CZ248698A3 - Vakcíny proti produktu genu 63 viru Varicella Zoster - Google Patents

Vakcíny proti produktu genu 63 viru Varicella Zoster Download PDF

Info

Publication number
CZ248698A3
CZ248698A3 CZ982486A CZ248698A CZ248698A3 CZ 248698 A3 CZ248698 A3 CZ 248698A3 CZ 982486 A CZ982486 A CZ 982486A CZ 248698 A CZ248698 A CZ 248698A CZ 248698 A3 CZ248698 A3 CZ 248698A3
Authority
CZ
Czechia
Prior art keywords
protein
vzv
pharmaceutical composition
cells
zoster virus
Prior art date
Application number
CZ982486A
Other languages
English (en)
Other versions
CZ289971B6 (cs
Inventor
Bernard Rentier
Catherine Sadzot
Original Assignee
Smithkline Beecham Biologicals S. A.
University Of Liege
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from GBGB9602617.4A external-priority patent/GB9602617D0/en
Priority claimed from GBGB9626882.6A external-priority patent/GB9626882D0/en
Application filed by Smithkline Beecham Biologicals S. A., University Of Liege filed Critical Smithkline Beecham Biologicals S. A.
Publication of CZ248698A3 publication Critical patent/CZ248698A3/cs
Publication of CZ289971B6 publication Critical patent/CZ289971B6/cs

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • A61K39/245—Herpetoviridae, e.g. herpes simplex virus
    • A61K39/25—Varicella-zoster virus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
    • A61P31/22—Antivirals for DNA viruses for herpes viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/04—Immunostimulants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
    • C12N2710/00011—Details
    • C12N2710/16011—Herpesviridae
    • C12N2710/16711—Varicellovirus, e.g. human herpesvirus 3, Varicella Zoster, pseudorabies
    • C12N2710/16722—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
    • C12N2710/00011—Details
    • C12N2710/16011—Herpesviridae
    • C12N2710/16711—Varicellovirus, e.g. human herpesvirus 3, Varicella Zoster, pseudorabies
    • C12N2710/16734—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein

Description

Vakcíny proti produktu genu 63 viru Varicella Zoster
Oblast techniky
Předkládaný vynález se týká prostředků k léčení nebo prevenci 5 pásového oparu (Zoster) u osob infikovaných virem Varicella Zoster (VZV) a na prevenci nebo léčbu infekcí vyvolaných Varicellou. Prostředky podle vynálezu obsahují protein kódovaný genem 63 viru VZV nebo jeho imunologicky aktivní derivát. Vynález se dále týká prostředků obsahujících DNA nebo RNA odpovídající genu 63 viru io VZV.
Dosavadní stav techniky
Virus Varicella je lidský alfa herpetický virus, který způsobuje dvě lidská onemocnění: při primární infekci způsobuje VZV dětské plané neštovice (Varicella), poté přechází virus do latence, z níž je Často aktivován (mnohdy po desetiletích) a způsobuje pak pásový opar (Zoster). Při planých neštovicích virus proniká do periferního nervového systému, kde přetrvává v latentním stavu až do reaktivace za vzniku bolestivé Zoster formy. Zatímco virus je latentní, exprese většiny virových genů je reprimovaná. Má se zato, že buněčná imunita hraje rozhodující úlohu při kontrole latence, neboť reaktivace v podobě pásového oparu je častá u starších lidí nebo u osob s oslabenou imunitou.
VZV infekci charakterizuje minimální přítomnost volného viru.
Během latence a při reaktivaci je virus převážně intracelulární. Z toho důvodu rekurentnímu onemocnění nezabrání ani vysoké hladiny neutralizujících protilátek a kontrola viru závisí na buněčné imunitě. K navození ochrany vakcinací je proto žádoucí indukovat nejen • · ··· ·
- 2· protilátkovou odpověď, ale též CTL odpověď. Účinná vakcína by měla aktivovat CTL, schopné působit co možná nejdříve, jakmile se objeví známky reaktivace latentního viru.
Jelikož mechanismus rozpoznávání antigenu cytotoxickými T lymfocyty (CTL) zahrnuje rozštěpení nativního antigenu na peptidy, vazbu těchto proteoiytických fragmentů k molekulám MHC a export komplexu na buněčný povrch, potenciálním cílem T-buněčné odpovědi může být jakýkoli virem kódovaný polypeptid, nejenom integrální membránové proteiny jako jsou glykoproteiny. Vzhledem k tomu, že VZV genom kóduje kromě vnějších glykoproteinů i několik nestrukturálních proteinů a vnitřních proteinů virionu, je potenciálních cílů CTL velký počet a není známo, který protein by mohl být nejrelevantnější.
Genom VZV viru obsahuje 71 otevřených čtecích rámců, kódujících 68 bílkovin proteinů. Sekvence virové DNA je známá (J.Gen.Virol. 67, 1759-1816). Gen 63 viru VZV kóduje okamžitý časný protein o předpokládané molekulové hmotnosti 30,5 kDa (Debrus et al., 1995, J. Virol. 69(5), 3240). Gen začíná v pozici 110581 (startovací kodon) a pokračuje do pozice 111414 (stop kodon). Další
2o kopie genu v opačné orientaci se nachází mezi bázemi 119316 a 118483. U IE63 proteinu bylo prokázáno, že v krysím modelu je během latence exprimovan, poněkud neobvykle, v neuronech. Bílkovina byla exprimovaná jako fúzovaná bílkovina v E.coli (Debrus et al.).
VZV IE63 protein byl nalezen výlučně v cytoplasmě neuronů latentně infikovaných lidských trigeminálních a torakálních ganglií. Toto je první případ identifikace bílkoviny alfa-herpes viru exprimované během latence v lidském nervovém systému.
Dále autoři vynálezu objevili, že tato bílkovina je důležitým cílem zásahu imunitního systému, konkrétně pak cílem T buněčné odpovědi, a tak je užitečná pro prevenci a léčbu infekcí VZV.
44··
-3• · 4 4 4 · • · · · · · • ·· ·· · · · • · · · · •4 44 44
Zejména pak pro prevenci pásového oparu u pacientů již infikovaných virem VZV.
Podstata vynálezu
Předkládaný vynález tedy poskytuje farmaceutický prostředek, který obsahuje bílkovinu IE63 viru Varicella Zoster nebo její imunologicky funkční ekvivalent a farmaceuticky přijatelný nosič.
Toto je první využití takovéhoto proteinu v medicíně a vynález tudíž poskytuje VZV IE63 protein nebo jeho imunologicky funkční, io ekvivalentní derivát pro použití v medicíně.
V dalším aspektu vynález poskytuje metodu léčby osob náchylných nebo trpících VZV infekcí, jež spočívá v podávání bezpečného a účinného množství prostředku podle vynálezu.
Množství bílkoviny v každé dávce vakcíny je vybráno jako 15 takové množství, které indukuje imunoprotektivní odezvu bez významných škodlivých vedlejších účinků. Toto množství se bude lišit v závislosti na tom, jaký specifický imunogen se použije a jak bude podáván. Obecně lze očekávat, že každá dávka bude obsahovat 1 - 1000 pg bílkoviny, s výhodou 2-100 pg, nejvýhodněji
4 - 40 pg bílkoviny. Optimální množství pro konkrétní vakcínu může být určeno standardními studiemi, jež spočívají ve sledování příslušné imunitní odpovědi u testovaných subjektů. Po první dávce vakcíny mohou sledované osoby dostat, s přiměřeným časovým odstupem, jednu nebo několik dalších posilovačích („booster“) imunizačních dávek.
Vedle vakcinace osob náchylných k VZV infekci mohou být farmaceutické prostředky podle vynálezu použity k imunoterapeutické léčbě pacientů trpících VZV infekcemi tak, aby se zabránily či • · ♦ · ·
-4 významně omezily opakované návraty onemocnění a snížila se frekvence, síla a trvání episod pásového oparu.
Ve vakcíně podle vynálezu lze přímo použít vodného roztoku IE63 proteinu(ů) VZV. VZV IE63 protein(y) mohou být též, po předchozí lyofilizaci nebo bez ní, smíchány navzájem nebo s jakýmkoli známým adjuvans. Takováto adjuvans zahrnují, ale nejsou na ně omezena, hydroxid hlinitý, muramyl dipeptid a saponiny jako jsou Quil A, zejména QS21 nebo 3 deacylovaný monofosforyl lipid A (3D-MPL). Preferovány jsou adjuvans nebo adjuvantové ío systémy, které přednostně indukují TH1 odpověď. Adjuvans schopná přednostní stimulace TH1-buněčné odpovědi jsou popsána v mezinárodních patentových přihláškách No. WO 94/00153 a WO 95/17209.
Konkrétní výhodné adjuvans obsahuje QS21, tj. HPLC15 přečištěnou, netoxickou frakci získanou z kůry Quillaja Saponaria Molina, a 3 De-O-acylovaný monofosforyl lipid A (3 D-MPL), případně spolu s emulsí „olej ve vodě“.
De-O-acylovaný monofosforyl lipid A je znám z GB 2220211 (Ribi). Chemicky se jedná o směs 3 De-O-acylovaného monofosforyl lipidu As 4, 5, nebo 6 acylovanými řetězci; výrobcem je Ribi Immunochem Montana. Výhodná forma 3 De-O-acylovaného monofosforyl lipidu A je zveřejněná v mezinárodní patentové přihlášce No. 92/16556.
QS21 je HPLC-přečištěná, netoxická frakce saponinů z kůry jihoamerického stromu Quillaja Saponaria Molina a metoda její produkce je zveřejněná (jako QA21) v US patentu No. 5,057,540.
Výhodná emulse „olej ve vodě“ obsahuje metabolizovatelný olej, jako je squalen, alfa tokoferol a tween 80. Emulse „olej ve vodě“ může navíc obsahovat spán 80 nebo lecithin.
99· · • 9 • ·
-5Poměr QS21 : 3D-MPL bývá typicky v řádu 1:10 až 10:1; s výhodou 1:5 až 5:1 a často v podstatě 1:1. Výhodný rozsah pro optimální synergismus je 2,5:1 až 1:1 3D MPL:QS21. Pro podávání lidským subjektům bývají QS21 a 3D MPL ve vakcíně typicky přítomny v rozsahu 1 μg -100 pg, s výhodou 10 pg - 50 pg na jednu dávku. Emulse „olej ve vodě“ typicky obsahuje 2 až 10% squalenu, 2 až 10% alfa tokoferolu a 0,3 až 3% tweenu 80. Poměr squalen: alfa tokoferol je s výhodou roven nebo menší než 1, což dává stabilnější emulsi. Spán 85 může být též přítomen v 1% hladině. V některých io případech může být výhodné, aby vakcíny podle vynálezu dále obsahovaly stabilizátor.
Příkladem další možnosti může být enkapsulace proteinu do mikročástic, jako jsou liposomy. Jiným dalším možným příkladem je konjugace VZV IE63 proteinu(ů) s imunostimulující makromolekulou jako je usmrcená Bordetella nebo tetanový toxoid.
Příprava vakcíny je v obecných rysech popsána v New Trends and Developments in Vaccines, Voliér et al., (eds.), University Park Press, Baltimore, Maryland, 1978. Enkapsulaci v liposomech popisuje Fullerton, US patent 4,235,877. Konjugace bílkovin k makromolekulám je zveřejněná např. v Likhite, US patent 4,372,954 a v Armor et al., US patent 4,474,757. Použití Quil A je zveřejněné v Dalsgaard et al., Acta Vet. Scand. 18: 349 (1977). 3D-MPL lze získat od Ribi Immunochem, USA a je zveřejněn v britské patentové přihlášce No. 2220211 a v US patentu 4912094. QS21 je zveřejněn v US patentu No. 5057540.
Použití polynukleotidu podle vynálezu pro genetickou imunizaci s výhodou uplatní vhodnou metodu vnesení, jako je přímá injikace plasmidové DNA do svalů (Wolff et al., Hum. Mol. Genet. 1992, 1:363, Manthorpe et al., Hum. Gene Ther. 1963, 4: 419), vnesení DNA v komplexu se specifickými bílkovinnými nosiči (Wu et al., J Biol.Chem. 1989, 264:1985), koprecipitace DNA s fosofrečnanem • ·· · • ·· ·· ·· ·· · · 9 9 8 9
8 8 9 · ··
8 · · 89 9 9 ·
9 9 ·9· 9 · 9
899 99 ··· ·· ·· ··
- 6 vápenatým (Benvenisty and Reshef, PNAS, 1986: 83, 9551) nebo enkapsulace DNA v různých formách liposomů (Kaneda et al., Science 1989: 243,375), bombardování částicemi (Tang et al., Nátuře 1992, 356:152, Eisenbraun et al., DNA Cell Biol. 1993,
12:791), a in vivo infekce prostřednictvím klonovaných retrovirových vektorů (Seegar et al., PNAS 1984: 81,5849) nebo neinfekčních rekombinantních virových vektorů, jako je „Semliki Forest helper 2“ systém (Berglund et al., Bio/Technology 1993, 11:916-920). Promotory vhodné k transfekci svalu zahrnují CMV, RSV, Sra, aktin, io MCK, alfa globin, adenovirus a dihydrofolátreduktasu. Výhodný způsob vnášení polynukleotidu podle vynálezu využívá zlatých mikročástic vstřelovaných pomocí „genového děla“ (US patenty
5100792, 5036006 a 4945050).
Polynukleotidové prostředky podle vynálezu mohou být is aplikovány při použití dávek a způsobů aplikace popsaných ve WO 90/11092. Je však jasné, že přesné dávkování bude záviset na faktorech jako jsou váha, pohlaví, způsob aplikace, všeobecný zdravotní stav pacienta a onemocnění, jež má být léčeno. Nicméně, dávky pro nitrosvalové použití se typicky budou pohybovat v rozsahu
2o 0,05 pg/kg až asi 50 mg/kg, typičtěji od asi 0,1 do 10 mg/kg. Vzhledem k schopnosti indukovat vysoké hladiny CTL, může být výhodná podkožní, epidermální, intradermální nebo mukosní aplikace.
Vakcína podle vynálezu může dále obsahovat i jiné antigenní složky VZV, jako jsou gpl, gpll, gplll, gpIV nebo gpV nebo jejich deriváty, anebo jiné okamžité časné proteiny, jako je IE62 protein. Zejména to jsou zkrácené formy gpl, gpll nebo gplll zveřejněné v Evropské patentové přihlášce publikované pod No. 0405867.
Výhodné provedení vynálezu poskytuje prostředek k vakcinaci, jenž obsahuje nezakotvený gpl v kombinaci s IE63 nebo s derivátem
3o IE63.
-7• · • fl* • ·· flfl ·· »· · · · · · · • · · · · · · • · · · flflfl · · • flfl · · · »·· flfl flfl fl·
Nezakotvený znamená, že jde o derivát glykoproteinu VZV, kterému chybí v podstatě celá C-koncová ukotvující oblast, čímž je umožněná jeho sekrece při expresi v savčích buňkách. Takovéto proteiny jsou popsány v EP-A-0405867.
Alternativní provedení poskytuje vakcínu obsahující fúzovaný protein sestávající z aminokyselinové sekvence představující IE63 nebo derivát a z aminokyselinové sekvence představující některý z glykoproteinú gpl, gpll, gplll, gpIV nebo gpV či jejich derivátů nebo jiný okamžitý časný protein jako je IE62.
V alternativním provedení může být použit jako vakcína přímo polynukleotid, schopný exprimovat IE63 nebo jeho derivát. Polynukleotidem je s výhodou DNA. V takovýchto případech bude polynukleotid pod kontrolou vhodného promotoru.
K imunizaci může být též použita RNA. Pro tyto případy může ís být RNA připravena pomocí metod uvedených v WO 92/10578.
Příklady provedení vynálezu
Přikladl: Vakcínový prostředek obsahující VZV IE63 protein
Připraví se dva přípravky adjuvans, přičemž každý obsahuje
2o následující složku emulse „olej ve vodě“
SB 62: 5% squalen, 5% tokoferol, 2% tween 80; velikost částic byla 180 nm
1(a) Příprava emulse SB 62 (dvojnásobný koncentrát)
Tween 80 se rozpustí ve fosfátem pufrovaném solném roztoku (PBS) tak, aby dal 2% roztok v PBS. K získání 100 ml dvojnásobného koncentrátu emulse se důkladně promíchá (na přístroji typu Vortex) 5g DL alfa tokoferolu a 5ml squalenu. Přidá se 90ml roztoku PBS/Tween a důkladně promíchá. Výsledná emulse se protlačí ··*·
- 8 injekční stříkačkou a nakonec mikrofluidizuje za použití mikrofluidizačního přístroje M110S. Výsledné olejové kapičky mají velikost přibližně 180nm.
1(b) Antigen je připraven podle metody, kterou uvádí Debrus et al 5 (shora) (c) Příprava prostředku IE63 proteinu v emulsi „olej ve vodě“ QS21/3DMPL.
K emulsi podle 1 a) se přidá stejný objem dvakrát io koncentrovaného antigenu (buď 20pg nebo 100pg) a promíchá se. Toto se spojí s 50pg/ml 3D-MPL a 20pg/ml QS21 za vzniku konečného přípravku. Pufr je podle koncentrace soli a pH.
Příklad 2: Imunologické vlastnosti IEP63
2.1. Materiály
Od jedenácti zdravých dárců, z nichž jeden byl očkován, byla odebrána krev. Všichni tito dárci byli dospělí, s anamnézou planých neštovic v dětství. Ve všech případech bylo odebráno 30ml krve do heparinlzovaných zkumavek a 5ml na sražení k získání séra.
2o 2.2. Humorální imunitní odpověď
K detekci anti-VZV imunoglobulinu IgG ve vzorcích krve byly provedeny ELISA testy za použití celého VZV a kontrolních antigenů: všichni testovaní dárci (kromě jednoho) měli detegovatelnou hladinu anti-VZV protilátek, což představuje serologický důkaz prodělaných planých neštovic v dětství.
Přítomnost anti-IE63 protilátek jsme zkoumali metodou westernového přenosu, přičemž byl použit IE63 protein, který byl klonovaný v pGEX5X, exprimovaný v E.coli jako fúzovaný protein
- 9 (GST-IE63) a purifikovaný afinitní chromatografii (Debrus et al., J Virol., 69, 3240-3245). GST protein exprimovaný a purifikovaný stejným způsobem sloužil jako negativní kontrola. Se všemi testovanými vzorky krve byl rozpoznán purifikovaný IE63 fúzovaný protein, což ukazuje na přítomnost anti-IE63 protilátek v séru. Kontrolní protein nebyl protilátkami nikdy rozpoznán.
2.3. Buněčná imunitní odpověď
Stimulace lymfocytů T byla měřena stimulací PBMC (Peripheral Blood Mononuclear Celíš, tj. mononukleárních buněk io periferní krve) izolovaných centrifugací ve ficoll/hypaque gradientu.
Všechny testy byly prováděny trojmo, stimulací 3x105 PBMC fytohemaglutininem (PHA) ke stanovení nespecifického stimulačního indexu, a dále celým VZV a kontrolními antigeny (připravenými sonikací infikovaných nebo neinfikovaných melanomových buněk) a purifikovaným fúzovaným proteinem (GST-IE63 nebo samotným GST). Šestého dne byl k buňkám přidán značený 3H-thymidin a po 16 hodinách byly buňky sklizeny. Stimulační index (S.l.) byl vypočten jako poměr cpm (impulsů za minutu) v jamkách s buňkami stimulovanými proteinem k jamkám s buňkami kontrolními; index byl
2o považován za pozitivní, byl-li > 2.
2.4. Výsledky testu proliferace buněk T
Doposud bylo provedeno 10 testů na proliferaci za podmínek stanovených dříve.
Výsledky jsou uvedeny v Tabulce 1.
Indexy S.l. získané po stimulaci celými VZ antigeny nebo IE63 proteinem byly vyneseny do grafu na Obr.1
Z těchto dat můžeme vyvodit:
·
Většina lidí (6/ί 0) vykazuje odpověď paměťových buněk T vůči VZV IE63.
Dva dárci mají velmi nízký S.l. jak s celými antigeny, tak s purifikovaným fúzovaným proteinem a mohou být považováni za negativní (S.l. < 2). Avšak jeden z nich měl velmi nízký titr protilátek, neměl v anamnéze jasný průkaz planých neštovic a mohl tedy být negativním dárcem. Druhý, jehož titr protilátek byl vysoký, měl lepší hodnotu S.l. když byl test proveden s MBP-IE63 (S.l.=3,4), což naznačuje, že v některých případech je buňkami T jeden io z fúzovaných proteinů lépe rozpoznáván, a že srovnání obou proteinů by mohlo být užitečné v případech velmi nízkých hodnot S.l.
s vysokou standardní odchylkou.
Dva další dárci vykazovali negativní odpověď na IE63, zatímco
S.l. s celými antigeny byl vysoký, stimulace však byla provedena pouze s GST fúzovaným proteinem.
Příklad 3: Buněčné odpovědi
V rozšíření výše uvedeného experimentu byly PBMC od 19 zdravých dospělých dárců testovány na proliferační odpověď buněk T po stimulaci buď VZV antigeny nebo purifikovaným GST-IE63 proteinem. Střední hodnota S.l. s VZ antigeny byla 15,5±3,3 s hodnotami od 2,1 do 52. Střední hodnota S.l. po stimulaci GST-IE63 proteinem byla 3,4±0,48 s hodnotami mezi 1,8 a 8. Tyto hodnoty S.l. byly významně vyšší než hodnoty zjištěné u neimunních pacientů, kde
S.l. byl 1,95+0,48 pro VZV antigeny a 1,3±0,1 pro IE63. Při grafickém vynesení S.l. po stimulaci s VZV a srovnání s S.l. po stimulaci s GST-IE63 vycházejí dva neimunní pacienti jasně negativní (S.l. < 2,0) s oběma antigenovými preparáty (Obr. 2). Všech 17 imunních dárců mělo S.l. k VZV antigenům vyšší než 2,0. Mezi těmito pozitivními dárci, byli 3 (17%), z nichž jeden měl v anamnéze četné
- 11 • · · · · • · · · • · · ·· · · • · · · • · · · erupce pásového oparu, kteří vykazovali velmi silnou odpověď k VZV antigenům, zatímco S.l. s GST-IE63 byl pod hodnotou 2,0. Čtyři dárci měli S.l. = 2,0 pro GST-IE63, přičemž S.l. pro VZ antigeny se pohyboval mezi 5,4 a 11. Avšak všichni tito dárci s S.l. < 2 pro
GST-IE63 měli velmi významnou odpověď k samotnému GST (data neuvedena), což činí interpretaci výsledků obtížnou. Všichni ostatní přirozeně imunní jednotlivci (59%) vykazovali silnou odpověď na GST-IE63, s hodnotami S.l. mezi 2,3 a 8. Avšak korelace mezi stimulací VZ antigeny a stimulací fúzovaným proteinem nebyla io prokázána.
Příklad 4: Testy na produkci cytokinů
Produkce cytokinů PBMC stimulovanými IE63 byla hodnocena u 7 subjektů: PBMC byly stimulovány buď GST nebo GST-IE63, a 2., 4.
nebo 6. den byly ELISA testem sledovány IL-2, IL-4 a γ-IFN. Výsledky byly vyjádřeny jako rozdíl mezi koncentrací cytokinů zjištěných po stimulaci GST-IE63 nebo samotným GST. IL-2 a IL-4 nebyly nikdy nalezeny, zatímco γ-IFN byl produkován ve významném množství (175 až 1400 pg/ml) buňkami T stimulovanými IE63, přičemž maximum produkce bylo 4.den. Množství γ-IFN zjištěné v kultuře, v níž nebyla pozorována žádná stimulace bylo významně nižší:
Dárce Proliferace T buněk po GST-IE63 (S.l.) IFN-γ (pg/ml) IL-4 (pg/ml)
1 2,9 750 0
2 2,2 1400 0
3 7,4 500 0
4 8,0 625 0
5 2,0 175 0
6 2,0 50 0
Příklad 5: Testy cytotoxicity
CTL odpovědi specifické na IE62 a IE63 byly zjišťovány testem limitního ředění buněk T získaných od 10 dárců imunních vůči VZV.
Tyto testy byly prováděny s autologními cílovými buňkami buď neinfikovanýml nebo infikovanými, a to buď samotnou vaccinií (kontrola), nebo vaccinií nesoucí IE62 (vaccinia-IE62) nebo vaccinií nesoucí IE63 (vaccinia-IE63). Pozadí představované kontrolními cílovými buňkami vykazovalo široký rozsah variací mezi dárci a ío výsledky byly považované za validní pouze tehdy, když lýza cílových buněk exprimujících virus byla nejméně o 10% vyšší než lýza kontrolních cílových buněk (neinfikovaných nebo infikovaných samotnou, kontrolní vaccinií).
Pokud byly populace buněk T získány pomocí systému T15 Lymphokwik, lýza cílových buněk exprimujících VZV proteiny byla významně vyšší než v případě neinfikovaných nebo kontrolních cílových buněk, což je ukázáno pro jeden test na obr.3. Lýza pozorovaná u cílových buněk exprimujících IE62 a buněk exprimujících IE63 se významně nelišila. Podobné výsledky byly získány pro 4 testy provedené s celou populací buněk T: pro IE62 • · · · • ·· · · · * · · · · · ···- 9 · · · · · . 13.........— ·· “ byla pozorována specifická lýza v rozmezí 25 až 48% a pro IE63 v rozmezí 27 až 43%. Průměrný výskyt prekursorů buněk T, které rozpoznávají IE62 byl 44500±22500 a pro IE63 31000116000, tyto rozdíly však nebyly statisticky významné (p=0,8).
Kultury v limitním ředěni byly rovněž připraveny z purifikovaných populací CD4+ a CD8+ lymfocytú T, jakožto efektorů. Obě populace lýzovaly cílové buňky exprimující IE62 a IE63. Hodnota RCF CD8+ buněk rozpoznávajících IE62 byla 28500110100 a rozpoznávajících IE63 30500113700, což není io statisticky rozdílné (p=0,9), a co tedy nasvědčuje, že oba virové proteiny byly rozpoznávány CD8+ buňkami se stejnou účinností (Obr.4). Počet buněk lýzujících cílové buňky, jež exprimují IE63, byl rovněž v obou populacích efektorových buněk stejný: střední hodnota CD4+ efektorových buněk byla 3145017500 a týž výskyt byl v populaci CD8+ buněk (p=0,97). Výpočet výskytu CD4+ buněk rozpoznávajících IE62 byl však počítačovou analýzou zamítnut.
Příklad 6: Exprese VZV 1E63 v průběhu latence
Pro analýzu VZV exprese v latentně infikovaných gangiiích byly
2o z 9 dospělých a 3 kojenců získány během 24 hodin po smrti jeden trigeminální a mnohá torakální ganglia. Žádný ze subjektů netrpěl před smrtí oslabením imunity a při pitvě nebyly shledány žádné kožní známky nedávné infekce herpesvirem. Enzymové imunostanovení odhalilo protilátky proti VZV v sérech všech dospělých subjektů. Sérum dostupné pouze od jednoho ze 3 kojenců neobsahovalo protilátky k VZV. PCR amplifikace provedená s DNA extrahované z malé části každého ganglia za použití VZVspecifických primerů (Mahalingham et al., Engl.J.Med. 323, 627-631) odhalila přítomnost VZV DNA ve všech dospělých gangiiích, nikoli však v gangiiích kojenců. Zbývající části každého ganglia byly analyzovány imunohistochemicky pomocí králičích protilátek získaných proti 30,5kD proteinu VZV IE63, jenž byl exprimován v E.coli jako protein fúzovaný s glutathion-S-transferasou a purifikovaný jak popisují Debrus et al. (shora). BSC-1 (Afričan monkey kidney, opičí ledvinné) buňky infikované a neinfikované VZV sloužily jako pozitivní a negativní kontrola.
Na VZV infikovaných BSC-1 buňkách byly patrné dvě oblasti fokusů s typickou VZV cytopatologií, jež obsahovaly VZV IE63 protein. Žádný signál nebyl detegován v neinfikovaných buňkách nebo v BSC10 1 buňkách infikovaných virem HSV. V gangliích získaných 17 hod po smrti od 46-letého muže, jenž zemřel na atherosklerosu, bylo pozorováno červené zabarvení (charakterizující VZV IE63 protein) výhradně v cytoplasmě 3 neuronů. Žádný signál nebyl detegován při použití normálního králičího séra na přilehlém řezu ze stejného ganglia. Intensivní červené zabarvení bylo detegováno v cytoplasmě neuronu v přilehlých řezech z jiného torakálního ganglia téhož subjektu. Světlejší červené zabarvení bylo též často patrné v mnohých neuronech latentně infikovaných ganglií, což naznačuje difúznější, možná slabší infekci. Červené barvení, specifické pro VZV
IE63 protein, nebylo nikdy vidět u satelitních (kapsulárních) buněk, kapilár, pojivové tkáně, nervových svazků uvnitř ganglií, nebo nervových kořínků vstupujících do ganglií. Žádný signál nebyl detegován po aplikaci antiséra proti VZV IE63 proteinu na ganglia 2měsíčního kojence, který zemřel na sepsi komplikující vrozenou omfalokélu a plicní hypoplazii. Celkem byl VZV IE63 protein nalezen v 5 gangliích (4 torakálních a 1 trigeminálním) ze 2 dospělých subjektů. U jednoho z těchto dospělých byl VZV IE63 protein detegován ve všech 10 řezech ze 4 z 5 torakálních ganglií. U druhého dospělého byl VZV IE63 protein detegován ve všech 4 řezech
3o z trigeminálního ganglia. Na pozitivních řezech byl VZV IE63 protein detegován v cytoplasmě 2-4 neuronů. VZV IE63 protein nebyl nalezen • ·
-15i
9· · v žádném ze 4 řezů připravených z každého ze 16 ganglií od 7 zbývajících dospělých, ani v žádném ze 4 řezů z každého z 9 ganglií pocházejících od 3 kojenců.
Skutečnost, že VZV DNA byla detegována téměř ve všech gangliích, avšak VZV IE63 protein pouze v některých latentně infikovaných gangliích by mohla být vysvětlena výběrem vzorků tzn. že analýza na přítomnost VZV IE63 proteinu ve všech řezech z každého ganglia, jež obsahuje VZV DNA, by mohla odhalit další pozitivní ganglia. Jiná možnost je, že exprese viru se může v různých io gangliích lišit; např. v gangliích latentně infikovaných virem HSV je počet neuronů obsahujících HSV DNA mnohem vyšší než počet neuronů, ve kterých je patrná přítomnost transkriptů souvisejících s latencí.
Konečně, mohla i nastat reaktivace viru, ačkoliv toto se nezdá pravděpodobné u subjektů, jejichž ganglia obsahovala VZV IE63 protein, neboť u nich nebyly před smrtí pozorovány klinické známky exantému pásového oparu, a nebyly u nich zaznamenány ani déle trvající neuralgické bolesti, jež mohou předcházet exantému (preherpetická neuralgie), ani bolest lokalizovaná do kožních inervačních zón bez exantému (Zoster sine herpete), ani postherpetická neuralgie, jež by naznačovala mírnou ganglionitidu. Navíc, histologické vyšetření ganglií neukázalo žádnou neuronofagii, inkluzní tělíska nebo zánětlivou reakci.
Závěry:
Z těchto pokusů lze vyvodit, že VZV IE63 vyvolává úplnou imunitní odpověď:
• anti-IE63 protilátky mohou být detegovány metodou westernového přenosu v séru většiny dárců s anamnézou planých neštovic;
- 16 β·· ·· • Τ buňky mohou proliferovat po in vitro stimulaci IE63 proteinem (purifikovaným jako GST-fúzovaný protein), avšak omezený počet testovaných dárců nedovolil nalézt přímou korelaci mezi stimulačním indexem (S.l.) pro VZV a pro IE63. Buňky T, které proliferují jako odpověď na stimulaci IE63 proteinem jsou většinou Th1, jak patrno z exprese velkého množství γ-IFN do supernatantu;
• byla prokázána T buněčná cytotoxická aktivita v kontextu rozpoznání IE63. Na procesu lýzy se účastní CD4+ jakož i CD8+ buňky, což bylo prokázáno pomocí purifikovaných efektorových buněk. Počet p re kurs ořových buněk rozeznávajících IE63 je podobný počtu buněk odpovídajících na IE62.
Toto je první popsaný případ identifikace proteinu herpetického viru exprimovaného během latence v lidském nervovém systému. Tato skutečnost spolu sjeho imunologickými vlastnostmi z něj činí výborný antigen pro zahrnutí do vakcíny proti Varicella Zoster.
t · *
9 9
- 17Tabulka 1: PROLIFERACE BUNĚK T
CS:
MS:
VD:
JM:
Ab status :4 S.l. s celým Ag 5Rg S.l. s GST-IE63
4,1 1,9
EIA: >1024 :16 6,4 2,5μρ 1,5
:64 5,7 1,25μ 3,2
PHA 11,5 Ο,βμρ 11,6
Ab status :4 S.l. 5μθ S.l.
7,5 1,1
EIA: >1024 :16 11,9 2,5μ0 2,7
:64 5,9 -25μρ 3,2
PHA 8,1 θ,θμθ 2,5
Ab status :4 S.l. 5μ9 S.l.
4,3 2,9
EIA: >1024 :16 4,5 2,5μρ 1,3
:64 5,5 ,25μ0 1,5
PHA 12,6 Ο,δμΟ 1,1
Ab status :4 S.l. 5μθ S.l.
1,5 1,7
EIA: >1024 :16 2,1 2,5μρ 1,4
:64 2,0 ,25μ9 2,2
PHA 7,1 Ο,δμ9 0,9
- 18 CD
CL:
J:
DJ:
• 99 • · · · · · • · · • · · • · · 9 9
9 99 • · · · • 9 99 • 99 9 9
9- 9
9 9 9
Ab status :4 S.l. 5pg S.l.
4,0 4,3
EIA: >1024 :16 20,1 2,5pg 2,8
:64 8,6 ,25pg 7,4
PHA 25,8 0,6pg 4,4
Ab status :4 S.l. 5pg S.l.
7,0 1,0
EIA: 256 .Ί6 7,0 2,5pg 2,0
:64 9,0 ,25pg 2,0
PHA 22,0 0,6pg 2,0
Ab status :4 S.l. 5Rg S.l.
7,0 1,0
EIA: 256 :16 7,0 2,5gg 2,0
:64 9,0 ,25pg 2,0
PHA 22,0 0,6pg 2,0
Ab status :4 S.l. 5pg S.l.
6,5 nd
EIA: >1024 :16 2,1 2,5gg nd
:64 5,1 .25pg nd
PHA 24,0 0,6pg nd
- 19 SH
LZ:
R:
V:
Ab status EIA: 16 :4 :16 S.l. 5μθ 2,5gg S.l.
1,4 2,1 0,8 1,2
WB: ? :64 0,4 ,25μρ 1,5
PHA 23,4 0,6μ9 1,9
Ab status :4 S.l. 5μθ S.l.
15,0 4,0
EIA: >1024 :16 14,0 2,5μ9 8,0
:64 11,0 >25μ9 8,0
PHA 38,0 θιθμθ 8,0
Ab status :4 S.l. 5μ9 S.l.
13,0 3,6
není dostupné :16 23,4 2,5μρ 3,4
není dostupné :64 5,2 ,25μρ 2,6
PHA 30,9 Ο,δμθ 3,8
Ab status :4 S.l. 5μθ S.l.
0,9 0,6
není dostupné :16 1,1 2,5μ9 1,1
není dostupné :64 0,7 ,25μ9 ???
PHA 23,5 Ο,6μ0 0,7
• · · ·
··
· ··
E:
Ab status :4 S.l. 5gg S.l.
28,2 0,7
EIA: >1024 :16 9,1 2,5pg 1,8
:64 52,6 -25pg 1,2
PHA 46,7 Ο,βμς 0,6
G:
Ab status :4 S.l. 5μ0 S.l.
2,4 1,2
EIA: <16 :16 2,3 2^g 0,9
:64 1,3 .25μg 1,4
PHA 70,9 ο,θμς 1,4
M:
Ab status :4 S.l. 5μ0 S.l.
6,1 2,7
EIA: >1024 :16 23,4 2^g 3,2
:64 29,6 ,25pg 2,3
PHA 79,5 O^g 4,6
C:
Ab status :4 S.l. 5μθ S.l.
0,8 0,5
EIA: <16 :16 1,6 2^g 0,9
:64 1,4 25pg 1,0
PHA 113,6 0,6pg 1,2
Ab status :4 S.l. 5μ9 S.l.
1,5 0,9
EIA: <16 :16 0,7 2,5μ9 1,2
:64 0,7 ,25μ0 0,6
PHA 9,3 θ,6μ9 ???
Tabulka 1: Humorální a buněčná imunitní odpověď na VZV.
S.l. byl měřen po stimulaci celými antigeny (sonikované melanomové buňky infikované nebo s napodobením infekce, ředěné 4x, 16x nebo 64x) nebo po stimulaci IE63 fúzovaným proteinem (GST nebo GST-IE63).
ío Status humorální imunity byl hodnocen ELISA testem s celým antigenem (vyjádřen jako ředění, pro které je O D. > 0,250) nebo metodou westernového přenosu s IE63.

Claims (11)

  1. PATENTOVÉ NÁROKY
    1. Farmaceutický prostředek vyznačující se tím, že obsahuje IE63 protein viru Varicella Zoster nebo imunologicky
    5 funkční derivát a farmaceuticky přijatelný excipient.
  2. 2. Farmaceutický prostředek vyznačující se tím, že obsahuje nukleovou kyselinu kódující IE63 nebo jeho imunologicky funkční derivát.
  3. 3. Protein genu IE63 nebo jeho imunologicky funkční derivát pro použití v medicíně.
  4. 4. Použití IE63 proteinu nebo jeho imunologicky funkčního derivátu is pro výrobu léku pro prevenci nebo zmírnění planých neštovic nebo pásového oparu.
  5. 5. Farmaceutický prostředek podle nároku 1, vyznačující se tím, že dále obsahuje další VZV antigeny.
  6. 6. Farmaceutický prostředek podle nároku 5, vyznačující se tím, že druhý protein viru Varicella Zoster je vybrán ze skupiny gpl, gpll, gplll, gpIV, gpV nebo IE62 nebo jejich imunologicky funkčních derivátů.
  7. 7. Farmaceutický prostředek podle nároků 1, 2, 5 nebo 6, vyznačující se tím, že dále obsahuje adjuvans.
    ··♦ · ··· ··
    -238. Farmaceutický prostředek podle nároku 7, vyznačující se tím, že adjuvans přednostně indukuje TH1 odpověď.
    5 9. Farmaceutický prostředek podle nároku 8, vyznačující se tím, že antigen je přítomen spolu s QS21 a 3D-MPL ve formě emulse „olej ve vodě“.
  8. 10. Způsob léčení pacienta trpícího nebo náchylného k infekci virem io Varicella Zoster, spočívající v podávání bezpečného a účinného množství farmaceutického prostředku podle kteréhokoli z nároků 1, 2, 5, 6, 7, 8 nebo 9 pacientovi.
  9. 11. Způsob výroby farmaceutického prostředku obsahujícího virový
  10. 15 protein IE63 Varicella Zoster, nukleovou kyselinu nebo jejich imunologicky funkční derivát, vyznačující se tím, že se mísí uvedený protein, nukleová kyselina nebo derivát s farmaceuticky přijatelným excipientem.
  11. 20 12. Způsob podle nároku 11, vyznačující se tím, že excipient obsahuje adjuvans.
CZ19982486A 1996-02-09 1997-02-04 Farmaceutický prostředek proti produktu genu 63 Varicella Zoster CZ289971B6 (cs)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
GBGB9602617.4A GB9602617D0 (en) 1996-02-09 1996-02-09 Vaccines
GBGB9626882.6A GB9626882D0 (en) 1996-12-24 1996-12-24 Vaccines

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CZ248698A3 true CZ248698A3 (cs) 1998-12-16
CZ289971B6 CZ289971B6 (cs) 2002-05-15

Family

ID=26308641

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CZ19982486A CZ289971B6 (cs) 1996-02-09 1997-02-04 Farmaceutický prostředek proti produktu genu 63 Varicella Zoster

Country Status (20)

Country Link
EP (1) EP0879060B1 (cs)
JP (1) JP2002504080A (cs)
KR (1) KR100365986B1 (cs)
CN (1) CN1210470A (cs)
AR (1) AR005750A1 (cs)
AT (1) ATE390146T1 (cs)
AU (1) AU723555B2 (cs)
BR (1) BR9707400A (cs)
CA (1) CA2245545C (cs)
CZ (1) CZ289971B6 (cs)
DE (1) DE69738597T2 (cs)
ES (1) ES2301175T3 (cs)
HU (1) HUP0001991A3 (cs)
IL (1) IL125440A (cs)
NO (1) NO983617L (cs)
NZ (1) NZ331164A (cs)
PL (1) PL188457B1 (cs)
TR (1) TR199801531T2 (cs)
TW (1) TW575427B (cs)
WO (1) WO1997028820A1 (cs)

Families Citing this family (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1999011241A1 (en) * 1997-09-05 1999-03-11 Smithkline Beecham Biologicals S.A. Oil in water emulsions containing saponins
ES2273482T3 (es) * 1998-03-09 2007-05-01 Glaxosmithkline Biologicals S.A. Composiciones de vacunas combinadas.
GB9901254D0 (en) * 1999-01-20 1999-03-10 Smithkline Beecham Biolog Vaccines
GB9921146D0 (en) * 1999-09-07 1999-11-10 Smithkline Beecham Biolog Novel composition
EP1227840B1 (en) * 1999-11-03 2007-10-03 Powderject Vaccines, Inc. Adjuvanted genetic vaccines
CA2400842C (en) 2000-02-23 2013-01-15 Smithkline Beecham Biologicals S.A. Novel compounds
EA020617B1 (ru) 2009-05-27 2014-12-30 Глаксосмитклайн Байолоджикалс С.А. Конструкции casb7439
KR101723605B1 (ko) * 2014-10-21 2017-04-07 진원생명과학 주식회사 대상포진 예방 및 치료용 dna 백신 조성물 및 이를 이용한 vzv 항원에 대한 t세포 활성화 방법
CN114891830B (zh) * 2022-04-02 2024-03-01 武汉博沃生物科技有限公司 基于水痘-带状疱疹病毒的重组表达载体、重组病毒及用途

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4952674A (en) * 1986-05-02 1990-08-28 Merck & Co., Inc. Vaccine against varicella-zoster virus
ATE119939T1 (de) * 1989-06-27 1995-04-15 Smithkline Beecham Biolog Verbindungen.

Also Published As

Publication number Publication date
CA2245545C (en) 2008-12-30
KR19990082360A (ko) 1999-11-25
NO983617L (no) 1998-10-02
TW575427B (en) 2004-02-11
DE69738597T2 (de) 2008-07-24
IL125440A (en) 2002-02-10
CN1210470A (zh) 1999-03-10
DE69738597D1 (de) 2008-05-08
ATE390146T1 (de) 2008-04-15
CA2245545A1 (en) 1997-08-14
NO983617D0 (no) 1998-08-06
WO1997028820A1 (en) 1997-08-14
NZ331164A (en) 2000-02-28
EP0879060B1 (en) 2008-03-26
PL188457B1 (pl) 2005-02-28
TR199801531T2 (xx) 1998-10-21
CZ289971B6 (cs) 2002-05-15
PL328414A1 (en) 1999-01-18
HUP0001991A2 (hu) 2000-10-28
BR9707400A (pt) 2000-01-04
AR005750A1 (es) 1999-07-14
ES2301175T3 (es) 2008-06-16
AU723555B2 (en) 2000-08-31
EP0879060A1 (en) 1998-11-25
JP2002504080A (ja) 2002-02-05
HUP0001991A3 (en) 2003-08-28
IL125440A0 (en) 1999-03-12
KR100365986B1 (ko) 2003-02-20
AU1601297A (en) 1997-08-28

Similar Documents

Publication Publication Date Title
AU2010249330B2 (en) Vaccines against Herpes Simplex Virus type 2: compositions and methods for eliciting an immune response
CN110035772B (zh) 水痘带状疱疹病毒疫苗
EA016648B1 (ru) Применение дефектного по репликации рекомбинантного аденовируса, содержащего гетерологичную нуклеиновую кислоту, кодирующую антиген cs возбудителя малярии, и белкового антигена, содержащего белок cs или его фрагмент, для лечения или профилактики малярии
US9782474B2 (en) Vaccines against herpes simplex virus type 2: compositions and methods for eliciting an immune response
KR20220143812A (ko) B형 간염 바이러스와 관련된 질병의 치료
AU723555B2 (en) Vaccines against varicella zoster virus gene 63 product
KR101881947B1 (ko) 기생충 질병에 대한 백신 또는 진단용으로 사용되는 ｌ3 및/또는 ｌ5 공급원의 용도
EP2782597B1 (en) Nucleic acid vaccines against herpes simplex virus type 2: compositions and methods for eliciting an immune response
CN116655748A (zh) 一种截短型水痘-带状疱疹病毒gE蛋白及其应用
US7112331B2 (en) Vaccines against varicella zoster virus gene 63 product
Etewa et al. Studies on the role of tumor necrosis factor-alpha (TNF-α) in hepatocytes induced apoptosis in vaccinated, Schistosoma mansoni-challenged mice
MXPA98006411A (es) Vacunas contra producto del gen 63 de virus zoster de varicela
RU2750818C1 (ru) Вирусный штамм для получения аттенуированной живой культуральной вакцины для профилактики и лечения опоясывающего герпеса для взрослого населения
WO2022212289A1 (en) Mutant herpesvirus and vaccine compositions
KR20230156744A (ko) 백신 조성물 및 hsv 치료 방법
WO2023039638A1 (en) &#34;immunogenic compositions and uses thereof&#34;
CN116212012A (zh) 复合佐剂以及包含它的疫苗制剂
CN117285652A (zh) 一种包括水痘带状疱疹病毒gE的融合蛋白、其制备方法与应用

Legal Events

Date Code Title Description
PD00 Pending as of 2000-06-30 in czech republic
MM4A Patent lapsed due to non-payment of fee

Effective date: 20080204