CZ262996A3 - Derivát biotinylovaného peptidu, způsob jeho přípravy a použití a farmaceutický prostředek, který ho obsahuje - Google Patents

Derivát biotinylovaného peptidu, způsob jeho přípravy a použití a farmaceutický prostředek, který ho obsahuje Download PDF

Info

Publication number
CZ262996A3
CZ262996A3 CZ962629A CZ262996A CZ262996A3 CZ 262996 A3 CZ262996 A3 CZ 262996A3 CZ 962629 A CZ962629 A CZ 962629A CZ 262996 A CZ262996 A CZ 262996A CZ 262996 A3 CZ262996 A3 CZ 262996A3
Authority
CZ
Czechia
Prior art keywords
asp
gly
lys
ala
pro
Prior art date
Application number
CZ962629A
Other languages
English (en)
Other versions
CZ291506B6 (cs
Inventor
Alfred Dr. Jonczyk
Simon Dr. Goodman
Beate Dr. Diefenbach
Horst Prof. Dr. Kessler
Dirk Finsinger
Original Assignee
Merck Patent Gesellschaft Mit Beschränkter Haftunfg
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Merck Patent Gesellschaft Mit Beschränkter Haftunfg filed Critical Merck Patent Gesellschaft Mit Beschränkter Haftunfg
Publication of CZ262996A3 publication Critical patent/CZ262996A3/cs
Publication of CZ291506B6 publication Critical patent/CZ291506B6/cs

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
    • C07K7/06—Linear peptides containing only normal peptide links having 5 to 11 amino acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/78—Connective tissue peptides, e.g. collagen, elastin, laminin, fibronectin, vitronectin or cold insoluble globulin [CIG]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
    • A61P19/10—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease for osteoporosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/02—Nutrients, e.g. vitamins, minerals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/08—Vasodilators for multiple indications
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01D—SEPARATION
    • B01D15/00—Separating processes involving the treatment of liquids with solid sorbents; Apparatus therefor
    • B01D15/08—Selective adsorption, e.g. chromatography
    • B01D15/26—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by the separation mechanism
    • B01D15/38—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by the separation mechanism involving specific interaction not covered by one or more of groups B01D15/265 and B01D15/30 - B01D15/36, e.g. affinity, ligand exchange or chiral chromatography
    • B01D15/3804—Affinity chromatography
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
    • C07K1/14—Extraction; Separation; Purification
    • C07K1/16—Extraction; Separation; Purification by chromatography
    • C07K1/22—Affinity chromatography or related techniques based upon selective absorption processes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C07K14/70546—Integrin superfamily
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/745—Blood coagulation or fibrinolysis factors
    • C07K14/75—Fibrinogen
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/531—Production of immunochemical test materials
    • G01N33/532—Production of labelled immunochemicals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Vascular Medicine (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Microbiology (AREA)

Description

Oblast techniky i
J_i —_V„y,n á, l.a z_.s.e _±-ý k á_ d. e,r.i.v.á.t.u.„b.i, o.t, i.n,y,lo3í.a n.é h.o p,e.p .t .i.d.u.,_k t. e r.ý„s.e„ ! dobře snáší a má hodnotné farmakologické vlastnosti, jelikož je inhibitorem integrinu, takže je vhodný pro výrobu farmaceutických prostředků. Vynález se také týká způsobu jeho přípravy a farmaceutického prostředku, který ho obsahuje.
Dosavadní stav techniky
Podobné deriváty biotinylovaného peptidu jsou popsány například ve světovém patentovém spise číslo WO 9415956 {biotinylované endothelinové receptorové antagonisty), ve světovém patentovém spise číslo WO 9413313 (biotinylované LHRH antagonisty) a ve světovém patentovém spise číslo WO 9418325 (biotinylované nekrosové faktory).
Biotinylaci peptidů v průběhu syntézy v pevné fázi na prys..______. kyř ici ^...za...ú.čeLem. ..z.l.e.p.š..e.n.í. .m.o.žn.os±.i____č iš.t.ě.ní_-popsal.-,. L.o.b.l__a_.k.o_l. ,.
— ·. (Anal. Biochem., 170, str. 502, 1988 )
Podobné sloučeniny cyklických a lineárních peptidů jsou známy z německých patentových spisů číslo DE 43 10643, DE 43 36 758, z evropského patentového spisu číslo EP 0 406 428 a ze světového | patentového spisu číslo W0 89/05150.
Úkolem vynálezu je vyvinout nové sloučeniny s hodnotnými vlastnostmi, zvláště sloučeniny a jejich fysiologicky vhodné soli, kterých lze použít pro výrobu léčiv.
Podstata vynálezu
Podstatou vynálezu je nový derivát derivátu biotinylovaného peptidu obecného vzorce I kde
H
S
Q (i) chybí nebo znamená skupinu -NH-{CH2)n-CO- nebo
-NH-(CH2)n-NHRl znamená skupinu X-Arg-Gly-Asp-Y, A-cys-(R2)-B-U nebo cyklo(Arg-Gly-Asp-Z) , přičemž. Z v postranním řetězci je vázáno na Q a pokud Q chybí na biotin,
X a Y znamená vždy na sobě nezávisle zbytek aminokyseliny nebo zbytek di-, tri- tetra- nebo pentapeptidu, přičemž jsou aminokyseliny na sobě nezávisle voleny ze souboru zahrnujícího Ala, Asn, Asp, Arg, Cys, Gin, Glu, Gly, 4-Hal-Phe, His, homo-Phe, Ile, Leu, Lys, Met, Nle, Phe, Phg, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr a Val, přičemž tyto kyseliny jsou popřípadě derivatizovaný,
A. chybí nebo znamená Asp nebo fragment peptidu volený ze souboru zahrnujícího
Ala-Asp, Thr-Ala-Asp, Lys-Thr-Ala-Asp, Lys-Thr-Ala-Asn, Lys-Thr-Gly-Asp,
Lys-Ala-AIa-Asp, Arg-Thr-Ata-Asp, Ser-Ala-Asp, Gln-Ser-Ala-Asp, Glp-Ser-AIa-Asp, Gly-Lys-Thr-Ata-Asp, Asn-Gly-Lys-Thr-Ala-Asp, tle-Ser-Ala-Gly,
Arg-Ser-Ala-Gly, Cys-Asn-Gly-Lys-Thr-Ala-Asp,
Tyr-Cys-Asn-Gly-Lys-Thr-Ala-Asp,
Asp-Tyr-Cys-Asn-Gly-Lys-Thr-Ala-Asp,
Asp-Asp-Tyr-Cys-Asn-Gly-Lys-Thr-Ala-Asp,
GIy-Lys-Thr-Cys(Trt)-A$p,
Met-Asp-Asp-Tyr-Cys-Asn-Gty-Lys-Thr-AJa-Asp,
Asp-Met-Asp-Asp-Tyr-Cys-Asn-Gly-Lys-Tbr-Ala-Asp,
B chybí nebo znamená OH, Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gin, Glu,
Gly, His, Ile, Leu, Lys, Met, Orn, Phe, 4-Hal-Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr a Val, nebo na atomu dusíku methylovaný derivát těchto aminokyselinových zbytků nebo znamená fragment peptidu ze souboru zahrnujícího Pro-Arg, Pro-Arg-Asn, Pro-Arg-Asn-Pro, Pro-Arg-Asn-Pro-His,
Pro-Ařg-Asn-Pro-His-Lys,
Pro-Arg-Asn-Pro-His-Lys-Gly,
Pro-Arg-Asn-Pro-His-Lys-Gly-Pro, Pro-Arg-Asn-Pro-His-Lys-Gly-Pro-Ala,, Pro-Arg-Asn-Pro-His-Lys-Gly-Pro-Ala-Thr, přičemž pokud R1 znamená skupinu A-Cys-(R2)-B-U, může chybět pouze jedna ze skupin symbolu A nebo B, a dále znamená R2 atom vodíku, alkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku, Trt,
Dpm nebo Bzl,
U OH, OR’, NH2, NHR’ nebo N(R’)2,
Z vždy na sobě nezávisle zbytek aminokyseliny nebo zbytek di-, tri- nebo tetrapeptidu, přičemž jsou aminokyseliny na sobě nezávisle voleny ze souboru zahrnujícího Ala, Asn, Asp, Arg, Cys, Gin, Glu, Gly, His, Ile, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr a Val nebo M, přičemž tyto aminokyseliny jsou popřípadě der i vátizovány , a aminokyselinové zbytky jsou navzájem peptidově vázány přes α-aminoskupiny a ct-karboxylové skupiny a skupina M je vždy obsazena,
M skupinu NH(R8)-CH(R3)-COOH,
R3 -RS-RO, -R6-R4, -R7-R4,
Ra skupinu OH, NH2, SH nebo COOH^
R5 alkylenovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku,
R6 alkylenfenylovou skupinu se 7 až 14 atomy uhlíku,
R7 alkylenfenylalkylenovou skupinu se 8 až 15 atomy uhlíku,
R8 atom vodíku, alkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku nebo alkylenfenylovou skupinu se 7 až 12 atomy uhlíku,
R9 alkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku
Hal atom fluoru, chloru, bromu nebo jodu a η 1 , 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 nebo 10, a pokud derivát obsahuje zbytky opticky aktivních aminokyselin a derivátů opticky aktivních aminokyselin D a L formy derivátu a jeho farmaceuticky vhodné soli.
Zjistilo se totiž, že nové sloučeniny obecného vzorce I a jejich fysiologicky vhodné soli při dobré snášenlivosti mají hodnotné farmakologické vlastnosti. Především působí jako inhibitory „ integrinu, přičemž zvláště brzdí vzájemné působení ct v -, β3- nebo i
\_P.s^.i,nt.e.gx..i.nQxýc.h_r.ejc..e.p.to.c.ů-s^.Lig.a.nAjL>—j.a.ko_na,p.ř. í.k.1 ad^á.z á.n.í_fjbjz, t rinogenu na p3-integrinový receptor. Obzvláště vysokou účinnost vykazují sloučeniny obecného vzorce I v případě integrinů (Χνβ3 , £Χνβ5, otiib[33, Κνβι ανβό 0£νβ8. Toto působení je možno dokázat způsobem, který popsal J.W. Smith a kol. (J. Biol. Chem. 265,
- --------------str . -12267 až 12271 , 1990)------------- - - - ...... - - - ------------.-------------—
Závislost vzniku angiogenese na vzájemném působení mezi vaskulárními integriny a extracelulárními matricovými proteiny popsal P.C, Brooks, R.A. Clark a D.A. Cheresh (Science 264, str. 569 až 571).
Možnost inhibice vzájemného působení a tím navození apoptosis (programované smrti buněk) angiogenních vaskulárních buněk cyklickým peptidem popsal P.C. Brooks, A.M. Montgomery, M. Rosenfeld, R.A. Reisfeld, T.-Hu, G. Klier a D.A. Cheresh (Cell 79, str. 1157 až 1164, 1994) .
.........Sloučeniny -o b e c n é h o“ v z o ř ce—fT“k te ré -bl o k u-j-f—v z á_j e m né - p ůs ob e ní integrlnových receptorů a ligandů, jako například fibrinogen na fibrinogenovém receptorů (glykoprotein Ilb/IIIa) brání jakožto . GPIIb/IIIa antagonisty šíření nádorových buněk prostřednictvím •4 , , metastáz. Tento poznatek dokládají následující pozorování:
i v l Síření nádorových buněk z jednoho místního nádoru do vaskulárního systému probíhá vázáním míkroagregátů (mikrothrombň) vzájemným působením nádorových buněk a krevních destiček. Nádorové buňky jsou chráněním v mikroagregátech odstíněny a nejsou rozpoznány buňkami imunního systému.
Mikroagregáty se mohou pevně zachytit na stěnách cév, čímž se usnadňuje další pronikání nádorových buněk do tkáně. Jelikož vázání mikrothrombů fibrinogenovými vazbami na fibrinogenové re5 ceptory je zprostředkováváno na aktivovaných krevních destičkách, mohou být GPIIa/IIIb-antagonisty považovány za účinnou brzdu metastáz.
Sloučeniny podle vynálezu obecného vzorce I se mohou používat jako účinné látky v humánní a veterinární medicíně, zejména v profylaxi a/nebo léčení thrombos, myokardiálního infarktu, , arteriosklerosy, zánětů, apoplexie, anginy pektoris, nádorových
I
X_o.n.e.m.o.c.n.ěn.L,^o.sXe1QXyXi.c.k,ý.c.h„Q,nje,m£t.c.niěn.írf, jAk,Q„j„e^.o,s t,e,o ρ.οχοε a pato,- _ logických angiogenních onemocnění, jako jsou například záněty, ofthalmologických onemocnění, diabetické retinopathie, svalové degenerace, myopie, oční histoplasmosy, rheumatické arthritis, osteoarthritis, rubeotického glaukomu, nádorové kolitis, Crohnovy — ·. nemoc i,-atherosklerosy, lupenky, restenosy po angioplast i i , virál-------------ní infekce, bakteriální infekce, houbová infekce, při akutním selhání ledvin a při hojení ran k podpore procesu hojení.
Sloučenin obecného vzorce I se může používat jakožto ant i mikrobiálně účinných látek při operacích, kdy se používá biologických materiálů, implantátů, katheterů nebo stimulátorů srdce.
Působí totiž antiseptický. Účinnost antimikrobiální aktivity se může doložit způsobem, který popsal P.Valentin-Weigund a kol. (Infection and Immunity, str. 2851 až 2855, 1988).
Jelikož sloučeniny obecného vzorce I představují inhibitory v-^z£n£ - f ibr irrogénu“ a “ t ím “ligandů f ibrinogenových 'receptroů -na - -...........
krevních destičkách, může se jich používat jakožto diagnostik k detekci a lokalizaci thromhi^ ve vaskulárním systému in vivo, . jelikož biotinylový zbytek představuje zbytek detekovatelný ultrafialovými paprsky.
; Sloučeniny obecného vzorce I se mohou jakožto inhibitory vázání fihrinogenu používat také jakožto účinné pomocné látky při studiu metabolismu krevních destiček v různých aktivačních stadiích nebo při studiu intracelulárních signálních mechanismů receptorů fihrinogenu. Detekovatelná jednotka “biotinového značení umožňuje po vázání na receptor zkoumat uvedené mechanismy.
Používané zkratky aminokyselin mají následující význam:
Abu 4-aminomáselná kyselina
Aha
Ala
Asn
Asp
Arg
Cys
Dab
Jaj.
- -- <í
Gin
Glp
Glu
Gly
His homo-Phe
Ile
Leu
Lys
Met
Nle
Orn
Phe
Phg
4-Hal-Phe
Pro
Ser
Thr
Trp
Tyr
Val ’
6-aminohexanová kyselina, 6-aminokapronová kyselina alanin aspáragin asparagová kyselina arginin cystein
2,4-diaminomáselná kyselina .2.,_3jz_d.ia.m,i.noprppip.npy,á_ky_sei , ......._ glutamin proglutarainová kyselina glutaroinová kyselina glycin histidin— -------. v--- -------------------------homo-f enylalanin isoleucin leucin lysin methionin norleucin ornitin fenylalanin fenylglycin
4“-haTog en f eny Ta ta ni n ——. .
prolin serin threonin tryptof an tyrosin valin
Bit
O
H
; j
Dále znamená
BOC terč.-butoxykarbony1
CBZ benzyloxykarbonyl
DCCl dicyklohexylkarbodiimid
DMF dimethylformamid
Et ethyl , Fraoc 9-fluorenylmethoxykarbony1 _ KuBt i-hydroxybenzotri azol_, .
„ Me methyl
MBHA 4-methylbenzhydrylamin
Mtr 4-methoxy-2,3,6-trimethylfenylsulfonyl
OBut terč.-butylester
OMe____, _ methyl ester_______ _________________________ ____________________ _______- ______________-______.
OEt ethylester
POA fenoxyacetyl
TFA trifluoroctovou kyselinu
Trt trityl (trifenylmethyl)
Pokud mohou být shora uvedené aminokyseliny v několika enantiomerních formách, zahrnuje vynález vždy všechny tyto formy a jejich směsi (například DL-formy) například jakožto podíly sloučeniny obecného vzorce I. Kromě toho mohou mít aminokyseliny, například jakožto podíly sloučenin obecného vzorce I, odpovídající, —, ~ —-o- sobě- známé- eh-rá-n-í-c í--skupiny-;------------------------ ........----- .—
Vynález se rovně týká prodrogových derivátů, to znamená sloučenin obecného vzorce I, které jsou obměněny alkylovými . skupinami nebo acylovými skupinami, cukry nebo oligopeptidy, které se v organismu rychle štěpí za uvolnění účinné sloučeniny podle vynálezu obecného vzorce I.
Způsob přípravy sloučenin obecného vzorce I a jejich solí spočívá podle vynálezu v tom, že se
a) nechává reagovat sloučenina obecného vzorce II
H-Q-R1 (II) kde Q a R1 mají shora uvedený význam, acylační reakcí se sloučeninou obecného vzorce III s
(in) kde znamená
L atom chloru, bromu, jodu nebo volnou nebo reaktivní funkčně obměněnou hydroxylovou skupinu, nebo
b) se nechává reagovat sloučenina obecného vzorce IV _ . _ ...__________.. ________ ......H-Rl.............. _ __________.. (IV) . .
kde R1 má shora uvedený význam, acylační reakcí se sloučeninou obecného vzorce V
(V) kde -Q má* shora~ uveďený vý znam-, - a -kde—známená-—- ---------—--------------L atom vodíku, chloru, bromu, jodu nebo volnou nebo reaktivní funkčně obměněnou hydroxylovou skupinu, nebo
c) se sloučenina obecného vzorce I uvolňuje ze svého funkčního derivátu zpracováním solvolyzačním nebo hydrogenolyzačním Činidlem, a/nebo se zásaditá nebo kyselá sloučenina Obecného vzorce I zpracováním kyselinou nebo zásadou převádí na svoji sůl.
Jednotlivé skupiny symbolu Q, R1 a L v obecných vzorcích I, II a III mají vždy shora uvedený význam pokud není uvedeno jinak.
V obecném vzorci I je alkylovou skupinou především skupina methylová, ethylová, isopropylová a terč.-butylová.
Alkylenem je s výhodou methylen, ethylen, propylen, butylenpefityFen nebo hexylen.
Alkylenfenylem je s výhodnou benzyl nebo fenethyl.
Alkylenfenylaikylenem je s výhodnou 4-methylenbenzyl nebo
4-ethylenbenzy1.
Skupinou symbolu -R6-R4 je s výhodou 2-, 3- nebo 4-hydroxybenzyl, 2-, 3- nebo 4-aminobenzyl, 2-, 3- nebo 4-merkaptobenzyl, -2-,-3- nebo 4-karboxybenzyl,.dále s výhodou 2-, 3- nebo 4„Jixd.ro,x.y£ eu e,thy.L,^.,2x.,__3- „nebo_Azano£enethylΛ3- nebo_4;mer?
kaptofenethyl, 2-, 3- nebo 4-karboxyfenethyl.
- Symbol Q znamená s výhodou zbytek 6-aminohexanové kyseliny (6-aminokapronové kyseliny) nebo chybí.
Symbol M znamená s výhodou Dap, Ser, Cys, Asp, D-Asp, Dab, homoserin, homocystein, Glu,— D-Glu ,-----Thr, Orn, Lys, D-Lys,
4-aminomethyl-Phe nebo 4-aminomethyl-D-Phe.
Symbol X znamená s výhodou Ala, Asn, Asp, Arg, Cys, Gin, Glu, Gly, His, Ile, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp,- Tyr nebo Val a dále s výhodou
Lys-GTy, Lyš-Ala.Lys-p-Ala, Tyr-Gly, Tyr-Ala, Tyr-p-Ala, Phe-Gly, Phe-Aía,
Phe-p-Ala, Tyr-Gly-Gly, Phe-Gly-Gly, Lys-Gly-Gly, Tyr-GIy-Ala,
Phe-GIy-Ala, Lys-Gly-Ala, Arg-Gly-Asp, Lys-Gly-GIy-Gly, Tyr-Gly-Gly-Gly, Phe-Gly-Gly-Gly, Lys-Gly-Gly-Ala, Tyr-Gly-Gly-Ala, Phe-Gly-Gly-AIa,
Lys-Gly-G!y-3-Ala, Tyr-Gly-Gly-p-Ala, Phe-Gly-Gly-p-AIa, ferner auch Lys-G lý-Gly-Glý^Glý7Tyř-Gly-0lý-<Slý-^ýyly-Gly, ~ r , Lys-Gly-Gly-AIa-Gly, Tyr-G ly-G ly-Ala-Gly, Phe-Gly-Gly-AIa-Gly,
Lys-G ly-G ly-p-Ala-GIy, Tyr-Gly-Gly-p-Ala-Gly oder Phe-GIy-Gly-3-Ala-Gly.
Symbol Y znamená s výhodou Ala, Asn, Asp, Arg, Cys, Gin, Glu, Gly, His, Ile, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr nebo Val a dále s výhodou
Tyr-Ala, Tyr-Asn, Tyr-Asp, Tyr-Arg, Tyr-Cys, Tyr-GIn, Tyr-GIu, Tyr-Gly,
Tyr-Hís, Tyr-lle, Tyr-Leu, Tyr-Lys, Tyr-Met, Tyr-Phe, Tyr-Pro, Tyr-Ser,
Tyr-Thr, Tyr-Trp, Tyr-Tyr.Tyr-Val, Phe-Ala, Phe-Asn, Phe-Asp, Phe-Arg,
Phe-Cys, Phe-GIn, Phe-Glu, Phe-Gly, Phe-His, Phe-lle, Phe-Leu,
Phe-Lys, Phe-Met, Phe-Phe, Phe-Pro, Phe-Ser, Phe-Thr, Phe-Trp,
Phe-Tyr, Phe-Val, Trp-Ala, Trp-Asn, Trp-Asp, Trp-Arg, Trp-Cys, Trp-GIn, Trp-Glu, Trp-Gly, Trp-His, Trp-lle, Trp-Leu, Trp-Lys, Trp-Met, Trp-Phe, Trp-Pro, Trp-Ser, Trp-Thr, Trp-Trp, Trp-Tyr, Trp-Val, Asp-Ala, Asp-Asn. Asp-Asp, Asp-Arg, Asp-Cys, Asp-GIn, Asp-Glu, Asp-Gly, Asp-His, Asp-tle, Asp-Leu, Asp-Lys, Asp-Met, Asp-Phe, Asp-Pro, Asp-Ser, Asp-Thr, Asp-Trp, Asp-Tyr, Asp-Vat, Ser-Pro-Lys, Tyr-Pro-Lys, Phe-Pro-Lys, Trp-Pro-Lys, Asp-Pro-Lys, Ser-Gly-Lys, Tyr-Gly-Lys, Phe-Gly-Lys, Trp-Gly-Lys, Asp-Gly-Lys, Ser-Ala-Lys, Tyr-Ala-Lys, Phe-Ala-Lys, „Trp-Ala.-Lys. Asp-Áia-Lys, SĚf-rrú-Aia. Ser-Lcu-Lys, Tyr-Leu-Lys,
Phe-Leu-Lys, Trp-Leu-Lys, Asp-Leu-Lys, Ser-lle-Lys, Tyr-lle-Lys, Phe-He-Lys, Trp-IIe-Lys, Asp-lle-Lys, Ser-Pro-AIa-Ser, Tyr-Pro-Ala-Ser, Phe-Pro-Ala-Ser, Trp-Pro-Ala-Ser, Asp-Pro-Ala-Ser, Šer-Gly-Ala-Ser, Tyr-Gly-Ala-Ser, Phe-Gly-Ala-Ser, Trp-Gly-Ala-Ser, Asp-Gly-Ala-Ser, Ser-Ala-Ala-Ser, Tyr-Ala-Ala-Ser, Phe-Ala-Ala-Ser, Trp-Ala-Ala-Ser, Asp-Ala-Ala-Ser, Ser-Val-Ala-Ser, Tyr-Vál-Ala-Ser, Phe-Val-Ala-Ser, Trp-Vaf-Ala-Ser, Asp-Val-Ala-Ser, Ser-Leu-Ala-Ser, Tyr-Leu-Ala-Ser, Phe-Leu-Ala-Ser, Trp-Leu-Ala-Ser, Asp-Leu-Ala-Ser, Ser-Ile-Ala-Ser, Tyr-lle-Ala-Ser, Phe-lle-Ala-Ser, Trp-lle-Ala-Ser, Asp-lle-Ala-Ser, .tak/ Ser-Pro-Ala-Ser-Ser.Tyr-Pro-Ala-Ser-Ser, Phe-Pro-AIa-Ser-Ser, Trp-Pro-Ata-Ser-Ser, Asp-Pro-Ala-Ser-Ser, Ser-Gly-Ala-Ser-Ser, Tyr-GIy-AIa-Ser-Ser, Phe-Gíy-Ala-Ser-Ser, Trp-Gly-AIa-Ser-Ser, Asp-Gly-Ala-Ser-Ser, Ser-Ala-Ala-Ser-Ser, Tyr-Ala-Ala-Ser-Ser, Phe-Ala-Ala-Ser-Ser, Trp-Ata-Ala-Ser-Ser, Asp-Ata-Ala-Ser-Ser,
Ser-Vaí-Ala-Ser-Ser. Tyr-Val-Ala-Ser-Ser, Phe-Val-Ala-Ser_-Ser,______
Trp-Val-Ala-Ser-Ser, Asp-Val-AIa-Ser-Ser, Ser-Leu-Ala-Ser-Ser, Tyr-Leu-Ala-Ser-Ser, Phe-Leu-Ala-Ser-Ser, Trp-Leu-AIa-Ser-Ser, Asp-Leu-Ala-Ser-Ser, Ser-lte-Ala-Ser-Ser, Tyr-tle-Ala-Ser-Ser, Phe-lle-Ala-Ser-Ser, Trp-lte-Ala-Ser-Ser oder Asp-lle-Ala-Ser-Ser.
Aminokyseliny a aminokyselinové zbytky,.uváděné jakožto významy symbolů X, Y, Z, mohou být ve formě drivátů, přičemž jsou výhodnými N-methylové, N-ethylové, N-propylové, N-benzylové nebo Ca-methylové deriváty. Dále jsou výhodnými deriváty Asp a Glu, zvláště methyl-, ethyl-, propyl-, butyl-, terč.-butyl-, neopentyl- nebo N-benzylesterové deriváty karboxyskupin vedlejších řetězců, dále také derivát Arg, substituovaný na -NH~C(= NH)-NH2 skupině acetylovým, benzoylovým, methoxykarbonylovým nebo ethoxykarbonylovým zbytkem.
Kromě toho mohou mít aminokyseliny a jejich zbytky, uváděné jakožto významy symbolů X a Y, odpovídající o sobě známé chránící skupiny.
Symbol Z znamená s výhodou M, dále s výhodou D-Phe-M, D-Trp-M,
D-Tyr-M, D-Phe-Lys, D-Phe-D-Lys, D-Trp-Lys, D-Trp-D-Lys, D-Tyr-Lys, “D-Tyr=D-Lys7D-Phe=0rnrD-Phe-DabrD-Phe-Dap,.D-Rhe-D-0rn,----—
D-Phe-D-Dab, D-Phe-D-Dap, D-Phe-4-á.minomethyl-Phe, D-Phe-4-imínomethyl-D-Phe, Ď-Trp-4-4minomethyl-Phe, D-Trp-4-áminomethyl-D-Phe, D-Tyr-4-a.minomethyl-Phe, D-Tyr-4-Aminomethyl-D-Phe, D-Phe-Asp,
D-Phe-D-Asp, D-Trp-Asp, D-Trp-D-Asp, D-Tyr-Asp, D-Tyr-D-Asp,
D-Tyr-D-Cys, Phe-D-Lys, Trp-D-Lys, Tyr-D-Lys, Phe-Orn, Phe-Dab,
Phe-Dap, Trp-Orn, Trp-Dab, Trp-Dap. Tyr-Orn, Tyr-Dab, Tyr-Dap, Phe-4-áminomethyl-D-Phe, Trp-4--4mÍnomethyl-D-Phe, TyM-aminomethyl-D-Phe, Phe-D-Asp, Trp-D-Asp, Tyr-D-Asp, Phe-D-Cys,
Trp-D-Cys, Tyr-D-Cys, D-Phe-Lys-Gly, D-Phe-M-Gty, D-Trp-Lys-Gly,
D-Trp-M-Gly, D-Tyr-Lys-Gly, D-Tyr-M-Gly, D-Phe-Val-Lys, D-Phe-GIy-Lys, D-Phe-Ala-Lys, D-Phe-lle-Lys, D-Phe-Leu-Lys, D-Trp-Val-Lys,
D-Trp-Gly-Lys, D-Trp-Ala-Lys, D-Trp-lfe-Lys, D-Trp-Leu-Lys,
D-Tyr-Val-Lys, D-Tyr-Gly-Lys, D-Tyr-Ala-Lys, D-Tyr-lle-Lys,
Ď-Tyr-Leu-Lys i&ke ~M-Pro-Ala-Séř-Sér. ’ - Sloučeniny obecného vzorce I mohou mít jedno nebo několik chirálních center, a proto mohou být v různých stereoisomerních formách, přičemž obecný vzorec I všechny tyto formy zahrnuje.
Vynález se zvláště týká sloučenin obecného vzorce I, ve kterých alespoň jedna ze shora uvedených skupin má alespoň jeden shora .uvedený výhodný význam. Některé výhodné skupiny sloučenin mohou být vyjádřeny následujícícmi obecnými vzorci la až If, které odpovídají obecnému vzorci I, přičemž blíže nespecifikované skupiny mají význam, uvedený u obecného vzorce I, přičemž však znamená v obecném vzorci
Iá ’ Q 1 chybí a
R1 X-Arg-Gly-Asp-Y f lb. . Q .....-NH-(CH2)s-CO' A r1 X-Arg-Gly-Asp-Y:
lc Q -NH-(CH2)s-CO-: A ~p/-——cyclo-(Arg-Gty-Asp-Z)— ~—— ...............................
Id Q -NH-(CK2)s-CO- A r1 cyclo-(Arg-GIy-Asp-M) le Q ' ' -NH-(CH2)s-CO- * ~ ' · r1 A-Cys(R2)-B lf Q -NH-íCHJn-CO-, r1 X-Arg-Gty-Asp-Y &n 1,2,3,4,5 náo 6
Sloučeniny obecného vzorce I a výchozí látky pro jejich přípravu se připravují o sobě známými způsoby, které jsou popsány -V“'l i t er atuř e—( např í klaď v e s tandardn ích—publ i kac ích -j ako -Houben-,,,K.ey.l, ...Met hoden der organischen Chemie, Georg-Thíeme Verlag , Stuttgart), a to za reakčních podmínek, které jsou pro jmenované reakce známy a vhodné. Přitom se může také používat o sobě známých, zde blíže nepopisovaných variant.
Výchozí látky se mohou popřípadě vytvářet také in šitu tak, že se z reakční směsi neizolují, nýbrž se ihned nechávají dále reagovat na sloučeniny obecného vzorce I.
S výhodou se sloučeniny obecného vzorce I připravují tak, Že nechávají reagovat sloučeniny obecného vzorce II se sloučeninami obecného vzorce III, přičemž jednotlivé symboly mají shora uvedený význam.
Sloučeniny obecného vzorce II a obecného vzorce III jsou zpravidla známy. Pokud nejsou známy, mohou se připravovat o sobě známými způsoby..
Ve sloučeninách obecného vzorce III znamená zbytek -CO-L zbytek předaktivované karboxylové kyseliny, s výhodou halogenidu karboxylové kyseliny, symetrického nebo nesymetrického anhydridu nebo aktivního esteru. Takové zbytky k aktivaci karboxylové skupiny v typických acylačních reakcích jsou popsány v literatuře ( Γι U ni’ τ' Ir 1 λ J i J. iy j_ ςχνί V C standardních publikacích jako Kouhen-weyi, Methode.n, der organischen Chemie, Georg-Thieme Verlag, Stuttgart). Aktivované estery se účelně vytvářejí in šitu, například přísadou HOBt nebo N-hydroxysukcinimidu. L znamená s výhodou atom vodíku, chloru, bromu, jodu nebo -ON-sukcinimid.
Reakce se provádí z p r a v i d1a v inertním organ ick ém . ro z p o u š-____ tědle v přítomnosti činidla vázajícího kyselinu s výhodou v přítomnosti organické zásady, jako jsou triethylamin, dimethylanilin, pyridin nebo chinolin nebo v nadbytku karboxylové složky obecného vzorce III. Může být příznivá přísada hydroxidu, uhličitanu nebo hydrogenuhličitanu alkalického kovu nebo kovu alkalické zeminy nebo jiné soli slabé kyseliny alkalického kovu nebo kovu alkalické zeminy, s výhodou draslíku, sodíku, vápníku nebo cesia. Reaskční doba je podle reakčních podmínek několik minut až 14 dní, přičemž reakčni teplota je přibližně -30 až 140 C, zpravid_ .l.a -1Ό ..až—90. /-C—a zvláště- p-ř i-b-l-i-ž-ně-O-a-ž- -př i-bl-ižně --70-- ’ C ;------------ —
Jakožto inertní rozpouštědla jsou vhodné například uhlovodíky jako hexan, petroether, benzen, toluen nebo xylen; chlorované uhlovodíky jako trichlorethylen, 1,2-dichlorethan nebo tetrachormethan, chloroform nebo dichlormethan; alkoholy jako methanol, ethanol, isopropanol, n-propanol, n-hutanol nebo terč.-butanol; ethery jako diethylether, di i. sopr opy 1 ether , tetrahydrofuran (THF) nebo dioxan; glykol ethery jako ethy1englýko1monomethyl ether nebo ethylenglykolmonoethylether (methylglykol nebo ethylglykol), ethylenglykoldimethylether (diglyme); ketony jako aceton nebo butanon; amidy jako acetamid, dimethylacetamid, dimethylformamid (DMF); nitrily jako acetonitril; sulfoxidy jako dimethylsulfoxid (DMSO); sirouhlík; organické karboxylové kyseliny jako je kyselí14 na mravenčí nebo octová; nitroslouČeniny jako nitromethan nebo nitrobenzen; estery jako ethylacetát. Kromě toho jsou také vhodné směsi těchto rozpouštědel... ....
Sloučeniny obecného vzorce I se také mohou získat tak, že se nechávají reagovat sloučeniny obecného vzorce IV se sloučeninami obecného vzorce V. Výchozí sloučeniny obecného vzorce IV a obecného vzorce V jsou zpravidla známy. Pokud nejsou známy, mohou se π r í p r 6. v o vh t o sobe z r. á. .t. ý ™ i způsoby.
Ve sloučeninách obecného vzorce V znamená zbytek -CO-L zbytek předaktivované karboxylové kyseliny, s výhodou halogenidu karboxylové kyseliny nebo směsného anhydridu nebo aktivního esteru. Takové zbytky k aktivaci karboxylové skupiny v typických acylačních reakcích jsou popsány v literatuře (například ve standar-__ dních publikacích jako Houben-Weyl, Methoden der ořganischen Chemie, Georg-Thieme Verlag, Stuttgart). Symbol L znamená s výhodou atom chloru, bromu nebo -ON-sukcinimid.
Reakce sloučeniny obecného vzorce IV se sloučeninou obecného vzorce V se provádí za stejných podmínek se zřetelem na reakční dobu, teplotu a rozpouštědla, jako reakce sloučeniny obecného vzorce II se sloučeninou obecného vzorce III.
Sloučeniny obecného vzorce I s lineárním otevřeným řetězcem, ve kterých znamená R1 X-Arg-Gly-Asp-Y nebo A-cys-(R2)-B-U se mohou. dále zí skat tak ,_ž_e_s.e__v__p_o.s.l_e.d.n.ím_kr-O.k.u__sy_n-t.é.zy—v_.pe-v.né--f-á-zi-biotin ve stejném cyklu kopuluje jako normální aminokyselina s chráněným N-zakončením jakožto poslední složka a biotin-peptid se za normálních podmínek od pryskyřice odštěpí.
Syntéza v pevné fází, odštěpení a čištění se provádí způsobem, který popsal A. Jonczyk a J. Meienhofer (Peptides, Proč. 8th Am.--Pept. Symp. Vyd. V.Hrubý a D.H. Rich, Pierce Comp. III, str.
až 77, 1983) nabo podobnými způsoby, jako jsou popsány v časopise Angew. Chem. 104, str. 375 až 391 (1992).
Sloučeniny obecného vzorce II a IV s lineárním otevřeným řetězcem se mohou připravovat o sobe známými způsoby syntézy aminokyselin a peptidů,které jsou popsány například ve shora uvedených standardních publikacích a v patentové literatuře, například také způsobem syntézy v pevné fázi, kterou popsal Merrifield (B.F. Gysin a R.B. Merrifield, J. Am. Chem. Soc. 94, str. 3102 a další, 1972 ) .
Cyklické sloučeniny obecného vzorce II a IV, kde znamená R1 cyklo-(Arg-Gly-Asp-Z), se mohou připravovat cyklizací lineárních sloučenin, které jsou popsány například v německém patentovém spise číslo DE 43 10 643 a v publikaci Houben-Weyl, Methoden der Λ Λ J 1 — nL 2 _ T 1, Η Γ i Τ τ . í, -i V η Λ λ Z * λ 3» j \
Ui 5 α u X © Vil cil Olízni J. e j ± . v « > S vaaéK lU/llj sir . 1 az OUD (líí K j «
Sloučeniny obecného vzorce I se mohou také získat tak, že se uvolňují solvolýzou, zvláště hydrolýzou nebo hydrogenolýzou ze svých funkčních derivátů.
Výhodnými sloučeninami pro solvolýzu popřípadě hydrogenolýzu jsou sloučeniny, které jinak.odpovídají obecnému vzorci I , na-_________________ jí však místo jedné nebo několika volných aminoskupin a/nebo hydroxylových skupin odpovídající chráněné aminoskupiny a/nebo hydroxylové skupiny, s výhodou skupiny, které místo atomu vodíku, který je vázán s atomem dusíku, mají skupinu chránící aminoskupinu, například sloučeniny obecného vzorce I, které mají místo NH2skupiny skupinu NHR' (kde znamená R' skupinu chránící aminoskupinu, například skupinu BOC nebo CBZ),
Dále jsou jako výchozí sloučeniny výhodné sloučeniny, které mají místo atomu vodíku hydroxylové skupiny chráněnou hydroxylon.- - - - vou - skupinu-,—na-p-ř-í-k-lad- s louč e-n-i-ny--obecného- v-zo-ree —-1 ,- kter é ma j í------—---však místo hydroxylové skupiny skupinu R0-feny1ovou (kde znamená R skupinu chránící hydroxylovou skupinu.
V molekule výchozí látky může být i několik stejných nebo různých chránících skupin. Pokud jsou takové skupiny od sebe odlišné, mohou se v mnoha případech selektivně odštěpovat.
Výraz skupina chránící aminoskupinu je obecně znám a jde o skupiny, které jsou vhodné k ochraně (k blokování) aminoskupiny před chemickými reakcemi, které jsou však snadno odstranitelné, když je žádoucí reakce na jiném místě molekuly provedena. Typické pro takové skupiny jsou zvláště nesubstituované nebo substituované skupiny acylové, arylové, aralkoxymethylové nebo aralkylové.
Jelikož se skupiny, chránící aminoskupinu, po žádoucí reakci (ne16 bo reakčním sledu) odstraňují, nemá jejich druh a velikost rozhodující význam. Výhodnými jsou však skupiny s 1 až 20 a zvláště s laž 8 atomy uhlíku. Výraz acylová skupina je zde vždy míněn v nejširším slova smyslu. Zahrnuje acylové skupiny odvozené od alifatických, aralifatických, aromatických nebo heterocyklických karboxylových nebo sulfonových kyselin, jakož zvláště skupiny alkoxykarbonylové, aryloxykarbonylové a především aralkoxykarbonyy takových a c y 1 o v y c h skupin o e u v a u e ,j x s Ku piny alkanoylové jako acetylová, propionylová, butyrylová skupina; aralkanoylové jako fenylacetylová skupina; aroylové jako benzoylová nebo toluylová skupina; aryloxyalkanoylové jako fenoxyacetylová skupina (POA); alkoxykarbonylové, jako skupina methoxykarbonylová, ethoxykarbonylová, 2,2,2-tr ichlorethoxykarbonylová, terč.-butoxykarbonylová (BOC), 2-jodethoxykarbonylová; aralkoxykarbonylové jako skupina benzyloxykarbonylová (CBZ) (karboxbenzoxy), 4-methoxybenzyloxykarbonylová a 9-fluorenylmethoxykarbonylová (FMOC) skupina; arylsulfonylové jako skupina 4-metboxy-2,36-trimethylfenylsulfonylová (Mtr.). Výhodnými skupinami, chránícími aminoskupinu, jsou skupiny BOC a Mtr, dále CBZ, Fmoc, benzylová a acetylová skupina.
Výraz skupina chránící hydroxyskupinu je obecně rovněž znám a jde o skupiny, které jsou vhodné k ochraně (k blokování) hyd___rp.OSkuuin.y__ p.řed.chemickými. reakcemi které - jsou však -sna-d-no- -od— * stranitelné, když je žádoucí reakce na jiném místě molekuly provedena. Typické pro takové skupiny jsou shora uvedené nesubstituované nebo substituované skupiny arylové, aralkylové nebo acylové dále také skupiny alkylové. Jelikož se skupiny, chránící hydroxyskupinu, po žádoucí reakci (nebo reakčním sledu) odstraňují, nemá jejich druh a velikost rozhodující význam. Výhodnými jsou však skupiny s 1 až 20 a zvláště s 1 až 10 atomy uhlíku. Jakožto příklady skupin chránících hydroxylovou skupinu, se uvádějí skupina benzylová, p-nitrobenzoylová, p-toluensulfonylová, terč.-butylová a acetylová, přičemž jsou obzvláště výhodnými skupina benzylová a terč.-butylová. Skupiny COOH v asparagové kyselině a v glutaminové kyselině se s výhodou chrání ve formě terč.-butylesteru (například Asp(OBut)).
Uvolňování sloučenin obecného vzorce I z jejich funkčních derivátů se daří - podle použité chránící skupiny- - například silnými kyselinami, účelně kyselinou trifluoroctovou nebo chloristou, avšak také jinými silnými anorganickými kyselinami, jako kyselinou chlorovodíkovou nebo sírovou, silnými organickými karboxylovými kyselinami jako kyselinou trich1oroctovou nebo sulfonovými kyselins-Hii s, k o i vil b c n z e n s u 1 f v 11 u v o u nebo t o j. u e π s u i fonovou. Přítomnost přídavného inertního rozpouštědla je možná, nikoliv však vždy nutná. Jakožto inertní rozpouštědla jsou vhodné organické například karboxylové kyseliny, jako je kyselina octová, ethery, jako je tetrahydrofuran nebo dioxan, amidy, jako je dimethylformamid (DMF), halogenované uhlovodíky, jako je dichlor-__ methan, dále také alkoholy, jako je methanol, ethanol nebo isopropanol jakož také voda. V úvahu mohou přicházet také směsi těchto rozpouštědel. Kyseliny trifluoroctové se s výhodou používá v nadbytku bez přísady dalších rozpouštědel, kyseliny chloristé ve formě směsi kyseliny octové a 70% kyseliny chloristé v poměru 9 : 1. Reakční teplota pro odštěpení je účelně přibližně 0 až přibližně 50 °C, s výhodou 15 až 30 ’C (teplota místnosti).
Skupiny BOC, OBut a Mtr se mohou například s výhodou odštěpovat kyselinou trifluoroctovou v dichlormethanu nebo přibližně 3 až,.5_n^_ky_s_e.l_i.n.o_u^c.h.l.o.r_o_v_o.d.í.ko-v_o.u—v—d-i-oxanu—př-i—te-p-l-o-tě—15-až 30----O, skupina FMOC 5 až 50% roztokem- dimethylaminu, diethylaminu nebo piperidinu v dimethyl f ormamidxi při teplotě 15 až 30 ' C.
Tritylové skupiny se používá ke chránění aminokyselin histidin, arginin,' glutamin a cystein. Odštěpení chránící skupiny se provádí podle žádaného konečného produktu systémem kyselina trifluoroctová/10% thio-fenol, přičemž se odštěpí tritylové skupina ze všech jmenovaných aminokyselin. Při použití systému kyselina trifluoroctová/anisol nebo kyselina trifluoroctová/thioanisol se odštěpí tritylové skupina jen z histidinu, z asparaginu a z glutaminu zatímco chránící skupina na vedlejším řetězci cysteinu zůstává nedotčena.
Hydrogenolyticky odstranitelné chránící skupiny (například skupina CBZ nebo skupina benzylová) se mohou odštěpovat například zpracováním vodíkem v přítomnosti katalyzátoru (například katalyzátoru . na bázi ušlechtilého kovu, jako palladium, účelně na nosiči, jako na uhlí). Jakožto rozpouštědlo se hodí shora uvedená rozpouštědla, zvláště například alkoholy, jako methanol nebo ethanol nebo amidy jako dimethylformamid. Hydrogenolýza se zpravidla provádí při teplotě přibližně 0 až 100 *C, za tlaku přibižně
0.1 a. 7, PO MPa. c véhadni, +* O τι 1 M S, J.
žně 0,1 až 1 MPa. Hydrogenolýza CBZ skupiny se daří například dobře na.5 až 10% palladiu na uhlí v methanolu nebo amoniumformiátem (místo vodíkem) v přítomnosti palladia na uhlí v systému methanol/dimethylformamid při teplotě 20 až 30 ’C.
Zásada obecného vzorce I se může kyselinou převádět na příslušnou adiční sůl s kyselinou, například reakcí ekvivalentního množství zásady a kyseliny v inertním rozpouštědle, jako je například ethanol a následným odpařením rozpouštědla. Pro tuto reakci přicházejí v úvahu vzláště kyseliny, které poskytují fysiologicky nezávadné soli. Může se používat anorganických kyselin, jako jsou kyselina sírová, dusičná, halogenovodíkové kyseliny, jako chlorovodíková nebo bromovodíková, fosforečné kyseliny, jako kyselina ortofosforečná, sulfaminová kyselina a ogranické kyseliny, zvláště alifatické, alicyklické, aralifatické, aromatické nebo heterojiyk_li_cké.....j.ednosytn.é_._n.e.bo -ně.k.o-l-i-ka.s.y-t.n.é-.kanboxylové-, -su-1 —--------------fonové nebo sírové kyseliny, jako jsou kyselina mravenčí, octová, propionová, pivalová, diethyloctová, malonová, jantarová, pimelová, fumarová, maleinová, mléčná, vinná, jablečná, citrónová, glukonová, askorbová, nikotinová, isonikotinová, methansulfonová, ethansulfonová, ethandisulfonová, 2-hydroxyethansulfonová, benzensulfonová, p-toluensulfonová, naftalenmonosulfonová a naftalendisulfonová a laurylsírová kyselina. Solí s fysiologicky nevhodnými kyselinami se může používat k izolaci a/nebo k čištění sloučenin obecného vzorce I.
Na druhé straně se sloučeniny obecného vzorce I reakcí se zásadou mohou převádět na své fysiologicky vhodné soli kovové nebo amoniové. Jakožto soli přicházejí v úvahu zvláště soli sodné,
I- 19 draselné, horečnaté, vápenaté a amoniové dále substituované amoniové soli, například dimethylamoniové, diethylamoniové, diisoproipylamoniové, monoethanolamoniové, diethanolamoniové, nebo diisopropanolamoniové, cyklohexylamoniové, dicyklohexylamoniové, dibenzylethylendiamoniové, dále například soli s argininem nebo s lysinem.
Sloučeniny obecného vzorce I a jejich fysiologicky nezávadné ť ~ ™ Λ ,, + J 1./. » V ___ j x o u u. i Qi IIIQL· c u 11 vn. J L· U zvláště nechemickou cestou. Za tímto účelem se mohou převádět na vhodnou dávkovači formu s alespoň jedním pevným nebo kapalným a/nebo polokapalným nosičem nebo pomocnou látkou a popřípadě ve směsi s jednou nebo s několika jinými účinnými látkami.
„ Vynález se proto také týká prostředkuj zvláště farmaceutických prostředků, obsahujících alespoň jednu sloučeninu obecného vzorce I, a/nebo její fysiologicky vhodnou sůl.
Těchto prostředků podle vynálezu se může používat jakožto léčiv v humánní a ve veterinární medicíně. Jakožto nosiče přicházejí v úvahu anorganické nebo organické látky, které jsou vhodné pro enterální (například orální) nebo pro parenterální nebo topické podávání nebo pro podávání ve formě inhalčnícb sprejů a které nereagují se sloučeninami obecného vzorce I, jako jsou například voda, rostlinné oleje, benzylalkoholy, alkylenglykoly, ____-po.ly.e_t.hy_l.e.ng.l.y.k.o.l.y-,__g.ly-c.e.r-i-n-t..r-i.ac-e-tát-,—ž-e-La-t-i-na-,—u hlohy-d-rá-t-y-,—ja-·^— ko laktosa nebo škroby, stearát hořečnatý, mastek a vaselina. Pro orální použití se hodí zvláště tablety, pilulky dražé, kapsle, prášky, granuláty, sirupy, šťávy nebo kapky, pro rektální použití čípky, pro parenterální použití roztoky, zvláště olejové nebo vodné roztoky, dále suspenze, emulze nebo implantáty, pro topické použití masti, krémy nebo pudry. Sloučeniny podle vynálezu se-také mohou lyofilizovat a získaných lyofilizátů se může například používat pro přípravu vstřikovatelných prostředků. Prostředky se mohou sterilovat a/nebo mohou obsahovat pomocné látky, jako jsou kluzná činidla, konservační, stabilizační činidla a/nebo smáčedla, emulgátory, soli k ovlivnění osmotického tlaku, pufry, barviva, chuťové přísady a/nebo aromatické látky. Popřípadě mohou ob20 sáhovat ještě jednu další nebo ještě několik dalších účinných látek, jako jsou například vitaminy. Pro podávání ve formě inhalaČních sprejů se účinná lát-ka rozpouští nebo suspenduje ve hnacím plynu nebo ve směsi hnacích plynů (jako jsou například oxid uhličitý nebo fluorchlorované uhlovodíky). V takovém případe se přitom používá účinné látky v mikronizované formě, přičemž se může přidávat alespoň jedno fysiologické kompatibilní rozpouštědlo, nq nř í l· 1 ti rl o 4- U o «1
Inha lačni i^ótuky se uiohúu pouavat za použiti o sobě známých, zařízení k tomuto účelu.
Sloučeniny obecného vzorce I a jejich fysiologicky nezávadné soli se mohou podávat jakožto integrinové inhibitory v boji proti nemocem, jako jsou zvláště patologická angiogenní onemocněn í, th r om b o ay^ _sr deč n i _in f a rk t, k o ronárn i onemocněn í„s rdce,.arteriosklerosa, nádory, osteoporosa, zápaly a infekce.
Sloučenin obecného vzorce I podle vynálezu se zpravidla používá v dávkách podobných jako obchodně známé peptidy, zvláště obdobně jako sloučeniny podle amerického patentového spisu číslo 4 472305, s výhodou v dávce přibližně 0,05 až 500 mg, zvláště 0,5 až 100 mg na dávkovači jednotku. Denní dávka je s výhodou přibližně 0,01 až 2 mg/kg tělesné hmotnostní. Určitá dávka pro každého jednotlivého jedince závisí na nejrůznějších faktorech, například na účinnosti určité použité sloučeniny, na stáří, tělesné
Jimj3tji.ojSLt.i_,_v_š.e.o.b ecném—zdrav-otní-m—s-ta-vu-^poh-l-a-v-i--,—stravě^—na— okamžiku a cestě podání, na rychlosti vylučování, na kombinaci léčiv a na závažnosti určitého onemocnění. Výhodné je parenterální podávání .
Sloučeniny obecného vzorce I se také mohou používat v analytické biologii a v molekulární biologii. Přitom se vyuužívá jejich schopnosti vytvářet komplexy mezi biotinylovým zbytkem a glykoproteinem avidin. Známé je použití biotin-avidinového komplexu (E.A. Bayer a M. Wilchek, Nethods of Biochemical Analysis 26, str. 1 až 45, 1980 [lit. 1]).
Nových sloučenin obecného vzorce I se může používat jakožto integrlnových ligandů pro vytváření sloupců pro afinitní chromatograf i i k čisté přípravě integrinů. Komplex z avi dinem derivát i*ι· zovaného nosičového materiálu, například Sepharose a nových sloučenin obecného vzorce I se vytváří o sobě známým způsobem, který je. po.psán. ( například v Lit. 1).... Z tohoto důvodu se. zde tento způsob podrobně nepopisuje a odkazuje se proto na odpovídající literaturu, například lit, 1.
Jakožto polymerní nosičové materiály jsou vhodné polymerní pevné fáze o sobě známé z chemie peptidů s výhodnými hydrofilními vlastnostmi; například příčně sesítěné nolycukry. jako jsou například celulóza, Sepharose nebo SephadexR, akrylamidy, polymery na polyethylenglykolové bázi nebo TentakelpolymeryR.
Nových sloučenin obecného vzorce I se může používat jakožto diagnostických markérů pro anti-biotin-protilátkové reakce ve zkouškách typu ELISA a ve FACS (fluorescence activated cell sorter-analýza). . .
Známé je použití antibiotinových protilátek k detekci biotinu (M, Berger, Biochemistry 14, str. 2338 až 2342, 1975).
Použití biotinem derivatizovaného imunoglobulinu IgG při enzymimunní zkoušce (ELISA) popsal U. Holmkov-Nielsen a kol. (Journal of Chromatography 297, str. 225 až 233, 1984)'.
J. Gao a S.J. Shattil (J. Immunol. Methods 181, str. 55 až 64, 1995) popsali zkoušku ELISA dokazující látky, které inhibují integrin aiibPm aktivaci. V tomto případě se k důkazu používá biotinylovaného fihrinogenu.___s_________________________
Použití průtokové cytometrie v klinické diagnostice buněk popsali G. Schmitz a G. rothe (DG Klinische Chemie Mitteilungen 24, sešit 1, str. 1 až 14, 1993).
'Kromě toho se sloučeniny obecného vzorce I mohou používat v mikroskopii v silovém poli (atomic force microscopy AFM) k měření -síly vzájemného působení 1 igand-receptor. Ligandem se míní zvláště komplex avidinu a nové sloučeniny obecného vzorce I. Receptorem se míní s výhodou integrinový receptor. E.-L. Florin a kol. (Science 264, str. 415 až 417, 1994) popsali měření adhezních sil mezi avidinem funkcionalizovaným silovým mikroskopem a biotinylovanou agarosou.
Vynález objasňují, nijak však neomezují následující příklady praktického provedení. Teploty se uvádějí vždy ve stupních Celsia. Výraz zpracování obvyklým způsobem v následujících příkladech praktického provedení znamená:
Popřípadě se přidává voda, popřípadě podle konstituce konečného produktu se hodnota pH nastavuje na 2 až 10, reakční směs se extrahuje ethylacetátem nebo dichlormethanem, provádí se oddělení, vysušení organické fáze síranem sodným, odpaření a čištění chromatografií na silikagelu a/nebo krystal i žací; Hodnoty Rf jsou na silikagelu, eluční činidlo je systém ethylacetát/methanol 9:1, RZ je retenční doba (v minutách) při HPLC v následujících systémech :
[A] sloupec; Nukleosil 7C18 250 x 4 mm eluční činidlo A: 0,1 % TFA ve vodě eluční činidlo B: 0,1 % TFA v acetonitrilu tok: 1 ml/min gradient: 20 až 50 % B /30 min [B] minutový gradient 0 až 80 % 2-propanolu ve vodě s 0,3 % TFA při 1 ml/min na sloupci LichrosorbR RP Select B (7 μιη) 250 x 4 mm sloupec: Lichrospher (5 μιη) 100RP8 125 x 4 mm eluční činidlo A: 0,01 M Na-fosfát pH 7,0 eluční činidlo B: 0,005 M Na-fosfát pH 7,0/obj. 60 % 2-propanolu tok: 0,7 ml/min gradient: 1 - 99 % B/50 min
Hmotová spektrometrie (MS):EI (ionizace rázem elektronů) M*
FAB (bombardování rychlými atomy)(M+H)+
Výrazem DMPP-pryskyřice se míní 4-(2',4'-dimethoxyfenylhydroxymethyl)fenoxypryskyřice, která umožňuje syntézu peptidů chráněných na postranních řetězcích.
Příklad 1
Roz-pustí se 0,6 g Fmoc-Lys(BOC}-OH ve 100 ml dichlofmethanu, smíchá se s 1,2 ekvivalenty DMPP-pryskyřice, s 1,4 ekvivalenty HOBt a s 1,4 ekvivalenty DCC1 a míchá se po dobu 12 hodin při teplotě místnosti. Po odstranění rozpouštědla se získá Fmoc-Lys(BOG)-DMPP-pryskyřice. V peptidovém syntetizéru se kondenzuje
ΡπιΊη-Ρηη-ίΊυ
H-Lys (B0C) *-Bíír P-yrys kyřicí [uvolněnou z . Fmoc-Lys.· (BOC)-DMPP-pryskyřice systémem pyperidin/dimethylformamid (20%)] použitím trojnásobného nadbytku chráněného prolinu. Kopulace se systémem DCCl/HOBt se provádí při teplotě místnosti. Získá se Fmoc-Pro-Lys(BOC)-DMPP-pryskyřice. Obdobně se získá následujícím odštěpením chrájiícÁ Fmoc skupiny a následující_k.opulaC-L-S-RmocSer(But)-0H, Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Arg(Mtr)-OH, Fmoc-Gly-OH , FmocGly-OH, Fmoc-Gly-OH a Bit-OH za opakujících se reakčních podmínek při každé kopulaci
-uvolněním B-aminoskupiny systémem piperidin/DMF (20%)
-promytím dimethylacetamidem
-reakcí s Fmoc-aminokyselinou popřípadě s Bit-OH Bit-Gly-Gly-Gly-Arg(Mtr)-Gly-Asp(OBut)-Ser(But)-Pro-Lys(BOC)-MDPP pryskyřice.
Pryskyřice se promyje systémem CF3SO3H/CH2CI2/H2O a získá se Jj_t_c_G 1 y^G.l yjsG.Ly^Ar_g.(M-t r-)--G-l y--A-s-p-(-0 Bu-t-)-Se-r-(-Bu t-)-Pr o-L-y s-(-B0 C-)--0H— Po odštěpení chránících skupin 2N-kyselinou chlorovodíkovou v dioxanu, odstranění rozpouštědla, vyjmutí zbytku do systému trifluoroctová kyselina/dichlormethan a vysrážení diethyletherem se produkt čistí přes RP-HPLC. Získá se
Bit-Gly-Gly-Gly-Arg-Gly-Asp-Ser-Pro-Lys-OH x 2 TFA; RZ [B]=12,14FAB 1056.
Příklad 2
Podobně jako podle příkladu 1 se získá následnými kopulacemi pryskyřice DMPP s Fmoc-Pro-OH, Fmoc-Cys{Trt)-OH, Fmoc-Asp(OBut)OH, Fmoc-Ala-0H, Fmoc-Thr(But)-OH, Fmoc-Lys(BOC)-OH, Fmoc-Gly-0H,
Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Gly-OH a Bit-OH
Bit-Gly-Gly-Gly-Lys(BOC)-Thr(But)-Ala-Asp(OBut)-Cys(Trt)-Pro-DMPPpryskyřice. ......
Odštěpením od pryskyřice, odstraněním chránících skuppin a vyčištěním se získá
Bit-Gly-Gly-Gly-Lys-Thr-Ala-Asp-Cys(Trt)-Pro-OH x 2 TFA; RZ [B] =27,6; FAB 1273.
Ohdobně se získá k ondenz6.cí DMPP-pryskyřice ___-_ - L2·-.-' ! _______________ —— - _ - ---------- -..J! u—
Fmoc-Pro-OH, Fmoc-Cys(Trt)-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH,
Fmoc-AIa-OH, Fmoc-Thr(But)-OH, Fmoc-Lys(BOC)-OH <sl Bit-OH:
Bit-Lys-Thr-Ala-Asp-Cys(Trt)-Pro-OH;
• Fmoc-Pro-OH, Fmoc-Cys(Trt)-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH,
Fmoc-AIa-OH, Fmoc-AIa-OH, Fmoc-Lys(BOC)-OH λ Bit-OH:
BÍt-Lys-AIa-Ala-Asp-Cys(Trt)-Pro-OH;
$ Fmoc-Pro-OH, Fmoc-Cys(Trt)-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-AIa-OH, Fmoc-Thr(But)-OH, Fmoc-Arg(Mtr)-OH Bit-OH:
Bit-Arg-Thr-Ala-Asp-Cys(Trt)-Pro-OH;
5. Fmoc-Pro-OH, Fmoc-Cys(Trt)-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH,
Fmoc-Ala-0 H, Fmoc-Ser(But)-OH a. Bit-OH: ___________
Bit-Ser-Ala-Asp-Cys(Trt)-Pro-OH;
s- Fmoc-Pro-OH, Fmoc-Cys(Trt)-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-AIa-OH, Fmoc-Ser(But)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH a Bit-OH:
Bit-Gln-Ser-Ala-Asp-Cys(Trt)-Pro-OH;
f Fmoc-Pro-OH, Fmoc-Cys(Trt)-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-AIa-OH, Fmoc-Ser(But)-OH, Fmoc-Glp-OH a. Bit-OH:
Bit-Glp-Ser-Ala-Asp-Cys(Trt)-Pro-OH;
-255 Fmoc-Pro-OH, Fmoc-Cys(Trt)-OH, Fmoc-Gly-OH,
Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Ser(But)-ÓH, Fmoc-Ile-OH * Bit-OH:
Bit-Ile-Ser-Ala-Gly-Cys(Trt)-Pro-ÓH;
Fmoc-Pro-OH, Fmoc-Cys(Trt)-OH, Fmoc-Gly-OH,
Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Ser(But)-OH, Fmoc-Arg(Mtr)-OH a Bit-OH:
Bit-Arg-Ser-Ala-Gly-Cys(Trt)-Pro-OH;
Fmoc-Pro-OH, Fmoc/Cys(Trt)-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH,
Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Lys(BOC)-OH' a. Bit-OH:
Bit-Lys-Gly-Gly-Asp-Cys(Trt)-Pro-OH;
Fmoc-Gys(Trt)-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Thr(But)-OH, Fmoc-Lys(BOC)-OH a. Bit-OH:
Bít-Lys-Thr-Ala-Asp-Cys(Trt)-OH;
$ Fmoc-Thr(But)-OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Pro-OH, Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Lys(BOC)-OH, Fmóc-His(Trt)-OH, Fmoc-Pro-OH,
Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Arg(Mtr)-OH, Fmoc-Pro-OH, Fmoc-Cys(Trt)-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-Ala-OH á. Bit-OH:
a) při odštěpení chránící skupiny pomocí TFA a 10 % thiofenolut _ _________________________________________
Bit-Ála-Asp-Cys-Pro-Arg-Asn-Pro-His-Lys-Gly-Pro-Ala-Thr-OH;
b) při odštěpení chránící skupiny pomocí TFA a 10 % thioanisolu.;
Bít-Ala-Asp-Cys(Trt)-Pro-Arg-Asn-Pro-His-Lys-GJy-Pro-Ala-Thr-OH;
$ Fmoc-Thr(But)-OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Pro-OH, Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Lys(BOC)-OH, Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-Pro-OH,
Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Arg(Mtr)-OH, Fmoc-Pro-OH, Fmoc-Cys(Trt)-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-Cys(Trt)-OH, Fmoc-Thr(But)-OH, Fmoc-Lys(BOC)-OH, Fmoc-Gly-OH Bit-OH:
-26a)Při odštěpení chránící thiof enoluí skupiny pomocí TFA a 10 %
Bit-Gly-Lys-Thr-Cys-Asp-Cys-Pro-Arg-Asn-Pro-His-Lys-Gly-Pro-AlaThr-OH;
b) při odštěpení chránící skupiny pomocí TFA a 10 X řhíoanisolitBit-Gly-Lys-Thr-Cys(Trt)-Asp-Cys(Trt)-Pro-Arg-Asn-Pro-HÍs-LysGly-Pro-Ala-Thr-OH;
Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Lys(BOC)-OH, Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-Pro-OH,
Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Arg(Mtrj-OH, Fmoc-Pro-OH, Fmoc-Cys(Trt)-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-AIa-OH, Fmoc-Thr(But)-OH, Fmoc-Lys(BOC)-OH . *. Bit-OH:
a) P®nA chránící skupiny pomocí .TFA.a 10 X 1 thiof enolu
Bit-Lys-Thr-Ala-Asp-Cys-Pro-Arg-Asn-Pro-His-Lys-Gly-OH;
b) při odštěpení, chránící skupiny pomocí TFA a 10 X thioanísolw:
Bit-Lys-Thr-Ala-Asp-Cys(Trt)-Pro-Arg-Asn-Pro-His-Lys-Gly-OH;
$ Fmoc-Ihr(But)-OH, Fmoc-AIa-OH, Fmoc-Pro-OH, Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Lys(BOC)-OH, Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-Pro-OH,
Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Arg(Mtr)-OH, Fmoc-Pro-OH, Fmoc-Cys(Trt)-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH,'Fmoc-AIa-OH,Fmoc-Thr(But)-OH, _ Fmoc-Lys(BOC)-OH λ Bit-OH:
a) při odštěpení chránící skupiny pomocí TFA a 10 X 1thiof enoluí
Bit-Lys-Thr-Ala-Asp-Cys-Pro-Arg-Asn-Pro-His-Lys-Gly-Pro-Ala-TbrOH;
b) při odštěpení chránící skupiny pomocí TFA a 10 X fhioanisoluJ
Bit-Lys-Thr-Ala-Asp-Cys(Trt) -Pro-Arg-Asn-Pro-Hís-Lys-Gly-ProAla-Thr-OH;
-27Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Lys(BOC)-OH, Fmoc-Hís(Trt)-OH, Fmoc-Pro-OK, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Arg(Mtr)-OH, Fmoc-Pro-OH, Fmoc-Cys(Trt)-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Thr(But)-OH,
Fmoc-Lys(BOC)-OH, Fmoc-Gly-OH . Bit-OH:
a) při odštěpení chránící skupiny pomoci TFA a 10 X 'thiofenoluí
Bit-Gly-Lys-Thr-Ala-Asp-Cys-Pro-Arg-Asn-Pró-His-Lys-Gly-OH;
b) při odštěpení chránící skupinv nomncí tuj - ~ J thioáfiišoliFí' ' .....: '
Bit-Gly-Lys-Thr-Ala-Asp-Cyš(Trt)-Pro-Arg-Asn-Pro-His-Lys-Gly-OH;
$ Fmoc-Thr(But)-OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Pro-OH, Fmoc-Gly-OH,
Fmoc-Lys(BOC)-OH, Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-Pro-OH,
Fmoc-Asn(Trt)-0 H, Fmoc-Arg(Mtr)-OH, Fmoc-Pro-0H, Fmoc-eys(Trt)-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Thr(But)-OH &. Bit-OH:
Bit-Thr-Ala-Asp-Cys-Pro-Arg-Asn-Pro-His-Lys-Gly-Pro-Ala-Thr-OH;
5. Fmoc-Thr(But)-OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Pro-OH, Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Lys(BOC)-OH, Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-Pro-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Arg(Mtr)-OH, Fmoc-Pro-OH, Fmoc-Cys(Trt)-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-Ala-OH <2. Bit-OH:
Bit-Ala-Asp-Cys-Pro-Arg-Asn-Pro-His-Lys-Gly-Pro-Ala-Thr-OH;
. Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Lys(BOC)-OH, Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-Pro-OH,
Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Arg(Mtr)-OH, Fmoc-Pro-OH, Fmoc-Cys(Trt)-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-Ala-OH ά Bit-OH:
Bit-Ala-Asp-Cys-Pro-Arg-Asn-Pro-His-Lys-Gly- OH;
£. Fmoc-Pro-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Arg(Mtr)-OH, Fmoc-Pro-OH, Fmoc-Cys(Trt)-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Thr(But)-OH, Fmoc-Lys(BOC)-OH Bit-OH:
BÍt-Lys-Thr-Ala-Asp-Cys(Trt)-Pro-Arg-Asn-Pro-OH;
* 5 Fmoc-Lys(BOC)-OH, Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-Pro-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Arg(Mtr)-OH, Fmoc-Pro-OH, Fmoc-Cys(Trt)-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Thr(But)-OH, Fmoc-Lys(BOC)-OK a. Bit-OH: Bit-Lys-Thr-A[a-Asp-Cys(Trt)-Pro-Arg-Asn-Pro-His-Lys-OH; '5 Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-Pro-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Arg(Mtr)-OH, Fmoc-Pro-OH, Fmoc-Cys(Trt)-OH, Fmoc-Asp(OBut)OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Thr(But)-OH, Fmoc-Lys{BOC)-OH 5 Bit-OH: Bit-Lys-Tnr-Aía-Asp-CysíTríj-Pro-Arg-Asn-Pro-His-oH,· .. ’ Ť £ Fmoc-Arg(Mtr)-OH, Fmoc-Pro-OH, Fmoc-Cys(Trt)-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Thr(But)-OH, Fmoc-Lys(BOC)-OH a Bit-OH: Bit-Lys-Thr-Ala-Asp-Cys(Trt)-Pro-Arg-OH; ________„________ ______
25 5 Fmoc-Lys(BOC)-OH, Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-Pro-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Arg(Mtr)-OH, Fmoc-Pro-OH, Fmoc-Cys(Trt)-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH Bit-OH: Bit-Asp-Cys(Trt)-Pro-Arg-Asn-Pro-His-Lys-OH;
30 s Fmoc-Arg(Mtr)-OH, Fmoc-Pro-OH, Fmoc-Cys(Trt)-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-Ala-OH a Bit-OH: B it-Ala-As p-Cys(Trt)-Pro-Arg-0 H;
. 35 4 £ . Fmoc-Arg(Mtr)-OH, Fmoc-Pro-OH, Fmoc-Cys(Trt)-OH, FmocAsp(OBut)-OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Thr(But)-OH = & Bit-OH: Bit-Thr-Ala-Asp-Cys(Trt)-Pro-Arg-OH;
k s. Fmoc-Pro-OH, Fmoc-Cys(Trt)-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-AlaOH, Fmoc-Thr{But)-OH, Fmoc-Lys(BOC)-OH á. Bit-OH: Bit-Lys-Thr-Ala-Asp-Cys(Trt)-Pro-OH; 5 Fmoc-NMeAla-QH, Fmoc-Cys(Trt)-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Thr(But)-OH, Fmoc-Lys(BOC)-OH · «sl Bit-OH: Bit-Lys-Thr-Ala-Ašp-Cys(Trt)-NMeAla-OH;
Příklad 3
Do roztoku.3,05 g cyklo-.( Arg-Gly-Asp-D-Phe-Lys ). [získatelného cyklizací H-Arg(Mtr)-Gly-Asp(OBut)- D-Phe-Lys(BOC)-OH na cyklo-{Arg{Mtr)-Gly-Asp(OBut)-D-Phe-Lys-(BOC)) a následným odštěpením chránících skupin] ve 100 ml dichlormethanu se přidá 1,7 g levně získatelného (+)-biotinyl-N-sukcinimidylesteru a 0,5 g triethylaminu. Míchá se po dohn pěti. hodin při teplotě místnosti a
Μ*·*—ί**ι1ίι~ΙΤ· ÉtLI—^U‘flU ***** fcWWII·· I Γ~Ι*ΙίΐΠί I·· *~*ί·Γ Art Ί —JÍ dťťljfc—MMH |4ΜΙ*·Μ·**^^·***Ι· 1 ‘ _·ΙΙ|.·Χ~Μ. |-·Μ^^—Γ obvyklým zpracováním se získá cyklo-(Arg-Gly-Asp-D-Phe-Lys-( N Bit)) x TFA; RZ [B] = 11,32; FÁB 830.
Příklad 4 ’ <
Podobně jako podle příkladu 3 se získá ze 3,5 g cyklo-(ArgGly-Ašp-D-Phe-Lys) a 2,3 g levně získatelného N-sukcinimidylesteru (+)-biotiny1-6-aminokapronové kyseliny (A) a 0,5 g triethylaminu cyklo-(Arg-Gly-Asp-D-Phe-Lys(K -Bit-Aha)) x TFA; RZ [C] = 23,67; FAB 943.
Obdobně se získá z A a z následujících cyklických sloučenin
Cyklo-(Arg-Gly-Asp-D-Trp-Lys)
Cyklo-(Arg-Gly-Asp-D-Tyr-Lys)
--------— Cyklo-(Arg-Gly-Asp-D-Phe-D-Lys) ' --------------------------------------------------------------CyAlo-(Arg-Gly-Asp-D-Phe-Cys)
Cykfo-(Arg-Gly-Asp-D-Phe-Dab)
Cyklo-(Arg-Gly-Asp-D-Trp-D-Cys)
Cylto-{Arg-Gly-Asp-D-Tyr-D-Cys)
Cyklo-(Arg-Gly-Asp-Phe-D-Lys)
ČyJtto-(Arg-Gly-Asp-Trp-D-Lys)
Cylf)o-(Arg-Gly-Asp-Tyr-D-Ly$)
Cyk lo-(Arg-Gly-Asp-Phe-D-Cys)
Cyííio-(Arg-Gly-Asp-Phe-Dab)
Cyklo-fArg-Gly-Asp-Trp-D-Cys)
CyMo-(Arg-Gly-Asp-Tyr-D-Cys)
Cyklo-(Arg-Gly-Asp-D-Trp-Orn)
-30Cy felo-(Arg-G ly-As p-D-Tyr-0 rn)
CyJclo-(Arg-Gly-Asp-D-Phe-Orn)
CyJtfo-(Arg-GIy-Asp-D-Trp-D-Orn)
Cyldo-(Arg-Gly-Asp-D-Tyr-D-Orn)
Cyklo-(Arg-Gly-Asp-D-Phe-D-Orn)
Cyklo-(Arg-Gly-Asp-D-Trp-Dab)
CyífIo-(Arg-Gly-Asp-D-Tyr-Dab)
CyJílo-(Arg-Gly-Asp-D-Trp-Dap) / A—, /Μ. , A T.
vy niu-(/-uy-viy 1 yi-vapj
Cyklo-(Arg-Gly-Asp-D-Phe-Dap)
Cytťlo-(Arg-Gly-Asp-D-Trp-D-Dap)
CyJíÍo-(Arg-Gly-Asp-D-Tyr-D-Dap)
Cyklo-(Arg-Gly-Asp-D-Phe-D-Dap) následující sloučeniny
CyííIo-(Arg-Gly-Asp-D-Trp-Lys(Ne-Bit-Aha))
Cy klo-(Arg-G ly-Asp-D-Tyr-Lys(Ne-B it-Aha))
Cyklo-(Arg-Gly-Asp-D-Phe-D-Lys(Nc-BÍt-Aha))
Cyldo-(Arg-Gly-Asp-D-Phe-Cys(S-BÍt-Aha))
Cyklo-(Arg-Gly-Asp-D-Phe-Dab(NY-Bit-Aha))
Cyl<!o-(Arg-G!y-Asp-D-Trp-D-Cys(S-Bit-Aha))
Cyklo-(Arg-Gly-Asp-D-Tyr-D-Cys(S-Bit-Aha))CyÍ!o-(Arg-Gly-Asp-Phe-D-Lys(N£-Bit-Aha))
CyJslo-tArg-Gly-Asp-Trp-D-LysíN^Bit-Aha))
Cyklo-(Arg-Gly-Asp-Tyr-D-Lys(Ne-Bit-Aha))
Cyklo-{Arg-Gly-Asp-Phe-D-Cys(S-B it-Aha))
Cyklo-(Arg-Gly-Asp-Phe-Dab(NY-Bit-Aha))
CyUo-(Arg-Gly-Asp-Trp-D-Cys(S-Bit-Aha))
Cykio-(Arg-Gly-Asp-Tyr-D-Cys(S-Bit-Aha))
Cyklo-fArg-Gly-Asp-D-Trp-OmfN^Bit-Aha))
CyklQ-(Arg-Gly-Asp-D-Tyr-Orn(Ns-Bit-Aha))
Cyklo-(Arg-GIy-Asp-D-Phe-Orn(Ns-Bit-Aha))
Cyklo-fArg-Gly-Asp-D-Trp-D-OrníN^Bit-Aha))
Cyído-(Arg-Gly-Asp-D-Tyr-D-Orn(N5-BÍt-Aha))
Cyíťlo-(Arg-GIy-Asp-D-Phe-D-Orn(Ns-Bit-Aha))
CyMo-(Arg-GIy-Asp-D-Trp-Ďab(NT-Bit-Aha))
Cyír,[o-{Arg-Gíy-Asp-D-Tyr-Dab(NT-Bit-Aha))
Cyklo-{Arg-Gly-Asp-D-Trp-Dap(Np-Bit-Aha))
Cy k[o-(Arg-G ly-Asp-D-Tyr-Dap(Np-B it-Ah a)) Cyklo-(Arg-Gly-Asp-D-Phe-Dap(Np-Bit-Aha)) Cyklo-(Arg-G ly-Asp-D-Trp-D-Dap(N?-B it-Ah a»-—Cyido-(Arg-Gly-Asp-D-Tyr-D-Dap(Np-Bit-Aha)) Cylílo-(Arg-Gly-Asp-D-Phe-D-Dap(Np-BÍt-Aha)) . Příklad 5_____________ ___________ . . ... __________________ _ . . .._______. ... ... ...___.........
Do roztoku 3,05 cyklo-(Arg-Gly-Asp-D-Phe-Lys) ve 40 ml 5% vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného a 40 ml tetrahydrofuranu se přidá 6 g Boc-Aha-N-sukcinimidylesteru. Míchá se pó dobu čtyř hodin, zpracuje Se obvyklým způsobem, čímž se získá cyklo. {Arg-Gly-Asp-D-Phe-Lys(BOC-Aha)); RZ [C] = 27,7; FAB 817.
Po odstranění chránící skupiny BOC v systému kyselina chlorovodíková/dioxan se získá po obvyklém zpracování cyklo-(Arg-GlyAsp-D-Phe-Lys(Nř-Aha)) x 2 TFA; RZ [C] = 14,76; FAB 717.
--------- -------- —Podobně jako- podle př-í-kTaďu—1- se--získá—ná-s-l-ednau- pea-kc-í-™— - s ( + )-biotinyl-N-sukciniraidylesterem cyklo-(Arg-Gly-Asp-D-PheLys(N- Bit-Aha)) x TFA; RZ [C] = 23,67; FAB 943.
Příklad 6 ' Podobně jako podle příkladu 4 se získá z cyklo-(Arg-Gly-AspD-Phe-Lys-Gly) [ získatelného cyklizací H-Arg(Mtr)-Gly-Asp(OBut)D-Phe-Lys(BOC)-Gly-ΌΗ na cyklo-{Arg(Mtr)-Gly-Asp(OBut)-D-Phe-Lys(BOC)-Gly) a následným odštěpením chránících skupin] a z N-sukcinimidylesteru (+ }-biotinyl-6-arainokapronové kyseliny cyklo-(ArgGly-Asp-D-Phe-Lys(N- Bit-Aha)-G1y) x TFA; RZ [A] = 10,97; FAB 1000.
Podobně se získá z cyklo-(Arg-Gly-Asp-D-Phe-Val-Lys} [získatelného cyklizací H-Arg(Mtr)-Gly-Asp(OBut)-D-Phe-Val-Lys(BOC)-OH na cyklo^-ÍArgtMtrJ-Gly-AsptOButJ-D-Phe-Val-Lýs-ÍBOC)) a následným odštěpením chránících skupin] a z N-sukciniraidylesteru (+)-bioti£ nyl-6-aminokapronové kyseliny cyklo-(Arg-Gly-Asp-D-Phe-Val-Lys(N Bit—Aha)) x TFA; RZ [A] = 16,11; FAB 1042.
Podobně se získá z cyklo-(Arg-Gly-Asp-D-Phe-N-Me-Lys) azNs.ukc.i.nimi.dy.les„t.er.u^L+.)_zbJo„t.i.nyJ^6^.amino,kapir.o.noxé^kysel_iny_cykip^ {Arg-Gly-Asp-D-Phe-N-Me-Lys(N*-Bit-Aha)).
Příklad 7
Podobně jako podle příkladu 1 se získá·následnými kopulacemi na MBHA-pryskyrici a za přísady 1,4 ekvivalentů HOBt a 1,4 ekvivalentů DCCl s Fmoc-Pro-OH, Fmoc-Cys(Trt)-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-Ala-OH., Fmoc-Thr ( But) - OH, Fmoc-Lys (BOC) - OH , Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Gly-OH a Bit-OH, Bit-Gly-Gly-Gly-Lys(BOC)-Thr(But)-Ala-Asp(OBut)-Cys(Trt)-Pro-MBHA-pryskyr ice. Odštěpením pryskyřice působením TFA a odštěpením chránících skupin systémem piperidin/dimethylforamid se získá
Bit-Gly-Gly-Gly-Lys-Thr-Ala-Asp-Cys(Trt)-Pro-NH2.
Obdobně se získá kondenzací MBHA-pryskýřice '5 Fmoc-Pro-OH, Fmoc-Cys(Trt)-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Thr(But)-OH, Fmoc-Lys(BOC)-OH Bit-OH:
Bit-Lys-Thr-Ala-Asp-Cys(Trt)-Pro-NH2;
s Fmoc-Pro-OH, Fmoc-Cys(Trt)-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Lys(BOC)-OH a. Bit-OH:
Bit-Lys-Ala-Ala-Asp-Cys(Trt)-Pro-NH2;
-33ti
Fmoc-Pro-OH, Fmoc-Cys(Trt)-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Thr(But)-OH, Fmoc-Arg (Mtr)-OH , s. Bit-OH:
Bit-Arg-Thr-Ala-Asp-Cys(Trt)-Pro-NH2;
Fmoc-Pro-OH, Fmoc-Cys(Trt)-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Ser(But)-OH a. Bit-OH:
B!í-Ser-A!a-Asp-Cy3(Trí)-Pro-HHz;
S Fmoc-Pro-OH, Fmoc-Cys(Trt)-OH, Fmoč-Asp(OBut)-OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Ser(But)-OH, Fmoc-Gín(Trt)-OH a Bit-OH:
Bit-Gln-Ser-Ala-Asp-Cys(Trt)-Pro-NH2;
S Fmoc-Pro-OH, Fmoc-Cys(Trt)-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-Alá-OH, Fmoc-Ser(But)-OH, Fmoc-Glp-OH a. Bit-OH:
Bit-G!p-Ser-Ala-Asp-Cys(Trt)-Pro-NH2;
$ Fmoc-Pro-OH, Fmoc-Cys(Trt)-OH, Fmoc-Gly-OH,
Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Ser(But)-OH, Fmoc-lle-OH · a.. Bit-OH:
Btt-IIe-Ser-AIa-G!y-Cys(Trt)-Pro-NH2;
Fmoc-Pro-OH, Fmoc-Cys(Trt)-OH, Fmoc-Gly-OH,
FmocrAlarQHFmoc-Ser( B.ut)-O.H, Fmoc-Arg (Mtr)--OH- aB it-0 H:_____________
Bit-Arg-Ser-Ala-Gly-Cys(Trt)-Pro-NH2;
š Fmoc-Pro-OH, Fmoc-Cys(Trt)-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Lys(BOC)-OH a. Bit-OH:
Bit-Lys-Gly-Gly-Asp-Cys(Trt)-Pro-NH2;
• -345 Fmoc-Cys(Trt)-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-Ala-OH,
Fmoc-Thr(But)-OH, Fmoc-Lys(BOC)-OH z Sit-OH: .....
B Ít-Lys-Thr-Ala-Asp-Cys (Trt)-N H2;
·· 5. Fmoc-Thr(But)-OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Pro-OH, Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Lys(BOC)-OH, Fmoc-HÍs(Trt)-OH, Fmoc-Pro-OH, £moc:Asn(Irt)-0H01QC^rg(Mír j-O H,_Fmoc^Pro-OH, FmůC;Cyš(Trtj-QH, Fmoc-Ásp(OBut)-OH, Fmoc-Ala-OH λ Bit-OH:
a) při odštěpení chránící skupiny pomocí TFA a 10 % thi o f enolul
Bit-Ala-Asp-Cys-Pro-Arg-Asn-Pro-His-Lys-Gly-Pro-Ala-Thr-NH2;
b) při odštěpení chránící skupiny pomocí TFA a 10 % íhioanisolu··
Bit-Ala-Asp-Cys(Trt)-Pro-Arg-Asn-Pro-His-Lys-Gly-Pro-Ala-Tbr-NH2;
Fmoc-Thr(But)-OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Pro-OH, Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Lys(BOC)-OH, Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-Pro-OH,
Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Arg(Mtr)-OH, Fmoc-Pro-OH, Fmoc-Cys(Trt)-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-Cys(Trt)-OH, Fmoc-Thr(But)-OH, Fmoc-Lys(BOC)-OH, Fmoc-Gly-OH a Bit-OH:
a) při odštěpení chránící skupiny pomocí TFA a 10 % ~ _ ' thiofenolu:--------- ---------------------- —·----------------Bit-GIy-Lys-Thr-Cys-Asp-Cys-Pro-Arg-Asn-Pro-His-Lys-Gly-Pro-AlaThr-NH2;
b) při odštěpení chránící skupiny pomocí TFA a 10 % ťhioanisolu:
Bit-Gly-Lys-Thr-Cys(Trt)-Asp-Cys(Trt)-Pro-Arg-Asn-Pro-His-LysGly-Pro-Ala-Thr-NH2;
sFmoc-Gly-OH, Fmoc-Lys(BOC)-OH, Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-Pro-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Arg{Mtr)-OH, Fmoc-Pro-OH, Fmoc-Cys(Trt)-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Thr(But)-OH,
-35Fmoc-Lys(BOC)-OH A Bit-OH:
a) při odštěpení chránící skupiny pomocí TFA a 10 Z thiofenolu*
Bit-Lys-Ťhr-Ala-Asp-Cys-Pro-Arg-Asn-Pro-His-Lys-Gly-NH2;
. b) při odštěpení chránící skupiny pomocí TFA a 10 Z ^hioanisolu*
Bit-Lys-Thr-AIa-Asp-CysfTrtJ-Pro-Arg-Asn-Pro-His-Lys-Gty-NHi “S Fmoc-Thr(But)-OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Pro-ÓH, Fmoc-GIy-OH, Fmoc-Ly$(BOC)-OH: Fmoc-HisfTrtJ-OH, Fmcc-PreOH,
Tmoc-Asn(Třt)-'OH, Fmoc-Arg(Mtr)-OH, Fmoc-Pro-OH, Fmoc-Cys(Trt)-OH,
Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Tlir(But)-OH,
Fmoc-Lys(BOC)-OH · a. Bit-OH:
a) při odštěpeni chránící skupiny pomocí TFA a 10 Z thiofenolu _ __________ . . _______,______
Bit-Lys-Thr-Ála-Ásp-Cys-Pro-Arg-Asn-Pro-His-Lys-Gly-Pro-AlaNH2;
b) při odštěpení chránící skupiny pomocí TFA a 10 Z íhioanisolu:
Bit-Lys-Thr-Ala-Asp-Cys(Trt) -Pro-Arg-Asn-Pro-His-Lys-Gly-ProAla-Thr-NH2;
Fmoc-GIy-OH, Fmoc-Lys(BOC)-OH, Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-Pro-OH, Fmoc-Asn{Trt)-OH, Fmoc-Arg(Mtr)-OH, Fmoc-Pro-OH, Fmoc-Cys(Trt)-OH, Fm°c-Asp(OBut)-OH,Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Thr(But)-OH, ______________________
Fmoc-Lys(BOC)-OH, Fmoc-GIy-OH A Bit-OH:
a) při odštěpení chránící skupiny pomocí TFA a 10 Z thiofenolu
Bit-Gly-Lys-TT)r-Ala-Asp-Cys-Pro-Arg-Asn-Pro-His-Lys-Gly-NH2·,
b) pri Odštěpení chránící skupiny pomocí TFA a 10 Z thioanisola;
Bit-Gly-Lys-Thr-Ala-Asp-Cys(Trt)-Pro-Arg Asn-Pro-His-Lys-Gly-NH2;
Fmoc-Thr(But)-OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Pro-OH, Fmoc-GIy-OH, Fmoc-Lys(BOC)-OH, Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-Pro-OH,
-3ÉFmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Arg(Mtr)-OH, Fmoc-Pro-OH, Fmoc-Cys(Trt)-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Thr(But)-OH «α Bít-OH:
Bit-Thr-Ala-Asp-Cys-Pro-Arg-Asn-Pro-His-Lys-Gly-Pro-Ala-Thr-NH2;
i Fmoc-Thr(But)-OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Pro-OH, Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Lys(BOC)-OH, Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-Pro-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Arg(Mtr)-OH, Fmoc-Pro-OH, Fmoc-Cys(Trt)-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-Ala-OH *a_ Bit-OH:
Bit-Ala-Asp-Cys-Pro-Arg-A$n-Pro-His-Lys-Gly-Pro-AJa-Thr-NH2;
“ýFmocT-Giy-OH, Fmoc-Lys(BOC)-OH, Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-Pro-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Arg(Mtr)-OH, Fmoc-Pro-OH, Fmoc-Cys(Trt)-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-Ala-OH a. Bit-OH:
Bit-Ala-Asp-Cys-Pro-Arg-Asn-Pro-His-Lys-Gly-NH2;
Fmoc-Pro-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Arg(Mtr)-OH, Fmoc-Pro-OH,
Fmoc-Cys(Trt)-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-Ala-OH,
Fmoc-Thr(But)-OH, Fmoc-Lys(BOC)-OH Bit-OH:
Bit-Lys-Thr-Ala-Asp-Cys(Trt)-Pro-Arg-Asn-Pro-NH2:
Fmoc-Lys(BOC)-OH, Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-Pro-ÓH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Arg(Mtr)-OH, Fmoc-Pro-OH, Fmoc-Cys(Trt)-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Thr(But)-OH,
Fmoc-Lys(BOC)-OH a Bit-OH:
__________BÍt-Lys-Thr-Ala-Asp-Cys(Trt)-Pro-Arg-Asn-Pro-His-Lys-NH2: ___
Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-Pro-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Arg(Mtr)-OH, Fmoc-Pro-OH, Fmoc-CysCTrtJ-OH, Fmoc-Asp(OBut)OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-TTir(But)-OH, Fmoc-Lys(BOC)-OH Bit-OH:
Bit-Lys-Thr-Ala-Asp-Cys(Trt)-Pro-Arg-Asn-Pro-His-NH2;
_s' Fmoc-Arg(Mtr)-OH, Fmoc-Pro-OH, Fmoc-Cys(Trt)-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Thr(But)-OH, Fmoc-Lys(BOC)-OH A Bit-OH:
Bit-Lys-Thr-Ala-Asp-Cys(Trt)-Pro-Arg-NH2;
s Fmoc-Lys(BOC)-OH, Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-Pro-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Arg(Mtr)-OH, Fmoc-Pro-OH, Fmoc-Cys(Trt)-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH <£ Bit-OH:
Btt-Asp-Cys(Trt)-Pro-Arg-Asn-Pro-His-Lys-NH2; '
Fmoc-Arg(Mtr)-OH, Fmoc-Pro-OH, Fmoc-Cys(Trt)-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-AIa-OH s. Bit-OH:
Bit-Ala-Asp-Cys(Trt)-Pro-Arg-NH2;
j. Fmoc-Arg(Mtr)-OH, Fmoc-Pro-OH, Fmoc-Cys(Trt)-OH, FmocAsp(OBut)-OH, Fmoc-AIa-OH, Fmoc-Thr(But)-OH a_ Bit-OH:
Bit-Thr-AIa-Asp-Cys(Trt)-Pro-Arg-NH2;
Fmoc-Pro-OH, Fmoc-Cys(Trt)-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-AIaOH, Fmoc-Thr(But)-OH, Fmoc-Lys(BOC)-OH Bit-OH:
Bit-Lys-Tbr-Ala-Asp-Cys(Trt)-Pro-NH2;
j Fmoc-NMeAla-OH, Fmoc-Cys(Trt)~OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-AIa-OH, Fmoc-Thr(But)-OH, Fmoc-Lys(BOC)-OH A Bit-OH:
Bit-Lys-Thr-Ala-Asp-Cy$(Trt)-NMeAla-NH2;
Příklad 8
Způsob přípravy vhodného materiálu pro afinitní chromatografi i k čištění integrinů
Sepharose se aktivuje způsobem podle lit. 1, str. 14. Pak se k 10 g aktivované Sepharose přidá 20 mg avidinu ve 20 ml 0,lM roztoku hydrogenuhličitanu sodného. Suspenze se míchá po dobu 12 hodin při teplotě 4’C a pak se promyje. Produkt se suspenduje ve vodě s několika krystaly natriumazidu. Avidinový komplex s biotinylovanými sloučeninami obecného vzorce I, například s cyklo(Arg-Gly-Asp-D-Phe-Lys(N -Bit)) x TFA se vytváří tak, že se rozpustí 1,1 ekvivalentu peptidu v natriumacetátovém pufru, roztok se přidá k suspenzi avidin-Sepharosy a míchá se po dobu čtýr hodin, Nadbytek peptidu se odstraní promytím.
Následující příklady objasňují farmaceutické prostředky:
Příklad A., Injekční ampulky
Roztok 100 g účinné látky obecného vzorce I a 5 g dinatriumhydrogenfosfátu ve 3 1 dvakrát destilované vody se nastaví 2n kyselinou chlorovodíkovou na hodnotu pH 6,5, sterilně se zfiltruje ni ní e a do injekčních ampulek, lyofilizuje se za sterilní.ch podmínek a sterilně se ampulky uzavřou. Každá injekční obsahuje 5 mg účinné látky.
ampulka
Příklad B. Čípky
Roztaví se směs 20 g účinné látky obecného vzorce I se 100 g sojového lecitinu a 1400 g kakového másla, vlije se do formiček a nechá se vychladnout. Každý Čípek obsahuje 20 mg účinné látky.
Příklad C. Roztok
Připraví se roztok 1 g účinné sloučeniny obecného vzorce I,
9,38 g dihydrátu natriumdihydrogenfosfátu, 28,48 g dinatriumhydrogenfosfátu se 12 molekulami vody a 0,1 g benzalkoniumchloridu
Y___940 ml dvakrát des-tilováné—vody-.—Hodnota—pH—roztoku— se-upravř na 6,8, doplní se na jeden litr a steriluje se ozářením. Tohoto roztoku je možno používat jakožto očních kapek.
Příklad D. Mast ' ’
--- 500 mg účinné látky obecného vzorce I se smísí s 99,5 g vazelíny za aseptických podmínek.
Příklad E. Tablety
Ze směsi 1 kg účinné látky obecného vzorce I, 4 kg laktózy,
1,2 kg bramborového škrobu, 0,2 kg mastku a 0,1 kg stearátu ho39 řečnatého se obvyklým způsobem vylisují tablety, tak, že každá tableta obsahuje 10 mg účinné látky.
Příklad F. Dražé
Obdobně jako podle příkladu E se vylisují tablety, které se
Příklad G. Kapsle sobě známým způsobem se plní do kapslí z tvrdé želatiny kg účinné látky obecného vzorce I tak, že každá kapsle obsahuje mg účinné látky.
Příklad H. Ampule
Roztok 1 kg účinné látky obecného vzorce I v 60 1 dvakrát destilované vody se sterilně zfiltruje a plní se do ampulí, lyofilizuje se za sterilních podmínek a sterilně se ampule uzavřou. Každá ampule obsahuje 10 mg účinné látky.
Příklad I. __I_nhala.ční. sprej.___________________________________ - — - ------=-·----Rozpustí se 14 g účinné látky obecného vzorce I v 10 1 isotonického roztoku chloridu sodného a plní se do běžných obchodních nádob pro stříkání s pumpovým mechanizmem. Roztok se může stříkat do úst nebo do nosu. Každý střik (přibližně 0,1 ml) odpovídá dávce přibližně 0,14 mg.
Průmyslová využitelnost
Derivát biotiny1ováného peptidu a jeho farmaceuticky vhodné soli jsou jakožto inhibitory integrinu využitelné pro výrobu farmaceutických prostředků a k různým účelům v biologii. /]

Claims (8)

  1. PATENTOVÉ NÁROKY Derivát biotinylovaného peptidu obecného vzorce I chybí nebo znamená skupinu -NH-(CH2)n-CO- nebo
    -NH-(CH2)n-NH- - — -------- -------- - > -------—znamená skupinu X-Arg-Gly-Asp-Y, A-cys-{R2)-B-U nebo cyklo(Arg-Gly-Asp-Z), přičemž Z v postranním řetězci je vázáno na Q a pokud Q chybí na biotin, a Y znamená vždy na sobě nezávisle zbytek aminokyseliny nebo zbytek di-, tri- tetra- nebo pentapeptidu, přičemž jsou a-
    minokyseliny na sobě nezávisle voleny ze souboru zahrnují- čího Ala, Asn, Asp, Arg, Cys, Gln, Glu, Gly, 4-Hal-Phe, His, homo-Phe, Ile, Leu, Lys, Met, Nle, Phe, Phg, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr a Val, přičemž tyto kyseliny jsou
    pOpřípadě der ivát i žováný’, T chybí nebo znamená Asp nebo fragment peptidu volený ze souboru zahrnujícího
    Ala-Asp, Thr-Ala-Asp, Lys-Thr-Ala-Asp, Lys-Thr-Ala-Asn, Lys-Thr-GIy-Asp, Lys-Ala-Ala-Asp, Arg-Thr-Ala-Asp, Ser-Ala-Asp,
    Gln-Ser-Ala-Asp, GIp-Ser-Ala-Asp, Gly-Lys-Thr-Ala-Asp, Asn-Gly-Lys-Thr-AIa-Asp, Ile-Ser-Ala-GIy,
    Arg-Ser-Ala-Gly, Cys-Asn-Gly-Lys-Thr-Ala-Asp, Tyr-Cys-Asn-Gly-Lys-Thr-Ala-Asp,
    Asp-Tyr-Cys-Asn-Gly-Lys-Thr-Ala-Asp,
    Asp-Asp-Tyr-Cys-Asn-Gly-Lys-Thr-Ala-Asp,
    GIy-Lys-Thr-Cys(Trt)-Asp,
    Met-Asp-Asp-Tyr-Cys-Asn-Gly-Lys-Thr-Ala-Asp,
    Asp-Met-Asp-Asp-Tyr-Cys-Asn-Gly-Lys-Thr-Ala-Asp,
    B chybí nebo znamená 0H-, Ala-, Arg, Asn, Asp, Cys, Gin,’Glu,
    Gly, His, Ile, Leu, Lys, Met, Orn, Phe, 4-Hal-Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr a Val, nebo na atomu dusíku methylovaný derivát těchto aminokyselinových zbytků nebo znamená fragment peptidů ze souboru zahrnujícího Pro-Arg, Pro-Arg-Asn
    Pro -Arg -Asn- Pro, Pro-Arg-Asn-Pro-His,_ ,
    Pro-Arg-Asn-Pro-His-Lys,
    Pro-Arg-Asn-Pro-His-Lys-Gly,
    Pro-Arg-Asn-Pro-His-Lys-Gly-Pro,
    Pro-Arg-Asn-Pro-His-Lys-Gly-Pro-Ala,,
    P r o - Ar g - Asn- P r o - H i s - L y s - G1 y 7 P r o - A1 a - T hr ,________ _____________ _____.... _ přičemž pokud R1 znamená skupinu A-Cys-(R2)-B-U, může chybět pouze jedna ze skupin symbolu A nebo B, a dále znamená
    R2 atom vodíku, alkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku, Trt,
    Dpra nebo Bzl,
    U OH, OR9, NH2, NHR9 nebo N(R9)2,
    Z vždy na sobě nezávisle zbytek aminokyseliny nebo zbytek di-, tri- nebo tetrapeptidu, přičemž jsou aminokyseliny na sobě nezávisle voleny ze souboru zahrnujícího Ala, Asn, Asp, Arg, Cys, Gin, Glu, Gly, His, Ile, Leu, Lys, Met, Phe, _________Pr.Oj_S.er.»_Thr_,„T.r_p_,—Tyr—a_ Val-nebo—M ,—př-i čem ž—t-y-t-o—am i nokyseliny jsou popřípadě derivatizovány, a aminokyselinové zbytky jsou navzájem peptidově vázány přes a-aminoskupiny a tt-karboxylové skupiny a skupina M je vždy obsažena,
    M skupinu NH(R8}-CH(R3)-COOH,
    R3 -R5-R4, -R6-R4, -R7-R4,
    R4 skupinu OH, NHz, SH -nebo COOH,
    R5 alkylenovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku,
    R6 alkylenfenylovou skupinu se 7 až 14 atomy uhlíku,
    R7 alkylenfenylalkylenovou skupinu se 8 až 15 atomy uhlíku,
    R8 atom vodíku, alkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku nebo alkylenfenylovou skupinu se 7 až 12 atomy uhlíku,
    R9 alkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku
    Hal atom fluory, chloru, bromu nebo jodu a η 1 , 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 nebo 10, a pokud derivát obsahuje zbytky opticky aktivních aminokyselin a derivátů opticky aktivních aminokyselin D a L formy derivátu a jeho farmaceuticky vhodné soli.
  2. 2. Derivát derivátu biotinylovaného peptidu podle nároku 1 obecnéno vzorce i ...... ... _ ........ „ .......' ...
    b) Q chybí a kde znamená
    R1 Gly-Gly-Gly-Arg-Gly-Asp-Ser-Pro-Lys-OH,
    c) Q chybí a kde znamená
    R1 Gly-Gly-Gly-Lys-Thr-Ala-Asp-Cys{Trt)-Pro-OH,
    d) Q znamená skupinu -NH-(CH2)5-CO a R1 cyklo-(Arg-Gly-Asp-D-Phe-Lys),
    e) Q znamená skupinu -NH-(CH2)5-CO a R1 cyklo-(Arg-Gly-Asp-D-Phe-Lys-Gly),
    f) Q znamená skupinu -NH-{CH2)5-CO a R1 cyklo-{Arg-Gly-Asp-D-Phe-Val-Lys),
    g) Q znamená skupinu -NH-(CH2)s-CO a R1 cyklo-(Arg-Gly-Asp-D-Trp-Lys),
    h) Q znamená skup i nu , -NH -(CH2)s-CO a
    R1 cyklo-(Arg-Gly-Asp-D-Tyr-Lys), a jeho farmaceuticky vhodné soli.
  3. 3. Způsob přípravy derivátu biotinylovaného peptidu podle nároku 1 obecného vzorce I, kde jednotlivé symboly mají v nároku 1 uvedený význam, a jeho solí, vyznačující se tím, že se
    a) nechává reagovat sloučenina obecného, vzorce. II
    H-Q-Rl (II) kde Q a R1 mají v nároku 1 uvedený význam, acylační reakcí se sloučeninou obecného vzorce III (III) kde znamená
    L atom chloru, bromu, jodu nebo volnou nebo reaktivní funkčně obměněnou hydroxylovou skupinu, nebo
    ------- b)- se nechává reagovat sloučenina obecného vzorce IV---------------- -----H-Ri (IV) kde R1 má v nároku 1 uvedený význam, acylační reakcí se sloučeni- kde Q má v nároku 1 uvedený význam, a kde znamená
    L atom vodíku, chloru, bromu, jodu nebo volnou nebo reaktivní funkčně obměněnou hydroxylovou skupinu, nebo c) se sloučenina obecného vzorce I uvolňuje ze svého funkčního derivátu zpracováním solvolyzačním nebo hydrógenolyzačním činidlem , a/nebo se zásaditá nebo kyselá sloučenina obecného vzorce I zpracováním kyselinou nebo zásadou převádí na svoji sůl.
  4. 4. Způsoh výroby farmaceutickéhoprostředku,i__v_y^. z—n~ a-č--u~— Χ*Τ*ΕΓ*Ϊ se t í m , že se derivát biotinylovaného peptidu podle nároku 1 obecného vzorce I, kde jednotlivé symboly mají v nároku 1 uvedený význam, nebo jeho fysiologicky vhodná sůl zpracovává spolu s alespoň jedním pevným, polopevným nebo kapalným nosičem nebo s pomocnou látkou na vhodnou dávkovači formu.
  5. 5. Farmaceutický prostředek, vyznačující se t í m , že obsahuje jako účinnou látku alespoň jeden derivát biotinylovaného peptidu podle nároku 1 obecného vzorce I, kde jednotlivé symboly mají v nároku 1 uvedený význam, nebo jeho fysiologicky vhodnou sůl.
  6. 6. Derivát biotinylovaného peptidu podle nároku 1 obecného vzorce I, kde jednotlivé symboly mají v nároku 1 uvedený význam, nebo jeho f ysiolpgicky „vhodná- sůl-jakožto- integr inové-ihKibítórý k potírání patologických angiogenních onemocnění, thrombos, srdečního infarktu, koronárních onemocnění srdce, arteriosklerosy, nádorů, osteoporosy, zápalů a infekcí.
  7. 7. Použití derivátu biotinylovaného peptidu podle nároku 1 obecného vzorce I, kde jednotlivé symboly mají v nároku 1 uvedený význam, nebo jeho fysiologicky vhodných solí pro výrobu léčiv.
  8. 8. Použití derivátu biotinylovaného peptidu podle nároku 1 obecného vzorce I, kde jednotlivé symboly mají v nároku 1 uvedený význam, k čištění integrinů afinitní chromatografií.
    θ· Použití derivátu biotinylovaného peptidu podle nároku 1 obecného vzorce I, kde jednotlivé symboly mají v nároku 1 uvedený význam, jako diagnostických markérů pro anti-biotin-protilátkové reakce ve zkouškách typu ELISA a ve FACS-analýze.
    1θ· Použiti derivátu biotinylovaného peptidu podle nároku 1 obecného vzorce I, kde jednotlivé symboly mají v nároku 1 uvedený vyznám, k mikroskopii v silovém poli k měření síly vzájemného důso b e n-í—1 í-gand-receptoγτ—'.....—..........- —............. “
CZ19962629A 1995-09-14 1996-09-09 Derivát peptidu, jeho použití a farmaceutický prostředek, který ho obsahuje CZ291506B6 (cs)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DE19534016A DE19534016A1 (de) 1995-09-14 1995-09-14 Biotinderivate

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CZ262996A3 true CZ262996A3 (cs) 1998-02-18
CZ291506B6 CZ291506B6 (cs) 2003-03-12

Family

ID=7772112

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CZ19962629A CZ291506B6 (cs) 1995-09-14 1996-09-09 Derivát peptidu, jeho použití a farmaceutický prostředek, který ho obsahuje

Country Status (23)

Country Link
EP (1) EP0771818B1 (cs)
JP (1) JP4127325B2 (cs)
KR (1) KR970015597A (cs)
CN (1) CN1168738C (cs)
AT (1) ATE215558T1 (cs)
AU (1) AU719307B2 (cs)
BR (1) BR9603741A (cs)
CA (1) CA2185394C (cs)
CZ (1) CZ291506B6 (cs)
DE (2) DE19534016A1 (cs)
DK (1) DK0771818T3 (cs)
ES (1) ES2174007T3 (cs)
HU (1) HUP9602223A3 (cs)
MX (1) MX9604019A (cs)
NO (1) NO314694B1 (cs)
PL (1) PL316069A1 (cs)
PT (1) PT771818E (cs)
RU (1) RU2171807C2 (cs)
SI (1) SI0771818T1 (cs)
SK (1) SK283129B6 (cs)
TW (1) TW517063B (cs)
UA (1) UA41981C2 (cs)
ZA (1) ZA967765B (cs)

Families Citing this family (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2000038786A2 (en) 1998-12-23 2000-07-06 G.D. Searle & Co. Use of cyclooxygenase 2 inhibitor and an integrin antagonist as a combination therapy in the treatment of neoplasia
EP1257566A4 (en) * 2000-02-11 2005-06-15 Univ Duke METHOD OF TREATING EYE PATHOLOGIES
KR100778633B1 (ko) * 2007-04-13 2007-11-28 성균관대학교산학협력단 비오틴과 비오틴-폴리에틸렌글리콜이 접합된 ｇｌｐ-1유도체, 이의 제조방법 및 이를 포함하는 약학 조성물
CN101990425B (zh) * 2008-04-08 2016-01-20 默克专利股份有限公司 包含环肽的组合物和使用方法
CN108956790A (zh) * 2017-05-18 2018-12-07 中国人民解放军第二军医大学第二附属医院 一组氨基酸标志物在急性肾损伤诊断试剂盒中的应用
CN113827591B (zh) * 2021-11-09 2023-06-09 上海市肺科医院 生物素在制备治疗脓毒症药物中的应用

Family Cites Families (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS5315076B2 (cs) * 1973-09-27 1978-05-22
JP2945680B2 (ja) * 1988-09-09 1999-09-06 旭硝子株式会社 ペプチド誘導体およびその用途
US5087561A (en) * 1990-06-28 1992-02-11 Merck & Co., Inc. Humoral hypercalcemic factor antagonists modified at position 13 by biotin
US6287792B1 (en) * 1991-06-17 2001-09-11 The Regents Of The University Of California Drug delivery of antisense oligonucleotides and peptides to tissues in vivo and to cells using avidin-biotin technology
DE4310643A1 (de) * 1993-04-01 1994-10-06 Merck Patent Gmbh Cyclische Adhäsionsinhibitoren
DE4336758A1 (de) * 1993-10-28 1995-05-04 Merck Patent Gmbh Lineare Adhäsionsinhibitoren

Also Published As

Publication number Publication date
HUP9602223A3 (en) 1998-03-02
JPH09124692A (ja) 1997-05-13
KR970015597A (ko) 1997-04-28
CN1153784A (zh) 1997-07-09
UA41981C2 (uk) 2001-10-15
NO963851D0 (no) 1996-09-13
ATE215558T1 (de) 2002-04-15
MX9604019A (es) 1997-03-29
AU6551896A (en) 1997-03-20
HU9602223D0 (en) 1996-10-28
AU719307B2 (en) 2000-05-04
EP0771818B1 (de) 2002-04-03
TW517063B (en) 2003-01-11
EP0771818A3 (de) 1997-07-02
DK0771818T3 (da) 2002-07-29
EP0771818A2 (de) 1997-05-07
ZA967765B (en) 1997-03-26
BR9603741A (pt) 1998-06-02
ES2174007T3 (es) 2002-11-01
DE19534016A1 (de) 1997-03-20
PL316069A1 (en) 1997-03-17
CZ291506B6 (cs) 2003-03-12
CA2185394C (en) 2007-05-01
NO314694B1 (no) 2003-05-05
HUP9602223A2 (en) 1997-06-30
JP4127325B2 (ja) 2008-07-30
CA2185394A1 (en) 1997-03-15
NO963851L (no) 1997-03-17
PT771818E (pt) 2002-09-30
CN1168738C (zh) 2004-09-29
RU2171807C2 (ru) 2001-08-10
DE59608995D1 (de) 2002-05-08
SK283129B6 (sk) 2003-02-04
SK115696A3 (en) 1997-05-07
SI0771818T1 (en) 2002-10-31

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CA2185489C (en) Cyclic adhesion inhibitors
MXPA96004100A (en) Cyclic compounds, adhes inhibitors
CA2250861C (en) Cyclic adhesion inhibitors
HUP0201925A2 (en) Cyclic peptide derivatives as inhibitors of integrin alphavbeta6 and their use
AU716847B2 (en) Cyclopeptide derivatives
RU2188205C2 (ru) Циклические азапептиды с ангиогенным действием
CZ262996A3 (cs) Derivát biotinylovaného peptidu, způsob jeho přípravy a použití a farmaceutický prostředek, který ho obsahuje
CZ20014484A3 (cs) Inhibitory integrinu alfa v beta 6
CZ465899A3 (cs) Derivát cyklického azapeptidu s angiogenním působením

Legal Events

Date Code Title Description
PD00 Pending as of 2000-06-30 in czech republic
MM4A Patent lapsed due to non-payment of fee

Effective date: 20030909