CZ292192B6

CZ292192B6 - Jednotková dávka farmaceutického prostředku, který je inhibitorem proteinázy

Info

Publication number: CZ292192B6
Application number: CZ19973803A
Authority: CZ
Inventors: Carole Anne Bailey; Josephine Christine Ferdinando; Navnit Shah
Original assignee: F. Hoffmann-La Roche Ag
Priority date: 1995-06-06
Filing date: 1996-06-04
Publication date: 2003-08-13
Also published as: AU709796B2; OA10546A; BG102106A; TR199701541T1; EP0831826A1; SK162797A3; JPH10507202A; AU6300496A; CA2224125C; CY2373B1; CN1092960C; IS2661B; ES2182996T3; JP3238412B2; NZ311646A; CA2224125A1; ATE226075T1; PL184820B1; NO975665L; IL122353A0

Abstract

Jednotkov d vka farmaceutick ho prost°edku, kter² je inhibitorem protein zy, obsahuj c (a) terapeuticky · inn mno stv N-terc-butyldekahydro-2-[2(R)-hydroxy-4-fenyl-3(S)-[[N- (2-chinolylkarbonyl)-L-asparaginyl]amino]butyl]-(4aS,8aS)isochinolin-3(S)-karboxamidu nebo jeho farmaceuticky p°ijateln²ch sol nebo ester , v etn jejich farmaceuticky p°ijateln²ch sol a (b) farmaceuticky p°ijateln² nosi obsahuj c monoglycerid mastn kyseliny se st°edn m °et zcem s 8 a 10 atomy uhl ku, p°i em je monoglycerid obsa en v mno stv posta uj c m k rozpuÜt n inhibitoru protein zy.\

Description

Jednotková dávka farmaceutického prostředku, který je inhibitorem proteinázy

Oblast techniky

Vynález se týká farmaceutického prostředku obsahujícího inhibitor proteinázy a monoglycerid.

Dosavadní stav techniky

V lékařství je dobře známo, že velká řada nemocí je způsobována retroviiy.

Jak je v současné době známo, je AIDS onemocnění imunitního systému způsobované retrovirem HIV (Human Immunodefíciency Virus). Podle zjištění světové zdravotnické organizace postihuje toto onemocnění přibližně 10 milionů lidí a dále se šíří a v téměř všech případech končí smrtí pacienta.

Retroviry HIV-1 a HTV-2 byly identifikovány jako příčina onemocnění a charakterizovány molekulární biologií.

Retrovirální proteáza je proteolytický enzym mající aspartátový zbytek v aktivním středu, je považována za aspartátovou proteázu a podílí se na dozrávání nových infekčních virů v napadených buňkách v reproduktivním cyklu řady retrovirů.

Například HIV-1 a HTV-2 mají vždy každý ve svém genomu oblast, která kóduje „gag-proteázu“. Tato „gag-proteáza“ zodpovídá za korektní proteolytické štěpení prekurzorových proteinů, jež se vytvářejí z genomových oblastí kódujících skupinu specifických antigenů („Group Specific Antigenes“, gag). V průběhu štěpení se uvolňují strukturální proteiny virového jádra. „Gag proteáza“ samotná je složkou prekurozorového proteinu zakódovaného pol-genomovou oblastí HTV-1 a HTV-2, přičemž tento protein také obsahuje oblasti pro „reversní transkriptázu“ a „intregrázu“ a má se zato, že je štěpen autoproteolýzou.

„Gag-proteáza“ štěpí hlavní jádrový protein p24 HTV-1 a HTV-2 přednostně N-terminálních prolinových zbytků, například dvojmocných zbytků Phe-Pro nebo Tyr-Pro. Je to proteáza mající katalyticky aktivní aspartátový zbytek v aktivním středu, tak zvaná aspartátová proteáza.

Zde používaný termín proteinázový inhibitor se vztahuje na ty sloučeniny, které inhibují aspartátové proteázy virového původu, jež jsou užitečné v profylaxi a léčení virálních infekcí způsobovaných retroviry,m jako jsou HIV u savců lidí nebo jiných živočichů. Detaily konstrukce takových proteinázových inhibitorů jsou popsány v literatuře (například Roberts N.A. a kol., Science 248, str. 358, 20. dubna 1990; Overton H. A. a kol., Virology 179, str. 508, 1990; Tucker T. J. a kol., J. Med. Chem. 35, str. 2525, 1992; a Phylip L. H. a kol. FEBS Letters 314, str. 449,1992).

Vzhledem k hydrofobnímu a/nebo lipofilnímu charakteru proteinázových inhibitorů mají jejich farmaceutické formulace s konvenčními pevnými nebo tekutými excipienty sklon k nevýhodám. Například proteinový inhibitor nemůže být uspokojivě absorbován. Mezi inherentní činitele o nichž je známo, že ovlivňují adsorpci, patří způsob výroby nebo způsob slučování; velikost částic a krystalická nebo polymorfiií forma drogové substance a ředidla nebo excipienty používané k formulování dávkové formy, včetně nosičů, plnidel, vazebních a desintegračních činidel, mazadel, povlaků, rozpouštědel suspendačních činidel a barviv.

Požadavkem léčebné účinnosti in vivo je dosahování dobré biologické dostupnosti, například dobré absorpční kapacity a/nebo vysoká hladina v krvi, také v případě enterálního podávání, jako je orální podávání, dosažení dostatečně vysokých koncentrací v infikovaných buňkách a/nebo dobré rozptýlení v ošetřovaném jedinci.

-1 CZ 292192 B6

Dalším požadavkem je, aby jednotková dávkovači forma měla dobrou stálost nebo životnost, aby mohla být uspokojivě skladována (například bez zmrazování), aby při teplotě místnosti (přibližně 20 °C) dlouhodobě (například 2 roky).

I když je mnoho známých návrhů jak čelit problémům tohoto druhu, zjistilo se, že mnohé z těchto návrhů jsou nevhodné v oboru inhibitorů proteinázy. S překvapením se však zjistilo, že některé třídy glyceridů, používané jako nosiče, pomáhají řešit uvedené požadavky. Zejména jsou schopné dodat lepší absorpci a tím usnadnit biologickou dostupnost a dobrou stálost a dlouhodobou 10 životnost.

Podstata vynálezu

Jednotková dávka farmaceutického prostředku spočívá podle vynálezu v tom, že obsahuje (a) terapeuticky účinné množství N-terc-butyldekahydro- 2-[2(R)-hydro-4—feny 1-3 (S)-[[-(2chionolylkarbonyl)-L-asparaginyl]amino]butyl]-(4aS,8aS)isochinolin-3(S)-karboxamidu nebo jeho farmaceuticky přijatelné soli nebo estery včetně jejich farmaceuticky přijatelných solí a (b) farmaceuticky přijatelný nosič obsahující monoglycerid mastné kyseliny se středním řetězcem s 8 až 10 atomy uhlíku, přičemž je monoglycerid obsažen v množství postačujícím k rozpuštění inhibitoru proteinázy.

Poměr monoglyceridu sloučeniny (b) ke sloučenině (a) je nejméně 1,5, výhodněji přibližně 2, ještě výhodněji přibližně 2,5 až přibližně 3,5 a nejvýhodněji alespoň 3. Složka (b) má hodnotu pH přibližně 2,5, výhodněji přibližně < 0,26 a ještě výhodněji < přibližně 0,1 a nejvýhodněji přibližně < 0,04.

Mastné kyseliny se středním řetězcem mohou být také částečně ethoxylované polyethylenglykolem s molekulovou hmotností přibližně 300 až 500, což je ekvivalent přibližně 6 až 8 mol ethylenoxidu.

Začlenit lze také směsi monoglyceridu mastných kyselin se středním řetězcem s 8 až 10 atomy 35 uhlíku a částečně ethoxylované mastné kyseliny se středním řetězcem.

Farmaceuticky přijatelný nosič může dále obsahovat polyvinylpyrrolidon.

Vynález se tedy týká farmaceutického prostředku, v jednotkové dávce shora charakterizovaného. 40 S výhodou je poměr monoglyceridu (b) ke složce (a) nejméně přibližně 1,5. Zkušený pracovník v oboru je schopen určit množství monoglyceridu potřebné k rozpouštění inhibitoru proteinázy podle vynálezu běžnými technikami.

Inhibitor proteinázy, N-terc-butyldekahydro-2-[2(2(R)-hydroxy-4-fenyl-3 (S)-[[N-(2-chino45 lylkarbonyl)-L-asparaginyl]amino]butyl]-{4aS,8aS)isochmolin-3(S)-karboxamid, jeho farmaceuticky přijatelné soli nebo estery, je popsáno v americkém patentovém spise US 5 196 438.

Jak se zde předpokládá, představuje farmaceuticky přijatelný nosič alespoň jeden monoglycerid mastné kyseliny se středním řetězcem a jeho směsi. Kromě toho může farmaceuticky přijatelný 50 nosič obsahovat di- a tri-glyceridy mastné kyseliny se středním řetězcem a jeho směsi. Mono-, di- a triglyceridy mohou být také částečně ethoxylované. Výhodněji se glyceridy mastné kyseliny se středním řetězcem volí ze souboru zahrnujícího monoglycerid mastných kyselin se středním řetězcem s 8 až 10 atomy uhlíku a polyethylenglykol mastných kyselin se středním řetězcem s 8 až 10 atomy uhlíku. Označením „mastné kyseliny se středním řetězcem“ se míní

-2CZ 292192 B6 mastné kyseliny mající 8 až 10 atomů uhlíku. Příklady mastných kyselin se středním řetězcem jsou kyselina kapronová (s 8 atomy uhlíku) a kapronová (s 10 atomy uhlíku).

Glyceridy mají obecný vzorec:

CH2O-R í

CH2O-R' (i)

I

CHzO-R kde znamená R, R'a R” atom vodíku nebo skupinu

-C(OHCH₂)_mCH₃, kde znamená m číslo 4 až 10 včetně, přičemž alespoň jeden za symbolů R, R'a R” znamená skupinu -C(O)-(CH₂)_mCH3. V případě, kde alespoň jeden ze symbolů R, R'a R znamená skupinu -C(O)-(CH2)_raCH3, představuje vzorec (1) monoglycerid. V případě, kdy kterékoli dva symboly R, R'a R znamenají skupinu -(3(0)-(0¾)^¾. představuje vzorec (1) diglycerid. V případě, kdy všechny symboly R, R'a R” znamenají -C(O)-(CH2)_mCH3, představuje vzorec (1) triglycerid.

Výhodný glycerid je směsí monoglyceridu a diglyceridu nasycených mastných kyselin s 8 až 10 atomy uhlíku (například kyseliny kaprylové a kaprinové) obchodně dostupné pod obchodním názvem CAPMUL MCM nebo CAPMUL MCM90, z nichž každý obsahuje minimálně 70 % monoglyceridů alfa, jak bylo stanoveno společností Američan Oil Chemisťs Society (AOCS) zkušební metodou Cd 11-57. CAPMUL MCM90 obvykle obsahuje přibližně 83 až 95 % monoglyceridů. CAPMUL MCM má maximální číslo kyselosti 2,5.

Čísla kyselosti, zde zaváděná, jsou stanovena AOCS zkušební metodou Cd3a-63, přičemž číslo kyselosti znamená počet miligramů hydroxidu draselného, potřebného k neutralizování volné kyseliny v 1,0 látky (USP ΧΧΠ Chemical Tests/Fats and Fixed Oils (401).

CAPMUL MCM je obchodním produktem společnosti Capital City Products Co, Columbus, Ohio, nebo Abertech, lne. (Karlshamn), Krshamn, Švédsko. S výhodou má tento materiál číslo kyselosti přibližně 0,5. Výhodnějším glyceridem by byl CAPMUL MCM, pokud by měl číslo kyselosti přibližně 0,26, dále výhodně 0,1 a nejvýhodněji 0,04. Jiný podobný materiál je obchodním produktem INWITTOR 988 (společnosti Híils, Německo) (glycerol-mono-di-kaprylát), který obsahuje minimálně 45 % monoglyceridů zjištěných plynovou chromatografií. INWITTOR 988 má typické složení přibližně 50 % monoglyceridů, přibližně 40 % diglyceridů a přibližně 6% triglyceridů (všechna procenta jsou míněna hmotnostně a jsou stanovena plynovou chromatografií). INWITTOR 988 má maximální hodnotu kyselosti přibližně 2 (v jednotkách mg KOH7g).

Částečně ethoxylovaný glycerid je s výhodou tekutina, která je směsí monoglyceridu, diglyceridu a triglyceridů, přičemž volná hydroxylová skupina je ethoxylovaná ethylenglykolem nebo ethylenoxidem. Zvláště ethoxylovaný glyceridem je polyethylenglykol 300, což je glyceridu mastné kyseliny se středním řetězcem s 8 až 10 atomy uhlíku, přičemž polyethylenglykol má střední molekulovou hmotnost přibližně 300 až 500 (ekvivalent přibližně 6 až 8 mol ethylenoxidu). Je to obchodní produkt SOFTIGEN 767 společnosti Hůls AG nebo Híils Amerika, Piscataway, New Jersey. SOFTIGEN 767 je směs částečných glyceridů přírodních, nasycených, stejně očíslovaných rostlinných mastných kyselin s délkou řetězce 8 až 10 atomů uhlíku (více než

-3CZ 292192 B6 % mastných kyselin s 8 až 10 atomy uhlíku a méně než 2 % mastných kyselin s 6 až 12 atomy uhlíku a má tuto strukturu:

R-CH₂-CH[(O-CH₂-CH₂)pOH]-CH₂-R

R-CH₂-CH[(O-CH₂-CH₂)pOH]-CH2-(O-CH₂-CH₂)pOH, kde znamená R acylový podíl mastné kyseliny s 8 až 10 atomy uhlíku a p číslo 3 nebo 4.

SOFTGEN 767 je též znám CFTA (Cosmetics, Toilery and Fragrance Association) jménem

PEG-6 kapiylové/kaprinové glyceridy. Částečně ethoxylovaný glycerid lze také získat pod jménem LABRASOL (nasycené polyglykolyzované glyceridy) s 8 až 10 atomy uhlíku, CFTA jménem PEG-8 kaprylové/kaprinové glyceridy společnosti Gattefossé Corporation, Westwood, New Jersey.

Prostředky rovněž uvažované podle vynálezu zahrnují formulace s ohledem na glyceridy mastných kyselin se středním řetězcem, jsou přibližně sto procentními monoglyceridy nasycených kyselin s 8 až 10 atomy uhlíku (například CAPMUL MCM) a 0% obsahem polyethylenglykolu 300-kaprylového/kaprinového glyceridu (například SOFTIGEN 767) až po přibližně stoprocentní polyethylenglykolu 300-kaprylový/kaprinový glyceridu (například SOFTIGEN 767) 20 a po přibližně 0% obsah monoglyceridu nasycených mastných kyselin s 8 až 10 atomy uhlíku (například CAPMUL MCM).

Prostředky mohou také zahrnovat PEG 400 a PEG 8000 (polyethylenglykoly s molekulovou hmotností 400 a 8000 a polyoxy(40) ricinový olej (což je ricinový olej s přibližně 40 až 45 mol 25 ethylenoxidu; také známý jako PEG-40 hydrogenovaný ricinový olej (CFTA Name), dosažitelný jako Cremphor RH-40 společnosti BASF). Cemophor RH-40 má následující typické fyzikální vlastnosti: hodnotu kyselosti 1,0, hydroxylovou hodnotu přibližně 60 až 80 a číslo zmýdelnění přibližně 50 až 60. Určité jiné prostředky mohou obsahovat také polyoxyethylenpolyoxypropylenový kopolymer (blokový polymer ethylenoxidu a propylenoxidu).

Z různých forem jednotkového dávkování, jež mohou připadat v úvahu, jsou to například tvrdé želatinové kapsle, měkké želatinové kapsle, tablety, kaplety, enterické povlečené tvrdé želatinové kaple, enterické povlečené měkké želatinové kaple, minikapsle, dražé, roztoky, emulse, suspense, sirupy, spreje a čípky, měkké želatinové kapsle, enterické povlečené měkké želatinové kapsle, 35 přičemž minikapsle a čípky jsou obzvlášť výhodnými formami jednotkových dávek.

Množství inhibitoru proteinázy pro formu jednotkových dávek, s výjimkou minikapslí, činí přibližně 10 mg až přibližně 3 000 mg, s výhodou 25 mg až 1 800 mg, výhodněji 25 mg až 600 mg, ještě výhodněji přibližně 50 mg přibližně 400 mg a ještě výhodněji přibližně 120 mg až 40 přibližně 300 mg a nej výhodněji přibližně 200 mg. U minikapslí je množství inhibitoru proteinázy přibližně 0,5 až přibližně 2 mg (což odpovídá náplňovému objemu přibližně 5 až přibližně 10 mg tekutiny). Alternativně je průměr minikapslí přibližně 0,5 mm až přibližně 5 mm, s výhodou přibližně 1 až přibližně 2 mm.

Při výrobě tablet, povlečených tablet, dražé a tvrdých želatinových kapslí se mohou inhibitory proteinázy zpracovávat s farmaceuticky inertními, anorganickými nebo organickými excipienty. Laktosa, kukuřičný škrob nebo jejich deriváty, mastek, kyselina stearová nebo její soli se mohou aplikovat například jako takové excipienty pro tablety, dražé a tvrdé želatinové kapsle.

Vhodnými excipienty pro měkké želatinové kapsle jsou například rostlinné oleje, vosky, tuky, polopevné a tekuté polyoly.

Vhodnými excipienty pro výrobu roztoků a sirupů jsou například voda, polyoly, sacharosa, invertní cukr a glukosa.

-4CZ 292192 B6

Vhodnými excipienty pro vstřikovatelné roztoky jsou například voda, alkoholy, polyoly, glycerol a rostlinné oleje.

Vhodnými excipienty pro čípky jsou například přírodní nebo vytvrzované oleje, vosky, tuky, polotekuté nebo tekuté polyoly.

Kromě toho může jednotková dávka farmaceutických prostředků obsahovat konverzační činidla, rozpouštědla, látky zvyšující viskozitu, stabilizační činidla, smáčedla, emulgační činidla, sladidla, barviva, ochucovací činidla, soli k měnění osmotického tlaku, pufry, povlaky a antioxidanty. Výhodným antioxidentem je dl-alfa tokoferol, který je obsažen v prostředku podle vynálezu ve hmotnostním množství přibližně 0,01 až přibližně 0,5 %, s výhodou přibližně 0,1 až přibližně 0,5 %. Jednotková dávka farmaceutických prostředků může obsahovat ještě další terapeuticky hodnotné látky.

Prostředky, obsahující přibližně 120 až přibližně 300 mg a s výhodou přibližně 200 mg inhibitoru proteázy mohou mít následující složení: přičemž jsou procenta míněna hmotnostně a vztahují se na prostředek jako celek a inhibitorem proteinázy se vždy míní N-terc-butyldekahydro-2-[2(R)hydroxy-4-fenyl-3(S)-[[N-(2-chinolylkarbonyl)-L-asparaginyl]amino]butyl]-4—(4aS,8aS)isochinolin-3(S)-karboxamid nebo jeho farmaceuticky přijatelné soli nebo estery včetně solí esterů:

Monoglycerid mastné kyseliny s 8 až 10 atomy uhlíku (například CAPMUL MCM nebo INWITTOR 988) dl-alfa-tokoferol polyvinylpyrrolidon

PEG 400

Polyoxy (40)ricinový olej

PEG 8000 až 80 % 0,01 až 0,5 % 0až30% 0až30% až 12 % až 5 %

Polyglykolyzované glyceridy mastné kyseliny s 8 až 10 atomy uhlíku, (např. LABRASOL nebo SOFTIGEN 767) 0 až 10 % kopolymer polyoxyethylenpolyoxypropylenu 0 až 25 %

Prostředky, obsahujících přibližně 200 mg inhibitoru proteinázy, obsahují přibližně 40 až 80 % monoglyceridů mastných kyselin s 8 až 10 atomy uhlíku, přibližně 0,5 % dl-a-tokoferolu, přibližně 0 až 28 % PEG—400, přibližně 0 až 10 % Polyoxyl(40)ricinového oleje a přibližně 0 až 30 % polyvinylpyrrolidonu. Dále jsou výhodné prostředky obsahující vždy přibližně 200 mg inhibitoru proteinázy, (a) přibližně 0,5 % dl-a-tokoferolu a přibližně 79,5 % monoglyceridů mastných kyselin s 8 až 10 atom uhlíku, a (b) přibližně 0,5 % dl-a-tokoferolu, přibližně 40 až 76,5 % monoglkyceridů mastných kyselin s 8 až 10 atomy uhlíku, přibližně 0 až 27,5 % polyoxy(40)ricinového oleje, a přibližně 20 až 30 % polyvinylpyrrolidonu. Výhodnější prostředky mají toto složení (uváděné jako mg/kapsli):

Tabulka A

Materiál A23 A24 A25

Inhibitor proteázy	200	200	200
dl-a-tokoferol	5	5	5
CAPMUL MCM	795	765	400
PEG 400			275
Polyoxyl(40)ricinový olej			100
Polyvinylpyrrolidon		30	20
Celkem	1000	1000	1000

-5CZ 292192 B6

Následující příklady popisují práce provedené za použití N-terc.-butyldekahydro-2-[2(R)hydroxy-4-fenyl-3(S)-[[N-(2-chinolylkarbonyl)-L-asparaginyl]amino]butyl]-(4aS,8aS)isochinolin-3(S)-karboxamidu, dále uváděného jako „sloučenina A“ a jeho farmaceuticky přijatelných solí jakožto vzorku inhibitoru proteinázy. Tyto příklady vynález toliko objasňují, 5 nij ak však neomezuj í.

Příklady provedení vynálezu

Příklad 1

Různé níže testované formulace a jiné, navrhované tímto vynálezem se provádějí následujícím způsobem. Jako příklad slouží formulace A-63:

Sloučenina A se prošije k odstranění hrubšího materiálu.

Do vhodné nádoby se umístí v tekuté formě 769,0 mg CAPMULMCM a 1,0 mg dl-a-tokoferolu a za stálého míchání se zahřeje na teplotu 55 až 60 °C. Do nádoby se přidá 30,0 mg 20 polyvinylpyrrolidonu K30 (PVP K30) s průměrnou molekulovou hmotností přibližně 30 000) a míchá se až do rozpuštění. Do tekutiny se pomalu a opatrně vnese za intenzivního míchání 200,0 mg přesáté sloučeniny A při teplotě udržování na 55 až 60 °C.

Když se sloučenina A úplně rozpustí, odstaví se nádoba ze zdroje ohřevu, míchání se zastaví 25 a výsledná tekutina se nechá vychladnout na teplotu místnosti (přibližně 20 °C). Vychladlá tekutina se pak plní do měkkých želatinových kapslí.

Teplota ohřevu na alespoň 55 °C je volena k urychlení rozpuštění sloučeniny A v glyceridu.

Příklad 2

Formulace podle vynálezu A-23, A-24, A-59, a A-63 jsou sestaveny v tabulce I. Formulace A-23, A-24 a A-59 se připraví obdobně jako podle příkladu 1.

Tabulka I

Materiál	mg/kapsle
	A-23	Formulace	A-63
A-24	A-59
Sloučenina A	200,0	200,0	200,0	200,0
CAPMULMCM90	795,0	765,0	599,2	769,0
Dl-H-tokoferol	5,0	5,0	0,8	1,0
PVPK30		30,0		30,0
Celkem	1000,0	1000,0	1000,0	1000,0

Příklad 3

S dobrovolníky se provedla studie s použitím sloučeniny A-63 podle vynálezu v porovnání se sloučeninou nespadající do rozsahu vynálezu. Formulace A-14 (sloučenina A-mesylátová sůl, 45 235,337 mg [ekvivalent 200,000 mg sloučeniny A] v bezvodé laktose jako nosiči, 63,300 mg;

mikrokrystalická celulosy (Avicel PH 102), 60,000 mg; natriumškrobový glykolát, 16,000 mg;

-6CZ 292192 B6

Povidon (polyvinylpyrrolidon) K30, 8,000 mg; a stearát hořečnatý 4,000 mg (čištěná voda použitá v procesu 92,590 mg) v kapsli z tvrdé želatiny k posouzení biologické dostupnosti.

V každé studii bylo 12 mužských dobrovolníků a každému se po jídle podle ekvivalent 600 mg sloučeniny A: tedy 3 tvrdé želatinové kapsle, každá s 200 mg formulace A-14 a 3 kapsle po 200 mg měkké želatinové kapsle formulace A-63. Hmotnost 200 mg znamená, že každá jak kapsle měkká, tak tvrdá obsahuje 200 mg sloučeniny A.

Po čtrnáctidenní periodě dostal každý produkt subjekt jedinou dávku prostředku A-63 podle vynálezu nebo prostředku A-14 nespadajícího do rozsahu vynálezu v průběhu 5 minut při standardním jídle (každý (1) k snídani: misku korfleiků se 100 ml plnotučného mléka, 2 plátky slaniny, dvě smažená vejce, dva plátky toustů s máslem 100 ml oranžády a 150 ml bezkofeinové kávy nebo čaje nebo (2) k obědu: 200 ml polévky, sendviče ze 4 kousků chleba, čokoládovou sušenku, pomeranč nebo jablko a 150 ml bezkofeinové kávy nebo čaje).

Vzorky krve se odebraly bezprostředně před dávkou a při 0,50 1, 1,5, 2, 2,5,3, 3,5,4,4,5, 5, 6, 7, 8, 10, 12, 16, 20 a 24 hodinách po dávce. Po minimálně šestidenní periodě vymývání dostane každý dobrovolník druhou dávku každého příslušného prostředku po standardním jídle a vzorky krve se odeberou jak shora uvedeno. Po další minimálně 6-denní vymývací periodě dostal každý dobrovolník další dávku každé příslušného prostředku po standardním jídle a vzorky krve se odebraly jak shora uvedeno.

Plasmové vzorky sloučeniny A v biologické kapalině se analyzují přípravou vzorků pevné fáze a vysokovýkonnou kapalinovou chromatografii s ultrafialovým detektorem při: 238 nm (HPLC/UV) jak dále popsáno.

K extrahování sloučeniny A ze vzorků plasmy se použije CgAdvenced Automated Sample Processor (AASP)- Kvantifikační meze byly 0,5 ng/ml s 1,0 ml plasmy s přesností 0,5 % a správností 99,1 %.

Vzorky krve z žíly (10 ml) se naberou do skleněných zkumavek Becton Dickinson Vacutainers nebo do polypropylenových nádobek Sarstadt obsahujících lithiumheparin jako antikoagulant a uloží se k ledu. Vzorky se odstředí v 1 hodině při 1500 g a plasma se převede do 5 ml polystyrénových lahviček se šroubovým uzávěrem a uloží se ve zmrazeném stavu při teplotě -20 °C. Před přenesením do analytické laboratoře se vzorky plasmy od HTV-pozitivních pacientů inaktivují tepelným zpracováním ve vodní lázni dvě hodiny při teplotě 56 °C (± 1 °C) ke zničení veškerého přítomného HTV. Pak se vzorky opět zmrazí na teplotu -20 °C. Před rozborem v analytické laboratoři se vzorky podrobí témuž tepelnému zpracování.

Do každého 1 ml podílu plasmy standardní nebo neznámé se přidá 300 μΐ podíl 0,5 mol monochloroctové kyseliny a vzorky se vortexují a pak odstředí 3 minuty v mikroodstředivce (MSE).

Za pomoci preparační stanice AASP (Varian, Walton on Thames, Anglie) se kazety AASP fáze, vázaná na Cg (Jones Chromatography, Hengoed, Wales) smísí s 2x1 ml methanolu a 2x1 ml pufru 0,001 M octanu amonného (pH3). Vzorky se pak vloží do kazety a promyjí se 2x1 ml 0,01M octanu amonného a 1 ml 0,01M octanu amonného (pH 3) pufrmethanol (60:40). kazety se přemístí do systému AASP a eluují do systému HPLC (vývěva Kratos, Spectroflow 400, ABI, Warrington, Anglie, AASP mininjektor, Varian Walton on Thames, Anglie, LKB 2141 variabilní detektor vlnové délky, Pharmacia/LKB, Milton Keynes, Anglie).

Kazety AASP se vyčistí podílem systému methanol:voda:ledová kyselina octová (48,8:48,8:2,4) pro 10 cyklů před injektováním a 10 cyků po injektování. Doba přepínacího ventilu se nastaví na 1 minutu s celkovým trváním cyklu 15 minut.

-7CZ 292192 B6

Elučním činidlem je systém methanol: 0,01M octanu amonného:ledová kyselina octová (90:1,75:0,25) při průtočné rychlosti 2 ml/min, což se projeví zpětným tlakem přibližně 5520 kPa. Použije se Phenyl Nova-Pak Guard Pak (Waters, Harrow, Anglie) s patronovou Phenyl Nova-Pak (4 mikrometry) (Waters, Harrow, Anglie) vybavenou kompresorovou jednot5 kou Waters RCM 8x10 (Waters, Harrow, Anglie). Detektor UV-záření se nastaví na 238 nm.

Tyto podmínky vedou k retenční době přibližně 10 minut pro sloučeninu A. Retenční doba závisí na analytickém sloupci (v důsledku počtu zbytkových silanolových skupin), na koncentraci octanu amonného v mobilní fázi a na množství methanolu. Optimální separace sloučeniny A od endogenních součástí se dosáhne retenční dobou 10 minut, doplněnou měněním koncentrace ío octanu amonného, použitého k přípravě mobilní fáze. Koncentrace octanu amonného se stanoví pro každý analytický sloupec a je přibližně 0,006 až přibližně 0,019 M.

Výška vrcholů sloučeniny A se vypočte automaticky počítačovým integrátorem (Maxima 820 chromatography data acquisition systém, Waters, Harrow, Anglie). Poměru výšky vrcholů ke 15 koncentracím sloučeniny A se použije ke konstrukci lineárních kalibračních křivek a výpočtu následných koncentrací u pacientů pomocí následných programů RODAS (Roche Products Ltd., Welwyn Garden City, Anglie). Kalibrační křivky se ustaví pomocí iteralivně vážených regresí nejmenších čtverců. Doba pro maximální koncentraci (C_max), doba k dosažení maximální koncentrace plasmy T_max a plocha pod koncentrací plasmy - časový profil (AUC) se určí 20 z koncentrace plasmy - časový profil každé formulace. Statistické analýzy, například průměr, procento součinitele variability a medián se rovněž vypočtou.

Relevantní farmakologické parametry formulace A-63 podle vynálezu v porovnání s formulací A-14 nespadající do rozsahu vynálezu obsaženy v tabulce Π.

Tabulka Π

Formulace		Statistické Parametr (jednotky)
	Cmax	Tmax	tlag	AUC*
	(ng/ml)	(h)	(h) (ng.h/ml)
Formulace A-63 Střed	334,6		—	701,4
%CV	70,9	—	—	80,9
medián	273,6	1,5	0	530,1
Formulace A-14 střed	61,85	—	—	194,9
%CV	62,3	—	—	59,3
medián	57,17	4,5	0,5	189,9

* AUC vypočteno pro poslední měřitelnou koncentraci plasmy

Podle údaje v tabulce Π má formulace A-63 podle vynálezu C_max pětinásobnou hodnotu oproti formulaci A-14. Formulace A-63 podle vynálezu má AUC více 3,5-násobnou oproti formulaci A-14. Výsledky tohoto vyhodnocení jsou překvapující.

³⁵

Mesylátová sůl sloučeniny A (slouží ve formulaci nespadající do rozsahu vynálezu A-14) má větší rozpustnost než báze sloučeniny A (2,55 oproti 0,03 mg/ml při teplotě místnosti ve vodě; 0,06 oproti 0,05 mg/ml při teplotě místnosti a hodnotě pH 1,1 (kyselina chlorovodíková; a 2,32 oproti < 0,01 ve fosfátovém pufiru s hodnotou pH 5,4). Mesylátová sůl sloučeniny A byla použita 40 ve formulaci A-14 díky větší rozpustnosti ve vodném prostředí ve srovnání s bází sloučeniny A.

Kdyby se byla použila báze sloučeniny A ve formulaci A-14, nespadající do rozsahu vynálezu, byla by biologická dostupnost menší, než jak je uvedeno v tabulce Π pro její nižší rozpustnost ve vodě. Avšak ve formulaci A-63 podle vynálezu, která obsahuje jako nosič glyceridy, má sloučenina A jakožto volná báze větší rozpustnost než mesylátová sůl sloučeniny A.

-8CZ 292192 B6

Další formulace přicházející v úvahu podle vynálezu jsou:

Tabulka ΙΠ

Složka #	Materiál (mg/kapsle)	A-25	Formulace A-28	A-29
1	sloučenina A	200,00	200,00	200,002
2	CAPMULMCM	400,00	750,00	550,00
3	PEG 400	275,0	0	0
4	PEG 8000	0	49,0	0
5	PEG(40) ricin. olej	100,0	0	0
6	polyoxyethylen polyoxypropylen kopolymer	0	0	249,65
7	PVP30	20,0	0	0
8	dl-jr-tokoferol	5,0	0,35	0,35
Celková hmotnost (mg)	1000,0	1000,0	1000,0

Formulace uvedené v tabulce ΙΠ lze připravit takto:

Smísí se složky 2, 3,4, 5 a 7 ve vhodné nádobě s mícháním a s udržováním ohřevem na teplotě přibližně 50 °C. Přidá se sloučenina A (položka 1) a směs se míchá až do vyčeření. Směs se nechá vychladnout na teplotu místnosti. Přidá se dl-n-tokoferol (položka 8) a směs se míchá až do jeho rozpuštění. Plní se do měkkých želatinových kapslí velikosti 16.

Příklad 5

Přídavné příklady jiných formulací podle vynálezu jsou v následující tabulce:

Tabulka IV

Složka	mg/kapslí
Sloučenina A	200	200	200	300
CAMPUL MCM	795	400	400	695
PEG (40)ricin. olej	0	120	0	0
PEG 400	0	275	295	0
PEG (8) kaprylový/kaprinový glyceryl	0	0	100	0
dl-rr-tokoferol	5	5	5	5
Celkem	1000	1000	1000	1000

Formulace podle tabulky IV lze připravit následovně:

Ve vhodné nádobě se smísí CAMPULMCM a případně použitý ricinový olej PEG(40), PEG 400, PEG (8), kaprylový/kaprinový glycerid a dl-n-tokoferol a za stálého míchání se směs zahřeje na teplotu 50 °C. Přidá se sloučenina A a míchá se až do vyčerpání. Směs se nechá vychladnout na teplotu místnosti. Plní se do tvrdých nebo měkkých želatinových kapslí přiměřené velikosti. Tvrdé želatinové kapsle mohou být utěsněny k zabránění úniku náplně.

I když se zde popsána řada provedení, je zřejmé, že provedení mohou být změněna za využití sloučenin a postupů podle vynálezu. Rozsah vynálezu zahrnuje všechna alternativní provedení

-9CZ 292192 B6 a varianty, jež jsou definovány v popisu a v patentových nárocích a vynález není omezen specifickým provedením, uvedeným v příkladech.

Průmyslová využitelnost

Jednotková dávka farmaceutického prostředku, který je inhibitorem proteinázy, obsahující (a) terapeuticky účinné množství inhibitoru proteinázy, (b) farmaceuticky přijatelný nosič mající monoglycerid mastné kyseliny se středním řetězcem Cg_i₀ v dostatečném množství k rozpuštění 10 inhibitoru proteinázy.

Claims

15 PATENTOVÉ NÁROKY

1. Jednotková dávka farmaceutického prostředku který je inhibitorem proteázy, vyznačující se tím, že obsahuje

20 (a) terapeuticky účinné množství N-terc-butyldekahydro-2-[2(R)-hydroxy-4-fenyl-3(S)-[[N(2-chinolylkarbonyl)-L-asparagmyl]amino]butyl-(4aS,8aS)isochinolin-3(S)-karboxamidunebo jeho farmaceuticky přijatelných solí nebo esterů a včetně jejich farmaceuticky přijatelných solí a (b) farmaceuticky přijatelný nosič obsahující monoglycerid mastné kyseliny se středním řetězcem s 8 až 10 atomy uhlíku, přičemž je monoglycerid obsažen v množství postačujícím 25 k rozpuštění inhibitoru proteinázy.

2. Jednotková dávka farmaceutického prostředku podle nároku 1, vyznačující se tím, že poměr monoglyceridů (b) ke složce (a) je hmotnostně nejméně 1,5.

30

3. Jednotková dávka farmaceutického prostředku podle nároku 2, vyznačující se tím, že poměr monoglyceridů (b) ke složce (a) je hmotnostně nejméně 3,0.

4. Jednotková dávka farmaceutického prostředku podle nároků laž3, vyznačující se tím, že číslo kyselosti složky (b) je < 0,04.

5. Jednotková dávka farmaceutického prostředku podle nároků laž4, vyznačující se tím, že obsahuje dále polyvinylpyrrolidon.

6. Jednotková dávka farmaceutického prostředku podle nároku 5, vyznačující se

40 t í m, že obsahuje hmotnostně 0,01 až 0,5 % dl-a-tokoferolu, vztaženo na prostředek jako celek.