SK138893A3 - Method of the preparation of d-aminoacids or d-aminoacid derivatives - Google Patents
Method of the preparation of d-aminoacids or d-aminoacid derivatives Download PDFInfo
- Publication number
- SK138893A3 SK138893A3 SK1388-93A SK138893A SK138893A3 SK 138893 A3 SK138893 A3 SK 138893A3 SK 138893 A SK138893 A SK 138893A SK 138893 A3 SK138893 A3 SK 138893A3
- Authority
- SK
- Slovakia
- Prior art keywords
- activity
- immobilized
- hydantoin
- preparation
- biocatalyst
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P41/00—Processes using enzymes or microorganisms to separate optical isomers from a racemic mixture
- C12P41/006—Processes using enzymes or microorganisms to separate optical isomers from a racemic mixture by reactions involving C-N bonds, e.g. nitriles, amides, hydantoins, carbamates, lactames, transamination reactions, or keto group formation from racemic mixtures
- C12P41/009—Processes using enzymes or microorganisms to separate optical isomers from a racemic mixture by reactions involving C-N bonds, e.g. nitriles, amides, hydantoins, carbamates, lactames, transamination reactions, or keto group formation from racemic mixtures by reactions involving hydantoins or carbamoylamino compounds
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N11/00—Carrier-bound or immobilised enzymes; Carrier-bound or immobilised microbial cells; Preparation thereof
- C12N11/02—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier
- C12N11/04—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier entrapped within the carrier, e.g. gel or hollow fibres
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P13/00—Preparation of nitrogen-containing organic compounds
- C12P13/04—Alpha- or beta- amino acids
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Dispersion Chemistry (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Immobilizing And Processing Of Enzymes And Microorganisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
Abstract
Description
Spôsob výroby D-aminokyselín alebo derivátov D-aminokyselínProcess for the preparation of D-amino acids or D-amino acid derivatives
Oblasť technikyTechnical field
Vynález sa týka nového spôsobu výroby D-aminokyselín alebo derivátov D-aminokyselín z racemickej zmesi príslušného hydantoinu pri použití buniek Agrobacterium radiobacter imobilizovaných prídavkom želatínovaných prírodných polymérov.The invention relates to a novel process for the preparation of D-amino acids or D-amino acid derivatives from a racemic mixture of the respective hydantoin using Agrobacterium radiobacter cells immobilized by the addition of gelatinized natural polymers.
Použitie biokatalyzátorov, na báze imobilizovaných mikroorganizmov poskytuje značné výhody pri kontinuálnej prevádzke. Vynález sa teda týka stereoselektívnej biochemickej transformácie D-hydantoinu, ktorej účelom je získať príslušnú D-aminokyselinu. Produkty, ktoré sa dajú týmto spôsobom získať, sú zaujímavé pre farmaceutický priemysel, ako v prípade p-hydroxyfenylglycínu.The use of biocatalysts based on immobilized microorganisms provides considerable advantages in continuous operation. The invention thus relates to the stereoselective biochemical transformation of D-hydantoin in order to obtain the corresponding D-amino acid. The products obtainable in this way are of interest to the pharmaceutical industry, such as p-hydroxyphenylglycine.
Doterajší stav technikyBACKGROUND OF THE INVENTION
Použitie hydantoinázového a/alebo karbamylázového enzymatického systému pre transformáciu hydantoinov je velmi dobre známe (Biotechnology: A Comprehensive Treatise zv. 6a, H-J. Rehm, G. Reed Eds., Verlag Chemie, Weinheim, 1984).The use of a hydantoinase and / or carbamylase enzyme system for transforming hydantoins is well known (Biotechnology: A Comprehensive Treatise Vol. 6a, H-J. Rehm, G. Reed Eds., Verlag Chemie, Weinheim, 1984).
Ako producenti hore uvedeného enzymatického systému bol navrhnutý celý rad mikroorganizmov, mj. Pseudomonas, Agbacterium, Candida, Hansenula, Arthrobacter. Osobitný záujem bol zameraný na Agrobacterium radiobacter, vďaka skutečnosti, že poskytuje celý enzymatický systém, ktorý vykazuje obidve aktivity.A number of microorganisms have been proposed as producers of the above-mentioned enzyme system, inter alia. Pseudomonas, Agbacterium, Candida, Hansenula, Arthrobacter. Particular interest has been directed to Agrobacterium radiobacter, due to the fact that it provides an entire enzymatic system that exhibits both activities.
Z patentov, ktoré majú vzťah k tomuto predmetu, je treba zdôrazniť tie, ktoré sa týkajú použitia Agrobacterium radiobacter na získanie D-fenylglycínu alebo jeho derivátov (DE-OS 2 621 076; DE-OS 2 920 963) a tiež nasledujúce články: R. Olivieri a ďalšie: Enzymatic Conversion of Ncarbamyl-D-amino acids to D-amino acids Enzýme Microb. Technol. 1, 201 až 204 (1979) a R. Olivieri a ďalšie Microbial Transformation of Racemic Hydantoins to D-amino acids Biotechnol. Bioeng. 23, 2173 až 2183 (1981). Tieto články opisujú mikrobiálny postup, pri ktorom sa používa voľná biomasa.Of the patents related to this subject, it should be noted those relating to the use of Agrobacterium radiobacter to obtain D-phenylglycine or its derivatives (DE-OS 2 621 076; DE-OS 2 920 963) and also the following articles: R Olivieri et al.: Enzymatic Conversion of N-carbamyl-D-amino acids to D-amino acids Enzyme Microb. Technol. 1, 201-204 (1979) and R. Olivieri et al., Microbial Transformation of Racemic Hydantoins to D-amino acids Biotechnol. Bioeng. 23, 2173-2183 (1981). These articles describe a microbial process using free biomass.
Z iných mikroorganizmov poskytujúcich enzymatické systémy je možné uviest Agrobacterium tumefaciens (EP 0 309 310), Pseudomonas (DE-OS 3 018 581), Candida (JP 61 177 992), Hansenula (JP 61 177 991).Other microorganisms providing enzyme systems include Agrobacterium tumefaciens (EP 0 309 310), Pseudomonas (DE-OS 3 018 581), Candida (JP 61 177 992), Hansenula (JP 61 177 991).
Použitie imobilizovaných mikroorganizmov, poskytuje podstatné prevádzkové výhody ako pri výrobe, tak pri separácii, ktoré sú predmetom tohto vynálezu. Použitie buniek Agrobacterium radiobacter imobilizovaných v želatínovaných polyméroch už síce bolo patentované (ES 523 360), tento biokatalyzátor však bol používaný pre poľnohospodárske účely a zachovanie enzýmovej účinnosti hydantoinázy a karbamylázy bolo opomíjané.The use of immobilized microorganisms provides substantial operational advantages both in the manufacturing and separation processes of the present invention. Although the use of Agrobacterium radiobacter cells immobilized in gelatinized polymers has already been patented (ES 523 360), this biocatalyst has been used for agricultural purposes and the maintenance of the enzyme activity of hydantoinase and carbamylase has been neglected.
Na druhej strane už bolo opísané použitie iných imobilizovaných mikroorganizmov pre biokonverziu hydantoinov, ako v prípade EP 0 Bacillus brevis. Ďalej 4 094 741. Nároky tohtoOn the other hand, the use of other immobilized microorganisms for the bioconversion of hydantoins has been described, as in the case of EP 0 Bacillus brevis. Next 4 094 741. Claims of this
261 836, ktorý sa týka imobilizácie je potrebné uviest US pantent č. patentu zahŕňajú všeobecne imobilizáciu enzymatickej účinnosti radu mikroorganizmov. Nie je tu však konkrétne uvádzaný mikroorganizmus Agrobacterium radiobacter ani špecifické metódy imobilizácie.No. 261,836, relating to immobilization, U.S. Pat. of the patent include generally immobilizing the enzymatic activity of a number of microorganisms. However, there is no specific mention of Agrobacterium radiobacter or specific methods of immobilization.
Podstata vynálezuSUMMARY OF THE INVENTION
Predmetom vynálezu je nový spôsob výroby D-aminokyselín a derivátov D-aminokyselín z racemickej zmesi zodpovedajúceho hydantoinu, pri ktorom sa používajú bunky Agrobacterium radiobacter, ktoré sú imobilizované prídavkom želatínovaných prírodných polymérov.SUMMARY OF THE INVENTION The present invention provides a novel process for the preparation of D-amino acids and D-amino acid derivatives from a racemic mixture of the corresponding hydantoin using Agrobacterium radiobacter cells which are immobilized by the addition of gelatinized natural polymers.
Použitie imobilizovaných mikroorganizmov umožňuje opakované použitie biokatalyzátoru. Tým sa dosiahne podstatných výhod, ako z hľadiska separácie, tak i z hľadiska prevádzky kontinuálneho postupu.The use of immobilized microorganisms allows reuse of the biocatalyst. This results in substantial advantages, both in terms of separation and in terms of operation of the continuous process.
Použitie buniek Agrobacterium radiobacter prináša výhodu v tom, že poskytuje úplný potrebný enzymatický systém pre kvantitatívnu transformáciu D-hydantoinu na žiadúci produkt.The use of Agrobacterium radiobacter cells has the advantage of providing the complete enzymatic system required for the quantitative transformation of D-hydantoin to the desired product.
Stereošpecifita enzýmov, ktoré pôsobia na D-formu hydantoinu je založená na rušení D-L-rovnováhy racemickej zmesi, čo umožňuje kvantitatívnu konverziu takej racemickej zmesi na D-aminokyselinu alebo derivát D-aminokyseliny.The stereospecificity of the enzymes that act on the D-form of the hydantoin is based on disrupting the D-L-equilibrium of the racemic mixture, allowing the quantitative conversion of such a racemic mixture to the D-amino acid or D-amino acid derivative.
Imobilizácia buniek Agrobacterium radiobacter (pričom tieto bunky sú neporušené alebo rozbité) sa uskutočňuje prídavkom želatínovaného alginátu alebo karageenátu, vytváraného v prítomnosti vápenatých iónov a/alebo vzniknutého tepelným spracovaním. Kulovité čiastice s regulovateľnou veľkosťou, ktoré sa takto získajú, sa dajú prípadne d'alej spevňovať:, aby sa zvýšila ich mechanická odolnosť.Immobilization of Agrobacterium radiobacter cells (which cells are intact or broken) is accomplished by the addition of gelatinous alginate or carageenate formed in the presence of calcium ions and / or generated by heat treatment. The spherical particles of controllable size thus obtained can optionally be further strengthened to increase their mechanical resistance.
V dôsledku tohto sa získa stabilný biokatalyzátor, ktorý je schopný vykonať plnú konverziu D-L-hydantoinu na zodpovedajúci derivát D-aminokyseliny, pričom tento biokatalyzátor sa dá používať počas najmenej 22 dní.As a result, a stable biocatalyst is obtained which is capable of fully converting D-L-hydantoin to the corresponding D-amino acid derivative, wherein the biocatalyst can be used for at least 22 days.
Vynález je bližšie objasnený v nasledujúcom príklade. Tento príklad má výhradne ilustratívny charakter a v žiadnom ohlade neobmedzuje rozsah vynálezu. Príklad je ilustrovaný obrázkami, ktorých prehlad je uvedený ďalej.The invention is illustrated by the following example. This example is for illustrative purposes only and in no way limits the scope of the invention. The example is illustrated by the figures below.
Prehlad obr. na výkresochAn overview of FIG. in the drawings
Na obr. 1 je znázornená závislosť aktivity hydantoinázy od hodnoty pH.In FIG. 1 depicts the pH dependence of hydantoinase activity.
Na obr. 2 je znázornená závislosť aktivity karbamylázy od hodnoty pH.In FIG. 2 shows the pH dependence of carbamylase activity.
Na obr. 3 a 4 je znázornená závislosť enzymatických účinností od teploty.In FIG. Figures 3 and 4 show temperature dependence of enzymatic activities.
Na obr. 5 a 6 je znázornená stabilita voinej biomasy pri 45 a 50 °C.In FIG. Figures 5 and 6 show the stability of free biomass at 45 and 50 ° C.
Na obr. 7 je znázornená stabilita dvoch skúšaných enzymatických aktivít v priebehu 22 dní pri 40 °C.In FIG. 7 shows the stability of two enzymatic activities tested over 22 days at 40 ° C.
Na obr. 8 je znázornená výkonnosť voinej biomasy, skúšenej v rovnakých podmienkach.In FIG. 8 shows the performance of free biomass tested under the same conditions.
Príklady predvedeniaDemonstration examples
1. Bunky Agrobacterium radiobacter sa používajú na získanie D-p-hydroxyfenylglycínu zo zodpovedajúceho hydantoinu. Výsledný produkt sa získa podlá nasledujúcej schémy.1. Agrobacterium radiobacter cells are used to obtain D-p-hydroxyphenylglycine from the corresponding hydantoin. The resulting product is obtained according to the following scheme.
HOHO
H —c— nh hydantoináza ho — —ch—cooh o =C C=oH — C-nh hydantoinase ho-c-ooh o = C C = o
NH m — C — nhII z oNH m-C-nhII of o
D,L-hydantoin karbamylázaD, L-hydantoin carbamylase
HO CH-COCWHO CH-COCW
NH 2NH 2
D-p-hvdroxyfenylglycínD-p-hvdroxyfenylglycín
2. Skúšky aktivity2. Activity tests
2.1. Enzymatická aktivita biomasy Agrobacterium radiobacter sa stanoví týmto spôsobom: 1 ml suspenzie biokatalyzátoru sa pridá k 11 ml suspenzie hydantoinu v tlmiacom roztoku s pH 8, pričom koncová koncentrácia substrátu je 0,02M. Zmes sa inkubuje 20 minút pri 40 °C v atmosfére dusíka a získaný D-p-hydroxy-fenylglycín sa analýzuje vysoko účinnou kvapalinovou chromatografiou (HPLC).2.1. The enzymatic activity of the Agrobacterium radiobacter biomass is determined as follows: 1 ml of the biocatalyst suspension is added to 11 ml of the hydantoin suspension in pH 8 buffer, with a final substrate concentration of 0.02M. The mixture was incubated for 20 minutes at 40 ° C under a nitrogen atmosphere and the obtained D-p-hydroxyphenylglycine was analyzed by high performance liquid chromatography (HPLC).
Na stanovenie karbamylázovej aktivity sa použijú rovnaké skúšky aktivity, len s tým rozdielom, že sa miesto hydantoinu použije karbamylderivát.The same activity assays are used to determine carbamylase activity except that carbamylderivative is used instead of hydantoin.
Aktivita imobilizovaného biokatalyzátoru sa stanoví rovnakým spôsobem, pričom sa robí s 5 ml biokatalyzátoru.The activity of the immobilized biocatalyst is determined in the same manner, with 5 ml of biocatalyst.
2.2. Na stanovenie najlepšej hodnoty pH pre každú enzymatickú aktivitu sa vyrobí lOmM roztoky každého zo substrátov (hydantoinu a karbamylderivátu) v tris-HCl tlmiacom roztoku alebo tlmiacom roztoku na báze uhličitan/kyselina uhličitá, v závislosti od žiaduceho pH. Suspenzia 1 ml biomasy sa pridá k roztoku substrátu s objemom 10 ml. Skúšanie sa uskutočňuje pri 40 °C spôsobom uvádzaným v odseku 2.1.2.2 To determine the best pH for each enzymatic activity, 10 mM solutions of each of the substrates (hydantoin and carbamyl derivative) in tris-HCl buffer or carbonate / carbonic acid buffer were prepared, depending on the desired pH. A suspension of 1 ml of biomass is added to a 10 ml substrate solution. Testing shall be carried out at 40 ° C as described in paragraph 2.1.
2.3. Na stanovenie najlepšej teploty pre každú enzymatickú aktivitu sa substráty (lOmM) rozpustia v tris- HCl tlmiacom roztoku pri optimálnom pH pre každý prípad (pH 8, v prípade hydantoinázovej aktivity a pH 8,5, v prípade karbamylázovej aktivity). Skúšky aktivity sa uskutočňujú pri rôznych teplotách.2.3 To determine the best temperature for each enzymatic activity, substrates (10mM) were dissolved in tris-HCl buffer at the optimum pH for each case (pH 8 for hydantoinase activity and pH 8.5 for carbamylase activity). Activity assays are performed at various temperatures.
2.4. Hydantoinázová aktivita sa vyjádri v jednotkách mmol/1 konvertovaného produktu v priebehu 20 minútovej reakcie (súčet produkt + karbamylderivát). Karbamylázová aktivita sa vyjádri v jednotkách mmol/1 p-hydroxyfenyl-glycínu, získaného po 20 minútovej reakcii z intermediárneho produktu .2.4 Hydantoinase activity is expressed in mmol / l of converted product over a 20 minute reaction (sum of product + carbamyl derivative). The carbamylase activity is expressed in mmol / L of p-hydroxyphenyl-glycine obtained after reaction for 20 minutes from the intermediate product.
3. Imobilizácia3. Immobilization
Suspenzia buniek Agrobacterium radiobacter sa imobilizuje v želatínovanom alginátu pri použití nasledujúceho postupu:Agrobacterium radiobacter cell suspension is immobilized in gelatinized alginate using the following procedure:
Materiály: alginát sodný (Protanal LF 10/60) pri 40 % koncového objemu. Biomasa Agrobacterium radiobacter sa používa v koncentrácii 21 % koncového objemu, koncentrácia chloridu vápenatého je 1,5 %.Materials: sodium alginate (Protanal LF 10/60) at 40% final volume. Agrobacterium radiobacter biomass is used in a concentration of 21% of the final volume, the concentration of calcium chloride is 1.5%.
ml biomasy (s koncentráciou 0,7 g/ml) sa zmieša s roztokom alginátu sodného (2,6 g, 46,67 ml). Zmes sa magneticky trepe, až do úplnej homogenizácie. Pomocou peristaltického čerpadla sa gél zavádza do dutej ihly (priemer 0,5 mm) umiestnenej vo vzdialenosti 30 cm od mechanicky tre7 paného roztoku chloridu vápenatého. Pri styku gélu s vápenatými ióny dochádza k stuhnutí kvapiek. Všetky imobilizačné postupy sa uskutočňujú v dusíkovej atmosfére.ml of biomass (0.7 g / ml) was mixed with sodium alginate solution (2.6 g, 46.67 ml). The mixture is agitated magnetically until complete homogenization. Using a peristaltic pump, the gel is introduced into a hollow needle (0.5 mm diameter) located 30 cm from the mechanically shaken calcium chloride solution. Contact of the gel with calcium ions causes the droplets to solidify. All immobilization procedures are carried out under a nitrogen atmosphere.
4. Stabilita4. Stability
4.1. Stabilita volnej biomasy ml biomasy sa udržuje pri teplote skúšania a pod dusíkovou atmosférou po celý čas vykonávania tejto skúšky. Vo vopred určených časových intervaloch sa odoberajú jedenmililitrové vzorky, ktoré sa skúšajú na aktivitu.4.1. The stability of free biomass ml of biomass shall be maintained at the test temperature and under a nitrogen atmosphere throughout the test. One milliliter samples are taken at predetermined time intervals and tested for activity.
4.2. Stabilita imobilizovanej biomasy2.4 Stability of immobilized biomass
Na stanovenie stability vyrobeného biokatalyzátoru sa periodicky vykonávajú skúšky aktivity. Imobilizovaný biokatalyzátor sa uchováva v uzatvorených nádobách v žiadúcej teplote pod atmosférou dusíka, pričom koncentrácia hydantoinu je 30 g/1. Biokatalyzátor sa pred uskutočňovaním skúšok aktivity podrobí celkovomu praciemu postupu.Activity tests are periodically performed to determine the stability of the biocatalyst produced. The immobilized biocatalyst is stored in sealed containers at the desired temperature under a nitrogen atmosphere, the hydantoin concentration being 30 g / l. The biocatalyst is subjected to an overall washing procedure before conducting activity tests.
5. Výsledky5. Results
5.1. Stanovenie pracovných podmienok pre každú enzymatickú aktivitu1.5 Determination of working conditions for each enzyme activity
Závislosť aktivity hydantoinázy od hodnoty pH je zrejmá z obr. 1. Ne j väčšia odchýlka sa dosahuje pri pH 8. Podobne, obr. 8 uvádza závislosť aktivity karbamylázy od hodnoty pH, pričom je zrejmé, že optimálna hodnota pH je v tomto prípade 8,5.The pH dependence of the hydantoinase activity is shown in FIG. 1. A greater deviation is achieved at pH 8. Similarly, FIG. 8 shows the dependence of carbamylase activity on pH, and it is apparent that the optimum pH in this case is 8.5.
Obr. 3 a 4 uvádzajú závislosť enzymatické aktivity od teploty. Maximálna aktivita hydantoinázy sa dosahuje pri 45 °C a maximálna aktivity karbamylázy sa dosahuje pri 50 °C.Fig. Figures 3 and 4 show the dependence of enzyme activity on temperature. Maximum hydantoinase activity is achieved at 45 ° C and maximum carbamylase activity is achieved at 50 ° C.
Stabilita volnej biomasy pri 45 a 50 °C je zrejmá z obr. 5 a 6. Obidve enzymatické aktivity vykazujú vysokú stabilitu v priebehu 10 dní, i keď sa aktivita karbamylázy pri 50 °C zníži o približne 20 %.The stability of the free biomass at 45 and 50 ° C is apparent from FIG. Both enzymatic activities show high stability over 10 days, although the carbamylase activity at 50 ° C decreases by approximately 20%.
Datá, ktoré boli získané pri skúškach aktivity a stability umožňujú doisť k záveru, že pracovná teplota by mala ležať v rozmedzí od 45 do 50 °C a optimálna hodnota pH v rozmedzí od 8 do 8,5. Ak je však v biomase prítomné menej karbamylázovej aktivity, v srovnaní s hydaňtoinázovou aktivitou, malo by sa robiť vo väčšej blízkosti optimálnych hodnôt pre karbamylázovú aktivitu, ktoré sú: pH = 8,5 a teplota = 50 °C.The data obtained in the activity and stability tests allow to conclude that the working temperature should be in the range of 45 to 50 ° C and the optimum pH in the range of 8 to 8.5. However, if less carbamylase activity is present in biomass, compared to hydantoinase activity, optimal values for carbamylase activity should be made in close proximity to: pH = 8.5 and temperature = 50 ° C.
5.2. Prevádzka pri použití imobilizovaného biokatalyzátoru.2.5 Operation using immobilized biocatalyst.
Výsledky, ktoré boli získané s imobilizovaným biokatalyzátorom, ukazujú, že sa dosahuje retencia aktivity 50 až 80 % (je potreba vziať do úvahy, že meranie aktivity odráža nie len vlastnú enzymatickú aktivitu, ale i rôzne obmedzenia, ku ktorým dochádza v prípade imobilizovaného biokatalyzátoru).The results obtained with the immobilized biocatalyst show that an activity retention of 50-80% is achieved (it should be taken into account that measurement of activity reflects not only the enzymatic activity itself but also the various limitations that occur with the immobilized biocatalyst) .
Získané čiastice biokatalyzátoru vykazujú stabilitu 100 %, pokiaľ sa týka dvoch skúšaných enzymatických aktivít v priebehu 22 dní pri 40 °C (viz obr. 7).The biocatalyst particles obtained exhibit 100% stability with respect to the two enzymatic activities tested over a period of 22 days at 40 ° C (see Fig. 7).
Výkonnosť imobilizovaného biokatalyzátoru je rovnaká ako výkonnosť volnej biomasy, pri skúšaní v rovnakých podmienkach (viz obr. 8).The performance of the immobilized biocatalyst is the same as that of free biomass when tested under the same conditions (see Figure 8).
Imobilizovaný biokatalyzátor je preto schopný si udržiavať v prevádzkových podmienkach enzymatické aktivity buniek Agrobacterium radiobacter a uskutočňovať špecifickú transformáciu D-hydantoinu na D-p-hydroxyfenylglycín.The immobilized biocatalyst is therefore able to maintain the enzymatic activities of Agrobacterium radiobacter cells under operating conditions and to perform a specific transformation of D-hydantoin to D-p-hydroxyphenylglycine.
Claims (5)
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
ES9200775A ES2042409B1 (en) | 1992-04-10 | 1992-04-10 | PROCEDURE FOR THE PREPARATION OF D-AMINO ACIDS OR D-AMINO ACID DERIVATIVES. |
PCT/ES1993/000024 WO1993021336A1 (en) | 1992-04-10 | 1993-04-07 | Method for the preparation of d-aminoacids or d-aminoacids derivatives |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
SK138893A3 true SK138893A3 (en) | 1994-05-11 |
Family
ID=8276694
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
SK1388-93A SK138893A3 (en) | 1992-04-10 | 1993-04-07 | Method of the preparation of d-aminoacids or d-aminoacid derivatives |
Country Status (12)
Country | Link |
---|---|
EP (1) | EP0602247A1 (en) |
JP (1) | JPH06508529A (en) |
AU (1) | AU666720B2 (en) |
BR (1) | BR9305474A (en) |
CA (1) | CA2111088A1 (en) |
CZ (1) | CZ285449B6 (en) |
ES (1) | ES2042409B1 (en) |
FI (1) | FI935518A (en) |
HU (1) | HU213883B (en) |
RO (1) | RO112643B1 (en) |
SK (1) | SK138893A3 (en) |
WO (1) | WO1993021336A1 (en) |
Families Citing this family (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO1996000296A1 (en) * | 1994-06-24 | 1996-01-04 | Kanegafuchi Kagaku Kogyo Kabushiki Kaisha | Process for producing d-amino acid by using composite immobilized enzyme preparation |
CN100516197C (en) * | 1994-12-28 | 2009-07-22 | 钟渊化学工业株式会社 | Process for producing d-n-carbamoyl-alpha-amino acids |
CN112920107B (en) * | 2021-02-07 | 2022-09-13 | 上海万巷制药有限公司 | Synthetic method of lobeline hydrochloride |
CN113930376A (en) * | 2021-10-11 | 2022-01-14 | 江苏海洋大学 | Engineering bacterium for catalytic production of D-p-hydroxyphenylglycine, high-density culture method and catalytic production method |
Family Cites Families (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4094741A (en) * | 1976-02-04 | 1978-06-13 | Kanegafuchi Kagaku Kogyo Kabushiki Kaisha | Process for preparing D-(-)-N-carbamoyl-2-(phenyl or substituted phenyl)glycines |
IT1109506B (en) * | 1978-05-23 | 1985-12-16 | Snam Progetti | ENZYMATIC-MICROBIOLOGICAL PROCESS FOR THE PRODUCTION OF OPTICALLY ACTIVE AMINO ACIDS FROM IDANTOINE AND / OR CARBAMY-DERIVATIVES RACEMI |
JPS55104890A (en) * | 1979-02-06 | 1980-08-11 | Kanegafuchi Chem Ind Co Ltd | Production of d-alpha-aminoacids |
DE3786511T2 (en) * | 1986-09-17 | 1994-01-13 | Beecham Group Plc | Immobilized enzyme preparation and its use. |
DE3918057C1 (en) * | 1989-06-02 | 1990-05-03 | Degussa Ag, 6000 Frankfurt, De |
-
1992
- 1992-04-10 ES ES9200775A patent/ES2042409B1/en not_active Expired - Fee Related
-
1993
- 1993-04-07 CZ CZ932683A patent/CZ285449B6/en not_active IP Right Cessation
- 1993-04-07 WO PCT/ES1993/000024 patent/WO1993021336A1/en active IP Right Grant
- 1993-04-07 JP JP5518006A patent/JPH06508529A/en active Pending
- 1993-04-07 BR BR9305474A patent/BR9305474A/en not_active Application Discontinuation
- 1993-04-07 AU AU38915/93A patent/AU666720B2/en not_active Ceased
- 1993-04-07 CA CA 2111088 patent/CA2111088A1/en not_active Abandoned
- 1993-04-07 RO RO93-01673A patent/RO112643B1/en unknown
- 1993-04-07 HU HU9303600A patent/HU213883B/en not_active IP Right Cessation
- 1993-04-07 EP EP93907873A patent/EP0602247A1/en not_active Withdrawn
- 1993-04-07 SK SK1388-93A patent/SK138893A3/en unknown
- 1993-12-09 FI FI935518A patent/FI935518A/en unknown
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
HU213883B (en) | 1997-11-28 |
EP0602247A1 (en) | 1994-06-22 |
CZ268393A3 (en) | 1994-06-15 |
CZ285449B6 (en) | 1999-08-11 |
JPH06508529A (en) | 1994-09-29 |
ES2042409A1 (en) | 1993-12-01 |
ES2042409B1 (en) | 1994-06-01 |
AU666720B2 (en) | 1996-02-22 |
AU3891593A (en) | 1993-11-18 |
WO1993021336A1 (en) | 1993-10-28 |
RO112643B1 (en) | 1997-11-28 |
FI935518A (en) | 1994-01-24 |
FI935518A0 (en) | 1993-12-09 |
CA2111088A1 (en) | 1993-10-28 |
HUT67332A (en) | 1995-03-28 |
BR9305474A (en) | 1995-01-03 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Jack et al. | The immobilization of whole cells | |
IE852409L (en) | Treating a dinitrile with a mononitrilase | |
Tramper | Immobilizing biocatalysts for use in syntheses | |
EP0330695B1 (en) | Process for preparation of organic chemicals | |
EP0366303A3 (en) | Biocatalysts | |
SK138893A3 (en) | Method of the preparation of d-aminoacids or d-aminoacid derivatives | |
Marconi | Immobilized enzymes: their catalytic behaviour and their industrial and analytical applications | |
US4650758A (en) | Stabilization of enzymes useful in the production of glucosone and other enzymatic processes | |
Morin et al. | Enrichment and Selection of Hydantoinase-producing Micro-organisms | |
Messing | Immobilized microbes | |
EP0383403A1 (en) | Process for preparation of organic chemicals | |
CN106636294B (en) | Process for producing unnatural amino acid product by immobilized double-enzyme coupling reaction | |
EP0032987A1 (en) | Thermophilic aspartase, processes for producing, culture used, and L-aspartic acid preparation process using the same | |
Çalık et al. | Growth and κ-carrageenan immobilization of Pseudomonas dacunhae cells for l-alanine production | |
Rai et al. | Production of D-amino acids using immobilized D-hydantoinase from lentil, Lens esculenta, seeds | |
Chen et al. | Production of N-carbamoyl-D-hydroxyphenylglycine by D-hydantoinase activity of a recombinant Escherichia coli | |
RU2146291C1 (en) | Improved biotechnological process of acrylamide producing | |
JPH01199576A (en) | Alpha-aminoadipinylmonoamino compound | |
IE63088B1 (en) | Biocatalysts and processes for the manufacture thereof | |
Mosbach | Immobilized enzymes in organic synthesis | |
Zaborsky | Enzymes: biological catalysts | |
RU2420581C1 (en) | Method of producing biocatalyst exhibiting cephalosporin acid synthesis activity | |
Katchalski‐Katzir | Preparation, properties and uses of polymer‐enzyme conjugates | |
Andresen et al. | Application of Enzymes to Organic Synthesis | |
JPH0286771A (en) | Biocatalyst and production thereof, and production of optically active compound |