CZ290383B6

CZ290383B6 - Racemické a opticky aktivní estery trans-apovinkaminové kyseliny jako léčiva

Info

Publication number: CZ290383B6
Application number: CZ19981962A
Authority: CZ
Inventors: Csaba Szántay; István Moldvai; András Vedres; Mária Incze; János Kreidl; László Czibula; Jenöné Mária Farkas; Juhász Ida Deutschné; Anikó Gere; Paróczai Margit Pellioniszné; Erzsébet Lapis; András Szekeres; Balázs Mária Zájerné; Ádám Sarkadi; Ferenc Auth; Béla Kiss; Egon Kárpáti; Sándor Farkas
Original assignee: Richter Gedeon Vegyészeti Gyár Rt.
Priority date: 1995-12-22
Filing date: 1996-12-13
Publication date: 2002-07-17
Also published as: AR005182A1; HU214600B; EP0876367B1; DE69623656T2; ES2181926T3; WO1997023481A1; IL124097A; CN1205701A; TW366348B; CZ196298A3; DK0876367T3; CA2238635A1; RU2161157C2; JP2000502676A; US6093720A; PL328170A1; CN1072670C; DE69623656D1; ZA9610646B; UA61062C2

Abstract

Racemick , nebo opticky aktivn estery trans-apovinkaminov kyseliny obecn ho vzorce I, v n m R znamen vod k nebo skupinu a, kde Z znamen nasycenou nebo nenasycenou alkylovou skupinu C.sub.1-4.n. s p° m²m nebo rozv tven²m °et zcem, p° padn substituovan² C.sub.6-10.n.aryl, C.sub.6-12.n.arylC.sub.1-4.n.alkyl, heteroaryl, nebo 14-eburnameninylovou skupinu; a n je cel slo 2, 3 nebo 4; kde heteroaryl znamen pyrrolylovou, furylovou, thienylovou, pyridylovou, pyranylovou, pyrazolylovou, imidazolylovou, pyrimidinylovou nebo morfolinylovou skupinu; a kde substituenty v² e zm n n²ch arylov²ch, aralkylov²ch a heteroarylov²ch skupin mohou b²t vybr ny z halogenu, alkylov skupiny C.sub.1-4 .n.a alkoxylov skupiny C.sub.1-4.n., hydroxylov , nitro-, amino-, kyan-, nebo trifluormethylov skupiny; stejn jako jejich terapeuticky pou iteln soli. Farmaceutick kompozice obsahuj c tyto estery, zp sob p° pravy v² e uveden²ch ester a kompozic a jejich pou it . Estery vzorce I vykazuj zvl tn antioxida n , antiischemick a antiamnezick · inky a jsou pou iteln pro inhibici peroxidace lipid a pro ochranu proti ischemii a amn zii a pro jejich l bu, a pro l en r zn²ch neurodegenerativn ch chorob jako je Alzheimerova choroba.\

Description

Racemické a opticky aktivní estery trans-apovinkaminové kyseliny jako léčiva

Oblast techniky

Tento vynález se týká racemických a opticky aktivních esterů apovinkaminové kyseliny vzorce

(I), kde

R znamená vodík nebo skupinu Z-C=O, přičemž Z zastupuje alkylovou skupinu Cm, případně substituovaný aryl, aralkyl, heteroaryl nebo 14-ebumameninylovou skupinu a n je celé číslo 2, 3 nebo 4, stejně jako jejich terapeuticky použitelné soli a farmaceutické kompozice obsahující tyto sloučeniny. Kromě toho se vynález týká způsob přípravy výše uvedených sloučenin a kompozic.

Sloučeniny podle vynálezu jsou nové a mají cenné biologické účinky. V podmínkách in vitro vykazují význačné antioxidační účinky (inhibice peroxidace lipidů). Při zkouškách in vivo byly zjištěny pozoruhodné antiischemické a antiamnezické účinky.

Vynález se tudíž týká i způsobu léčení zahrnujícího podání terapeuticky aktivní dávky sloučeniny vzorce I nebo její terapeuticky vhodné soli léčenému pacientovi. Pokud jde o vzorec I:

Co se týče významu R: Z jako alkylová skupina Cm může zastupovat nasycené nebo nenasycené skupiny s přímým nebo rozvětveným řetězcem, jako například skupinu methylovou, ethylovou, n-propylovou, izopropylovou, n-butylovou, sec.-butylovou, terc.-butylovou, izobutylovou, vinylovou, propenylovou apod.; jako arylová skupina může být jako Z použita například fenylová skupina; jako aralkylová skupina to může být benzylová skupina, difenylmethylová skupina a podobně; jako heteroarylová skupina obsahující stejné nebo různé heteroatomy, například atom dusíku, kyslíku nebo síry jako například skupinu pyrrolylovou, fúrylovou, thienylovou, pyridylovou, pyranylovou, pyrazolylovou, imidazolylovou, pyrimidinylovou, morfolinylovou a podobně.

Substituenty výše zmíněných arylových, aralkylových a heteroarylových skupin mohou být halogeny jako fluor, chlor a bróm, alkylové skupiny C_w a alkoxylové skupiny Cm, stejně jako hydroxylová, nitro-, amino-, kyano-, trifluormethylová skupina ap.

Terapeuticky přijatelné soli sloučenin vzorce I podle vynálezu mohou být kyselé adiční soli nebo kvartémí soli.

-1 CZ 290383 B6

Dosavadní stav techniky

Deriváty apovinkaminové kyseliny podle vzorce II používané jako výchozí látky lze připravit působením kyselin na vhodné deriváty hydroxyiminoktahydroindol (2,3-a) chinolizinu, jak je popsáno v britském patentu GB 2 124 214.

Z literatury jsou známé sloučeniny strukturálně příbuzné sloučeninám podle vzorce I. V maďarském patentu 186 891 jsou popsány estery kyseliny trans-apovinkaminové sprotizánětlivými, protikřečovými, protiaterosklerotickými účinky i účinné proti Parkinsonově nemoci. Maďarský patent 187 733 popisuje deriváty apovinkaminové kyseliny s postranními řetězci s účinky antihypoxickými nebo vazodilatačními.

Podstata vynálezu

Na rozdíl od výše zmíněných sloučenin známých z literatury, nové estery trans-apovinkaminové kyseliny mají významné antioxidační, antiamnezické a antiischemické účinky.

Podstatu vynálezu tak tvoří racemické a opticky aktivní estery apovinkaminové kyseliny vzorce I

(I) kde R znamená vodík nebo skupinu Z-C=O, kde Z znamená nasycenou nebo nenasycenou alkylovou skupinu Ci_4 s přímým nebo rozvětveným řetězcem, případně substituovaný C^ioaryl, C^aryl Ci^alkyl, heteroaryl nebo 14-ebumameninylovou skupinu; a n je celé číslo 2, 3 nebo 4, kde heteroaryl znamená pyrrolylovou, furylovou, thienylovou, pyridylovou, pyranylovou, pyrazolylovou, imidazolylovou, pyrimidinylovou nebo morfolinylovou skupinu; a kde substituenty výše zmíněných arylových, aralkylových a heteroarylových skupin jsou vybrány z halogenů, alkylové skupin Ci^ a alkoxylové skupiny C]_4, stejně jako hydroxylové, nitro-, amino-, kyano-, trifluormethylové skupiny;

stejně jako jejich terapeuticky použitelné soli a farmaceutické kompozice, které obsahují.

Je uveden také způsob přípravy výše uvedených esterů a jejich použití.

Nepřetržitý krevní oběh je nezbytný pro normální funkce centrálního nervového systému (CNS), protože zajišťuje potřebnou saturaci extrémních nároků mozkové tkáně na glukózu a kyslík.

Vlivem ischemie a reperfuze jsou narušeny poznávací pochody; v závislosti na rozsahu a trvání ischemie může dojít k reverzibilnímu i ireverzibilnímu poškození. Poškození struktury a funkce membrán neuronových buněk může vést k zániku neuronu.

-2CZ 290383 B6

V důsledku ischemie může dojít k různým patologickým pochodům jako je vznik volných radikálů. Vznik volných radikálů má za následek oxidaci nenasycených mastných kyselin (peroxidace lipidů), které tvoří důležitou složku membrán. Toto je méně specifický proces destrukce buněk změnami nebo poškozováním biomolekul. Takto lze poškodit funkce různých vrstev buněk, orgánů a celých organismů.

Reakce volných radikálů jsou pravděpodobně příčinou patogeneze některých traumat vyvolaných ischemií jako jsou ischemická střevní onemocnění, ischemie myokardu, hemoratický šok, poruchy cerebrovaskulámích funkcí vázané na ischemií, ischemická onemocnění jater, ledvinová ischemie a podobně.

V důsledku inhibice peroxidace lipidů antioxidační sloučeniny zajišťují ochranu proti traumatům vyvolaným volnými radikály v podmínkách ischemie. Proto mohou být antioxidanty použitelné jako antiischemické sloučeniny v léčení výše zmíněných patologických nálezů.

Zkoušky in vitro zjišťující antioxidační účinky

Antioxidační účinky byly studovány za použití dvou metod.

1. Účinek na peroxidaci lipidů v mozkových mikrozómech vyvolanou NADPH

J. M. Braughler a další: Nové 21-aminosteroidy jako účinné inhibitory peroxidace lipidů v přítomnosti železa. (J. Biol. Chem., sv. 262, s. 10 438-10 440, 1987.)

T. J. Player a A. A. Horton: Enzymová peroxidace lipidů v mikrozomální frakci mozku krys. (J. Neurochem., sv. 37, 422^126, 1981.)

Pro přípravu mikrozómů bylo použito samců krys Hannover-Wistar s tělesnou hmotností 150-259 g. Po dekapitaci byl vyjmut celý mozek a homogenizován v desetinásobku ledově studeného roztoku sacharózy koncentrace 0,25M. Homogenát byl 10 minut odstřeďován na zařízení Hitachi CR 26H při 15 000 g a 4 °C, supematant (kapalina nad usazeninou) byl potom spojen a 60 minut odstřeďován na zařízení Hitachi SCP 85H při 78 000 g a 4 °C. Po suspendování precipitátu v roztoku KC1 koncentrace 0,15M byl určen obsah bílkovin v získaném roztoku a upraven na koncentraci ÍOmg/ml. Takto získaný mikrozóm byl zmražen ve směsi suchého ledu a acetonu a skladován do použití při -70 °C. Inkubovaná směs měla složení: 50 mM TRIS-HC1 (pH 6,8), 0,2 mM chloridu železitého, 1 mM dihydrogenkaliumfosfátu, 0,5 mM ADP, 0,2 mg mikrozómů a testovaná sloučenina. Inkubace byla provedena s konečným množstvím 1 ml při inkubační době 20 minut a teplotě 37 °C. Lipidová peroxidace byla vyvolána přidáním 0,4 mM NADPH. (Srovnávací vzorky neobsahovaly NADPH.) Reakce byla zastavena přidáním roztoku obsahujícího trichlóroctovou kyselinu koncentrace 40 % a HC1 koncentrace 5 M v poměru 2:1.

Vznik malondialdehydu byl zjištěn kyselinou thiobarbiturovou. Po uvedeném ukončení reakce byl ke každému vzorku přidán 1 ml 1% roztoku thiobarbiturové kyseliny a vzorky byly na 10 minut umístěny ve vodní lázni teploty asi 100 °C. Potom byly vzorky 10 minut odstřeďovány při 2000 g v zařízení Janetzki K.70 při teplotě 4 °C. Hodnoty absorbance barevné kapalné fáze z odstředění (supematantů) byly měřeny na spektrofotometru Hitachi 150-20 při 535 nm. Jako referenční sloučeniny bylo použito malondialdehyd-bis-diethylacetalu.

2. Účinek na peroxidaci lipidu vyvolanou Fe²⁺ v mozkovém homogenátu.

Po dekapitaci krys Hannover-Wistar hmotnosti 150-250 g byl celý mozek homogenizován v 9 objemech ledového ústroje Krebs-Ringer obsahujícího 15 mM HEPES (4-(2-hydroxyethyl)1-piperazinylethansulfonová kyselina) (pH 7,4), 140 mM NaCl, 3,6 mM KC1, 1,5 mM CaCl₂,

-3CZ 290383 B6

1,4 mM K₂HPO₄ a 10 mM glukózy. Potom byl stanoven obsah proteinu v roztoku a upraven na koncentraci lOmg/ml.

Po přidání testovaného inhibičního činidla v objemu 5 μΐ až 200 μΐ homogenátu byla inkubační směs 20 minut inkubována při 37 °C. Peroxidace lipidů vyvolaná Fe²⁺ byla provedena přidáním 5 μΐ roztoku FeífNH^SO.^ koncentrace 8 mM. Po ukončení inkubační doby byla reakce zastavena přidáním 1 ml roztoku obsahujícího HC1 v koncentraci 0,8 M a 12,5% kyselinu trichloroctovou, a potom byly vzorky 10 minut odstřeďovány při 2000 g v zařízení Janetzki K70 při 4 °C.

K dávce 0,5 ml supematantu se přidal 1 ml roztoku 1% thiobarbiturové kyseliny, pak se vzorky umístily na 20 minut ve vodní lázni teploty 100 °C. Intenzita vzniklého zbarvení se stanovovala spektrofotometrem Hitachi 150-20 při 535 nm s použitím bis-diethylacetalu malondialdehydu jako referenční sloučeniny.

Na základě korelací koncentrace/účinek zkoušených sloučenin byly stanoveny hodnoty IC50 a tyto výsledky jsou uvedeny pro obě metody v tabulce 1.

Tabulka 1

Sloučenina č.	Příklad č.	AEI (IC₅₀ μΜ)	ANI (IC50 μΜ)
2705279	2	6,3	4,8
1010885	1	9,7	15,5
1010962	8	7,5	5,7
1010960	6	7,4	5,7
1010961	7	5,9	5,3
1011005	9	10,3	11,9
2705283	3	11,2	6,8
2705284	4	20,4	6,8
1011008	10	6,0	21,2
1010887	13	12,6	7,2
1010886	18	7,6	7,7
1011038	16	8,4	8,7
1011036	14	7,7	9,3
1011037	13	3,2	11,4
1011047	17	5,9	16,1
Idebenon	1,2	18,9
Vitamin E	406,3	12,1
Silymarin	191,0	54,9

Z údajů v tabulce 1 lze konstatovat, že každá zkoušená sloučenina podle vynálezu vykazovala antioxidační aktivitu (inhibici peroxidace lipidů). Antioxidační účinek byl zjišťován zkouškou peroxidace lipidů vyvolané jak cestou enzymatickou (NADPH, AEI), tak neenzymatickou (Fe²⁺, ANI). Intenzita antioxidačního účinku sloučenin byla charakterizována jejich hodnotami IC50. Jako referenčních sloučenin bylo použito idebenonu s cerebroprotektivní účinností, přírodního antíoxidantu vitaminu E (DL-a-tokoferolu) a silymarinu s hepatoprotektivní účinností.

Z údajů v tabulce 1 je zřejmé, že testované sloučeniny vykazovaly mnohem vyšší inhibiční aktivitu vůči peroxidaci lipidů vyvolané NADPH (enzymaticky) než referenční sloučeniny, jak vyplývá zjejich mnohem nižších hodnot IC50 než jsou hodnoty IC₅₀ DL-a-tokoferolu nebo silymarinu. Vedle sloučenin, jež se projevily jako velice účinné, antioxidační účinek sloučenin č. 2705279, 1010961, 1011008, 1011037 a 1011047 byl srovnatelný s antioxidačním účinkem idebenonu. Sloučeniny č. 1010885, 1010962, 1010960, 1011005, 1010887, 1010886, 1011038,

-4CZ 290383 B6

1011036 a 2705283 inhibují peroxidaci lipidů vyvolanou NADPH asi dvacetkrát účinněji než silymarin.

Převažující většina sloučenin uvedených v tabulce 1 vykázala mnohem silnější inhibiční účinek na peroxidaci lipidů vyvolanou Fe²⁺ (neenzymaticky) než referenční sloučeniny. Zvláště aktivní byly sloučeniny č. 2705279, 2705283, 2705284, 1010962, 1010960, 1010961, 1010887, 1010886, 1011038 a 1011036, a to dvakrát více než idebenon nebo DL-a-tokoferol. Sloučeniny č. 1010885 a 1011047 inhibují peroxidaci lipidů vyvolanou ionty Fe²⁺ účinněji než idebenon. Antioxidační aktivita sloučenin č. 1011008 rovněž předčí aktivitu silymarinu.

Lze konstatovat na základě údajů získaných při obou řadách testů in vitro, že sloučeniny č. 2705279, 1010962, 1010960, 1010961, 1010886, 101138 a 1011036 velmi významně inhibují peroxidaci lipidů vyvolanou různými způsoby (ionty Fe²⁺ nebo NADPH), takže hodnoty IC₅o těchto sloučenin se nalézají pod koncentrací 10 μΜ. Poněvadž žádná ze srovnávaných sloučenin nevykazovala takovou účinnost při obou druzích testů (inhibovaly v různém stupni peroxidaci lipidů vyvolanou buď NADPH nebo ionty Fe²⁺), lze sloučeniny podle vynálezu uznat za účinnější než referenční sloučeniny.

Všechny zkoumané sloučeniny vykazují značnou antioxidační aktivitu, protože jsou schopny inhibovat peroxidaci lipidů způsobenou volnými radikály vzniklými ve Fentonově reakci (katalyzované Fe²⁺) nebo působením enzymu NADPH-cytochrom c reduktáza.

Zkratky:

NADPH:

TRIS:

ADP: idebenon: DL-a-tokoferol: ellagová kyselina: silymarin:

AEI:

ANI:

redukovaná forma fosfátu nikotinamidadenindinukleotidu tris(hydroxymethyl)aminomethan adenosin-5 '-difosfát

6-( 10-hydroxydecyl)-2,3-dimethoxy-5-methyl-l ,4-benzochinon

2.5.7.8- tetramethyl-2-(4',812 '-trimethyltridecyl)-6-chromanol

2.3.7.8- tetrahydroxy( 1 )benzopyrano(5,4,3-cde)( 1 )benzopyran-5,10-dion silybinin + silydianin + silychristin zkouška peroxidace lipidů vyvolaná enzymaticky (NADPH) zkouška peroxidace lipidů vyvolaná neenzymaticky (Fe²⁺)

Zkoušky in vitro použité pro zjištění antiischemických a antiamnezických účinků

1. Antiischemický účinek (na modelu oboustranně podvázané cévy)

N. Himori a další: Model mozkové ischemie s aktivací receptoru NMDA a poruchy schopnosti učení a paměti s použitím myší při plném vědomí. (J. Pharmacol. Meth., sv. 23, s. 311-327, 1990.)

Tabulka 2

Sloučenina č.	Příklad č.	Úmrtnost, %
2705279	2	10
1010885	1	60
1010960	6	20
1010961	7	60
1010962	8	40
1011005	9	70
1010887	13	30

-5CZ 290383 B6

Tabulka 2 - pokračování

Sloučenina č.	Příklad č.	r ¹ · ·*·^{1 1} ~— Úmrtnost, %
1010886	13	30
1011036	14	50
1011037	15	50
1011038	16	60
1011047	17	50
Idebenon		40
Vitamin E		70
Kontrola		70

Karotidy (krční tepny) myší (hmotnosti 30 až 32 g) se za narkózy oboustranně vystavily intraperitoneálnímu (i.p.) působení chloralhydrátu v dávce 450 mg/kg. Sympatické a bludné nervy se oddělily a karotidy se oboustranně volně podvázaly. Oba konce úvazku byly vyvedeny na hřbet za uši. Příštího dne byly při plném vědomí myší oba konce úvazku utaženy a tím byl přerušen přívod krve krčními tepnami. Tento stav se udržoval 5 minut a pak bylo podvázání uvolněno s cílem obnovit prokrvení (reperfuzi). Počet zvířat uhynulých během prvních 5 minut a v následujících 24 hodinách byl zaznamenáván. Výpočet a vyhodnocení se provedlo testem chi². 30 minut před podvázáním se intraperitoneálně (i.p.) podávaly zkoušené sloučeniny. Tabulka 2 ukazuje vliv dávek 2 mg/kg těchto sloučenin i.p. na úmrtnost způsobenou oboustranným podvázáním tepen.

Tabulka 3 ukazuje hodnoty ED₅₀ referenčních sloučenin i nejúčinnějších sloučenin podle vynálezu podávaných intraperitoneálně.

Tabulka 3

Sloučenina	ED50 i.p. (mg/kg)
Idebenon	4,50 (0,96-9,38)
Vitamin E	17,80 (8,46-41,8)
2705279	0,76 (0,2-1,27)

Biologická aktivita in vivo sloučenin s výrazným antioxidačním účinkem (IC50 <10 μΜ) in vitro byla zjišťována na modelu cerebrální ischemie vyvolané oboustranným podvázáním tepny. Přechodný dramatický pokles přívodu krve do mozku, posléze počátek reperfúze (opětovné prokrvování) vede ke vzniku mimořádně toxických kyslíkatých volných radikálů (superoxidový radikál, peroxid vodíku). Sloučeniny s antioxidačními vlastnostmi jsou velice účinné v ochraně proti toxickým účinkům uvolněných radikálů. Pětiminutové oboustranné podvázání krční tepny má za následek 70% úmrtnost. Dávky 2 mg/kg nejaktivnějších sloučenin podle vynálezu (2705279, 1010960, 1010887, 1010886) snižují mortalitu na 10-30%, zatímco známé antioxidanty jako idebenon nebo vitamin E používané jako referenční sloučeniny jsou v těchto dávkách méně účinné. Vynikající aktivita sloučeniny č. 2705279, jež byla shledána jako nejúčinnější ještě více překvapuje při porovnání s hodnotami ED₅₀ těchto sloučenin. (ED₅₀ je dávka v mg/kg snižující úmrtnost o 50 % ve srovnání s úmrtností srovnávací skupiny, jíž nebyla podána.) Hodnota ED₅₀ i.p. (intraperitoneálně) idebenonu je 4,5 mg/kg, zatímco pro sloučeninu č. 2705279 je jen 0,76 mg/kg. Antiischemický účinek této sloučeniny lze měřit i po orální administraci. V jiných pokusech bylo ukázáno, že tato sloučenina vykazuje aktivitu nejen v rámci globálních ischemických modelů zahrnujících celou hmotu mozku, ale i v rámci tak zvaných „fekálních“ modelů ischemie, vyvolaných v jediné přesně určené oblasti mozku.

Antiamnezická účinnost sloučenin podle vynálezu byla potvrzena následujícím pokusem.

-6CZ 290383 B6

2. Anterográdní amnézie vyvolaná diazepamem

C. L. Broekamp a další: Srovnání účinků benzodiazepinů, progabidu a PK 9084 na získání pasivní inerce (passive avoidance) u myší. [Psvchopharmacology (Berlin), sv. 83, s. 122-125, 1984.]

Testy paměti se prováděly na myších NMRI s hmotností mezi 25 a 28 g za použití metody pasivní inerce (avoidance), což je metoda založená na geneticky založeném nyktofilním chování hlodavců. V periodě učení se předem vybraná zvířata (myši vstupující z osvětleného prostoru do tmavého prostoru během 30 xteřin) umístila v osvětleném prostoru. Po vstupu do tmavého prostoru dostala zvířata během 30 vteřin elektrický šok na plantu (intenzita 1 mA za 3 min.), potom se zaznamenávala perioda latence, doba před vstupem do tmavého prostoru. Po 24 hodinách byla zvířata opět umístěna v osvětleném prostoru a měřila se doba potřebná ke vstupu do tmavého prostoru (retenční doba = T s časovým limitem do 300 sekund). Pro vyvolání anterográdní amnézie byla zvířata 30 minut před učením opatřena dávkou 3 mg/kg diazepamu. Sloučeniny byly podávány perorálně v dávkách 0,1 resp. 10 mg/kg 1 hodinu před učením. Procentuální hodnota ochranného účinku (P%) byla vypočítána pomocí následujícího vzorce a v tabulce 4 je uvedena pro sloučeniny podle vy nálezu:

P/^“[(Tjioučenína + DIa) (Tpjacebo + D[a)] 100 . [(Tp[_2cep_o) (Tp|_acebo - Día)1

Tabulka 4

Účinek sloučenin v modelové anterográdní amnézii vyvolané diazepamem

Sloučenina	Inhibice amnézie vyvolané diazepamem, %
č.	příklad č.	0,1 mg/kg p.o.	0,1 mg/kg mp.o.
1010885	1	74	65
2705279	2	79	119
1010960	6	0	0
1010961	7	3	15
1010962	8	16	4
1010887	13	50	56
1010886	18	72	44
1011038	16	64	24
1011036	14	23	16
Vinpocetin		0	123

Sloučeniny s antioxidační aktivitou vykazují významný ochranný účinek v případech mozkové ischemie (přechodný ischemický atak (TIA), mrtvice), kde k poškození schopnosti učit se a paměti může dojít spolu s neurologickými symptomy různé intenzity. Amnezický účinek sloučenin podle vynálezu byl studován na modelu anterográdní amnézie vyvolané diazepamem s použitím vinpocetinu jako referenční sloučeniny, který je strukturálně podobný a užívá se v klinické praxi. Aktivní sloučeniny byly nalezeny mezi deriváty jak trans-a-ethylapovinkaminové kyseliny tak trans-P-ethylapovinkaminové kyseliny. Jako zvláště účinné byly shledány sloučeniny č. 2705279, 1010886, 1011038 a 1010887. Nejaktivnější látkou byla sloučenina č. 2705279 s výrazným ochranným účinkem v obou užívaných dávkách a s aktivitou daleko překračující aktivitu vinpocetinu. Antiamnezický účinek sloučeniny 2705279 byl potvrzen i v jiných modelech amnézie: vykázal ochranný účinek při orálně podávané dávce v rozmezí 0,1 až 10 mg/kg na modelu retrográdní amnézie a chránil proti zhoršení paměti vyvolanému ischemií při perorálně podávané dávce v rozmezí 1 až 10 mg/kg. Její antiamnezický účinek mohl být dobře měřen i na krysách.

Shrnutí

Nové deriváty trans-apovinkaminové kyseliny podle vynálezu mají značné antioxidační aantiischemické účinky. Antioxidační aktivita sloučeniny č. 2705279, jež byla shledána jako 5 nejúčinnější, předčí in vitro i in vivo aktivitu idebenonu resp. vinpocetinu, používaných jako srovnávací sloučeniny. Kromě antioxidačních a antiischemických účinků vykazují sloučeniny podle vynálezu i antiamnezický účinek různé intenzity. Sloučenina č. 2705279 je nejaktivnější i v tomto ohledu.

Sloučeniny podle vynálezu jsou díky svým antioxidačním, antiischemiským a antiamnezickým účinkům použitelné při léčbě patologických obrazů, kde se volné radikály uplatňují buď v akutní fázi onemocnění nebo při vývinu pozdějších následků. Jsou to cerebrovaskulámí ischemická poškození, mrtvice, apoplexie, cerebrální nebo spinální traumata, subarachnoidální nebo intracerebrální hemoragie stejně jako různé neurodegenerativní choroby jako Alzheimerova choroba.

Díky své antiischemické aktivitě mohou být tyto sloučeniny použitelné pro léčbu nejen ischemického poškození mozku, ale i jiných orgánů, jako ku příkladu jater, srdce nebo svalstva.

Při výše zmíněných klinických syndromech jsou předpokládané dávky sloučenin podle vynálezu mezi 0,1 a 40 mg/kg tělesné hmotnosti, a podávají se jednou denně nebo v několika dělených 20 dávkách perorálně nebo parenterálně.

V souladu s vynálezem lze připravit nové deriváty esteru trans-apovinkaminové kyseliny vzorce I stejně jako jejich terapeuticky použitelné soli transesterifikací racemického nebo opticky aktivního derivátu esteru transapovinkaminové kyseliny vzorce

kde R] představuje alkylovou skupinu C^, ve vhodném glykolu v přítomnosti bazického katalyzátoru a v případě potřeby acylaci takto získané sloučeniny vzorce I kde R je vodík, a/nebo podle přání štěpením racemické sloučeniny vzorce I a/nebo podle přání konverzí sloučeniny vzorce I na její terapeuticky přijatelné soli.

V dalším bude podrobně popsána příprava nových terapeuticky aktivních sloučenin podle vynálezu.

Ve způsobu podle vynálezu pro přípravu sloučeniny vzorce I, kde R zastupuje vodík, se sloučenina vzorce II podrobí transesterifikací. Tato reakce se provádí v nadbytku transesterifikačního alkoholu, například vhodného glykolu, s výhodou ethylenglykolu, v bezvodých podmínkách a v přítomnosti katalytického množství silné báze. Jako báze lze užít hydridy alkalického kovu nebo alkoxidy alkalického kovu, za vhodné se považují terciární alkoxidy, s výhodou například terciární butoxid draslíku. Transesterifíkace se děje v teplotním rozsahu mezi 80 °C a 140 °C, s výhodou mezi 110 °C a 120 °C. Podle přání je možno reakční produkt této reakce použít v příštím reakčním stupni bez předběžné izolace; případně jej lze izolovat i tím způsobem, že se reakční směs vlije do vody a po filtraci se sraženina může přečistit překrystalováním; nebo lze reakční směs po zředění vodou extrahovat inertním s vodou nemísitelnými organickým rozpouštědlem jako je dichlormethan nebo chlorbenzen a pak se produkt izoluje

-8CZ 290383 B6 odpařením nebo jako sůl. Sloučeniny vzorce I, kde R je vodík, lze acylaci transformovat na

I sloučeniny vzorce I, kde R je skupina Z-C=O.

Acylační reakce se může provést kteroukoliv organickou karboxylovou kyselinou obsahující vhodnou acylovou skupinu, nebo použitím jejího reaktivního derivátu jako je například acylhalogenid, výhodně acylchlorid nebo anhydrid kyseliny nebo podobně a to známým způsobem, podle přání v přítomnosti činidla vázajícího kyselinu.

Při acylaci vhodnou karboxylovou kyselinou se reakce provádí v inertním organickém rozpouštědle, například v dipolámím aprotickém rozpouštědle jako je dimethylformamid (DMF), dimethylsulfoxid (DMSO), acetonitril a podobně v přítomnosti kondenzačního činidla. Vhodnými kondenzačními činidly jsou například karbodiimidové deriváty jako například dicyklohexylkarbodiimid nebo karbonyldiimidazol. Reakce se provádí při teplotách od 0 °C do 15 40 °C, s výhodou při pokojové teplotě.

Provádí-li se acylace pomocí acylhalogenidu, vhodný je například acylchlorid, reakce probíhá v inertním organickém rozpouštědle jako je alifatický nebo cyklický éter, například diethyléter nebo tetrahydrofúran (THF), nebo v chlorovaném uhlovodíku, například v chloroformu, nebo 20 v aromatickém uhlovodíku, například benzenu, chlorbenzenu nebo toluenu, nebo v organické bázi, například pyridinu, výhodně v přítomnosti činidla vázajícího kyselinu. Organické báze použité v reakci, například pyridin, mohou současně hrát dvojí roli, rozpouštědla i činidla vázajícího kyselinu.

Sloučeniny vzorce I, kde R zastupuje skupinu Z-C=O, lze izolovat z rozpouštědla tak, že po odstranění rozpouštědla nebo podle přání nadbytku reagentu a činidla vázajícího kyselinu se získaný zbytek rozpustí ve směsi vody a rozpouštědla nemísitelného s vodou, jako je ethylacetát, chloroform, dichlormethan, benzen, diethyléter a podobně a potom se v případě potřeby přidáním 30 vodného hydroxidu amonného nebo vodného roztoku hydrogenuhličitanu alkalického kovu nastaví pH na slabě alkalickou hodnotu (pH 8 až 9) a fáze se oddělí. Organická fáze se promyje vodou, vysuší a rozpouštědlo se za sníženého tlaku oddělí, takže se získá požadovaná sloučenina.

Sloučeninu vzorce I podle vynálezu lze případně převést na kvartémí soli. Pro tuto konverzi se 35 používá o něco vyšší než evimolekulámí množství alkylhalogenidu, výhodně chloridu, bromidu, jodidu nebo alkylsulfátu. Reakci lze uskutečnit v inertním organickém aprotickém a dipolámím rozpouštědle.

Podle potřeby lze sloučeniny I podle vynálezu převést na jejich kyselé adiční soli známým 40 způsobem s použitím jakékoliv kyseliny vhodné pro vznik terapeuticky použitelné kyselé adiční soli.

Volitelně se mohou sloučeniny vzorce I připravené způsobem podle vynálezu nebo jejich soli dodatečně přečišťovat, například překrystalováním. Výčet rozpouštědel použitelných pro 45 překrystalování závisí na vlastnostech určujících rozpustnost a krystalizaci rekrystalovaných sloučenin.

Nové estery trans-apovinkaminové kyseliny vzorce I podle vynálezu mohou být racemické nebo opticky aktivní. Při použití opticky aktivních sloučenin vzorce II jako výchozích surovin se 50 získají opticky aktivní sloučeniny vzorce I, zatímco použití racemických sloučenin vzorce Π jako výchozích sloučenin vede ke vzniku racemických sloučenin vzorce I. Z racemátů vzorce I se získají opticky aktivní sloučeniny jejich štěpením známým způsobem.

Nové racemické nebo opticky aktivní estery trans-apovinkaminové kyseliny vzorce I nebo jejich 55 soli se převedou na farmaceutické kompozice smíšením s netoxickými, inertními, pevnými nebo

-9CZ 290383 B6 kapalnými nosiči a/nebo ostatními přísadami běžně používanými v terapii pro parenterální nebo enterální administraci. Použitelné nosiče jsou například voda, želatina, laktóza, škrob, pektin, stearát horečnatý’, stearová kyselina, talek, rostlinné oleje jako podzemnicový olej, olivový olej a podobně. Aktivní složku lze formulovat v podobě jakékoliv farmaceutické kompozice, zvláště jako pevnou kompozici, například tabletu, dražé, tobolku, čípek a podobně. Množství pevného nosiče se může pohybovat v širokých limitech, výhodně mezi 25 mg a 1 g. Podle přání mohou tyto kompozice obsahovat také další běžné přísady používané ve farmacii, například stabilizátory, konzervační prostředky, smáčedla, povrchově aktivní prostředky, emulgační činidla a podobně. Tyto kompozice se mohou připravovat známým způsobem kteroukoliv běžnou farmaceutickou technologií a podle přání se mohou podrobit dalším běžným operacím, jako například sterilizaci.

Příklady provedení vynálezu

Vynález je podrobně ilustrován pomocí následujících příkladů, které nemají limitující význam.

Příklad 1

Příprava 2-hydroxyethylesteru (-)-trans-apovinkaminové kyseliny (3β, 16α) g (0,045 mol) methylesteru (~)-trans-apovinkaminové kyseliny (3β, 16α) se v 300 ml ethylenglykolu v přítomnosti 1 g terc.butoxidu draselného za míchání zahřívá 5 hodin při 120 °C a pak se reakční směs ochladí na pokojovou teplotu. Směs se vlije do 1 1 ledově studené vody, kry stalická sraženina se zfiltruje, dvakrát promyje 50 ml vody a usuší s výtěžkem 15,9 g (97 %) produktu uvedeného v titulku s teplotou tání 82-87 °C.

[a]²⁰ _D =-138,7° (c = 0,2; chloroform).

‘H-NMR (CDClj) δ: 0,65 (3H), t, CHjCH₂); 0,66-3,2 (14H, m, skeletální protony, OH);

3,85 (2H, m, HO-CH2); 4,43 (2H, m CHr-O-C=O); 6,35 (1H, s, H-15); 7,00-7,55 (4H, m, aromatické protony).

Rozbor:

Pro C22H26N2O3 (molekulová hmotnost 366,44):

vypočteno: C 72,10; H 7,15; N 7,65 %;

nalezeno: C 71,89; H7,15; N 7,62 %.

Příklad 2

Příprava 2-acetoxyethylestermonohydrochloridu (-)-trans-apovinkaminové kyseliny (3β, 16α)

K roztoku obsahujícímu 3,66 g (0,01 mol) 2-hydroxyethylesteru (-)-trans-apovinkaminové kyseliny (3β, 16α) v 50 ml bezvodého pyridinu se po kapkách přidá 5 ml (0,052 mol) acetanhydridu, reakční směs se nechá přes noc stát při pokojové teplotě, pak se za sníženého tlaku odpaří do sucha. Po rozpuštění odpařeného zbytku ve směsi 100 ml ethylacetátu se přidá 30 ml vody a 50 ml nasyceného roztoku hydrogenuhličitanu sodného a fáze se oddělí. Organická vrstva se třikrát promyje 20 ml vody a usuší nad bezvodým síranem sodným.

-10CZ 290383 B6

Roztok zbytek z odpařování v 30 ml izopropanolu se okyselí na pH 4 přidáním roztoku chlorovodíku v ethanolu, ponechá stát přes noc v chladničce a pak se krystalická sraženina zfiltruje a usuší s výtěžkem 2,8 g (62 %) produktu uvedeného v nadpisu s teplotou tání

179-189 °C;

[α]²°ο = -118,9° (c = 0,2, methanol).

‘H-NMR (CDClj) δ; 0,75 (3H, t, CHjCHj); 2,1 (3H, s, CH₃CO); 4,28 (1H. s, H-3); 6,28 (1H, s, H-l 5); 4,30-4,70 (4H, m, -OCH₂CH₂CH₂O-); 7,05-7,60 (4H, m, aromatické protony).

Příklad 3

Příprava 2-(2-thiofenoyloxy)ethylestermonohydrochloridu (-)-trans-apovinkaminové kyseliny (3β, 16α)

K roztoku připravenému při pokojové teplotě z 3,66 g (0,01 mol) 2-hydroxyethylesteru (-)-trans-apovinkaminové kyseliny (3β, 16α) ve 20 ml bezvodého pyridinu se po kapkách přidají 4,8 ml (0,045 mol) thiofen-2-karboxychloridu, reakční směs se ponechá stát 24 hodin a potom se za sníženého tlaku odpaří do sucha. Po přidání 100 ml dichlormethanu a 20 ml vody ke zbytku po odpaření se PH upraví na 9 přidáním 20 ml nasyceného roztoku hydrogenuhličitanu sodného. Po oddělení fází se organická fáze promyje vodou a suší nad bezvodým síranem sodným. Po přefiltrování se roztok za sníženého tlaku odpaří do sucha, zbytek se rozpustí v 50 ml izopropanolu a pH se upraví na 4 přidáním roztoku chlorovodíku v ethanolu. Reakční směs se nechá stát přes noc v chladničce, roztok se zfiltruje a krystalická sraženina se promyje studeným izopropanolem s výtěžkem 2,9 g produktu uvedeného v titulku (57 %).

Teplota tání: 178-183 °C; [a]²⁰ _D = - 113,9° (c = 0,2; chloroform).

Příklad 4

Příprava 2-(4-nitrobenzyloxy)ethylesteru (-)-trans-apovinkaminové kyseliny (3β, 16α)

K roztoku připravenému při pokojové teplotě z 3,66 g (0,01 mol) 2-hydroxyethylesteru (-)-trans-apovinkaminové kyseliny (3β, 16α) ve 20 ml bezvodého pyridinu se přidají 4,2 g (0,0225 mol) 4-nitrobenzoylchloridu a reakční směs se ponechá stát přes noc. Po zředění reakční směsi 150 ml ethylacetátu se přidá 50 ml vody a 3 ml koncentrovaného vodného roztoku hydroxidu amonného. Fáze se oddělí, potom se organická fáze promyje čtyřikrát dávkou 25 ml vody a usuší nad bezvodým síranem sodným. Po filtraci se roztok za sníženého tlaku odpaří do sucha, olejovitý zbytek se rozpustí v 50 ml horkého izopropanolu, vyčeří aktivovaným uhlím a po zfíltrování se nechá několik hodin stát. Krystalická sraženina se zfiltruje, promyje 10 ml izopropanolu a usuší s výtěžkem 2,6 g (58%) produktu uvedeného v nadpisu, s teplotou tání 139-142 °C; [a]²⁰ _D = -86,7° (c = 0,2; chloroform).

Příklad 5

Příprava 2-(nikotinoyloxy)ethylesterdihydrochloridu (-)-trans-apovinkaminové kyseliny (3β, 16α)

K roztoku obsahujícímu 2,4 g (0,0065 mol) 2-hydroxyethylesteru (-)-trans-apovinkaminové kyseliny (3β, 16α) ve 20 ml bezvodého pyridinu se po kapkách přidá 2,15 g (0,015 mol) nikotinoylchloridu rozpuštěného v 10 ml pyridinu, reakční směs se míchá 3 hodiny při pokojové teplotě a za sníženého tlaku odpaří do sucha. Po rozpuštění zbytku z odpařování ve směsi 150 ml ethyl-11 CZ 290383 B6 acetátu a 50 ml nasyceného roztoku hydrogenuhličitanu sodného se fáze oddělí. Organická vrstva se dvakrát promyje dávkami 20 ml vody a usuší nad bezvodým síranem sodným. Po zfiltrování se roztok odpaří za sníženého tlaku do sucha, zbytek po odpaření se rozpustí v 30 ml izopropanolu a roztok se okyselí na pH 4 přidáním roztoku chlorovodíku v ethylalkoholu. Po odpaření do sucha za sníženého tlaku se zbytek nechá krystalizovat z 50 ml ethylacetátu s výtěžkem 1,30 g (36%) sloučeniny uvedené v nadpisu s teplotou tání 158-164 °C; [a]²⁰ _D = -69, 5° (c = 0,2; chloroform).

Rozbor:

Pro C28H29N3O4.2HCI (molekulová hmotnost 544,47):

vypočteno: C 61,76; H 5,73; N7,71; Cl 13,02%;

nalezeno: C 61,73; H 6,05; N 7,69; Cl 12,90%.

Příklad 6

Příprava 2-(benzoyloxy)ethylesterhydrochloridu (-)-trans-apovinkamínové kyseliny (3β, 16α)

K roztoku 4,4 g (0,012 mol) 2-hydroxyethylesteru (-)-trans-apovinkaminové kyseliny (3β, 16α) v 60 ml chlorbenzenu se přidá 1,83 g (0,018 mol) triethylaminu a 2,5 g (0,018 mol) benzoylchloridu. Směs se 30 minut míchá při 40 °C, potom se zalkalizuje na pH 8 přidáním 15 ml 10% roztoku hydrogenuhličitanu sodného. Po oddělení fází se organická fáze dvakrát promývá dávkami 20 ml vody a usuší nad bezvodým síranem hořečnatým. Po odfiltrování sušidla a dvojnásobném promytí dávkami 3 ml chlorbenzenu se přidá roztok chlorovodíku v dioxanu, čímž se pH změní na 3—4, krystalická sraženina se při 0 °C odfiltruje, důkladně rozetře ve studeném acetonu a zfiltruje s výtěžkem 4,8 g (79%) produktu uvedeného v titulku s teplotou tání 216217,5 °C; [a]²⁰ _D = -86,6° (c = 1; methanol).

Příklad 7

Příprava 2-(4-chlorbenzoyloxy)ethylestermethansulfonátu (-)-trans-apovinkaminové kyseliny (3β, 16α)

Po rozpuštění 4,4 g (0,012 mol) 2-hydroxyethylesteru (-)-trans-apovinkaminové kyseliny (3β, 16α) v 60 ml dichlormethanu se přidá 1,83 g (0,018 mol) triethylaminu a 3,15 g (0,018 mol) 4-chlorbenzoylchloridu a reakční směs se míchá 30 minut při 40 °C. Po ochlazení na 10 °C se přidá 25 ml vody a pH směsi se upraví na 8 přidáním 15 ml 10% roztoku hydrogenuhličitanu sodného. Po oddělení se organická fáze dvakrát promývá 20 ml vody a usuší nad bezvodým síranem hořečnatým. Po zfiltrování sušidla a dvojnásobném promytí 5 ml dichlormethanu se organická fáze odpaří do úplného odstranění rozpouštědla. Zbytek se rozpustí v 35 ml acetonu a okyselí na pH 4 přidáním methansulfonové kyseliny. Krystalická sraženina se zfiltruje při 0 °C, promyje studeným acetonem a usuší s výtěžkem 5,85 g (81%) soli uvedené v titulku s teplotou tání 197-199 °C; [a]²⁰ _D = -73,3° (c = 1; methanol).

Příklad 8

Příprava 2-(propionyloxy)ethylesterhydrochloridu (-)-trans-apovinkaminové kyseliny (3β, 16α)

K roztoku obsahujícímu 4,4 g (0,012 mol) 2-hydroxyethylesteru (-)-trans-apovinkaminové kyseliny (3β, 16α) ve 100 ml chlorbenzenu se přidá 5,33 g (0,04 mol) anhydridu kyseliny propionové a 1,4 g (0,014 mol) triethylaminu. Po čtyřhodinovém míchání reakční směsi při 80 °C

- 12CZ 290383 B6 se oddestiluje za sníženého tlaku 40 ml chlorbenzenu a přebytek propionové kyseliny. Po přidání 25 ml vody ke zbytku při pokojové teplotě se upraví pH na 8 přídavkem 20 ml 10% roztoku hydrogenuhličitanu sodného. Po oddělení fází se organická fáze dvakrát promyje dávkami 20 ml vody a usuší nad bezvodým síranem hořečnatým. Sušidlo se odfiltruje a dvakrát promyje dávkami 3 ml chlorbenzenu. Po odpaření organické fáze za sníženého tlaku do úplného odstranění rozpouštědla se zbytek rozpustí ve 40 ml acetonu a okyselí na pH 4 přidáním roztoku chlorovodíku v dioxanu. Krystaly se zfiltrují při 5 °C, promyjí acetonem a suší s výtěžkem 4,2 g (76 %) hydrochloridu uvedeného v titulku s teplotou tání 219-220 °C; [a]²⁰ _D = — 111,9° (c = 1; methanol).

Příklad 9

Příprava 2-(3,4,5-trimethoxybenzoyloxy)ethylesterhydrochloridu (-)-trans-apovinkaminové kyseliny (3β, 16α)

K roztoku obsahujícímu 5,1 g (0,014 mol) 2-hydroxyethylesteru (-)-trans-apovinkaminové kyseliny (3β, 16α) v 80 ml dichlorethanu se přidají 2 g (0,02 mol) triethylaminu a 4,6 g (0,02 mol) 3,4,5-trimethoxybenzoylchloridu. Směs se 1 hodinu míchá při 50 °C, pak se při pokojové teplotě přidá 50 ml vody a směs se alkalizuje na pH 8 přídavkem 20 ml 10% roztoku hydrogenuhličitanu sodného. Po oddělení fází se organická fáze dvakrát promyje dávkami 25 ml vody a usuší nad bezvodým síranem hořečnatým. Po odfiltrování sušidla a promytí dvakrát dávkou 5 ml dichlorethanu se filtrát odpaří při sníženém tlaku do sucha, zbytek se rozpustí v 25 ml ethylacetátu a okyselí na pH 4 roztokem chlorovodíku v dioxanu. Krystalická sraženina se zfíltruje při 10 °C a promyje acetonem s výtěžkem 6,2 g (76%) hydrochloridu uvedeného v titulku s teplotou tání 191-194 °C; [a]²⁰ _D = -96,2° (c = 1; methanol).

Příklad 10

Příprava ethylenglykolesterdihydrochloridu (-)-bis-trans-apovinkaminové kyseliny (3β, 16α)

K roztoku obsahujícímu 5,1 g (0,014 mol) 2-hydroxyethylesteru (-)-trans-apovinkaminové kyseliny (3β, 16α) v 100 ml dichlorethanu se přidá 6 g (0,06 mol) triethylaminu, potom za chlazení 7,54 g (0,02 mol) hydrochloridu (-)-trans-apovinkaminylchloridu a pak se reakční směs míchá dvě hodiny při pokojové teplotě. Po přidání 50 ml vody a 20 ml 10% roztoku hydrogenuhličitanu sodného ke směsi pro zvýšení pH na 8 a oddělení fází se organická fáze dvakrát promyje dávkami 25 ml vody, usuší nad bezvodým síranem hořečnatým, zfíltruje a dvakrát promyje dávkami 5 ml dichlorethanu. Organická vrstva se odpaří do odstranění všeho rozpouštědla. Zbytek se rozpustí v 60 ml acetonu a okyselí na pH 3,5 přídavkem chlorovodíku rozpuštěného v dioxanu. Krystalická sraženina se zfíltruje při 5 °C a promyje acetonem s výtěžkem 6,55 g (63 %) dihydrochloridu uvedeného v titulku.

Teplota tání 222-2225 °C; [a]²⁰ _D = -131,5° (C = 1; methanol).

Příklad 11

Příprava 2-(acetoxy)ethylestermethansulfonátu (-)-trans-apovinkaminové kyseliny (3β, 16α)

K roztoku obsahujícímu 7,3 g (0,02 mol) 2-hydroxyethylesteru (-)-trans-apovinkaminové kyseliny (3β, 16α) v 100 ml dichlorethanu se přidají 2,2 g (0,022 mol) triethylaminu a 2,42 g (0,03 mol) acetylchloridu. Směs se 15 minut míchá při 50 °C, pak se při pokojové teplotě přidá 50 ml vody a směs se alkalizuje na pH 8 přídavkem 20 ml 10% roztoku hydrogenuhličitanu sodného. Po oddělení fází se organická fáze dvakrát promyje dávkami 25 ml dichlorethanu

- 13 CZ 290383 B6 a usuší nad bezvodým síranem hořečnatým. Po odfiltrování sušidla a promytí dvakrát dávkou ml dichlorethanu se filtrát odpaří při sníženému tlaku do sucha, zbytek se rozpustí v 40 ml ethylacetátu a okyselí na pH 3 methansulfonovou kyselinou. Krystalická sraženina se zfiltruje při °C a promyje ethylacetátem a usuší s výtěžkem 7,75 g (77 %) soli uvedené v titulku s teplotou tání 130-133 °C. [a]²⁰ _D = -92,2° (c = 1; methanol).

Příklad 12

Příprava 2-(acetoxy)ethylesterbenzensulfonátu (-)-trans-apovinkaminové kyseliny (3β, 16α)

Způsobem popsaným v příkladu 11 se provede příprava soli s použitím benzensulfonové kyseliny místo methansulfonové kyseliny při pH 3,5. Benzensulfonová sůl se získá ve výtěžku 7,9 g (70 %), teplota tání je 180,5 až 183 °C; [a]²⁰ _D = -90,3° (c = 1; methanol).

Příklad 13

Příprava 2-hydroxyethylesteru (+)-trans-apovinkaminové kyseliny (3β, 16α)

Roztok obsahující 16,88 g (0,05 mol) methylesteru (+)-trans-apovinkaminové kyseliny (3β, 16α) v 335 ml ethylenglykolu se míchá 5 hodin s 1 g terc.butoxidu draselného při 120 °C. Po ochlazení na pokojovou teplotu se reakční směs pomalu vleje do 1 litru ledově studené vody. Sraženina se zfiltruje, třikrát promyje dávkami 500 ml vody a usuší s výtěžkem 17,6 g (96 %) sloučeniny uvedené v titulku; teplota tání je 85-90 °C; [a]²⁰ _D = +131,2° (c = 1; chloroform).

Příklad 14

Příprava 2-(benzoyloxy)ethylesterhydrochloridu (-j-trans-apovinkaminové kyseliny (3β, 16α)

Při aplikaci způsobu popsaného v příkladu 6 se 4,4 g (0,12 mol) 2-hydroxyethylesteru (+)-transapovinkaminové kyseliny (3β, 16α) použijí místo 2-hydroxyethylesteru (-)-transapovinkaminové kyseliny (3β, 16α) s výtěžkem 4,7 g (77 %) hydrochloridu uvedeného v nadpise s teplotou tání 217-219 °C; [α]²⁰ο = +84,9; (c = 1; methanol).

Příklad 15

Příprava 2-(4-chlorbenzyloxy)ethylestermethansulfonátu (+)-trans-apovinkaminové kyseliny (3β, 16α)

Aplikuje se způsob popsaný v příkladu 7, ale místo 4,4 g (0,12 mol) 2-hydroxyethylesteru (-)-trans-apovinkaminové kyseliny (3β, 16α) se použije 4,4 g (0,12 mol) 2-hydroxyethylesteru (+)-trans-apovinkaminové (3β, 16α) s výtěžkem 5,5 g (76 %) soli uvedené v titulku s teplotou tání 199-200 °C; [a]²⁰ _D = +73,3° (c = 1; methanol).

-14CZ 290383 B6

Příklad 16

Příprava 2-(propionyloxy)ethylesterhydrochloridu (+)-trans-apovinkaminové ky seliny (3β, 16α)

Aplikuje se způsob popsaný v příkladu 8, ale místo 4,4 g (0,012 mol) 2-hydroxyethylesteru (~)-trans-apovinkaminové kyseliny (3β, 16α) se použije 4,4 g (0,012 mol) 2-hydroxyethylesteru (+)-trans-apovinkaminové kyseliny (3β, 16α) s výtěžkem 4,35 g (79 %) hydrochloridu uvedeného v titulku s teplotou tání 220-221 °C; [a]²⁰ _D = +109,7° (c = 1; methanol).

Příklad 17

Příprava 2-(3,4,5-trimethoxybenzoyloxy)ethylesteru (+)-trans-apovinkaminové kyseliny (3β, 16α)

Aplikuje se způsob popsaný v příkladu 9, ale místo 5,1 g (0,14 mol) 2-hydroxyethylesteru (-)-trans-apovinkaminové kyseliny (3β, 16α) se použije 5,1 g (0,14 mol) 2-hydroxyethylesteru (+)-trans-apovinkaminové kyseliny (3β, 16α) s výtěžkem 6,2 g (76 %) hydrochloridu uvedeného v titulku s teplotou tání 192-195 °C; [a]²⁰ _D = +95,3° (c = 1; methanol).

Příklad 18

Příprava 2-(acetoxy)ethylesterhydrochlorid (+}-trans-apovinkaminové kyseliny (3β, 16α)

K roztoku 7,3 g (0,02 mol) 2-hydroxyethylesteru (-)-trans-apovinakaminové kyseliny (3β, 16α) v 100 ml dichlorethanu se přidají 2,2 g (0,022 mol) triethylaminu a 2,42 g (0,03 mol) acetylchloridu. Míchá se 25 minut při 40 °C, přidá se 50 ml vody při pokojové teplotě a pak se přídavkem 20 ml 10% roztoku hydrogenuhličitanu sodného upraví pH na 8. Po oddělení fází se organická fáze dvakrát promyje dávkami 25 ml vody a usuší nad bezvodým síranem hořečnatým. Po zfiltrování se sušidlo dvakrát promyje dávkami 5 ml dichlorethanu a filtrát se za sníženého tlaku odpaří do odstranění rozpouštědla. Zbytek se rozpustí ve 40 ml ethylacetátu a okyselí na pH 4 přidáním roztoku chlorovodíku v dioxanu. Krystalická sraženina se odfiltruje při 0 °C, promyje ethylacetátem a usuší s výtěžkem 6,95 g (78 %) hydrochloridu uvedeného v titulku s teplotou tání 221-224,5 °C; [a]²⁰ _D = +107,4; (c = 1; methanol).

Příklad 19

Příprava 2-hydroxyethylesterhydrochloridu racemické trans-apovinakaminové kyseliny

Aplikuje se způsob popsaný v příkladu 13, ale místo 16,8 g (0,05 mol) methylesteru (+)-transapovinkaminové kyseliny (3β, 16α) se použije 16,8 g (0,05 mol) methylesteru racemické trans-apovinkaminové kyseliny za vzniku hydrochloridu racemátu uvedeného v titulku s výtěžkem 17,4 g (95 %) s teplotou tání 97-101 °C.

Příklad 20

Příprava 2-(acetoxy)ethylesterhydrochloridu racemické trans-apovinkaminové kyseliny (3β, 16α)

Aplikuje se způsob popsaný v příkladu 18, ale místo 7,3 g (0,02 mol) 2-hydroxyethylesteru (+)-trans-apovinkaminové kyseliny (3β, 16α) se použije 7,3 g (0,02 mol) 2-hydroxyethylesteru

-15CZ 290383 B6 racemické trans-apovinkaminové kyseliny za vzniku hydrochloridu uvedeného v titulku s výtěžkem 7,1 g (80 %) s teplotou tání 187-189 °C.

Příklad 21

Příprava 3-hydroxypropylesteru (-)-trans-apovinkaminové kyseliny (3β, 16α)

Aplikuje se způsob popsaný v příkladu 1, ale použije se 300 ml propylenglykolu místo 300 ml ethylenglykolu. Po vlití do vody se získaný olej nemísitelný s vodou rozpustí v 100 ml dichlormethanu a dvakrát se promyje dávkami 20 ml vody. Organická fáze se suší nad bezvodým síranem hořečnatým a zfiltruje. Sušidlo se dvakrát promyje dávkami 5 ml dichlormethanu a filtrát se odpaří za sníženého tlaku do odstranění rozpouštědla. Sloučenina uvedená v titulku se získá s výtěžkem 16,8 g jako světle žlutý viskózní olej. Po překrystalování z acetonu hydrochlorid taje při 216-218 °C; [a]²⁰ _D =-122,2° (c = 1; methanol).

Příklad 22

Příprava 3-(acetoxy)propylesterhydrochloridu (-)-trans-apovinkaminové kyseliny (3β, 16α)

Aplikuje se způsob popsaný v příkladu 18, ale místo 7,3 g (0,02 mol) 2-hydroxyethylesteru (+)-trans-apovinkaminové kyseliny (3β, 16α) se použije 7,6 g (0,02 mol) 3-hydroxypropylesteru (-)-trans-apovínkaminové kyseliny (3β, 16α) s výtěžkem 7,0 g (76 %) hydrochloridu uvedeného v titulku s teplotou tání 205-207 °C; [α]²⁰ _ο = -113,2° (c = 1; methanol).

PATENTOVÉ NÁROKY

Claims

1. Racemické a opticky aktivní estery apovinkaminové kyseliny obecného vzorce I kde R znamená vodík nebo skupinu Z-C=O, kde Z znamená nasycenou nebo nenasycenou alkylovou skupinu Ci^ s přímým nebo rozvětveným řetězcem, případně substituovaný C6_ioaryl, C^narylCi^alkyl, heteroaryl nebo 14-ebumameninylovou skupinu; a n je celé číslo 2, 3 nebo 4, kde heteroaryl znamená pyrrolylovou, furylovou, thienylovou, pyridylovou, pyranylovou, pyrazolylovou, imidazolylovou, pyrimidinylovou nebo morfolinylovou skupinu; a kde substituenty výše zmíněných arylových, aralkylových a heteroarylových skupin jsou vybrány

-16CZ 290383 B6 z atomů halogenu, alkylové skupiny C|_i, hydroxylové, nitro-, amino-, kyano-, nebo trifluormethylové skupiny; stejně jako jejich terapeuticky použitelné soli.

2. Racemické a opticky aktivní estery podle nároku 1, vybrané z 2-(acetoxy)ethylester (-)-trans-apovinkaminové kyseliny (3β, 16α) a její terapeuticky použitelné soli.

3. Farmaceutická kompozice, vyznačující se tím, že jako aktivní složku obsahuje ester apovinkaminové kyseliny obecného vzorce I podle nároku 1, nebo její terapeuticky použitelnou sůl s příměsí nosiče a/nebo ostatních přísad běžně užívaných ve farmaceutickém průmyslu.

4. Způsob přípravy esterů racemické a opticky aktivní trans-apovinkaminové kyseliny obecného vzorce I podle nároku 1, vyznačující se tím, že se transesterifikuje ester racemické nebo opticky aktivní trans-apovinkaminové kyseliny obecného vzorce II, kde Rj představuje alkylovou skupinu Ci^, v rozpouštědle glykolového typu a v přítomnosti bazického katalyzátoru; a podle potřeby se příslušně acyluje ester apovinkaminové kyseliny obecného vzorce I, kde R je vodík, popřípadě volitelně štěpí racemický ester apovinkaminové kyseliny obecného vzorce I, popřípadě se volitelně převede ester apovinkaminové kyseliny obecného vzorce I na její terapeuticky použitelnou sůl.

5. Použití esteru apovinkaminové kyseliny obecného vzorce I podle nároku 1, nebo jeho terapeuticky použitelné soli pro přípravu farmaceutické kompozice, pro inhibici peroxidace lipidů a ochranu proti ischemii a amnézii a jejich léčbu, a pro léčení různých neurodegenerativních chorob jako je Alzheimerova choroba.