CZ289955B6 - Stabilizační médium pro alfa-GST v moči a způsob jeho stanovení metodou enzymové imunoanalýzy - Google Patents

Stabilizační médium pro alfa-GST v moči a způsob jeho stanovení metodou enzymové imunoanalýzy Download PDF

Info

Publication number
CZ289955B6
CZ289955B6 CZ19971173A CZ117397A CZ289955B6 CZ 289955 B6 CZ289955 B6 CZ 289955B6 CZ 19971173 A CZ19971173 A CZ 19971173A CZ 117397 A CZ117397 A CZ 117397A CZ 289955 B6 CZ289955 B6 CZ 289955B6
Authority
CZ
Czechia
Prior art keywords
alpha
gst
stabilizing medium
stabilizing
medium according
Prior art date
Application number
CZ19971173A
Other languages
English (en)
Other versions
CZ117397A3 (en
Inventor
John Martin Doyle
Cormac Gerard Kilty
Original Assignee
Biotrin Intellectual Properties Limited
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Biotrin Intellectual Properties Limited filed Critical Biotrin Intellectual Properties Limited
Priority to CZ19971173A priority Critical patent/CZ289955B6/cs
Publication of CZ117397A3 publication Critical patent/CZ117397A3/cs
Publication of CZ289955B6 publication Critical patent/CZ289955B6/cs

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
    • G01N33/544—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals the carrier being organic
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/10—Transferases (2.)
    • C12N9/1085—Transferases (2.) transferring alkyl or aryl groups other than methyl groups (2.5)
    • C12N9/1088—Glutathione transferase (2.5.1.18)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/96—Stabilising an enzyme by forming an adduct or a composition; Forming enzyme conjugates
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/573—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for enzymes or isoenzymes
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

Stabiliza n m dium pro alfa-GST v mo i obsahuje stabilizuj c mno stv neenzymov b lkoviny, nap°. sm s stejn ho mno stv bovinn ho s rov ho albuminu a hydrolyzovan elatiny, chelatizuj c inidlo a pufr, p°i em hodnota pH m dia je od 7,0 do 7,5. M dium zabra uje ztr t imunologick aktivity alfa-GST p°i skladov n vzork mo i p°i teplot -20 .degree.C a zlep uje imunoreaktivitu alfa-GST, je-li p°id no ke vzork m mo i, kter byly p°echodn skladov ny p°i teplot 2 a 8 .degree.C po dobu maxim ln 2 hodiny. Stanoven alfa-GST zahrnuje kontaktov n vzorku mo i, o et°en ho stabiliza n m m diem s nerozpustnou formou anti-alfa-GST-IgG, ur en mno stv v zan ho alfa-GST kontaktov n m s enzymem zna en²m anti-alfa-GST-IgG a m °en aktivity zna kuj c ho enzymu.\

Description

Oblast techniky
Vynález se týká stabilizačního média pro alfa-glutathion-S-transferázu (alfa-GST) v moči a způsob stanovení alfa-GST metodou enzymové imunoanalýzy s jeho použitím.
Dosavadní stav techniky
Glutathiontransferázy (GST) jsou enzymy, které se nachází ve velmi proměnlivém množství v lidských tkáních. Tyto enzymy jsou rozděleny do tří hlavních tříd, označovaných alfa, pí a mí. Vlastnosti enzymů v jednotlivých třídách jsou vzájemně poměrně odlišné.
Alfa-GST se nachází v tubulámí oblasti ledvin a je uvolňován do moči i u zdravých jedinců, jak bylo potvrzeno enzymovou imunoanalýzou a „western blot“ analýzou. (Campbell, J. H. a kol. (1961) Cancer (Philadelphia), 67, 1 608-1 613). Jakýkoliv zásah, který poškodí oblast tubulů může způsobit uvolnění alfa-GST do moči, což vede ke zvýšení jeho obsahu v moči nad normální úroveň. Zvýšení hladiny alfa-GST v moči tedy může být výsledkem poškození tubulámí oblasti ledvin. (Sherman, R. A. a kol. (1985) Uremia Investigation, 8,111-115). Práce z poslední doby ukázaly, že cis-platina způsobuje poškození tubulámí oblasti ledvin u krys „Wistar“, které je spojeno se zvýšenou aktivitou alfa-GST v moči a se snížením volného sérového kreatininu (Stojanov, M. a kol. (1994) Clin. Chem., 14, 1 125), u lidí vede akutní nekróza tubulů a imunologický šok při transplantaci ledviny k prudkému nárůstu hladiny jak alfa-GST, tak pí-GST (Sundberg, A. G. M. akol. (1964)Nephron 67, 308-316).
Možnost použití moči jako vzorku tělesné tekutiny pro detekci a stanovení hladiny enzymu, která charakterizuje stupeň poškození ledvin, zvláště určité oblasti ledvin, je velikou výhodou zvláště proti, že získávání tělního vzorku není invazivní. To je obecně velmi důležité, neboť požadavek na stanovení alfa-GST bývá u vážně nemocných pacientů, u kterých je minimalizace jakéhokoliv zbytečného traumatu velice žádoucí.
Dosud je pro stanovení alfa-GST v moči používána radioimunoanalýza, přinášející průvodní nevýhody, vyplývající z použití látek, značených radioaktivním izotopem.
Často není možné po určitou dobu, např. po několik dnů po odebrání vzorku moči, provádět požadované stanovení alfa-GST v moči. Tehdy je nutno skladovat vzorky moči při velmi nízké teplotě, zpravidla okolo -20 °C. Bylo však zjištěno, že u takto skladovaných vzorků dochází ke ztrátě imunoreaktivity a tím k nízké citlivosti imunoanalýzy. Tato ztráta imunoreaktivity je s největší pravděpodobností výsledkem denaturace enzymu při fázovém přechodu mrznutí - tání.
Z toho vyplývá potřeba nalézt médium, umožňující skladování vzorků moči pro stanovení alfa-GST imunoanalýzou při teplotách okolo -20 °C bez podstatné ztráty imunoreaktivity alfa-GST.
Podstata vynálezu
Vynález poskytuje stabilizační médium pro alfa-GST v moči, které zahrnuje neenzymovou bílkovinu, chelatizující činidlo a pufr, takže médium má pH v rozmezí od 7,0 do 7,5, přičemž médium účinně zabraňuje ztrátě imunologické aktivity alfa-GST.
Stabilizační médium podle vynálezu může být použito ke skladování vzorků moči při teplotě okolo -20 °C, aniž by došlo ke snížení imunoreaktivity. Mimoto bylo zjištěno, že stabilizační médium podle vynálezu zlepšuje imunoreaktivitu čerstvé moči, která byla před analýzou přechodně skladována při 2 až 8 °C po dobu nejvýše 2 hodin.
Neenzymová bílkovina je přechodně albumin.
Albumin může být směsí albuminu a hydrolyzovaného albuminu. Vhodným hydrolyzovaným albuminem je hydrolyzovaná želatina. Takové želatinové hydrolyzáty jsou komerčně dostupné 10 například od Sigma Chemicals (Code G-0262, vyrobeno enzymaticky).
Zvlášť výhodným albuminem (nehydrolyzovaným) je sériový albumin, zvláště albumin bovinního séra (BSA).
Výhodnou směsí sérového albuminu a hydrolyzovaného albuminu je směs stejného množství hmot./obj. bovinního sérového albuminu a hydrolyzátu želatiny.
Koncentrace neenzymové bílkoviny je výhodně v rozmezí 5 — 15 % hmotn./obj., zvláště okolo 10 % hmotn./obj.
Chelatizující činidlo je výsledně sůl alkalického kovu a EDTA.
Stabilizační médium výhodně obsahuje sůl v koncentraci mezi 4 až 5 % hmotn./obj. Zvlášť výhodnými solemi jsou soli alkalických kovů, především chlorid sodný.
Zavedení soli jako je chlorid sodný pomáhá při rozpouštění albuminu a/nebo albuminového hydrolyzátu nebo jiných použitých neenzymových bílkovin a současně žádoucím způsobem stabilizuje vlastnosti roztoku.
Ačkoliv není požadováno jakékoli teoretické vysvětlení vynálezu, je zřejmé, že sůl může působit ve smyslu minimalizace „pozadí“ testu, tzn. minimalizace nespecifického vázání.
S výhodou je označeným enzymem peroxidázam, především peroxidáza křenu selského HRP.
Jiným výhodným peroxidázovým konjugátem je biotinizovaný avidin (obsahující streptavidin) peroxidáza komplex, který může být použit s konjugátem specifická protilátka-biotin za účelem zesílení enzymové imunoanalýzy konvenčním způsobem. Při takovém enzymoimulogickém stanovení je nerozpuštěný antigen zakotven na pevné protilátce a navázán je konjugátu specifická protilátka-biotin, který je zase přivázán k biotinizovanému avidin/streptavidin-peroxidáza 40 komplexu, j ehož peroxidázová aktivita j e měřena.
Dále je přednostně k enzymové imunoanalýze použit konjugát specifické protilátky anti-alfaGST IgG-HRP ve formě, stabilní v roztoku, který zahrnuje stabilizační médium, obsahující stabilizující množství cytochromu c, sérového albuminu, povrchově aktivní látky, polyolu 45 a pufru, takže pH tohoto média je přibližně 6,5 a konečná koncentrace polyolu je mezi 5 až 15 % obj.
Cytochrom c je přednostně obsažen v množství od 0,02 do 2 % hmotn./obj. Zatímco koncentrace cytochromu c může být zvýšena nad 2 % hmotn./obj. bez podstatného ovlivnění stabilizace, 50 snížení jeho koncentrace pod 0,02 % hmotn./obj. má za následek snížení stabilizačního účinku.
Cytochromem c je zde myšlen cytochrom, ve kterém jsou mezi postranními řetězci hemové části molekuly a bílkovinou kovalentní vazby.
-2CZ 289955 B6
Stabilizující bílkovinou je přednostně sérový albumin, který je přítomen v množství 0,5 až 2 % hmotn./obj.
Zvláště vhodným sérovým albuminem je albumin bovinního séra (BSA). Zatímco množství BSA může být podobně jako v případě cytochromu c zvýšeno nad 2 % hmotn./obj. bez podstatného ovlivnění stabilizace, snížení jeho koncentrace pod 0,5 % hmotn./obj. má za následek snížení stabilizačního účinku.
Sérový albumin může být nahrazen jinou stabilizační bílkovinou, např. fetálním telecím sérem, které je bohaté na BSA.
Povrchově aktivní látkou je přednostně neionogenní tenzid vybraný z esterů polyoxyetylenu a mastných kyselin, z esterů polyoxyetylenu a kyseliny sorbové, z polyoxyetylenalkoholů a polyoxyetylenizoalkoholů, z etérů a esterů polyoxyetylenu, z polyoxyetylenu-p-t-oktylfenolů nebo kondenzátů oktylfenolu a ethylenoxidu, z kondenzátů etylenoxidu s mastnými alkoholy, polyoxyetylennonylfenolů a směsí polyalkylenových glykolů nebo jejich směsí.
Zvlášť výhodné neionogenní tenzidy obsahují: estery polyetylénu a kyseliny sorbové prodávané pod obchodní značkou „Tween“, zvláště polyoxyetylensorbitanmonolaurát nebo „Tween 20“, ale také „Tween 60“ a „Tween 80“: polyoxyetylenétery prodávané pod obchodní známkou „Triton“, jako je „Triton X100, TritonXl 14, triton XI10E“ a „Triton N101“ a „Brij“, oktylfenyletylenoxid kondenzát prodávaný pod obchodní známkou, „Nonidet P40, kondenzáty etylenoxidu a mastných alkoholů prodávané pod obchodní známkou „Lubrol“, zvláště „Lubrol PX“ a směs 1 hmotn. dílu polyetylenglykolu a 4 hmotn. dílů polypropylenglykolu prodávaná pod obchodní známkou „Synperonic F108“.
Mimořádně výhodnou povrchově aktivní látkou je „Synperonic F108“.
Polyol stabilizuje interakce bílkovina-bílkovina. Výhodnými polyoly jsou glukózám glycerol, mannitol, sorbitol a sacharóza nebo jejich směsi. Zvláště výhodným polyolem je glycerol v celkové koncentraci okolo 10 % obj.
Zvláště výhodným pufrem je fosforečná sůl.
Stabilizační médium pro anti-alfa-GST IgG-HRP konjugát může také obsahovat další aditiva v závislosti na povaze konjugátu, např. různá protimikrobiální a konverzační činidla, inhibitory proteinázy, činidla, která stabilizují vzájemné reakce bílkovina-bílkovina, antioxidanty a barviva, která usnadňují identifikaci.
Vhodná konverzační činidla zahrnují konzervovadla s obsahem merkurothiolátu, známého také jako thiomersal nebo thiomerosal.
Vhodným inhibitorem proteinázy je například inhibitor trypsinu, např. aprotinin.
Vhodným barvivém je karmínové barvivo.
-3CZ 289955 B6
Příklady provedení vynálezu
Vynález je dále ilustrován následujícími příklady.
Nejvýhodnější způsob provedení vynálezu
Příklad 1
Stabilizační médium pro alfa-GST v moči složek:
složka
HEPES
Na2EDTA chlorid sodný BSA hydrolyzát želatiny aprotinin thiomersal azid sodný hodnotou pH 7,3 bylo připraveno z následujících
0,5 M mM
4,5 % hmotn./obj.
% hmotn./obj.
% hmotn./obj.
g/ml
0,01 % hmotn./obj.
0,05 % hmotn./obj.
Všechny výše uvedené složky byly vneseny do deionizované vody o objemu 80 % konečného 15 množství a pH bylo upraveno hydroxidem sodným na hodnotu 7,3. Roztok byl doplněn deionizovanou vodou na konečný objem. V případě, kdy je přidáván BSA a hydrolyzát želatiny je důležité, aby tyto látky byly vnášeny odděleně a je třeba věnovat pozornost tomu, aby první složka byla před přídavkem druhé úplně rozpuštěna.
Takto připravené stabilizační médium se použije pro stabilizaci alfa-GST v moči přidáním jednoho dílu média ke čtyřem dílům moči (1/5 zředění), mírně se zamíchá a zmrazí se při teplotě -20 °C nebo se před analýzou skladuje přechodně při 2 až 8 °C maximálně 2 hodiny.
Příklad 2
Stabilizační médium pro anti-alfa-GST IgG-HRP konjugát o hodnotě pH 6,5 bylo připraveno z následujících složek:
složka množství
NaCl 8,000 g
NaH2PO4.2H2O 0,260 g
Na2HPO4.2H2O 1,425 g
cytochrom c 0,250 g
Synperonic F108 10,000 g
BSA 10,000 g
fetální telecí sérum 25,000 ml
thiomersal 0,100 g
gentamicin 0,100 g
karmínové barvivo 0,930 g
koncentrovaná HC1 (nastavení pH) proměnlivé
deioniz. voda (doplnění do 1000 ml) proměnlivé
-4CZ 289955 B6
700 ml deionizované vody bylo vneseno do skleněného zásobníku a přidán NaCl, NaH2PO4.2H2O, Na2HPO4.2H2O a thiomersal. Směs byla míchána do rozpouštění všech složek. Potom byl k roztoku přidán Synperonic F108 s následujícím mícháním do rozpuštění tenzidu. Poté bylo zkontrolováno pH roztoku a 5M roztokem HC1 upraveno na hodnotu 6,5. K takto 5 upravenému roztoku byl přidán BSA, po jeho rozpuštění dále fetální telecí sérum s následujícím mícháním až do jeho rozpuštění. Poté byl přidán gentamicin, cytochrom c, karmínové barvivo a roztok byl míchán do rozpuštění těchto tří složek. Opět bylo zkontrolováno pH roztoku a popřípadě upraveno na hodnotu 6,5. Objem roztoku byl doplněn na 1 000 ml a byl zfiltrován přes 0,2 pm filtr, čímž byl připraven ke skladování. Před použitím se k devíti dílům směsi přidá ιό jeden díl glycerolu.
Příklad 3
Stabilita anti-alfa-GST IgG-HRP konjugátu, která je průběžně k dispozici v lyofilizované formě v soupravě pro enzymovou imunoanalýzu fy Biotrin Intemational Ltd. pod obchodní značkou „Nephkit“, byla zkoumána se stabilizačním médiem, připraveným podle příkladu 2. „Nephkit“ test zahrnuje způsob kvantitativního určení alfa-GST v moči a může být průkazným pro poškození tubulámí oblasti ledviny.
Byla zjištěna 100% stabilita i u desetinásobné koncentrace když byl konjugát skladován po hodin při pokojové teplotě ve stabilizačním médiu podle příkladu 2.
Příklad 4
Použití stabilizačního média podle příkladu 1 pro stabilizaci alfa-GST v moči při skladování při -20 °C.
Bylo analyzováno devět vzorků moči (samčí a samičí) se zaměřením na obsah alfa-GST pomocí soupravy „Nephkit“ pro enzymovou imunoanalýzu, produkované fy Biotrin Intemational Ltd, Mount Merrion, County Dublin, Irsko. Výsledky jsou uvedeny ve sloupci 2 tabulky 1.
Poté byly vzorky rozděleny, k jedné sérii bylo přidáno stabilizační médium, připravené podle 35 příkladu 1 (-20 °C (SM)), ke druhé sérii stabilizační médium přidáno nebylo (-20 °C).
Vzorky byly temperovány při -20 °C po dobu tří dnů, potom byly analyzovány pomocí testu „Nephkit“.
Bylo zjištěno že hodnoty, získané u vzorků, skladovaných při teplotě -20 °C ve stabilizačním médiu byly v těsné korekci s hodnotami původních čerstvých vzorků (4 °C). Naopak všechny vzorky, zmražené bez stabilizačního média, vykazovaly úbytek alfa-GST imunoreaktivity. Jak bylo uvedeno výše, tato ztráta imunoreaktivity je s největší pravděpodobností výsledkem denaturace, indukované přechodem mrznutí-tání.
-5CZ 289955 B6
Tabulka 1
Příklad 5
Stabilizace vzorků moči, obohacených alfa-GST
Dva vzorky moči A a B byly obohaceny do pěti různých úrovní alfa-GST (10,25,50,100 a 500 ng/ml) a potom skladovány v přítomnosti stabilizačního média podle příkladu 1 dva dny při teplotě 4 °C a -20 °C. Výsledky jsou uvedeny v tabulce 2 a 3.
Z obsahu tabulek 2 a 3 vyplývá, že přítomnost stabilizačního média chrání alfa-GST před ztrátou 15 imunologické aktivity, což prokázala použitá enzymová imunoanalýza.
Tabulka 2
vzorek teplota skladování 4 °C alfa-GST (ng/ml) teplota skladov. -20 °C (SM) alfa-GST (ng/ml)
A: 500 191,1 507,8
A: 100 57,22 103,2
A: 50 29,48 47,11
A: 25 15,35 25,9
A: 10 7,71 11,82
Tabulka 3
vzorek teplota skladování 4 °C alfa-GST (ng/ml) teplota skladov. -20 °C (SM) alfa-GST (ng/ml)
B: 500 49,30 467,8
B: 100 37,30 88,95
B: 50 17,52 45,23
B: 25 8,63 21,12
B: 10 3,40 8,26
Příklad 6
Byly připraveny dva vzorky označené C 200 a D 200, obsahující 200 ng/ml alfa-GST a přídavek stabilizačního média podle příkladu 1.
-6CZ 289955 B6
Oba vzorky byly potom rozděleny a takto získané části vzorků byly skladovány při teplotě 4 °C a-20 °C.
Po skladování po dva dny byl každý ze vzorků testován při různém zředění (1/40 až 1/320) rozpouštědlem, používaným v „Nephkit“ testu podle příkladu 4. Výsledky jsou uvedeny v tabulkách 4 a 5.
Z výsledků uvedených v tabulkách 4 a 5 vyplývá, že stupeň zředění vzorku nemá vliv na stanoveni alfa-GST a že skladování při teplotě -20 °C je překvapivě lepší než skladování při 4 °C.
Tabulka 4
vzorek teplota skladování 4 °C alfa-GST (ng/ml) teplota skladov. -20 °C (SM) alfa-GST (ng/ml)
C 200 (1/40) 106 175
(1/80) 109 185
(1/160) 104 188
(1/320) 111 180
Tabulka 5
vzorek teplota skladování 4 °C alfa-GST (ng/ml) teplota skladov. -20 °C (SM) alfa-GST (ng/ml)
D 200 (1/40) 141 183
(1/80) 141 183
(1/160) 134 180
(1/320) 128 187
PATENTOVÉ NÁROKY

Claims (17)

1. Stabilizační médium pro alfa-GST v moči, vyznačující se tím, že obsahuje stabilizující množství neenzymové bílkoviny, chelatizující činidlo a pufr, má hodnotu pH v rozmezí od 7,0 do 7,5, přičemž médium zabraňuje ztrátě imunologické aktivity alfa-GST.
2. Stabilizační médium podle nároku 1, vyznačující se tím, že neenzymovou bílkovinou je albumin.
3. Stabilizační médium podle nároku 1 nebo 2, vyznačující se tím, že neenzymovou bílkovinou je směs albuminu a hydrolyzovaného albuminu.
4. Stabilizační médium podle nároku 3, vyznačující se tím, že směs je směsí sérového albuminu a hydrolyzovaného albuminu.
5. Stabilizační médium podle nároku 3 nebo 4, v y z n a č u j í c í se t í m, že směs je směsí stejného množství hmotn,/obj. bovinního sérového albuminu a hydrolyzátu želatiny.
6. Stabilizační médium podle jednoho z předchozích nároků 1 až 5, vyznačující se t í m , že koncentrace neenzymové bílkoviny je okolo 10 % hmotn./obj.
7. Stabilizační médium podle jednoho z předchozích nároků 1 až 6, vyznačující se 5 t í m, že chelatizující činidlo je sůl alkalického kovu a EDTA.
8. Stabilizační médium podle nároku 7, vyznačující se tím, že koncentrace soli je 4 až 5 % hmotn./obj.
10 9. Stabilizační médium podle nároku 8, vyznačující setím, že sůl je solí alkalického kovu.
10. Stabilizační médium podle nároku 8 nebo 9, vyznačující se tím, že solí je chlorid sodný.
11. Stabilizační médium podle jednoho z předcházej ících nároků lažlO, vyznačující se t í m, že dále obsahuje inhibitor proteinázy.
12. Stabilizační médium podle jednoho z předcházejících nároků lažll,vyznačující se 20 t í m , že pufr je obojetný pufr.
13. Stabilizační médium podle nároku 12, vyznačující se tím, že pufrem je HEPES.
14. Stabilizační médium podle jednoho z předcházejících nároků lažl3, vyznačující se 25 t í m , že pH pufru má hodnotu 7,3.
15. Způsob kvantitativního stanovení alfa-GST v moči, který zahrnuje kontaktování vzorku moči s nerozpustnou formou anti-alfa-GST IgG, kde vzorek moči byl ošetřen stabilizačním médiem podle jednoho z nároků lažl 4, vyznačující se tím, že se stanovuje množství
30 alfa-GST, vázaného k anti-alfa-GST IgG kontaktováním vázaného alfa-GST s enzymem značeným anti-alfa-GST IgG, a měřením aktivity značkujícího enzymu.
16. Způsob podle nároku 15, vyznačující se tím, že značkujícím enzymem je peroxidáza.
17. Způsob podle nároku 16, vyznačující se tím, že peroxidázou je peroxidáza křenu selského.
18. Způsob podle nároku 17, vyznačující se tím, že konjugát peroxidáza-IgG je ve 40 formě, stabilní v roztoku, stabilizační médium zahrnuje stabilizující množství cytochromu c a stabilizující množství sérového albuminu, povrchově aktivní látku, polyol a pufr, má hodnotu pH okolo 6,5 a konečná koncentrace polyolu je 5 až 15 % obj.
CZ19971173A 1994-10-17 1994-10-17 Stabilizační médium pro alfa-GST v moči a způsob jeho stanovení metodou enzymové imunoanalýzy CZ289955B6 (cs)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CZ19971173A CZ289955B6 (cs) 1994-10-17 1994-10-17 Stabilizační médium pro alfa-GST v moči a způsob jeho stanovení metodou enzymové imunoanalýzy

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CZ19971173A CZ289955B6 (cs) 1994-10-17 1994-10-17 Stabilizační médium pro alfa-GST v moči a způsob jeho stanovení metodou enzymové imunoanalýzy
PCT/IE1994/000050 WO1996012191A1 (en) 1994-10-17 1994-10-17 STABILISING MEDIUM FOR αGST IN URINE FOR USE IN AN ENZYME IMMUNOASSAY

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CZ117397A3 CZ117397A3 (en) 1997-09-17
CZ289955B6 true CZ289955B6 (cs) 2002-05-15

Family

ID=11042488

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CZ19971173A CZ289955B6 (cs) 1994-10-17 1994-10-17 Stabilizační médium pro alfa-GST v moči a způsob jeho stanovení metodou enzymové imunoanalýzy

Country Status (14)

Country Link
US (1) US6071706A (cs)
EP (1) EP0787300B1 (cs)
JP (1) JPH10507269A (cs)
KR (1) KR970706497A (cs)
AU (1) AU690144B2 (cs)
CZ (1) CZ289955B6 (cs)
DE (1) DE69415560T2 (cs)
FI (1) FI971580A (cs)
HU (1) HUT78059A (cs)
NO (1) NO971641D0 (cs)
NZ (1) NZ274245A (cs)
PL (1) PL176625B1 (cs)
RU (1) RU2142136C1 (cs)
WO (1) WO1996012191A1 (cs)

Families Citing this family (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1998029745A1 (fr) * 1996-12-26 1998-07-09 Fuji Yakuhin Kogyo Kabushiki Kaisha Agent pour traiter les echantillons d'urine
US6977140B1 (en) 1998-09-29 2005-12-20 Organ Recovery Systems, Inc. Method for maintaining and/or restoring viability of organs
US6492103B1 (en) 2000-01-31 2002-12-10 Organ Recovery Systems, Inc. System for organ and tissue preservation and hypothermic blood substitution
GB0023057D0 (en) 2000-09-20 2000-11-01 Randox Lab Ltd Liquid reagent
CN100434515C (zh) * 2005-12-23 2008-11-19 上海复星长征医学科学有限公司 酶复合稳定剂
WO2009041577A1 (ja) 2007-09-27 2009-04-02 Niigata University 尿中タンパク質定量用の尿前処理剤、尿前処理方法、及び尿中タンパク質定量方法。
KR20140072041A (ko) * 2011-08-11 2014-06-12 오츠카 세이야쿠 가부시키가이샤 단백질을 포함하는 생체 시료의 전처리 방법

Family Cites Families (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4273756A (en) * 1978-07-28 1981-06-16 Abbott Laboratories Immunoassay for class specific antibodies
JPH025763A (ja) * 1989-04-10 1990-01-10 Kayaba Ind Co Ltd 可変型油圧モータ
US5278316A (en) * 1989-06-29 1994-01-11 Warner-Lambert Company N-substituted cycloalkyl and polycycloalkyl alpha-substituted Trp-Phe- and phenethylamine derivatives
JPH0425763A (ja) * 1990-05-21 1992-01-29 Maruko Seiyaku Kk グルタチオンＳ―トランスフェラーゼπの定量方法および診断のための試薬
US5264419A (en) * 1990-08-31 1993-11-23 Warner-Lambert Company N-substituted cycloalkyl and polycycloalkyl α-substituted TRP derivatives
US5217868A (en) * 1992-05-01 1993-06-08 Syncor Limited Measurement of an enzyme marker as an aid to diagnosis of liver transplant rejection
JP3029376B2 (ja) * 1994-07-15 2000-04-04 株式会社東芝 プライオリティエンコ−ダ
US5817497A (en) * 1996-11-26 1998-10-06 Incyte Pharmaceuticals Glutathione s-transferase
US5874248A (en) * 1997-08-21 1999-02-23 Incyte Pharmaceuticals, Inc. Glutathione S-transferase homolog

Also Published As

Publication number Publication date
EP0787300A1 (en) 1997-08-06
PL176625B1 (pl) 1999-07-30
PL319969A1 (en) 1997-09-01
CZ117397A3 (en) 1997-09-17
DE69415560T2 (de) 1999-06-24
RU2142136C1 (ru) 1999-11-27
HUT78059A (hu) 1999-07-28
AU690144B2 (en) 1998-04-23
NO971641L (no) 1997-04-10
EP0787300B1 (en) 1998-12-23
AU7821994A (en) 1996-05-06
JPH10507269A (ja) 1998-07-14
WO1996012191A1 (en) 1996-04-25
NZ274245A (en) 1998-11-25
US6071706A (en) 2000-06-06
DE69415560D1 (de) 1999-02-04
KR970706497A (ko) 1997-11-03
NO971641D0 (no) 1997-04-10
FI971580A0 (fi) 1997-04-15
FI971580A (fi) 1997-04-15

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Upadhya et al. Evidence of a role for matrix metalloproteinases in cold preservation injury of the liver in humans and in the rat
CN101828112B (zh) 血红素蛋白的稳定化方法
GB2275774A (en) Stabilized composition of troponin
CZ289955B6 (cs) Stabilizační médium pro alfa-GST v moči a způsob jeho stanovení metodou enzymové imunoanalýzy
US4448882A (en) Stabilized peroxidase compositions
JPH10160734A (ja) イムノアッセイ用較正／対照用配合物
Butera et al. Sex differences in the subunits of glutathione-S-transferase isoenzyme from rat and human kidney
Burcham et al. Diminished susceptibility to proteolysis after protein modification by the lipid peroxidation product malondialdehyde: inhibitory role for crosslinked and noncrosslinked adducted proteins
EP2031390B1 (en) Stabilizing agent and blocking agent
US5863742A (en) Inhibition of protease activity of human whole blood cell lysates
JP2003014768A (ja) ヘムタンパク質の安定化方法および保存溶液
JPH11218533A (ja) ヘモグロビン試料の安定化
Lorenz et al. Problems in the assay of histamine release by gelatin: o-Phthaldialdehyde-induced fluorescence, inhibition of histamine methyltransferase and H 1-receptor antagonism by Haemaccel
Yamamoto et al. Probable involvement of cathepsin D in the degradation of β2-microglobulin in acidic urine
JP3337818B2 (ja) 非特異的吸着防止剤
JP2003194825A (ja) ヘムタンパク質の安定化方法およびこれに用いる保存溶液
CA2202773A1 (en) Stabilising medium for .alpha.gst in urine for use in an enzyme immunoassay
EP0110722B1 (en) A heat-stable aqueous solution of human urine kallikrein
de Lamirande et al. Effects of transglutaminase substrates and inhibitors on the motility of demembranated reactivated spermatozoa
JPH09224942A (ja) ヒトヘモグロビンの安定化方法
CN1164279A (zh) 用于酶免疫测定检测尿中的αGST的稳定化介质
JPH1160600A (ja) 尿中ミオグロビンの安定化方法、安定化剤およびこれを応用した免疫学的測定方法
Lampi et al. Association of calpain with insoluble pellet of rat lens
SHIKIMI et al. Human urinary trypsin inhibitor (urinastatin)-like substance in mouse kidney and its relationships to mouse kidney kallikrein
Backman et al. The excretion of carbonic anhydrase isozymes CAI and CAII in the urine of apparently healthy subjects and in patients with kidney disease

Legal Events

Date Code Title Description
PD00 Pending as of 2000-06-30 in czech republic
MM4A Patent lapsed due to non-payment of fee

Effective date: 20021017

MM4A Patent lapsed due to non-payment of fee

Effective date: 20041017