CZ278613B6 - Process of determining nad(p)h or substrates or enzymes reacting under the formation or consumption of nad(p)h and a testing system for making the same - Google Patents
Process of determining nad(p)h or substrates or enzymes reacting under the formation or consumption of nad(p)h and a testing system for making the same Download PDFInfo
- Publication number
- CZ278613B6 CZ278613B6 CS839721A CS972183A CZ278613B6 CZ 278613 B6 CZ278613 B6 CZ 278613B6 CS 839721 A CS839721 A CS 839721A CS 972183 A CS972183 A CS 972183A CZ 278613 B6 CZ278613 B6 CZ 278613B6
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- nad
- substances
- mmol
- test system
- range
- Prior art date
Links
- 238000012360 testing method Methods 0.000 title claims description 31
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 16
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 title claims description 11
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 title claims description 11
- 239000000758 substrate Substances 0.000 title claims description 7
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 title description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 26
- 239000002824 redox indicator Substances 0.000 claims description 25
- 239000012085 test solution Substances 0.000 claims description 16
- 108091006149 Electron carriers Proteins 0.000 claims description 4
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims description 4
- RXGJTUSBYWCRBK-UHFFFAOYSA-M 5-methylphenazinium methyl sulfate Chemical compound COS([O-])(=O)=O.C1=CC=C2[N+](C)=C(C=CC=C3)C3=NC2=C1 RXGJTUSBYWCRBK-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 3
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 3
- 125000003831 tetrazolyl group Chemical group 0.000 claims description 3
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 claims description 2
- 239000000370 acceptor Substances 0.000 claims 3
- ZYDGCYWJDWIJCS-UHFFFAOYSA-N 1-methoxyphenazine Chemical compound C1=CC=C2N=C3C(OC)=CC=CC3=NC2=C1 ZYDGCYWJDWIJCS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 25
- XJLXINKUBYWONI-DQQFMEOOSA-N [[(2r,3r,4r,5r)-5-(6-aminopurin-9-yl)-3-hydroxy-4-phosphonooxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl] [(2s,3r,4s,5s)-5-(3-carbamoylpyridin-1-ium-1-yl)-3,4-dihydroxyoxolan-2-yl]methyl phosphate Chemical compound NC(=O)C1=CC=C[N+]([C@@H]2[C@H]([C@@H](O)[C@H](COP([O-])(=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]3[C@H]([C@@H](OP(O)(O)=O)[C@@H](O3)N3C4=NC=NC(N)=C4N=C3)O)O2)O)=C1 XJLXINKUBYWONI-DQQFMEOOSA-N 0.000 description 18
- 229930027945 nicotinamide-adenine dinucleotide Natural products 0.000 description 17
- 239000007979 citrate buffer Substances 0.000 description 11
- 230000004456 color vision Effects 0.000 description 11
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 10
- RTAQQCXQSZGOHL-UHFFFAOYSA-N Titanium Chemical compound [Ti] RTAQQCXQSZGOHL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 239000010936 titanium Substances 0.000 description 9
- 229910052719 titanium Inorganic materials 0.000 description 9
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 7
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 7
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 7
- LEHOTFFKMJEONL-UHFFFAOYSA-N Uric Acid Chemical compound N1C(=O)NC(=O)C2=C1NC(=O)N2 LEHOTFFKMJEONL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- TVWHNULVHGKJHS-UHFFFAOYSA-N Uric acid Natural products N1C(=O)NC(=O)C2NC(=O)NC21 TVWHNULVHGKJHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 230000008033 biological extinction Effects 0.000 description 5
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 5
- 229940116269 uric acid Drugs 0.000 description 5
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 4
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 4
- KUUVQVSHGLHAKZ-UHFFFAOYSA-N thionine Chemical compound C=1C=CC=CSC=CC=1 KUUVQVSHGLHAKZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 3
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 3
- JJMQRJKPLUACSO-UHFFFAOYSA-N 3-(4-iodophenyl)-2-(4-nitrophenyl)-5-phenyl-1,3-dihydrotetrazol-3-ium;chloride Chemical compound [Cl-].C1=CC([N+](=O)[O-])=CC=C1N1N(C=2C=CC(I)=CC=2)[NH2+]C(C=2C=CC=CC=2)=N1 JJMQRJKPLUACSO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101710088194 Dehydrogenase Proteins 0.000 description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RJTOSFZZYBCYTM-UHFFFAOYSA-N Moperone hydrochloride Chemical compound [Cl-].C1=CC(C)=CC=C1C1(O)CC[NH+](CCCC(=O)C=2C=CC(F)=CC=2)CC1 RJTOSFZZYBCYTM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FBWADIKARMIWNM-UHFFFAOYSA-N N-3,5-dichloro-4-hydroxyphenyl-1,4-benzoquinone imine Chemical compound C1=C(Cl)C(O)=C(Cl)C=C1N=C1C=CC(=O)C=C1 FBWADIKARMIWNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010046334 Urease Proteins 0.000 description 2
- 238000007357 dehydrogenase reaction Methods 0.000 description 2
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- VNWKTOKETHGBQD-UHFFFAOYSA-N methane Chemical compound C VNWKTOKETHGBQD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- SOWBFZRMHSNYGE-UHFFFAOYSA-N oxamic acid Chemical compound NC(=O)C(O)=O SOWBFZRMHSNYGE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 2
- 239000010981 turquoise Substances 0.000 description 2
- ZYECOAILUNWEAL-NUDFZHEQSA-N (4z)-4-[[2-methoxy-5-(phenylcarbamoyl)phenyl]hydrazinylidene]-n-(3-nitrophenyl)-3-oxonaphthalene-2-carboxamide Chemical compound COC1=CC=C(C(=O)NC=2C=CC=CC=2)C=C1N\N=C(C1=CC=CC=C1C=1)/C(=O)C=1C(=O)NC1=CC=CC([N+]([O-])=O)=C1 ZYECOAILUNWEAL-NUDFZHEQSA-N 0.000 description 1
- MASUWVVNWALEEM-UHFFFAOYSA-M 1-methoxy-5-methylphenazin-5-ium;methyl sulfate Chemical compound COS([O-])(=O)=O.C1=CC=C2N=C3C(OC)=CC=CC3=[N+](C)C2=C1 MASUWVVNWALEEM-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- NBWRJAOOMGASJP-UHFFFAOYSA-N 2-(3,5-diphenyl-1h-tetrazol-1-ium-2-yl)-4,5-dimethyl-1,3-thiazole;bromide Chemical compound [Br-].S1C(C)=C(C)N=C1N1N(C=2C=CC=CC=2)N=C(C=2C=CC=CC=2)[NH2+]1 NBWRJAOOMGASJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SXGZJKUKBWWHRA-UHFFFAOYSA-N 2-(N-morpholiniumyl)ethanesulfonate Chemical compound [O-]S(=O)(=O)CC[NH+]1CCOCC1 SXGZJKUKBWWHRA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000954 2-hydroxyethyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])O[H] 0.000 description 1
- KPGXRSRHYNQIFN-UHFFFAOYSA-L 2-oxoglutarate(2-) Chemical compound [O-]C(=O)CCC(=O)C([O-])=O KPGXRSRHYNQIFN-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- BCHZICNRHXRCHY-UHFFFAOYSA-N 2h-oxazine Chemical compound N1OC=CC=C1 BCHZICNRHXRCHY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000016938 Catalase Human genes 0.000 description 1
- 108010053835 Catalase Proteins 0.000 description 1
- 102000018832 Cytochromes Human genes 0.000 description 1
- 108010052832 Cytochromes Proteins 0.000 description 1
- 101000717864 Escherichia coli (strain K12) Lactaldehyde dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- 101710086840 Glutamate dehydrogenase A Proteins 0.000 description 1
- 102000003855 L-lactate dehydrogenase Human genes 0.000 description 1
- 108700023483 L-lactate dehydrogenases Proteins 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- LCTONWCANYUPML-UHFFFAOYSA-M Pyruvate Chemical compound CC(=O)C([O-])=O LCTONWCANYUPML-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- 239000002250 absorbent Substances 0.000 description 1
- 230000002745 absorbent Effects 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 238000000862 absorption spectrum Methods 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000012556 adjustment buffer Substances 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 1
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 1
- 239000013522 chelant Substances 0.000 description 1
- 239000005515 coenzyme Substances 0.000 description 1
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 1
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 1
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 1
- KCIDZIIHRGYJAE-YGFYJFDDSA-L dipotassium;[(2r,3r,4s,5r,6r)-3,4,5-trihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl] phosphate Chemical class [K+].[K+].OC[C@H]1O[C@H](OP([O-])([O-])=O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O KCIDZIIHRGYJAE-YGFYJFDDSA-L 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 1
- 125000004029 hydroxymethyl group Chemical group [H]OC([H])([H])* 0.000 description 1
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N iron Substances [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 1
- -1 iron ions Chemical class 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- CXKWCBBOMKCUKX-UHFFFAOYSA-M methylene blue Chemical compound [Cl-].C1=CC(N(C)C)=CC2=[S+]C3=CC(N(C)C)=CC=C3N=C21 CXKWCBBOMKCUKX-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229960000907 methylthioninium chloride Drugs 0.000 description 1
- 238000000386 microscopy Methods 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000010979 pH adjustment Methods 0.000 description 1
- 230000008447 perception Effects 0.000 description 1
- BULVZWIRKLYCBC-UHFFFAOYSA-N phorate Chemical compound CCOP(=S)(OCC)SCSCC BULVZWIRKLYCBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 230000001052 transient effect Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/008—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions for determining co-enzymes or co-factors, e.g. NAD, ATP
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/805—Test papers
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/81—Packaged device or kit
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10S436/904—Oxidation - reduction indicators
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Description
Způsob stanovení NAD(P)H nebo substrátů nebo enzymů, reagujících za tvorby nebo spotřebování NAD(P)H a zkušební systém k provádění tohoto způsobu.
Oblast techniky
Vynález se týká způsobu stanovení NAD(P)H nebo substrátů nebo enzymů, reagujících za tvorby nebo spotřebování NAD(P)H a zkušebního systému k provádění tohoto způsobu. Měřicí rozsah zkušebního systému podle vynálezu je rozšířen oproti použití pouze jednoho redox-indikátoru.
Dosavadní stav techniky
Stanovení klinických parametrů se provádí ve většině případů pomocí vysoce specifických reakcí dehydrogenázy, v jejichž průběhu se přímo nebo nepřímo tvoří nebo spotřebuje NAD(P)H. Přitom absolutně zreagované množství NAD(P)H, nebo množství NAD(P)H, zreagované za časovou jednotku, je měřítkem koncentrace zkoušené látky v kapalině. Jako obzvláště výhodná je reakce dehydrogenázy s ohledem na steichiometrii a nepatrnou poruchovost. Naproti tomu je nevýhodné, že na základě absorpčních vlastností koenzymových molekul je možné vyhodnocení měřené reakce pouze fotometry a ultrafialovým měřicím rozsahem; čistě vizuální vyhodnocení se nemůže provádět. To je teprve možné spojením vlastní reakce, vytvářející NAD(P)H, s barevnou reakcí. Jsou popsány různé způsoby, při kterých se toto dosáhne přímo nebo pomocí elektronových přenašečů, jako fenazinmethosulfátu nebo diaforázy, zprostředkovaným přenosem redox ekvivalentů na různé redox indikátory. K těmto látkám patří například cytochrom, komplexní nebo chelátové ionty železa, dichlorfenolindofenol, tetrazoliové soli atd. Známé je také spojení měřicí reakce s následující reakcí (DE-AS 15 98 263, EU 54 146) přičemž tvorba barviva nastává přes přechodné vytvořenou látku. Všem těmto systémům je společný následující průběh reakce, při kterém vždy produkt prvé dílčí reakce je výchozím produktem pro druhou reakci, atd.
V patentové přihlášce P 32 11 167 je popsán způsob, ve kterém reaguje stanovovaná látka na různé rozlišitelné produkty, takže se získá při stejné přesnosti měření větší měřicí rozsah oproti běžným testům. Toho se dosáhne použitím více na sobě nezávislých enzymových systémů při reakci stejné zkoumané látky, přičemž jeden obsahuje dehydrogenázu, závislou na NAD a druhý obsahuje dehydrogenázu, nezávislou na NAD. Jediná nevýhoda tohoto způsobu spočívá v tom, že pro velký podíl zkoumaných látek v klinické diagnostice nejsou potřebné enzymy, nezávislé na NAD, v protikladu k příslušným enzymům závislým na NAD, v obchodě dostupné.
Úkolem vynálezu je vyvinout zkušební systém ke stanovení NAD(P)H, který má oproti běžným systémům mnohonásobně větší měřicí rozsah a který se může provádět s enzymy, vždy dostupnými v obchodě.
-1CZ 278613 B6
Podstata vynálezu
Neočekávaně bylo zjištěno, že je za určitých podmínek možná nezávislá reakce NAD(P)H s různými redox indikátory. Nezávislá reakce přitom znamená, že například reakce druhého redox indikátoru (s nižším elektrochemickým potenciálem) probíhá teprve po úplné reakci prvého redox indikátoru (s vyšším elektrochemickým potenciálem), takže je možné oddělené vyhodnocování. Bylo to neočekávatelné také proto, že při současném předložení redox indikátorů nastávají vzájemným účinkem jednotlivých látek a cizími vlivy (kyslík, zkoušené látky) poruchy.
Předmětem vynálezu je způsob stanovení NAD(P)H nebo substrátů nebo enzymů, reagujících za tvorby nebo spotřebování NAD(P)H ve vodném roztoku, jehož podstata spočívá v tom, že se zkoušený roztok uvede do reakce současně s více látkami s různými elektrochemickými potenciály, fungujícími nezávisle na sobě vůči NAD(P)H jako akceptor elektronů, zvolenými ze souboru, zahrnujícího látky s vyšším elektrochemickým potenciálem než NAD(P)H/NAD(P), jejichž oxidovaná nebo redukovaná forma je jednoznačně vizuálně, fotometricky nebo elektrochemicky rozlišitelná a vzniklé analyticky rozlišitelné konečné produkty se vyhodnotí měřicí technikou nebo vizuálně.
Předmětem vynálezu je dále též zkušební systém ke stanovení NAD(P)H nebo substrátů nebo enzymů, reagujících za tvorby nebo spotřebovávání NAD(P)H, jehož měřicí rozsah je rozšířen oproti použití pouze jednoho redox-indikátoru, k provádění výše uvedeného způsobu, jehož podstata spočívá v tom, že obsahuje současně více látek s různými elektrochemickými potenciály, fungujících nezávisle na sobě vůči NAD(P)H jako akceptor elektronů, zvolených ze souboru, zahrnujícího látky s vyšším elektrochemickým potenciálem než NAD(P)H/NAD(P), jejichž oxidovaná nebo redukovaná forma je jednoznačně vizuálně, fotometricky nebo elektrochemicky rozlišitelná.
Podle druhu redox indikátoru může probíhat přenos elektronů přímo nebo pomocí tak zvaného přenašeče elektronů. S výhodou obsahuje zkušební systém přenašeč elektronů, který má katalytický účinek na redox indikátory. Vhodným přenašečem elektronů je například fenazinmethosulfát (FNS), methoxyfenazinmethosulfát (MFMS), Meldolova modř, diaforáza atd. a směsi těchto látek.
Vhodnými redox indikátory pro zkušební systém podle vynálezu jsou například oxazinová a thiazinovaná barviva, tetrazoliové soli atd. [DE-PS 28 34 743, Proč. Soc. Exp. Biol. 104, 407 (1960)] s výhodou dichlorfenolindofenol (DIF), 3-(4-jodfenyl)-2-(4-nitrofenyl)-5-fenyl-2H-tetrazoliumchlorid (INT) a 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-difenyl-2H-tetrazoliumbromid (MTT). Použití těchto redox indikátorů ve zkušebním systému dehylrogenázy bylo dosud omezeno na systémy pouze s jedním redox indikátorem. Neočekávané se nyní ukázalo, že při více redox indikátorech s různými normálními potenciály mohou být k dispozici zkušební systémy s rozšířeným měřicím rozsahem. Normální potenciály redox indikátorů jsou v rozmezí -0,3 až + 0,5, obzvláště v rozmezí - 0,3 až + 0,3. Stanovení se zpravidla provádí ve vodných roztocích s přídavkem pufru, přičemž hodnota pH je v rozmezí 4,5 až 8,0, s výhodou v rozmezí 5,0 až 7,0. Vhodným pufrem k nastavení pH je například fos
-2CZ 278613 B6 forečnanový pufr, citranový pufr, sodná sůl 2-/N-morfolino/ethansulfonové kyseliny,bis-/2-hydroxyethyl/-amino-tris/hydroxymethyl/ methan, dvojdraselné soli piperazin-Ν,Ν'-bis /2-ethansulfonové kyseliny/ atd., s výhodou fosforečnanový a citranový pufr.
Výběr redox indikátorů, použitých pro zkušební systém podle vynálezu, se provádí podle rozlišitelnosti měrného signálu, vytvořeného při reakci, s výhodou podle změny extinkce při různých vlnových délkách /fotometrické stanovení/, nebo podle rozlišitelné barevné změny zkoušeného roztoku /vizuální vyhodnocení/. V posledním případě jsou vhodné obzvláště kombinace redox indikátorů, ze kterých je jedna forma bezbarvá nebo jen slabě zabarvená. V následujícím jsou uvedeny některé vhodné redox indikátory s normálním potenciálem při hodnotě pH 7 a příslušné barevné změny.
| Látka | Potenciál při pH 7,0 | Barva oxidované | Barva redukované |
| NADH | -0,32 | ||
| DIF | +0,23 | modrá | bezbarvá |
| MTT | +0,11 | bezbarvá | modrá |
| INT | +0,09 | bezbarvá | červená |
| Thionin | +0,06 | fialová | bezbarvá |
| methylenová | modř +0,01 | modrá | bezbarvá |
Z tabulky vyplývá, že kombinace redox indikátorů DIF/INT s barevným přechodem od modré do bezbarvé v 1. stupni a od bezbarvé do červené v 2. stupni je obzvláště výhodná. Obě látky mají jak mezi oxidovanou a redukovanou formou každé látky, tak také mezi látkami značné rozdíly v absorpčním spektru a ve vizuálním barevném vjemu. Reakce obou látek ve směsi s NAD/P/H vede k nezávislé reakci DIF a INT a tak ke značně rozšířenému měřicímu rozsahu oproti systému s pouze jednou z těchto látek. Látka s vyšším normálním potenciálem /DIF/ zreaguje téměř úplně před druhou látkou /INT/. Při stanovení NAD/P/H s DIF jako jediným redox indikátorem postihuje koncentrační rozmezí až 0,26 mmolu/1, s INT rozmezí až 0,13 mmolu/1 a s kombinací DIF a INT až 0,55 mmolu/1, což znamená, že se zkušebním systémem podle vynálezu se zachytí dvojnásobné až více než čtyřnásobné koncentrační rozmezí NAD/P/H. Fotometrické vyhodnocení se může například provádět registrací extinkce při dvou rozdílných vlnových délkách /460 a 650 nm/. Při vizuálním vyhodnocení se mohou získané barevné stupně zesílit přídavkem tak zvaného barevného pozadí /například titanové žlutí/.
Při kombinaci redox indikátorů INT /thionin se provádí podle normálními potenciálů nejprve redukce INT a potom thioninu. Podle zvoleného způsobu vyhodnocení se mohou použít pro způsob podle vynálezu četné kombinace redox indikátorů.
Zkušební systém podle vynálezu se může zásadně použit pro všechna stanovení NAD/P/H a pro všechny reakce, spotřebovávající nebo tvořící NAD/P/H. Zkoumaným vzorkem je s výhodou sérum, plasma, moč atd. Provádění způsobu podle.vynálezu se uskutečňuje způsobem běžným pro enzymatické metody, přičemž se obecné nejprve
-3CZ 278613 B6 nechá proběhnout reakce s NAD/P/H a potom se stanoví vytvořená nebo spotřebovaná NAD/P/H. Samozřejmě je možné při reakci, vytvářející NAD/P/H, také přímá kopulace. Také se může enzymatická aktivita stanovit tak, že se reakce v určitém čase zastaví a stanoví se vytvořená nebo spotřebovaná NAD/P/H v tomto čase. Redox indikátory se s výhodou přidají současně ke zkoušenému roztoku, rovněž je možný časově oddělený přídavek.
Zkušební systém podle vynálezu je také vhodný ke stanovení NAD/P/H jako indikátor ve formě savých impregnovaných materiálů.
Příklad 1
Stanovení NAD/P/H
Připraví se následující 3 vsázky:
Vsázka A
Vsázka B
Vsázka C
| 0,01 | mmolu/1 | PMS | 0,01 | mmolu/1 | FMS | 0,01 | mmolu/1 FMS |
| 0,25 | mmolu/1 | DIF | 0,2 | mmolu/1 | INT | 0,2 | mmolu/1 IN |
| 0,025 | mmolu/1 | titanové | 0,025 | mmolu/1 | titanové | 0,25 | mmolu/DIF |
| žluti | žluti | 0,025 | mmolu/1 titanové žluti | ||||
| 0,15 | molu/1 | 0,15 | molu/1 | 0,15 | molu/1 | ||
| citranového pufru | citranového pufru | citranového pufru | |||||
| pH 5, | 8 | pH 5, | 8 | pH 5, | 8 |
Ke 2 ml těchto vsázek se přidají různá množství NADH /NADPH/. Po 10 minutách se zjistí extinkce při 460 a 650 nm a barevný vjem zkoušeného roztoku. V závislosti na použití koncentrace NADH nebo NADPH v celkovém zkoušeném roztoku se získají pro barevný vjem následující výsledky:
| NADH /NADHP/ /mmol/1/ | Výsledný barevný vsázka A | vjem zkoušeného vsázka B | roztoku vsázka C |
| 0 | tmavě modrý | žlutý | tmavomodrý |
| 0,05 | tmavomodrý | oranžový | tmavomodrý |
| 0,09 | modrý | hnědý | modrý |
| 0,13 | světlemodrý | červený | světlemodrý |
| 0,17 | modrozelený | modrozelený | |
| 0,22 | zelený | zelený | |
| 0,24 | žlutozelený | žlutozelený | |
| 0,26 | ’lutý | okrový | |
| 0,27 | oranžový | ||
| 0,30 | hnědý | ||
| 0,34 | červenohnědý | ||
| 0,38 | červený | ||
| 0,55 | tmavočervený |
Změna extinkce zkoušeného roztoku je uvedena na obr. 1.
-4CZ 278613 B6
Zatímco je možné se vsázkami A a B vizuální stanovení koncentrace NADH v rozmezí až maximálně 0,25 mmolu/1, je se vsázkou C možné stanovení až 0,55 mmolu/1.
Příklad 2
Stanovení NADH
Ke 2 ml roztoku obsahujícího
0,01 mmolu/1 MFMS
0,2 mmolu/1 INT
0,03 mmolu/1 Thioninu a
0,15 molu/1 citranového pufru, pH 5,2 se přidají různá množství NADH. Po 10 minutách se zjistí extinkce zkoušených roztoků při 460 a 600 nm. Získané výsledky jsou uvedeny v závislosti na použité koncentraci na obr. 2.
Pro zkušební vsázku s oběma barvivý se získá pro stanovení NADH dvojnásobně velký měřící rozsah než u příslušných zkušebních vsázek pouze s jedním barvivém.
Příklad 3
Stanovení NADH
Připraví se následující vsázky:
Vsázka A
Vsázka B
0,01 mmolu/1
0,25 mmolu/1
0,025 mmolu/1
0,15 molu/1 meldolové modři DIF titanové žlutí citranového pufru pH 5,8
0,01 mmolu/1 meldolové modři
0,25 mmolu/1 DIF
0,2 mmolu/1 INT
0,25 mmolu/1 titanové žlutí
0,15 molu/1 citranového pufru
Ke 2 ml těchto vsázek se přidají různá množství NADH. Po 10 minutách se zjistí barevný vjem zkoušeného roztoku. V závislosti na použité koncentraci NADH v celkovém zkoušeném roztoku se získají pro barevný vjem následující výsledky:
| NADH /mmol/1 | Výsledný barevný vjem Vsázka A | zkoušeného roztoku Vsázka B |
| 0 | tmavomodrý | tmavomodrý |
| 0,10 | tyrkysový | tyrkysový |
| 0,20 | tmavězelený | tmavězelený |
| 0,25 | světlezelený | světlezelený |
| 0,30 | světlehnědý | |
| 0,35 | světlečerv.-fial. | |
| 0,40 | vínově červený | |
| 0,50 | tmavě červený |
-54*
Zatímco je možné se vsázkou A vizuální stanovení koncentrace NADH v rozmezí až 0,25 mmolu/1, umožňuje vsázka B stanovení až 0,5 mmolu/1.
Příklad 4
Stanovení močoviny v séru.
K 1,5 ml reakčního roztoku, obsahujícího
0,03 molu/1 fosforečného pufru, pH 7,6
2,2 mmolu/1 ADP
4,0 mmolu/1 ketoglutarátu
0,5 mmolu/1 NADH
KU/1 glutamátdehydrogenázy a
KU/1 ureázy se přidá 25 μΐ vzorku séra s různým obsahem močoviny /nastaveno přídavkem močoviny, přezkoušeno standardní metodou/. Po 10 minutách se přidá 350 μΐ roztoku, obsahujícího
0,35 molu/1 citranového pufru, pH 5,8
0,05 molu/1 FMS
1,34 mmolu/1 DIF
1,1 mmolu/1 INT
0,13 mmolu/1 titanové žlutí
250 U/l diaphorázy a po dalších 5 až 10 minutách se stanoví barevný vjem reakčního roztoku v mikroskopu. Získají se následující výsledky:
Močovina /mg/dl/
100
120
150
180
Výsledný barevný vjem zkoušeného roztoku červený červenohnědý hnědý oranžový okrový žlutozelený zelený modrozelený svétlemodrý tmavomodrý tmavomodrý
Zatímco se mohou provádět u zkoušení vsázky pouze s jedním barvivém vizuální stanovení až do 70 mg/dl, umožňuje systém podle vynálezu stanovení až do 180 mg/dl.
-6CZ 278613 B6
Příklad 5
Stanovení kyseliny močové v moči
K 1,3 ml reakčního roztoku, obsahujícího
0,03 molu/1 fosforečnanového pufru, pH 8,5 mmolu/1 KC1
1,43 molu/1 ethanolu
0,5 mmolu/1 NADP+
1750 U/l katalázy
150 U/l aldehyddehydrogenázy a
U/l ureázy se přidá 200 μΐ vzorku moči s různým obsahem kyseliny močové /nastaveno přídavkem kyseliny močové, přezkoušeno standardním způsobem/. Po 20 minutách se přidá ke zkoušenému roztoku 350 μΐ roztoku, který obsahuje následující složky:
0,5 molu/1 citranového pufru, pH 5,8
0,05 molu/1 FES
1,34 mmolu/1 DIF
1,10 mmolu/1 INT a
0,13 mmolu/1 titanové žluti.
Po dalších 10 minutách se zjistí barevný vjem reakčního roztoku v mikroskopu. Získají se následující výsledky:
Kyselina močová Výsledný barevný vjem
| /mg/d/ | zkoušeného roztoku |
| 0 9 15 21 29 37 40 42 45 50 57 64 | tmavomodrý tmavomodrý modrý svétlemodrý modrozelený zelený žlutozelený okrový hnědý červenohnědý červený tmavěčervený |
Zatímco se mohou provádět u příslušného testu pouze s jedním barvivém vizuální stanovení kyseliny močové v rozmezí až 40mg/dl, se systémem podle vynálezu se mohou ještě spolehlivě postihnout rozmezí až nad 60 mmolu/1.
Příklad 6
Stanovení laktatdehydrogenázy v séru
Ke 1,2 ml reakčního roztoku, obsahujícího
0,03 molu/1 fosforečnanového pufru, pH 7,5
-7>
0,6 mmolu/1 pyruvátu a
0,5 mmolu/1 NADH se přidá 100 μΐ vzorkem séra s různou aktivitou LDH /nastaveno přídavkem LDH, přezkoušeno standardní metodou/. Po 10 minutách při 25 C se přidá 300 μΐ roztoku, který obsahuje
0,5
1,34
1,10
0,05
0,13 molu/1 citranového pufru, pH mmolu/1 DIF mmolu/1 INT mmolu/1 FMS mmolu/1 titanové žlutí a mmolu/1 oxaminové kyseliny
Za dalších 10 minut se stanoví barevný vjem celkového zkoušeného roztoku. Získají se následující výsledky:
| LDH /U/l/ | Výsledný barevný vjem zkoušeného roztoku |
| 32 96 160 210 225 255 290 370 430 500 560 640 | červený červenohnědý hnědý oranžový okrový žlutozelený zelený modrozelený světlemodrý modrý tmavomodrý tmavomodrý |
Zatímco se mohou provádět při příslušném testu pouze s jedním barvivém stanovení LDR s vizuálním vyhodnocením v rozmezí až maximálně 225 U/l, umožňují zkušební systémy podle vynálezu stanovení až nad 600 U/l.
Claims (8)
- PATENTOVÉ NÁROKY1. Způsob stanovení NAD(P)H nebo substrátů nebo enzymů, reagujících za tvorby nebo spotřebování NAD(P)H ve vodném roztoku, vyznačující se tím, že se zkoušený roztok uvede do reakce současně s více látkami s různými elektrochemickými potenciály, fungujícími nezávisle na sobě vůči NAD(P)H jako akceptor elektronů, zvolenými ze souboru, zahrnujícího látky s vyšším elektrochemickým potenciálem než NAD(P)H/NAD(P), jejichž oxidovaná nebo redukovaná forma je jednoznačně vizuálně, fotometricky nebo elektrochemicky rozlišitelná a vzniklé analyticky rozlišitelné konečné produkty se vyhodnotí měřicí technikou nebo vizuálně.
- 2. Způsob podle nároku 1,vyznačující se tím, že se stanovení provádí ve vodném roztoku s přídavkem pufru při pH v rozmezí 4,5 až 8, s výhodou 5,0 až 7.
- 3. Zkušební systém ke stanovení NAD(P)H nebo substrátů nebo enzymů, reagujících za tvorby nebo spotřebovávání NAD(P)H, jehož měřicí^rozsah je rozšířen oproti použití pouze jednoho redoxindikátoru, k provádění způsobu podle nároků 1 až 2, vyznačující se tím, že obsahuje současně více látek s různými elektrochemickými potenciály, fungujících nezávisle na sobě vůči NAD(P)H jako akceptor elektronů, zvolených ze souboru, zahrnujícího látky s vyšším elektrochemickým potenciálem než NAD(P)H/NAD(P), jejichž oxidovaná nebo redukovaná forma je jednoznačné vizuálně, fotometricky nebo elektrochemicky rozlišitelná.
- 4. Zkušební systém podle nároku 3, vyznačující se tím, že látky, fungující jako akceptory elektronů, jsou redox indikátory s normálním potenciálem v rozmezí - 0,3 až + 0,5, s výhodou v rozmezí - 0,3 až + 0,3.
- 5. Zkušební systém podle nároků 3 a 4, vyznačující se tím, že obsahuje přídavné přenašeč elektronů.
- 6. Zkušební systém podle nároků 3 až 5, vyznačující se tím, že obsahuje jako redox indikátory dichlorfenylindofenol a tetrazoliovou sůl.
- 7. Zkušební systém podle nároků 3 až 6, vyznačující se tím, že přídavně obsahuje jako přenašeč elektronů fenazinmethosulfát, fenazinethosulfát, methoxyfenazinmethosulfát, Meldolovou modř, diaforázu nebo směsi těchto látek.
- 8. Zkušební systém podle nároků 3 až 7, vyznačující se t i m, že přídavně obsahuje kontrastní barvivo.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE19823247894 DE3247894A1 (de) | 1982-12-24 | 1982-12-24 | Testsystem und verfahren zur bestimmung von nad(p)h |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ972183A3 CZ972183A3 (en) | 1994-01-19 |
| CZ278613B6 true CZ278613B6 (en) | 1994-04-13 |
Family
ID=6181666
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS839721A CZ278613B6 (en) | 1982-12-24 | 1983-12-21 | Process of determining nad(p)h or substrates or enzymes reacting under the formation or consumption of nad(p)h and a testing system for making the same |
Country Status (7)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4629697A (cs) |
| EP (1) | EP0114267B1 (cs) |
| JP (1) | JPS59132900A (cs) |
| CZ (1) | CZ278613B6 (cs) |
| DE (2) | DE3247894A1 (cs) |
| IL (1) | IL70518A (cs) |
| ZA (1) | ZA839577B (cs) |
Families Citing this family (29)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE3419642A1 (de) * | 1984-05-25 | 1985-11-28 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim | Verfahren und reagenz zur vollenzymatischen bestimmung von harnstoff |
| US4746607A (en) * | 1985-02-07 | 1988-05-24 | Eastman Kodak Company | Use of substituted quinone electron transfer agents in analytical determinations |
| US5220035A (en) * | 1986-04-04 | 1993-06-15 | Miles Inc. | Dithiol-(2-nitrobenzoate) indicators |
| US4975367A (en) * | 1986-04-04 | 1990-12-04 | Miles Inc. | Catalytic test composition intended to produce a range of colors |
| CA1295216C (en) * | 1986-04-04 | 1992-02-04 | James P. Albarella | Rainbow test device |
| US4898813A (en) * | 1986-04-04 | 1990-02-06 | Albarella James P | Catalytic test composition intended to produce a range of colors |
| JPS6394994A (ja) * | 1986-10-09 | 1988-04-26 | Fuji Photo Film Co Ltd | 酸化型補酵素含有乾式分析要素 |
| DE3783851T2 (de) * | 1986-10-09 | 1993-06-17 | Fuji Photo Film Co Ltd | Integrales, mehrschichtiges element fuer analyse. |
| DE3640318A1 (de) * | 1986-11-26 | 1988-06-09 | Boehringer Mannheim Gmbh | Verfahren und testtraeger zur bestimmung eines analyten |
| US5036000A (en) * | 1986-12-16 | 1991-07-30 | Enzymatics, Inc. | Threshold color control system |
| US5032506A (en) * | 1986-12-16 | 1991-07-16 | Enzymatics, Inc. | Color control system |
| US5250420A (en) * | 1987-04-02 | 1993-10-05 | Toyo Boseki Kabushiki Kaisha | Method and reagent for determination of dehydrogenase or its substrate |
| US5200325A (en) * | 1988-02-10 | 1993-04-06 | Miles Inc. | Self-indicating analysis employing stoichiometric chemical subtraction |
| US5126247A (en) * | 1988-02-26 | 1992-06-30 | Enzymatics, Inc. | Method, system and devices for the assay and detection of biochemical molecules |
| US5413915A (en) * | 1988-07-12 | 1995-05-09 | Resource Technologies Group, Inc. | Method and sensor for detecting toxic chemical exposure effects and metabolic activation of carcinogenic chemical agents |
| JP2811319B2 (ja) * | 1989-04-18 | 1998-10-15 | 旭化成工業株式会社 | 胆汁酸の高感度測定法および測定用組成物 |
| CA2049237C (en) * | 1990-09-19 | 1999-10-19 | Gunther Beck | 2-thiazolyl tetrazolium salt indicators |
| US5126275A (en) * | 1990-09-19 | 1992-06-30 | Miles Inc. | Analytical method using tetrazolium salt indicators having a reflectance plateau |
| CA2049209C (en) * | 1990-09-19 | 1992-03-20 | Jurgen Kocher | Phenyl-substituted 2-thiazolyl tetrazolium salt indicators |
| US5707820A (en) * | 1991-09-19 | 1998-01-13 | Boehringer Mannheim Corporation | Reagent and assay methods including a phenazine-containing indicator |
| US5358855A (en) * | 1992-05-14 | 1994-10-25 | The Medical College Of Pennsylvania | Inosinic acid dehydrogenase assay |
| DE19521019A1 (de) * | 1995-06-13 | 1996-12-19 | Boehringer Mannheim Gmbh | Verfahren und Mittel zur gleichzeitigen kolorimetrischen und elektrochemischen Messung eines Analyten |
| US7700305B2 (en) | 1999-09-17 | 2010-04-20 | N2Itive1 Innovations | Analyte detection |
| US6656697B1 (en) * | 1998-09-28 | 2003-12-02 | Lifescan, Inc. | Diagnostics based on tetrazolium compounds |
| JP2003528623A (ja) * | 2000-03-28 | 2003-09-30 | ライフスキャン・インコーポレイテッド | サンプル中の還元された補助因子の存在を検出するための試薬システムおよびその使用方法 |
| AT408661B (de) * | 2000-04-12 | 2002-02-25 | Roland Palkovits | Testsystem zur vereinfachten bestimmung von nad(p)h |
| AU2002366025B2 (en) * | 2001-11-21 | 2007-08-23 | Unitika Ltd | ATP measurement method allowing visual judgement and reagent therefore |
| GB0625789D0 (en) * | 2006-12-22 | 2007-02-07 | Univ Cardiff | Organometallic sensor device |
| CN112684160A (zh) * | 2019-10-17 | 2021-04-20 | 潍坊峡山荆卫生物科技有限公司 | 一种高效的血浆、红细胞、淋巴细胞nad+检测方法 |
Family Cites Families (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB1318568A (en) * | 1970-09-17 | 1973-05-31 | Miles Lab | Colourimetric assay of dehydrogenases |
| US3929580A (en) * | 1974-08-29 | 1975-12-30 | American Cyanamid Co | Creatine phosphokinase test indicator |
| US4056485A (en) * | 1974-10-04 | 1977-11-01 | Warner-Lambert Company | Stable colored reference standard for enzymatic determinations |
| JPS5222993A (en) * | 1975-08-14 | 1977-02-21 | Nippon Chemiphar Co Ltd | Method of determining reduced-form coenzyme |
| US4141688A (en) * | 1977-08-11 | 1979-02-27 | Miles Laboratories, Inc. | Composition, device and method for determining reducing agents |
| JPS5437798A (en) * | 1977-08-31 | 1979-03-20 | Wako Pure Chem Ind Ltd | Measurement of substrate or enzyme activity |
| DE2834706A1 (de) * | 1978-08-08 | 1980-02-14 | Boehringer Mannheim Gmbh | Verfahren und reagens zur bestimmung von glutamat-oxalacetat-transaminase und glutamat-pyruvat-transaminase |
| US4211845A (en) * | 1978-11-24 | 1980-07-08 | Miles Laboratories, Inc. | Glucose indicator and method |
| JPS5768798A (en) * | 1980-10-14 | 1982-04-27 | Toyo Jozo Co Ltd | Novel measurement of amylase activity |
| DE3211167A1 (de) * | 1982-03-26 | 1983-09-29 | Merck Patent Gmbh, 6100 Darmstadt | Testsystem und verfahren zur bestimmung von substanzen in fluessigkeiten |
| US4394444A (en) * | 1982-06-21 | 1983-07-19 | Miles Laboratories, Inc. | Cofactor indicator compositions |
-
1982
- 1982-12-24 DE DE19823247894 patent/DE3247894A1/de not_active Withdrawn
-
1983
- 1983-12-03 EP EP83112171A patent/EP0114267B1/de not_active Expired
- 1983-12-03 DE DE8383112171T patent/DE3364283D1/de not_active Expired
- 1983-12-21 IL IL70518A patent/IL70518A/xx not_active IP Right Cessation
- 1983-12-21 CZ CS839721A patent/CZ278613B6/cs unknown
- 1983-12-22 ZA ZA839577A patent/ZA839577B/xx unknown
- 1983-12-23 US US06/564,866 patent/US4629697A/en not_active Expired - Fee Related
- 1983-12-23 JP JP58242267A patent/JPS59132900A/ja active Granted
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| IL70518A (en) | 1986-09-30 |
| US4629697A (en) | 1986-12-16 |
| EP0114267B1 (de) | 1986-06-25 |
| CZ972183A3 (en) | 1994-01-19 |
| JPH0470000B2 (cs) | 1992-11-09 |
| DE3364283D1 (en) | 1986-07-31 |
| JPS59132900A (ja) | 1984-07-31 |
| ZA839577B (en) | 1984-08-29 |
| EP0114267A1 (de) | 1984-08-01 |
| DE3247894A1 (de) | 1984-06-28 |
| IL70518A0 (en) | 1984-03-30 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CZ278613B6 (en) | Process of determining nad(p)h or substrates or enzymes reacting under the formation or consumption of nad(p)h and a testing system for making the same | |
| US4490465A (en) | Coupled enzyme systems for determination of dissolved substances | |
| US4321397A (en) | 4-Aminoantipyrine dye for the analytic determination of hydrogen peroxide | |
| US5334508A (en) | Process and agent for the colorimetric determination of an analyte by means of enzymatic oxidation | |
| JPS61146196A (ja) | Ｈ↓２ｏ↓２の測色的測定を改善するための方法び試薬 | |
| US4247631A (en) | Reagent and method for the analytic determination of hydrogen peroxide | |
| US4592996A (en) | Process for determining reduced form coenzymes | |
| EP0133681B1 (en) | Enzymatic urea assay | |
| EP0606296B1 (en) | Reagents and assay methods including a phenazine-containing indicator | |
| Masayoshi et al. | A new enzymatic method to determine creatine | |
| Lundin et al. | Optimized bioluminescence assay of creatine kinase and creatine kinase B-subunit activity. | |
| JPS59140899A (ja) | オキシダ−ゼによる基質の新規定量法 | |
| Kayamori et al. | Enzymatic method for assaying uric acid in serum with a new tetrazolium salt produces water-soluble formazan dye | |
| JPS603480B2 (ja) | クレアチニンおよびクレアチンの定量法 | |
| US5919644A (en) | Method for assaying sulfate-conjugated bile acid and therefore | |
| Kuan et al. | An alternative method for the determination of uric acid in serum | |
| CA1206077A (en) | Sensitive enzymatic creatinine assay | |
| JPH0662521B2 (ja) | 新規コリン誘導体及びそれを用いた血清コリンエステラーゼ活性測定法 | |
| JPH0650997B2 (ja) | コリンエステラ−ゼ活性の新規測定方法 | |
| JPS60238000A (ja) | 新規なコリンエステラ−ゼ活性測定法 | |
| JPH0343096A (ja) | 基質又は酵素の定量方法 | |
| Yuan et al. | Spectrophotometric and fluorimetric enzymatic determination of serum creatine kinase mb isoenzyme by using immuno-inhibition | |
| JPH0253039B2 (cs) | ||
| JPH04346798A (ja) | Ｄ−ガラクトースの高感度定量法および定量用組成物 | |
| JPH0223888A (ja) | リゾチーム活性の定量法 |