depois de Doses únicas de 500 mg__________________ _____________________Concentrações Plasmáticas (gg/mL)_______________________________

E Cá

X u

-Η -H

Tabela F. Concentrações Plasmáticas Médias de 5-flurocitosina para Cães Machos Que

Recebem 500 mg de 5-FC XR TID

Tabela G. Parâmetros Farmacocinéticos Médios para 5-fluorocitosina para Cães Machos

cn

V c

N tá

O tá

EXEMPLO 27

Tratamento multiforme de glioblastoma. Um vetor retroviral recombinante compreendendo um cassete IRES ligado a uma sequência de codificação de citosina desaminase pode ser injetado transcranialmente no tumor do indivíduo. O cirurgião usará uma técnica estereostática (tanto a base de quadro quanto neuronavegacional) para identificar uma área de tumor correspondente a uma região de melhoria com relação à varredura intensificada com gadolínio. Um furo de broca será criado e uma agulha Nashold será inserida no tumor. Uma seção congelada será obtida para confirmar que a agulha assentou no tumor e então 1 mL do vetor retroviral será injetado abaixo do furo da agulha. Depois de 3 minutos a agulha será lentamente removida e o local de entrada fechado. Em virtude de o vetor ser um vírus competente de replicação, existe uma necessidade limitada de fazer injeções múltiplas no cérebro. Cada paciente receberá apenas uma injeção única, embora diferentes locais de tumor e câncer possam ser injetados tanto temporalmente quanto espacialmente.

5-FC é geralmente bem tolerada em pacientes com função renal normal. A dose padrão de 5-FC usada para tratar infecções fungicas é 50 a 150 mg/kg/dia administrada em 4 doses divididas. Em estudos em animal, 5-FC foi dosada a 500 mg/kg intraperitonealmente uma vez diariamente. Esta dose é equivalente em uma base por metro quadrado para aproximadamente 50 mg/kg em humanos. Entretanto, em virtude de muitos estudos foram documentados a variabilidade de concentrações de flucitosina sérica após a dosagem oral, a faixa média dose de 100 mg/kg/dia será escolhida como a dose de partida ou dose de aumento, e determinação da concentração plasmática de pico será usada para otimizar a dosagem de 5-FC. Após uma dosagem inicial para obter a concentração plasmática desejada de 5-FC uma formulação de liberação prolongada pode ser administrada (tanto formas de dosagem de liberação modificada monolíticas (MMR) encapsulado com polímero, encapsulado com SiO2 quanto encapsulado alginato). A fórmula de liberação prolongada pode compreender qualquer das formulações anteriores. O propósito da formulação de liberação prolongada é a assistir na aquiescência do paciente e efeitos colaterais adversos tipicamente resultantes de grande regime de dosagem com padrão Ancobon®.

Doses pode ser ajustadas com base no monitoramento de níveis flucitosina sérica de pico tanto durante quanto antes da manutenção do medicamento a longo prazo.

Uma dose conterá ~10⁶ TU/mL (isto é, unidade de transformação (TU) refere-se a inúmeros genomas retrovirais presentes em uma célula transfectada em um teste de titulação de vetor padrão). Após a primeira dose de 5-FC, a concentração plasmática de 5-FC de pico será determinada e a dose de 5-FC ajustada para manter a concentração de pico na faixa de 50 a 80 pg/mL. Se tolerada, a dosagem de liberação prolongada é repetida a uma administração de 4 ou menos vezes por dia por 7 dias. A resposta do tumor é avaliada usando o critério Macdonald. Um algorítimo de escalação de dose padrão será seguido. Três pacientes serão avaliados a cada nível de dose (10,10,10, TU/mL). Não haverá nenhuma escalação de dose intra-paciente.

5-FC será administrada entre cerca de 1 a 250 mg/kg/dia (por exemplo, cerca de 1 a 200 mg/kg, cerca de 1 a 175 mg/kg, cerca de 1 a 150 mg/kg, ou cerca de 1 a 100 mg/kg por dia) em 1 ou mais doses divididas. Concentração sérica de pico pode ser medida tirando sangue 1 a 2 horas após uma dose de flucitosina. A amostra será dividida e metade corrida no sítio para fornecer informação imediata com relação a dose, e metade enviada para o laboratório central para correlação posterior. A concentração de flucitosina de pico será entre cerca de 50 e 80 pg/mL.

Inúmeras modalidades da invenção foram descritas.

Entretanto, será entendido que várias modificações podem ser feitas sem fugir do espírito e escopo da invenção. Dessa maneira, outras modalidades estão no escopo das reivindicações seguintes.

Claims

REIVINDICAÇÕES

1. Composição farmacêutica oral em comprimido monolítico gastrorretentivo, caracterizada pelo fato de que compreende 5-FC, pelo menos um polímero de formação de matriz hidrofílica de 5 a 40 porcento em peso selecionado de carbopol, acetato de polivinila e polímero a base de povidona, hidroxipropil celulose (HPC), hidroximetil celulose (HPMC), e óxido de polietileno (PoliOx); pelo menos um diluente de 10 a 40 porcento em peso e pelo menos um ligante de 0,5 a 30 porcento em peso.
2. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que os polímeros hidrofílicos constituem cerca de 10 porcento em peso a cerca de 40 porcento em peso da composição e 5-FC está presente em uma quantidade de cerca de 100 mg a cerca de 2.000 mg.
3. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que a composição exibe taxa de liberação de 5-FC por dissolução in vitro maior que 80% em 4 a 12 horas da maneira medida pelo aparelho de dissolução USP Tipo II (método de pá) a 75 rpm em água ou tampão fosfato a 37 °C usando método USP de 5-FC com detecção UV a 275285 nm.
4. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que 5-FC está presente na composição farmacêutica em uma quantidade de cerca de 500 mg.
5. Uso de uma composição farmacêutica como definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizado pelo fato de ser para a preparação de um medicamento para tratar uma infecção fúngica.
6. Uso de uma composição farmacêutica como definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 4 junto com um polipeptídeo compreendendo atividade de citosina desaminase, caracterizado pelo fato de ser para a preparação de um medicamento para tratar câncer em um mamífero.

Petição 870190102169, de 11/10/2019, pág. 8/11
7. Uso de uma composição farmacêutica como definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 4 junto com um polinucleotídeo que codifica uma citosina desaminase, caracterizado pelo fato de ser para a preparação de um medicamento para tratar câncer em um mamífero.
8. Uso de uma composição como definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizado pelo fato de ser para a preparação de um medicamento para tratar câncer em um mamífero tendo previamente recebido terapia gênica de citosina desaminase.
9. Uso de acordo com a reivindicação 7, caracterizado pelo fato de que o polinucleotídeo que codifica uma citosina desaminase é dispensado com um vetor viral.
10. Uso de acordo com a reivindicação 7, caracterizado pelo fato de que o polinucleotídeo que codifica uma citosina desaminase é dispensado com um vetor não viral.
11. Uso de acordo com a reivindicação 7, caracterizado pelo fato de que a infecção fúngica é uma infecção por um fungo selecionado do grupo que consiste em Candida spp., Criptococcus spp., Sporothrix spp., Aspergillus spp., Cladosporium spp., Exophila spp. e Phialophora spp.
12. Uso de um vetor de expressão compreendendo uma citosina desaminase que é capaz de converter 5-fluorocitosina em 5fluoruracila em células do câncer e de uma composição como definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizado pelo fato de ser para a preparação de um medicamento para tratar câncer.
13. Uso de acordo com a reivindicação 8, caracterizado pelo fato de que o câncer compreende um sólido tumor.
14. Uso de acordo com a reivindicação 12 ou 13, caracterizado pelo fato de que o vetor de expressão é um vetor retroviral.
15. Uso de acordo com a reivindicação 14, caracterizado pelo fato de que o vetor retroviral é um vetor retroviral competente de replicação.

Petição 870190102169, de 11/10/2019, pág. 9/11
16. Uso de acordo com a reivindicação 14, caracterizado pelo fato de que o vetor retroviral é um vetor retroviral competente de replicação recombinante.
17. Uso de acordo com a reivindicação 16, caracterizado pelo 5 fato de que o vetor retroviral competente de replicação compreende um vetor oncoretroviral.
18. Uso de acordo com a reivindicação 16 ou 17, caracterizado pelo fato de que o vetor retroviral competente de replicação compreende um local de entrada ribossomal interno (IRES) 5' para o polinucleotídeo que

10 codifica uma citosina desaminase.
19. Uso de acordo com a reivindicação 18, caracterizado pelo fato de que o polinucleotídeo que codifica uma citosina desaminase é 3' para um polinucleotídeo ENV.
20. Uso de acordo com a reivindicação 14, caracterizado pelo 15 fato de que o vetor viral é um vetor adenoviral.