CZ285449B6 - Způsob výroby D-aminokyselin nebo derivátů D - aminokyselin - Google Patents

Způsob výroby D-aminokyselin nebo derivátů D - aminokyselin Download PDF

Info

Publication number
CZ285449B6
CZ285449B6 CZ932683A CZ268393A CZ285449B6 CZ 285449 B6 CZ285449 B6 CZ 285449B6 CZ 932683 A CZ932683 A CZ 932683A CZ 268393 A CZ268393 A CZ 268393A CZ 285449 B6 CZ285449 B6 CZ 285449B6
Authority
CZ
Czechia
Prior art keywords
activity
immobilized
hydroxyphenylglycine
hydantoinase
agrobacterium radiobacter
Prior art date
Application number
CZ932683A
Other languages
English (en)
Other versions
CZ268393A3 (en
Inventor
Massa Maria Dolores Benaiges
Saperas Gloria Caminal
Santin José Lopez
Jurado Josep Maria Serrat
Original Assignee
Control Y Gestion Instrumental, S. A.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Control Y Gestion Instrumental, S. A. filed Critical Control Y Gestion Instrumental, S. A.
Publication of CZ268393A3 publication Critical patent/CZ268393A3/cs
Publication of CZ285449B6 publication Critical patent/CZ285449B6/cs

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P41/00—Processes using enzymes or microorganisms to separate optical isomers from a racemic mixture
    • C12P41/006—Processes using enzymes or microorganisms to separate optical isomers from a racemic mixture by reactions involving C-N bonds, e.g. nitriles, amides, hydantoins, carbamates, lactames, transamination reactions, or keto group formation from racemic mixtures
    • C12P41/009—Processes using enzymes or microorganisms to separate optical isomers from a racemic mixture by reactions involving C-N bonds, e.g. nitriles, amides, hydantoins, carbamates, lactames, transamination reactions, or keto group formation from racemic mixtures by reactions involving hydantoins or carbamoylamino compounds
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N11/00—Carrier-bound or immobilised enzymes; Carrier-bound or immobilised microbial cells; Preparation thereof
    • C12N11/02—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier
    • C12N11/04—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier entrapped within the carrier, e.g. gel or hollow fibres
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P13/00—Preparation of nitrogen-containing organic compounds
    • C12P13/04—Alpha- or beta- amino acids

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Dispersion Chemistry (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Immobilizing And Processing Of Enzymes And Microorganisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)

Abstract

Způsob výroby D-aminokyselin nebo derivátů D-aminokyselin z odpovídajícího hydantoinu, jehož podstata spočívá v tom, že se při této výrobě používá imobilizovaných mikroorganismů obsahujících hydantoinasovou a karbamylasovou enzymatickou aktivitu. Vhodným mikroorganismem je Agrobacterium radiobacter. Imobilizace buněk se provádí pomocí přírodních polymerů, jako je alginát nebo karrageenát. Jako příklad vyráběné D-aminokyseliny je možno uvést D-p-hydroxyfenylglycin.ŕ

Description

Způsob výroby D-p-hydroxyfenylglycinu nebo jeho derivátu
Oblast techniky
Vynález se týká způsobu výroby D-p-hydroxyfenylglycinu nebo jeho derivátu z odpovídajícího hydantoinu za použití imobilizovaného mikroorganismu, který vykazuje hydantoinasovou enzymatickou aktivitu.
Dosavadní stav techniky
Použití hydantoinasového a/nebo karbamylázového enzymatického systému pro transformaci hydantoinů je velmi dobře známo (Biotechnology: A Comprehensive Treatise sv. 6a, H-J. Rehm, G. Reed Eds., Verlag Chemie, Weinheim, 1984).
Jako producenti výše uvedeného enzymatického systému byla navržena celá řada mikroorganismů, mj. Pseudomonas, Agrobacterium, Candida, Hansenula, Arthrobacter. Obzvláštní zájem byl zaměřen na Agrobacterium radiobacter, díky skutečnosti, že poskytuje úplný enzymatický systém, který vykazuje obě aktivity.
Z patentů, které se vztahují k tomuto předmětu, je třeba zdůraznit ty, které se týkají použití Agrobacterium radiobacter pro získání D-fenylglycinu nebo jeho derivátů (DE-OS 2 621 076; DE-OS 2 920 963) a také následující články: R. Olivieri a další: Enzymatic Conversion of Ncarbamyl-D-amino acids to D-amino acids Enzyme Microb, Technol. 1, 201 až 204 (1979) a R. Olivieri a další Microbial Transformation of Racemic Hydantoins to D-amino acids Biotechnol. Bioeng. 23, 2173 až 2183 (1981). Tyto články popisují mikrobiální postup, při němž se používá volné biomasy.
Z jiných mikroorganismů poskytujících enzymatické systémy je možno uvést Agrobacterium tumefaciens (EP 0 309 310), Pseudomonas (DE-OS 3 018 581), Candida (JP 61 177 992), Hansenula (JP 61 177 991).
Použití imobilizovaných mikroorganismů, poskytuje podstatné provozní výhody jak při výrobě, tak při separaci, které jsou předmětem tohoto vynálezu. Použití buněk Agrobacterium radiobacter imobilizovaných v želatinovaných polymerech již sice bylo patentováno (ES 523 360), tohoto biokatalyzátoru však bylo používáno pro zemědělské účely a zachování enzymatické účinnosti hydantoinasy a karbamylázy bylo pomíjeno.
Na druhé straně již bylo popsáno použití jiných imobilizovaných mikroorganismů pro biokonverzi hydantoinů, jako je tomu v případě EP 0 261 836, který se týká imobilizace Bacillus brevis. Dále je třeba se zmínit o US patentu č. 4 094 741. Nároky tohoto patentu zahrnují obecně imobilizaci enzymatické účinnosti řady mikroorganismů. Není zde však konkrétně uváděn mikroorganismus Agrobacterium radiobacter ani specifické metody imobilizace.
Podstata vynálezu
Předmětem vynálezu je způsob výroby D-p-hydroxyfenylglycinu nebo jeho derivátu z odpovídajícího hydantoinu pomocí imobilizovaného mikroorganismu, který vykazuje hydantoinasovou enzymatickou aktivitu, jehož podstata spočívá v tom že se při této výrobě používá imobilizovaného mikroorganismu Agrobacterium radiobacter, který má hydantoinasovou akarbamylázovou enzymatickou aktivitu.
-1 CZ 285449 B6
Imobilizace buněk se účelně provádí pomocí přírodních polymerů, jako je alginát nebo karagenát. S výhodou se způsob provádí v redukčním prostředí, buď v atmosféře dusíku, nebo za přítomnosti chemických redukčních činidel, jako je sulfid sodný.
Výchozího hydantoinu se může s výhodou používat ve formě racemické směsi.
Použití imobilizovaných mikroorganismů umožňuje opakované použití biokatalyzátoru. Tím se dosáhne podstatných výhod, jak z hlediska separace, tak z hlediska provozu kontinuálního postupu.
Použití buněk Agrobacterium radiobacter přináší výhodu vtom, že poskytuje úplný potřebný enzymatický systém pro kvantitativní transformaci D-hydantoinu na požadovaný produkt.
Stereospecificita enzymů, které působí na D-formu hydantoinu, je založena na rušení D-Lrovnováhy racemické směsi, což umožňuje kvantitativní konverzi takové racemické směsi na Daminokyselinu nebo derivát D-aminokyseliny.
Imobilizace buněk Agrobacterium radiobacter (přičemž tyto buňky jsou neporušené nebo rozbité) se provádí přídavkem želatinovaného alginátu nebo karagenátu, vytvořeného za přítomnosti vápenatých iontů a/nebo vzniklého tepelným zpracováním. Kulovité částice o regulované velikosti, které se takto získají, je popřípadě možno dále zpevňovat, aby se zvýšila jejich mechanická odolnost.
V důsledku toho se získá stabilní biokatalyzátor, který je schopen provést úplnou konverzi D-Lhydantoinu na odpovídající derivát D-aminokyseliny, přičemž tohoto biokatalyzátoru je možno používat po dobu nejméně 22 dnů.
Vynález je blíže objasněn v následujícím příkladu. Tento příklad má výhradně ilustrativní charakter a v žádném ohledu neomezuje rozsah vynálezu. Příklad se opírá o obrázky, jejichž přehled je uveden dále.
Přehled obrázků na výkresech
Na obr. 1 je znázorněna závislost aktivity hydantoinasy na hodnotě pH.
Na obr. 2 je znázorněna závislost aktivity karbamylázy na hodnotě pH.
Na obr. 3 a 4 je znázorněna závislost enzymatických účinností na teplotě.
Na obr. 5 a 6 je znázorněna stálost volné biomasy při 45 a 50 °C.
Na obr. 7 je znázorněna stálost dvou zkoušených enzymatických aktivit v průběhu 22 dnů při 40 °C.
Na obr. 8 je znázorněna výkonnost volné biomasy, zkoušené za stejných podmínek.
Příklady provedení vynálezu
1. Buněk Agrobacterium radiobacter se používá pro získání D-p-hydroxyfenylglycinu z odpovídajícího hydantoinu. Výsledný produkt se získá podle následujícího schématu.
-2 CZ 285449 B6
D,L- hydantoin
D— p— hydroxyfenylglycin
2. Zkoušky aktivity
2.1. Enzymatická aktivita biomasy Agrobacterium radiobacter se stanoví takto: 1 ml suspenze biokatalyzátoru se přidá k 11 ml suspenze hydantoinu v pufru o pH 8, přičemž konečná koncentrace substrátu je 0,02 M. Směs se inkubuje 20 minut při 40 °C v atmosféře dusíku a získaný D-p-hydroxyfenylglycin se analyzuje vysoce účinnou kapalinovou chromatografií (HPLC).
Pro stanovení karbamylázové aktivity se použije stejné zkoušky aktivity, pouze s tím rozdílem, že se místo hydantoinu použije karbamylderivátu.
Aktivita imobilizovaného biokatalyzátoru se stanoví stejným způsobem, přičemž se pracuje s 5 ml biokatalyzátoru.
2.2. Pro stanovení nejlepší hodnoty pH pro každou enzymatickou aktivitu se vyrobí 10 mM roztoky každého ze substrátů (hydantoinu a karbamylderivátu) v tris-HCl pufru nebo pufru na bázi uhličitan/kyselina uhličitá, v závislosti na požadovaném pH. Suspenze 1 ml biomasy se přidá k roztoku substrátu o objemu 10 ml. Zkoušení se provádí při 40 °C způsobem uvedeným v odstavci 2.1.
2.3. Pro stanovení nejlepší teploty pro každou enzymatickou aktivitu se substráty (10 mM) rozpustí v tris-HCl pufru při optimálním pH pro každý případ (pH 8, v případě hydantoinasové aktivity a pH 8,5, v případě karbamylázové aktivity). Zkoušky aktivity se provádějí při různých teplotách.
2.4. Hydantoinasová aktivita se vyjádří v jednotkách mmol/1 konvertovaného produktu v průběhu 20 minutové reakce (součet produkt + karbamylderivát). Karbamylázová aktivita se vyjádří v jednotkách mmol/1 p-hydroxyfenylglycinu, získaného po 20 minutové reakci z intermediámího produktu.
3. Imobilizace
Suspenze buněk Agrobacterium radiobacter se imobilizuje v želatinovaném alginátu za použití následujícího postupu:
Materiály: alginát sodný (Protanal LF 10/60) při 40 % konečného objemu. Biomasy Agrobacterium radiobacter se používá v koncentraci 21% konečného objemu, koncentrace chloridu vápenatého je 1,5 %.
ml biomasy (o koncentraci 0,7 g/ml) se smíchá s roztokem alginátu sodného (2,6 g, 46,67 ml). Směs se magneticky třepe, až do úplné homogenizace. Pomocí peristaltického čerpadla se gel uvádí do duté jehly (průměr 0,5 mm) umístěné ve vzdálenosti 30 cm od mechanicky třepaného roztoku chloridu vápenatého. Při styku gelu s vápenatými ionty dochází ke ztuhnutí kapek. Všechny imobilizační postupy se provádějí v dusíkové atmosféře.
4. Stabilita
4.1. Stabilita volné biomasy ml biomasy se udržuje při teplotě zkoušení apod dusíkovou atmosférou po celou dobu provádění této zkoušky. V předem určených časových intervalech se odebírají jednomililitrové vzorky, které se zkoušejí na aktivitu.
4.2. Stabilita imobilizované biomasy
Pro stanovení stability vyrobeného biokatalyzátoru se periodicky provádějí zkoušky aktivity. Imobilizovaný biokatalyzátor se uchovává v uzavřených nádobách při požadované teplotě pod atmosférou dusíku, přičemž koncentrace hydantoinu je 30 g/1. Biokatalyzátor se před prováděním zkoušek aktivity podrobí úplnému pracímu postupu.
5. Výsledky
5.1. Stanovení pracovních podmínek pro každou enzymatickou aktivitu
Závislost aktivity hydantoinasy na hodnotě pH je zřejmá z obr. 1. Největší odchylky se dosahuje při pH 8. Podobně, obr. 8 uvádí závislost aktivity karbamylázy na hodnotě pH, přičemž je zřejmé, že optimální hodnota pH je v tomto případě 8,5.
Obr. 3 a 4 uvádějí závislost enzymatické aktivity na teplotě. Maximální aktivity hydantoinasy se dosahuje při 45 °C a maximální aktivity karbamylázy se dosahuje při 50 °C.
Stabilita volné biomasy při 45 a 50 °C je zřejmá z obr. 5 a 6. Obě enzymatické aktivity vykazují vysokou stabilitu v průběhu 10 dnů, přestože aktivita karbamylázy při 50 °C se sníží o přibližně 20 %.
Data, která byla získána při zkouškách aktivity a stability umožňují dojít k závěru, že pracovní teplota by měla ležet v rozmezí od 45 do 50 °C a optimální hodnota pH v rozmezí od 8 do 8,5. Čím je však v biomase přítomno méně karbamylázové aktivity, ve srovnání s hydantoinasovou aktivitou, tím by se mělo pracovat ve větší blízkosti optimálních hodnot pro karbamylázovou aktivitu, které jsou: pH = 8,5 a teplota = 50 °C.
5.2. Provoz za použití imobilizovaného biokatalyzátoru
Výsledky, které byly získány s imobilizovaným biokatalyzátorem, ukazují, že se dosahuje retence aktivity 50 až 80 % (je třeba vzít v úvahu, že měření aktivity odráží nejen vlastní enzymatickou aktivitu, ale i různá omezení, ke kterým dochází v případě imobilizovaného biokatalyzátoru).
-4CZ 285449 B6
Získané částice biokatalyzátoru vykazují stabilitu 100%, pokud se týče dvou zkoušených enzymatických aktivit v průběhu 22 dnů při 40 °C (viz obr. 7).
Výkonnost imobilizovaného biokatalyzátoru je stejná jako výkonnost volné biomasy, při zkoušení za stejných podmínek (viz obr. 8).
Imobilizovaný biokatalyzátor je proto schopen si podržovat za provozních podmínek enzymatické aktivity buněk Agrobacterium radiobacter a provádět specifickou transformaci Dhydantoinu na D-p-hydroxyfenylglycin.

Claims (4)

  1. PATENTOVÉ NÁROKY
    1. Způsob výroby D-p-hydroxyfenylglycinu nebo jeho derivátu z odpovídajícího hydantoinu pomocí imobilizovaného mikroorganismu, který vykazuje hydantoinasovou enzymatickou aktivitu, vyznačující se tím, že se při této výrobě používá imobilizovaného mikroorganismu Agrobacterium radiobacter, který má hydantoinasovou a karbamylázovou enzymatickou aktivitu.
  2. 2. Způsob podle nároku 1, vyznačující se tím, že se používá mikroorganismu Agrobacterium radiobacter, který je imobilizován přídavkem želatinovaných přírodních polymerů, například alginátu nebo karagenátu.
  3. 3. Způsob podle nároku 1 nebo 2, vyznačující se tím, že se odpovídajícího hydantoinu používá ve formě racemické směsi.
  4. 4. Způsob podle nároku 1 nebo 2, vyznačující se tím, že se pracuje v redukčním prostředí, buď v atmosféře dusíku, nebo za přítomnosti chemických redukčních činidel, jako je sulfid sodný.
CZ932683A 1992-04-10 1993-04-07 Způsob výroby D-aminokyselin nebo derivátů D - aminokyselin CZ285449B6 (cs)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
ES09200775A ES2042409B1 (es) 1992-04-10 1992-04-10 Procedimiento para la preparacion de d-aminoacidos o derivados de d-aminoacidos.
PCT/ES1993/000024 WO1993021336A1 (es) 1992-04-10 1993-04-07 Procedimiento para la preparacion de d-aminoacidos o derivados de d-aminoacidos

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CZ268393A3 CZ268393A3 (en) 1994-06-15
CZ285449B6 true CZ285449B6 (cs) 1999-08-11

Family

ID=8276694

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CZ932683A CZ285449B6 (cs) 1992-04-10 1993-04-07 Způsob výroby D-aminokyselin nebo derivátů D - aminokyselin

Country Status (12)

Country Link
EP (1) EP0602247A1 (cs)
JP (1) JPH06508529A (cs)
AU (1) AU666720B2 (cs)
BR (1) BR9305474A (cs)
CA (1) CA2111088A1 (cs)
CZ (1) CZ285449B6 (cs)
ES (1) ES2042409B1 (cs)
FI (1) FI935518A7 (cs)
HU (1) HU213883B (cs)
RO (1) RO112643B1 (cs)
SK (1) SK138893A3 (cs)
WO (1) WO1993021336A1 (cs)

Families Citing this family (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1996000296A1 (fr) * 1994-06-24 1996-01-04 Kanegafuchi Kagaku Kogyo Kabushiki Kaisha Procede de production de d-amino acide au moyen d'une preparation a base d'une enzyme composite immobilisee
CN1082090C (zh) * 1994-12-28 2002-04-03 钟渊化学工业株式会社 生产D－N－氨基甲酰基－α－氨基酸的方法
CN112920107B (zh) * 2021-02-07 2022-09-13 上海万巷制药有限公司 一种盐酸洛贝林的合成方法
CN113930376A (zh) * 2021-10-11 2022-01-14 江苏海洋大学 一种用于催化生产d-对羟基苯甘氨酸的工程菌、高密度培养方法及催化生产方法

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4094741A (en) * 1976-02-04 1978-06-13 Kanegafuchi Kagaku Kogyo Kabushiki Kaisha Process for preparing D-(-)-N-carbamoyl-2-(phenyl or substituted phenyl)glycines
IT1109506B (it) * 1978-05-23 1985-12-16 Snam Progetti Processo enzimatico-microbiologico per la produzione di amminoacidi otticamente attivi a partire da idantoine e/o carbamil-derivati racemi
JPS55104890A (en) * 1979-02-06 1980-08-11 Kanegafuchi Chem Ind Co Ltd Production of d-alpha-aminoacids
ES2058121T3 (es) * 1986-09-17 1994-11-01 Beecham Group Plc Preparacion enzimatica inmovilizada y su uso.
DE3918057C1 (cs) * 1989-06-02 1990-05-03 Degussa Ag, 6000 Frankfurt, De

Also Published As

Publication number Publication date
BR9305474A (pt) 1995-01-03
AU3891593A (en) 1993-11-18
FI935518L (fi) 1994-01-24
CZ268393A3 (en) 1994-06-15
ES2042409B1 (es) 1994-06-01
HU213883B (en) 1997-11-28
AU666720B2 (en) 1996-02-22
FI935518A7 (fi) 1994-01-24
EP0602247A1 (en) 1994-06-22
HUT67332A (en) 1995-03-28
WO1993021336A1 (es) 1993-10-28
ES2042409A1 (es) 1993-12-01
FI935518A0 (fi) 1993-12-09
RO112643B1 (ro) 1997-11-28
JPH06508529A (ja) 1994-09-29
CA2111088A1 (en) 1993-10-28
SK138893A3 (en) 1994-05-11

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US3907644A (en) Creatinine amidohydrolase composition and process for the determination of creatinine
Morikawa et al. Penicillin G production by immobilized whole cells of Penicillium chrysogenum
JPH05508549A (ja) 新規な酵素固定化形態としての架橋結合された結晶の使用
EP0058686A1 (en) PROCESS FOR PRODUCING HEPARINASE.
KR870000509B1 (ko) L-글루탐산 산화효소(h₂o₂생성), 그 제법 및 분석방법
Eberhardt On chemolithotrophy and hydrogenase of a Gram-positive Knallgas bacterium
US4650758A (en) Stabilization of enzymes useful in the production of glucosone and other enzymatic processes
CZ285449B6 (cs) Způsob výroby D-aminokyselin nebo derivátů D - aminokyselin
US3843442A (en) Immobilized glucose isomerase
CA1215336A (en) Immobilization of catalytically active microorganisms in agar gel fibers
US4275164A (en) Process and nutrient medium for growing microorganism
Karube et al. Production of L-glutamate by immobilized protoplasts
Dulaney Formation of extracellular lysine by Ustilago maydis and Gliocladium sp.
JPH0657149B2 (ja) ウレア−ゼ及びその製造法
EP0032987A1 (en) Thermophilic aspartase, processes for producing, culture used, and L-aspartic acid preparation process using the same
RU2146291C1 (ru) Усовершенствованный биотехнологический способ получения акриламида
Patel et al. Stabilization of a halophilic α-amylase by calcium alginate immobilization
Rai et al. Production of D-amino acids using immobilized D-hydantoinase from lentil, Lens esculenta, seeds
JPS6258708B2 (cs)
CA2003767A1 (en) Biocatalysts and processes for the manufacture thereof
Konecny Enzymes as Industrial Catalysts
JP3392865B2 (ja) 固定化酵素調製物およびＤ―α―アミノ酸の製造法
Stella et al. Porphyrin biosynthesis. Immobilized enzymes IV. Studies on aminolaevulate dehydratase attached to Sepharose
Sato et al. Depolymerization of chondroitin C sulfate by immobilized Proteus vulgaris cells
JPS58116690A (ja) Ｄ−β−ヒドロキシアミノ酸の製造法

Legal Events

Date Code Title Description
IF00 In force as of 2000-06-30 in czech republic
MM4A Patent lapsed due to non-payment of fee

Effective date: 20000407