CZ285471B6 - Způsob výroby gama linolenové kyseliny účinkem delta-6 Desaturázy - Google Patents
Způsob výroby gama linolenové kyseliny účinkem delta-6 Desaturázy Download PDFInfo
- Publication number
- CZ285471B6 CZ285471B6 CZ94817A CZ81794A CZ285471B6 CZ 285471 B6 CZ285471 B6 CZ 285471B6 CZ 94817 A CZ94817 A CZ 94817A CZ 81794 A CZ81794 A CZ 81794A CZ 285471 B6 CZ285471 B6 CZ 285471B6
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- desaturase
- acid
- plant
- gla
- nucleic acid
- Prior art date
Links
- VZCCETWTMQHEPK-UHFFFAOYSA-N gamma-Linolensaeure Natural products CCCCCC=CCC=CCC=CCCCCC(O)=O VZCCETWTMQHEPK-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 67
- VZCCETWTMQHEPK-QNEBEIHSSA-N gamma-linolenic acid Chemical compound CCCCC\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCCC(O)=O VZCCETWTMQHEPK-QNEBEIHSSA-N 0.000 title claims abstract description 67
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 44
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 title claims abstract description 37
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 title claims abstract description 36
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 title claims abstract description 36
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 title claims abstract description 15
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 title claims abstract description 8
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 title claims abstract description 8
- 229940098330 gamma linoleic acid Drugs 0.000 title claims abstract description 6
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 title claims description 12
- 239000002253 acid Substances 0.000 title claims description 10
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title abstract description 6
- 235000020664 gamma-linolenic acid Nutrition 0.000 claims abstract description 66
- 229960002733 gamolenic acid Drugs 0.000 claims abstract description 61
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims abstract description 23
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims abstract description 14
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims abstract description 14
- 230000001131 transforming effect Effects 0.000 claims abstract description 5
- OYHQOLUKZRVURQ-NTGFUMLPSA-N (9Z,12Z)-9,10,12,13-tetratritiooctadeca-9,12-dienoic acid Chemical compound C(CCCCCCC\C(=C(/C\C(=C(/CCCCC)\[3H])\[3H])\[3H])\[3H])(=O)O OYHQOLUKZRVURQ-NTGFUMLPSA-N 0.000 claims description 7
- LGHXTTIAZFVCCU-SSVNFBSYSA-N (2E,4E,6E,8E)-octadeca-2,4,6,8-tetraenoic acid Chemical compound CCCCCCCCC\C=C\C=C\C=C\C=C\C(O)=O LGHXTTIAZFVCCU-SSVNFBSYSA-N 0.000 claims description 3
- OYHQOLUKZRVURQ-HZJYTTRNSA-N Linoleic acid Chemical compound CCCCC\C=C/C\C=C/CCCCCCCC(O)=O OYHQOLUKZRVURQ-HZJYTTRNSA-N 0.000 abstract description 26
- 235000020778 linoleic acid Nutrition 0.000 abstract description 26
- OYHQOLUKZRVURQ-IXWMQOLASA-N linoleic acid Natural products CCCCC\C=C/C\C=C\CCCCCCCC(O)=O OYHQOLUKZRVURQ-IXWMQOLASA-N 0.000 abstract description 23
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 51
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 46
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 39
- 241000192542 Anabaena Species 0.000 description 30
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 29
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 25
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 22
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 21
- 150000004665 fatty acids Chemical group 0.000 description 21
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 19
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 19
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 19
- 238000001030 gas--liquid chromatography Methods 0.000 description 18
- 108700026244 Open Reading Frames Proteins 0.000 description 17
- 244000061176 Nicotiana tabacum Species 0.000 description 13
- 235000002637 Nicotiana tabacum Nutrition 0.000 description 13
- 241000192584 Synechocystis Species 0.000 description 13
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 13
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 12
- 241000192707 Synechococcus Species 0.000 description 11
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 10
- 235000019387 fatty acid methyl ester Nutrition 0.000 description 10
- 230000006870 function Effects 0.000 description 10
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 9
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 9
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 9
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 8
- 241000192700 Cyanobacteria Species 0.000 description 7
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 6
- 244000020551 Helianthus annuus Species 0.000 description 6
- 235000003222 Helianthus annuus Nutrition 0.000 description 6
- 101000833492 Homo sapiens Jouberin Proteins 0.000 description 6
- 101000651236 Homo sapiens NCK-interacting protein with SH3 domain Proteins 0.000 description 6
- 102100024407 Jouberin Human genes 0.000 description 6
- VKOBVWXKNCXXDE-UHFFFAOYSA-N icosanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O VKOBVWXKNCXXDE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 6
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 5
- NSTPXGARCQOSAU-VIFPVBQESA-N N-formyl-L-phenylalanine Chemical compound O=CN[C@H](C(=O)O)CC1=CC=CC=C1 NSTPXGARCQOSAU-VIFPVBQESA-N 0.000 description 5
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 5
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 5
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 5
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 5
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 5
- 235000017060 Arachis glabrata Nutrition 0.000 description 4
- 244000105624 Arachis hypogaea Species 0.000 description 4
- 235000010777 Arachis hypogaea Nutrition 0.000 description 4
- 235000018262 Arachis monticola Nutrition 0.000 description 4
- 240000002791 Brassica napus Species 0.000 description 4
- 235000006008 Brassica napus var napus Nutrition 0.000 description 4
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 description 4
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 4
- 229930193140 Neomycin Natural products 0.000 description 4
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 4
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 4
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 4
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 4
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 4
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 4
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 4
- 238000004817 gas chromatography Methods 0.000 description 4
- 108010050848 glycylleucine Proteins 0.000 description 4
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 4
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 4
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 4
- 229960004927 neomycin Drugs 0.000 description 4
- 235000020232 peanut Nutrition 0.000 description 4
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 4
- 241000589155 Agrobacterium tumefaciens Species 0.000 description 3
- 241000701489 Cauliflower mosaic virus Species 0.000 description 3
- 241001464430 Cyanobacterium Species 0.000 description 3
- VAXIVIPMCTYSHI-YUMQZZPRSA-N Gly-His-Asp Chemical compound C1=C(NC=N1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O)NC(=O)CN VAXIVIPMCTYSHI-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 3
- MLTRLIITQPXHBJ-BQBZGAKWSA-N Leu-Asn Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(N)=O MLTRLIITQPXHBJ-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 3
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 3
- 108010047857 aspartylglycine Proteins 0.000 description 3
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 3
- 210000003763 chloroplast Anatomy 0.000 description 3
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 3
- 239000013601 cosmid vector Substances 0.000 description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 description 3
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 3
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 3
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 3
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 3
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 3
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 3
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 3
- 241000894007 species Species 0.000 description 3
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 3
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 3
- WRIDQFICGBMAFQ-UHFFFAOYSA-N (E)-8-Octadecenoic acid Natural products CCCCCCCCCC=CCCCCCCC(O)=O WRIDQFICGBMAFQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LQJBNNIYVWPHFW-UHFFFAOYSA-N 20:1omega9c fatty acid Natural products CCCCCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O LQJBNNIYVWPHFW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QSBYPNXLFMSGKH-UHFFFAOYSA-N 9-Heptadecensaeure Natural products CCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O QSBYPNXLFMSGKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000589158 Agrobacterium Species 0.000 description 2
- NWVVKQZOVSTDBQ-CIUDSAMLSA-N Ala-Glu-Arg Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O NWVVKQZOVSTDBQ-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 2
- YCRAFFCYWOUEOF-DLOVCJGASA-N Ala-Phe-Ser Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)C)CC1=CC=CC=C1 YCRAFFCYWOUEOF-DLOVCJGASA-N 0.000 description 2
- JCROZIFVIYMXHM-GUBZILKMSA-N Arg-Met-Ser Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N JCROZIFVIYMXHM-GUBZILKMSA-N 0.000 description 2
- FVKHEKVYFTZWDX-GHCJXIJMSA-N Asn-Ile-Cys Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N FVKHEKVYFTZWDX-GHCJXIJMSA-N 0.000 description 2
- BLQBMRNMBAYREH-UWJYBYFXSA-N Asp-Ala-Tyr Chemical compound N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(C=C1)O)C(=O)O BLQBMRNMBAYREH-UWJYBYFXSA-N 0.000 description 2
- JHFNSBBHKSZXKB-VKHMYHEASA-N Asp-Gly Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)NCC(O)=O JHFNSBBHKSZXKB-VKHMYHEASA-N 0.000 description 2
- 201000001320 Atherosclerosis Diseases 0.000 description 2
- JAHCWGSVNZXHRR-SVSWQMSJSA-N Cys-Thr-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CS)N JAHCWGSVNZXHRR-SVSWQMSJSA-N 0.000 description 2
- 244000000626 Daucus carota Species 0.000 description 2
- 235000002767 Daucus carota Nutrition 0.000 description 2
- 101710129170 Extensin Proteins 0.000 description 2
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 2
- AFODTOLGSZQDSL-PEFMBERDSA-N Glu-Asn-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N AFODTOLGSZQDSL-PEFMBERDSA-N 0.000 description 2
- HKTRDWYCAUTRRL-YUMQZZPRSA-N Glu-His Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CN=CN1 HKTRDWYCAUTRRL-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 2
- QNJNPKSWAHPYGI-JYJNAYRXSA-N Glu-Phe-Leu Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 QNJNPKSWAHPYGI-JYJNAYRXSA-N 0.000 description 2
- JWNZHMSRZXXGTM-XKBZYTNZSA-N Glu-Ser-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O JWNZHMSRZXXGTM-XKBZYTNZSA-N 0.000 description 2
- XVYKMNXXJXQKME-XEGUGMAKSA-N Gly-Ile-Tyr Chemical compound NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 XVYKMNXXJXQKME-XEGUGMAKSA-N 0.000 description 2
- NNCSJUBVFBDDLC-YUMQZZPRSA-N Gly-Leu-Ser Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O NNCSJUBVFBDDLC-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 2
- VBOBNHSVQKKTOT-YUMQZZPRSA-N Gly-Lys-Ala Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O VBOBNHSVQKKTOT-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RGPWUJOMKFYFSR-QWRGUYRKSA-N His-Gly-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O RGPWUJOMKFYFSR-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 2
- VJJSDSNFXCWCEJ-DJFWLOJKSA-N His-Ile-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O VJJSDSNFXCWCEJ-DJFWLOJKSA-N 0.000 description 2
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QTUSJASXLGLJSR-OSUNSFLBSA-N Ile-Arg-Thr Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)O)N QTUSJASXLGLJSR-OSUNSFLBSA-N 0.000 description 2
- IDMNOFVUXYYZPF-DKIMLUQUSA-N Ile-Lys-Phe Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)O)N IDMNOFVUXYYZPF-DKIMLUQUSA-N 0.000 description 2
- RCFDOSNHHZGBOY-UHFFFAOYSA-N L-isoleucyl-L-alanine Natural products CCC(C)C(N)C(=O)NC(C)C(O)=O RCFDOSNHHZGBOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LHSGPCFBGJHPCY-UHFFFAOYSA-N L-leucine-L-tyrosine Natural products CC(C)CC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 LHSGPCFBGJHPCY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QPRQGENIBFLVEB-BJDJZHNGSA-N Leu-Ala-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O QPRQGENIBFLVEB-BJDJZHNGSA-N 0.000 description 2
- YOKVEHGYYQEQOP-QWRGUYRKSA-N Leu-Leu-Gly Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(O)=O YOKVEHGYYQEQOP-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 2
- ZDBMWELMUCLUPL-QEJZJMRPSA-N Leu-Phe-Ala Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 ZDBMWELMUCLUPL-QEJZJMRPSA-N 0.000 description 2
- FPFOYSCDUWTZBF-IHPCNDPISA-N Leu-Trp-Leu Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](NC(=O)[C@@H]([NH3+])CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C([O-])=O)=CNC2=C1 FPFOYSCDUWTZBF-IHPCNDPISA-N 0.000 description 2
- 108010037138 Linoleoyl-CoA Desaturase Proteins 0.000 description 2
- GAOJCVKPIGHTGO-UWVGGRQHSA-N Lys-Arg-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(O)=O GAOJCVKPIGHTGO-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 2
- NKKFVJRLCCUJNA-QWRGUYRKSA-N Lys-Gly-Lys Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN NKKFVJRLCCUJNA-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 2
- XDGFFEZAZHRZFR-RHYQMDGZSA-N Met-Leu-Thr Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O XDGFFEZAZHRZFR-RHYQMDGZSA-N 0.000 description 2
- BQVUABVGYYSDCJ-UHFFFAOYSA-N Nalpha-L-Leucyl-L-tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(NC(=O)C(N)CC(C)C)C(O)=O)=CNC2=C1 BQVUABVGYYSDCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 239000005642 Oleic acid Substances 0.000 description 2
- ZQPPMHVWECSIRJ-UHFFFAOYSA-N Oleic acid Natural products CCCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O ZQPPMHVWECSIRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CYZBFPYMSJGBRL-DRZSPHRISA-N Phe-Ala-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O CYZBFPYMSJGBRL-DRZSPHRISA-N 0.000 description 2
- BKWJQWJPZMUWEG-LFSVMHDDSA-N Phe-Ala-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 BKWJQWJPZMUWEG-LFSVMHDDSA-N 0.000 description 2
- MMPBPRXOFJNCCN-ZEWNOJEFSA-N Phe-Tyr-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O MMPBPRXOFJNCCN-ZEWNOJEFSA-N 0.000 description 2
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 2
- AXOHAHIUJHCLQR-IHRRRGAJSA-N Ser-Met-Tyr Chemical compound CSCC[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(C=C1)O)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CO)N AXOHAHIUJHCLQR-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 2
- UPLYXVPQLJVWMM-KKUMJFAQSA-N Ser-Phe-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O UPLYXVPQLJVWMM-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 2
- 235000021355 Stearic acid Nutrition 0.000 description 2
- DFTCYYILCSQGIZ-GCJQMDKQSA-N Thr-Ala-Asn Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O DFTCYYILCSQGIZ-GCJQMDKQSA-N 0.000 description 2
- XSTGOZBBXFKGHA-YJRXYDGGSA-N Thr-His-His Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)N[C@@H](CC2=CN=CN2)C(=O)O)N)O XSTGOZBBXFKGHA-YJRXYDGGSA-N 0.000 description 2
- VGYVVSQFSSKZRJ-OEAJRASXSA-N Thr-Phe-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)[C@H](O)C)CC1=CC=CC=C1 VGYVVSQFSSKZRJ-OEAJRASXSA-N 0.000 description 2
- PELIQFPESHBTMA-WLTAIBSBSA-N Thr-Tyr-Gly Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(=O)NCC(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 PELIQFPESHBTMA-WLTAIBSBSA-N 0.000 description 2
- VMSSYINFMOFLJM-KJEVXHAQSA-N Thr-Tyr-Met Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(C=C1)O)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)O)N)O VMSSYINFMOFLJM-KJEVXHAQSA-N 0.000 description 2
- RPVDDQYNBOVWLR-HOCLYGCPSA-N Trp-Gly-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O RPVDDQYNBOVWLR-HOCLYGCPSA-N 0.000 description 2
- 241000251539 Vertebrata <Metazoa> Species 0.000 description 2
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 2
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 2
- 108010070944 alanylhistidine Proteins 0.000 description 2
- DTOSIQBPPRVQHS-PDBXOOCHSA-N alpha-linolenic acid Chemical compound CC\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCCCCCC(O)=O DTOSIQBPPRVQHS-PDBXOOCHSA-N 0.000 description 2
- YZXBAPSDXZZRGB-DOFZRALJSA-N arachidonic acid Chemical compound CCCCC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCC(O)=O YZXBAPSDXZZRGB-DOFZRALJSA-N 0.000 description 2
- 108010069205 aspartyl-phenylalanine Proteins 0.000 description 2
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 2
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 2
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 2
- 230000000378 dietary effect Effects 0.000 description 2
- FSXRLASFHBWESK-UHFFFAOYSA-N dipeptide phenylalanyl-tyrosine Natural products C=1C=C(O)C=CC=1CC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 FSXRLASFHBWESK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 2
- 210000002472 endoplasmic reticulum Anatomy 0.000 description 2
- 235000004626 essential fatty acids Nutrition 0.000 description 2
- 238000010230 functional analysis Methods 0.000 description 2
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 2
- 108010090037 glycyl-alanyl-isoleucine Proteins 0.000 description 2
- 108010028295 histidylhistidine Proteins 0.000 description 2
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 2
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 2
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 2
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 2
- QXJSBBXBKPUZAA-UHFFFAOYSA-N isooleic acid Natural products CCCCCCCC=CCCCCCCCCC(O)=O QXJSBBXBKPUZAA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010012058 leucyltyrosine Proteins 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- QIQXTHQIDYTFRH-UHFFFAOYSA-N octadecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O QIQXTHQIDYTFRH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OQCDKBAXFALNLD-UHFFFAOYSA-N octadecanoic acid Natural products CCCCCCCC(C)CCCCCCCCC(O)=O OQCDKBAXFALNLD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N oleic acid Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(O)=O ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N 0.000 description 2
- 229940094443 oxytocics prostaglandins Drugs 0.000 description 2
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 2
- 235000020777 polyunsaturated fatty acids Nutrition 0.000 description 2
- 230000000644 propagated effect Effects 0.000 description 2
- 150000003180 prostaglandins Chemical class 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 230000001172 regenerating effect Effects 0.000 description 2
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 2
- 239000013605 shuttle vector Substances 0.000 description 2
- 239000008117 stearic acid Substances 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 2
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 2
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 2
- 238000011426 transformation method Methods 0.000 description 2
- 108010020532 tyrosyl-proline Proteins 0.000 description 2
- 241001515965 unidentified phage Species 0.000 description 2
- 235000021122 unsaturated fatty acids Nutrition 0.000 description 2
- 150000004670 unsaturated fatty acids Chemical class 0.000 description 2
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 2
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 1
- 102100034544 Acyl-CoA 6-desaturase Human genes 0.000 description 1
- LGQPPBQRUBVTIF-JBDRJPRFSA-N Ala-Ala-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O LGQPPBQRUBVTIF-JBDRJPRFSA-N 0.000 description 1
- HGRBNYQIMKTUNT-XVYDVKMFSA-N Ala-Asn-His Chemical compound C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)O)N HGRBNYQIMKTUNT-XVYDVKMFSA-N 0.000 description 1
- HQJKCXHQNUCKMY-GHCJXIJMSA-N Ala-Ile-Asp Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O)NC(=O)[C@H](C)N HQJKCXHQNUCKMY-GHCJXIJMSA-N 0.000 description 1
- FOHXUHGZZKETFI-JBDRJPRFSA-N Ala-Ile-Cys Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)NC(=O)[C@H](C)N FOHXUHGZZKETFI-JBDRJPRFSA-N 0.000 description 1
- MNZHHDPWDWQJCQ-YUMQZZPRSA-N Ala-Leu-Gly Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(O)=O MNZHHDPWDWQJCQ-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- IPWKGIFRRBGCJO-IMJSIDKUSA-N Ala-Ser Chemical compound C[C@H]([NH3+])C(=O)N[C@@H](CO)C([O-])=O IPWKGIFRRBGCJO-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 1
- HOVPGJUNRLMIOZ-CIUDSAMLSA-N Ala-Ser-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](C)N HOVPGJUNRLMIOZ-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- QRIYOHQJRDHFKF-UWJYBYFXSA-N Ala-Tyr-Ser Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)C)CC1=CC=C(O)C=C1 QRIYOHQJRDHFKF-UWJYBYFXSA-N 0.000 description 1
- PQWTZSNVWSOFFK-FXQIFTODSA-N Arg-Asp-Asn Chemical compound C(C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)N)CN=C(N)N PQWTZSNVWSOFFK-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- YHZQOSXDTFRZKU-WDSOQIARSA-N Arg-Trp-Leu Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N)=CNC2=C1 YHZQOSXDTFRZKU-WDSOQIARSA-N 0.000 description 1
- AKEBUSZTMQLNIX-UWJYBYFXSA-N Asn-Ala-Tyr Chemical compound C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(C=C1)O)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N AKEBUSZTMQLNIX-UWJYBYFXSA-N 0.000 description 1
- NLCDVZJDEXIDDL-BIIVOSGPSA-N Asn-Asn-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CC(=O)N)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N)C(=O)O NLCDVZJDEXIDDL-BIIVOSGPSA-N 0.000 description 1
- ODBSSLHUFPJRED-CIUDSAMLSA-N Asn-His-Asn Chemical compound C1=C(NC=N1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N ODBSSLHUFPJRED-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- GQRDIVQPSMPQME-ZPFDUUQYSA-N Asn-Ile-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O GQRDIVQPSMPQME-ZPFDUUQYSA-N 0.000 description 1
- DATSKXOXPUAOLK-KKUMJFAQSA-N Asn-Tyr-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O DATSKXOXPUAOLK-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- VGRHZPNRCLAHQA-IMJSIDKUSA-N Asp-Asn Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O VGRHZPNRCLAHQA-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 1
- GISFCCXBVJKGEO-QEJZJMRPSA-N Asp-Glu-Trp Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(O)=O GISFCCXBVJKGEO-QEJZJMRPSA-N 0.000 description 1
- VIRHEUMYXXLCBF-WDSKDSINSA-N Asp-Gly-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O VIRHEUMYXXLCBF-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- JGLWFWXGOINXEA-YDHLFZDLSA-N Asp-Val-Tyr Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 JGLWFWXGOINXEA-YDHLFZDLSA-N 0.000 description 1
- OMPJBNCRMGITSC-UHFFFAOYSA-N Benzoylperoxide Chemical compound C=1C=CC=CC=1C(=O)OOC(=O)C1=CC=CC=C1 OMPJBNCRMGITSC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001072256 Boraginaceae Species 0.000 description 1
- 241000722877 Borago Species 0.000 description 1
- 101150058073 Calm3 gene Proteins 0.000 description 1
- OOULJWDSSVOMHX-WDSKDSINSA-N Cys-Met Chemical compound CSCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CS OOULJWDSSVOMHX-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- LMKYZBGVKHTLTN-NKWVEPMBSA-N D-nopaline Chemical compound NC(=N)NCCC[C@@H](C(O)=O)N[C@@H](C(O)=O)CCC(O)=O LMKYZBGVKHTLTN-NKWVEPMBSA-N 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 241000620209 Escherichia coli DH5[alpha] Species 0.000 description 1
- 108700039691 Genetic Promoter Regions Proteins 0.000 description 1
- HUWSBFYAGXCXKC-CIUDSAMLSA-N Glu-Ala-Met Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(O)=O HUWSBFYAGXCXKC-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- SNFUTDLOCQQRQD-ZKWXMUAHSA-N Glu-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O SNFUTDLOCQQRQD-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 1
- BKRQSECBKKCCKW-HVTMNAMFSA-N Glu-Ile-His Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N BKRQSECBKKCCKW-HVTMNAMFSA-N 0.000 description 1
- RFTVTKBHDXCEEX-WDSKDSINSA-N Glu-Ser-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(O)=O RFTVTKBHDXCEEX-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- ZQNCUVODKOBSSO-XEGUGMAKSA-N Glu-Trp-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O ZQNCUVODKOBSSO-XEGUGMAKSA-N 0.000 description 1
- MFYLRRCYBBJYPI-JYJNAYRXSA-N Glu-Tyr-Lys Chemical compound C1=CC(=CC=C1C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N)O MFYLRRCYBBJYPI-JYJNAYRXSA-N 0.000 description 1
- XPJBQTCXPJNIFE-ZETCQYMHSA-N Gly-Gly-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)CN XPJBQTCXPJNIFE-ZETCQYMHSA-N 0.000 description 1
- DKEXFJVMVGETOO-LURJTMIESA-N Gly-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CN DKEXFJVMVGETOO-LURJTMIESA-N 0.000 description 1
- IUZGUFAJDBHQQV-YUMQZZPRSA-N Gly-Leu-Asn Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O IUZGUFAJDBHQQV-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- GGAPHLIUUTVYMX-QWRGUYRKSA-N Gly-Phe-Ser Chemical compound OC[C@@H](C([O-])=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)C[NH3+])CC1=CC=CC=C1 GGAPHLIUUTVYMX-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 1
- BNMRSWQOHIQTFL-JSGCOSHPSA-N Gly-Val-Phe Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 BNMRSWQOHIQTFL-JSGCOSHPSA-N 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- JBCLFWXMTIKCCB-UHFFFAOYSA-N H-Gly-Phe-OH Natural products NCC(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 JBCLFWXMTIKCCB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VOKCBYNCZVSILJ-KKUMJFAQSA-N His-Asn-Tyr Chemical compound C1=CC(=CC=C1C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)NC(=O)[C@H](CC2=CN=CN2)N)O VOKCBYNCZVSILJ-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- YJBMLTVVVRJNOK-SRVKXCTJSA-N His-Asp-His Chemical compound C1=C(NC=N1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CC2=CN=CN2)C(=O)O)N YJBMLTVVVRJNOK-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- OEROYDLRVAYIMQ-YUMQZZPRSA-N His-Gly-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O OEROYDLRVAYIMQ-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- LDFWDDVELNOGII-MXAVVETBSA-N His-Lys-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CC1=CN=CN1)N LDFWDDVELNOGII-MXAVVETBSA-N 0.000 description 1
- DEMIXZCKUXVEBO-BWAGICSOSA-N His-Thr-Tyr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(C=C1)O)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC2=CN=CN2)N)O DEMIXZCKUXVEBO-BWAGICSOSA-N 0.000 description 1
- FFYYUUWROYYKFY-IHRRRGAJSA-N His-Val-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O FFYYUUWROYYKFY-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- 208000035150 Hypercholesterolemia Diseases 0.000 description 1
- NZOCIWKZUVUNDW-ZKWXMUAHSA-N Ile-Gly-Ala Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(O)=O NZOCIWKZUVUNDW-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 1
- VNDQNDYEPSXHLU-JUKXBJQTSA-N Ile-His-Tyr Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)N[C@@H](CC2=CC=C(C=C2)O)C(=O)O)N VNDQNDYEPSXHLU-JUKXBJQTSA-N 0.000 description 1
- GLLAUPMJCGKPFY-BLMTYFJBSA-N Ile-Ile-Trp Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](NC(=O)[C@H]([C@@H](C)CC)NC(=O)[C@@H](N)[C@@H](C)CC)C(O)=O)=CNC2=C1 GLLAUPMJCGKPFY-BLMTYFJBSA-N 0.000 description 1
- RMNMUUCYTMLWNA-ZPFDUUQYSA-N Ile-Lys-Asp Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O)N RMNMUUCYTMLWNA-ZPFDUUQYSA-N 0.000 description 1
- YSGBJIQXTIVBHZ-AJNGGQMLSA-N Ile-Lys-Leu Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O YSGBJIQXTIVBHZ-AJNGGQMLSA-N 0.000 description 1
- WMDZARSFSMZOQO-DRZSPHRISA-N Ile-Phe Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 WMDZARSFSMZOQO-DRZSPHRISA-N 0.000 description 1
- BQSLGJHIAGOZCD-CIUDSAMLSA-N Leu-Ala-Ser Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O BQSLGJHIAGOZCD-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- NFNVDJGXRFEYTK-YUMQZZPRSA-N Leu-Glu Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O NFNVDJGXRFEYTK-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- QVFGXCVIXXBFHO-AVGNSLFASA-N Leu-Glu-Leu Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O QVFGXCVIXXBFHO-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- LESXFEZIFXFIQR-LURJTMIESA-N Leu-Gly Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)NCC(O)=O LESXFEZIFXFIQR-LURJTMIESA-N 0.000 description 1
- VBZOAGIPCULURB-QWRGUYRKSA-N Leu-Gly-His Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)O)N VBZOAGIPCULURB-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 1
- QPXBPQUGXHURGP-UWVGGRQHSA-N Leu-Gly-Met Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)O)N QPXBPQUGXHURGP-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- UCDHVOALNXENLC-KBPBESRZSA-N Leu-Gly-Tyr Chemical compound CC(C)C[C@H]([NH3+])C(=O)NCC(=O)N[C@H](C([O-])=O)CC1=CC=C(O)C=C1 UCDHVOALNXENLC-KBPBESRZSA-N 0.000 description 1
- QJXHMYMRGDOHRU-NHCYSSNCSA-N Leu-Ile-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(O)=O QJXHMYMRGDOHRU-NHCYSSNCSA-N 0.000 description 1
- SEMUSFOBZGKBGW-YTFOTSKYSA-N Leu-Ile-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O SEMUSFOBZGKBGW-YTFOTSKYSA-N 0.000 description 1
- FOBUGKUBUJOWAD-IHPCNDPISA-N Leu-Leu-Trp Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CC(C)C)C(O)=O)=CNC2=C1 FOBUGKUBUJOWAD-IHPCNDPISA-N 0.000 description 1
- OVZLLFONXILPDZ-VOAKCMCISA-N Leu-Lys-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O OVZLLFONXILPDZ-VOAKCMCISA-N 0.000 description 1
- UHNQRAFSEBGZFZ-YESZJQIVSA-N Leu-Phe-Pro Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N2CCC[C@@H]2C(=O)O)N UHNQRAFSEBGZFZ-YESZJQIVSA-N 0.000 description 1
- PTRKPHUGYULXPU-KKUMJFAQSA-N Leu-Phe-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O PTRKPHUGYULXPU-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- ISSAURVGLGAPDK-KKUMJFAQSA-N Leu-Tyr-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O ISSAURVGLGAPDK-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- CIOWSLJGLSUOME-BQBZGAKWSA-N Lys-Asp Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(O)=O CIOWSLJGLSUOME-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- RPWTZTBIFGENIA-VOAKCMCISA-N Lys-Thr-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O RPWTZTBIFGENIA-VOAKCMCISA-N 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- AFFKUNVPPLQUGA-DCAQKATOSA-N Met-Leu-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O AFFKUNVPPLQUGA-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- NSMXRFMGZYTFEX-KJEVXHAQSA-N Met-Thr-Tyr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(C=C1)O)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCSC)N)O NSMXRFMGZYTFEX-KJEVXHAQSA-N 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 241000235575 Mortierella Species 0.000 description 1
- AUEJLPRZGVVDNU-UHFFFAOYSA-N N-L-tyrosyl-L-leucine Natural products CC(C)CC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 AUEJLPRZGVVDNU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101710202365 Napin Proteins 0.000 description 1
- 241001478892 Nostoc sp. PCC 7120 Species 0.000 description 1
- 241000219925 Oenothera Species 0.000 description 1
- LZDIENNKWVXJMX-JYJNAYRXSA-N Phe-Arg-Arg Chemical compound NC(N)=NCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 LZDIENNKWVXJMX-JYJNAYRXSA-N 0.000 description 1
- ALHULIGNEXGFRM-QWRGUYRKSA-N Phe-Cys-Gly Chemical compound OC(=O)CNC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 ALHULIGNEXGFRM-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 1
- GLUBLISJVJFHQS-VIFPVBQESA-N Phe-Gly Chemical compound OC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 GLUBLISJVJFHQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- APJPXSFJBMMOLW-KBPBESRZSA-N Phe-Gly-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 APJPXSFJBMMOLW-KBPBESRZSA-N 0.000 description 1
- JWBLQDDHSDGEGR-DRZSPHRISA-N Phe-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 JWBLQDDHSDGEGR-DRZSPHRISA-N 0.000 description 1
- KNYPNEYICHHLQL-ACRUOGEOSA-N Phe-Leu-Tyr Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(O)=O)C1=CC=CC=C1 KNYPNEYICHHLQL-ACRUOGEOSA-N 0.000 description 1
- ACJULKNZOCRWEI-ULQDDVLXSA-N Phe-Met-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O ACJULKNZOCRWEI-ULQDDVLXSA-N 0.000 description 1
- AFNJAQVMTIQTCB-DLOVCJGASA-N Phe-Ser-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 AFNJAQVMTIQTCB-DLOVCJGASA-N 0.000 description 1
- JXQVYPWVGUOIDV-MXAVVETBSA-N Phe-Ser-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O JXQVYPWVGUOIDV-MXAVVETBSA-N 0.000 description 1
- NJONQBYLTANINY-IHPCNDPISA-N Phe-Trp-Asn Chemical compound N[C@@H](Cc1ccccc1)C(=O)N[C@@H](Cc1c[nH]c2ccccc12)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O NJONQBYLTANINY-IHPCNDPISA-N 0.000 description 1
- 235000001537 Ribes X gardonianum Nutrition 0.000 description 1
- 235000001535 Ribes X utile Nutrition 0.000 description 1
- 235000016919 Ribes petraeum Nutrition 0.000 description 1
- 244000281247 Ribes rubrum Species 0.000 description 1
- 235000002355 Ribes spicatum Nutrition 0.000 description 1
- 238000012300 Sequence Analysis Methods 0.000 description 1
- LTFSLKWFMWZEBD-IMJSIDKUSA-N Ser-Asn Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(N)=O LTFSLKWFMWZEBD-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 1
- ICHZYBVODUVUKN-SRVKXCTJSA-N Ser-Asn-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O ICHZYBVODUVUKN-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- UQFYNFTYDHUIMI-WHFBIAKZSA-N Ser-Gly-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CO UQFYNFTYDHUIMI-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- CTONFVDJYCAMQM-IUKAMOBKSA-N Thr-Asn-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)N CTONFVDJYCAMQM-IUKAMOBKSA-N 0.000 description 1
- BZTSQFWJNJYZSX-JRQIVUDYSA-N Thr-Tyr-Asp Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O BZTSQFWJNJYZSX-JRQIVUDYSA-N 0.000 description 1
- LVRFMARKDGGZMX-IZPVPAKOSA-N Thr-Tyr-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 LVRFMARKDGGZMX-IZPVPAKOSA-N 0.000 description 1
- 108700029229 Transcriptional Regulatory Elements Proteins 0.000 description 1
- XNRJFXBORWMIPY-DCPHZVHLSA-N Trp-Ala-Phe Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O XNRJFXBORWMIPY-DCPHZVHLSA-N 0.000 description 1
- HQVKQINPFOCIIV-BVSLBCMMSA-N Trp-Arg-Tyr Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)N)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 HQVKQINPFOCIIV-BVSLBCMMSA-N 0.000 description 1
- HYLNRGXEQACDKG-NYVOZVTQSA-N Trp-Asn-Trp Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(O)=O HYLNRGXEQACDKG-NYVOZVTQSA-N 0.000 description 1
- BUWIKRJTARQGNZ-IHPCNDPISA-N Trp-Phe-Cys Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC2=CNC3=CC=CC=C32)N BUWIKRJTARQGNZ-IHPCNDPISA-N 0.000 description 1
- WDIJBEWLXLQQKD-ULQDDVLXSA-N Tyr-Arg-His Chemical compound C1=CC(=CC=C1C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H](CC2=CN=CN2)C(=O)O)N)O WDIJBEWLXLQQKD-ULQDDVLXSA-N 0.000 description 1
- FIRUOPRJKCBLST-KKUMJFAQSA-N Tyr-His-Asp Chemical compound C1=CC(=CC=C1C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC2=CN=CN2)C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O)N)O FIRUOPRJKCBLST-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- WDGDKHLSDIOXQC-ACRUOGEOSA-N Tyr-Leu-Phe Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 WDGDKHLSDIOXQC-ACRUOGEOSA-N 0.000 description 1
- CDKZJGMPZHPAJC-ULQDDVLXSA-N Tyr-Leu-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 CDKZJGMPZHPAJC-ULQDDVLXSA-N 0.000 description 1
- VNYDHJARLHNEGA-RYUDHWBXSA-N Tyr-Pro Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 VNYDHJARLHNEGA-RYUDHWBXSA-N 0.000 description 1
- ABZWHLRQBSBPTO-RNXOBYDBSA-N Tyr-Trp-Phe Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC2=CNC3=CC=CC=C32)NC(=O)[C@H](CC4=CC=C(C=C4)O)N ABZWHLRQBSBPTO-RNXOBYDBSA-N 0.000 description 1
- XCTHZFGSVQBHBW-IUCAKERBSA-N Val-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C([O-])=O)NC(=O)[C@@H]([NH3+])C(C)C XCTHZFGSVQBHBW-IUCAKERBSA-N 0.000 description 1
- PMKQKNBISAOSRI-XHSDSOJGSA-N Val-Tyr-Pro Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(C=C1)O)C(=O)N2CCC[C@@H]2C(=O)O)N PMKQKNBISAOSRI-XHSDSOJGSA-N 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 108010078114 alanyl-tryptophyl-alanine Proteins 0.000 description 1
- 235000020661 alpha-linolenic acid Nutrition 0.000 description 1
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 1
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 1
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 1
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 235000021342 arachidonic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229940114079 arachidonic acid Drugs 0.000 description 1
- 108010040443 aspartyl-aspartic acid Proteins 0.000 description 1
- 108010058966 bacteriophage T7 induced DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 230000010307 cell transformation Effects 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 229960005091 chloramphenicol Drugs 0.000 description 1
- WIIZWVCIJKGZOK-RKDXNWHRSA-N chloramphenicol Chemical compound ClC(Cl)C(=O)N[C@H](CO)[C@H](O)C1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 WIIZWVCIJKGZOK-RKDXNWHRSA-N 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 230000035601 cold sensitivity Effects 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 1
- 230000001276 controlling effect Effects 0.000 description 1
- 208000029078 coronary artery disease Diseases 0.000 description 1
- 238000005520 cutting process Methods 0.000 description 1
- 108010016616 cysteinylglycine Proteins 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 1
- 238000006477 desulfuration reaction Methods 0.000 description 1
- 230000023556 desulfurization Effects 0.000 description 1
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 1
- 235000020930 dietary requirements Nutrition 0.000 description 1
- 238000006073 displacement reaction Methods 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 1
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 1
- 230000006862 enzymatic digestion Effects 0.000 description 1
- 235000020774 essential nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 230000004129 fatty acid metabolism Effects 0.000 description 1
- 229940013317 fish oils Drugs 0.000 description 1
- 238000013467 fragmentation Methods 0.000 description 1
- 238000006062 fragmentation reaction Methods 0.000 description 1
- VPZXBVLAVMBEQI-UHFFFAOYSA-N glycyl-DL-alpha-alanine Natural products OC(=O)C(C)NC(=O)CN VPZXBVLAVMBEQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010081551 glycylphenylalanine Proteins 0.000 description 1
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 230000007407 health benefit Effects 0.000 description 1
- 108010036413 histidylglycine Proteins 0.000 description 1
- 238000005286 illumination Methods 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 108010027338 isoleucylcysteine Proteins 0.000 description 1
- 229960000318 kanamycin Drugs 0.000 description 1
- 229930027917 kanamycin Natural products 0.000 description 1
- SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N kanamycin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N 0.000 description 1
- 229930182823 kanamycin A Natural products 0.000 description 1
- 108010053037 kyotorphin Proteins 0.000 description 1
- 108010051673 leucyl-glycyl-phenylalanine Proteins 0.000 description 1
- -1 linoleic acid (9 Chemical class 0.000 description 1
- 229960004488 linolenic acid Drugs 0.000 description 1
- 108010003700 lysyl aspartic acid Proteins 0.000 description 1
- 108010025153 lysyl-alanyl-alanine Proteins 0.000 description 1
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 1
- 108010005942 methionylglycine Proteins 0.000 description 1
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 1
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 1
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 1
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 1
- 238000001823 molecular biology technique Methods 0.000 description 1
- 238000007899 nucleic acid hybridization Methods 0.000 description 1
- 108010083476 phenylalanyltryptophan Proteins 0.000 description 1
- 238000000053 physical method Methods 0.000 description 1
- 230000008488 polyadenylation Effects 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 238000001742 protein purification Methods 0.000 description 1
- 210000001938 protoplast Anatomy 0.000 description 1
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 1
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 239000006152 selective media Substances 0.000 description 1
- 239000002689 soil Substances 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 108010080629 tryptophan-leucine Proteins 0.000 description 1
- 108010015666 tryptophyl-leucyl-glutamic acid Proteins 0.000 description 1
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 1
- 108010036320 valylleucine Proteins 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/0004—Oxidoreductases (1.)
- C12N9/0071—Oxidoreductases (1.) acting on paired donors with incorporation of molecular oxygen (1.14)
- C12N9/0083—Miscellaneous (1.14.99)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/74—Vectors or expression systems specially adapted for prokaryotic hosts other than E. coli, e.g. Lactobacillus, Micromonospora
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
- C12N15/8241—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology
- C12N15/8242—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with non-agronomic quality (output) traits, e.g. for industrial processing; Value added, non-agronomic traits
- C12N15/8243—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with non-agronomic quality (output) traits, e.g. for industrial processing; Value added, non-agronomic traits involving biosynthetic or metabolic pathways, i.e. metabolic engineering, e.g. nicotine, caffeine
- C12N15/8247—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with non-agronomic quality (output) traits, e.g. for industrial processing; Value added, non-agronomic traits involving biosynthetic or metabolic pathways, i.e. metabolic engineering, e.g. nicotine, caffeine involving modified lipid metabolism, e.g. seed oil composition
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
- C12P7/64—Fats; Fatty oils; Ester-type waxes; Higher fatty acids, i.e. having at least seven carbon atoms in an unbroken chain bound to a carboxyl group; Oxidised oils or fats
- C12P7/6409—Fatty acids
- C12P7/6427—Polyunsaturated fatty acids [PUFA], i.e. having two or more double bonds in their backbone
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
- C12P7/64—Fats; Fatty oils; Ester-type waxes; Higher fatty acids, i.e. having at least seven carbon atoms in an unbroken chain bound to a carboxyl group; Oxidised oils or fats
- C12P7/6436—Fatty acid esters
- C12P7/6445—Glycerides
- C12P7/6472—Glycerides containing polyunsaturated fatty acid [PUFA] residues, i.e. having two or more double bonds in their backbone
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y114/00—Oxidoreductases acting on paired donors, with incorporation or reduction of molecular oxygen (1.14)
- C12Y114/19—Oxidoreductases acting on paired donors, with incorporation or reduction of molecular oxygen (1.14) with oxidation of a pair of donors resulting in the reduction of molecular oxygen to two molecules of water (1.14.19)
- C12Y114/19003—Linoleoyl-CoA desaturase (1.14.19.3)
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
- Y10S530/82—Proteins from microorganisms
- Y10S530/825—Bacteria
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Nutrition Science (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Fats And Perfumes (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
Abstract
Izolovaná nukleová kyselina kodující kyanobakteriální .DELTA..sup.6.n.-desaturázu a obahující sekvenci SEQ. ID NO:3; Izolovaná nukleová kyselina kódující kyanobakteriální .DELTA..sup.6.n.- desaturázu obsahující nukleotidy 2002 až 3081 sekvence SEQ ID No:1; Způsob přípravy bakteriální kvasinkové nebo rostlinné buňky obsahující kyanobakteriální .DELTA..sup.6.n.-desaturázu, který zahrnuje transformaci bakteriální, kvasinkové nebo rostlinné buňky izolovanou výše uvedenou nukleovou kyselinou; Způsob indukce tvorby gamma-linolenové kyseliny /GLA/ v bakterii nebo rostlině se sníženým obsahem nebo s chybějící GLA, kde bakterie nebo rostlina vytváří linolovou kyselinu. Bakterie nebo rostlina se transformuje izolovanou výše uvedenou nukleovou kyselinou; Způsob indukce tvorby gamma-linolenové kyseliny /GLA/ v bakterii nebo rostlině se sníženým obsahem nebo chybějící GLA a linolovou kyselinou /LA/. Bakterie nebo rostlina se transformuje izolovanou nukleovou kyselinou kódující kyanobakteriální .DELŕ
Description
Vynález se týká izolované nukleové kyseliny, způsobu přípravy bakteriální, kvasinkové nebo rostlinné buňky obsahující kyanobakteriální A6-desaturázu, způsobu indukce tvorby gammalinolenové kyseliny a způsobu indukce tvorby oktadekatetraenové kyseliny.
Dosavadní stav techniky
Nenasycené mastné kyseliny jako kyselina linolová (CigA9,12) a kyselina a-linolenová (ClgA9,12’15) jsou podstatné složky výživy, které nemohou být syntetizovány obratlovci, neboť buňky obratlovců mohou zavést dvojné vazby v A9-poloze mastných kyselin, avšak nemohou zavést přídavné dvojné vazby mezi dvojnou vazbou Δ9 a koncovou methylovou skupinou řetězce mastných kyselin. Protože představují prekurzoiy jiných produktů, jsou linolové kyseliny a alinolenové kyseliny esenciálními mastnými kyselinami a obvykle se získají z rostlinných zdrojů. Linolová kyselina může být savci přeměněna na γ-linolenovou kyselinu (GLA, C]gA6·9’12), která může být dále přeměněna na arachidovou kyselinu (20:4), což je kriticky významná mastná kyselina, protože je podstatným prekurzorem většiny prostaglandinů.
Dietní zjištění linolové kyseliny její výslednou přeměnou na GLA a arachidovou kyselinu uspokojuje dietní požadavky na GLA a arachidovou kyselinu. Byla nicméně dokázána souvislost mezi konzumací mastných kyselin a ohrožením zdraví chorobami jako je hypercholesterolemie, ateroskleróza a jiné chemické nevyváženosti, které souvisí s náchylností k onemocnění koronárních tepen, zatímco konzumace nenasycených mastných kyselin byla spojena se sníženou hladinou cholesterolu v krvi a sníženým nebezpečím aterosklerózy. Terapeutické příznivé dietní účinky GLA plynou z toho, že GLA je prekurzorem arachidové kyseliny a tudíž přispívá k syntéze prostaglandinů. Konzumace více nenasycených kyselin GLA, spíše než kyseliny linolové, má potenciální příznivé účinky na zdraví. Ovšem GLA není ve skutečnosti obsažena v žádných komerčně pěstovaných rostlinách.
Kyselina linolová se přeměňuje na GLA enzymem o názvu A6-desaturáza. A6-desaturáza, enzym obsahující asi 359 aminokyselin, má oblast vázanou na membránu aktivní místo pro odsycení mastných kyselin. Když je tento enzym přenesen do buněk, které endogenně vyvíjejí linolovou kyselinu a nikoliv GLA, vyvíjí se GLA.
Podstata vynálezu
Vynález se týká izolované nukleové kyseliny, kódující kyanobakteriální A6-desaturázu obsahující sekvenci SEQ ID No:3. Izolovaná nukleová kyselina kódující kyanobakteriální Δ6desaturázu obsahuje nukleotidy 2002 až 3081 sekvence SEQ ID No: 1.
Dalším předmětem předloženého vynálezu je způsob přípravy bakteriální, kvasinkové nebo rostlinné buňky obsahující kyanobakteriální Δό-desaturázu, který zahrnuje transformaci bakteriální, kvasinkové nebo rostlinné buňky izolovanou nukleovou kyselinou definovanou výše.
Dalším předmětem předloženého vynálezu je způsob indukce tvorby gamma-linolenové kyseliny (GLA) v bakterii nebo rostlině se sníženým obsahem nebo s chybějící GLA, kde uvedená bakterie nebo rostlina vytváří linolovou kyselinu, spočívající vtom, že bakterie nebo rostlina se transformuje izolovanou nukleovou kyselinou definovanou výše.
Dalším předmětem předloženého vynálezu je způsob indukce tvorby gamma-linolenové kyseliny (GLA) v bakterii nebo rostlině se sníženým obsahem nebo s chybějící GLA a linolovou kyselinou (LA), kde uvedená bakterie nebo rostlina se transformuje výše uvedenou izolovanou nukleovou kyselinou kódující kyanobakteriální A6-desaturázu a izolovanou nukleovou kyselinou kódující Al2-desaturázu.
Dalším předmětem předloženého vynálezu je způsob indukce tvorby oktadekatetraeonové kyseliny v bakterii nebo rostlině se sníženým obsahem nebo chybějící gamma-linolovou kyselinou nebo oktadekatetraeonovou kyselinou a kde uvedená bakterie nebo rostlina vytváří linolovou kyselinu, kde se uvedená bakterie nebo rostlina transformuje izolovanou nukleovou kyselinou uvedenou výše.
Linolová kyselina (18:2) (LA) se transformuje na gama linolenovou kyselinu (18:3) (GLA) enzymem, nazývaným A6-desaturáza. Když je tento enzym nebo nukleová kyselina, která jej kóduje, přenesen do buněk, produkujících LA, vyvíjí se GLA. Předmětem předloženého vynálezu je také nukleová kyselina, obsahující gen enzymu desaturázy. Přesněji řečeno, nukleová kyselina obsahuje promotor, kódující oblast a terminační oblast genu A6-desaturázy. Předložený vynález se dále týká konstrukce vektoru exprese obsahující kódující oblast A6-desaturázy ve funkční kombinaci s heterologními regulačními sekvencemi. Nukleové kyseliny a konstrukce expresního vektoru podle předloženého vynálezu jsou použitelné pro vytváření GLA v transgenních organizmech.
Předložený vynález dále vytváří rostliny snášející ochlazení. Obr. 1 znázorňuje hydropathické profily dedukovaných sekvencí aminokyselin Synechocystis A6-desaturázy (obr.lA) a Δ12 desaturázy (obr. IB). Domnělé transmembránové oblasti jsou označeny plnými čarami. Hydrofóbní index byl vypočítán pro velikost okna 19 zbytků aminokyselin (Kyte a sp. (1982) J. Molec. Biol. 157).
Obr. 2 znázorňuje průběhy získané plyno-kapalinovou chromatografii pro divoký typ (obr. 2A) a pro transgenní Anabaena (Obr. 2B).
Obr. 3 je diagram map kosmidů cSy75, cSyl3 a cSy7 s oblastmi přesunu a subklony. Začátky subklonů cSy75, cSy75-3.5 a cSy7 jsou označeny přerušovanými uhlopříčkovými čarami. Místa restrikce, která byla odstraněna, jsou v závorkách.
Obr. 4 znázorňuje průběhy získané plyno-kapalinovou chromatografii pro divoký typ (Obr. 4A) a transgenní tabák (obr. 4B).
Předložený vynález vytváří izolovanou nukleovou kyselinu kódující A6-desaturázu. Pro identifikaci nukleové kyseliny kódující desaturázu se DNA izoluje z organismu, který vyvíjí GLA. Tento organismus může být například zvířecí buňka, některé houby, například Mortierella, některé bakterie, například Synechocystis, nebo některé rostliny, jako Borago off., Oenothera, nebo rybíz. Izolace genomické DNA může být provedena rozličnými způsoby v oboru známými, které pokusně provedli Sambrook a sp. (1989) a popsali v publikaci Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor, NY. Izolovaná DNA se fragmentuje fyzikálními metodami nebo enzymatickou digescí a klonuje do vhodného vektoru jako bakteriofága nebo vektoru kosmidu, některým ze známých způsobů obsaženým v literatuře jako je Sambrook a sp. (1989). Specificky jsou zde uvažovány expresní vektory obsahující DNA podle předloženého vynálezu. DNA kódující A6-desaturázu může být indentifikována analýzou zisku funkce. Vektor obsahující fragmentovanou DNA se přenese například infekcí, transkonjugací, transfekcí, do
-2CZ 285471 B6 hostitelského organismu, který vyvíjí linolovou kyselinu, avšak nevyvíjí GLA. Výraz transformace zde obecně používaný znamená obecně vnesení cizí DNA do hostitelské buňky. Způsoby zavedení rekombinanty DNA do hostitelského organismu jsou v oboru obecně známé a mohou být nalezeny například v publikaci Sambrook a sp. (1989). Vytváření GLA těmito organismy, to znamená zisk funkce, se zkouší například plynovou chromatografii nebo jinými způsoby v oboru známými. Organizmy, které byly indukovány k vyvíjení GLA, to znamená získaly funkci zavedením vektoru, jsou identifikovány jako vyjadřující DNA kódující Δ6desaturázu a zmíněná DNA se zpětně získá z těchto organizmů. Zpětně získaná DNA může být opět fragmentována, klonována s expresními vektory a funkčně zkoušena výše uvedenými způsoby pro přesnější definování DNA kódující A6-desaturázu.
Jako příklad provedení předloženého vynálezu je izolována náhodná DNA z kyanobakterie Synechocystis Pasteur Culture Collection (PCC) 6803, Američan Type Culture Collection (ATCC) 27184, klonované do vektoru kosmidu, a zavedené transkonjugací do bakterie cyanobacterium Anabaena kmen PCC 7120, ATCC 27893 se sníženým obsahem GLA. Vyvíjení GLA z linolové kyseliny Anabaena je sledováno plynovou chromatografii a příslušný fragment DNA je izolován.
Izolovaná DNA je sekvenčně zpracována způsoby v oboru známými, například podle Sambrook asp. (1989).
V rámci předloženého vynálezu byla izolována DNA obsahující gen A6-desaturázy. Přesněji byla z bakterie cyanobakteria Synechocystis izolována DNA 3.588 kilobase (kb) obsahující gen A6-desaturázy. Byla určena sekvence nukleotidů 3.588 kb DNA a je znázorněna v SEQ ID NO: 1. Otevřené čtecí úseky definující potenciální kódovací oblasti jsou přítomny z nukleotidu 317 až do 1507 a z nukleotidu 2002 až do 3081. Pro definování nukleotidů odpovědných za kódování A6-desaturázy je 3.588 kb fragment ukazující aktivitu A6-desaturázy rozštěpen ve dva subfragmenty, z nichž každý obsahuje pouze jeden otevřený čtecí úsek. Fragment ORF1 obsahuje nukleotidy od 1 do 1704, zatímco fragment ORF2 obsahuje nukleotidy od 1705 do 3588. Každý fragment je subklonován v dopředně i zpětné orientaci na konjugovaný expresní vektor (AM542, Wolk a sp. (1984) Proč. Nati. Acad. Sci. USA 81, 1561), který obsahuje promotor kyanobakteriální karboxylázy. Výsledné konstrukty ORF1(F), ORF1(R), ORF2(F) a ORF2(R) jsou konjugovány na divoký typ Anabaena PCC 7120 standardními způsoby (viz například Wolk a sp. (1984) Proč. Nati. Acad. Sci. USA 81, 1561). Konjugované buňky Anabaena jsou identifikovány jako Neo zelení kolonie na hnědém pozadí zanikajících nekonjugovaných buněk po dvou týdnech pěstování na selektivních médiích (standardní minerální média BG11N + obsahující 30 pg/ml neomycinu podle Rippka a sp. (1979) J. Gen Microbiol. 111, 1). Zelené kolonie jsou vyloučeny a pěstovány v selektivních kapalných médiích (BG1 IN + 15 pg/ml neomycinu). Lipidy se extrahují standardními způsoby (například Dahmer a sp. (1989) Joumal of Američan Oil Chemical Society 66, 543) z výsledných transkonjugantů obsahujících dopředně a zpětně orientované konstrukty ORF1 a ORF2. Pro srovnání se lipidy také extrahují z divokého typu kultur Anabaena a Synechocystis. Methylestery mastných kyselin se analyzují plyno-kapalinovou chromatografii (GLC) například s plyno-kapalinovým chromatografem Tracor-560 s detektorem ionizace vodíkového plamene a s kapilární kolonou. Výsledky analýzy GLC jsou uvedeny v tabulce 1.
-3 CZ 285471 B6
Tabulka 1: Výskyt mastných kyselin Cl8 v divokém typu a ve transgenní kyanobakterii
| ZDROJ | 18:0 | 18:1 | 18:2 | γ18:3 | α18:3 | 18:4 |
| Anabaena (divoký typ) | + | + | + | - | + | - |
| Anabaena + ORF1 (F) | + | + | + | - | + | - |
| Anabaena + ORF1 (R) | + | + | + | - | + | - |
| Anabaena + ORF2 (F) | + | + | + | + | + | + |
| Anabaena + ORF2 (R) | + | + | + | - | + | - |
| Synechocystis (divoký typ) | + | + | + | + | - | - |
Jak bylo vyzkoušeno analýzou GLC, Anabaena se sníženým obsahem GLA získá funkci vyvíjení GLA když se transkonjugací zavede konstrukt obsahující ORF2 v dopředně orientaci. Transkonjuganty obsahující konstrukty s ORF2 ve zpětné orientaci k promotoru karboxylázy, nebo ORF1 ve kterékoli orientaci nevykazují žádné vyvíjení GLA. Tato analýza ukazuje, že jediný otevřený úsek čtení (ORF2) v 1884 bp fragmentu kóduje A6-desaturázu. 1884 bp fragment je znázorněn jako SEQ ID NO:3. To je potvrzeno celkovou podobností hydropathických průběhů mezi A6-desaturázou a A12-desaturázou (Wade a sp. (1990) Nátuře 347), jak je znázorněno v obr. 1 jako (A) popřípadě jako (B).
Izolované nukleové kyseliny kódující A6-desaturázu mohou být identifikovány z jiných organizmů vyvíjejících GLA získáním funkční analýzy popsané výše nebo technikou hybridizace nukleových kyselin používající izolovanou nukleovou kyselinu, která kóduje Anabaena Δ6desaturázu jako hybridizační próbu. Oba způsoby klonování genomové DNA a cDNA v oboru známé jsou použity ve předloženém vynálezu. Hybridizační próba: může obsahovat celou sekvenci DNA uvedenou jako SEQ. ID NO:1, nebo restrikční fragment nebo jiný její DNA fragment obsahující vzorek oligonukleotidů. Způsoby klonování homologních genů křížovou hybridizaci jsou v oboru známé a mohou být nalezeny například v publikaci Sambrook (1989) a Beltz a sp. (1983) Methods in Enzymology 100, 26.
Transgenní organizmy, které získají funkci vyvíjení GLA zavedením DNA kódující A6-desaturázu také získají funkci vyvíjet oktadekatetraeonové kyseliny (18:4 6AI2’l5y Oktadekatetraeonová kyselina je normálně přítomná v rybích olejích a v některých rostlinných druzích rodu Boraginaceae (Craig a sp. (1964) J. Amer. Oil Chem. Soc. 41, 209-211; Gross a sp. (1976) Can. J. Plant Sci. 56, 659-664). Ve transgenních organizmech podle předloženého vynálezu je oktadekatetraeonová kyselina výsledkem další desaturace α-linolenové kyseliny A6-desaturázou nebo desaturace GLA A15-desaturázou.
359 aminokyselin kódovaných ORF2, to znamená otevřený čtecí úsek kódující A6-desaturázu, je znázorněno jako SEQ. ID NO:2. Předložený vynález dále sleduje jiné sekvence nukleotidů, které kódují aminokyseliny ze SEQ. ID NO:2. Běžným úkolem pracovníka školeného v oboru je identifikace takové sekvence, která vyplývá například z degenerace genetického kódu. Pracovník školený v oboru může dále určit ziskem funkční analýzy popsané výše menší subfragmenty z 1884 bp fragmentu obsahujícího ORF2, který kóduje A6-desaturázu.
Předložený vynález uvažuje takový polypeptidový fragment A6-desaturázy a nukleových kyselin obsahujících aktivitu pro přeměnu LA na GLA.
Podle jiné myšlenky předloženého vynálezu je vektor obsahující 1884 bp fragment nebo menší fragment obsahující promotor, kódovací sekvenci a oblast terminace genu A6-desaturázy přenesen do organizmu, například kyanobakterie, ve kterém promotor a oblasti terminace Δ6desaturázy jsou funkční. Tudíž vynález vytváří organizmy vyvíjející rekombinantu A6-desaturázy. Podle další myšlenky předloženého vynálezu se vyvíjí izolovaná Δό-desaturáza, která může
-4CZ 285471 B6 být vyčištěna z rekombinačních organizmů standardními způsoby čištění proteinů, (například viz
Ausubel a sp. (1987) Current Protocols in Molecular Biology, Green Publishing Associates, New
York).
Vektory obsahující DNA kódující Δό-desaturázu jsou také vytvářeny předloženým vynálezem. Je zřejmé, že vhodné vektory mohou být konstruovány k řízení vyjádření kódové sekvence Δ6desaturázy v rozličných organizmech. Replikovatelné vektoiy vyjádření jsou zvláště preferovány. Replikovatelné vektory vyjádření zde popisované jsou molekuly DNA nebo RNA zpracované pro řízené vyjádření žádaného genu, to je genu Δό-desaturázy. Přednostně jsou tyto vektory plazmidy, bakteriofágy, kosmidy nebo viry. Kyvadlové vektory, například popsané Wolk a sp. (1984) Proč. Nati. Acad. Aci. USA, 1561-1565 a Bustos a sp. (1991) J. Bacteriol. 174, 75257533, jsou také uvažovány v souvislosti s předloženým vynálezem. Sambrook a sp. (1989). Goeddel (1990) Methods in Enzymology 185 Acacemic Press, a Perbal (1988) a Practical Guide to Molecular Cloning, John Wiley and Sons, lne., podávají podrobný přehled vektorů, do kterých může být zavedena nukleová kyselina kódující danou Δό-desaturázu a tam vyjádřena. Takové vektory také obsahují sekvence nukleových kyselin, které mohou způsobit vyjádření nukleových kyselin kódujících Δό-desaturázu. Prvky sekvence schopné uskutečnit vyjádření produktu genu obsahují promotory, zlepšovací prvky, protiproudé aktivační sekvence, signály přepisu terminace a místa polyadenylace. Jsou sledovány konstitutivní i tkáňové specifické promotory. Pro transformaci rostlinných buněk mají zvláštní význam promotor květákového mosaikového viru (CaMV) 355 a promotory, které jsou regulovány během zrání plodin. Všechny takové promotory a transkripční regulátorové prvky jednotlivě nebo v kombinaci jsou uvažovány pro použití ve přítomných replikovatelných vektorech vyjádření a jsou v oboru známé. Promotor CaMV 355 je popsán například Restrepo a sp. (1990) Plant Cell 2, 987. Také jsou uvažovány geneticky zpracované a mutované regulátorové sekvence.
Normálně školený odborník může určit vektory a regulátorové prvky vhodné pro vyjádření ve zvláštní hostitelské buňce. Tak například vektor obsahující promotor z genu kódujícího karboxylázu Anabaena operačně svázaný s kódovací oblastí Δό-desaturázy a dále operačně svázaný se signálem terminace ze Synechocystis je vhodný pro vyjádření Δό-desaturázy v kyanobakterii. Výraz operačně svázaný zde značí, že promotor a terminační sekvence účinně fungují pro regulaci přepisu. Jako další příklad vektor vhodný pro vyjádření Δό-desaturázy ve transgenních rostlinách může obsahovat sekvenci promotorů specifických pro semeno odvozenou z helianthininu, napinu nebo glycinu a operačně svázanou s kódovací oblastí Δό-desaturázy a dále operačně svázanou s terminačním signálem specifickým pro semeno nebo terminačním signálem syntézy nopalinu.
Zejména regulační prvky helianthininu popsané v přihlášce vynálezu Spojených států amerických téhož přihlašovatele číslo série 682,354 ze dne 8. dubna 1991 jsou uvažovány jako prvky promotoru pro řízení vyjádření Δό-desaturázy předloženého vynálezu.
Modifikace sekvencí nukleotidů nebo regulačních prvků zde popsané, které udržují uvažované funkce, jsou v rámci myšlenky předloženého vynálezu. Takové modifikace obsahují vložení, substituce a zrušení a zejména substituce, které odrážejí degeneraci genetického kódu.
Standardní techniky pro konstrukci takových hybridních vektorů jsou v oboru dobře známé a popisuje je například Sambrook a sp. (1989) nebo řada laboratorních příruček o rekombinantách DNA a jejich technologii. Existuje řada strategií pro ligaci fragmentů DNA a jejich volba závisí na typu konců fragmentů DNA. V souhlase s předloženým vynálezem se dále uvažuje zavést do hybridních vektorů jiné sekvence prvků nukleotidů, které usnadňují klonování, vyjádření nebo zpracování například sekvence kódující signálové peptidy, sekvence kódující KDEL, požadovaný pro udržení proteinů v endoplasmickém retikulu nebo sekvence kódující tranzitní peptidy, které řídí Δό-desaturázu ke chloroplastu. Takové sekvence jsou v oboru známé.
-5 CZ 285471 B6
Optimalizovaný tranzitní peptid popisuje například Van den Broeck a sp. (1985) Nátuře 313,
358. Prokaryotické a eukaryotické sekvence signálů jsou popsány například od Michaelis a sp.
(1982), Ann. Rev. Microbiol. 36, 425.
Další myšlenka předloženého vynálezu vytváří organizmy jiné než kyanobakterie, které obsahují DNA kódující A6-desaturázu podle předloženého vynálezu. Transgenní organizmy uvažované v rámci předloženého vynálezu zahrnují bakterie, kyanobakterie, houby a rostliny a zvířata. Izolovaná DNA podle předloženého vynálezu může být zavedena do hostitelského organismu způsoby v oboru známými, například infekcí, transfekcí, transformací nebo transkonjugací. Techniky přenosu DNA podle předloženého vynálezu do takových organizmů jsou obecně známé a popsané v literatuře jako Sambrook a sp. (1989).
Je známo množství způsobů transformace rostlin. Gen A6-desaturázy může být do rostlin zaveden způsobem transformace a regenerace plochy listu jak je popsal Horsch a sp. (1985) Science 227, 1229. Jiné způsoby transformace, jako kultura protoplastu (Horsch a sp. (1984) Science 223, 496; DeBlock a sp., (1984) EMBO J. 2, 2143; Bartoň a sp. (1983) Cell 32, 1033) mohou také být použity a spadají do rámce předloženého vynálezu. Ve přednostním provedení se rostliny transformují vektory odvozenými od Agrobacterium. Nicméně jsou přístupné i jiné způsoby pro zavedení genu A6-desaturázy podle předloženého vynálezu do rostlinných buněk. Takové alternativní způsoby zahrnují biologické přístupy (Klein a sp. (1987) Nátuře 327, 70), elektroporaci, chemicky indukovaný převod DNA, a použití virů nebo pylu jako vektorů.
Je-li to nutné pro způsob transformace, gen Δ6—desaturázy podle předloženého vynálezu může být zaveden do transformačního vektoru rostliny, například binárního vektoru, kteiý popisuje Bevan (1984) Nucleic Acids Res. 12, 8111. Transformační vektory rostlin mohou být odvozeny modifikací přírodního systému přenosu genů Agrobacterium tumefaciens. Přírodní systém obsahuje velké Ti (tumor indukující) plazmidy obsahující velký segment, známý jako T-DNA, který se přenese na transformované rostliny. Jiný segment Ti-plasmidu, oblast virů, je odpovědná za přenos T-DNA Oblast T-DNA je ohraničena opakováním terminálu. V modifikovaných binárních vektorech mají geny indukující tumor být potlačeny a funkce oblasti virů jsou použity pro přenos cizí DNA obklopené okrajovými sekvencemi T-DNA. T-oblast také obsahuje volitelný příznak pro antibiotickou odolnost a násobné klonovací místo pro vložení sekvencí pro přenos. Takové zpracované kmeny jsou známy jako odzbrojené kmeny A. tumefaciens a umožňují účinnou transformaci sekvencí ohraničených T-oblastí do nukleárních genomů rostlin.
Povrchově sterilizované plochy listů se inokulují A. tumefaciens obsahující odzbrojenou cizí DNA a kultivují se po dva dny a potom se přenesou do média obsahujícího antibiotikum. Transformované výhonky se po ujmutí pěstují v prostředí obsahujícím vhodné antibiotikum, přenesou se do půdy a regenerují.
Jiná myšlenka předloženého vynálezu vytváří transgenní rostliny nebo progeny těchto rostlin obsahující izolovanou DNA podle vynálezu. Uvažují se monokotyledenní i dikotyledenní rostliny. Rostlinné buňky se transformují izolovanou DNA kódující A6-desaturázu některým způsobem transformace rostlin popsaným výše. Transformovaná rostlinná buňka, obvykle ve tvrdé kultuře nebo ploše listu se regeneruje na úplnou transgenní rostlinu způsoby v oboru dobře známými, které popsal například Horsch a sp. (1985) Science 227, 1129. Ve přednostním provedení transgenní rostlina je slunečnice, řepka olejka, kukuřice, tabák, arašíd nebo sojový bob. Protože progeny transformovaných rostlin zdědí DNA kódující A6-desaturázu, sadby nebo řízky z transformovaných rostlin se použijí pro zachování linie transgenní rostliny.
Předložený vynález dále vytváří způsob vyvíjení transgenních rostlin se zvýšeným obsahem GLA. Tento způsob spočívá v zavedení DNA kódující A6-desaturázu do rostlinných buněk
-6CZ 285471 B6 majících nízký obsah nebo žádnou GLA, avšak obsahujících LA, a v regeneraci rostlin se zvýšeným obsahem GLA z transgenních buněk. Zejména komerčně pěstované rostliny se uvažují jako transgenní organismy a jsou to, bez omezení, slunečnice, sojový bob, řepka olejka, kukuřice, arašíd a tabák.
Předložený vynález dále vytváří způsob vyvíjení transgenních organizmů obsahujících GLA. Tento způsob spočívá v zavedení DNA kódující A6-desaturázu do organizmu, kteiý nemá nebo má nízkou úroveň GLA, avšak obsahuje LA. V jiném provedení tento způsob spočívá v zavedení jednoho nebo více expresních vektorů obsahujících DNA kódující A12-desaturázu a Δ6desaturázu do organizmů, které neobsahují ani GLA ani LA. Organizmy, které neobsahují ani GLA ani LA se indukují, aby vyvíjely LA vyjádřením A12-desaturázy a potom se vyvíjí GLA následkem vyjádření A6-desaturázy. Expresní vektory obsahující DNA kódující A12-desaturázu nebo A12-desaturázu a A6-desaturázu mohou být konstruovány způsoby technologie rekombinant, které jsou v oboru známé (Sambrook a sp., 1989) a zveřejněná sekvence A12-desaturázy (Wada a sp. (1990) Nátuře (London) 347, 200-203). Navíc bylo objeveno v souhlase se předloženým vynálezem, že nukleotidy 2002-3081 ze SEQ. ID NO:1 kódují kyanobakteriální A12-desaturázu. Tudíž může být tato sekvence použita pro konstrukci příslušných expresních vektorů. Jako transgenní organizmus jsou zejména uvažovány komerčně pěstované rostliny, což jsou bez omezení slunečnice, sojový bob, řepka olejka, kukuřice, arašíd a tabák.
Předložený vynález dále zahrnuje způsob indukující odolnost rostlin proti ochlazení. Citlivosti na chladno může být následek přenosu fáze lipidů v buněčných membránách. Teplota přenosu fáze závisí na stupni nenasycení mastných kyselin v lipidech membrány a tedy zvýšení stupně nenasycenosti, například zavedením Δό-desaturázy pro přeměnu LA a GLA může indukovat nebo zlepšit odolnost proti ochlazení. Způsob podle vynálezu tudíž spočívá v zavedení DNA kódující A6-desaturázu do rostlinné buňky a v regeneraci rostliny se zvýšenou odolností proti ochlazení ze zmíněné transformované rostlinné buňky. Ve přednostním provedení rostlina je slunečnice, sojový bob, řepka olejka, kukuřice, arašid nebo tabák.
Přehled obrázků na výkresech
Vynález je znázorněn na výkresech, kde obr. 1 znázorňuje hydropathické profily dedukovaných sekvencí aminokyselin Synechocystis A6-desaturázy (obr. IA) a Á12-desaturázy (obr. IB), obr. 2 znázorňuje průběhy získané plyno-kapalinovou chromatografií pro divoký typ (obr. 2A) a transgenní Anabaena (obr. 2B), obr. 3 je diagram map kosmidů cSy75, cSyl3 a cSy7 s oblastmi přesahu a subklony a obr. 4 znázorňuje průběhy získané plynokapalinovou chromatografií pro divoký typ (obr. 4A) a transgenní tabák (obr. 4B).
Příklady provedení vynálezu
Příklad 1
Druhy a podmínky kultivace
Synechocystis (PCC 6803, ATCC 27184), Anabaena (PCC 7120, ATCC 27893) a Svnechococcus (PCC 7942, ATCC 33912) byly kultivovány fotoautotropicky při 30 °C v prostředí BG11N+ (Rippka a sp. (1979) J. Gen. Microbiol. 111, 1-61) při osvětlení inkandescenčními lampami (60 pE.m^.S’1). Kosmidy a plazmidy byly kultivovány a propagovány v Escheria Coli druh DH5a na médiu LB doplněném antibiotiky při standardních koncentracích,
-7CZ 285471 B6 jak popsal Maniatis a sp. (1982) Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor
Laboratory, Cold Spring, New York.
Příklad 2
Konstrukce genomické knihovny kosmidu Synechocvstis
Celková genomická DNA ze Synechocvstis (PCC 6803) byla částečně digestována se Sau3A a frakcionována na sacharózovém gradientu (Ausubel a sp. (1987) Current Protocols in Molecular Biology, Greene Publishing Associates and Wiley Interscience, New York). Frakce obsahující 30 až 40 kb fragmentů DNA byly kultivovány a ligovány do defosforylovaného místa BamHI vektoru kosmidu, pDUCA7 (Buikema a sp. (1991) J. Bacteriol. 173, 1879-1885). Ligovaná DNA byla zabalena in vitro, jak popsal Ausubel a sp. (1987), a zabalené fágy byly propagovány v E. coli DH5a obsahující methylázový pomocný plasmid Aval a Eco4711, pRL528 jak popsal Buikema a sp. (1991). Celek 1152 kolonií byl izolován náhodně a udržován individuálně ve dvanácti 96-stěnových mikrotitrových deskách.
Příklad 3
Vyjádření zisku funkce GLA v Anabaena
Anabaena (PCC 7120), vláknitá kyanobakterie, neobsahuje GLA, avšak obsahuje významná množství kyseliny linolové, prekurzoru pro GLA, viz obr. 2 a tabulku 2. Knihovna kosmidu Synechocvstis popsaná v příkladu 2 byla konjugována do Anabaena (PCC 7120) pro identifikaci transkonjugantů, které vyvíjejí GLA. Buňky Anabaena byly kultivovány do mid-log fáze v kapalném prostředí BG11N+ a resuspendovány ve stejném prostředí na konečnou koncentraci asi 2xl08 buněk na 1 ml. Kultura midlog fáze E. coli RP4 (Burkardt a sp. (1979) J. Gen. Microbiol. 114, 341-348) kultivovaná vLB obsahujícím ampicilin byla promyta a resuspendována v čerstvém LB prostředí. Anabaena a RP4 byly potom smíchány a nastříkány na desky BG11N+ obsahující 5% LB. Genomická knihovna kosmidu byla replikované nanesena na desky LB obsahující 50 pg/ml kanamycinu a 17,5 pm/ml chloramfenikolu a potom byla nanesena na desky BG11N+ obsahující Anabaena a RP4. Po 24 hodinách inkubace při 30 °C bylo podloženo 30 pg/ml neomycinu a inkubace při 30 °C pokračovala až do objevení transkonjugantů.
Individuální transkonjuganty byly izolovány po konjugaci a kultivovány ve 2 ml kapalného prostředí BG11N+ s 15 pg/ml neomycinu. Methylestery mastných kyselin byly připraveny z kultur divokého typu a z kultur obsahujících oblasti deseti transkonjugantů následovně. Kultury divokého typu a transgenní kyanobakteriální kultury byly vytěženy centrifugací a promyty dvakrát destilovanou vodou. Methylestery mastných kyselin byly extrahovány z těchto kultur jak popsal Dahmer a sp. (1989) J. Amer. Oil Chem. Soc. 66, 543-548 a byly analyzovány plynokapalinovou chromatografíí (GLC) použitím chromatografii Tracor 560 opatřeného detektorem ionizace vodíkového plamene a kapilární kolonou (30 m x 0,25 mm vázaný FSOT Superox II, Alltech Associates lne., IL). Retenční doby a kochromatografíe standardů (získaných od Sigma Chemical Co.) byly použity pro identifikaci mastných kyselin. Střední složení mastných kyselin bylo určeno jako poměr vrcholové plochy každé Cl8 mastné kyseliny normalizované k mezinárodní normě.
Representativní GLC profily jsou znázorněny na obr. 2. Jsou znázorněny methylestery mastné kyseliny Cl8. Vrcholy byly identifikovány srovnáním časů eluce se známými normami metylesterů mastných kyselin a byly ověřeny plynovou chromatografii a hmotovou spektrografíí. Obr. 2A znázorňuje GLC analýzu mastných kyselin divokého typu Anabaena. Šipka označuje dobu migrace GLA. Obr. 2B jsou profil GLC mastných kyselin transkonjugantů Anabaena
-8CZ 285471 B6 s pAM542+1.8F. Dvě vyvíjecí oblasti GLA (ze 25 oblastí reprezentujících 250 transkonjugantů) byly identifikovány jako vyvíjející GLA. Jednotlivé transkonjuganty každé oblasti pozitivní na GLA byly analyzovány na vyvíjení GLA. Dva nezávislé transkonjuganty, AS 13 a AS75, každý zjedné oblasti, byly identifikovány jako vyjadřující významné úrovně GLA a obsahující kosmidy cSyl3 popřípadě cSy75, viz obr. 3. Přesah kosmidů je v oblasti dlouhé přibližně 7,5 kb. Fragment 3.5 kb Nhel kosmidu cSy75 byl reklonován ve vektoru pDUCA7 a převeden do Anabaena s výsledkem zisku funkce vyjádření GLA (Tabulka 2).
Dva Nhel/Hind III subfragmenty (1.8 a 1.7 kb) ze 3.5 kb Nhe I fragmentu ze cSy75-3.5 byly subklonovány do pBLUESCRJPT (Stratagene), viz obr. 3, pro sekvenční zpracování. Byly provedeny standardní techniky molekulární biologie, jak je popisuje Maniatis a sp. (1982) a Ausubel a sp. (1987). Dideoxy sekvenční zpracování (Sanger a sp. (1977) Proč. Nati. Acad. Sci. USA 74, 5463-5467) pBS1.8 bylo provedeno se SEQUENASE (United States Biochemical) na obou řadách použitím specifických oligonukleotidů jako primérů syntetizovaných v Advanced DNA Technologies Laboratory (Biology Department, Texas A & M University). Sekvenční analýza DNA byla provedena sGCG (Madison, WI) programovým vybavením, které popsal Devereux a sp. (1984) Nucleic Acids Res. 12, 387-395.
Oba Nhel/HindlII subfragmenty byly přeneseny do konjugovaného vektoru vyjádření, AM542, v dopředně i zpětné orientaci s ohledem na promotor kyanobakteriální karboxylázy a byly zavedeny do Anabaena konjugací. Transkonjuganty obsahující 1.8 kb fragment v dopředně orientaci (AM542-1.8F) vyvíjely významná množství GLA a oktadekatetraeonové kyseliny, viz obr. 2 a tabulku 2. Transkonjuganty obsahující jiné konstrukty, buď zpětně orientovaný 1.8 kb fragment nebo dopředně a zpětně orientovaný 1.7 kb fragment, nevyvíjely zjistitelné úrovně GLA, viz tabulku 2.
Obr. 2 srovnává profil mastné kyseliny Cl8 extraktu z divokého typu Anabaena (obr. 2A) s profilem transgenní Anabaena obsahující 1.8 kb fragment cSy75-3.5 vdopředné orientaci (obr. 2B). Analýza metylesterů mastných kyselin z AM542-1.8F metodou GLC objevila vrchol s retenční dobou identickou s retenční dobou autentického standardu GLA. Analýza tohoto vrcholu plynovou chromatografií a hmotovou spektrometrií (GC-MS) potvrdila, že měl stejný vzor hmotové fragmentace jako srovnávací vzorek GLA. Transgenní Anabaena s alterovanými úrovněmi polynenasycených mastných kyselin byly v rychlosti růstu a v morfologii podobné divokému typu.
Tabulka 2
Složení mastných kyselin C18 v divokém typu a ve transgenní kyanobakterii
| Druh | Mastná kyselina (%) | |||||
| 18:0 | 18:1 | 18:2 | 18:3 (a) | 18:3 (y) | 18:4 | |
| Divoký typ | ||||||
| Sinechocystis (sp. PCC6803) | 13.6 | 4.5 | 54.5 | - | 27.3 | - |
| Anabaena (sp. PCC7120) | 2.9 | 24.8 | 37.1 | 35.2 | - | - |
| Synechococcus (Sp. PCC7942) | 20.6 | 79.4 | - | - | - | - |
-9CZ 285471 B6
Tabulka 2 - pokračování
| Druh | Mastná kyselina (%) | |||||
| 18:0 | 18:1 | 18:2 | 18:3 («) | 18:3 (7) | 18:4 | |
| Transkonjuganty Anabaena | ||||||
| cSy75 | 3.8 | 24.4 | 22.3 | 9.1 | 27.9 | 12.5 |
| cSy75-3.5 | 4.3 | 27.6 | 18.1 | 3.2 | 40.4 | 6.4 |
| pAM542-1.8F | 4.2 | 13.9 | 12.1 | 19.1 | 25.4 | 25.4 |
| PAM542-1.8R | 7.7 | 23.1 | 38.4 | 30.8 | - | - |
| pAM542-1.7F | 2.8 | 27.8 | 36.1 | 33.3 | - | - |
| pAM542-1.7R | 2.8 | 25.4 | 42.3 | 29.6 | - | - |
| Transformanty Synechococcus | ||||||
| pAM854 | 27.8 | 72.2 | - | - | - | - |
| pAM854-A12 | 4.0 | 43.2 | 46.0 | - | - | - |
| pAM854-A6 | 18.2 | 81.8 | - | - | - | - |
| pAM854-A6 & A12 | 42.7 | 25.3 | 19.5 | - | 16.5 | - |
18.0, kyselina stearová; 18.1, kyselina olejová; 18.2, kyselina linolová; 18.3 (a), kyselina alinolenová:18.3 (γ), kyselina γ-linolenová; 18.4, kyselina oktadekatetraenová
Příklad 4
Transformace Synechococcus geny A6-desaturázy a A12-desaturázy
Třetí kosmid, cSy7, který obsahuje gen A12-desaturázy, byl izolován stíněním genomické knihovny Synechocvstis s oligonukleotidem syntetizovaným ze zveřejněné genové sekvence Svnechocystis A12-desaturázy (Wade a sp. (1990) Nátuře (London) 347, 200-203). Fragment 1.7 kb Aval z tohoto kosmidu obsahující gen A12-desaturázy byl identifikován a použit jako vzorek pro důkaz, že cSyl3 obsahuje nejen gen A6-desaturázy, ale také gen A12-desaturázy (obr. 3). Genomická Southem blot analýza dále ukázala, že geny A6-desaturázy i Δ12desaturázy jsou jediné v genomu Svnechocystis, takže oba funkcionální geny zavedené v desaturaci mastné kyseliny Cl8 jsou v genomu Svnechocystis těsně svázány.
Jednobuněčná kyanobakterie Synechococcus (PCC 7942) neobsahuje linolovou kyselinu ani GLA (3). Geny A12-desaturázy a A6-desaturázy byly klonovány individuálně a spolu do pAM854 (Bustos a sp. (1991) J. Bacteriol. 174, 7525-7533), kyvadlového vektoru který obsahuje sekvence nutné pro integraci cizí DNA do genomu Synechococcus (Golden a sp. (1987) Methods in Enzymol. 153, 215-231). Synechococcus byl transformován s těmito genovými konstrukty a byly kultivovány kolonie. Metylestery mastných kyselin byly extrahovány z transgenního Synechococcus a analyzovány metodou GLC.
Tabulka 2 ukazuje, že základní mastné kyseliny divokého typu Synechococcus jsou kyselina stearová (18:0) a kyselina olejová (18:1). Synechococcus transformovaný spAM854-A12 vyjadřoval linolovou kyselinu (18:2) přídavně k základním mastným kyselinám. Transformanty spAM854-A6 a Δ12 vyvíjely jak linoláty tak GLA (tabulka 1). Výsledky ukázaly, že Synechococcus obsahující geny A12-desaturázy i A6-desaturázy získal schopnost zavést druhou dvojnou vazbu v poloze A12-desaturázy a třetí dvojnou vazbu v poloze A6-desaturázy u mastných kyselin Cl8. Nicméně ve transformantu obsahujícím pAM854-A6 nebyly pozorovány
-10CZ 285471 B6 žádné změny ve složení mastných kyselin, což znamená, že při nepřítomnosti substrátu syntetizovaného Á12-desaturázou je Δό-desaturáza neaktivní. Tento pokus dále potvrzuje, že
Nhel/HindlII fragment (obr. 3) obsahuje oblast kódování i oblast promotoru genu Δό-desaturázy
Synechocystis. Transgenní Synechococcus se změněnými úrovněmi polynenasycených mastných kyselin byly v rychlosti růstu a morfologii podobné divokému typu.
Příklad 5
Sekvence nukleotidů Δό-desaturázy
Sekvence nukleotidů 1.8 kb fragmentu cSy75-3.5 obsahující gen funkcionální Δό-desaturázy byla určena. Otevřený čtecí úsek kódující polypeptid 359 aminokyselin byl identifikován (obr. 4). Hydropathická analýza metodou Kyte-Doodlittle (Kyte a sp. (1982) J. Mol. Biol. 157, 105-132) identifikovala dvě oblasti hydrofóbních aminokyselin, které by mohly představovat domény transmembrány (obr. IA). Dále je hydropathický profil Δό-desaturázy podobný hydropathickému profilu A12-desaturázy (obr. IB; Wada a sp.) a také A9-desaturázy (Thiede a sp. (1986) J. Biol. Chem. 26, 13230-13235). Podobnost sekvence mezi Δό-desaturázou a Δ12desaturázou Synechocystis je však nižší než 40% na úrovni nukleotidů asi 18% na úrovni aminokyselin.
Příklad 6
Přenos kyanobakteriální Δό-desaturázy do tabáku
Gen kyanobakteriální Δό-desaturázy byl mobilizován do rostlinného expresního vektoru a přenesen na tabák použitím Agrobacterium pro přenos genu. Pro zajištění, aby přenesená desaturáza byla vhodně vyjádřena v listech a vyvíjejících se semenech a aby produkt genu desaturázy byl zacílen k endoplasmatickému retikulu nebo chloroplastu, byly zkonstruovány rozličné expresní kazety s otevřeným čtecím úsekem (ORF) Δ-desaturázy Synechocystis. Složky těchto kazet jsou: (i) 35S promotor nebo specifický promotor semena odvozený od genu helianthininu slunečnice pro způsobení vyjádření genu Δό-desaturázy ve všech rostlinných tkáních popřípadě pouze ve vyvíjejících se semenech, (ii) peptidy domnělého signálu buď z genu extenzinu mrkve, nebo z genu halianthininu slunečnice pro zacílení nové syntetizované Δό-desaturázy do ER, (iii) sekvenci signálů pro retenci v lumen ER (KDEL) u COOH-konce ORF Δό-desaturázy a (iv) optimizovaný tranzitní peptid, aby zacílil Δό-desaturázu do chloroplastu. Promotor 35S je derivát pRTL2, který popsal Rastrepo a sp. (1990). Sekvence optimizovaných tranzitních peptidů je popsána, viz Van de Broeck a sp. (1985). Peptid signálu extenzinu z mrkve popsal Chen a sp. (1985) EMBO J. 9, 2145.
Byly vyrobeny rostliny transgenního tabáku obsahující gen kyanobakteriální desaturázy sestávající z genu Δό-desaturázy Synechocystis fúzovaného na endoplasmickou sekvenci retikulámí retence (KDEL) a peptid signálu způsobeného promotorem CaMC 35S. Zesílení PCR genomové DNA transgenního tabáku ukazuje, že gen Δό-desaturázy byl zaveden do genu tabáku. Metylestery mastných kyselin těchto rostlin transgenního tabáku byly extrahovány a analyzovány plyno-kapalnou chromatografií (GLC). Tyto transgenní tabáky nahromadily významné množství GLA (obr. 4). Obr. 4 znázorňuje metylestery mastných kyselin stanovené pomocí GLC. Vrcholy byly identifikovány srovnáním dob eluce se známými standardy metylesterů mastných kyselin. Tak mohou být kyanobakteriální geny působící v metabolismu mastných kyselin užity pro vyvíjení transgenních rostlin se změněným složením mastných kyselin.
-11 CZ 285471 B6 (2) Informace pro SEQ ID NO: 1:
(i) charakteristiky sekvence:
(A) Délka: 3588 páru baze (B) Typ: nukleová kyselina (C) Počet větví: obě (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: DNA (genomická) (ix) Provedení:
(A) Jméno/Klíč: CDS ίο (B) Umístění: 2002..3081 (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 1:
| GCTAGCCACC | AGTGACGATG | CCTTGAATTr | GGCCATTCTG | ACCCAGGCCC | GTATTCTGAA | 60 |
| TCCCCGCATT | CGCATTGTTA | ATCGTTTGTT | CAACCATGCC | CTGGGTAAAČ | GTTTAGACAC | 120 |
| CACC1IGuCA | GACCACGTTA | GTTTGAGTGT | TTCCGCCCTG | GCGGCCCCGA | TrmTccrr | 180 |
| TGCGGCTTTG | GGCAATCAGG | CGATCGGGCA | ATTGCGTTTG | TTTGACCAGA | CTTGGCCCAT | 240 |
| TCAGGAAATT | GTCATTCACC | AAGACCATCC | CTGGCTCAAT | TTACCCCTGG | CGGATTTATG | 300 |
| GGATGATCCG | AGCCGAATGT | TGATCTATTA | CCTACCGGCC | CACAGTGAAA | CGGATTTAGT | 36Π |
| AGGCGCAGTG | GTGAATAATT | TAACGTTGCA | ATCTGGGGAC | CATTTAATAG | TGGGACAAAA | 420 |
| ACCCCAACCC | AAGACCAAAC | GGCGATCGCC | TTGGCGCAAA | TITTCCAAAC | TGATTACCAA | 480 |
| CCTGCGGGAG | TATCAGCGGT | ATGTCCAACA | GGTGATATGG | GTGGTGTTGT | TTTTATTGTT | 540 |
| GArtíAi mi | CTGGCCACCT | TCATCTACGT | TTCCATTGAT | CAACATATTG | CCCCAGTGGA | 600 |
| CGCGTTGTAT | TTTTCCGTGG | GCATGATTAC | CGGGGCCGGT | GGCAAGGAAG | AGGTGGCCGA | 660 |
| AAAGTCCCCC | GATATCATCA | AAGTATTCAC | AGTGGTGATG | ATGATCGCCG | GGGCGGGGGT | 720 |
| GATTGGTATT | TGTTATGCCC | TACTGAATGA | TTTCATCCTT | GGCAGTCGCT | TTAGTCAGTT | 780 |
| TTTGGATGCG | GCCAAGTTAC | CCGATCGCCA | TCACATCATC | ATTTGTGGGC | TGGGGGGAGT | 840 |
| GAGCATGCCC | ATTATTGAAG | AGTTAATTCA | CCAGGGCCAT | GAAATTGTGG | TAATCGAAAA | 900 |
| GGATACAGAT | AATCGTTTCT | TGCATACGGC | CCGCTCCCTG | GGGGTGCCCG | TAATTGTGGA | 960 |
-12CZ 285471 B6
| GGATGCCCGC | CTAGAAAGAA | CGTTGGCCTG | CGCCAATATC | AACCGAGCCG | AAGCCATTGT | 1020 |
| ggtggccacc | AGCGACGACA | CCGTTAACTT | GGAAATTGGC | CTAACTGCCA | AGGCGATCGC | 1080 |
| CCCTAGCCTG | CCAGTGGTGT | TGCGTTGCCA | GGATGCCCAG | TTTAGCCTGT | CCCTGCAOGA | 1140 |
| AGTATTTGAA | TTTGAAACGG | TGCTTTGTCC | GGCGGAATTG | GCCACCTATT | CCTTTGCGGC | 1200 |
| GGCGGCCCTG | GGGGGCAAAA | TTTTGGGCAA | CGGCATGACC | GATGATTTGC | TGTGGGTAGC | 1260 |
| CCTAGCCACC | TTAATCACTC | CTAACCATCC | CTTTGCCGAC | CAATTGGTTA | AAATTGCAGC | 1320 |
| CCAAAAGTCT | GATTTCGTTC | CCCTCTATCT | AGAACGGGGT | GGCAAAACCA | TCCATAGCTG | 1380 |
| GGAATTATTG | GGTACCCATC | TCGACTCTGG | AGACGTGTTG | TATTTAACCA | TGCCCGCCAC | 1440 |
| TGCCCTAGAG | CAACTTTGGC | GATCGCCCCG | TGCCACTGCT | GATCCTCTGG | AcrcTrrrrr | 1500 |
| GGTTTAGCAT | GGGGGGATGG | AACTCTTGAC | TCGGCCCAAT | GGTGATCAAG | AAAGAACGCT | 1560 |
| TTGTCTATGT | TTAGTATTTT | TAAGTTAACC | AACAGCAGAG | GATAACTTCC | AAAAGAAATT | 1620 |
| AAGCTCAAAA | AGTAGCAAAA | taagtttaat | TCATAACTGA | GTTTTACTGC | TAAACAGCGG | 1680 |
| TGCAAAAAAG | TCAGATAAAA | TAAAAGCTTC | acttcggttt | TATATTGTGA | CCATGGTTCC | 1740 |
| CAGGCATCTG | CTCTAGGGAG | tttttccgct | GCCTTTAGAG | AGTATTTTCT | CCAAGTCGGC | 1800 |
| TAACTCCCCC | ΛΧ 1 1 1 X | AAAATCATAT | AuAuAuxAlC | CCAATATTGC | CAGAGCTTTG | 1860 |
| ATGACTCACT | GTAGAAGGCA | GACTAAAATT | CTAGCAATGG | ACTCCCAGTT | GGAATAAATT | 1920 |
| TTTAGTCTCC | CCCGGCGCTG | GAGTTTTTTT | GTAGTTAATG | GCGu 1Λ ť ΑΛΤ | GTGAAAGTTT | 1980 |
| TTTATCTATT TAAATTTATA A | ATG | CTA | ACA | GCG | GAA | AGA | ATT | AAA | TTT | ACC | 2031 | |||||
| Met | Leu | Thr | Ala | Glu | Arg | Ile | Lys | Phe | Thr | |||||||
| 1 | 5 | 10 | ||||||||||||||
| CAG | AAA | CGG | GGG | TTT | CGT | CGG | GTA | CTA | AAC | CAA | CGG | GTG | GAT | GCC | TAC | 2079 |
| Gin | Lys | Arg | Gly | Phe | Arg | Arg | Val | Leu | Asn | Gin | Arg | Val | Asp | Ala | Tyr | |
| 15 | 20 | 25 | ||||||||||||||
| TTT | GCC | GAG | CAT | GGC | CTG | ACC | CAA | AGG | GAT | AAT | CCC | TCC | ATG | TAT | CTG | 2127 |
| Phe | Ala | Glu | His | Gly | Leu | Thr | Gin | Arg | Asp | Asn | Pro | Ser | Met | Tyr | Leu | |
| 30 | 35 | 40 |
| AAA ACC | CTG ATT ATT | GTG CTC val Leu | TGG TTG TTT TCC GCT TGG GCC TTT | GTG Val | 2175 | |||||||||||
| Lys | Thr | Leu 45 | Ile | Ile | Trp 50 | Leu Phe | Ser | Ala Trp Ala Phe 55 | ||||||||
| CTT | TTT | GCT | CCA | GTT | ATT | TTT | CCG | GTG | CGC | CTA | CTG | GGT | TGT | ATG | GTT | 2223 |
| Leu | Phe | Ala | Pro | Val | ile | Phe | Pro | Val | Arg | Leu | Leu | Gly | Cys | Met | Val | |
| 60 | 65 | 70 | ||||||||||||||
| TTG | GCG | ATC | GCC | TTG | GCG | GCC | TTT | TCC | TTC | AAT | GTC | GGC | CAC | GAT | GCC | 2271 |
| Leu | Ala | Ile | Ala | Leu | Ala | Ala | Phe | Ser | Phe | Asn | Val | Gly | His | Asp | Ala | |
| 75 | 80 | 85 | 90 | |||||||||||||
| AAC | CAC | AAT | GCC | TAT | TCC | TCC | AAT | CCC | CAC | ATC | AAC | CGG | GTT | CTG | GGC | 2319 |
| Asn | His | Asn | Ala | Tyr | Ser | Ser | Asn | Pro | His | Ile | Asn | Arg | val | Leu | Gly | |
| 95 | 100 | 105 | ||||||||||||||
| ATG | ACC | TAC | GAT | TTT | GTC | GGG | ΤΤΛ | TCT | AGT | TTT | CTT | TGG | CGC | TAT | CGC | 2367 |
| Met | Thr | Tyr | Asp | Phe | Val | Gly | Leu | Ser | Ser | Phe | Leu | Trp | Arg | Tyr | Arg | |
| 110 | 115 | 120 | ||||||||||||||
| CAC | AAC | TAT | TTG | CAC | CAC | ACC | TAC | ACC | AAT | ATT | CTT | GGC | CAT | GAC | GTG | 2415 |
| His | Asn | Tyr | Leu | His | His | Thr | Tyr | Thr | Asn | Ile | Leu | Gly | His | Asp | Val | |
| 125 | 130 | 135 |
-13 CZ 285471 B6
| GAA ATC CAT GGA GAT | GGC GCA GTA CGT ATG AGT CCT GAA CAA GAA CAT | 2453 | |||||||||||
| Glu | Ile 140 | His | Gly Asp | Gly | Ala 145 | Val | Arg | Met | Ser | Pro 150 | Glu | Gin Glu His | |
| GTT | GGT | ATT | TAT CGT | TTC | CAG | CAA | TTT | TAT | ATT | TGG | GGT | TTA TAT CTT | 2511 |
| Val | Gly | Ile | Tyr Arg | Phe | Gin | Gin | Phe | Tyr | Ile | Trp | Gly | Leu Tyr Leu | |
| 155 | 160 | 165 | 170 | ||||||||||
| TTC | ATT | CCC | TTT TAT | TGG | TTT | CTC | TAC | GAT | GTC | TAC | CTA | GTG CTT ΛΛΤ | 2559 |
| Phe | Ile | Pro | Phe Tyr | Trp | Phe | Leu | Tyr | Asp | Val | Tyr | Leu | Val Leu Asn | |
| 175 | 180 | 185 | |||||||||||
| AAA | GGC | AAA | TAT CAC | GAC | CAT | AAA | ATT | CCT | CCT | TTC | CAG | CCC CTA GAA | 2607 |
| Lys | Gly | Lys | Tyr His | Asp | His | Lys | Ile | Pro | Pro | Phe | Gin | Pro Leu Glu | |
| 190 | 195 | 200 | |||||||||||
| TTA | GCT | AGT | TTG CTA | GGG | ATT | AAG | CTA | TTA | TGG | CTC | GGC | TAC GTT TTC | 2655 |
| Leu | Ala | Ser | Leu Leu | Gly | Ile | Lys | Leu | Leu | Trp | Leu | Gly | Tyt Val Phe | |
| 205 | 210 | 215 | |||||||||||
| GGC | TTA | CCT | CTG GCT | CTG | GGC | ΤΓΓ | TCC | ATT | CCT | GAA | > GTA | TTA ATT GGT | 2703 |
| Gly | Leu | Pro | Leu Ala | Leu | Gly | Phe | Ser | Ile | Pro | Glu | Val | Leu Ile Gly | |
| 220 | 225 | 230 | |||||||||||
| GCT | TCG | GTA | ACC TAT | ATG | ACC | TAT | GGC | ATC | GTG | GTT | TGC | ACC ATC TTT | 2751 |
| Ala | Ser | Val | Thr Tyr | Met | Thr | Tyr | Gly | Ile | Val | val | cys | Thr Ile Phe | |
| 235 | 240 | 245 | 250 | ||||||||||
| ATG | CTG | GCC | CAT CTG | TTG | GAA | TCA | ACT | GAA | TTT | CTC | ACC | CCC GAT GGT | 2799 |
| Met | Leu | Ala | His Val | Leu | Glu | Ser | Thr | Glu | Phe | Leu | Thr | Pro Asp Gly | |
| 255 | 260 | 255 | |||||||||||
| GAA | TCC | GGT | GCC ATT | GAT | GAC | GAG | TGG | GCT | ATT | TGC | CAA | ATT CGT ACC | 2847 |
| Glu | Ser | Gly | Ala Ile | Asp | Asp | Glu | Trp | Ala | Ile | Cys | Gin | Ile Arg Thr | |
| 270 | 275 | 280 | |||||||||||
| ACG | GCC | AAT | TTT GCC | ACC | AAT | AAT | CCC | TTT | TGG | AAC | TGG | TTT TGT GGC | 2895 |
| Thr | Ala | Asn | phe Ala | Thr | Asn | Asn | Pro | Phe | Trp | Asn | Trp | Phe Cys Gly | |
| 285 | 290 | 295 | |||||||||||
| GGT | TTA | AAT | CAC CAA | GTT | ACC | CAC | CAT | CTT | TTC | CCC | AAT | ATT TGT CAT | 2943 |
| Gly | Leu | Asn | His Gin | Val | Thr | His | His | Leu | Phe | Pro | Asn | Ile Cys His | |
| 300 | 305 | 310 | |||||||||||
| ATT | CAC | TAT | CCC CAA | TTG | GAA | AAT | ATT | ATT | AAG | GAT | GTT | TGC CAA GAG | 2991 |
| Ile | His | Tyr | Pro Gin | 1Λυ | Glu | Asn | Ile | Ile | Lys | Asp | val | Cys Gin Glu | |
| 315 | 320 | 325 | 330 | ||||||||||
| TTT | GGT | GTC | GAA TAT | AAA | GTT | TAT | CCC | ACC | TTC | ΑΛΑ | GCG | GCG ATC GCC | 3039 |
| Phe | Gly | Val | Glu Tyr | Lys | Val | Tyr | Frc | Thr | Phe | Lys | Ala | Ala Ile Ala | |
| 335 | 340 | 345 | |||||||||||
| TCT | AAC | TAT | CGC TGG | CTA | GAG | GCC | ATG | GGC | AAA | GCA | TCG | TGACATTGCC | 3088 |
| Ser | Asn | Tyr | Arg Trp | Leu | Glu | Ala | Met | Gly | Lys | Ala | Ser | ||
| 350 | 355 | 360 |
AGCAAAATGG
CAAAATCCCT
3148
TTGGGATTGA
CGTAAATCTA
TGATCGAAGC
CTTTCTGTTG
CCCGCCGACC
AAATCCCCGA
TGCTGACCAA
AGGTTGATGT
TGGCATTGCT
CCAAACCCAC
3208
TTTGAGGGGG
TTCATTGGCC
GCAGTTTCAA
GCTGACCTAG
GAGGCAAAGA
TTGGGTGATT
3268
TTGCTCAAAT
CCGCTGGGAT
ATTGAAAGGC
TTCACCACCT
TTGGTTTCTA
CCCTGCTCAA
3328
TGGGAAGGAC
AAACCGTCAG
AATTGTTTAT
TCTGGTGACA
CCATCACCGA
CCCATCCATG
3388
TGGTCTAACC
CAGCCCTGGC
CAAGGCTTGG
ACCAAGGCCA
TGCAAATTCT
CCACGAGGCT
3448
AGGCCAGAAA
AATTATATTG
GCTCCTGATT
TCTTCCGGCT
ATCGCACCTA
CCGATTTTTG
3508
AGCATTITTG
CCAAGGAATT
CTATCCCCAC
TATCTCCATC
CCACTCCCCC
GCCTGTACAA
3568
- 14CZ 285471 B6
3588 aattitatcc atcagctagc (2) Informace pro SEQ ID NO:2:
(i) charakteristiky sekvence:
(A) Délka: 359 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (D) Topologie: lineami (ii) Typ molekuly: protein (xi) opis sekvence: SEQ IDN0:2:
| Met | Leu | Thr | Ala | Glu | Arg | Ile | Lys | Phe | Thr | Gin | Lys | Arg | Gly | rhe | Arg |
| 1 | 5 | 10 | 15 | ||||||||||||
| Arg | Val | Leu | Asn | Gin | Arg | Val | Asp | Ala | Tyr | Phe | Ala | Glu | His | Gly | Leu |
| 20 | 25 | 30 | |||||||||||||
| Thr | Gin | Aru | Asp | Asn | Pro | Ser | Met | Tyr | Leu | Lys | Thr | Leu | Ile | Ile | Val |
| 35 | 40 | 45 | |||||||||||||
| Leu | Trp | Leu | Phe | Ser | Ala | Trp | Ala | Phe | Val | Leu | Phe | Ala | Pro | Val | Ile |
| 50 | 55 | 60 | |||||||||||||
| Phe | Pro | Val | Ara | Leu | Leu | G)y | Cys | Met | val | Leu | Ala | Ile | Ala | Leu | Ala |
| 65 | 70 | 75 | 80 | ||||||||||||
| Ala | Phe | Ser | Phe | Asn | val | Gly | His | Asp | Ala | Asn | His | Asn | Ala | Tyr | Ser |
| 85 | 90 | 95 | |||||||||||||
| Ser | Asn | Pra | His | Ile | Asn | Arg | val | Leu | Gly | Met | Thr | Tyr | Asp | Phe | Val |
| 100 | 105 | 110 | |||||||||||||
| Gly | Leu | Ser | Ser | Phe | Leu | Trp | Ara | Tyr | Arg | His | Asn | Tyr | Leu | His | His |
| 115 | 120 | 125 | |||||||||||||
| Thr | Tyr | Thr | Asn | Ile | Leu | Gly | His | Asp | Val | Glu | Ile | His | Gly | Asp | Gly |
| 130 | 135 | 140 | |||||||||||||
| Ala | Val | Arg | Met | Ser | Pro | Glu | Gin | Glu | His | Val | Gly | Ile | Tyr | Arg | Phe |
| 145 | 150 | 155 | 160 | ||||||||||||
| Gin | Gin | Phe | Tyr | Ile | Trp | Gly | Leu | Tyr | Leu | Phe | Ile | Pro | Phe | Tyr | Trp |
| 165 | 170 | 175 |
| Phe | Leu | Tyr | Asp Val Tyr Leu Val 180 | Leu Asn 185 | Lys Gly | Lys | Tyr 190 | His | Asp | ||||||
| His | Lys | Ile | Pro | Pro | Phe | Gin | Pro | Leu | Glu | Leu | Ala | Ser | Leu | Leu | Gly |
| 195 | 200 | 205 | |||||||||||||
| Ile | tys | Leu | Leu | Trp | Leu | Gly | Tyr | Val | Phe | Gly | Leu | Pro | Leu | Ala | Leu |
| 210 | 215 | 220 | |||||||||||||
| Gly | Phe | Ser | Ile | Pro | Glu | Val | Leu | Ile | Gly | Ala | Ser | val | Thr | Tyr | Met |
| 225 | 230 | 235 | 240 | ||||||||||||
| Thr | Tyr | Gly | Ile | Val | Val | Cys | Thr | Ile | Phe | Met | Leu | Ala | His | val | Leu |
| 245 | 250 | 255 | |||||||||||||
| Glu | Ser | Thr | Glu | Phe | Leu | Thr | Pro | Asp | Gly | Glu | Ser | Gly | Ala | Ile | Asp |
| 260 | 265 | 270 |
- 15 CZ 285471 B6
A«P Glu Trp Ala Ile Cys Cln Ile Arg Thr Thr Ala Asn Phe Ala Thr
275 280 285
Asn Asn Pro Phe Trp Asn Trp Phe Cys Gly Gly Leu Asn Mls Gin Val 290 295300
Thr His His Leu Phe Pro Asn Ile Cys His Ile His Tyr Pro GinLeu
305 3J0 31$320
Glu Asn Ile Ile Lys Asp Va) Cys Gin Glu Phe Gly Val Glu TyrLys
325 330335
Val Tyr Pro Thr Phe Lys Ala Ala Ile Ala Ser Asn Tyr Arg Trp Leu
340 345350
Glu Ala Met Gly Lys Ala Ser
355 (2) Informace pro SEQ ID NO:3:
(i) charakteristiky sekvence:
(A) Délka: 1884 párů baze (B) Typ: nukleová kyselina (C) Počet větví: obě (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: DNA (genomická) io (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO:3:
AGCTTCACTT CGGTTHATA TTGTGACCAT GGTTCCCAGG CATCTGCTCT AGGGAGTTTT60
TCCGCTGCCT TTAGAGAGTA TTTTCTCCAA GTCGGCTAAC ŤCCCCCATTT TTAGGCAAAA120
TCATATACAG ACTATCCCAA TATTGCCAGA GCTTTGATGA CTCACTGTAG AAGGCAGACT180
AAAATTCTAG CAATGGACTC CCAGTTGGAA ΤλλΑΤΤΓΓΤλ GTCTCCCCCG GCGCTGGAGTZ40
TTTTTTGTAG TTAATGGCGG TATAATGTGA AAGTTrTTTA TCTATTTAAA TTTATAAATG300
CTAACAGCGG AAAGAATTAA ATTTACCCAG AAACGGGGGT TTCGTCGGGT ACTAAACCAA360
CGGGTGGATG CCTACTTTGC CGAGCATGGC CTGACCCAAA GGGATAATCC CTCCATGTAT420
CTGAAAACCC TGATTATTGT GCTCTGGTTG TTTTCCGCTT GGGCCTTTGT GCTTTTTGCT480
CCAGTTATTT TTCCGGTGCG CCTACTGGGT TGTATGGTTT TGGCGATCGC CTTGGCGGCC540
TTTTCCTTCA ATGTCGGCCA CGATGCCAAC CACAATGCCT ATTCCTCCAA TCCCCACATC600
AACCGGGTTC TGGGCATGAC CTACGATTTT GTCGGGTTAT CTAGTTTTCT TTGGCGCTAT660
CGCCACAACT ATTTGCACCA CACCTACACC AATATTCTTG GCCATGACGT GGAAATCCAT720
GGAGATGGCG CAGTACGTAT GAGTCCTGAA CAAGAACATG TTGGTATTTA TCGTTTCCAG780
CAATTTTATA TTTGGGGTTT ATATCTTTTC ATTCCCTTTT ATTGGTTTCT CTACGATGTC840
TACCTAGTGC TTAATAAAGG CAAATATCAC GACCATAAAA TTCCTCCTTT CCAGCCCCTA900
GAATTAGCTA GTTTGCTAGG GATTAAGCTA TTATGGCTCG GCTACGTTTT CGGCTTACCT960
CTGGCTCTGG GCTTTTCCAT TCCTGAAGTA TTAATTGGTG CTTCGGTAAC CTATATGACC1020
TATGGCATCG TGGTTTGCAC CATCTTTATG CTGGCCCATG TGTTGGAATC AACTGAATTT1080
CTCACCCCCG ATGGTGAATC CGGTGCCATT GATGACGAGT GGGCTATTTG CCAAATTCGT1140
ACCACGGCCA ATTTTGCCAC CAATAATCCC TTTTGGAACT GGTTTTGTGG CGGTTTAAAT1200
CACCAAGTTA CCCACCATCT TTTCCCCAAT ATTTGTCATA TTCACTATCC CCAATTGGAA1260
- 16CZ 285471 B6
| ΑΑΤΑΤΓΑΤΓΑ | AGGATGTTTG | CCAAGAGTTT | GGTGTGGAAT | ATAAAGTTTA | TCCCACCTTC | 1320 |
| AAAGCGGCGA | TCGCCTCTAA | CTATCGCTGG | CTAGAGGCCA | TGGGCAAAGC | ATCGTGACAT | 13B0 |
| TGCCTTGGGA | TTGAAGCAAA | ATGGCAAAAT | CCCTCGTAAA | TCTATGATCG | aagcctttct | 1440 |
| GTTGCCCGCC | GACCAAATCC | CCGATGCTGA | CCAAAGGTTG | ATGTTGGCAT | TGCTCCAAAC | 1500 |
| CCACTTTGAG | GGGGTTCATT | GGCCGCAGTT | TCAAGCTGAC | CTAGGAGGCA | AAGATTGGGT | 1560 |
| GATTTTGCTC | AAATCCGCTG | GGATATTGAA | AGGCTTCACC | ACCTTTGGTT | TCTACCCTGC | 1620 |
| TCAATGGGAA | GGACAAACCG | TCAGAATTGT | TTATTCTGGT | GACACCATCA | CCGACCCATC | 1680 |
| CATGTGGTCT | aacccagccc | TGGCCAAGGC | TTGGACCAAG | GCCATGCAAA | TTCTCCACGA | 1740 |
| GGCTAGGCCA | GAAAAATTAT | ATTGGCTCCT | gatttcttcc | GGCTATCGCA | CCTACCGATT | 1800 |
| TTTGAGCATT | tttgccaagg | AATTCTATCC | CCACTATCTC | CATCCCACTC | CCCCGCCTGT | 1860 |
| ACAAAATTTT | ATCCATCAGC | TAGC | 1884 |
PATENTOVÉ NÁROKY
Claims (6)
- PATENTOVÉ NÁROKY1. Izolovaná nukleová kyselina kódující kyanobakteriální Δό-desaturázu obsahující sekvenci SEQIDNo:3.
- 2. Izolovaná nukleová kyselina kódující kyanobakteriální Δό-desaturázu obsahující nukleotidy 2002 až 3081 sekvence SEQ ID No:l.
- 3. Způsob přípravy bakteriální, kvasinkové nebo rostlinné buňky obsahující kyanobakteriální Δό-desaturázu, vyznačující se tím, že zahrnuje transformaci bakteriální, kvasinkové nebo rostlinné buňky izolovanou nukleovou kyselinou podle nároků 1 nebo 2.
- 4. Způsob indukce tvorby gamma-linolenové kyseliny v bakterii nebo rostlině se sníženým obsahem nebo s chybějící gamma-linoleovou kyselinou, kde bakterie nebo rostlina vytváří linolovou kyselinu, vyznačující se tím, že bakterie nebo rostlina se transformuje izolovanou nukleovou kyselinou podle nároků 1 nebo 2.
- 5. Způsob indukce tvorby gamma-linolenové kyseliny v bakterii nebo rostlině se sníženým obsahem nebo schybějící gamma-linoleovou kyselinou a linolovou kyselinou, vyznačující se tím, že se uvedená bakterie nebo rostlina transformuje izolovanou nukleovou kyselinou kódující kyanobakteriální Δό-desaturázu podle nároků 1 nebo 2 a izolovanou nukleovou kyselinou kódující A12-desaturázu.
- 6. Způsob indukce tvorby oktadekatetraeonové kyseliny v bakterii nebo rostlině se sníženým obsahem nebo chybějící gamma-linolenovou kyselinou nebo oktadekatetraenovou kyselinou a kde uvedená bakterie nebo rostlina vytváří linolovou kyselinu, vyznačující se tím, že se uvedená bakterie nebo rostlina transformuje izolovanou nukleovou kyselinou podle nároku 1.
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US77447591A | 1991-10-10 | 1991-10-10 | |
| US81791992A | 1992-01-08 | 1992-01-08 | |
| PCT/US1992/008746 WO1993006712A1 (en) | 1991-10-10 | 1992-10-13 | Production of gamma linolenic acid by a δ6-desaturase |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ81794A3 CZ81794A3 (en) | 1995-09-13 |
| CZ285471B6 true CZ285471B6 (cs) | 1999-08-11 |
Family
ID=27118889
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ94817A CZ285471B6 (cs) | 1991-10-10 | 1992-10-13 | Způsob výroby gama linolenové kyseliny účinkem delta-6 Desaturázy |
Country Status (23)
| Country | Link |
|---|---|
| US (3) | US5552306A (cs) |
| EP (1) | EP0666918B1 (cs) |
| JP (1) | JP3537434B2 (cs) |
| KR (1) | KR100316068B1 (cs) |
| CN (2) | CN1053469C (cs) |
| AT (1) | ATE284961T1 (cs) |
| AU (1) | AU667848B2 (cs) |
| BG (1) | BG61791B1 (cs) |
| BR (1) | BR9206613A (cs) |
| CA (1) | CA2120629C (cs) |
| CZ (1) | CZ285471B6 (cs) |
| DE (1) | DE69233459T2 (cs) |
| DK (1) | DK0666918T3 (cs) |
| ES (1) | ES2231767T3 (cs) |
| HU (1) | HU217328B (cs) |
| IL (1) | IL103407A (cs) |
| MX (1) | MX9205820A (cs) |
| NZ (1) | NZ244685A (cs) |
| PH (1) | PH31293A (cs) |
| RO (1) | RO113256B1 (cs) |
| RU (1) | RU2152996C2 (cs) |
| UA (1) | UA43314C2 (cs) |
| WO (1) | WO1993006712A1 (cs) |
Families Citing this family (119)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5614393A (en) * | 1991-10-10 | 1997-03-25 | Rhone-Poulenc Agrochimie | Production of γ-linolenic acid by a Δ6-desaturase |
| US20070130654A1 (en) * | 1991-10-10 | 2007-06-07 | Thomas Terry L | Production of gamma linolenic acid by a delta6-desaturase |
| US6872872B1 (en) | 1992-11-17 | 2005-03-29 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Genes for microsomal delta-12 fatty acid desaturases and related enzymes from plants |
| US6372965B1 (en) | 1992-11-17 | 2002-04-16 | E.I. Du Pont De Nemours And Company | Genes for microsomal delta-12 fatty acid desaturases and hydroxylases from plants |
| WO1994018337A1 (en) * | 1993-02-05 | 1994-08-18 | Monsanto Company | Altered linolenic and linoleic acid content in plants |
| US5639645A (en) * | 1993-09-22 | 1997-06-17 | Mitsubishi Corporation | Recombinant Δ9 desaturase and a gene encoding the same |
| US6310194B1 (en) * | 1994-09-26 | 2001-10-30 | Carnegie Institution Of Washington | Plant fatty acid hydroxylases |
| US5965793A (en) | 1995-09-20 | 1999-10-12 | Monsanto Company, Inc. | Strong early seed-specific gene regulatory region |
| US5977436A (en) * | 1997-04-09 | 1999-11-02 | Rhone Poulenc Agrochimie | Oleosin 5' regulatory region for the modification of plant seed lipid composition |
| US5959175A (en) * | 1997-04-09 | 1999-09-28 | Thomas; Terry L. | Sunflower albumin 5' regulatory region for the modification of plant seed lipid composition |
| US5968809A (en) | 1997-04-11 | 1999-10-19 | Abbot Laboratories | Methods and compositions for synthesis of long chain poly-unsaturated fatty acids |
| US6051754A (en) * | 1997-04-11 | 2000-04-18 | Abbott Laboratories | Methods and compositions for synthesis of long chain poly-unsaturated fatty acids in plants |
| US6075183A (en) * | 1997-04-11 | 2000-06-13 | Abbott Laboratories | Methods and compositions for synthesis of long chain poly-unsaturated fatty acids in plants |
| US5972664A (en) | 1997-04-11 | 1999-10-26 | Abbott Laboratories | Methods and compositions for synthesis of long chain poly-unsaturated fatty acids |
| US7745694B1 (en) | 1997-04-11 | 2010-06-29 | Monsanto Technology Llc | Methods and compositions for synthesis of long chain polyunsaturated fatty acids in plants |
| US6432684B1 (en) | 1997-04-11 | 2002-08-13 | Abbott Laboratories | Human desaturase gene and uses thereof |
| CN1253588A (zh) * | 1997-04-11 | 2000-05-17 | 艾博特公司 | 在植物中合成长链多不饱和脂肪酸的方法和组合物 |
| US6428990B1 (en) | 1997-04-11 | 2002-08-06 | Abbott Laboratories | Human desaturase gene and uses thereof |
| US6080911A (en) * | 1997-04-15 | 2000-06-27 | Ohio University | Mice models of growth hormone insensitivity |
| BR9808676B1 (pt) * | 1997-04-15 | 2010-10-05 | construção genética, processos para produzir um polipeptìdeo epoxigenase enzimaticamente ativo, recombinante, e, polipeptìdeo recombinante de ocorrência não natural. | |
| US6100450A (en) * | 1997-10-22 | 2000-08-08 | Rhone-Poulenc Agrochimie | Seed specific promoters based on arabidopsis genes |
| CA2329159A1 (en) * | 1998-05-29 | 1999-12-02 | Bruce Kelder | Compositions and methods for the synthesis of fatty acids, their derivatives and downstream products |
| CA2330024C (en) * | 1998-06-12 | 2012-01-24 | Calgene Llc | Polyunsaturated fatty acids in plants |
| US6403349B1 (en) | 1998-09-02 | 2002-06-11 | Abbott Laboratories | Elongase gene and uses thereof |
| US20030163845A1 (en) * | 1998-09-02 | 2003-08-28 | Pradip Mukerji | Elongase genes and uses thereof |
| US6913916B1 (en) | 1998-09-02 | 2005-07-05 | Abbott Laboratories | Elongase genes and uses thereof |
| US6677145B2 (en) | 1998-09-02 | 2004-01-13 | Abbott Laboratories | Elongase genes and uses thereof |
| KR20020025069A (ko) | 1999-06-07 | 2002-04-03 | 바스프 플랜트 사이언스 게엠베하 | 쎄라토돈 푸르푸레우스로부터의 δ6-아세틸레나제 및δ6-데새처라제 |
| DE10030976A1 (de) | 2000-06-30 | 2002-01-10 | Basf Ag | DELTA6-Desaturasegene exprimierende Pflanzen und PUFAS enthaltende Öle aus diesen Pflanzen und ein Verfahren zur Herstellung ungesättigter Fettsäuren |
| US7070970B2 (en) | 1999-08-23 | 2006-07-04 | Abbott Laboratories | Elongase genes and uses thereof |
| GB9929897D0 (en) * | 1999-12-18 | 2000-02-09 | Slabas Antoni R | Improvements in or relating to conjugated fatty acids and related compounds |
| FR2803592A1 (fr) | 2000-01-06 | 2001-07-13 | Aventis Cropscience Sa | Nouveaux derives de l'acide 3-hydroxypicolinique, leur procede de preparation et compositions fongicides les contenant. |
| FR2810994B1 (fr) * | 2000-06-30 | 2004-03-12 | Biogemma Fr | Acides nucleiques codant pour une phosphatase vegetale de type mipp a activite phytasique et applications |
| EP1197550A3 (en) * | 2000-08-25 | 2002-11-20 | Pfizer Products Inc. | Methods and compositions for diagnosing and treating disorders involving angiogenesis |
| DK1911837T3 (da) | 2000-09-28 | 2011-08-29 | Bioriginal Food & Science Corp | FAD5-2 fedtsyredesaturasefamiliemedlem og anvendelser deraf |
| FR2815969B1 (fr) | 2000-10-30 | 2004-12-10 | Aventis Cropscience Sa | Plantes tolerantes aux herbicides par contournement de voie metabolique |
| DE10102337A1 (de) | 2001-01-19 | 2002-07-25 | Basf Plant Science Gmbh | Verfahren zur Herstellung mehrfach ungesättigter Fettsäuren, neue Biosynthesegene sowie neue pflanzliche Expressionskonstrukte |
| CA2435685C (en) * | 2001-01-25 | 2011-06-07 | Abbott Laboratories | Desaturase genes and uses thereof |
| US6635451B2 (en) | 2001-01-25 | 2003-10-21 | Abbott Laboratories | Desaturase genes and uses thereof |
| US7045683B2 (en) * | 2001-05-04 | 2006-05-16 | Abbott Laboratories | Δ4-desaturase genes and uses thereof |
| MX281182B (es) * | 2001-05-14 | 2010-11-22 | Martek Biosciences Boulder Corp | Produccion y uso de una fraccion rica en lipidos polares, que contienen acidos grasos altamente insaturados omega-3 y/u omega-6, procedentes de microbios, de semillas de plantas y de organismos marinos geneticamente modificados. |
| MXPA03010467A (es) * | 2001-05-14 | 2004-12-06 | Martek Biosciences Boulder Corp | Produccion y uso de una fraccion polar rica en lipidos que contienen acido estearidonico y acido gama-linolenico proviniente de semillas y microbios. |
| ES2337564T3 (es) | 2002-01-30 | 2010-04-27 | Basf Plant Science Gmbh | Metodo para elaborar acidos grasos poliinsaturados mediante un nuevo gen de elongasa. |
| US7211656B2 (en) * | 2002-01-30 | 2007-05-01 | Abbott Laboratories | Desaturase genes, enzymes encoded thereby, and uses thereof |
| GB2385852A (en) | 2002-02-27 | 2003-09-03 | Rothamsted Ex Station | Delta 6-desaturases from Primulaceae |
| WO2005024017A1 (en) * | 2002-03-15 | 2005-03-17 | Monsanto Technology Llc | Nucleic acid molecules associated with oil in plants |
| DE10219203A1 (de) | 2002-04-29 | 2003-11-13 | Basf Plant Science Gmbh | Verfahren zur Herstellung mehrfach ungesättigter Fettsäuren in Pflanzen |
| EP2216405A1 (en) | 2002-05-03 | 2010-08-11 | Monsanto Technology LLC | Speed specific USP promoters for expressing genes in plants |
| FR2848064B1 (fr) * | 2002-12-06 | 2006-01-13 | Bayer Cropscience Sa | Plantes legumineuses transplastomiques fertiles |
| FR2848570B1 (fr) | 2002-12-12 | 2005-04-01 | Bayer Cropscience Sa | Cassette d'expression codant pour une 5-enol pyruvylshikimate-3-phosphate synthase (epsps) et plantes tolerantes aux herbicides la contenant |
| US7078234B2 (en) | 2002-12-18 | 2006-07-18 | Monsanto Technology Llc | Maize embryo-specific promoter compositions and methods for use thereof |
| BR0317304A (pt) | 2002-12-19 | 2005-11-08 | Univ Bristol | Processo para a produção de compostos, sequência de ácido nucleico isolada, sequência de aminoácidos, construção gênica, vetor, e, organismo |
| ATE517984T1 (de) | 2003-02-27 | 2011-08-15 | Basf Plant Science Gmbh | Verfahren zur herstellung mehrfach ungesättigter fettsäuren |
| AU2004225483B2 (en) | 2003-03-28 | 2009-07-23 | Monsanto Technology, Llc | Novel plant promoters for use in early seed development |
| EP1613746B1 (de) | 2003-03-31 | 2013-03-06 | University Of Bristol | Neue pflanzliche acyltransferasen spezifisch für langkettige, mehrfach ungesättigte fettsäuren |
| WO2004090123A2 (de) | 2003-04-08 | 2004-10-21 | Basf Plant Science Gmbh | Δ-4-desaturasen aus euglena gracilis, exprimierende pflanzen und pufa enthaltende öle |
| US11952581B2 (en) | 2003-08-01 | 2024-04-09 | Basf Plant Science Gmbh | Process for the production of polyunsaturated fatty acids in transgenic organisms |
| US9433228B2 (en) | 2003-08-01 | 2016-09-06 | Basf Plant Science Gmbh | Method for the production of multiple-unsaturated fatty acids in transgenic organisms |
| EP1656449B1 (en) | 2003-08-21 | 2009-05-06 | Monsanto Technology LLC | Fatty acid desaturases from primula |
| CA2450000A1 (en) * | 2003-12-18 | 2005-06-18 | Alberta Research Council Inc. | Method of creating plants with reduced level of saturated fatty acid in seed oil |
| EP1720988B1 (de) | 2004-02-27 | 2011-10-12 | BASF Plant Science GmbH | Verfahren zur herstellung von ungesättigten omega-3-fettsäuren in transgenen organismen |
| CN1930277B (zh) | 2004-02-27 | 2011-02-02 | 巴斯福植物科学有限公司 | 在转基因植物中产生多不饱和脂肪酸的方法 |
| US20050220901A1 (en) * | 2004-03-22 | 2005-10-06 | Huttenbauer Samuel Jr | Methods of pharmaceutical separation from plants |
| CN1968688A (zh) | 2004-04-16 | 2007-05-23 | 孟山都技术有限公司 | 脂肪酸去饱和酶在玉米中的表达 |
| US7834250B2 (en) | 2004-04-22 | 2010-11-16 | Commonwealth Scientific And Industrial Research Organisation | Synthesis of long-chain polyunsaturated fatty acids by recombinant cells |
| CN102559364B (zh) | 2004-04-22 | 2016-08-17 | 联邦科学技术研究组织 | 用重组细胞合成长链多不饱和脂肪酸 |
| US7138391B2 (en) * | 2004-08-09 | 2006-11-21 | Silverbrook Research Pty Ltd | Hydrophilizable and hydrophilic cyanine dyes |
| US7456270B2 (en) * | 2004-09-01 | 2008-11-25 | Abbott Laboratories | Δ6-desaturase genes and uses thereof |
| WO2006089950A2 (en) | 2005-02-26 | 2006-08-31 | Basf Plant Science Gmbh | Expression cassettes for seed-preferential expression in plants |
| DE102005013779A1 (de) | 2005-03-22 | 2006-09-28 | Basf Plant Science Gmbh | Verfahren zur Herstellung von mehrfach ungesättigten C20- und C22-Fettsäuren mit mindestens vier Doppelbindungen in transgenen Pflanzen |
| ATE552343T1 (de) | 2005-04-19 | 2012-04-15 | Basf Plant Science Gmbh | Endosperm-spezifische expression und/oder expression in keimenden embryos monokotyledoner pflanzen |
| AU2006237346B2 (en) | 2005-04-20 | 2011-04-07 | Basf Plant Science Gmbh | Expression cassettes for seed-preferential expression in plants |
| AU2006245701B2 (en) | 2005-05-10 | 2011-04-28 | Basf Plant Science Gmbh | Expression cassettes for seed-preferential expression in plants |
| ES2550623T3 (es) | 2005-05-23 | 2015-11-11 | Blue Horse Labs, Inc. | Cártamo con ácido gamma linolénico elevado |
| DE102005038036A1 (de) | 2005-08-09 | 2007-02-15 | Basf Plant Science Gmbh | Verfahren zur Herstellung von Arachidonsäure und/oder Eicosapentaensäure in transgenen Nutzpflanzen |
| GB2431158A (en) | 2005-10-13 | 2007-04-18 | Rothamsted Res Ltd | Process for the production of arachidonic and/or eicosapentaenoic acid |
| DE102005052551A1 (de) | 2005-11-02 | 2007-05-16 | Rothamsted Res Harpenden | Verfahren zur Herstellung von y-Linolensäure und/oder Stearidonsäure in transgenen Brassicaceae und Linaceae |
| EP1806398A1 (en) * | 2006-01-04 | 2007-07-11 | Monsanto S.A.S. | Fad-2 mutants and high oleic plants |
| GB0603160D0 (en) | 2006-02-16 | 2006-03-29 | Rothamsted Res Ltd | Nucleic acid |
| AR059376A1 (es) | 2006-02-21 | 2008-03-26 | Basf Plant Science Gmbh | Procedimiento para la produccion de acidos grasos poliinsaturados |
| US8629195B2 (en) | 2006-04-08 | 2014-01-14 | Bayer Materialscience Ag | Production of polyurethane foams |
| ES2366297T3 (es) | 2006-07-19 | 2012-01-13 | Monsanto Technology, Llc | Desaturasas de ácidos grasos de tetraselmis suecica. |
| AU2007287585B2 (en) | 2006-08-24 | 2013-08-29 | Basf Plant Science Gmbh | Isolation and characterization of a novel Pythium omega 3 desaturase with specificity to all omega 6 fatty acids longer than 18 carbon chains |
| CA2661697A1 (en) | 2006-08-29 | 2008-03-06 | Commonwealth Scientific And Industrial Research Organisation | Synthesis of fatty acids |
| EP2182056B1 (de) | 2006-10-06 | 2015-12-23 | BASF Plant Science GmbH | Verfahren zur Herstellung mehrfach ungesättigter Fettsäuren in transgenen nicht-humanen Organismen |
| AU2008214568B2 (en) | 2007-02-16 | 2013-04-18 | Basf Plant Science Gmbh | Nucleic acid sequences for regulation of embryo-specific expression in monocotyledonous plants |
| US20090004715A1 (en) | 2007-06-01 | 2009-01-01 | Solazyme, Inc. | Glycerol Feedstock Utilization for Oil-Based Fuel Manufacturing |
| CA2695112A1 (en) | 2007-07-31 | 2009-02-05 | Basf Plant Science Gmbh | Elongases and processes for the production of polyunsaturated fatty acids in transgenic organisms |
| US20130323801A1 (en) * | 2007-11-01 | 2013-12-05 | Wake Forest University School Of Medicine | Compositions, Methods, and Kits for Polyunsaturated Fatty Acids from Microalgae |
| WO2009077478A2 (en) | 2007-12-14 | 2009-06-25 | Basf Plant Science Gmbh | Promoters from brassica napus for seed specific gene expression |
| AU2009242130B2 (en) | 2008-04-30 | 2013-09-19 | Rothamsted Research Ltd. | Desaturase and method for the production of polyunsaturated fatty acids in transgenic organisms |
| DE112009001585T5 (de) | 2008-07-01 | 2012-02-23 | Basf Plant Science Gmbh | Promotoren von Brassica napus für samenspezifische Genexpression |
| DE112009002048T5 (de) | 2008-08-26 | 2012-01-26 | Basf Plant Science Gmbh | Nukleinsäure, die Desaturasen kodieren, und modifiziertes Planzenöl |
| EP2358882B1 (en) | 2008-11-18 | 2017-07-26 | Commonwealth Scientific and Industrial Research Organisation | Enzymes and methods for producing omega-3 fatty acids |
| ES2714096T3 (es) | 2008-11-28 | 2019-05-27 | Corbion Biotech Inc | Producción de aceites adaptados en microorganismos heterotróficos |
| CA2744930C (en) | 2008-12-12 | 2018-03-20 | Basf Plant Science Gmbh | Desaturases and process for the production of polyunsaturated fatty acids in transgenic organisms |
| AR074941A1 (es) | 2009-01-07 | 2011-02-23 | Bayer Cropscience Sa | Plantas transplastomicas exentas de marcador de seleccion |
| MX2011010763A (es) | 2009-04-17 | 2011-12-16 | Basf Plant Science Co Gmbh | Promotor de planta operable en endosperma y usos del mismo. |
| CA2756146C (en) | 2009-04-22 | 2018-12-04 | Basf Plant Science Company Gmbh | Whole seed specific promoter |
| EP2821492A3 (en) | 2009-05-13 | 2015-04-08 | BASF Plant Science Company GmbH | Acyltransferases and uses thereof in fatty acid production |
| AU2010270309A1 (en) | 2009-07-10 | 2012-02-02 | Basf Plant Science Company Gmbh | Expression cassettes for endosperm-specific expression in plants |
| US8188335B2 (en) | 2009-07-17 | 2012-05-29 | Abbott Laboratories | Δ9-elongase for production of polyunsaturated fatty acid-enriched oils |
| DE112010005958T5 (de) | 2009-12-03 | 2013-08-14 | Basf Plant Science Company Gmbh | Expressionskassetten für die Embryo-spezifische Expression in Pflanzen |
| CN102741415A (zh) | 2010-02-02 | 2012-10-17 | 拜尔农科股份公司 | 使用hppd抑制剂作为选择剂的大豆转化 |
| CA2801057C (en) | 2010-05-28 | 2019-06-18 | Solazyme, Inc. | Tailored oils produced from recombinant heterotrophic microorganisms |
| US9388437B2 (en) | 2010-06-25 | 2016-07-12 | Basf Plant Science Company Gmbh | Acyltransferases and uses thereof in fatty acid production |
| CA3024641A1 (en) | 2010-11-03 | 2012-05-10 | Corbion Biotech, Inc. | Microbial oils with lowered pour points, dielectric fluids produced therefrom, and related methods |
| MX351063B (es) | 2011-02-02 | 2017-09-29 | Terravia Holdings Inc | Aceites adaptados producidos a partir de microorganismos oleaginosos recombinantes. |
| AU2013246661B2 (en) | 2012-04-12 | 2018-12-20 | Rothamsted Research Ltd | Production of omega-3 long chain polyunsaturated fatty acids |
| ES2744868T3 (es) | 2012-04-18 | 2020-02-26 | Corbion Biotech Inc | Aceites hechos a medida |
| US9719114B2 (en) | 2012-04-18 | 2017-08-01 | Terravia Holdings, Inc. | Tailored oils |
| US8946460B2 (en) | 2012-06-15 | 2015-02-03 | Commonwealth Scientific And Industrial Research Organisation | Process for producing polyunsaturated fatty acids in an esterified form |
| GB201217524D0 (en) | 2012-10-01 | 2012-11-14 | Rothamsted Res Ltd | Recombinant organisms |
| EP2993993A2 (en) * | 2013-04-26 | 2016-03-16 | Solazyme, Inc. | Low polyunsaturated fatty acid oils and uses thereof |
| EP3052636A2 (en) | 2013-10-04 | 2016-08-10 | Solazyme, Inc. | Tailored oils |
| SG11201604871VA (en) | 2013-12-18 | 2016-07-28 | Commw Scient Ind Res Org | Lipid comprising long chain polyunsaturated fatty acids |
| KR102527795B1 (ko) | 2014-06-27 | 2023-05-02 | 커먼웰쓰 사이언티픽 앤 인더스트리알 리서치 오거니제이션 | 도코사펜타에노산을 포함하는 지질 |
| ES2764273T3 (es) | 2014-07-10 | 2020-06-02 | Corbion Biotech Inc | Nuevos genes de cetoacil ACP sintasa y uso de los mismos |
| KR102054762B1 (ko) | 2018-03-06 | 2020-01-22 | 대한민국(관리청: 특허청장, 승계청: 농촌진흥청장) | 갈고리 흰오징어 유래의 지방산 사슬연장효소 유전자 및 이의 용도 |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4736866B1 (en) * | 1984-06-22 | 1988-04-12 | Transgenic non-human mammals | |
| NZ221259A (en) * | 1986-07-31 | 1990-05-28 | Calgene Inc | Seed specific transcriptional regulation |
| ZA888155B (en) * | 1987-11-04 | 1989-07-26 | Merrell Dow Pharma | Fluorinated arachidonic acid derivatives |
| BR9007159A (pt) * | 1989-02-24 | 1991-12-10 | Monsanto Co | Genes sinteticos de plantas e processo para a preparacao dos mesmos |
| ATE241007T1 (de) * | 1990-03-16 | 2003-06-15 | Calgene Llc | Dnas, die für pflanzliche desaturasen kodieren und deren anwendungen |
-
1992
- 1992-10-07 PH PH45060A patent/PH31293A/en unknown
- 1992-10-09 IL IL10340792A patent/IL103407A/en not_active IP Right Cessation
- 1992-10-09 NZ NZ244685A patent/NZ244685A/en not_active IP Right Cessation
- 1992-10-09 MX MX9205820A patent/MX9205820A/es not_active IP Right Cessation
- 1992-10-10 CN CN92113085A patent/CN1053469C/zh not_active Expired - Lifetime
- 1992-10-13 HU HU9401007A patent/HU217328B/hu not_active IP Right Cessation
- 1992-10-13 ES ES92922205T patent/ES2231767T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1992-10-13 RO RO94-00585A patent/RO113256B1/ro unknown
- 1992-10-13 CA CA002120629A patent/CA2120629C/en not_active Expired - Lifetime
- 1992-10-13 UA UA94005172A patent/UA43314C2/uk unknown
- 1992-10-13 DK DK92922205T patent/DK0666918T3/da active
- 1992-10-13 AT AT92922205T patent/ATE284961T1/de not_active IP Right Cessation
- 1992-10-13 BR BR9206613A patent/BR9206613A/pt not_active Application Discontinuation
- 1992-10-13 AU AU28812/92A patent/AU667848B2/en not_active Expired
- 1992-10-13 DE DE69233459T patent/DE69233459T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1992-10-13 CZ CZ94817A patent/CZ285471B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1992-10-13 RU RU94030816/13A patent/RU2152996C2/ru active
- 1992-10-13 KR KR1019940701152A patent/KR100316068B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1992-10-13 EP EP92922205A patent/EP0666918B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1992-10-13 JP JP50724393A patent/JP3537434B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1992-10-13 WO PCT/US1992/008746 patent/WO1993006712A1/en active IP Right Grant
-
1994
- 1994-04-05 BG BG98695A patent/BG61791B1/bg unknown
- 1994-09-14 US US08/307,382 patent/US5552306A/en not_active Expired - Lifetime
-
1995
- 1995-06-07 US US08/473,508 patent/US5689050A/en not_active Expired - Lifetime
- 1995-06-07 US US08/478,727 patent/US5663068A/en not_active Expired - Lifetime
-
1997
- 1997-03-21 CN CN97104566A patent/CN1121499C/zh not_active Expired - Lifetime
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CZ285471B6 (cs) | Způsob výroby gama linolenové kyseliny účinkem delta-6 Desaturázy | |
| AU707061B2 (en) | Production of gamma linolenic acid by a delta6-desaturase | |
| US6355861B1 (en) | Production of gamma linolenic acid by a Δ6-desaturase | |
| US9701947B2 (en) | Fatty acid desaturases from primula | |
| US6683232B1 (en) | Production of γ linolenic acid by a Δ6-desaturase | |
| Zárate et al. | Healthy omega-3 enhancement in Echium acanthocarpum transformed hairy roots by overexpression of a 6-desaturase gene from Primula vialli | |
| US20070130654A1 (en) | Production of gamma linolenic acid by a delta6-desaturase | |
| US20090077692A1 (en) | Production of gamma linolenic acid by a delta6-desaturase |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| IF00 | In force as of 2000-06-30 in czech republic | ||
| MK4A | Patent expired |
Effective date: 20121013 |