CZ291506B6 - Derivát peptidu, jeho použití a farmaceutický prostředek, který ho obsahuje - Google Patents

Derivát peptidu, jeho použití a farmaceutický prostředek, který ho obsahuje Download PDF

Info

Publication number
CZ291506B6
CZ291506B6 CZ19962629A CZ262996A CZ291506B6 CZ 291506 B6 CZ291506 B6 CZ 291506B6 CZ 19962629 A CZ19962629 A CZ 19962629A CZ 262996 A CZ262996 A CZ 262996A CZ 291506 B6 CZ291506 B6 CZ 291506B6
Authority
CZ
Czechia
Prior art keywords
gly
lys
asp
arg
phe
Prior art date
Application number
CZ19962629A
Other languages
English (en)
Other versions
CZ262996A3 (cs
Inventor
Alfred Dr. Jonczyk
Simon Dr. Goodman
Beate Dr. Diefenbach
Horst Prof. Dr. Kessler
Dirk Finsinger
Original Assignee
Merck Patent Gesellschaft Mit Beschränkter Haftunf
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Merck Patent Gesellschaft Mit Beschränkter Haftunf filed Critical Merck Patent Gesellschaft Mit Beschränkter Haftunf
Publication of CZ262996A3 publication Critical patent/CZ262996A3/cs
Publication of CZ291506B6 publication Critical patent/CZ291506B6/cs

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/78—Connective tissue peptides, e.g. collagen, elastin, laminin, fibronectin, vitronectin or cold insoluble globulin [CIG]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
    • C07K7/06—Linear peptides containing only normal peptide links having 5 to 11 amino acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
    • A61P19/10—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease for osteoporosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/02—Nutrients, e.g. vitamins, minerals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/08—Vasodilators for multiple indications
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01D—SEPARATION
    • B01D15/00—Separating processes involving the treatment of liquids with solid sorbents; Apparatus therefor
    • B01D15/08—Selective adsorption, e.g. chromatography
    • B01D15/26—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by the separation mechanism
    • B01D15/38—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by the separation mechanism involving specific interaction not covered by one or more of groups B01D15/265 and B01D15/30 - B01D15/36, e.g. affinity, ligand exchange or chiral chromatography
    • B01D15/3804—Affinity chromatography
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
    • C07K1/14—Extraction; Separation; Purification
    • C07K1/16—Extraction; Separation; Purification by chromatography
    • C07K1/22—Affinity chromatography or related techniques based upon selective absorption processes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C07K14/70546—Integrin superfamily
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/745—Blood coagulation or fibrinolysis factors
    • C07K14/75—Fibrinogen
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/531—Production of immunochemical test materials
    • G01N33/532—Production of labelled immunochemicals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Vascular Medicine (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • Obesity (AREA)

Abstract

Deriv t peptidu ze souboru zahrnuj c ho Bit-Gly-Gly-Gly-Arg-Gly-Asp-Ser-Pro-Lys-OH, Bit-Gly-Gly-Gly-Lys-Thr-Ala-Asp-Cys(Trt)-Pro-OH, cyklo-(Arg-Gly-Asp-D-Phe-Lys(N.sup..epsilon..n.-Bit)), cyklo-(Arg-Gly-Asp-D-Phe-Lys(N.sup..epsilon..n.-Aha)), cyklo-(Arg-Gly-Asp-D-Phe-Lys(N.sup..epsilon..n.-Bit-Aha)-Gly), cyklo-(Arg-Gly-Asp-D-Phe-Val-Lys(N.sup..epsilon..n.-Bit-Aha)), cyklo-(Arg-Gly-Asp-D-Phe-N-Me-Lys(N.sup..epsilon..n.-Bit-Aha)), cyklo-(Arg-Gly-Asp-D-Phe-Lys(N.sup..epsilon..n.-Bit-Aha)), cyklo-(Arg-Gly-Asp-D-Phe-Lys(BOC-Aha)), a jeho farmaceuticky p°ijateln soli jsou jako to inhibitory integrinu vyu iteln pro v²robu farmaceutick²ch prost°edk a k dalÜ m · el m v biologii a v molekul rn biologii.\

Description

Derivát peptidu, jeho použití a farmaceutický prostředek, který ho obsahuje
Oblast techniky
Vynález se týká derivátů peptidu, které se dobře snáší a mají hodnotné farmakologické vlastnosti, jelikož jsou inhibitorem integrinu, takže jsou vhodné pro výrobu farmaceutických prostředků. Vynález se také týká způsobu jejich přípravy a farmaceutického prostředku, který je obsahuje.
Dosavadní stav techniky
Podobné deriváty peptidu jsou popsány například ve světovém patentovém spise číslo WO 9 415 956 (biotinylované endothelinové receptorové antagonisty), ve světovém patentovém spise číslo WO 9 413 313 ( biotinylované LHRH antagonisty) a ve světovém patentovém spise číslo WO 9 418 325 (biotinylované nekrosové faktory).
Biotinylaci peptidů v průběhu syntézy v pevné fázi na pryskyřici za účelem zlepšení možnosti čištění popsal Lobl a kol., (Anal. Biochem., 170, str. 502, 1988).
Podobné sloučeniny cyklických a lineárních peptidů jsou známy z německých patentových spisů číslo DE 4 310 643, DE 4 336 758, z evropského patentového spisu číslo EPO 406 428 a ze světového patentového spisu číslo WO 89/05 150.
Úkolem vynálezu je vyvinout nové sloučeniny s hodnotnými vlastnostmi, zvláště sloučeniny a jejich fyziologicky přijatelné soli, kterých lze používat pro výrobu léčiv.
Podstata vynálezu
Podstatou vynálezu jsou nové deriváty peptidu vybrané ze souboru zahrnujícího
Bit-Gly-Gly-Gly-Arg-Gly-Asp-Ser-Pro-Lys-OH, Bit-Gly-Gly-Gly-Lys-Thr-Ala-Asp-Cys(Trt)-Pro-OH, cyklo-(Arg-G ly-Asp-D-Phe-Lys(NE-B it)), cyklo-(Arg-Gly-Asp-D-Phe-Lys(N£-Aha)), cyklo-(Arg-Gly-Asp-D-Phe-Lys(NE-Bit-Aha)-Gly), cyklo-(Arg-Gly-Asp-D-Phe-Val-Lys(Nc-Bit-Aha)), cyklo-(Arg-Gly-Asp-D-Phe-A-Me-Lys(NE-Bit-Aha)), cyklo-(Arg-Gly-Asp-D-Phe-Lys(NE-Bit-Aha)), cyklo-(Arg-Gly-Asp-D-Phe-Lys(BOC-Aha)), a jejich farmaceuticky přijatelné soli.
Zjistilo se totiž, že nové deriváty podle vynálezu a jejich fyziologicky přijatelné soli při dobré snášenlivosti mají hodnotné farmakologické vlastnosti. Především působí jako inhibitory integrinu, přičemž zvláště brzdí vzájemné působení αν-, β3- nebo Bs-integrinových receptorů s ligandy, jako například vázání fibrinogenu na B3-integrinový receptor. Obzvláště vysokou účinnost vykazují deriváty podle vynálezu v případě integrinů ανβ3, avBs, a 11 b β3, avBi avBó otyfig. Toto působení je možno dokázat způsobem, který popsal J. W. Smith a kol. (J. Biol. Chem. 265, str. 12 267 až 12 271, 1990).
Závislost vzniku angiogeneze na vzájemném působení mezi vaskulámími integriny a extracelulárními matricovými proteiny popsal P. C. Brooks, R. A. Clark a D. A. Cheresh (Science
264, str. 569 až 571).
Možnost inhibice vzájemného působení a tím navození apoptosis (programované smrti buněk) angiogenních vaskulámích buněk cyklickým peptidem popsal P. C. Brooks, A. M. Montgomery, M. Rosenfeld, R. A. Reisfeld, T.-Hu, G. Klier a D. A. cheresh (Cell 79, str. 1157 až 1164, 1994).
Deriváty podle vynálezu, které blokují vzájemné působení intergrinových receptorů a ligandů, jako například fíbrinogen na fíbrinogenovém receptoru (glykoprotein Ilb/IIIa) brání jakožto GPIIb/IIIa antagonisty šíření nádorových buněk prostřednictvím metastáz. Tento poznatek dokládají následující pozorování:
Síření nádorových buněk z jednoho místního nádoru do vaskulámího systému probíhá vázáním mikroagregátů (mikrotrombů) vzájemným působením nádorových buněk a krevních destiček. Nádorové buňky jsou chráněním v mikroagregátech odstíněny a nejsou rozpoznány buňkami imunního systému.
Mikroagregáty se mohou pevně zachytit na stěnách cév, čímž se usnadňuje další pronikání nádorových buněk do tkáně. Jelikož vázání mikrotrombů fibrinogenovými vazbami na fibrinogenové receptory je zprostředkováváno na aktivovaných krevních destičkách, mohou být GPIIa/IIIb -antagonisty považovány za účinnou brzdu metastáz.
Deriváty podle vynálezu se mohou používat jako účinné látky v humánní a veterinární medicíně, zejména v profylaxi a/nebo léčení trombóz, myokardiálního infarktu, ateriosklerózy, zánětů, apoplexie, angíny pektoris, nádorových onemocnění, osteolytických onemocnění jako je osteoporóza, patologických angiogenních onemocnění, jako jsou například záněty, ofilhalmologických onemocnění, diabetické retinopathie, svalové degenerace, myopie, oční histoplazmózy, reumatické arthritis, asteoartritis, rubeotického glaukomu, nádorové kolitis, Crohnovy nemoci, aterosklerózy, lupénky, restenózy po angioplastii, virové infekce, bakteriální infekce, houbová infekce, při akutním selhání ledvin a při hojení ran k podpoře procesu hojení.
Derivátů podle vynálezu se může používat jakožto antimikrobiálně účinných látek při operacích, kdy se používá biologických materiálů, implantátů, katheterů nebo stimulátorů srdce. Působí totiž antiseptický. Účinnost antimikrobiální aktivity se může doložit způsobem, který popsal P. Valentin-Weigund a kol. (Infection and Immunity, str. 2 851 až 2 855, 1988).
Jelikož deriváty podle vynálezu představují inhibitory vázání fibrinogenu a tím ligandů fibrinogenových receptorů na krevních destičkách, může se jich používat jakožto diagnostik k detekci a lokalizaci trombů ve vaskulámím systému in vivo, jelikož biotinylový zbytek představuje
Deriváty podle vynálezu se mohou jakožto inhibitory vázání fibrinogenu používat také jakožto účinné pomocné látky při studiu metabolismu krevních destiček v různých aktivačních stadiích nebo při studiu intracelulárních signálních mechanismů receptorů fibrinogenu. Detekovatelná jednotka „biotinového značení“ umožňuje po vázání na receptor zkoumat uvedené mechanismy.
Používané zkratky aminokyselin mají následující význam:
Aha 6-aminohexanová kyselina, 6-aminokapronová kyselina
Ala alanin
Arg arginin
Asp asparagová kyselina
Cys cystein
Gly glycin
-2CZ 291506 B6
Lys lysin
Phe fenylalanin
Pro prolin
Ser serin
Thr threonin
Val valin
Dále znamená
Bit skupinu vzorce
BOC terc.-bntoxykarbonyl
Me methyl
Trt tntyl (trifenylmethyl)
Pokud mohou být shora uvedené aminokyseliny v několika enantiomeniích formách, zahrnuje vynález vždy všechny tyto formy ajejich směsi (například DL-formy) například jakožto podíly sloučeniny podle vynálezu. Kromě toho mohou mít aminokyseliny, například jakožto podíly sloučenin podle vynálezu, odpovídající, o sobě známé chránící skupiny.
Vynález se rovněž týká prodrogových derivátů, to znamená derivátů podle vynálezu, které jsou obměněny alkylovými skupinami nebo acylovými skupinami, cukry nebo oligopeptidy. které se v organismu rychle štěpí za uvolnění účinného derivátu podle vynálezu.
Deriváty podle vynálezu mohou mít jedno nebo několik chirálních center, a proto mohou být v různých stereoisomerních formách, přičemž vynález všechny tyto formy zahrnuje.
Deriváty podle vynálezu a výchozí látky pro jejich přípravu se připravují o sobě známými způsoby, které jsou popsány v literatuře (například ve standardních publikací jako Houben-Weyl, Methoden der organischen Chemie, Georg-Thieme Verlag, Stuttgart), a to za reakčních podmínek, které jsou pro jmenované reakce známy a vhodné. Přitom se může také používat o sobě známých, zde blíže nepopisovaných variant.
Výchozí látky se mohou popřípadě vytvářet in šitu tak, že se z reakční směsi neizolují, nýbrž se ihned nechávají dále reagovat na deriváty podle vynálezu.
Syntéza v pevné fázi, odštěpení a čištění se provádí způsobem, který popsal A. Jonczyk aj. Meienhofer (Peptides, Proč. 8 th Am. Pept. Symp. Vyd. V. Hrubý a D. H. rich, Pierce Comp. III, str. 73 až 77, 1983) nebo podobnými způsoby, jako jsou popsány v časopise Angew. Chem. 104, str. 375 až 391 (1992).
Deriváty podle vynálezu se mohou připravovat o sobě známými způsoby syntézy aminokyselin a peptidů, které jsou popsány například ve shora uvedených standardních publikacích a v patentové literatuře, například také způsobem syntézy v pevné fázi, kterou popsal Merrifield (B. F. Gysin a R. B. Merrifield, J. Am. Chem. Soc. 94, str. 3 102 a další, 1972).
- J
Cyklické deriváty se mohou připravovat cyklizací lineárních sloučenin, které jsou popsány například v německém patentovém spise číslo DE 4 310 643 a v publikaci Houben-Weyl,
Methoden der organischen Chemie, I.c., svazek 15/11, str. 1 až 806 (1974).
Deriváty podle vynálezu se mohou také získat tak, že se uvolňují solvolýzou, zvláště hydrolýzou nebo hydrogenolýzou ze svých funkčních derivátů.
Výhodnými sloučeninami pro solvolýzu popřípadě hydrogenolýzu jsou sloučeniny, které jinak odpovídají derivátům podle vy nálezu, mají však místo jedné nebo několika volných aminoskupin a/nebo hydroxylových skupin odpovídající chráněné aminoskupiny a/nebo hydroxylové skupiny, které místo atomu vodíku, který je vázán s atomem dusíku, mají skupinu chránící aminoskupinu, například deriváty podle vynálezu, které mají místo NH2-skupiny skupinu NHR' (kde znamená R' skupinu chránící aminoskupinu, například skupinu BOC nebo CBZ).
Dále jsou jako výchozí sloučeniny výhodné sloučeniny, které mají místo atomu vodíku hydroxylové skupiny chráněnou hydroxylovou skupinu, například deriváty podle vynálezu, které mají však místo hydroxylové skupiny skupinu R O-fenylovou (kde znamená R skupinu chránící hydroxylovou skupinu).
V molekule výchozí látky může být i několik stejných nebo různých chránících skupin. Pokud jsou takové skupiny od sebe odlišné, mohou se v mnoha případech selektivně odštěpovat.
Výraz „skupina chránící aminoskupinu“ je obecně znám a jde o skupinu, které jsou vhodné k ochraně (k blokování) aminoskupiny před chemickými reakcemi, které jsou však snadno odstranitelné, když je žádoucí reakce na jiném místě molekuly provedena. Typické pro takové skupiny jsou zvláště nesubstituované nebo substituované skupiny acylové, arylové, aralkoxymethylové nebo aralkylové. Jelikož se skupiny, chránící aminoskupinu, po žádoucí reakci (nebo reakčním sledu) odstraňují, nemá jejich druh a velikost rozhodující význam. Výhodnými jsou však skupiny s 1 až 20 a zvláště s 1 až 8 atomy uhlíku. Výraz „acylová skupina“ je zde vždy míněn v nejširším slova smyslu. Zahrnuje acylové skupiny odvozené od alifatických, aralifatických, aromatických nebo heterocyklických karboxylových nebo sulfonových kyselin, jakož zvláště skupiny alkoxykarbonylové, aryloxykarbonylové a především aralkoxykarbonylové. Jakožto příklady takových acylových skupin se uvádějí skupiny alkanoylové jako acetylová, propionylová, butyrylová skupina; aralkanoylové jako fenylacetylová skupina; aroylové jako benzoylová nebo toluylová skupina; aryloxyalkanoylové jako fenoxyacetylová skupina (POA); alkoxykarbonylové, jako skupina methoxykarbonylová, ethoxykarbonylová, 2,2,2-trichlorethoxykarbonylová, terc.-butoxykarbonylová (BOC), 2-jodethoxykarbonylová; aralkoxykarbonylové jako skupina benzyloxykarbonylová (CBZ) („karboxbenzoxy“), 4-methoxybenzyloxykarbonylová a 9-fluorenylmethoxykarbonylová (Fmoc) skupina; arylsulfonylové jako skupina 4methoxy-2,3,6-trimethylfenylsulfonylová (Mtr). Výhodnými skupinami, chránícími aminoskupinu, jsou skupiny BOC a Mtr, dále CBZ, Fmoc, benzylová a acetylová skupina.
Výraz „skupina chránící hydroxyskupinu“ je obecně rovněž znám a jde o skupiny, které jsou vhodné k ochraně (k blokování) hydroxyskupiny před chemickými reakcemi, které jsou však snadno odstranitelné, když je žádoucí reakce na jiném místě molekuly provedena. Typické pro takové skupiny jsou shora uvedené nesubstituované nebo substituované skupiny arylové, aralkylové nebo acylové dále také skupiny alkylové. Jelikož se skupiny, chránící hydroxyskupinu, po žádoucí reakci (nebo reakčním sledu) odstraňují, nemá jejich druh a velikost rozhodující význam. Výhodnými jsou však skupiny s 1 až 20 a zvláště s 1 až 10 atomy uhlíku. Jakožto příklady skupin chránících hydroxylovou skupinu, se uvádějí skupina benzylová, p-nitrobenzoylová, p-toluensulfonylová, terc.-butylová a acetylová, přičemž jsou obzvláště výhodnými skupina benzylová a terc.-butylová. Skupiny COOH v asparagové kyselině a v glutaminové kyselině se s výhodou chrání ve formě terc.-butylesteru (například Asp(OBut)).
-4CZ 291506 B6
I
Uvolňování derivátů podle vynálezu zjejich funkčních derivátů se daří -podle použité chránící skupiny - například silnými kyselinami, účelně kyselinou trifluoroctovou nebo chloristou, avšak také jinými silnými anorganickými kyselinami, jako kyselinou chlorovodíkovou nebo sírovou, silnými organickými karboxylovými kyselinami jako kyselinou trichloroctovou nebo sulfonovými kyselinami jako kyselinou benzensulfonovou nebo toluensulfonovou. Přítomnost přídavného inertního rozpouštědla je možná, nikoliv však vždy nutná. Jakožto inertní rozpouštědla jsou vhodné organické například karboxylové kyseliny, jako je kyselina octová, ethery, jako je tetrahydrofuran nebo dioxan, amidy, jako je dimethylformamid (DMF), halogenové uhlovodíky, jako je dichlormethan, dále také alkoholy, jako je methanol, ethanol nebo isopropanol jakož také voda. V úvahu mohou přicházet také směsi těchto rozpouštědel. Kyseliny trifluoroctové se s výhodou používá v nadbytku bez přísady dalších rozpouštědel, kyseliny chloristé ve formě směsi kyseliny octové a 70% kyseliny chloristé v poměru 9:1. Reakční teplota pro odštěpení je účelně přibližně 0 až přibližně 50 °C, s výhodou 15 až 30 °C (teplota místnosti).
Skupiny BOC, OBut a Mtr se mohou například s výhodou odštěpovat kyselinou trifluoroctovou v dichlormethanu nebo přibližně 3 až 5n kyselinou chlorovodíkovou v dioxanu při teplotě 15 až 30 °C, skupina Fmoc 5 až 50% roztokem diethylaminu, dimethylaminu nebo piperidinu v dimethylformamidu při teplotě 15 až 30 °C.
Tritylové skupiny se používá ke chránění aminokyselin histidin, arginin, glutamin a cystein. Odštěpení chránící skupiny se provádí podle žádaného konečného produktu systémem kyselina trifluoroctová/10% thiofenol, přičemž se odštěpí tritylové skupina ze všech jmenovaných aminokyselin. Při použití systému kyselina trifluoroctová/anisol nebo kyselina trifluoroctová/thioanisol se odštěpí tritylové skupina jen zhistidinu, zasparaginu a zglutaminu zatímco chránící skupina na vedlejším řetězci cysteinu zůstává nedotčena.
Hydrogenolyticky odstranitelné chránící skupiny (například skupina CBZ nebo skupina benzylová) se mohou odštěpovat například zpracováním vodíkem v přítomnosti katalyzátoru (například katalyzátoru na bázi ušlechtilého kovu, jako palladium, účelně na nosiči, jako na uhlí). Jakožto rozpouštědlo se hodí shora uvedená rozpouštědla, zvláště například alkoholy, jako methanol nebo ethanol nebo amidy jako dimethylformamid. Hydrogenolýza se zpravidla provádí při teplotě přibližně 0 až 100 °C, za tlaku přibližně 0,1 až 20 MPa, s výhodou pri teplotě 20 až 30 °C, za tlaku přibližně 0,1 až 1 MPa. Hydrogenolýza CBZ skupiny se daří například dobře na 5 až 10% palladiu na uhlí v methanolu nebo amoniumformiátem (místo vodíkem) v přítomnosti palladia na uhlí v systému methanol/dimethylformamid při teplotě 20 až 30 °C.
Zásada podle vynálezu se může kyselinou převádět na příslušnou adiční sůl s kyselinou, například reakcí ekvivalentního množství zásady a kyseliny v inertním rozpouštědle, jako je například ethanol a následným odpařením rozpouštědla.Pro tuto reakci přicházejí v úvahu zvláště kyseliny, které poskytují fyziologicky nezávadné soli. Může se používat anorganických kyselin, jako jsou kyselina sírová, dusičná, halogenovodíkové kyseliny, jako chlorovodíková nebo bromovodíková, fosforečné kyseliny, jako kyselina ortofosforečná, sulfaminová kyselina a organické kyseliny, zvláště alifatické, alicyklické, aralifatické, aromatické nebo heterocyklické jednosytné nebo několika sytné karboxylové, sulfonové nebo sírové kyseliny, jako jsou kyselina mravenčí, octová, propionová, pivalová, diethyloctová, malonová, jantarová, pimelová, fumarová, maleinová, mléčná, vinná, jablečná, citrónová, glukonová, askorbová, nikotinová, isonikotinová, methansulfonová, ethansulfonová, ethandisulfonová, 2-hydroxyethansulfonová, benzensulfonová, ptoluensulfonová, naftalenmonosulfonová a naftalendisulfonová a laurylsírová kyselina. Solí s fyziologicky nevhodnými kyselinami se může používat k izolaci a/nebo k čištění sloučenin podle vynálezu.
Na druhé straně se deriváty podle vynálezu reakcí se zásadou mohou převádět na své fyziologicky vhodné soli kovové nebo amoniové. Jakožto soli přicházejí v úvahu zvláště soli sodné, draselné, horečnaté, vápenaté a amoniové dále substituované amoniové soli, například dimethylamoniové, diethylamoniové, diisopropylamoniové, monoethanolamoniové, diethanolamoniové,
-5CZ 291506 B6 nebo diisopropanolamoniové, cyklohexylamoniové, dicyklohexylamoniové, dibenzylethylendiamoniové, dále například soli s argininem nebo s lysinem.
Deriváty podle vynálezu a jejich fyziologicky přijatelné soli se mohou používat pro výrobu farmaceutických prostředků, zvláště nechemickou cestou. Za tímto účelem se mohou převádět na vhodnou dávkovači formu s alespoň jedním pevným nebo kapalným a/nebo polokapalným nosičem nebo pomocnou látkou a popřípadě ve směsi s jednou nebo několika jinými účinnými látkami.
Vynález se proto také týká prostředků, zvláště farmaceutických prostředků, obsahujících alespoň jeden derivát podle vynálezu a/nebo její fyziologicky vhodnou sůl.
Těchto prostředků podle vynálezu se může používat jakožto léčiv v humánní a ve veterinární medicíně. Jakožto nosiče přicházejí v úvahu anorganické nebo organické látky, které jsou vhodné pro enterální (například orální) nebo pro parenterální nebo topické podávání nebo pro podávání ve formě inhalačních sprejů a které nereagují s deriváty podle vynálezu, jako jsou například voda, rostlinné oleje, benzylalkoholy alkylenglykoly, polyethylenglykoly, glycerintriacetát, želatina, uhlohydráty, jako laktóza nebo škroby, stearát hořečnatý, mastek a vazelína. Pro orální použití se hodí zvláště tablety, pilulky dražé, kapsle, prášky, granuláty, sirupy, šťávy nebo kapky, pro rektální použití čípky, pro parenterální použití roztoky olejové nebo vodné roztoky, dále suspenze, emulze nebo implantáty, pro topické použití masti, krémy nebo pudry. Sloučeniny podle vynálezu se také mohou lyofilizovat a získaných lyofilizátů se může například používat pro přípravu vstřikovatelných prostředků. Prostředky se mohou sterilovat a/nebo mohou obsahovat pomocné látky, jako jsou kluzná činidla, konservační, stabilizační činidla a/nebo smáčedla, emulgátory, soli k ovlivnění osmotického tlaku, pufry, barviva, chuťové přísady a/nebo aromatické látky. Popřípadě mohou obsahovat ještě jednu další nebo ještě několik dalších účinných látek, jako jsou například vitaminy. Pro podávání ve formě inhalačních sprejů se účinná látka rozpouští nebo suspenduje ve hnacím plynu nebo ve směsi hnacích plynů (jako jsou například oxid uhličitý nebo fluorchlorované uhlovodíky). V takovém případě se přitom používá účinné látky v mikronizované formě, přičemž se může přidávat alespoň jedno fyziologické kompatibilní rozpouštědlo, například ethanol. Inhalační roztoky se mohou podávat za použití o sobě známých zařízení k tomuto účelu.
Deriváty podle vynálezu a jejich fyziologicky přijatelné soli se mohou podávat jakožto integrinové inhibitory v boji proti nemocem, jako jsou zvláště patologická angiogenní onemocnění, trombózy, srdeční infarkt, koronární onemocnění srdce, arterioskleróza, nádory, osteoporóza, zápaly a infekce.
Derivátů podle vynálezu se zpravidla používá v dávkách podobných jako obchodně známé peptidy, zvláště obdobně jako sloučeniny podle amerického patentového spisu číslo 4 472 305, s výhodou v dávce přibližně 0,05 až 500 mg, zvláště 0,5 až 100 mg na dávkovači jednotku. Denní dávka je s výhodou přibližně 0,01 až 2 mg/kg tělesné hmotnosti. Určitá dávka pro každého jednotlivého jedince závisí na nejrůznějších faktorech, například na účinnosti určité použité sloučeniny, na stáří, tělesné hmotnosti, obecném zdravotním stavu, pohlaví, stravě, na okamžiku a cestě podání, na rychlosti vylučování, na kombinaci léčiv a na závažnosti určitého onemocnění. Výhodné je parenterální podávání.
Deriváty podle vynálezu se také mohou používat v analytické biologii a v molekulární biologii. Přitom se využívá jejich schopnosti vytvářet komplexy mezi biotinylovým zbytkem a glykoproteinem avidin. Známé je použití biotin-avidinového komplexu (E. A. Bayer a M. Wilchek, Methods of Biochemical Analysis 26, str. 1 až 45, 1980 [lit. 1]).
Nových derivátů podle vynálezu se může používat jakožto integrinových ligandů pro vytváření sloupců pro afinitní chromatografií k čisté přípravě integrinů. Komplex z avidinem derivatizovaného nosičového materiálu, například Sepharose a nových sloučenin podle vynálezu se vytváří
-6CZ 291506 B6 osobě známým způsobem, který je popsán (například vlit. 1). Z tohoto důvodu se zde tento způsob podrobně nepopisuje a odkazuje se proto na odpovídající literaturu, například lit. 1.
Jakožto polymemí nosičové materiály jsou vhodné polymemí pevné fáze o sobě známé z chemie peptidů s výhodnými hydrofilními vlastnostmi, například příčné sesítěné polycukry, jako jsou například celulóza, Sepharose nebo SephadexR, akrylamidy, polymery na polyethylenglykolové bázi nebo TentakelpolymeryR.
Nových derivátů podle vynálezu se může používat jakožto diagnostických markérů pro antibiotin-protilátkové reakce ve zkouškách typu ELISA a ve FACS („fluorescence activated cell sorter-analýza).
Známé je použití antibiotinových protilátek k detekci biotinu (M. Berger, Biochemistry 14, str. 2 338 až 2 342, 1975).
Použití biotinem derivatizovaného imunoglobulinu IgG při enzymimunní zkoušce (ELISA) popsal U. Holmkov-Nielsen a kol. (Joumal of Chromatography 297, str. 225 až 233, 1984).
J. Gao a S. J. Shattil (J. Immunol. Methods 181, str. 55 až 64, 1995) popsali zkoušku ELISA dokazující látky, které inhibují integrin a.[ i bBi 11 aktivaci. V tomto případě se k důkazu používá biotinylovaného fibrinogenu.
Použití průtokové cytometrie v klinické diagnostice buněk popsali G. Schmitz a G. Rothe (DG Klinische Chemie Mitteilungen 24, sešit 1, str. 1 až 14,1993).
Kromě toho se deriváty podle vynálezu mohou používat v mikroskopii v silovém poli (atomic force microscopy AFM) k měření síly vzájemného působení ligand-receptor. Ligandem se míní zvláště komplex avidinu a nové deriváty podle vynálezu. Receptorem se míní s výhodou integrinový receptor E.-L. Florin a kol. (Science 264, str. 415 až 417,1994) popsali měření adhezních sil mezi avidinem funkcionalizovaným silovým mikroskopem a biotinylovanou agarosou.
Vynález objasňují, nijak však neomezují následující příklady praktického provedení. Teploty se uvádějí vždy ve stupních Celsia. Výraz „zpracování obvyklým způsobem“ v následujících příkladech praktického provedení znamená:
Popřípadě se přidává voda, popřípadě podle konstituce konečného produktu se hodnota pH nastavuje na 2 až 10, reakční směs se extrahuje ethylacetátem nebo dichlormethanem, provádí se oddělení, vysušení organické fáze síranem sodným, odpaření a čištění chromatografií na silikagelu a/nebo krystalizací. Hodnoty Rf jsou na silikagelu, eluční činidlo je systém ethylacetát/methanol 9 : 1, RZ je retenční doba (v minutách) při HPLC v následujících systémech:
[A]
sloupec: Nukleosil 7C18 250 x 4 mm
eluční činidlo A: 0,1 % TFA ve vodě
eluční činidlo B: 0,1 % TFA v acetonitrilu
tok: 1 ml/min
gradient: 20 až 50 % B /30min
[B] minutový gradient 0 až 80 % 2-propanolu ve vodě s 0,3 % TFA při 1 ml/min na sloupci LichrosorbR RP Selecí B (7 pm) 250 x 4 mm [C]
sloupec: Lichrospher (5 pm) 100 RP8 125 x 4 mm
eluční činidlo A: 0,01 M Na-fosfát pH 7,0
eluční činidlo B: 0,005 M Na-fosfát pH 7,0/obj. 60 % 2-propanolu
tok: 0,7 ml/min
gradient: 1-99%B/5O min
hmotová spektrometrie (MS):EI (ionizace rázem elektronů) M+ FAB (bombardování rychlými atomy) (M+H)+
Výrazem DMPP-pryskyřice se míní 4-(2',4'-dimethoxyfenylh\droxymethyl)fenoxypryskyřice, která umožňuje syntézu peptidů chráněných na postranních řetězcích.
Příklady provedení vynálezu
Příklad 1
Rozpustí se 0,6 g Fmoc-Lys(BOC)-OH ve 100 ml dichlormethanu, smíchá se s 1,2 ekvivalenty DMPP-pryskyřice, s 1,4 ekvivalenty HOBt a s 1,4 ekvivalenty DCC1 a míchá se po dobu 12 hodin při teplotě místnosti. Po odstranění rozpouštědla se získá Fmoc-Lys-(BOC)-DMPPpryskyřice. V peptidovém syntetizéru se kondenzuje Fmoc-Pro-OH s H-Lys(BOC)-DMPPpryskyřicí [uvolněnou z Fmoc-Lys-(BOC)-DMPP-pryskyřice systémem pyperidin/dimethylformamid (20 %)] použitím trojnásobného nadbytku chráněného prolinu. Kopulace se systémem DCCl/HOBt se provádí při teplotě místnosti. Získá se Fmcc-Pro-Lys(BOC)-DMPP-pryskyřice. Obdobně se získá následujícím odštěpením chránící Fmoc skupiny a následující kopulací s Fmoc-Ser(But)-OH, Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Arg(Mtr)-OH, Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Gly-OH a Bit-OH za opakujících se reakčních podmínek při každé kopulaci
-uvolněním α-aminoskupiny systémem piperidin/DMF (20 %)
-promytím dimethylacetamidem
-reakcí s Fmoc-aminokyselinou popřípadě s Bit-OH
Bit-Gly-Gly-Gly-Arg(Mtr)-Gly-Asp(Obut)-Ser(But)-Pro-Lys(BOC)-MDPP-pryskyřice.
Pryskyřice se promyje systémem CF3SO3H/CH2CI2/H2O a získá se Bit-Gly-Gly-Gly-Arg(Mtr)Gly-Asp(Obut)-Ser(But)-Pro-Lys(BOC)-OH. Po odštěpení chránících skupin 2a kyselinou chlorovodíkovou v dioxanu, odstranění rozpouštědla, vyjmutí zbytku do systému trifluoroctová kyselina/dichlormethan a vysrážení diethyletherem se produkt čistí přes RP-HPLC. Získá se Bit— Gly-Gly-Gly-Asp-Ser-Pro-Lys-OH x 2 TFA; RZ [B] = 12,14-; FAB 1056.
Příklad 2
Podobně jako podle příkladu 1 se získá následnými kopulacemi pryskyřice DMPP s Fmoc-ProOH, Fmoc-Cys(Trt)-OH, Fmoc-Asp(Obut)-OH, Fmoc-Ala-ΌΗ, Fmoc-Thr(But)-OH, FmocLys(BOC)-OH, Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Gly-OH a Bit-OH
Bit-Gly-Gly-Gly-Lys(BOC)-Thr(But)-Ala-Asp(Obut)-Cys(Trt)-Pro-DMPP-pryskyřice.
Odštěpením od pryskyřice, odstraněním chránících skupin a vyčištěním se získá
Bit-Gly-Gly-Gly-Lys-Thr-Ala-Asp-Cys(Trt)-Pro-OH x 2 TFA; RZ [B] = 27,6; FAB 1273.
-8CZ 291506 B6
Příklad 3
Do roztoku 3,05 g cyklo-(Arg-Gly-Asp-D-Phe-Lys) [získatelného cyklizací H-Arg(Mtr)-GlyAsp(Obut)-D-Phe-Lys(BOC)-OH na cyklo-(Arg(Mtr)-Gly-Asp(Obut)-D-Phe-Lys-(BOC)) a následným odštěpením chránících skupin] ve 100 ml dichlormethanu se přidá 1,7 g (+)biotinyl-N-sukcinimidylesteru a 0,5 g triethylaminu. Míchá se po dobu pěti hodin při teplotě místnosti a obvyklým zpracováním se získá cyklo—(Arg-Gly-Asp-D-Phe-Lys-(N- Bit)) x TFA; RZ [B] = 11,32; FAB 830.
Příklad 4
Podobně jako podle příkladu 3 se získá ze 3.5 g cyklo-(Arg-Gly-Asp-D-Phe-Lys) a 2,3 g Asukcinimidylesteru (+)-biotinyl-6-aminokapronové kyseliny („A“) a 0,5 g triethylaminu cyklo(Arg-Gly-Asp-D-Phe-Lys(N-bit-Aha)) x TFA; RZ [C] = 23,67; FAB 943.
Příklad 5
Do roztoku 3,05 cyklo-(Arg-Gly-Asp-D-Phe-Lys) ve 40 ml 5% vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného a 40 ml tetrahydrofuranu se přidá 6 g Boc-Aha-N-sukcinimidylesteru. Míchá se po dobu čtyř hodin, zpracuje se obvyklým způsobem, čímž se získá cyklo-(Arg-Gly-Asp-DPhe-Lys (BOC-Aha)); RZ [C] = 27,7; FAB 817.
Po odstranění chránící skupiny BOC v systému kyselina chlorovodíková/dioxan se získá po obvyklém zpracování cyklo-(Arg-Gly-Asp-D-Phe-Lys(N-Aha)) x 2 TFA; RZ [C] = 14,76; FAB 717.
Podobně jako podle příkladu 1 se získá následnou reakcí s (+)-biotinyl-N-sukcinimidylesterem cyklo-(Arg-Gly-Asp-D-Phe-Lys(N- Bit-Aha)) x TFA; RZ [C] = 23,67; FAB 943.
Příklad 6
Podobně jako podle příkladu 4 se získá z cyklo-(Arg-Gly-Asp-D-Phe-Lys-G)y) [získatelného cyklizací H-Arg(Mtr)-Gly-Asp(Obut)-D-Phe-Lys(BOC)-Gly-OH na cyklo-(Arg(Mtr)-GlyAsp(OBut)-D-Phe-Lys-(BOC)-Gly) a následným odštěpením chránících skupin] a zNsukcinimidylesteru (+)-biotinyl-6-aminokapronové kyseliny cyklo-(Arg-Gly-Asp-D-PheLys(N-Bit-Aha)-Gly) xTFA; RZ [A] = 10,97; FAB 1000.
Podobně se získá z cyklo-(Arg-Gly-Asp-D-Phe-Val-Lys) [získatelného cyklizací HArg(Mtr)-Gly-Asp(Obut)-D-Phe-Val-Lys(BOC)) a následným odštěpením chránících skupin] a zN-sukcinimidylesteru (+)-biotinyl-6-aminokapronové kyseliny cyklo-(Arg-Gly-Asp~DPhe-Val-Lys(N- Bit-Aha)) x TFA; RZ [A] = 16,11; FAB 1042.
Podobně se získá zcyklo-(Arg-Gly-Asp-D-Phe-N-Me-Lys) a zN-sukcinimidylesteru (+)biotinyl-6-aminokapronové kyseliny cyklo-(Arg-Gly-Asp-D-Phe-N-Me-Lys(N-Bit-Aha)).
-9CZ 291506 B6
Příklad 7
Způsob přípravy vhodného materiálu pro afmitní chromatografii k čištění integrinů
Sepharose se aktivuje způsobem podle lit. 1, str. 14. Pak se k 10 g aktivované Sepharose přidá 20 mg avidinu ve 20 ml 0,1 M roztoku hydrogenuhličitanu sodného. Suspenze se míchá po dobu 12 hodin při teplotě 4 °C a pak se promyje. Produkt se suspenduje ve vodě s několika krystaly natrimazidu. Avidinový komplex s biotinylovanými sloučeninami obecného vzorce I, například s cyklo-(Arg-Gly-Asp-D-Phe-Lys(N-Bit)) x TFA se vytváří tak, že se rozpustí 1,1 ekvivalentu peptidu v natriumacetátovém pufru, roztok se přidá k suspenzi avidin-Sepharosy a míchá se po dobu čtyř hodin. Nadbytek peptidu se odstraní promytím.
Následující příklady objasňují farmaceutické prostředky:
Příklad A. Injekční ampulky
Roztok 100 g účinné látky podle vynálezu a 5 g dinatriumhydrogenfosfátu ve 3 1 dvakrát destilované vody se nastaví 2n kyselinou chlorovodíkovou na hodnotu pH 6,5, sterilně se zfiltruje a plní se do injekčních ampulek, lyofilizuje se za sterilních podmínek a sterilně se ampulky uzavřou. Každá injekční ampulka obsahuje 5 mg účinné látky.
Příklad B. Čípky
Roztaví se směs 20 g účinné látky podle vynálezu se 100 g sojového lecitinu a 1400 g kakaového másla, vlije se do formiček a nechá se vychladnout. Každý čípek obsahuje 20 mg účinné látky.
Příklad C. Roztok
Připraví se roztok 21 g účinného derivátu podle vynálezu, 9,38 g dihydrátu natriumhydrogenfosfátu, 28,48 g dinatriumhydrogenfosfátu se 12 molekulami vody a 0,1 g benzalkoniumchloridu v 940 ml dvakrát destilované vody. Hodnota pH roztoku se upraví na 6,8, doplní se najeden litr a steriluje se ozářením. Tohoto roztoku je možno používat jakožto očních kapek.
Příklad D. Mast
500 mg účinné látky podle vynálezu se smísí s 99,5 g vazelíny za aseptických podmínek.
Příklad E. Tablety
Ze směsi 1 kg účinné látky podle vynálezu, 4 kg laktózy, 1,2 kg bramborového škrobu, 0,2 kg mastku a 0,1 kg stearátu hořečnatého se obvyklým způsobem vylisují tablety, tak, že každá tableta obsahuje 10 mg účinné látky.
Příklad F. Dražé
Obdobně jako podle příkladu E se vylisují tablety, které se pak obvyklým způsobem povléknou povlakem ze sacharózy, bramborového škrobu, mastku, tragantu a barviva.
-10CZ 291506 B6
Příklad G. Kapsle
O sobě známým způsobem se plní do kapslí z tvrdé želatiny 2 kg účinné látky podle vynálezu tak, že každá kapsle obsahuje 20 mg účinné látky.
Příklad H. Ampule
Roztok 1 kg účinné látky obecného vzorce I v 60 1 dvakrát destilované vody se sterilně zfiltruje a plní se do ampulí, lyofilizuje se za sterilních podmínek a sterilně se ampule uzavřou. Každá ampule obsahuje 10 mg účinné látky.
Příklad I. Inhalační sprej
Rozpustí se 14 g účinné látky podle vynálezu v 10 1 isotonického roztoku chloridu sodného a plní se do běžných obchodních nádob pro stříkání s pumpovým mechanizmem. Roztok se může stříkat do úst nebo nosu. Každý střik (přibližně 0,1 ml) odpovídá dávce přibližně 0,14 mg.
Test inhibice receptoru
Čištění lidské integriny GPIIblIIa (identický s aIIbB3) z krevních destiček a o\B; z placenty se absorbují v mikrotitrových důlcích a odezva se vyvolává biotinylovaným systémem komplementární ligandy - vitronektin (VN) pro avB3 a fibrinogenem (FGN) pro aIIbB3 v přítomnosti vzrůstajícího množství testovaných sloučenin.
Způsob: 1 pg m'1 systému biotin-ligand se inkubuje s 1 pg ml'1 povlečeného receptoru v přítomnosti sériově ředěných peptidů. Po třech hodinách při teplotě 30 °C se měří vázané ligandy detekcí systému anti-biotin-alkalická fosfatáza (Charo I.F., Nannizzi L., Smith J. W. a Cheresh D.A, J. Cell.. Biol. 111, str. 2795 až 2800,1990).
V tabulce I jsou uvedeny hodnoty IC5o pro vázání biotinylovaných ligandů na lidský placentový avB3 a na destičkový aIIbB3. Pro porovnání derivátů podle vynálezu se uvádějí výsledky stejného testu pro Gly-Arg-Gly-Ast-Ser-Pro-Lys.
Tabulka I
Sekvence IC50[nM] IC50 [nM]
VN: avB3 FGN: aIIbB3
Gly-Arg-Gly-Asp-Ser-Pro-Lys 1750 5380
cyklo-(Arg-Gly-Asp-D-Phe-Lys-(NE-Bit)) 2,2 983
cyklo-(Arg-Gly-Asp-D-Phe-Lys-(NE-Aha)) 2 600
cyklo-(Arg-Gly-Asp-D-Phe-Lys-(BOC-Aha)) 6 1900
cyklo-(Arg-Gly-Asp-D-Phe-Lys-(NE-Bit-Aha)) 2,2 983
cyklo-(Arg-Gly-Asp-D-Phe-Lys-(NE-Aha)) 2 600
- 11 CZ 291506 B6
Z tabulky je zřejmé, že testované derivát}’ mají vyšší inhibiční účinnost se zřetelem na avBa vitronektinovou interakci a na allb63 fibrinogenovou interakci než srovnávací sloučenina v obou systémech testů.
Průmyslová využitelnost
Derivát biotinylovaného peptidu a jeho farmaceuticky vhodné soli jsou jakožto inhibitory integrinu využitelné pro výrobu farmaceutických prostředků a k různým účelům v biologii.
PATENTOVÉ NÁROKY

Claims (6)

1. Derivát peptidu ze souboru zahrnujícího
Bit-Gly-Gly-Gly-Arg-Gly-Asp-Ser-Pro-Lys-OH, Bit-Gly-Gly-Gly-Lys-Thr-Ala-Asp-Cys(Trt)-Pro-OH, cyklo-(Arg-Gly-Asp-D-Phe-Lys(Ne-Bit)), cyklo-(Arg-Gly-Asp-D-Phe-Lys(Ns-Aha)), cyklo-(Arg-Gly-Asp-D-Phe-Lys(NE-Bit-Aha)-Gly), cyklo-(Arg-Gly-Asp-D-Phe-Val-Lys(NE-Bit-Aha)), cyklo-(Arg-Gly-Asp-D-Phe-N-Me-Lys(NE-Bit-Aha)), cyklo-(Arg-Gly-Asp-D-Phe-Lys(NE-Bit-Aha)), cyklo-(Arg-Gly-Asp-D-Phe-Lys(BOC-Aha)), a jeho farmaceuticky přijatelné soli.
2. Farmaceutický prostředek, vyznačující se tí m , že obsahuje jako účinnou látku alespoň jeden derivát peptidu podle nároku 1 nebo jeho fyziologicky přijatelnou sůl.
3. Derivát peptidu podle nároku 1 nebo jeho fyziologicky přijatelná sůl jakožto integrinové inhibitory k potírání patologických angiogenních onemocnění, trombóz, srdečního infarktu, koronárních onemocnění srdce, arteriosklerózy, nádorů, osteoporózy, zánětů a infekcí.
4. Použití derivátu peptidu podle nároku 1 nebo jeho fyziologicky přijatelných solí pro výrobu léčiv.
5. Použití derivátu peptidu podle nároku 1 k čištění integrinů afinitní chromatografii.
6. Použití derivátu peptidu podle nároku 1 jako diagnostických markérů pro anti-biotin-protilátkové reakce ve zkouškách in vitro typu ELIS A a ve FACS-analýze.
CZ19962629A 1995-09-14 1996-09-09 Derivát peptidu, jeho použití a farmaceutický prostředek, který ho obsahuje CZ291506B6 (cs)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DE19534016A DE19534016A1 (de) 1995-09-14 1995-09-14 Biotinderivate

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CZ262996A3 CZ262996A3 (cs) 1998-02-18
CZ291506B6 true CZ291506B6 (cs) 2003-03-12

Family

ID=7772112

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CZ19962629A CZ291506B6 (cs) 1995-09-14 1996-09-09 Derivát peptidu, jeho použití a farmaceutický prostředek, který ho obsahuje

Country Status (23)

Country Link
EP (1) EP0771818B1 (cs)
JP (1) JP4127325B2 (cs)
KR (1) KR970015597A (cs)
CN (1) CN1168738C (cs)
AT (1) ATE215558T1 (cs)
AU (1) AU719307B2 (cs)
BR (1) BR9603741A (cs)
CA (1) CA2185394C (cs)
CZ (1) CZ291506B6 (cs)
DE (2) DE19534016A1 (cs)
DK (1) DK0771818T3 (cs)
ES (1) ES2174007T3 (cs)
HU (1) HUP9602223A3 (cs)
MX (1) MX9604019A (cs)
NO (1) NO314694B1 (cs)
PL (1) PL316069A1 (cs)
PT (1) PT771818E (cs)
RU (1) RU2171807C2 (cs)
SI (1) SI0771818T1 (cs)
SK (1) SK283129B6 (cs)
TW (1) TW517063B (cs)
UA (1) UA41981C2 (cs)
ZA (1) ZA967765B (cs)

Families Citing this family (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP1140193A2 (en) 1998-12-23 2001-10-10 G.D. SEARLE & CO. Use of an integrin antagonist and one or more antineoplastic agents as a combination therapy in the treatment of neoplasia
WO2001058931A1 (en) * 2000-02-11 2001-08-16 Duke University Method of treating disorders of the eye
KR100778633B1 (ko) * 2007-04-13 2007-11-28 성균관대학교산학협력단 비오틴과 비오틴-폴리에틸렌글리콜이 접합된 ｇｌｐ-1유도체, 이의 제조방법 및 이를 포함하는 약학 조성물
CN101990425B (zh) * 2008-04-08 2016-01-20 默克专利股份有限公司 包含环肽的组合物和使用方法
CN108956790A (zh) * 2017-05-18 2018-12-07 中国人民解放军第二军医大学第二附属医院 一组氨基酸标志物在急性肾损伤诊断试剂盒中的应用
CN113827591B (zh) * 2021-11-09 2023-06-09 上海市肺科医院 生物素在制备治疗脓毒症药物中的应用

Family Cites Families (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS5315076B2 (cs) * 1973-09-27 1978-05-22
JP2945680B2 (ja) * 1988-09-09 1999-09-06 旭硝子株式会社 ペプチド誘導体およびその用途
US5087561A (en) * 1990-06-28 1992-02-11 Merck & Co., Inc. Humoral hypercalcemic factor antagonists modified at position 13 by biotin
US6287792B1 (en) * 1991-06-17 2001-09-11 The Regents Of The University Of California Drug delivery of antisense oligonucleotides and peptides to tissues in vivo and to cells using avidin-biotin technology
DE4310643A1 (de) * 1993-04-01 1994-10-06 Merck Patent Gmbh Cyclische Adhäsionsinhibitoren
DE4336758A1 (de) * 1993-10-28 1995-05-04 Merck Patent Gmbh Lineare Adhäsionsinhibitoren

Also Published As

Publication number Publication date
JPH09124692A (ja) 1997-05-13
EP0771818A3 (de) 1997-07-02
SK115696A3 (en) 1997-05-07
ZA967765B (en) 1997-03-26
HU9602223D0 (en) 1996-10-28
CN1153784A (zh) 1997-07-09
PT771818E (pt) 2002-09-30
SI0771818T1 (en) 2002-10-31
HUP9602223A3 (en) 1998-03-02
DE19534016A1 (de) 1997-03-20
CA2185394A1 (en) 1997-03-15
RU2171807C2 (ru) 2001-08-10
JP4127325B2 (ja) 2008-07-30
SK283129B6 (sk) 2003-02-04
MX9604019A (es) 1997-03-29
PL316069A1 (en) 1997-03-17
BR9603741A (pt) 1998-06-02
ATE215558T1 (de) 2002-04-15
EP0771818B1 (de) 2002-04-03
DE59608995D1 (de) 2002-05-08
NO963851L (no) 1997-03-17
DK0771818T3 (da) 2002-07-29
CA2185394C (en) 2007-05-01
AU719307B2 (en) 2000-05-04
TW517063B (en) 2003-01-11
NO314694B1 (no) 2003-05-05
AU6551896A (en) 1997-03-20
HUP9602223A2 (en) 1997-06-30
KR970015597A (ko) 1997-04-28
CN1168738C (zh) 2004-09-29
EP0771818A2 (de) 1997-05-07
NO963851D0 (no) 1996-09-13
ES2174007T3 (es) 2002-11-01
CZ262996A3 (cs) 1998-02-18
UA41981C2 (uk) 2001-10-15

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CZ286713B6 (en) Cyclopeptide, process of its preparation and use as well as pharmaceutical preparation in which it is comprised
KR100360831B1 (ko) 시클로펩티드유도체및이의제조방법
MXPA96004100A (en) Cyclic compounds, adhes inhibitors
KR100438378B1 (ko) 고리형부착억제제
AU716847B2 (en) Cyclopeptide derivatives
CZ20012212A3 (cs) Peptidická sloučenina, její použití a farmaceutický prostředek, který ji obsahuje
US6534478B1 (en) Cyclic azapeptides with angiogenic effect
CZ291506B6 (cs) Derivát peptidu, jeho použití a farmaceutický prostředek, který ho obsahuje
CZ235293A3 (en) Glycopeptides
CZ20014484A3 (cs) Inhibitory integrinu alfa v beta 6
CZ465899A3 (cs) Derivát cyklického azapeptidu s angiogenním působením
SK8052001A3 (en) Peptide compound, the use thereof and pharmaceutical composition comprising the same
MXPA99011999A (en) Cyclic azapeptides with angiogenic effect

Legal Events

Date Code Title Description
PD00 Pending as of 2000-06-30 in czech republic
MM4A Patent lapsed due to non-payment of fee

Effective date: 20030909