CZ289971B6 - Farmaceutický prostředek proti produktu genu 63 Varicella Zoster - Google Patents
Farmaceutický prostředek proti produktu genu 63 Varicella Zoster Download PDFInfo
- Publication number
- CZ289971B6 CZ289971B6 CZ19982486A CZ248698A CZ289971B6 CZ 289971 B6 CZ289971 B6 CZ 289971B6 CZ 19982486 A CZ19982486 A CZ 19982486A CZ 248698 A CZ248698 A CZ 248698A CZ 289971 B6 CZ289971 B6 CZ 289971B6
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- protein
- vzv
- pharmaceutical composition
- varicella zoster
- immunologically functional
- Prior art date
Links
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 title claims abstract description 36
- 208000007514 Herpes zoster Diseases 0.000 title claims abstract description 14
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 title 1
- 241000701085 Human alphaherpesvirus 3 Species 0.000 claims abstract description 36
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims abstract description 27
- 230000002265 prevention Effects 0.000 claims abstract description 7
- 101710134694 Transcriptional regulator ICP22 homolog Proteins 0.000 claims description 42
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 22
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 22
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 22
- 101710176004 Major viral transcription factor ICP4 homolog Proteins 0.000 claims description 12
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 claims description 11
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 11
- 230000004044 response Effects 0.000 claims description 10
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 7
- 201000006082 Chickenpox Diseases 0.000 claims description 6
- 206010046980 Varicella Diseases 0.000 claims description 6
- 239000007764 o/w emulsion Substances 0.000 claims description 6
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims description 5
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims description 5
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims description 5
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 4
- 241001092142 Molina Species 0.000 claims description 3
- 241001454523 Quillaja saponaria Species 0.000 claims description 3
- 235000009001 Quillaja saponaria Nutrition 0.000 claims description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 3
- -1 monophospholyl lipid A Chemical compound 0.000 claims description 3
- 108010067390 Viral Proteins Proteins 0.000 claims description 2
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims 3
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 abstract description 11
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 abstract description 7
- 101150026651 63 gene Proteins 0.000 abstract 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 30
- 210000000609 ganglia Anatomy 0.000 description 26
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 19
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 14
- 108010047620 Phytohemagglutinins Proteins 0.000 description 13
- 101900116756 Varicella-zoster virus Transcriptional regulator ICP22 homolog Proteins 0.000 description 13
- 230000001885 phytohemagglutinin Effects 0.000 description 13
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 12
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 12
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 11
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 11
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 10
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 10
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 description 8
- GVJHHUAWPYXKBD-IEOSBIPESA-N α-tocopherol Chemical compound OC1=C(C)C(C)=C2O[C@@](CCC[C@H](C)CCC[C@H](C)CCCC(C)C)(C)CCC2=C1C GVJHHUAWPYXKBD-IEOSBIPESA-N 0.000 description 8
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 6
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 6
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 6
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 6
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 6
- YYGNTYWPHWGJRM-UHFFFAOYSA-N (6E,10E,14E,18E)-2,6,10,15,19,23-hexamethyltetracosa-2,6,10,14,18,22-hexaene Chemical compound CC(C)=CCCC(C)=CCCC(C)=CCCC=C(C)CCC=C(C)CCC=C(C)C YYGNTYWPHWGJRM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- BHEOSNUKNHRBNM-UHFFFAOYSA-N Tetramethylsqualene Natural products CC(=C)C(C)CCC(=C)C(C)CCC(C)=CCCC=C(C)CCC(C)C(=C)CCC(C)C(C)=C BHEOSNUKNHRBNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- PRAKJMSDJKAYCZ-UHFFFAOYSA-N dodecahydrosqualene Natural products CC(C)CCCC(C)CCCC(C)CCCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C PRAKJMSDJKAYCZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 5
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 5
- 229940031439 squalene Drugs 0.000 description 5
- TUHBEKDERLKLEC-UHFFFAOYSA-N squalene Natural products CC(=CCCC(=CCCC(=CCCC=C(/C)CCC=C(/C)CC=C(C)C)C)C)C TUHBEKDERLKLEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 210000000115 thoracic cavity Anatomy 0.000 description 5
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 4
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 4
- 206010046865 Vaccinia virus infection Diseases 0.000 description 4
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 4
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 4
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 4
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 4
- 230000034994 death Effects 0.000 description 4
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 4
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 4
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 4
- 229940035032 monophosphoryl lipid a Drugs 0.000 description 4
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 4
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 description 4
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 description 4
- 206010037844 rash Diseases 0.000 description 4
- 229960000984 tocofersolan Drugs 0.000 description 4
- 208000007089 vaccinia Diseases 0.000 description 4
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 3
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 3
- 208000010201 Exanthema Diseases 0.000 description 3
- 108090000978 Interleukin-4 Proteins 0.000 description 3
- 230000005867 T cell response Effects 0.000 description 3
- 229940087168 alpha tocopherol Drugs 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 3
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 3
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 3
- 238000005538 encapsulation Methods 0.000 description 3
- 201000005884 exanthem Diseases 0.000 description 3
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 3
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 3
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 3
- 230000007420 reactivation Effects 0.000 description 3
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 3
- 239000002076 α-tocopherol Substances 0.000 description 3
- 235000004835 α-tocopherol Nutrition 0.000 description 3
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 2
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 2
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 2
- 208000002193 Pain Diseases 0.000 description 2
- 101000999689 Saimiriine herpesvirus 2 (strain 11) Transcriptional regulator ICP22 homolog Proteins 0.000 description 2
- 230000024932 T cell mediated immunity Effects 0.000 description 2
- 230000006052 T cell proliferation Effects 0.000 description 2
- UZQJVUCHXGYFLQ-AYDHOLPZSA-N [(2s,3r,4s,5r,6r)-4-[(2s,3r,4s,5r,6r)-4-[(2r,3r,4s,5r,6r)-4-[(2s,3r,4s,5r,6r)-3,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)-4-[(2s,3r,4s,5s,6r)-3,4,5-trihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxyoxan-2-yl]oxy-3,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxy-3,5-dihydroxy-6-(hy Chemical compound O([C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]([C@@H]1O)O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]([C@@H]1O)O[C@H]1CC[C@]2(C)[C@H]3CC=C4[C@@]([C@@]3(CC[C@H]2[C@@]1(C=O)C)C)(C)CC(O)[C@]1(CCC(CC14)(C)C)C(=O)O[C@H]1[C@@H]([C@@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O[C@H]4[C@@H]([C@@H](O[C@H]5[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O5)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O4)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O3)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1)O)[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O UZQJVUCHXGYFLQ-AYDHOLPZSA-N 0.000 description 2
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 2
- 238000001516 cell proliferation assay Methods 0.000 description 2
- 230000007969 cellular immunity Effects 0.000 description 2
- 230000036755 cellular response Effects 0.000 description 2
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 2
- 230000016396 cytokine production Effects 0.000 description 2
- 210000001151 cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- GVJHHUAWPYXKBD-UHFFFAOYSA-N d-alpha-tocopherol Natural products OC1=C(C)C(C)=C2OC(CCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C)(C)CCC2=C1C GVJHHUAWPYXKBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 230000028996 humoral immune response Effects 0.000 description 2
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 2
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 2
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 2
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 2
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 2
- 239000011859 microparticle Substances 0.000 description 2
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 2
- 210000005036 nerve Anatomy 0.000 description 2
- 210000000653 nervous system Anatomy 0.000 description 2
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 2
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 2
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 2
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 2
- 229930182490 saponin Natural products 0.000 description 2
- 150000007949 saponins Chemical class 0.000 description 2
- 235000017709 saponins Nutrition 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 2
- 230000007419 viral reactivation Effects 0.000 description 2
- IIZPXYDJLKNOIY-JXPKJXOSSA-N 1-palmitoyl-2-arachidonoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCCC IIZPXYDJLKNOIY-JXPKJXOSSA-N 0.000 description 1
- 108010042708 Acetylmuramyl-Alanyl-Isoglutamine Proteins 0.000 description 1
- 102000007469 Actins Human genes 0.000 description 1
- 108010085238 Actins Proteins 0.000 description 1
- 201000001320 Atherosclerosis Diseases 0.000 description 1
- 241000588807 Bordetella Species 0.000 description 1
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 1
- 206010053567 Coagulopathies Diseases 0.000 description 1
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- 235000001815 DL-alpha-tocopherol Nutrition 0.000 description 1
- 239000011627 DL-alpha-tocopherol Substances 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- PZOHPVWRSNXCRP-QRCCJXOFSA-N GPL-1 Chemical compound C([C@@H](NC(=O)CC(O)CCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCC)C(=O)N[C@H]([C@@H](C)OC1[C@@H]([C@H](O)[C@H](O)[C@H](C)O1)O[C@H]1[C@@H]([C@H](O)[C@@H](O)[C@H](C)O1)O)C(=O)N[C@H](C)C(=O)N[C@@H](C)COC1[C@@H]([C@H](OC)[C@@H](OC)[C@H](C)O1)O)C1=CC=CC=C1 PZOHPVWRSNXCRP-QRCCJXOFSA-N 0.000 description 1
- 102000005720 Glutathione transferase Human genes 0.000 description 1
- 108010070675 Glutathione transferase Proteins 0.000 description 1
- 102100027685 Hemoglobin subunit alpha Human genes 0.000 description 1
- 108091005902 Hemoglobin subunit alpha Proteins 0.000 description 1
- 208000029433 Herpesviridae infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 108010007403 Immediate-Early Proteins Proteins 0.000 description 1
- 206010061598 Immunodeficiency Diseases 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- 102100037850 Interferon gamma Human genes 0.000 description 1
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 1
- 206010073333 Neuronophagia Diseases 0.000 description 1
- 108700026244 Open Reading Frames Proteins 0.000 description 1
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 description 1
- 206010036376 Postherpetic Neuralgia Diseases 0.000 description 1
- 206010037407 Pulmonary hypoplasia Diseases 0.000 description 1
- 206010040047 Sepsis Diseases 0.000 description 1
- 108091081024 Start codon Proteins 0.000 description 1
- 101710172711 Structural protein Proteins 0.000 description 1
- 210000000173 T-lymphoid precursor cell Anatomy 0.000 description 1
- 108010022394 Threonine synthase Proteins 0.000 description 1
- 108020005202 Viral DNA Proteins 0.000 description 1
- 108700005077 Viral Genes Proteins 0.000 description 1
- 208000008615 Zoster Sine Herpete Diseases 0.000 description 1
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 1
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K aluminium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 238000004873 anchoring Methods 0.000 description 1
- 230000005875 antibody response Effects 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 238000011888 autopsy Methods 0.000 description 1
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 210000001736 capillary Anatomy 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 230000035602 clotting Effects 0.000 description 1
- 238000000975 co-precipitation Methods 0.000 description 1
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 1
- 210000002808 connective tissue Anatomy 0.000 description 1
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002784 cytotoxicity assay Methods 0.000 description 1
- 231100000263 cytotoxicity test Toxicity 0.000 description 1
- 230000002939 deleterious effect Effects 0.000 description 1
- 238000002716 delivery method Methods 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 102000004419 dihydrofolate reductase Human genes 0.000 description 1
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 239000013020 final formulation Substances 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000010931 gold Substances 0.000 description 1
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000010562 histological examination Methods 0.000 description 1
- 230000004727 humoral immunity Effects 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 1
- 230000002480 immunoprotective effect Effects 0.000 description 1
- 230000001024 immunotherapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 210000003000 inclusion body Anatomy 0.000 description 1
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 1
- 230000028709 inflammatory response Effects 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 230000030214 innervation Effects 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 239000000787 lecithin Substances 0.000 description 1
- 235000010445 lecithin Nutrition 0.000 description 1
- 229940067606 lecithin Drugs 0.000 description 1
- 230000002934 lysing effect Effects 0.000 description 1
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- MIKKOBKEXMRYFQ-WZTVWXICSA-N meglumine amidotrizoate Chemical compound C[NH2+]C[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO.CC(=O)NC1=C(I)C(NC(C)=O)=C(I)C(C([O-])=O)=C1I MIKKOBKEXMRYFQ-WZTVWXICSA-N 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- BSOQXXWZTUDTEL-ZUYCGGNHSA-N muramyl dipeptide Chemical compound OC(=O)CC[C@H](C(N)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](C)O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H](O)[C@@H]1NC(C)=O BSOQXXWZTUDTEL-ZUYCGGNHSA-N 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 208000004296 neuralgia Diseases 0.000 description 1
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 1
- 201000003508 omphalocele Diseases 0.000 description 1
- 210000001428 peripheral nervous system Anatomy 0.000 description 1
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 1
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000009696 proliferative response Effects 0.000 description 1
- 230000004224 protection Effects 0.000 description 1
- 230000002797 proteolythic effect Effects 0.000 description 1
- 239000001397 quillaja saponaria molina bark Substances 0.000 description 1
- 230000000306 recurrent effect Effects 0.000 description 1
- 230000001177 retroviral effect Effects 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 230000000405 serological effect Effects 0.000 description 1
- 238000000527 sonication Methods 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 229960000814 tetanus toxoid Drugs 0.000 description 1
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 1
- 239000011732 tocopherol Substances 0.000 description 1
- 229930003799 tocopherol Natural products 0.000 description 1
- 235000010384 tocopherol Nutrition 0.000 description 1
- 229960001295 tocopherol Drugs 0.000 description 1
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 1
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 210000000427 trigeminal ganglion Anatomy 0.000 description 1
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 1
- 241001529453 unidentified herpesvirus Species 0.000 description 1
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 1
- 229940124742 varicella zoster vaccine Drugs 0.000 description 1
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 1
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 description 1
- 210000002845 virion Anatomy 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
- A61K39/245—Herpetoviridae, e.g. herpes simplex virus
- A61K39/25—Varicella-zoster virus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
- A61P31/22—Antivirals for DNA viruses for herpes viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
- C12N2710/00011—Details
- C12N2710/16011—Herpesviridae
- C12N2710/16711—Varicellovirus, e.g. human herpesvirus 3, Varicella Zoster, pseudorabies
- C12N2710/16722—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
- C12N2710/00011—Details
- C12N2710/16011—Herpesviridae
- C12N2710/16711—Varicellovirus, e.g. human herpesvirus 3, Varicella Zoster, pseudorabies
- C12N2710/16734—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
Abstract
P°edkl dan °e en se t²k prost°edk na l en nebo prevenci p sov ho oparu u osob infikovan²ch virem Varicella Zoster (VZV) a na prevenci nebo l bu infekc vyvolan²ch Varicellou. Prost°edky podle °e en obsahuj protein k dovan² genem 63 viru VZV nebo jeho imunologicky aktivn deriv t. Toto °e en se d le t²k prost°edk obsahuj c ch DNA nebo RNA odpov daj c genu 63 viru VZV.\
Description
Oblast techniky
Předkládaný vynález se týká prostředku k léčení nebo prevenci pásového oparu (Zoster) u osob infikovaných virem Varicella Zoster (VZV) a na prevenci nebo léčbu infekcí vyvolaných Varicellou. Prostředky podle vynálezu obsahují protein kódovaný genem 63 viru VZV nebo jeho imunologicky aktivní derivát. Vynález se dále týká prostředků obsahujících DNA nebo RNA odpovídající genu 63 viru VZV.
Dosavadní stav techniky
Virus Varicella je lidský alfa herpetický virus, který způsobuje dvě lidská onemocnění: při primární infekci způsobuje VZV dětské plané neštovice (Varicella), poté přechází virus do latence, z níž je často aktivován (mnohdy po desetiletích) a způsobuje pak pásový opar (Zoster). Při planých neštovicích virus proniká do periferního nervového systému, kde přetrvává v latentním stavu až do reaktivace za vzniku bolestivé Zoster formy. Když je virus v latentní formě, exprese většiny virových genů je reprimována. Má se zato, že při kontrole latence hraje rozhodující úlohu buněčná imunita, neboť reaktivace v podobě pásového oparu je častá u straších lidí nebo u osob s oslabenou imunitou.
VZV infekci charakterizuje minimální přítomnost volného viru. Během latence a při reaktivaci je virus převážně intracelulámí. Z toho důvodu rekurentnímu onemocnění nezabrání ani vysoké hladiny neutralizujících protilátek a kontrola viru závisí na buněčné imunitě. K navození ochrany vakcinací je proto žádoucí indukovat nejen protilátkovou odpověď, ale též CTL odpověď. Účinná vakcína by měla aktivovat CTL, schopné působit co možná nejdříve, jakmile se objeví známky reaktivace latentního viru.
Jelikož mechanismus rozpoznání antigenu cytotoxickými T lymfocyty (CTL) zahrnuje rozštěpení nativního antigenu na peptidy, vazbu těchto proteolytických fragmentů k molekulám MHC a export komplexu na buněčný povrch, potenciálním cílem T-buněčné odpovědi může být jakýkoli virem kódovaným polypeptid, nejenom integrální membránové proteiny jako jsou glykoproteiny. Vzhledem k tomu, že VZV genom kóduje kromě vnějších glykoproteinů i několik nestrukturálních proteinů a vnitřních proteinů virionu, je potenciálních cílů CTL velký počet a není známo, který protein by mohl být nejrelevantnější.
Genom VZV viru obsahuje 71 otevřených čtecích rámců, kódujících 68 bílkovin proteinů. Sekvence virové DNA je známá (J. Gen. Virol. 67,1 759-1 816). Gen 63 viru N7N kóduje okamžitý časný protein o předpokládané molekulové hmotnosti 30,5 kDa (Debrus et al., 1995, j. Virol. 69(5), 3240). Gen začíná v pozici 110581 (startovací kodon) a pokračuje do pozice 111414 (stop kodon). Další kopie genu v opačné orientaci se nachází mezi bázemi 119316 a 118483. U IE63 proteinu bylo prokázáno, že v krysím modelu je během latence exprimován, poněkud neobvykle, v neuronech. Bílkovina byla exprimována jako fúzovaná bílkovina v E. coli (Debrus et al.).
VZV 1E63 protein byl nalezen výlučně v cytoplazmě neuronů latentně infikovaných lidských trigeminálních a torakálních ganglií. Toto je první případ identifikace bílkoviny alfa-herpes viru exprimované během latence v lidském nervovém systému.
Dále autoři vynálezu objevili, že tato bílkovina je důležitým cílem zásahu imunitního systému, konkrétně pak cílem T buněčné odpovědi, a tak je užitečná pro prevenci a léčbu infekcí VZV. Zejména pak pro prevenci pásového oparu u pacientů již infikovaných virem VZV.
-1 CZ 289971 B6
Podstata vynálezu
Předkládaný vynález tedy poskytuje farmaceutický prostředek, který obsahuje bílkovinu IE63 viru Varicella Zoster nebo její imunologicky funkční ekvivalent a farmaceuticky přijatelný nosič.
Toto je první využití takovéhoto proteinu v medicíně a vynález tudíž poskytuje VZV IE63 protein nebo jeho imunologicky funkční, ekvivalentní derivát pro použití v medicíně.
Vynález dále poskytuje farmaceutický prostředek, který obsahuje nukleovou kyselinu kódující IE63 nebo jeho imunologicky funkční derivát.
Množství bílkoviny v každé dávce vakcíny je vybráno jako takové množství, které indukuje imunoprotektivní odezvu bez významných škodlivých vedlejších účinků. Toto množství se bude lišit v závislosti na tom, jaký specifický imunogen se použije a jak bude podáván. Obecně lze očekávat,, že každá dávka bude obsahovat 1 - 1 000 pg bílkoviny, s výhodou 2-100pg, nejvýhodněji 4-40 pg bílkoviny. Optimální množství pro konkrétní vakcínu může být určeno standardními studiemi, jež spočívají ve sledování příslušné imunitní odpovědi u testovaných subjektů. Po první dávce vakcíny mohou sledované osoby dostat, s přiměřeným časovým odstupem, jednu nebo několik dalších posilovačích („booster“) imunizačních dávek.
Vedle vakcinace osob náchylných kVZV infekci mohou být farmaceutické prostředky podle vynálezu použity k imunoterapeutické léčbě pacientů trpících VZV infekcemi, tak aby se zabránily či významně omezily opakované návraty onemocnění a snížila se frekvence, síla a trvání epizod pásového oparu.
Ve vakcíně podle vynálezu lze přímo použít vodného roztoku IE63 proteinu(ů) N7N. N7N IE63 protein(y) mohou být též, po předchozí lyofilizaci nebo bez ní, smíchány navzájem nebo s jakýmkoli známým adjuvans. Takováto adjuvans zahrnují, ale nejsou na ně omezena, hydroxid hlinitý, muramyl-dipeptid a saponiny jako jsou Quil A, zejména QS21 nebo 3 deacylovaný monofosfoiyl lipid A (3D-MPL). Preferovány jsou adjuvans nebo adjuvanotové systémy, které přednostně indukují TH1 odpověď. Adjuvans schopná přednostní stimulace THl-buněčné odpovědi jsou popsána v mezinárodních patentových přihláškách WO 94/00 153 aWO 95/17 209.
Konkrétní výhodné adjuvans obsahuje QS21, tj. HPLC-přečištěnou, netoxickou frakci získanou z kůry Quillaja Saponaria Molina, a 3 De-Ó-acylovaný monofosforyl lipid A (3 D-MPL), případně spolu s emulzí „olej ve vodě“.
De-O-acylovaný monofosforyl lipid A je znám z GB 2 220 211 (Ribi). Chemicky se jedná o směs 3 De-O-acylovaného monofosforyl lipidu A se 4, 5, nebo 6 acylovanými řetězci; výrobcem je Ribi Immunochem Montana. Výhodná forma 3 De-O-acylovaného monofosforyl lipidu A je zveřejněná v mezinárodní patentové přihlášce WO 92/16 556.
QS21 je HPLC-přečištěná, netoxická frakce saponinu z kůry jihoamerického stromu Quillaja Saponaria Molina a metoda její produkce je zveřejněná (jako QA21) v US patentu 5 057 540.
Výhodná emulze „olej ve vodě“ obsahuje metabolizovatelný olej, jako je squalen, alfa-tokoferol a tween 80. Emulze „olej ve vodě“ může navíc obsahovat spán 80 nebo lecitin.
Poměr QS21 : 3D-MPL bývá typicky v řádu 1 : 10 až 10:1; s výhodou 1 : 5 až 5 : 1 a často v podstatě 1:1. Výhodný rozsah pro optimální synergismus je 2,5 : 1 až 1 : 1 3D MPL:QS21. Pro podávání lidským subjektům bývají QS21 a 3D MPL ve vakcíně typicky přítomny v rozsahu lpg-100pg, s výhodou 10pg-50pg na jednu dávku. Emulze „olej ve vodě“ typicky obsahuje 2 až 10% squalenu, 2 až 10% alfa-tokoferolu a 0,3 až 3 % tweenu 80. Poměr
-2CZ 289971 B6 squalen : alfa tokoferol je s výhodou roven nebo menší než 1, což dává stabilnější emulzi. Spán 85 může být též přítomen v 1 % hladině. V některých případech může být výhodné, aby vakcíny podle vynálezu dále obsahovaly stabilizátor.
Příkladem další možnosti může být enkapsulace proteinu do mikročástic, jako jsou liposomy. Jiným dalším možným příkladem je konjugace VZV IE63 proteinu(ů) s imunistimulující makromolekulou jako je usmrcena Bordetella nebo tetanový toxoíd.
Příprava vakcíny je v obecných rysech popsána v New Trends and Developments in Vaccines, Voliér et al., (eds.), University Park Press, Baltimore, Maryland, 1978. Enkapsulaci v liposomech popisuje Fullerton, US patent 4 235 877. Konjugace bílkovin k makromolekulám je zveřejněná např. v Likhite, US patent 4 372 954 a v Armor et al., US patent 4 474 757. Použití Quil A je zveřejněné vDalsgaard et al., Acta Vet. Scand. 18: 349(1977). 3D-MPL lze získat od Ribi Immunochem, USA a je zveřejněn v britské patentové přihlášce GB 2 220 211 a v US patentu
912 094. QS21 je zveřejněn v US patentu 5 057 540.
Použití polynukleotidu podle vynálezu pro genetickou imunizaci s výhodou uplatní vhodnou metodou vnesení, jako je přímá injikace plazmidové DNA do svalů (Wolff et al., Hum. Mol. Genet. 1992, 1:363, Manthorpe et al., Hum. Gene Ther. 1963, 4: 419), vnesení DNA v komplexu se specifickými bílkovinnými nosiči (Wu et al., J. Biol. Chem. 1989, 264:1985), koprecipitace DNA s fosforečnanem vápenatým (Benvenisty and Reshef, PNAS, 1986: 83, 9551) nebo enkapsulace DNA v různých formách liposomů (Kaneda et. al., Science 1989: 243, 375), bombardování částicemi (Tang et al., Nátuře 1992, 356:152, Eisenbraun et al., DNA Cell Biol. 1993, 12:791), a in vivo infekce prostřednictvím klonovaných retrovirových vektorů (Seegar et al., PNAS 1984: 81,5849) nebo neinfekčních rekombinantních virových vektorů, jako je „Semliki Forest helper 2“ systém (Berglund et al., Bio/Technology 1993, 11:916-920). Promotory vhodné ktransfekci svalu zahrnují CMV, RSV, Sra, aktin, MCK, alfa-globin, adenovirus a dihydrofolátreduktázu. Výhodný způsob vnášení polynukleotidu podle vynálezu využívá zlatých mikročástic vstřelovaných pomocí „genového děla“ (US patenty 5 100 792,
036 006 a 4 945 050).
Polynukleotidové prostředky podle vynálezu mohou být aplikovány při použití dávek a způsobů aplikace popsaných ve WO 90/11 092. Je však jasné, že přesné dávkování bude záviset na faktorech jako jsou váha, pohlaví, způsob aplikace, všeobecný zdravotní stav pacienta a onemocnění, jež má být léčeno. Nicméně, dávky pro nitrosvalové použití se typicky budou pohybovat v rozsahu 0,05 pg/kg až asi 50mg/kg, typičtěji od asi 0,1 do lOmg/kg. Vzhledem k schopnosti indukovat vysoké hladiny CTL, může být výhodná podkožní, epidermální, intradermální nebo mukózní aplikace.
Vakcína podle vynálezu může dále obsahovat i jiné antigenní složky N7N, jako jsou gpl, gpll, gpIII, gpIV nebo gpV nebo jejich deriváty, anebo jiné okamžité časné proteiny, jako je IE62 protein. Zejména to jsou zkrácené formy gpl, gpll nebo gpIII zveřejněné v Evropské patentové přihlášce EP 0 405 867.
Výhodné provedení vynálezu poskytuje prostředek k vakcinaci, jenž obsahuje nezakotvený gpl v kombinaci s IE63 nebo s derivátem IE63.
Nezakotvený znamená, že jde o derivát glykoproteinu N7N, kterému chabí v podstatě celá C-koncová ukotvující oblast, čímž je umožněná jeho sekrece při expresi v savčích buňkách. Takovéto proteiny jsou popsány v ΕΡ-Α-Ό 405 867.
Alternativní provedení poskytuje vakcínu obsahující fúzovaný protein sestávající z aminokyselinové sekvence představující IE63 nebo derivát a z aminokyselinové sekvence představující některý z glykoproteinů gpl, gpll, gpIII, gpIV nebo gpV či jejich derivátů nebo jiný okamžitý časný protein jako je IE62.
-3CZ 289971 B6
V alternativním provedení může být použit jako vakcína přímo polynukleotid, schopný exprimovat IE63 nebo jeho derivát. Polynukleotidem je s výhodou DNA. V takovýchto případech bude polynukleotid pod kontrolou vhodného promotoru.
K imunizaci může být též použita RNA. Pro tyto případy může být RNA připravena pomocí metod uvedených v WO 92/10 578.
Příklady provedení vynálezu
Příklad 1: Vakcínový prostředek obsahující VZV IE63 protein
Připraví se dva přípravky adjuvans, přičemž každý obsahuje následující složku emulze „olej ve vodě“
SB 62: 5 % squalen, 5 % tokoferol, 2 % tween 80; velikost částic byla 180 nm (a) Příprava emulze SB 62 (dvojnásobný koncentrát)
Tween 80 se rozpustí ve fosfátem pufrovaném solném roztoku (PBS) tak, aby dal 2 % roztok v PBS. K získání 100 ml dvojnásobného koncentrátu emulze se důkladně promíchá (na přístroji typu Vortex) 5 g DL-alfa-tokoferolu a 5 ml squalenu. Přidá se 90 ml roztoku PBS/Tween a důkladně promíchá. Výsledná emulze se protlačí injekční stříkačkou a nakonec mikrofluidizuje za použití mikrofluidizačního přístroje M110S. Výsledné olejeové kapičky mají velikost přibližně 180 nm.
(b) Antigen je připraven podle metody, kterou uvádí Debrus et al (shora) (c) Příprava prostředku IE63 proteinu v emulzi „olej ve vodě“ QS21/3DMPL.
K emulzi podle 1 a) se přidá stejný objem dvakrát koncentrovaného antigenu (buď 20 pg nebo 100 pg) a promíchá se. Toto se spojí s 50 pg/ml 3D-MPL a 20 pg/ml QS21 za vzniku konečného přípravku. Pufr je podle koncentrace soli a pH.
Příklad 2: Imunologické vlastnosti IEP63
2.1. Materiály
Od jedenácti zdravých dárců, z nichž jeden byl očkován, byla odebrána krev. Všichni tito dárci dospělí, s anamnézou planých neštovic v dětství. Ve všech případech bylo odebráno 30 ml krve do heparinizovaných zkumavek a 5 ml na sražení k získání séra.
2.2. Humorální imunitní odpověď
K detekci anti-VZV imunoglobulinů IgG ve vzorcích krve byly všichni testovaní dárci (kromě jednoho) měli detekovatelnou hladinu anti-VZV protilátek, což představuje sérologický důkaz prodělaných planých neštovic v dětství.
Přítomnost anti-IE63 protilátek jsme zkoumali metodou westernového přenosu, přičemž byl použit IE63 protein, který byl klonovaný v pGEX5X, exprimovaný v E. coli jako fúzovaný protein (GST-IE63) a purifíkovaný afmitní chromatografií (Debrus et al., J Virol., 69, 3 2403 245). GST protein exprimovaný a purifíkovaný stejným způsobem sloužil jako negativní
-4CZ 289971 B6 kontrola. Se všemi testovanými vzorky krve byl rozpoznán purifikovaný IE63 fúzovaný protein, což ukazuje na přítomnost anti-IE63 protilátek v séru. Kontrolní protein nebyl protilátkami nikdy rozpoznán.
2.3 Buněčná imunitní odpověď
Stimulace lymfocytů T byla měřena stimulací PBMC (peripheral) Blood Mononuclear Cells, tj. mononukleámích buněk periferní krve) izolovaných centrifugací ve fícoll/hypaque gradientu.
Všechny testy byly prováděny trojmo, stimulací 3x105 PBMC fytohemaglutininem (PHA) ke stanovení nespecifického stimulačního indexu, a dále celým N7N a kontrolními antigeny (připravenými sonikací infikovaných nebo neinfikovaných melanomových buněk) a purifíkovaným fúzovaným proteinem (GST-IE63 nebo samotným GST). Šestého dne byl k buňkám přidán značený 3H-thymidin a po 16 hodinách byly buňky sklizeny. Stimulační index (S.I.) byl vypočten jako poměr cpm (impulzů za minutu) v jamkách s buňkami stimulovanými proteinem k jamkám s buňkami kontrolními; index byl považován za pozitivní, byl-li > 2.
2.4 Výsledek testu proliferace buněk T
Doposud bylo provedeno 10 testů na proliferaci za podmínek stanovených dříve.
Výsledky jsou uvedeny v tabulce 1.
Indexy S.I. získané po stimulaci celými VZ antigeny nebo IE63 proteinem byly vyneseny do grafu na obr. 1
Z těchto dat můžeme vyvodit:
Většina lidí (6/10) vykazuje odpověď paměťových buněk T vůči VZVIE63.
Dva dárci mají velmi nízký S.I. jak s celými antigeny, tak s purifíkovaným fúzovaným proteinem a mohou být považováni za negativní (S.I. < 2). Avšak jeden z nich měl velmi nízký titr protilátek, neměl v anamnéze jasný průkaz planých neštovic a mohl tedy být negativním dárcem. Druhý, jehož titr protilátek byl vysoký, měl lepší hodnotu S.I. když byl test proveden sMBP-IE63 (S.I.=3,4), což naznačuje, že v některých případech je buňkami T jeden z fúzovaných proteinů lépe rozpoznáván a že srovnání obou proteinů by mohlo být užitečné v případech velmi nízkých hodnot S.I. s vysokou standardní odchylkou.
Dva další dárci vykazovali negativní odpověď na IE63, zatímco S.I. s celými antigeny byl vysoký, stimulace však byla provedena pouze s GST fúzovaným proteinem.
Příklad 3: Buněčné odpovědi
V rozšíření výše uvedeného experimentu byly PBMC od 19 zdravých dospělých dárců testovány na proliferační odpověď buněk T po stimulaci buď VZV antigeny nebo purifíkovaným GST-IE63 proteinem. Střední hodnota S.I. s VZ antigeny byla 15,5 ± 3,3 s hodnotami od 2,1 do 52. Střední hodnota S.I. po stimulaci GST-IE63 proteinem byla 3,4 ± 0,48 s hodnotami mezi 1,8 a 8. Tyto hodnoty S.I. byly významně vyšší než hodnoty zjištěné u neimunních pacientů, kde S.I. byl 1,95 + 0,48 pro VZV antigeny a 1,3 ±0,1 pro IE63. Při grafickém vynesení S.I. po stimulaci s VZV a srovnání s S.I. po stimulaci s GST-IE63 vycházejí dva neimunní pacienti jasně negativní (S.I. <2,0) s oběma antigenovými preparáty (obr. 2). Všech 17 imunních dárců mělo S.I. k VZV antigenům vyšší než 2,0. Mezi těmito pozitivními dárci, byli 3 (17 %), z nichž jeden měl v anamnéze četné erupce pásového oparu, kteří vykazovali velmi silnou odpověď
-5CZ 289971 B6 k VZV antigenům S.I. = 2,0 pro GST-IE63, přičemž S.I. pro VZ antigeny se pohyboval mezi
5,4 a 11. Avšak všichni tito dárci s S.I. <2 pro GST-IE63 měli velmi významnou odpověď k samotnému GST (data neuvedena), což činí interpretaci výsledků obtížnou. Všichni ostatní přirozeně imunní jednotlivci (59 %) vykazovali silnou odpověď na GST-IE63, s hodnotami S.I. mezi 2,3 a 8. Avšak korelace mezi stimulací VZ antigeny a stimulací fúzovaným proteinem nebyla prokázána.
Příklad 4: Testy na produkci cytokinů
Produkce cytokinů PBMC stimulovanými IE63 byla hodnocena u 7 subjektů: PBMC byly stimulovány buď GST nebo GST-IE63, a 2., 4. nebo 6. den byly ELISA testem sledovány IL-2, IL-4 a γ-IFN. Výsledky byly vyjádřeny jako rozdíl mezi koncentrací cytokinů zjištěných po stimulaci GST-IE63 nebo samotným GST. IL-2 a IL-4 nebyly nikdy nalezeny, zatímco γ-IFN byl produkován ve významném množství (175 až 1 400 pg/ml) buňkami T stimulovanými IE63, přičemž maximum produkce bylo 4. den. Množství γ-IFN zjištěné v kultuře, v níž nebyla pozorována žádná stimulace bylo významně nižší:
| Dárce | Proliferace T buněk po GST-IE63 (S.I) | IFN-γ (pg/ml) | IL-4 (pg/ml) |
| 1 | 2,9 | 750 | 0 |
| 2 | 2,2 | 1400 | 0 |
| 3 | 7,4 | 500 | 0 |
| 4 | 8,0 | 625 | 0 |
| 5 | 2,0 | 175 | 0 |
| 6 | 2,0 | 50 | 0 |
Příklad 5: Testy cytotoxicity
CTL odpovědi specifické na IE62 a IE63 byly zjišťovány testem limitního ředění buněk T získaných od 10 dárců imunních vůči N7N. Tyto testy byly prováděny s autologními cílovými buňkami buď neinfikovanými nebo infikovanými, a to buď samotnou vacinií (kontrola), nebo vaccinií nesoucí IE62 (vaccinia-IE62) nebo vaccinií nesoucí IE63 (vaccinia-IE63). Pozadí představované kontrolními cílovými buňkami vykazovalo široký rozsah variací mezi dárci a výsledky byly považované za validní pouze tehdy, když lýza cílových buněk exprimujících virus byla nejméně o 10% vyšší než lýza kontrolních cílových buněk (neinfikovaných nebo infikovaných samotnou, kontrolní vaccinií).
Pokud byly populace buněk T získány pomocí systému T-Lymphokwik, lýza cílových buněk exprimujících VZV proteiny byla významně vyšší než v případě neinfikovaných nebo kontrolních cílových buněk, což je ukázáno projeden test na obr. 3. Lýza pozorovaná u cílových exprimujících IE62 a buněk exprimujících IE63 se významně nelišila. Podobné výsledky byly získány pro 4 testy provedené s celou populací buněk T: pro IE62 byla pozorována specifická lýza v rozmezí 25 až 48 % a pro IE63 v rozmezí 27 až 43 %. Průměrný výskyt prekurzorů buněk T, které rozpoznávají IE62 byl 44500 ±22500 a pro IE63 31000 ± 16000, tyto rozdíly však nebyly statisticky významné (p = 0,8).
Kultury v limitním ředění byly rovněž připraveny z purifikovaných populací CD4+ a CD8+ lymfocytů T, jakožto IE62 a IE63. Hodnota RCF CD8+ buněk rozpoznávajících IE62 byla 28500 ± 10100 a rozpoznávajících IE63 30500 ± 13700, což není statisticky rozdílné (p = 0,9), a to tedy nasvědčuje, že oba virové proteiny byly rozpoznávány CD8+ buňkami se stejnou účinností (obr. 4). Počet buněk lýzujících cílové buňky, jež exprimují IE63, byl rovněž v obou populacích efektorových buněk stejný: střední hodnota CD4+ efektorových buněk byla 31450 ± 7500 a týž výskyt byl rozpoznávajících IE62 byl však počítačovou analýzou zamítnut.
-6CZ 289971 B6
Příklad 6: Exprese VZV IE63 v průběhu latence
Pro analýzu VZV exprese v latentně infikovaných gangliích byly z 9 dospělých a 3, kojenců získány během 24 hodin po smrti jeden trigeminální a mnohá torakální ganglia. Žádný ze subjektů netrpěl před smrtí oslabením imunizy a při pitvě nebyly shledány žádné kožní známky nedávné infekce herpes virem. Enzymové imunostanovení odhalilo protilátky proti VZV v sérech všech dospělých subjektů. Sérum dostupné pouze od jednoho ze 3 kojenců neobsahovalo protilátky kVZV. PCR amplifikace provedená sDNA extrahované z malé části ganglia za použití VZV-specifických primerů (Mahalingham et al., Engl. J. Med. 323, 627-631) odhalila přítomnost VZV DNA ve všech dospělých gangliích, nikoli však v gangliích kojenců. Zbývající části každého ganglia byly analyzovány imunohistochemicky pomocí králičích protilátek získaných proti 30,5 kD proteinu VZV IE63, jenž byl exprimován v E. coli jako protein fúzovaný s glutathion-S-transferázou a purifikováný jak popisují Debrus et al. (shora). BSC-1 (Afričan monkey kidney, opičí ledvinné) buňky infikované VZV sloužily jako pozitivní a negativní kontrola.
Na N7N infikovaných BSC-1 buňkách byly patrné dvě oblasti fokusů s typickou VZV cytopatologií, jež obsahovaly VZV IE63 protein. Žádný signál nebyl detekován v neinfikovaných buňkách nebo v BSC-1 buňkách infikovaných virem HSV. V gangliích získaných 17 hod po smrti od 46-letého muže, jenž zemřel na aterosklerózu, bylo pozorováno^ červené zabarvení (charakterizující VZV IE63 protein) výhradně v cytoplazmě 3 neuronů. Žádný signál nebyl detekován při použití normálního králičího séra na přilehlém řezu ze stejného ganglia. Intenzivní červené zabarvení bylo detekováno v cytoplazmě neuronu v přilehlých řezech z jiného torakálního ganglia téhož subjektu. Světlejší zabarvení bylo též často patrné v mnohých neuronech latentně infikovaných ganglií, což naznačuje difuznější, možná slabší infekci. Červené barvení, specifické pro N7N IE63 protein, nebylo nikdy vidět u satelitních (kapsulámích) buněk, kapilár, pojivové tkáně, nervových svazků uvnitř ganglií, nebo nervových kořínků vstupujících do ganglií. Žádný signál nebyl detekován po aplikaci antiséra proti VZV IE63 proteinu na ganglia 2-měsíčního kojence, který zemřel na sepsi komplikující vrozenou omfalokélu a plicní hypoplazii. Celkem byl VZV IE63 protein nalezen v 5 gangliích (4 torakálních a 1 trigeminálním) ze 2 dospělých subjektů. U jednoho z těchto dospělých byl VZV IE63 protein detekován ve všech 10 řezech ze 4 z 5 torakálních ganglií. U druhého dospělého byl N7N IE63 protein detekován ve všech 4 řezech z trigeminálního ganglia. Na pozitivních řetězech byl VZV IE63 protein detekován v cytoplazmě 2-4 neuronů. VZV IE63 protein nebyl nalezen v žádném ze 4 řezů připravených z každého ze 16 ganglií od 7 zbývajících dospělých, ani v žádném ze 4 řezů z každého z 9 ganglií pocházejících od 3 kojenců.
Skutečnost, že N7N DNA byla detekována téměř ve všech gangliích, avšak N7N IE63 protein pouze v některých latentně infikovaných gangliích by mohla být vysvětlena výběrem vzorků tzn. že analýza na přítomnost VZV IE63 proteinu ve všech řezech z každého ganglia, jež obsahuje VZV DNA, by mohla odhalit další pozitivní ganglia. Jiná možnost je, že exprese viru se může v různých gangliích lišit; např. v gangliích latentně infikovaných virem HSV je počet neuronů obsahujících HSV DNA mnohem vyšší než počet neuronů, ve kterých je patrná přítomnost transkriptů souvisejících s latencí.
Konečně, mohla i nastat reaktivace viru, ačkoliv toto se nezdá pravděpodobné u subjektů, jejich ganglia obsahovala VZV IE63 protein, neboť u nich nebyly před smrtí pozorovány klinické známky exantému pásového oparu, a nebyly u nich zaznamenány ani déle trvající neuralgické bolesti, jež mohou předcházet exantému (preherpetická neuralgie), ani bolest lokalizovaná do kožních inervačních zón bez exantému (Zoster sine herpete), ani postherpetická neuralgie, jež by naznačovala mírnou ganglionitidu. Navíc, histologické vyšetření ganglií neukázalo žádnou neuronofagii, inkluzní tělíska nebo zánětlivou reakci.
-7CZ 289971 B6
Závěry:
Z těchto pokusů lze vyvodit, že NZN IE63 vyvolává úplnou imunitní odpověď:
- anti-IE63 protilátky mohou být detekovány metodou westernového přenosu v séru většiny dárců s anamnézou planých neštovic;
- T buňky mohou proliferovat po in vitro stimulaci IE63 proteinem (purifikovaným jako GST-fúzovaný protein), avšak omezený počet testovaných dárců nedovolil nalézt přímou korelaci mezi stimulačním indexem (S.I) pro VZV a pro IE63. Buňky T, které proliferují jako odpověď na stimulaci IE63 proteinem jsou většinou Thi, jak patrno z exprese velkého množství γ-IFN do supematantu;
- byla prokázána T buněčná cytotoxická aktivita v kontextu rozpoznávací IE63. Na procesu lýzy se účastní CD4+ jakož i CD8+ buňky, což bylo prokázáno pomocí purifikovaných efektorových buněk. Počet prekurzorových buněk rozeznávajících IE63 je podobný počtu buněk odpovídajících na IE62.
Toto je první popsaný případ identifikace proteinu herpetického viru exprimovaného během latence v lidském nervovém systému. Tato skutečnost spolu s jeho imunologickými vlastnostmi z něj činí výborný antigen pro zahrnutí do vakcíny proti Varicella Zoster.
-8CZ 289971 B6
Tabulka 1: Proliferace buněk T
S.I. = stimulační index, Ag = antigen, Ab status = stav protilátek, CS a další zkratky v prvním sloupci = iniciály pacientů, PHA = fytohemaglutinin, EIA = enzymatické imunologické stanovení, WB = westernový přenos
CS:
| Ab status | :4 | S.I. s celým Ag | 5pg | S.I. s GST-IE63 | |
| 4,1 | 1,9 | ||||
| EIA: >1024 | :16 | 6,4 | 2,5pg | 1,5 | |
| :64 | 5,7 | 1,25μ | 3,2 | ||
| PHA | 11,5 | 0,6pg | 11.6 |
MS:
| Ab status | :4 | S.I. | 5μθ | S.I. | |
| 7,5 | 1,1 | ||||
| EIA: >1024 | :16 | 11,9 | 2,5pg | 2,7 | |
| :64 | 5,9 | 1.25μ9 | 3,2 | ||
| PHA | 8,1 | 0,6gg | 2,5 |
VD:
| Ab status | :4 | s.i. | 5pg | S.I. | |
| 4,3 | 2,9 | ||||
| EIA: >1024 | :16 | 4,5 | 2,5pg | 1,3 | |
| :64 | 5,5 | 1,25Pg | 1,5 | ||
| PHA | 12,6 | 0.6pg | 1,1 |
-9CZ 289971 B6
JM:
| Ab status | I S*L | 5gg | S.L | ||
| :4 | 1,5 | 1,7 | |||
| EIA: >1024 | :16 | 2,1 | 2.5gg | 1,4 | |
| :64 | 2,0 | 1.25pg | 2,2 | ||
| PHA | 7,1 | 0.6gg | 0,9 |
CD:
| Ab status | :4 | S.l. | 5gg | S.l. | |
| 4,0 | 4,3 | ||||
| EIA; >1024 | :16 | 20,1 | 2.5pg | 2,8 | |
| :64 | 8,6 | 1.25pg | 7,4 | ||
| PHA | 25,8 | 0,6pg | 4,4 |
CL:
| S.l. | | s.i. | ||||
| Ab status | :4 | 7,0 | 5gg | 1,0 | |
| EIA: 256 | :16 | 7,0 | 2,5pg | 2,0 | |
| :64 | 9,0 | 1.25gg | 2,0 | ||
| PHA | 22,0 | 0,6gg | 2,0 |
| Ab status | :4 | s.l. | 5gg | S.l. | |
| 7,0 | 1,0 | ||||
| EIA: 256 | :16 | 7,0 | 2,5pg | 2,0 | |
| :64 | 9,0 | 1,25pg | 2,0 | ||
| PHA | 22,0 | 0,6pg | 2,0 |
- 10CZ 289971 B6
DJ:
SH;
LZ:
-11 CZ 289971 B6
E:
G:
- 12CZ 289971 B6
| S.l. | S.l. | |||||
| C: | Ab status | :4 | 0,8 | 5gg | 0,5 | |
| EIA: <16 | :16 | 1,6 | 2,5μ9 | 0,9 | ||
| :64 | 1,4 | 1,25pg | 1,0 | |||
| PHA | 113,6 | 0,6pg | 1,2 | |||
| S.l. | S.l. | |||||
| Z. | Ab status | :4 | 1,5 | 5pg | 0,9 | |
| EIA: <16 | :16 | 0,7 | 2,5pg | 1,2 | ||
| :64 | 0,7 | 1,25gg | 0,6 | |||
| PHA | 9,3 | 0,6pg | ??? |
Tabulka 1: Humorální a buněčná imunitní odpověď na VZV.
S.I. byl měřen po stimulaci celými antigeny (sonikované melanomové buňky infikované nebo s napodobením infekce, ředěné 4x, 16x nebo 64x) nebo po stimulaci IE63 fúzovaným proteinem (GST nebo GST-IE63).
Status humorální imunity byl hodnocen ELISA testem s celým antigenem (vyjádřen jako ředění, pro které je O D. > 0,250) nebo metodou westernového přenosu s IE63.
PATENTOVÉ NÁROKY
Claims (11)
1. Farmaceutický prostředek, vyznačující se tím, že obsahuje protein IE63 viru Varicella Zoster nebo imunologicky funkční derivát a farmaceuticky přijatelný excipient.
2. Farmaceutický prostředek, vyznačující se tím, že obsahuje nukleovou kyselinu kódující IE63 nebo jeho imunologicky funkční derivát.
3. Protein genu IE63 nebo jeho imunologicky funkční derivát pro použití v medicíně.
4. Použití proteinu IE63 nebo jeho imunologicky funkčního derivátu pro výrobu léku pro prevenci nebo zmírnění planých neštovic nebo pásového oparu.
5. Farmaceutický prostředek podle nároku 1, vyznačující se tím, že dále obsahuje další antigeny viru Varicella Zoster.
6. Farmaceutický prostředek podle nároku 5, vyznačující se tím, že druhý protein viru Varicella Zoster je vybrán ze skupiny gpl, gpll, gpIII, gpIV, gpV nebo IE62 nebo jejich imunologicky funkčních derivátů.
-13CZ 289971 B6
7. Farmaceutický prostředek podle nároků 1,2,5 nebo 6, vyznačující se tím, že dále obsahuje adjuvans.
8. Farmaceutický prostředek podle nároku 7, vyznačující se tím, že adjuvans přednostně indukuje TH1 odpověď.
9. Farmaceutický prostředek podle nároku 8, vyznačující se tím, že antigen je přítomen spolu s adjuvans Quillaja Saponaria Molina QS21 a 3D-E-0-acylovaným monofosfoiyllipidem A ve formě emulze „olej ve vodě“.
10. Způsob výroby farmaceutického prostředku obsahujícího virový protein IE63 Varicella Zoster, nukleovou kyselinu nebo jejich imunologicky funkční derivát, vyznačující se t í m, že se mísí uvedený protein, nukleová kyselina nebo derivát s farmaceuticky přijatelným excipientem.
11. Způsob podle nároku 10, vyznačující se tím, že protein, nukleová kyselina nebo derivát se mísí s farmaceuticky přijatelným excipientem obsahujícím adjuvans.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| GBGB9602617.4A GB9602617D0 (en) | 1996-02-09 | 1996-02-09 | Vaccines |
| GBGB9626882.6A GB9626882D0 (en) | 1996-12-24 | 1996-12-24 | Vaccines |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ248698A3 CZ248698A3 (cs) | 1998-12-16 |
| CZ289971B6 true CZ289971B6 (cs) | 2002-05-15 |
Family
ID=26308641
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ19982486A CZ289971B6 (cs) | 1996-02-09 | 1997-02-04 | Farmaceutický prostředek proti produktu genu 63 Varicella Zoster |
Country Status (20)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0879060B1 (cs) |
| JP (1) | JP2002504080A (cs) |
| KR (1) | KR100365986B1 (cs) |
| CN (1) | CN1210470A (cs) |
| AR (1) | AR005750A1 (cs) |
| AT (1) | ATE390146T1 (cs) |
| AU (1) | AU723555B2 (cs) |
| BR (1) | BR9707400A (cs) |
| CA (1) | CA2245545C (cs) |
| CZ (1) | CZ289971B6 (cs) |
| DE (1) | DE69738597T2 (cs) |
| ES (1) | ES2301175T3 (cs) |
| HU (1) | HUP0001991A3 (cs) |
| IL (1) | IL125440A (cs) |
| NO (1) | NO983617L (cs) |
| NZ (1) | NZ331164A (cs) |
| PL (1) | PL188457B1 (cs) |
| TR (1) | TR199801531T2 (cs) |
| TW (1) | TW575427B (cs) |
| WO (1) | WO1997028820A1 (cs) |
Families Citing this family (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1999011241A1 (en) * | 1997-09-05 | 1999-03-11 | Smithkline Beecham Biologicals S.A. | Oil in water emulsions containing saponins |
| ES2273482T3 (es) * | 1998-03-09 | 2007-05-01 | Glaxosmithkline Biologicals S.A. | Composiciones de vacunas combinadas. |
| GB9901254D0 (en) * | 1999-01-20 | 1999-03-10 | Smithkline Beecham Biolog | Vaccines |
| GB9921146D0 (en) * | 1999-09-07 | 1999-11-10 | Smithkline Beecham Biolog | Novel composition |
| EP1227840B1 (en) * | 1999-11-03 | 2007-10-03 | Powderject Vaccines, Inc. | Adjuvanted genetic vaccines |
| CA2400842C (en) | 2000-02-23 | 2013-01-15 | Smithkline Beecham Biologicals S.A. | Novel compounds |
| EA020617B1 (ru) | 2009-05-27 | 2014-12-30 | Глаксосмитклайн Байолоджикалс С.А. | Конструкции casb7439 |
| KR101723605B1 (ko) * | 2014-10-21 | 2017-04-07 | 진원생명과학 주식회사 | 대상포진 예방 및 치료용 dna 백신 조성물 및 이를 이용한 vzv 항원에 대한 t세포 활성화 방법 |
| CN114891830B (zh) * | 2022-04-02 | 2024-03-01 | 武汉博沃生物科技有限公司 | 基于水痘-带状疱疹病毒的重组表达载体、重组病毒及用途 |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4952674A (en) * | 1986-05-02 | 1990-08-28 | Merck & Co., Inc. | Vaccine against varicella-zoster virus |
| ATE119939T1 (de) * | 1989-06-27 | 1995-04-15 | Smithkline Beecham Biolog | Verbindungen. |
-
1997
- 1997-02-04 IL IL12544097A patent/IL125440A/en not_active IP Right Cessation
- 1997-02-04 ES ES97902334T patent/ES2301175T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1997-02-04 JP JP52814197A patent/JP2002504080A/ja active Pending
- 1997-02-04 WO PCT/EP1997/000520 patent/WO1997028820A1/en active IP Right Grant
- 1997-02-04 CZ CZ19982486A patent/CZ289971B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1997-02-04 BR BR9707400-4A patent/BR9707400A/pt not_active Application Discontinuation
- 1997-02-04 CA CA002245545A patent/CA2245545C/en not_active Expired - Fee Related
- 1997-02-04 HU HU0001991A patent/HUP0001991A3/hu not_active Application Discontinuation
- 1997-02-04 TR TR1998/01531T patent/TR199801531T2/xx unknown
- 1997-02-04 KR KR10-1998-0706090A patent/KR100365986B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1997-02-04 AU AU16012/97A patent/AU723555B2/en not_active Ceased
- 1997-02-04 EP EP97902334A patent/EP0879060B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1997-02-04 PL PL97328414A patent/PL188457B1/pl not_active IP Right Cessation
- 1997-02-04 CN CN97192099A patent/CN1210470A/zh active Pending
- 1997-02-04 NZ NZ331164A patent/NZ331164A/en unknown
- 1997-02-04 DE DE69738597T patent/DE69738597T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1997-02-04 AT AT97902334T patent/ATE390146T1/de not_active IP Right Cessation
- 1997-02-07 AR ARP970100494A patent/AR005750A1/es not_active Application Discontinuation
- 1997-06-25 TW TW086102043A patent/TW575427B/zh not_active IP Right Cessation
-
1998
- 1998-08-06 NO NO983617A patent/NO983617L/no unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CA2245545C (en) | 2008-12-30 |
| KR19990082360A (ko) | 1999-11-25 |
| NO983617L (no) | 1998-10-02 |
| TW575427B (en) | 2004-02-11 |
| DE69738597T2 (de) | 2008-07-24 |
| IL125440A (en) | 2002-02-10 |
| CN1210470A (zh) | 1999-03-10 |
| DE69738597D1 (de) | 2008-05-08 |
| ATE390146T1 (de) | 2008-04-15 |
| CA2245545A1 (en) | 1997-08-14 |
| NO983617D0 (no) | 1998-08-06 |
| WO1997028820A1 (en) | 1997-08-14 |
| NZ331164A (en) | 2000-02-28 |
| EP0879060B1 (en) | 2008-03-26 |
| PL188457B1 (pl) | 2005-02-28 |
| TR199801531T2 (xx) | 1998-10-21 |
| PL328414A1 (en) | 1999-01-18 |
| HUP0001991A2 (hu) | 2000-10-28 |
| BR9707400A (pt) | 2000-01-04 |
| AR005750A1 (es) | 1999-07-14 |
| ES2301175T3 (es) | 2008-06-16 |
| AU723555B2 (en) | 2000-08-31 |
| EP0879060A1 (en) | 1998-11-25 |
| JP2002504080A (ja) | 2002-02-05 |
| CZ248698A3 (cs) | 1998-12-16 |
| HUP0001991A3 (en) | 2003-08-28 |
| IL125440A0 (en) | 1999-03-12 |
| KR100365986B1 (ko) | 2003-02-20 |
| AU1601297A (en) | 1997-08-28 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP6096839B2 (ja) | 単純ヘルペスウイルス２型に対するワクチン：免疫応答を誘発する組成物および方法 | |
| JP5840167B2 (ja) | 水疱−帯状疱疹ウイルスワクチン | |
| Heppner et al. | Safety, immunogenicity, and efficacy of Plasmodium falciparum repeatless circumsporozoite protein vaccine encapsulated in liposomes | |
| CN110035772B (zh) | 水痘带状疱疹病毒疫苗 | |
| EA016648B1 (ru) | Применение дефектного по репликации рекомбинантного аденовируса, содержащего гетерологичную нуклеиновую кислоту, кодирующую антиген cs возбудителя малярии, и белкового антигена, содержащего белок cs или его фрагмент, для лечения или профилактики малярии | |
| EA027504B1 (ru) | Композиция микобактериальных антигенов | |
| US20200164060A1 (en) | Herpes simplex virus vaccine epitopes specifically recognized by tissue resident memory t cells | |
| AU723555B2 (en) | Vaccines against varicella zoster virus gene 63 product | |
| KR20220143812A (ko) | B형 간염 바이러스와 관련된 질병의 치료 | |
| CN112867502A (zh) | Herv-k衍生抗原作为共有肿瘤抗原用于抗癌疫苗 | |
| KR101881947B1 (ko) | 기생충 질병에 대한 백신 또는 진단용으로 사용되는 ｌ3 및/또는 ｌ5 공급원의 용도 | |
| EP2782597B1 (en) | Nucleic acid vaccines against herpes simplex virus type 2: compositions and methods for eliciting an immune response | |
| CN116655748A (zh) | 一种截短型水痘-带状疱疹病毒gE蛋白及其应用 | |
| US7112331B2 (en) | Vaccines against varicella zoster virus gene 63 product | |
| MXPA98006411A (es) | Vacunas contra producto del gen 63 de virus zoster de varicela | |
| WO2022212289A1 (en) | Mutant herpesvirus and vaccine compositions | |
| KR20230156744A (ko) | 백신 조성물 및 hsv 치료 방법 | |
| CN116212012A (zh) | 复合佐剂以及包含它的疫苗制剂 | |
| CN117122676A (zh) | Hsv免疫原性组合物及其应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PD00 | Pending as of 2000-06-30 in czech republic | ||
| MM4A | Patent lapsed due to non-payment of fee |
Effective date: 20080204 |