CZ256598A3 - Inhibitory serinové proteázy a farmaceutický prostředek - Google Patents

Inhibitory serinové proteázy a farmaceutický prostředek Download PDF

Info

Publication number
CZ256598A3
CZ256598A3 CZ982565A CZ256598A CZ256598A3 CZ 256598 A3 CZ256598 A3 CZ 256598A3 CZ 982565 A CZ982565 A CZ 982565A CZ 256598 A CZ256598 A CZ 256598A CZ 256598 A3 CZ256598 A3 CZ 256598A3
Authority
CZ
Czechia
Prior art keywords
alkyl
chr
phe
amino acid
cha
Prior art date
Application number
CZ982565A
Other languages
English (en)
Other versions
CZ291690B6 (cs
Inventor
Peter Diederik Jan Grootenhuis
Man Adrianus Petrus Antonius De
Anton Egbert Peter Adang
Original Assignee
Akzo Nobel N. V.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Akzo Nobel N. V. filed Critical Akzo Nobel N. V.
Publication of CZ256598A3 publication Critical patent/CZ256598A3/cs
Publication of CZ291690B6 publication Critical patent/CZ291690B6/cs

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/02—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing at least one abnormal peptide link
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/02—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing at least one abnormal peptide link
    • C07K5/022—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing at least one abnormal peptide link containing the structure -X-C(=O)-(C)n-N-C-C(=O)-Y-; X and Y being heteroatoms; n being 1 or 2
    • C07K5/0222—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing at least one abnormal peptide link containing the structure -X-C(=O)-(C)n-N-C-C(=O)-Y-; X and Y being heteroatoms; n being 1 or 2 with the first amino acid being heterocyclic, e.g. Pro, Trp
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/02—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing at least one abnormal peptide link
    • C07K5/0202—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing at least one abnormal peptide link containing the structure -NH-X-X-C(=0)-, X being an optionally substituted carbon atom or a heteroatom, e.g. beta-amino acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/02—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing at least one abnormal peptide link
    • C07K5/0205—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing at least one abnormal peptide link containing the structure -NH-(X)3-C(=0)-, e.g. statine or derivatives thereof
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/02—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing at least one abnormal peptide link
    • C07K5/022—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing at least one abnormal peptide link containing the structure -X-C(=O)-(C)n-N-C-C(=O)-Y-; X and Y being heteroatoms; n being 1 or 2
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
    • Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
    • Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
    • Y02P20/55—Design of synthesis routes, e.g. reducing the use of auxiliary or protecting groups

Description

Inhibitory serinové proteázy a farmaceutický prostředek
Oblast techniky
Vynález se týká inhibitoru serinové proteázy s acylguanidinovým postranním řetězcem, farmaceutického prostředku obsahujícího uvedené inhibitory a použití uvedeného inhibitoru pro prevenci a léčení onemocnění spojených s trombinem.
Dosavadní stav techniky
Serinové proteázy jsou enzymy, které mimo jiné mají důležitou úlohu v kaskádě koagulace krve. Mezi tuto skupinu proteáz patří například trombin, trypsin, faktory Vila, IXa, Xa, Xla, XIla a protein C.
Trombin je serinová proteáza, která řídí poslední stupeň v koagulační kaskádě. Primární funkcí trombinu je štěpení fibrinogenu za vytvoření fibrinových monomerů, které vytvoří zesítěním nerozpustný gel. Navíc reguluje trombin svou vlastní produkci aktivací faktorů V a Vlil položených v kaskádě dříve. Má také důležitou úlohu na buněčné úrovni, kde působí na specifické receptory za vzniku agregace destiček, aktivace endotheliálních buněk a proliferace fibroblastů. Trombin má tedy centrální regulační úlohu při hemostáze
2o a vytváření trombu. Protože inhibitory trombinu mohou mít široké terapeutické použití, byl v této oblasti prováděn intenzívní výzkum.
Při vývoji syntetických inhibitorů serinových proteáz a zvláště trombinu stoupal zájem o malé syntetické peptidy, které jsou rozpoznávány proteolytickými enzymy podobným způsobem, jako se tak děje u přirozených substrátů. Výsledkem byla příprava nových peptidům podobných inhibitorů jako jsou inhibitory přechodného stavu trombinu a inhibitor trombinu s nízkou molekulovou hmotností Inogatran (Thromb. Haemostas. 1995, 73: 1325 (Abs. 1633); WO • ·
93/11152 (příklad 67), o kterém bylo zjištěno, že je silným a selektivním inhibitorem trombinu. Příbuzné sloučeniny se popisují ve WO 95/23609; v porovnání s Inogatranem a jeho analogy mají sloučeniny uváděné v této patentové přihlášce v agmatinu podobné skupině aromatickou skupinu.
Hledání účinnějších a selektivnějších inhibitorů serinové proteázy pokračuje dále s cílem získat inhibitory, které mohou být podávány v nízkých dávkách a které mají méně a méně významných vedlejších účinkú.
Podstata vynálezu
Nyní byla nalezena nová třída vysoce účinných inhibitorů serinové proteázy, které jsou zvláště selektivními inhibitory trombinu nebo Xa vzorce I
A-B-X-NZ-CH-Q (i) kde
A znamená H, popřípadě substituovaný D,L α-hydroxyacetyl, R1, R1-O-C(O)-, R1-C(O)-, R1-SO2-, R2OOC-(CHR2)m-SO2-, R2OOC(CHR2)m-, H2NC0-(CHR2)m-, nebo N-ochranná skupina, kde R1 je zvolena ze skupiny (1-12C)alkyi, (2-12C)alkenyl, (2-12C)alkinyl a (32s 8C)cykloalkyl, které mohou být popřípadě substituovány skupinami (38C)cykloalkyl, (1-6C)alkoxy, oxo, OH, COOH, CF3 nebo halogen, a ze skupiny (6-14C)aryl, (7-15C)aralkyl a (8-16)aralkenyl, kde arylové skupiny mohou být popřípadě substituovány skupinami (1 -6C)alkyl, (38C)cykloalkyl, (1-6C)alkoxy„ OH, COOH, CF3 nebo halogen; každá skupina R2 znamená nezávisle atom vodíku nebo má stejný význam jako R1; m znamená 1, 2 nebo 3;
B znamená vazbu, aminokyselinu vzorce -NH5 CH[(CH2)pC(0)0H]-C(0)- nebo její esterový derivát a p je 0, 1,2 nebo
3, -N((1-12C)alkyl)-CH2-CO-, -N((2-12C)alkenyl)-CH2-CO-, -N((212C)alkinyl)-CH2-CO-, -N(benzyl)-CH2-CO-, D-1-Tiq, D-3-Tiq, D-Atc, Aic, D-1-Piq, D-3-Piq nebo L- nebo D-aminokyseiinu s hydrofobním bázickým nebo neutrálním postranním řetězcem, která může být io popřípadě N-(1-6C)alkylsubstituována; nebo A a B znamenají spolu zbytek R3R4N-CHR5-C(O)-, kde R3 a R4 jsou nezávisle R1, R1-O-C(O)-, R1-C(O)-, R1-S02-, R2OOC-(CHR2)m-SO2-, R2OOC-(CHR2),„-, H2NCO(CHR2)m-, nebo N-ochrannou skupinu, nebo jedna ze skupin R3 a R4 je spojena se skupinou R5 za vytvoření 5- nebo 6-členného kruhu spolu is s N-C, na kterou jsou navázány, přičemž uvedený kruh může být fúzován s alifatickým nebo aromatickým 6-členným kruhem; a R5 znamená hydrofobní, bázický nebo neutrální postranní řetězec;
X znamená L-aminokyselinu s hydrofobním postranním řetězcem, serin, threonin, cyklickou aminokyselinu popřípadě
2o obsahující další heteroatom zvolený ze skupiny N, O nebo S, a popřípadě substituovaným skupinami (1-6C)alkyl, (1-6C)alkoxy, benzyloxy nebo oxo, nebo X znamená -NR2-CH2-C(O)- nebo fragment
nebo kde n znamená 2, 3, nebo 4, a W znamená CH nebo N;
• ·
Λ 4»··'··
Q znamená H nebo -C(O)Y, kde Y znamená H, -CHF2, -CF3, -CO-NH-(1-6C)alkylen-C6H5, -COOR6 a R6 je H nebo (1-6C)alkyl, -CONR7R8 a R7 a R8 jsou nezávisle H nebo (1 -6C)alkyl nebo R7 a R8 spolu znamenají (3-6C)alkylen, nebo Y znamená heterocykl zvolený ze skupiny 2-thiazol, 2-thiazolin, 2-benzothiazol, 2-oxazol, 2-oxazolin a 2-benzoxazol, kde uvedené heterocykly mohou být popřípadě substituovány skupinami (1 -6C)alkyl, (1-6C)alkoxy nebo oxo;
Z znamená H nebo (1 -6C)alkyl;
r znamená 0 nebo 1, jestliže Q znamená -C(O)Y nebo r znamená 0, 1, 2, 3 nebo 4, jestliže Q znamená H;
nebo jejich prekurzory nebo farmaceuticky přijatelné soli.
Sloučeniny podle předkládaného vynálezu jsou použitelné pro léčení a prevenci trombinem podmíněných a s trombinem spojených onemocnění. Mezi tato onemocnění patří celá řada trombotických a protrombotických stavů, při kterých je aktivována koagulační kaskáda, které bez omezení zahrnují trombózu hlubokých žil, plicní embólii, tromboflebitidu, uzavření tepen trombózou nebo embólii, znovuuzavření tepen v průběhu nebo po angioplastice nebo trombolýze, restenózu po arteriárním poranění nebo invazívních kardiologických postupech, postoperativní trombózu žil nebo embólii, akutní nebo chronickou aterosklerózu, mrtvici, infarkt myokardu, rakovinu a metastázy a neurodegenerativní onemocnění. Sloučeniny podle vynálezu mohou být také použity jako antikoagulanty při použití mimotělního krevního oběhu, v případě nutnosti při dialýze a chirurgických zákrocích. Sloučeniny podle vynálezu mohou být také použity jako antikoagulanty in vitro.
Výhodné sloučeniny podle vynálezu mají vzorec I, kde X je Laminokyselina s hydrofobním postranním řetězcem, serin, threonin nebo -NR2-CH2-C(O)-; a Z je H nebo methyl. Další výhodné sloučeniny vzorce I jsou takové, kde A je jak definováno výše; B je vazba, aminokyselina vzorce -NH-CH[(CH2)pC(O)OH]-C(O)- nebo její esterový
-·5*-
derivát a p je O, 1, 2 nebo 3, -N((1-6C)alkyl)-CH2-CO-,
-N((2-6C)alkenyl)-CH2-CO-, -N(benzyl)-CH2-CO-, D-1-Tiq, D-3-Tiq, D-Atc, Aic, D-1-Piq, D-3-Piq nebo D-aminokyselina s hydrofobním postranním řetězcem, kde tato aminokyselina muže být popřípadě N5 (1-6C)alkyl substituována; nebo A a B znamenají spolu zbytek R3R4NCHRS-C(O)-; a X je cyklická aminokyselina obsahující popřípadě další heteroatom zvolený ze skupiny N, O nebo S, a popřípadě substituovaná skupinami (1-6C)alkyl, (1-6C)alkoxy, benzyloxy nebo oxo, nebo X znamená -NR2-CH2-C(O)- nebo fragment z (CH2)n\
-NH-CH^^N-CH2-C(0)0 nebo
-NH
N-CH2-C(0)15 a Z je H nebo methyl.
Výhodnější jsou sloučeniny vzorce I, kde A znamená H, 2hydroxy-3-cyklohexylpropionyl-, 9-hydroxyfluoren-9-karboxyl, R1, R1S02-, R2OOC-(CHR2)m-SO2-, R2OOC-(CHR2)m-, H2NCO-(CHR2)m-, nebo N-ochranná skupina, kde R1 je zvolena ze skupin (1 -12C)aikyl, oo (2-12C)alkenyl, (6-14C)aryl, (7-15C)aralkyl a (8-16)aralkenyl; každá skupina R2je nezávisle atom vodíku nebo má stejný význam jako R1; B je vazba, D-1-Tiq, D-3-Tiq, D-Atc, Aic, D-1-Piq, D-3-Piq nebo Daminokyselina s hydrofobním postranním řetězcem, kde uvedená aminokyselina může být popřípadě N-(1-6C)alkyl substituovaná; nebo
A a B spolu tvoří zbytek R3R4N-CHR5-C(0)-; Y je -CO-NH(1-6C)alkylen-C6H5, -COOR6, -C0NR7R8, nebo Y je heterocykl zvolený ze skupiny 2-thiazol, 2-thiazolin, 2-benzothiazol, 2-oxazol, 2-oxazoiin a 2-benzoxazol.
Zvláště výhodné jsou sloučeniny, kde A je R1-SO2-, R200C30 (CHR2)m-; B je vazba, D-1-Tiq, D-3-Tiq, D-Atc, Aic, D-1-Piq, D-3-Piq • · /8-:
nebo D-aminokyselina s hydrofobním postranním řetězcem; nebo A a B spolu tvoří zbytek R3R4N-CHR5-C(O)-, kde alespoň jedna ze skupin R3 a R4 je R2OOC-(CHR2)m- nebo R*-SO2- a další znamená nezávisle (1-12C)alkyl, (2-12C)alkenyl, (2-12C)alkinyl, (3-8C)cykloalkyl, (75 15C)aralkyl, R1-SO2- nebo R2OOC-(CHR2)m-, a R5 je hydrofobní postranní řetězec; Y je -CO-NH-(1-6C)alkylen-C6H5, -COOR® a R6 je H nebo (1-3C)alkyl, -CONR7R8, R7 a R8 znamenají nezávisle H nebo (1-3C)alkyl nebo R7 a R8 spolu tvoří (3-5C)alkylen, nebo Y je heterocykl zvolený ze skupiny 2-thiazol, 2-benzothiazol, 2-oxazol nebo io 2-benzoxazol.
Jestliže A je R2OOC-(CHR2)m-, je s výhodou B D-aminokyselina s hydrofobním postranním řetězcem; nebo A a B spolu tvoří zbytek R3R4N-CHR5-C(O)-, kde alespoň jedna ze skupin R3 a R4 je R200C(CHR2)m- a další znamená nezávisle (1 -12C)alkyl, (3-8C)cykloalkyl, ís R1-SO2- nebo R2OOC-(CHR2)m-; a X je 2-azetidinová karboxylová kyselina, prolin, kyselina pipekolová, kyselina 4thiazolidinkarboxylová, 3,4-dehydroprolin, kyselina 2oktahydroindolkarboxylová. Výhodnější jsou sloučeniny, kde A je HOOC-CH2-; B je D-Phe, D-Cha, D-Coa, D-Dpa, p-CI-D-Phe, p20 OMethyl-D-Phe, p-OEthyl-D-Phe, D-NIe, m-CI-D-Phe, 3,4-di-OMe-DPhe, D-Chg; nebo A a B spolu znamenají zbytek R3R4N-CHR5-C(O)-, kde alespoň jedna ze skupin R3 a R4 znamená HOOC-CH2- a další je nezávisle methyl, (1-4C)alkyl-SO2- nebo HOOC-CH2- a R5 je (3-8C)cykloalkyl, (3-8C)cykloalkyl(1-4C)alkyl, fenyl, benzyl, popřípadě substituovaná atomem chloru nebo skupinou (1-4C)alkoxy.
Jestliže A je R1-SO2-, je s výhodou B vazba, D-1-Tiq, D-3-Tiq, D-Atc, Aic, D-1-Piq, D-3-Piq nebo D-aminokyselina s hydrofobním postranním řetězcem; nebo A a B znamenají spolu zbytek R3R4NCHR5-C(O)-, kde alespoň jedna ze skupin R3 a R4 je R1-SO2- a další je nezávisle (1 -12C)alkyl nebo R1-SO2-; X je kyselina 2azetidinkarboxylová, prolin, kyselina pipekolová, kyselina 4• · • · • · · · · ·
thiazolidinkarboxylová, 3,4-dehydroprolin, kyselina 2oktahydroindolkarboxylová, nebo fragment z(CH2)n
-NH-CH^^N-CH2-C(O)o nebo
N-CH2-C(O)Výhodnější jsou sloučeniny, kde A je ethyl-SO2- nebo benzylSO2-; B je vazba, D-Phe, D-Cha, D-Coa, D-Dpa, p-CI-D-Phe, p10 OMethyi-D-Phe, p-OEthyl-D-Phe, D-NIe, m-CI-D-Phe, 3,4-di-OMe-DPhe, D-Chg; nebo A a B znamenají spolu zbytek R3R4N-CHRS-C(O)-, kde alespoň jedna ze skupin R3 a R4 je ethyl-SO2- nebo benzyl-SO2- a další je nezávisle (1 -12C)alkyl nebo R1-SO2- a R5 je (3-8C)cykloalkyl, (3-8C)cykloalkyl(1-4C)alkyl, fenyl, benzyl, difenylmethinyl, kde tyto skupiny jsou popřípadě substituovány atomem chloru nebo skupinou (1-4C)alkoxy.
Nejvýhodnější sloučeniny vzorce I jsou sloučeniny, kde Q znamená H a r je 0, 1 nebo 2.
N-ochranná skupina jak je definována v definici skupiny A je jakákoliv N-ochranná skupina používaná v chemii peptidu. Vhodné Nochranné skupiny je možno nalézt v T.W. Green a P. G. M. Wuts: Protective Groups in Organic Synthesis, 2. vydání (Wiley, NY, 1991) a v The Peptides, Analysis, Synthesis, Biology, díl 3. E. Gross a J. Meienhofer, Eds, (Academie Press, New York, 1981 ).
Termín popřípadě substituovaný D,L α-hydroxyacetyl znamená skupinu vzorce HO-CRaRb-C(O)-, kde Ra a Rb jsou nezávisle H, hydrofobní postranní řetězec, nebo Ra a Rb spolu tvoří 5- nebo 6členný kruh, který je popřípadě fúzován s jedním nebo dvěma alifatickými nebo aromatickými 6-člennými kruhy, a kde uvedené 5nebo 6-členné kruhy se skládají z atomů uhlíku a popřípadě jednoho heteroatomů zvoleného ze skupiny N, O a S. Výhodné D,L ahydroxyacetylové skupiny jsou 2-hydroxy-3-cyklohexyl-propionyl- a 9hydroxy-fluoren-9-karboxyl.
Termín (1-12C)alkyl znamená rozvětvenou nebo přímou alkylovou skupinu s 1 až 12 atomy uhlíku, jako je methyl, ethyl, t-butyl, izopentyl, heptyl, dodecyl, apod. Výhodné alkylové skupiny jsou (1-6C)alkylové skupiny s 1 - 6 atomy uhlíku. Nejvýhodnější v definici R6, R7 a R8 jsou (1-3C)alkylové skupiny s 1 - 3 atomy uhlíku, jako je ío methyl, ethyl, izopropyl. (2-12C)alkenylová skupina je přímá nebo větvená nenasycená uhlovodíková skupina s 2 až 12 atomy uhlíku. Výhodné jsou (2-6C)alkenylové skupiny. Příklady jsou ethenyl, propenyl, allyl, apod.
Termín (1-6C)alkylen znamená větvenou nebo nevětvenou alkylenovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku, jako je -(CH2)m- a m je od 1 do 6, -CH(CH3)-, -CH(CH3)-(CH2)-, atd. Výhodné alkylenové skupiny v definici skupiny Y jsou ethylen a methylen.
(2-12C)alkinylová skupina je rozvětvená nebo nerozvětvená uhlovodíková skupina obsahující trojnou vazbu, která má 2 až 12
2o atomů uhlíku. Výhodné jsou (2-6C)alkinylové skupiny, jako ethinyl a propinyl.
(6-14C)arylová skupina je atomatická skupina s 6 až 14 atomy uhlíku. Arylová skupina může dále obsahovat jeden nebo více heteroatomů, jako je N, S, nebo O. Příklady arylových skupin jsou fenyl, nafthyl, (izo)chinolyl, indanyl, apod. Nejvýhodnější je fenylová skupina.
Skupiny (7-15C)aralkyl a (8-16C)aralkenyl jsou alkylové a alkenylové skupiny, substituované jednou nebo více arylovými skupinami, kde celkový počet atomů uhlíku je 7 až 15, popřípadě 8
3o až 16.
Termín (1-6C)alkoxy znamená alkoxylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku, jejíž alkylová skupina má výše definovaný význam.
Termín (3-8C)cykloalkyl znamená cykloalkylovou skupinu s 3 až 8 atomy uhlíku, jako cyklopropyl, cyklobutyl, cyklopentyl, cyklohexyl, cykloheptyl nebo cyklooktyl. Cyklopentyl a cyklohexyl jsou výhodné cykloalkylové skupiny.
Termín halogen znamená fluor, chlor, brom nebo jod.
Termín esterové deriváty znamená jakékoliv vhodné esterové deriváty, s výhodou (1-4C)alkylestery, jako jsou methyl-, ethyl- nebo tio butylestery.
Termíny 1- a 3-Tiq znamenají 1,2,3,4-tetrahydroizochinolin-1nebo -3-karboxylovou kyselinu; 1- a 3-Piq jsou 1- popřípadě 3karboxyperhydroizochinolin; Atc je kyselina 2-aminotetralin-2karboxylová; Aic je kyselina aminoindankarboxylová; Phe je fenylalanin; Cha je cyklohexylalanin; Dpa je difenylalanin; Coa je cyklooktylalanin; Chg je cyklohexylglycin; Nle je norleucin.
Termín hydrofobní postranní řetězec znamená (1 -12C)alkyl, popřípadě substituovaný jednou nebo více (3-8C)cykloalkylovými skupinami nebo (6-14C)arylovými skupinami (které mohou obsahovat
2o heteroatom, např. atom dusíku) jako je cyklohexyl, cyklooktyl, fenyl, pyridinyl, nafthyl, tetrahydronafthyl, apod., kde hydrofobní postranní řetězec může být popřípadě substituován substituenty jako je halogen, trifluormethyl, nižší alkyl (např. methyl nebo ethyl), nižší alkoxy (např. methoxy), fenyloxy, benzyloxy, apod.
Termín substituovaný znamená substituovaný jedním nebo více substituenty.
Aminokyseliny s bázickým postranním řetězcem jsou například bez omezení arginin a lyzin, s výhodou arginin. Termín aminokyseliny s neutrálním postranním řetězcem označuje aminokyseliny jako je methioninsulfon apod.
• · . · · »· · · · · · · • ··· · · · · · ··
•.Λ * * · · · · ··· · · • ifl - . ... ...
• «· i . · ... ·· ·· ··
Cyklické aminové kyseliny jsou například kyselina 2azetidinkarboxylová, prolin, kyselina pipekolová, 1-amino-1-karboxy(3-8C)cykloalkan (s výhodou 4C, 5C nebo 6C), kyselina 4piperidinkarboxylová, kyselina 4-thiazolidinkarboxylová, 3,4-dehydro5 prolin, azaprolin, kyselina 2-oktahydroindolkarboxylová apod. Výhodné jsou kyselina 2-azetidinkarboxylová, prolin, kyselina pipekolová, kyselina 4-thiazolidinkarboxylová, 3,4-dehydroprolin a kyselina 2-oktahydroindolkarboxylová
Termín prekurzor znamená sloučeninu, ve které je chráněná io amidinová skupina vzorce I, např. skupinou (16C)alkoxykarbonylovou.
Vynález dále zahrnuje způsob výroby sloučeniny vzorce I včetně navázání vhodně chráněných aminokyselin nebo analogů aminokyselin následovaného odstraněním ochranných skupin.
Sloučeniny vzorce I mohou být vyrobeny způsobem běžným pro tyto sloučeniny.
Vhodně Na chráněné (pokud je přítomen reaktivní postranní řetězec, je chráněný také) deriváty aminokyselin nebo peptidy se aktivují a vážou na deriváty aminokyseliny nebo peptidu s vhodně chráněným karboxylem buď v roztoku nebo na pevném nosiči. Chránění α-aminových skupin obvykle probíhá uretanovými funkčními skupinami, jako je v přítomnosti kyselin labilní terc.butyloxykarbonylová skupina (Boc), benzyloxykarbonylová skupina (Z) a substituované analogy v přítomností bází labilní 9-fluorenyl25 methyloxykarbonylové skupiny (Fmoc). Skupina Z může být také odstraněna katalytickou hydrogenací. Další vhodné skupiny chránící aminoskupiny jsou Nps, Bmv, Bpoc, Msc, atd. Dobrý přehled ochranných skupin aminokyselin se uvádí v publikaci The Peptides, Analysis, Synthesis, Biology, díl 3 E. Gross a J. Meienhofer, Eds,
3o (Academie Press, New York, 1981 ). Ochrana karboxylových skupin může probíhat tvorbou esteru např. esterů labilních v přítomností bází • · jako jsou methyl- nebo ethylestery, esterů labilních v přítomnosti kyselin jako terc.-butylestery, nebo hydrogenolyticky labilní estery jako jsou benzylestery. Ochrany funkčních skupin lyzinu vedlejších řetězců je možno dosáhnout použitím výše uvedených skupin.
Aktivace karboxylové skupiny vhodně chráněných aminokyselin nebo peptidů může být provedena azidem, směsným anhydridem, aktivním esterem nebo karbodiimidovou metodou, zvláště s přídavkem katalytických a racemizaci potlačujících sloučenin jako je 1hydroxybenzotriazol, N-hydroxysukcinimid, 3-hydroxy-4-oxo-3,4io dihydrol ,2,3-benzotriazin, N-hydroxy-5-norbornen-2,3-dikarboximid. Viz např. The Peptides, Analysis, Synthesis, Biology (viz výše) a Pure and Applied Chem. 59(3), 331-344 (1987). Acylguanidinová skupina může být navázána na C-konec vhodně Να-chráněného derivátu aminokyselin nebo peptidů vazebnými metodami jak je popsáno výše.
Vhodnou metodou pro výrobu sloučenin podle vynálezu, kde Q je -C(O)Y, chráněná kyselina glutamová (Glu) se naváže na skupinu Y, odstraní se ochranná skupina a na N-konec se naváže část A-B-Xza vytvoření sloučeniny vzorce A-B-X-Glu-Y. V odděleném postupu se připraví chráněná S-methylizourea, která se převede na chráněný guanidin. Chráněný guanidin se naváže na skupinu A-B-X-Glu-Y a po odstranění ochranné skupiny se získá sloučenina vzorce I.
Sloučeniny podle vynálezu, které mohou být ve formě volné báze, mohou být z reakční směsi izolovány ve formě farmaceuticky přijatelné soli. Farmaceuticky přijatelné soli mohou být také získány působením organické nebo anorganické kyseliny jako je chlorovodík, bromovodík, jodovodík, kyselina sírová, fosforečná, octová, propionová, glykolová, maleinová, malonová, methansulfonová, fumarová, jantarová, vinná, citrónová, benzoová a askorbová na volnou bázi vzorce I.
3o Sloučeniny podle vynálezu mohou mít jeden nebo více chirálních atomu uhlíku a mohou být proto získány ve formě čistého ·· ·· · ·· ·· ··
enantiomeru nebo jako směs enantiomerů nebo jako směs obsahující diastereomery. Způsoby získávání čistých enantiomerů jsou v oboru dobře známé, například krystalizace solí získaných z opticky aktivních kyselin a racemické směsi nebo chromatografie s použitím chirálních kolon. Pro diastereomery je možno použít kolony s přímou nebo reverzní fází.
Sloučeniny podle vynálezu je možno podávat enterálně nebo parenterálně, u člověka s výhodou v denní dávce 0,001-100 mg na kg tělesné hmotnosti, s výhodou 0,01-10 mg na kg tělesné hmotnosti. Ve io směsi s farmaceuticky vhodnými pomocnými látkami, například jak se popisují ve standardní referenční publikaci Gennaro a další, Remingtonů Pharmaceutical Sciences, (18th ed, Mack Publishing Company, 1990, viz např. část 8: Pharmaceuticat Preparations a Their Manufacture) mohou být sloučeniny lisovány do pevných dávkovačích jednotek, jako jsou pilulky a tablety, nebo mohou být zpracovány do kapslí nebo čípků. Pomocí farmaceuticky vhodných kapalin mohou být sloučeniny použity také ve formě roztoku, suspenze, emulze, např. pro použití jako injekční preparát, nebo jako sprej např. pro použití jako nosní sprej.
2o Pro výrobu dávkovačích jednotek např. tablet se předpokládá použití běžných aditivních látek jako jsou plniva, barviva, polymerní pojivá apod. Obecně je možno použít jakékoliv farmaceutické aditivní látky, která neinterferuje s funkcí aktivních sloučenin.
Vhodné nosiče, se kterými mohou být sloučeniny podávány, zahrnují laktózu, škrob, deriváty celulózy apod. nebo jejich směsi použité ve vhodných množstvích.
Vynález je dále ilustrován následujícími příklady.
• · ·- 33 A
Příklady provedení vynálezu
Termín -Glu(guanidin) znamená
-NH-CH-C(O)Bzl = benzyl; Boc = terc.-butyloxykarbonyl; Cbz = benzyloxykarbonyl; Ac = acetyl; PAc = fenylacetyi; Glu = kyselina glutamová; Cha = cyklohexylalanin; Pro = prolin; Phe = fenylanlanin; 1-Piq = 1-karboxyperhydroizochinolin; Nal = 2-naftylalanin; Asp = kyselina asparagová.
Pokud není uvedeno jinak, retenční časy (Rt(LC)) byly určovány kapalnou chromatografii s reverzní fází na koloně Supeicosii LC-1815 DB (2,1 mm x 25 cm).
PŘÍKLAD 1
HQOC-CH? -D-Cha-fN-ckHopentyQ-Gly-S-Ala-quanidin (a) N-fterc.-butyloxvkarbonvP-S-methylizothiourea
S-methylizothiourea semisulfát (10 g) byla suspendována v dichlormethanu (100 ml). K suspenzi byl za míchání přidán roztok 4N hydroxidu sodného (10 ml). Reakční směs byla vložena do ledové lázně, po kapkách byl přidán di-terc-butyl dikarbonát (15,7 g) v dichlormethanu (100 ml) spolu s 2N roztokem hydroxidu sodného pro udržení pH v okolí 11. Po skončení přidávání byla reakční směs míchána přes noc při pokojové teplotě. Vrstva dichlormethanu byla oddělena, a vodná vrstva byla extrahována dichlormethanem. Spojené organické vrstvy byly promyty vodou a sušeny nad síranem sodným,
V 00 • 0 0
• 0
00 0 0 0 0
0 00
000 0 0
0 0
0 0« zfiltrovány a odpařeny ve vakuu. Zbytek byl čištěn chromatografií na oxidu křemičitém (eluent: heptan/ethylacetát = 4/1 obj. %) za získání N-(terc-butyloxykarbonyl)-S-methylizothiourey (9,38 g).
TLC: Rf = 0,75, silikagel, ethylacetát/heptan = 3/1 obj. % (b) N-(benzyloxvkarbonvl)-N'-(terc-butyloxvkarbonvl)-Smethylizothiourea
N-(terc-butyloxykarbonyl)-S-methylizothiourea (2 g) byla rozpuštěna v dichlormethanu (20 ml). K roztoku byl za míchání přidán io roztok 4N hydroxidu sodného (2 ml). Reakční směs byla vložena do ledové lázně; po kapkách byl přidáván N-(benzyloxy-karbonyloxy)sukcinimid (2,62 g) v dichlormethanu (20 ml) spolu s 2N hydroxidem sodným pro udržení pH v okolí 11. Když bylo přidávání ukončeno, reakční směs byla míchána přes noc při pokojové teplotě. Vrstva dichlormethanu byla oddělena a vodná vrstva byla dvakrát promyta dichlormethanem. Spojené organické vrstvy byly promyty vodou, sušeny nad síranem sodným, zfiltrovány a odpařeny ve vakuu. Zbytek byl čištěn chromatografií na oxidu křemičitém (eluent: heptan/ethylacetát = 3/2 obj. %) za získání N-(benzyloxykarbonyl)-N'2o (terc-butyloxykarbonyl)-S-methylizothiourey (3,15 g).
TLC: Rf = 0,78, silikagel, ethylacetát/heptan =1/1 obj. % (c) N-(Cbz)-N,-(t-Boc)-guanidin
N-(benzyloxykarbonyl)-N'-(terc-butyloxykarbonyl)-S25 methylizothiourea (3,15 g) byla rozpuštěna v methanolovém roztoku amoniaku (2,4M, 50 ml). Reakční směs byla míchána přes noc při pokojové teplotě. Směs byla odpařena ve vakuu a zbytek byl čištěn chromatografií na oxidu křemičitém (eluent: dichlormethan/methanol 95/5 obj. %) za získání N-(Cbz)-N'-(t-Boc)-guanidinu (1,83 g).
TLC: Rf = 0,80, silikagel, dichlormethan/methanol = 9/1 obj. %.
(d) N-(t-Boc)-guanidinhvdrochlorid % paladium na aktivním uhlí (250 mg) a 3,12 ml 2N roztoku chlorovodíku bylo přidáno k roztoku N-(Cbz)-N'-(t-Boc)-guanidinu (1,8 g) v methanolu (50 ml). Směs byla hydrogenována při atmosférickém tlaku při pokojové teplotě 1 h. Paladiový katalyzátor byl odstraněn filtrací a rozpouštědlo bylo odpařeno za sníženého tlaku za získání N-(t-Boc)-guanidinhydrochloridu s kvantitativním výtěžkem.
io TLC: Rf = 0,10, silikagel, dichlormethan/methanol = 9/1 obj. %.
(e) Cbz-3-Ala-(N-t-Boc)-guanidin
Cbz-p-Ala-OH (171 mg) byl rozpuštěn v suchém dimethylformamidu (5 ml). Po přidání triethylaminu (212 μΙ), byla reakční směs umístěna pod dusíkem a ochlazena na -15 °C. Potom byl přidán izobutylchlorformát (99 μΙ) a směs byla ponechána míchat při - 15 °C 15 min. K ochlazené směsi byly přidány N-(t-Boc)guanidinhydrochlorid (150 mg) a triethylamin (106 μΙ). Reakční směs byla míchána 1 h při -15 °C a udržována při pokojové teplotě 45 min.
Triethylaminhydrochlorid byl odfiltrován afiltrát byl odpařen do sucha. Zbytek byl čištěn chromatografii na oxidu křemičitém (eluent: dichlormethan/methanol = 95/5 obj. %) za získání Cbz-3-Ala-(N-t-Boc)guanidinu (256 mg).
TLC: Rf = 0,50, silikagel, dichlormethan/methanol = 9/1 obj. %.
(f) H-B-Ala-(N-t-Boc)-guanidinhydrochlorid % paladium na aktivním uhlí (100 mg) a 300 μΙ 4M roztoku chlorovodíkáu bylo přidáno k roztoku Cbz-p-Ala-(N-t-Boc)-guanidinu (220 mg) v dimethylformamidu (5 ml). Směs byla hydrogenována za • ·
atmosférického tlaku při pokojové teplotě 1 h. Paladiový katalyzátor byl odstraněn filtrací a rozpouštědlo bylo odpařeno za sníženého tlaku za získání H-3-Ala-(N-t-Boc)-guanidinhydrochloridu s kvantitativním výtěžkem.
TLC: Rf = 0,10, silikagel, dichlormethan/methanol = 9/1 obj. %.
(g) N-cyklopentyl-Glv-OMe
Cyklopentanon (15,6 g) byl přidán k roztoku H-Gly-OMe.HCI (23,2 g) v 200 ml methanolu. Směs byla míchána 15 min a byl přidán io kyanoborohydrid sodný (7 g). pH bylo nastaveno na 6. Reakční směs byla míchána 16 hod při pokojové teplotě. Pro ukončení reakce byl přidán cyklopentanon (1 g) a míchání pokračovalo.
Reakce byla monitorována na TLC. Když byl spotřebován veškerý výchozí materiál, směs byla okyselena na pH 2 a míchána is 30 min. Rozpouštědlo bylo odstraněno a zbytek byl zředěn vodou. Roztok byl promyt etherem, pH nastaveno na 12 6N roztokem hydroxidu sodného a směs byla extrahována dichlormethanem. Spojené organické vrstvy byly promyty nasyceným roztokem chloridu sodného, sušeny na síranu sodném a odpařeny ve vakuu za získání
16 g oleje.
Rf = 0,46 ve směsi ethylacetát/pyridin/kyselina octová/voda 63/20/6/11 (obj.) na oxidu křemičitém.
(h) N-(t-butvloxykarbonvlmethvl)-D-Cha-OMe t-butyl-bromacetát (17 g) byl přidán k míchanému roztoku H-DCha-OMe.HCI (26 g) v 300 ml acetonitrilu. pH směsi bylo nastaneno na 8,5 diizopropylethylaminem. Směs byla míchána 16 hod při pokojové teplotě a odpařena ve vakuu. Zbytek byl rozpuštěn v dichlormethanu a roztok byl promyt vodou, sušen na síranu sodném • · • · • · • ·
a odpařen ve vakuu. Chromatografie na silikagelu ve směsi hexan/ethylacetát 9/1 (obj.) poskytla 20 g N-(tbutyloxykarbonylmethyl)-D-Cha-OMe.
Rf = 0,46 ve směsi ethylacetát/pyridin/kyselina octová/voda
15,75/5/1,5/2,75 (obj.) na oxidu křemičitém.
(i) N-(t-butvloxvkarbonvlmethvl)-N-Boc-D-Cha-OMe pH roztoku N-(t-butyloxykarbonylmethyl)-D-Cha-OMe (20 g) a di-t-butyldikarbonátu (17 g) bylo nastaveno na 8,5 io diizopropylethylaminem. Směs byla míchána 16 hod při pokojové teplotě. Rozpouštědlo bylo odstraněno ve vakuu. Ke zbytku byl přidán dichlormethan a voda. Organická vrstva byla oddělena, promyta chladným 1N chlorovodíkem, vodou, 5 % roztokem hydrogenuhličitanu sodného a vodou. Organická vrstva byla sušena na síranu sodném a filtrát byl odpařen na amorfní pevnou látku N-(tbutyloxykarbonylmethyl)-N-Boc-D-Cha-OMe s výtěžkem 28 g.
Rf = 0,60 ve směsi ethylacetát/pyridin/kyselina octová/voda 252/20/6/11 (obj.) na oxidu křemičitém.
(j) N-(t-butvloxvkarbonylmethyl)-N-Boc-D-Cha-QH
Roztok N-(t-butyloxykarbonylmethyl)-N-Boc-D-Cha-OMe (28 g) v 420 ml směsi dioxan:voda 9/1 (obj.) byl smísen s dostatečným množstvím 1N hydroxidu sodného pro udržení pH na hodnotě 13 90 min při pokojové teplotě. Po okyselení byla směs vlita do vody a byla extrahována dichlormethanem. Organická vrstva byla promyta vodou a sušena na síranu sodném. Filtrát byl odpařen za získání 24 g N-(t-butyloxykarbonylmethyl)-N-Boc-D-Cha-OH.
Rf = 0,23 ve směsi dichlormethan/methanol 9/1 (obj) na silikagelu.
(k) N-(t-butyloxvkarbonylmethyl)-N-Boc-D-Cha-(N-cyklopentyl)-GlyQMe
N-cyklopentyl-Gly-OMe (10,2 g) a 2-(1H-benztriazol-1-yl)1,1,3,3-tetramethyluroniumtetrafluorborát (TBTU; 21,2 g) byly přidány k roztoku N-(t-butyloxykarbonylmethyl)-N-Boc-D-Cha-OH (24 g) v 300 ml Ν,Ν-dimethylformamidu. pH směsi bylo nastaveno na 8,5. Směs byla míchána přes noc při pokojové teplotě a byla zakoncentrována odpařením. Ke zbytku byla přidána voda a ethylacetát. Organická vrstva byla oddělena 1N chlorovodíkem, io vodou, 5 % hydrogenuhiičitanem sodným, byla sušena nad síranem sodným. Filtrát byl odpařen a azbytek byl chromatografován na silikagelu ve směsi hexan/ethylacetát 8/2 (obj.) jako eluentu. Frakce obsahující N-(t-butyloxykarbonylmethyl)-N-Boc-D-Cha-(N-cyklopentyl)Gly-OMe byly spojeny a odpařeny s výtěžkem 17 g.
Rf = 0,57 ve směsi hexan/ethylacetát 7/3 (obj.) na oxidu křemičitém.
(l) N-(t-butvloxvkarbonvimethvl)-N-Boc-D-Cha-(N-cvklopentyl)-Gly-OH
N-(t-butyloxykarbonylmethyl)-N-Boc-D-Cha-(N-cyklopentyl)-GlyOMe (17 g) byl saponifikován ve směsi dioxan/voda 1/1 (obj., 150 ml)
2o a zředěného hydroxidu sodného za získání 15 g amorfní pevné látky. Chromatografie na silikagelu ve směsi dichlormethan/methanol 95/5 (obj.) jako eluent poskytla 13 g N-(t-butyloxykarbonylmethyl)-N-Boc-DCha-(N-cyklopentyl)-GlyOH.
Rf = 0,30 ve směsi dichlormethan/methanol 9/1 (obj.) na oxidu křemičitém.
1$-: :
• · · · · · ·· · · • * • · 4 (m) N-(t-butvloxvkarbonylmethvl)-N-Boc-D-Cha-(N-cvklopentvl)-Glv-BAla-(N-t-Boc)-guanidin
N-(t-butyloxykarbonylmethyl)-N-Boc-D-Cha-(N-cyklopentyl)-GlyOH (310 mg) byl rozpuštěn v suchém dimethylformamidu (10 ml). Po přídavku triethylaminu (168 μΙ) byla reakční směs umístěna pod dusík a ochlazena na -15 °C. Potom byl přidán izobutylchlorformát (79 μΙ) a směs byla ponechána míchat 15 min při -15 °C. H-3-Ala-(N-t-Boc)guanidinhydrochlorid (154 mg) byl rozpuštěn v suchém dimethylformamidu (5 ml) a po kapkách byl přidáván ke chladnému ío roztoku anhydridu při ddržování pH na 8,5 přídavkem triethylaminu. Reakční směs byla míchána 1 hod při -15 °C a potom 1 hod při 0 °C. Reakční směs byla odpařena dosucha. Zbytek byl rozpuštěn v ethylacetátu a potom promyt vodou, roztokem soli, sušen nad síranem sodným a koncentrován ve vakuu. Zbytek byl čištěn chromatografii na oxidu křemičitém (eluent: dichlormethan/methanol = 95/5 obj. %) za získání N-(t-butyloxykarbonylmethyl)-N-Boc-D-Cha-(Ncyklopentyl)-Gly-3-Ala-(N-t-Boc)-guanidinu (268 mg).
TLC: Rf = 0,80, silikagel, dichlormethan/methanol = 9/1 obj. %.
(n) HOOC-CH?-D-Cha-(N-cvklopentyl)-Glv-6-Ala-guanidin
N-(t-butyloxykarbonylmethyl)-N-Boc-D-Cha-(N-cyklopentyl)-Gly3-Ala-(N-t-Boc)-guanidin (265 mg) byl smísen s 90 % roztokem kyseliny trifluoroctové/voda (10 ml) a ponechán 2 hod a při pokojové teplotě. Reakční směs byla koncentrována ve vakuu a zbytek byl rozpuštěn ve vodě a přímo nanesen na preparativní kolonu HLPC Supelcosil LC-18-DB s použitím gradientního systému eluce 20%A/80%B až 20%A/20%B/60%C v průběhu 40 min při průtoku 15 ml/min. (A: 0,5M fosfátový pufr pH=2,1, B: voda, C: acetonitril/voda = 6/4). Výtěžek: 185 mg HOOC-CH2-D-Cha-(N-cyklopentyl)-Gly-p-Ala3o guanidin.
Rf (LC): 32,22 min 20%A/80%B až 20%A/20%B/60%C v průběhu 40 min.
PŘÍKLAD 2
HOQC-CH7-D-Cha-Pro-Glu-(guanidin)-(2-thiazolyl) (a) H-D-Cha-OMe.HCI
Ke chladnému (-20 °C) a suchému methanolu (195 ml) byl po kapkách přidáván thionylchlorid (28 ml). Byl přidán H-D-Cha-OH.HCI (40 g) a reakční směs byla zahřívána pod zpětným chladičem 5 hod. ío Směs byla koncentrována ve vakuu a odpařena spolu s methanolem (3 x). Zbytek byl krystalizován ze směsi methanol/diethylether za získání H-D-Cha-OMe.HCI jako krystalického prášku (40,9 g).
TLC: Rf = 0,66, silikagel, n-butanol/kyselina octová/voda = 10/1/3 obj. %.
(b) N-(t-butyloxvkarbonvlmethyl)-D-Cha-OMe t-butylbromoacetát (36 g) byl přidán k míchanému roztoku H-DCha-OMe.HCI (40,9 g) v 400 ml acetonitrilu. pH směsi bylo nastaveno na 8,5 diizopropylethylaminem. Směs byla míchána 16 hod při pokojové teplotě a a odpařena ve vakuu. Zbytek byl rozpuštěn v dichlormethanu a roztok byl promyt vodou, sušen na síranu sodném a odpařen ve vakuu. Chromatografie na silikagelu ve směsi heptan/ethylacetát 9/1 (obj.) poskytla 64 g N-(t-butyloxykarbonylmethyl)-D-Cha-OMe.
TLC: Rf= 0,25, silikagel, ethylacetát/heptan = 1/1 obj. %.
• a • a aaa a a a a a a (c) N-ft-butyloxykarbonvImethyO-N-Boc-D-Cha-OMe pH roztoku N-(t-butyloxykarbonylmethyl)-D-Cha-OMe (64 g) a di-t-butyldikarbonátu (40,3 g) bylo nastaveno na 8,5 diizopropylethylaminem. Směs byla míchána 16 hod při pokojové teplotě. Rozpouštědlo bylo odstraněno ve vakuu. Dichlormethan a voda byly přidány ke zbytku. Organická vrstva byla oddělena, promyta chladným 1N chlorovodíkem, vodou, 5 % roztokem hydrogenuhličitanu sodného a vodou. Organická vrstva byla sušena na síranu sodném a filtrát byl odpařen na amorfní pevnou látku N-(tio butyloxykarbonylmethyl)-N-Boc-D-Cha-OMe s výtěžkem 59,6 g.
TLC: Rf = 0,50, silikagel, ethylacetát/heptan = 1/1 obj. %.
(d) N-(t-butyloxykarbonvlmethvl)-N-Boc-D-Cha-QH
Roztok N-(t-butyloxykarbonylmethyi)-N-Boc-D-Cha-OMe (59,6 g) v 900 ml směsi dioxan/voda = 9/1 (obj.) byl smísen s dostatečným množstvím hydroxidu sodného pro udržení pH na 12 6 hod při pokojové teplotě. Po okyselení byla směs vlita do vody a byla extrahována dichlormethanem. Organická vrstva byla promyta vodou a sušena na síranu sodném. Filtrát byl odpařen za získání 54 g N-(t20 butyloxykarbonylmethyl)-N-Boc-D-Cha-OH.
TLC: Rf = 0,60. silikagel, dichlormethan/methanol = 9/1 obj. %.
(e) N-(t-butvloxvkarbonylmethvl)-N-Boc-D-Cha-Pro-QBzl
K chladnému (0 °C) roztoku N-(t-butyloxykarbonylmethyl)-N25 Boc-D-Cha-OH (13,5 g) v Ν,Ν-dimethylformamidu (150 ml) byl postupně přidán 1-hydroxybenztriazol (7,09 g), dicyklohexylkarbodiimid (7,61 g), H-Pro-OBzl.HCI (9,31 g) a triethylamin (6 ml). Směs byla míchána 1 hod při 0 °C a při pokojové teplotě udržována přes noc. Směs byla ochlazena na - 20 °C • ·
a dicyklohexylurea byla odstraněna filtrací. Filtrát byl odpařen dosucha. Zbytek byl rozpuštěn v ethylacetátu a postupně promyt 5 % hydrogenuhličitanem sodným, vodou, 3 % kyselinou citrónovou a roztokem soli, sušen nad síranem sodným a koncentrován ve vakuu.
Zbytek byl chromatografován na silikagelu ve směsi heptan/ethylacetát = 3/1 (obj.) jako eluentu. Frakce obsahující N-(tbutyloxykarbonylmethyl)-N-Boc-D-Cha-Pro-OBzl byly spojeny a odpařeny. Výtěžek: 15 g.
TLC: Rf = 0,70, siiikagel, heptan/ethylacetát = 1/1 obj. %.
(f) N-(t-butvloxykarbonylmethvD-N-Boc-D-Cha-Pro-OH % paladium na uhlí (750 mg) bylo přidáno k roztoku N-(tbutyloxykarbonylmethyl)-N-Boc-D-Cha-Pro-OBzl (15 g) v methanolu (150 ml). Směs byla hydrogenována za atmosférického tlaku při pokojové teplotě 1 hod. Paladiový katalyzátor byl odstraněn filtrací a rozpouštědlo bylo odstraněno odpařením za sníženého tlaku za získání 11,2 g N-(t-butyloxykarbonylmethyl)-N-Boc-D-Cha-Pro-OH.
TLC: Rf = 0,65, siiikagel, ethylacetát/pyridin/kyselina octová/voda = 213/20/6/11 obj. %.
(g) Boc-Glu-(OtBu)-NMeOMe
K roztoku Boc-Glu(OtBu)-OH (15 g) v dichlormethanu (150 ml) byl přidán N,O-dimethylhydroxylaminhydrochlorid (5,3 g) a [2-(1 Hbenztriazol-1 -yl)-1,1,3,3-tetramethyluroniumtetrafluorborát) (15,87 g) a pH bylo nastaveno na pH 8-8,5 přídavkem triethylaminu. Reakční směs byla míchána 16 h při pokojové teplotě. Směs byla postupně promyta chladným 0,3M roztokem kyseliny chlorovodíkové, vodou, 5 % vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a vodou. Organická vrstva byla sušena nad síranem sodným, zfiltrována a odpařena. Zbytek byl čištěn chromatografii na oxidu křemičitém (eluent: dichlormethan/methanol = 98/2 obj. %) za získání BocGlu(OtBu)-NMeOMe (17,5 g).
TLC: Rf= 0,85, silikagel, dichlormethan/methanol = 9/1 obj. %.
(h) Boc-Glu(OtBu)-(2-thiazolvl)
K chladnému (- 78 °C), míchanému roztoku n-butyllithia (88,9 mmol) v diethyletheru (90,7 ml), byl po kapkách přidán roztok 2bromothiazolu (14,6 g) v diethyletheru (75 ml). Po míchání roztoku při - 78 °C po dobu 30 min byl roztok po kapkách přidáván k roztoku Bocio Glu(OtBu)-NMeOMe (14 g) v suchém tetrahydrofuranu (150 ml). Směs byla míchána při - 78 °C 1 ha potom byla vlita do ledového 5 % roztoku kyseliny citrónové ve vodě. Směs byla ponechána ohřát na pokojovou teplotu a vrstvy byly odděleny. Vodná vrstva byla extrahována ethylacetátem. Spojené organické vrstvy byly promyty vodou, nasyceným vodným roztokem chloridu sodného, sušeny nad síranem sodným, zfiltrovány a odpařeny. Zbytek byl čištěn chromatografii na oxidu křemičitém (eluent: dichlormethan/ethyiacetát = 9/1 obj. %) za získání Boc-Glu(OtBu)-(2-thiazolylu) (6,83 g).
TLC: Rf = 0,92, silikagel, dichlormethan/ethyiacetát = 7/3 obj. %.
(i) H-Glu-(2-thiazolyl).TFA
Boc-Glu(OtBu)-(2-thiazolyl) (450 mg) byl rozpuštěn v 3 ml kyseliny trifluoroctové (TFA), 1 ml dichlormethanu a 150 μΙ anisolu a míchán 1 h při pokojové teplotě. Surový amin byl izolován jako žlutý olej v kvantitativním výtěžku po odstranění rozpouštědla odpařením a použit ihned pro výrobu N-Boc-N-(terc-butyloxykarbonylmethyl)-DCha-Pro-Glu-(2-thiazolylu).
TLC: Rf = 0,10, silikagel, ethylacetát/pyridin/kyselina octová/voda = 63/20/6/11 obj. %.
• · • ·
-2Á (i) N-(t-butvloxvkarbonvlmethyl)-N-Boc-D-Cha-Pro-Glu-(2-thiazolyl)
N-Boc-N-(terc-butyloxykarbonylmethyl)-D-Cha-Pro-OH (590 mg) byl rozpuštěn v suchém dimethylformamidu (15 ml). Po přidání diizopropylethylaminu (416 μΙ) byla reakční směs umístěna pod dusík a chlazena na - 15 °C. Izobutylchlorformát (158 μΙ) byl přidán a směs byla ponechána míchat 15 min při -15 °C. H-Glu-(2-thiazolyl).TFA (300 mg) byla rozpuštěna v suchém dimethylformamidu (10 ml) a po kapkách přidána k roztoku míchaného anhydridu při udržovánípH na io 8,5 přídavkem diizopropylethylaminu. Reakční směs byla míchána 30 min při - 15 °C. Zbytek byl rozpuštěn po odpaření dosucha v ethylacetátu a postupně promyt vodou, 5 % vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného, vodou, roztokem soli, byl sušen nad síranem sodným a zakoncentrován ve vakuu. Zbytek byl čištěn chromatografií na oxidu křemičitém (eluent: dichlormethan/methanol = 95/5 obj. %) za získání N-Boc-N-(terc-butyloxykarbonylmethyl)-D-ChaPro-Glu-(2-thiazolylu) (171 mg).
TLC: Rf = 0,50, silikagel, dichlormethan/methanol = 9/1 obj. %.
(k) N-(terc-butvloxvkarbonvl)-S-methvlizothiourea
S-methylizothiourea semisulfát (10 g) byl suspendován v dichlormethanu (100 ml). K suspenzi byl za míchání přidán roztok 4N NaOH (10 ml). Reakční směs byla umístěna do ledové lázně a po kapkách byl přidán roztok di-terc-butyldikarbonátu (15,7 g) v dichlormethanu (100 ml) spolu s 2N roztokem hydroxidu sodného pro udržení pH v okolí 11. Po ukončení přidávání byla reakční směs míchána přes noc při pokojové teplotě. Vrstva dichlormethanu byla oddělena a vodná vrstva byla extrahována dvakrát dichlormethanem. Spojené organické vrstvy byly promyty vodou a sušeny nad síranem sodným, zfiltrovány a odpařeny ve vakuu. Zbytek byl čištěn chromatografií na oxidu křemičitém (eluent: heptan/ethylacetát = 4/1 obj. %) za získání 9,38 g.
TLC: Rf = 0,75, silikagel, ethylacetát/heptan = 3/1 obj. % (I) N-(benzvloxvkarbonvD-N,-(terc-butvloxvkarbonvl)-Smethlizothiourea
N-(terc-butyloxykarbonyl)-S-methylizothiourea (2 g) byla rozpuštěna v dichlormethanu (20 ml). K roztoku byl za míchání přidán 4N roztok hydroxidu sodného (2 ml). Reakční směs byla umístěna do io ledové lázně a po kapkách byl přidán roztok N-(benzyloxykarbonyloxy)-sukcinimidu (2,62 g) v dichlormethanu (20 ml) spolu s roztokem 2N hydroxidu sodného pro udržení pH v okolí 11. Po ukončení přidávání byla reakční směs míchána přes noc při pokojové teplotě. Dichlormethanová vrstva byla oddělena a vodná vrstva byla dvakrát promyta dichlormethanem. Spojené organické vrstvy byly promyty vodou a sušeny nad síranem sodným, zfiltrovány a odpařeny ve vakuu. Zbytek byl čištěn chromatografií na oxidu křemičitém (eluent: heptan/ethylacetát = 3/2 obj. %) s výtěžkem 3,15 g.
TLC: Rf = 0,78, silikagel, ethylacetát/heptan = 1/1 obj. % (m) N-(Cbz)-N'-(t-Boc)-guanidin
N-(benzyloxykarbonyl)-N'-(terc-butyloxykarbonyl)-Smethylizothiourea (3,15 g) byla rozpuštěna v methanolovém roztoku amoniaku (2,4M, 50 ml). Reakční směs byla míchána při pokojové teplotě přes noc. Směs byla odpařena ve vakuu a získaný zbytek bnyl čištěn chromatografií na oxidu křemičitém (eluent: dichlormethan/methanol = 95/5 obj. %) s výtěžkem 1,83 g.
TLC: Rf = 0,80, silikagel, dichlormethan/methanol = 9/1 obj. %.
• · · (n) N-(t-Boc)- guanidinhvdrochlorid
K roztoku N-(Cbz)-N'-(t-Boc)-guanidinu (1,8 g) v methanolu (50 ml) bylo přidáno 10 % paladium na uhlí (250 mg) a 3,12 ml 2N roztoku chlorovodíku. Směs byla hydrogenována za atmosférického tlaku a při pokojové teplotě 1 h. Paladiový katalyzátor byl odstraněn filtrací a rozpouštědlo bylo odstraněno odpařením za sníženého tlaku za získání N-(t-Boc)-guanidin.hydrochloridu v kvantitativním výtěžku. TLC: Rf = 0,10, silikagel, dichlormethan/methanol = 9/1 obj. %.
io (o). N-(t-butvloxvkarbonylmethyl)-N-Boc-D-Cha-Pro-Glu((N-t-Boc)guanidin)-(2-thiazolyl)
K chladnému (0 °C) roztoku N-(t-butyloxykarbonylmethyl)-NBoc-D-Cha-Pro-Glu-(2-thiazolylu) (170 mg) v dichlormethanu (5 ml) byl postupně přidán dicyklohexylkarbodiimid (123 mg), N-(t-Boc)15 guanidin.HCI (75 mg) a triethylamin (53 pl). Směs byla míchána při 0 °C 1 hod a potom udržována při pokojové teplotě další 1 hod. Směs byla ochlazena na - 20 °C a dicyklohexylurea byla odstraněna filtrací. Filtrát byl odpařen dosucha. Zbytek byl chromatografován na silikagelu ve směsi dichlormethan/methanol = 95/5 (obj. %) jako eluentu. Frakce obsahující N-(t-butyloxykarbonylmethyl)-N-BocD-Cha-Pro-Glu((N-t-Boc)-guanidin)-(2-thiazoiyl) byly spojeny a odpařeny. Výtěžek: 173 mg.
TLC: Rf = 0,50, silikagel, dichlormethan/methanol = 9/1 obj. %.
(p) HOOC-CH7-D-Cha-Pro-Glu(guanidin)-(2-thiazolvl)
N-(t-butyloxykarbonylmethyl)-N-Boc-D-Cha-Pro-Glu((N-t-Boc)guanidin)-(2-thiazoiyl) byl smísen se směsí 90 % kyselina trifluoroctová/voda (10 ml) a směs byla udržována 5 h při pokojové teplotě. Reakční směs byla koncentrována ve vakuu a zbytek byl • · rozpuštěn ve vodě a přímo nanesen na preparativní HPLC DeltaPak RP-Cis s použitím systému gradientní eluce 20%A/80%B až 20%A/45%B/35%C v průběhu 40 min při průtoku 50 ml/min (A: 0,5M fosfátový pufr pH 2,1, B: voda, C: acetonitril/voda = 6/4). Výtěžek:
22 mg HOOC-CH2-D-Cha-Pro-Glu(guanidin)-(2-thiazolyl).
Rt(LC): 35,04 min, A 20%, B 80%, C 0% až A 20%, B 20%, C 60% v průběhu 40 min.
PŘÍKLAD 3 (4aR,8aR)-perhvdrizochinolin-1(R,S)-karbonyl-Pro-Glu(guanidin)-(2thiazolvl) (a) Kyselina 2-Cbz-(4a,8aR)-perhydroizochinolin-1 (R.S)-karboxylová
Kyselina 2-Cbz-(4aR,8aR)-perhydroizochinolin-1 (R,S)karboxylová byla syntetizována podle popisu v EP 0643073, příklad 1.
TLC: Rf = 0,85, ethylacetát/pyridin/kyselina octová/voda 63/20/6/11 na oxidu křemičitém.
(b) 2-Cbz-(4aR,8aR)-perhydroizochinolin-1(R,S)-karbonvl-Pro-Q-tBu)
K chladnému roztoku (0 °C) kyseliny 2-Cbz-(4aR,8aR)20 perhydroizochinolin-1(R,S)-karboxylové (500 mg) v dimethylformamidu (5 ml) byl postupně přidán DCCI (1,3-dicyklohexylkarbodiimid; 342 mg), HOBT (1-hydroxybenztriazolhydrát; 319 mg), H-Pro-OtBu (270 mg) a triethylamin (0,55 ml). Reakční směs byla míchána při 0 °C 1 h a potom udržována při pokojové teplotě přes noc. Reakční směs byla ochlazena na - 20 °C a DCU (1,3-dicyklohexylurea) byla odstraněna filtrací. Filtrán byl koncentrován ve vakuu a zbytek rozpuštěn v ethylacetátu. Roztok byl postupně promyt 5 % vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného, 3 % vodným roztokem kyseliny citrónové, vodou a roztokem soli, sušen nad síranem sodným
·· ·· ·· • · · · · · • · · · · · • ·· · · · · · • · · · · ·· ·· ·· a koncentrován ve vakuu. Zbytek byl čištěn chromatografií na oxidu křemičitém (eluent: heptan/ethylacetát 4/1 obj. %) za získání 2-Cbz(4aR,8aR)-perhydroizochinolin-1 (R,S)-karbonyl-Pro-O-tBu) (634 mg).
TLC: Rf = 0,90, ethylacetát/pyridin/kyselina octová/voda 63/20/6/11 na 5 oxidu křemičitém.
(ď) 2-Cbz-(4aR,8aR)-perhydroizochinolin-1 (R.S)-karbonyl-Pro-QH
2-Cbz-(4aR,8aR)-perhydroizochinolin-1(R,S)-karbonyl-Pro-O-tbutylester (600 mg) byl míchán ve směsi dichlormethanu (1 ml), io kyseliny trifluoroctové (3 ml), anisolu (0,15 ml) 1 h při pokojové teplotě. Reakční směs byla koncentrována ve vakuu za nízké teploty a zbytek byl rozpuštěn ve vodě při pH 9,5. Vodná fáze byla promyta diethyletherem, a vodná vrstva byla okyselena 2M kyselinou chlorovodíkovou. Vodná vrstva byla extrahována ethylacetátem a organická fáze byla promyta roztokem soli, sušena nad síranem sodným a koncentrována ve vakuu za získání 2-Cbz-(4aR,8aR)perhydroizochinolin-1(R,S)-karbonyl-Pro-OH (588 mg).
TLC: Rf = 0,54, ethylacetát/pyridin/kyselina octová/voda 60/3/1/2 na oxidu křemičitém (d) (4aR,8aR)-perhydroizochinolin-1 (R,S)-karbonyl-Pro-Glu-(2thiazolyl)
Postupem popsaným v příkladu 2 byla provedena směsná anhydridová vazba mezi 2-Cbz-(4aR,8aR)-perhydroizochinolin-1(R,S)25 karbonyl-Pro-OH a H-Glu-(2-thiazolyl).TFA, guanidizace, odstranění ochranných skupin a purifikace. Výtěžek: 64,7 mg.
Rt (LC): 28,93 min, 20% A, 80% B až 20% A, 20 % B a 60 % C v průběhu 40 min.
-29.
PŘÍKLAD 4
EtSO2-D-Cha-Pro-Glu(quanidin)-(2-thiazolyl) (a) Boc-D-Cha-Pro-OPAc
Boc-D-Cha-Pro-OPAc byl připraven podobným způsobem jako v příkladu 1 s použitím Boc-D-Cha-OH a H-Pro-OPAc.
TLC: Rf = 0,5, dichlormethan/methanol 95/5 na oxidu křemičitém.
(b) EthylSOz-D-Cha-Pro-OPAc
Boc-D-Cha-Pro-OPAc (3,8 g) byl rozpuštěn v 50 % io TFA/dichlormethan (25 ml) a míchán 30 min při pokojové teplotě. Reakční směs byla odpařena ve vakuu. Surový amin byl rozpuštěn v dichlormethanu (50 ml) a byl přidán ethansulfonylchlorid (0,8 ml) při -78 °C. Pro udržení pH 8 byl přidán triethylamin. Směs byla míchána 3 h při 0 °C a potom bylo přidáno 25 ml vody. Po dalším míchání 30 min při pokojové teplotě byla reakční směs koncentrována ve vakuu. Zbytek byl rozpuštěn v diethyletheru a promyt 1N roztokem kyseliny chlorovodíkové, vodou, 5 % roztokem hydrogenuhličitanu sodného a roztokem soli, sušen nad síranem sodným, zfiltrován a odpařen ve vakuu. Rozetřením surového materiálu s methanolem byl získán ethylSO2-D-Cha-Pro-OPAc (3,0 g).
TLC: Rf = 0,6, dichlormethan/methanol 95/5 na oxidu křemičitém.
(c) EthylSQ?-D-Cha-Pro-QH
K roztoku ethylSO2-D-Cha-Pro-OPAc (10 g) v tetrahydrofuranu (250 ml) byl přidán 1M roztok tetrabutylamoniumfluoridu v tetrahydrofuranu (84 ml). Reakční směs byla míchána 30 min při pokojové teplotě a vlita do vody (1 I). Vodný roztok byl extrahován ethylacetátem. Spojené organické vrstvy byly postupně promyty roztokem 1N kyseliny chlorovodíkové a vodou, sušeny nad síranem • ·
a> · sodným a koncentrovány ve vakuu. Zbytek byl čištěn krystalizací ze směsi ethylacetát/diizopropylether za získání ethylSO2-D-Cha-Pro-OH (6.0 g).
TLC: Rf= 0,2, ethylacetát/pyridin/kyselina octová/voda 163/20/6/11 na oxidu křemičitém.
(d) EthylSO2-D-Cha-Pro-Glu(guanidin)-(2-thiazolyl)
Směsná anhydridová vazba mezi ethylS02-D-Cha-Pro-OH a HGlu-(2-thiazolyl).TFA, guanidace, odstranění ochranných skupin io a čištění bylo prováděno postupem popsaným v příkladu 2. Výtěžek mg.
Rt (LC): 28,33 min, 20 % A, 60% B a 20% C až 20% A a 80% C v průběhu 30 min.
PŘÍKLAD 5
N-Ac-D-Phe-2-Nal-Glu(guanidin)-(2-thiazolv0
N-Ac-D-Phe-2-Nal-OMe byl připraven podobným způsobem jak bylo popsáno v příkladu 2 s použitím N-Ac-D-Phe-OH a H-2-Nal-OMe.
2o (a) N-Ac-D-Phe-2-Nal-OH
Roztok N-Ac-D-Phe-2-Nal-OMe (1,55 g) v 20 ml směsi dioxan/voda = 9/1 (obj.) byl smísen s dostatečným množstvím 6N hydroxidu sodného pro udržení pH na 12 po dobu 1 hod při pokojové teplotě. Po okyselení byla směs vlita do vody a byla extrahována dichlormethanem. Organická vrstva byla promyta vodou a byla sušena na síranu sodném. Filtrát byl odpařen za získání 1,7 g surového N-AcD-Phe-2-Nal-OH.
φ 9 φφ • 9 9 • ΦΦΦ ♦ Φ Φ
·* ®· ·· • · φ Φ · Φ
Φ Φ φ Φ ΦΦ • Φ Φ ΦΦΦ Φ Φ
9 ΦΦΦ • «Φ ΦΦ ΦΦ
TLC: Rf= 0,50, silikagel, ethylacetát/pyridin/kyselina octová/voda 63/20/6/11 obj. %.
(b) N-Ac-D-Phe-2-Nal-Glu(guanidin)-(2-thiazolvl)
Směsná anhydridová vazba mezi N-Ac-D-Phe-2-Nal-0H a HGlu-(2-thiazolyi).TFA, guanidace a odstranění ochranných skupin a purifikace byly provedeny podle postupů popsaných v příkladu 2. Výtěžek: 218 mg.
Rt (LC): 29,97 min, 20% A, 60% B a 20% C až 20% A a 80% C io v průběhu 30 min.
PŘÍKLAD 6
N-Me-D-Cha-Pro-Glu(guanidin)-(2-thiazolvl)
Boc-(N-Me)-D-Cha-Pro-OH byl připraven podobným způsobem is jak bylo popsáno v příkladu 2 s použitím Boc-(N-Me)-D-Cha-OH a HPro-OBzl.
H-(N-Me)-D-Cha-Pro-Glu(guanidin)-(2-thiazolyl)
Směsná anhydridová vazba mezi Boc-(N-Me)-D-Cha-Pro-OH a H-Glu-(2-thiazolyl).TFA, guanidace, odstranění ochranných skupin
2o a purifikace byla provedena postupy popsanými v příkladu 2. Výtěžek: 85 mg.
Rt (LC): 32,27 min, 20% A a 80% B až 20% A, 20%B a 60* C v průběhu 40 min.
PŘÍKLAD 7
N-Ac-D-Phe-Phe-Glu(guanidin)-(2-thiazoivl)
V názvu uvedená sloučenina byla vyrobena analogickým způsobem jak se popisuje v příkladu 5. Výtěžek: 112 mg.
• · fl ·
Rt (LC): 42,97 min, 20% A, 80% B až 20% A, 80%B a 60% C v průběhu 40 min.
PŘÍKLAD 8
N-Me-D-Phe-Pro-Glufguanidin)-(2-thiazolyl)
Boc-(N-Me)-D-Phe-Pro-OMe byl připraven podobným způsobem jak se popisuje v příkladu 2 s použitím Boc-(N-Me)-D-Cha-OH a HPro-OMe.
Boc-(N-Me)-D-Phe-Pro-OH byl připraven podobným způsobem io jak se popisuje v příkladu 5 s použitím Boc-(N-Me)-D-Phe-Pro-OMe.
Rt (LC): 28,0 min, 20% A, 80% B až 20% A, 20%B a 60% C v průběhu 40 min.
H-(N-Me)-D-Phe-Pro-Glu(quanidin)-(2-thiazolyl)
Směsná anhydridová vazba mezi Boc-(N-Me)-D-Phe-Pro-OH a H-Glu-(2-thiazolyl).TFA, guanidace, odstranění ochranných skupin a purifikace byly provedeny postupy uvedenými v příkladu 2. Výtěžek: 79,3 mg.
Rt (LC): 28,28 min, 20% A, 80% B až 20% A, 20%B a 60% C v průběhu
40 min.
PŘÍKLAD 9
BzlSQ2-norLeu(cyklo)-Gly-Glu(quanidin)-(2-thiazolyl) norLeu(cyk!o)-Gly znamená strukturní fragment vzorce
-NH-CH
N-CH2-C(O)-
(a) Boc-norLeu(cyklo)-OH
K míchanému roztoku L-a-amino-s-kaprolaktamu (10 g) ve směsi dioxan/voda (2/1 obj.) (30 ml) byl přidán 1N roztok hydroxidu sodného (7,8 ml) a potom di-t-butylkarbonát (18,8 g). Směs byla míchána 16 h při pokojové teplotě a koncentrována ve vakuu. Zbytek byl rozpuštěn v ethylacetátu a promyt vodou a roztokem soli, sušen nad síranem sodným, zfiltrován a odpařen ve vakuu. Surový materiál byl rozetřen s hexanem, zfiltrován a sušen ve vakuu za získání Bocio norLeu(cyklo)-OH (16 g).
TLC: Rf = 0,85, ethylacetát/heptan 1/1 na oxidu křemičitém.
(b) Boc-norLeu(cyklo)-Gly-OMe
Boc-norLeu(cyklo)-OH (10 g) byl rozpuštěn v dichlormethanu (100 ml). Při -20 °C byl pomalu přidán roztok 1M bis(trimethylsilyl)amidu ve směsi THF/cyklohexan (1/1 obj.) (1 ekv) a směs byla míchána 30 min. Potom byl přidán methylbromacetát (4 ml) a směs byla míchána 2 hod při pokojové teplotě. Potom byl přidán bis(trimethylsilyl)amid ve směsi THF/cyklohexan (1/1 obj.) pro ukončení reakce. Směs byla zředěna dichlormethanem a promyta 0,1N roztokem kyseliny chlorovodíkové, vodou, 5 % vodným roztokem hydrogenuhíičitanu sodného a roztokem soli, sušena nad síranem sodným, zfiltrována a odpařena ve vakuu. Zbytek byl čištěn chromatografii na oxidu křemičitém (eluent: heptan/ethylacetát 6/4 obj. % za získání Boc-norLeu(cyklo)-Gly-OMe (12 g).
TLC: Rf= 0,55, ethylacetát/heptan 6/4 na oxidu křemičitém.
- 34«· » · · · ·· · · 4 • · • · · · (c) BzlSO?-norLeu(cvklo)-Glv-OMe
Boc-norLeu(cyklo)-Gly-OMe (3 g) byl rozpuštěn v 50 % TFA/dichlormethan (30 ml) a míchán 1 h při pokojové teplotě. Surový amin byl rozpuštěn v dichlormethanu (25 mi) a pomalu byl přidán roztok benzylsulfonylchloridu (2,25 g) v dichlormethanu (10 ml) při 0 °C. Triethylamin byl přidáván v průběhu reakce pro udržení pH na 8. Směs byla míchána 1 hod při pokojové teplotě a potom byla zakoncentrována ve vakuu. Zbytek byl rozpuštěn v ethylacetátu a promyt 5 % roztokem hydrogenuhličitanu sodného, vodou io a roztokem soli, sušen nad síranem sodným, filtrován a odpařen ve vakuu. Zbytek byl čištěn chromatografíi na oxidu křemičitém (eluent: dichlormethan/ethylacetát 95/5 obj. %) za získání BzlS02norLeu(cykio)-GlyOMe (3,9 g)
TLC: Rf = 0,40, dichlormethan/ethylacetát 9/1 na oxidu křemičitém.
(d) BzlSO?-norLeu(cyklo)-Glv-OH
Roztok BzlSO2-norLeu(cyklo)-Gly-OMe (3,9 g) v 100 ml směsi dioxan/voda 9/1 byl smísen s dostatečným množstvím 1N hydroxidu sodného pro udržení pH na 13 po dobu 2 hod při pokojové teplotě. Po okyselení byla směs vlita do vody a extrahována dichlormethanem. Organická vrstva byla promyta vodou a sušena na síranu sodném. Filtrát byl odpařen a bylo získáno 3,6 g v názvu uvedené sloučeniny.
TLC: Rf = 0,60, ethylacetát/pyridin/kyselina octová/voda 63/20/6/11 na oxidu křemičitém.
(e) BzlSQ?-norLeu(cvklo)-Gly-Glu(guanidin)-(2-thiazolyl)
Směsná anhydridová vazba mezi BzlSO2-norLeu(cyklo)-Gly-OH a H-Glu-(2-thiazolyl).TFA, guanidace, odstranění ochranných skupin
• ·
a purifikace byly provedeny podle postupů popsaných v příkladu 2. Výtěžek: 34,6 mg.
Rt (LC): 21,42 min, 20% A, 60% B a 20% C až 20% A a 80% C v průběhu 30 min.
PŘÍKLAD 10
Výroba acylguanidinů na Kaiserově oximové pryskyřici
K suspenzi 4,0 g Kaiserovy oximové pryskyřice (NovaBiochem,
1,10 mmol/g) v 80 ml směsi dichlormethan/dimethylformamid (3:2 obj.) ío byl přidán Βοο-β-Ala-OH (3,3 g, 17,6 mmol), N-hydroxybenztriazol (3,0 g, 22,0 mmol), a N,N-diizopropylkarbodiimid (3,4 ml, 22,0 mmol). Suspenze byla třepána 16 hod při pokojové teplotě. Pryskyřice byla odfiltrována a promyta směsí dichlormethan/dimethylformamid (3:2 obj.), dimethylformamidem, 2-propanolem a dichlormethanem (vždy třikrát). Na nezreagované oximové skupiny byla navázána zakončovací skupina působením 80 ml směsi anhydrid kyseliny octové/diizopropylethylamin/N-methylpyrrolidon (3:1: 12 obj.) po dobu 30 min při pokojové teplotě. Reakční směs byla odstraněna filtrací a pryskyřice byla promyta N-methylpyrrolidonem, směsí 220 propanol/dichlormethan (1:3 obj.) a dichlormethanem (vždy třikrát). Získaná derivatizovaná pryskyřice (4,96 g) byla sušena ve vakuu.
Části po 50 mg této pryskyřice byly převedeny do 24 reaktorů na roboru pro provádění organických syntéz. Pryskyřice byla ponechána nabobtnat promytím směsí dichlormethan/dimethylformamid (3:2 obj.) a dichlormethanem (dvakrát).
- 36:-..
i) Odstranění ochranné skupiny Boc
Pryskyřice byla předem smísena s 1 ml 25 % kyseliny trifluoroctové v dichlormethanu a potom ponechána reagovat za občasného probublávání dusíkem s 2 ml 25 % kyseliny trifluoroctové
30 min. Pryskyřice byla promyta dichlormethanem, 2-propanolem, a dichlormethanem (vždy dvakrát).
ii) Navázání prvního vazebného bloku (A)
Pryskyřice byla ponechána nabobtnat promytím směsí dichlormethan/dimethylformamid (3:2 obj.). K pryskyřici byl přidán 1 ml io 0,2 M roztoku stavebního bloku A (Boc-Pro-OH, Boc-(N-methyl)-GlyOH, Boc-Gly-OH nebo Boc-Phe-OH) v dichlormethanu/ (3:2 obj.), 0,5 ml 0,44M TBTU v dimethylformamidu, a 0,5 ml 0,44M diizopropylethylaminu v dichlormethanu. Pryskyřice byla inkubována při pokojové teplotě 60 min s občasným propubláváním dusíkem. Po odstranění rozpouštědla byla pryskyřice promyta směsí dichlormethan/dimethylformamid (3:2 obj.), dimethylformamidu, 2propanolu, a dichlormethanu (vždy dvakrát).
ii) Odstranění ochranné skupiny Boc
Skupina Boc z vazebného bloku A byla odstraněna použitím postupu popsaného v i).
iv) Navázání druhého vazebného bloku (B)
Druhý vazebný blok B byl připojen s použitím stejného postupu, jaký byl popsán v iii) s použitím 0,2M roztoků stavebního bloku B (Boc-D-Cha-OH, nebo Boc-D-Phe-OH) ve směsi dichlormethan/dimethylformamid (3/2 obj.).
v) Odstranění ochranné skupiny Boc
Skupina Boc stavebního bloku B byla odstraněna s použitím postupu popsaného v i) kromě kroku předběžného působení kyselinou trifluoroctovou.
· · * · · ···
- ·· ··· ·· ·· ·· vi) Navázání třetího stavebního bloku (C)
Pryskyřice byla promyta směsí dichlormethan/dimethylformamid (3:2 obj.) a potom dvakrát 2 ml 0,11M roztoku díizopropylethylaminu ve směsi dichlormethan/dimethylformamid (3:2 obj.). K pryskyřici byl přidán 1 mi směsi dichlormethan/dimethylformamid (3:2 obj.), 0,5 ml 0,44M roztoku sulfonylchloridů C (fenylsulfonylchlorid, 4chlorfenylsulfonylchlorid, nebo 7-methoxynaftylsulfonylchlorid) ve směsi dichlormethan/dimethylformamid (3:2 obj.), a 0,5 ml 0,44M roztoku díizopropylethylaminu v dichlormethanu. Pryskyřice reagovala ío 60 min při pokojové teplotě s občasným probubláváním dusíkem. Po odstranění reakční směsi byla pryskyřice promyta směsí dichlormethan/dimethylformamid (3:2 obj.), dimethylformamidem, 2propanolem, a dichlormethanem (vždy dvakrát).
vii) Odštěpení produktu z pryskyřice is Pryskyřice byla dvakrát promyta dimethylformamidem před přídavkem 1,8 ml 0,2M roztoku guanidin.HCI v dimethylformamidu a 0,2 ml díizopropylethylaminu. Pryskyřice byla inkubována při pokojové teplotě 64 hod s občasným probubláváním dusíkem. Pryskyřice byla odfiltrována a filtrát byl shromážděn ve skleněné
2o zkumavce. Pryskyřice byla dvakrát promyta dimethylformamidem. Spojené filtráty byly odpařeny dosucha.
Charakterizace
Všechny sloučeniny byly charakterizovány kapalinovou chromatografii s reverzní fází na koloně Supelcosii LC-18-DB (4,6 mm x 25 cm) za následujících podmínek: Průtok: 1,0 ml/min; Pufry A: voda, B: acetonitril/voda (9:1 obj.), C: 0,5M fosfátový pufr pH=2,1; Gradient 1: 0 -> 30 min 55%A-25%B-20%C -> 15%A-65%B-20%C. UVdetekce při 210 nm. Retenční časy jsou uvedeny v minutách v tabulce I.
- 3S<
Všechny sloučeniny byly dále analyzovány hmotnostní spektrometrií s elektrorozprašovací ionizací. Tabulka I ukazuje hodnoty M+H detekované v pozitivním modu. U všech sloučenin je zjištěná hmotnost v souladu s očekávanou hodnotou.
- 3S~
• · · · I • · I te · · te
Tabulka I: Charakterizace (retenční časy na HPLC s reverzní fází a vrchol M+H při hmotnostní spektrometrii s elektrickým rozprašováním) acylguanidinú vyrobených na Kaiserově oximové pryskyřici.
X: fenyl-SO2- 4-chlorfenyl- SO2- 7-methoxynaftyl- SO2-
X-D-Cha-Pro-β- Ala-guanidin r.t = 16,9 min M+H = 521,4 r.t = 20,1 min M+H = 555,4 r.t = 22,1 min M+H = 601,4
X-D-Phe-Pro-β- Ala-guanidin r.t = 13,4 min M+H = 515,4 r.t = 17,0 min M+H = 549,2 r.t = 19,3 min M+H = 595,4
X-D-Cha-(N- methyl)-Gly^- Ala-guanidin r.t = 15,8 min M+H = 495,4 r.t = 18,9 min M+H = 529,4 r.t = 20,9 min M+H = 575,4
X-D-Phe-(N- methyl)-Gly·^- Ala-guanidin r.t = 11,7 min M+H = 489,2 r.t = 15,5 min M+H = 523,2 r.t = 17,7 min M+H = 569,4
X-D-Cha-Gly-β- Ala-guanidin r.t = 14,0 min M+H = 481,2 r.t = 17,2 min M+H = 515,2 r.t = 19,4 min M+H = 561,4
X-D-Phe-Gly-β- Ala-guanidin r.t = 10,1 min M+H = 475,2 r.t = 14,1 min M+H = 509,2 r.t = 16,4 min M+H = 555,4
X-D-Cha-Phe-β- Ala-guanidin r.t = 21,7 min M+H = 571,4 r.t = 24,2 min M+H = 605,2 r.t = 26,0 min M+H = 651,4
X-D-Phe-Phe-β- Ala-guanidin r.t = 17,6 min M+H = 565,4 r.t = 20,8 min M+H = 599,4 r.t = 22,6 min M+H = 645,4
• fe
40*·
Příklad 11
Způsoby podle předkládaného vynálezu mohou být dále vyrobeny následující sloučeniny:
- HOOC-CH2-D-Cha-(1 -aminocyklohexylkarboxy)-p-Ala-guanidin;
- (HOOC-CH2)2-D-Cha-Pro-p-Ala-guanidin;
- HOOC-CH2-N-Me-D-Cha-Pro^-Ala-guanidin;
- HOOC-CH2-N-allyl-D-Cha-Pro-3-Ala-guanidin;
- HOOC-CH2-N-propargyl-D-Cha-Pro-3-Ala-guanidin;
- HOOC-CH2-N-benzyl-D-Cha-Pro-p-Ala-guanidin;
- HOOC-CH2-N-cyklopropyl-D-Cha-Pro-3-Ala-guanidin;
- HOOC-CH2-N-cyklobutyl-D-Cha-Pro-3-Ala-guanidin;
- HOOC-CH2-N-cyklopentyl-D-Cha-Pro-3-Ala-guanidin;
- HOOC-CH2-N-cyklohexyl-D-Cha-Pro-p-Ala-guanidin;
- 2-propyl-pentanoyl-Asp(OMe)-Pro-p-Ala-guanidin;
- 2-propyl-pentanoyl-Asp-Pro-3-Ala-guanidin;
- ethylSO2-D-Cha-Pro-p-Ala-guanidin;
- ethylSO2-D-Phe-Pro-3-Ala-guanidin;
- [2-(BzlSO2-NH)-pyridinyl-1-CH2-CQ]-p-Ala-guanidin;
- [3-(BzlSO2-NH)-pyridin-2-on-1-CH2-CO]-p-Ala-guanidin;
- BzlSO2-norLeu(cyklo)-Gly-3-Ala-guanidin;
- N-Me-D-Phe-Pro-Glu(guanidin)-COOH;
- N-Me-D-Phe-Pro-Glu(guanidin)-(2-oxazolyl);
- N-Me-D-Cha-Pro-Glu(guanidin)-COOH;
- N-Me-D-Cha-Pro-Glu(guanidin)-(2-thiazolyl);
- N-Me-D-Cha-Pro-Glu(guanidin)-(2-oxazolyl);
- HOOC-CH2-D-Phe-Pro-Glu(guanidin)-COOH;
- HOOC-CH2-D-Phe-Pro-Glu(guanidin)-(2-thiazolyl);
- HOOC-CH2-D-Phe-Pro-Glu(guanidin)-(2-oxazolyl);
- HOOC-CH2-D-Cha-Pro-Glu(guanidin)-COOH;
- HOOC-CH2-D-Cha-Pro-Glu(guanidin)-(2-oxazolyl);
-5f1
- ethylSO2-D-Phe-Pro-Glu(guanidin)-COOH;
- ethylSO2-D-Phe-Pro-Glu(guanidin)-(2-thiazolyl);
- ethylSO2-D-Phe-Pro-Glu(guanidin)-(2-oxazolyl);
- ethylSO2-D-Cha-Pro-Glu(guanidin)-COOH;
- ethylSO2-D-Cha-Pro-Glu(guanidin)-(2-oxazolyl);
- 1-Piq-Pro-Glu(guanidin)-COOH;
-1 -Piq-Pro-Glu(guanidin)-(2-oxazolyl);
- HOOC-CH2-D-Cha-(N-cyklopentyl)-Gly-Glu(guanidin)-(2-thiazolyl);
- N-Me-D-Phe-(N-cyklopentyl)-Gly-Glu(guanidin)-(2-thiazolyl);
- 2-propyl-pentanoyl-Asp(OMe)-Pro-Glu(guanidin)-(2-thiazolyl);
- 2-hydroxy-3-cyklohexyl-propionyl-Pro-Glu(guanidin)-(2-thiazolyl);
- 1-Piq-(N-cyklopentyl)-Gly-Glu(guanidin)-(2-thiazolyl);
- difenylpropionyl-Pro-Glu(guanidin)-(2-thiazolyl);
- sloučeniny, kde zbytek:
15 ycH2)4\
BziSO2-NH-CH^^N-CH2-C(O)o je navázán na -Glu(guanidin)-COOH, -Glu(guanidin)-(220 thiazolyl) nebo -Glu(guanidin)-(2-oxazolyl);
- 9-hydroxy-fluoren-9-karboxyl-Pro-p-Ala-guanidin;
- 9-hydroxy-fluoren-9-karboxyl-(N-cyklopentyl)-Gly-P-Ala-guanidin;
- 9-hydroxy-fluoren-9-karboxyl-azetidin-2-karboxyl-p-Ala-guanidin.
PŘÍKLAD 12 Antitrombinovy test
Trombin (factor lla) je faktor v koagulační kaskádě. Antitrombinový účinek sloučenin podle předkládaného vynálezu byl
určován spektrofotometrickým měřením , rychlostí hydrolýzy chromogenního substrátu s-2238 působením trombinu. Tento test antitrombinového účinku v systému pufru byl použit pro určování hodnoty IC50 testované sloučeniny.
Testovací medium: Tromethamin-NaCI-polyethylenglycol 6000 (TNP) pufr. Referenční sloučenina: 12581 (Kabi) Vehikulum: TNP pufr. Pro zlepšení solubilizace může být použit dimethylsulfoxid, methanol, ethanol, acetonitril nebo terc.-butylalkohol, které nemají škodlivý vliv v koncentracích až do 2,5 % v hotové reakční směsi.
Způsob provedení
Reaqencie*: 1. Tromethamin-NaCI (TN) pufr. Složení pufru: Tromethamin (Tris) 6,057 g (50 mmol), NaCI 5,844 g (100 mmol), voda do 1 I. pH roztoku je nastaveno na 7,4 při 37 °C pomocí HCl (10 mmol). 2. TNP pufr: Polyethylenglykol 6000 se rozpustí v TN pufru pro získání koncentrace 3 g Γ1. 3. Roztok S-2238: Jedna ampule S2238 (25 mg; Kabi Diagnostica, Švédsko) se rozpustí ve 20 ml TN pufru za získání koncentrace 1,25 mg ml·1 (2 mmol Γ1). 4. Roztok trombinu: lidský trombin (16 000 nKat/ampule; Centraal Laboratorium voor Bloedtransfusie, Amsterdam, Holandsko) se rozpustí v TNP pufru za získání zásobního roztoku 835 nKat-ml'1. Bezprostředně před použitím se tento roztok zředí pufrem TNP za získání koncentrace
3,34 nKat-ml'1.
* -Všechny použité látky jsou čistoty pro analýzu
- Pro vodné roztoky se používá ultračistá voda (kvality Milli-Q).
Příprava roztoků testovací a referenční sloučeniny
Testovací a referenční sloučeniny se rozpustí ve vodě Milli-Q za poskytnutí zásobních koncentrací 10'2 mol.l'1. Každá koncentrace se ·· ·
-43.
vehikulem postupně zředí za získání koncentrací 10‘3, 10‘4 a 10‘5 moll'1. Tato ředění včetně zásobního roztoku se používají v testu (finální koncentrace v reakční směsi: 3 Ί0'3; 10'3; 3Ί0'4; 10‘4; 3Ί0'5; 10'5; 3-1 θ'6 a 10'6 mol·!*1).
Postup
Při pokojové teplotě se střídavě pipetuje 0,075 ml a 0,025 ml testované sloučeniny nebo referenční sloučeniny do jamek mikrotitrační destičky a tyto roztoky se zředí 0,115 ml, případně ío 0,0165 ml TNP pufru. Do každé jamky se přidá alikvot 0,030 ml roztoku S-2238 a destička se předehřeje a předinkubuje za třepání v inkubátoru (Amersham) 10 min při 37 °C. Po předinkubaci se nastartuje hydrolýza S-2238 přídavkem 0,030 ml roztoku trombinu do každé jamky. Destička se inkubuje (za třepání 30 s) při 37 °C. Počínaje první minutou inkubace se měří absorbance každého vzorku při 405 nm každé 2 min po dobu 90 min s použitím čtečky mikrotitračních destiček s kinetickým měřením (Twinreader plus, Flow Laboratories).
Všechna data se shromažďují v počítači IBM s použitím programu LOTUS-MEASURE. Pro každou koncentraci sloučeniny
2o (vyjádřenou v mol.l1 reakční směsi) a pro blank se vynese absorbance proti době reakce v minutách.
Vyhodnocení výsledků:
Pro každou konečnou koncentraci se z grafu vypočte maximální absorbance. Hodnota IC50 (finální koncentrace vyjádřená v pmol.l'1, která způsobí 50 % inhibici maximální absorbance blanku) byla vypočtena s použitím transformační analýzy logit podle Hafner a další (Arzneim.-Forsch./Drug Res. 1977; 27(ll): 1871-3).
V následující tabulce jsou uvedeny hodnoty IC5o sloučenin podle vynálezu:

Claims (14)

  1. PATENTOVÉ NÁROKY
    Sloučenina vzorce I
    A-B-X-NZ-CH-Q (i) kde
    A znamená H, popřípadě substituovaný D,L a-hydroxyacetyl, R1, R1-O-C(O)-, R1-C(O)-, R’-SO2-, R2OOC-(CHR2)m-SO2-, R2OOC-(CHR2)m-, H2NC0-(CHR2)m-, nebo N-ochranná skupina, kde R1 je zvolena ze skupiny (1 -12C)alkyl, (2-12C)alkenyl, (212C)alkinyl a (3-8C)cykloalkyl, které mohou být popřípadě substituovány skupinami (3-8C)cykloaikyi, (1-6C)alkoxy, oxo, OH, COOH, CF3 nebo halogen, a ze skupiny (6-14C)aryl, (7-15C)aralkyl a (8-16)aralkenyl, kde arylové skupiny mohou být popřípadě substituovány skupinami (1-6C)alkyl, (3-8C)cykloalkyl, (1-6C)alkoxy, OH, COOH, CF3 nebo halogen; každá skupina R2 znamená nezávisle atom vodíku nebo má stejný význam jako R1; m znamená 1, 2 nebo 3;
    B znamená vazbu, aminokyselinu vzorce -NH-CH[(CH2)pC(O)OH]-C(O)- nebo její esterový derivát a p jeO, 1, 2 nebo 3, -N((1-12C)alkyl)-CH2-CO-, -N((212C)alkenyl)-CH2-CO-, -N((2-12C)alkinyi)-CH2-CO-, -N(benzyl)CH2-CO-, D-1-Tiq, D-3-Tiq, D-Atc, Aic, D-1-Piq, D-3-Piq nebo L- nebo D-aminokyselinu s hydrofobním bázickým nebo neutrálním postranním řetězcem, která může být popřípadě N10 .- 4$.-· (1 -6C)alkylsubstituována; nebo A a B znamenají spolu zbytek R3R4N-CHR5-C(O)-, kde R3 a R4 jsou nezávisle R1, R1-0-C(0)-, R1-C(O)-, R1-SO2-, R200C-(CHR2)m-S02-, R2OOC-(CHR2)m-, H2NC0-(CHR2)m-, nebo N-ochrannou skupinu, nebo jedna ze skupin R3 a R4 je spojena se skupinou R5 za vytvoření 5- nebo 6-členného kruhu spolu s N-C, na kterou jsou navázány, přičemž uvedený kruh může být fúzován s alifatickým nebo aromatickým 6-členným kruhem; a R5 znamená hydrofobní, bázický nebo neutrální postranní řetězec;
    X znamená L-aminokyselinu s hydrofobním postranním řetězcem, kterým je (1 -12C)alkyl, popřípadě substituovaný jednou nebo více (3-8C)cykloalkylovými skupinami nebo (6-14C)arylovými skupinami, přičemž tento hydrofobní postranní řetězec může být popřípadě substituován substituenty jako je halogen, trifiuormethyl, nižší alkyl, nižší alkoxy, fenyloxy, benzaloxy apod., nebo je X serin, threonin, cyklická aminokyselina popřípadě obsahující další heteroatom zvolený ze skupiny N, O nebo S, a popřípadě substituovaná skupinami (1-6C)alkyl, (1-6C)alkoxy, benzyloxy nebo oxo, nebo X znamená -NR2-CH2-C(O)- nebo fragment
    Z \
    -NH-CH
    N-CH,-C(0)-\.N-CH2-C(0}nebo kde n znamená 2, 3, nebo 4, a W znamená CH nebo N;
    Q znamená H nebo -C(O)Y, kde Y znamená H, -CHF2, -CF3, -CO-NH-(1-6C)alkylen-C6H5, -COOR6 a R6 je H nebo (16C)alkyl, -C0NR7R8 a R7 a R8 jsou nezávisle H nebo (16C)alkyl nebo R7 a R8 spolu znamenají (3-6C)alkylen, nebo Y znamená heterocykl zvolený ze skupiny 2-thiazol, 2-thiazolin, • * • ·
  2. 2-benzthiazol, 2-oxazol, 2-oxazolin a 2-benzoxazol, kde uvedené heterocykly mohou být popřípadě substituovány skupinami (1 -6C)alkyl, (1-6C)alkoxy nebo oxo;
    Z znamená H nebo (1 -6C)alkyl;
    5 r znamená 0 nebo 1, jestliže Q znamená -C(O)Y nebo r znamená 0, 1, 2, 3 nebo 4, jestliže Q znamená H; nebo její prekurzor nebo farmaceuticky přijatelná sůl.
    2. Sloučenina podle nároku 1, kde X je L-aminokyselina io s hydrofobním postranním řetězcem, serin, threonin nebo -NR2CH2-C(O)-; a Z znamená atom vodíku nebo methyl.
  3. 3. Sloučenina podle nároku 1, kde
    A je jak definováno výše; B je vazba, aminokyselina vzorce
    15 -NH-CH[(CH2)pC(O)OH]-C(O)- nebo její esterový derivát a p je
    0, 1, 2 nebo 3, -N((1-6C)alkyl)-CH2-CO-, -N((2-6C)alkenyl)CH2-CO-, -N(benzyl)-CH2-CO-, D-1-Tiq, D-3-Tiq, D-Atc, Aic, D1-Piq, D-3-Piq nebo D-aminokyselina s hydrofobním postranním řetězcem, kde tato aminokyselina může být
    20 popřípadě N-(1-6C)alkylsubstituována; nebo
    A a B znamenají spolu zbytek R3R4N-CHR5-C(O)-; a
    X je cyklická aminokyselina obsahující popřípadě další heteroatom zvolený ze skupiny N, O nebo S, a popřípadě substituovaná skupinami (1-6C)alkyl, (1-6C)alkoxy, benzyloxy
    25 nebo oxo, nebo X znamená -NR2-CH2-C(O)- nebo fragment
  4. 4.
    ··
    4.
  5. 5.
    5.
    48·-NH-CH
    N-CHrC(O)nebo
    -NH
    O
    N-CH2-C(O)a Z je H nebo methyl.
    Sloučenina podle nároku 3, kde A znamená H, 2-hydroxy-3-cyklohexylpropionyl-, 9hydroxyfIuoren-9-karboxyl, R1, R1-SO2-, R2OOC-(CHR2)m-SO2-, R200C-(CHR2)m-, H2NC0-(CHR2)m-, nebo N-ochranná skupina, kde R1 je zvolena ze skupin (1 -12C)alkyl, (2-12C)alkenyl, (614C)aryl, (7-15C)araikyl a (8-16)aralkenyl; každá skupina R2je nezávisle atom vodíku nebo má stejný význam jako R1;
    B je vazba, D-1-Tiq, D-3-Tiq, D-Atc, Aic, D-1-Piq, D-3-Piq nebo D-aminokyselina s hydrofobním postranním řetězcem, kde uvedená aminokyselina může být popřípadě N-(1-
  6. 6C)alkyl substituovaná; nebo
    A a B spolu tvoří zbytek R3R4N-CHRS-C(O)-;
    Y je -C0-NH-(1-6C)aikylen-C6H5, -COOR5, -CONR7R3, nebo je
    Y heterocykl zvolený ze skupiny 2-thiazol, 2-thiazolin, 2benzthiazol, 2-oxazol, 2-oxazoiin a 2-benzoxazol.
    Sloučenina podle nároku 4, kde A je R1-S02-, R2OOC(CHR2)m-;
    B je vazba, D-1-Tiq, D-3-Tiq, D-Atc, Aic, D-1-Piq, D-3-Piq nebo D-aminokyselina s hydrofobním postranním řetězcem;
    nebo A a B spolu tvoří zbytek R3R4N-CHRS-C(O)-, kde alespoň jedna ze skupin R3 a R4 je R2OOC-(CHR2)m- nebo R1-SO2- a • 9 další znamená nezávisle (1 -12C)alkyl, (2-12C)alkenyl, (212C)alkinyl, (3-8C)cykloalkyl, (7-15C)aralkyl, R1-SO2- nebo
    R200C-(CHR2)m-, a R5 je hydrofobní postranní řetězec;
    Y je -CO-NH-(1-6C)alkylen-C6H5, -COOR6 a R6 je H nebo (15 3C)alkyl, -CONR7R8, R7 a R8 znamenají nezávisle H nebo (1-3C)alkyl nebo R7 a R8 spolu tvoří (3-5C)alkylen, nebo Y je heterocykl zvolený ze skupiny 2-thiazol, 2-benzthiazol, 2oxazol nebo 2-benzoxazol.
    io 6. Sloučenina podle nároku 5, kde A je R2OOC-(CHR2)m-,
    B je D-aminokyselina s hydrofobním postranním řetězcem; nebo A a B spolu tvoří zbytek R3R4N-CHR5-C(O)-, kde alespoň jedna ze skupin R3 a R4 je R2OOC-(CHR2)m- a další znamená
    15 nezávisle (1 -12C)alkyl, (3-8C)cykloalkyl, R1-SO2- nebo R2OOC(CHR2)m-; a
    X je kyselina 2-azetidinkarboxylová, prolin, kyselina pipekolová, kyselina 4-thiazolidinkarboxylová, 3,4dehydroprolin, kyselina 2-oktahydroindolkarboxylová.
  7. 7. Sloučenina podle nároku 6, kde A je HOOC-CH2-;
    » B je D-Phe, D-Cha, D-Coa, D-Dpa, p-CI-D-Phe, p-OMethyl-DPhe, p-OEthyl-D-Phe, D-NIe, m-CI-D-Phe, 3,4-di-OMe-D-Phe,
    25 D-Chg; nebo
    A a B spolu znamenají zbytek R3R4N-CHR5-C(O)-, kde alespoň jedna ze skupin R3 a R4 znamená HOOC-CH2- a další je nezávisle methyl, (1-4C)alkyl-S02- nebo HOOC-CH2- a R5 je (3-8C)cykloalkyl, (3-8C)cykloalkyl(1-4C)alkyl, fenyl, benzyl, popřípadě substituovanýá atomem chloru nebo skupinou (14C)alkoxy.
    ··
  8. 8. Sloučenina podle nároku 5, kde A je R1-SO2-,
    5 B je vazba, D-1-Tiq, D-3-Tiq, D-Atc, Aic, D-1-Piq, D-3-Piq nebo
    D-aminokyselina s hydrofobním postranním řetězcem; nebo
    A a B znamenají spolu zbytek R3R4N-CHRS-C(O)-, kde alespoň jedna ze skupin R3 a R4 je R1-S02- a další je nezávisle (112C)alkyl nebo R1-SO2-;
    ίο X je kyselina 2-azetidinkarboxylová, prolin, kyselina pipekolová, kyselina 4-thiazolidinkarboxylová, 3,4dehydroprolin, kyselina 2-oktahydroindolkarboxylová, nebo fragment r \ •NH-CH^^N-CH2-C(O)θ nebo
    -NH-< xN-CH2-C(0)0
  9. 9. Sloučenina podle nároku 8, kde
    20 A je ethyl-SO2- nebo benzyl-S02-;
    B je vazba, D-Phe, D-Cha, D-Coa, D-Dpa, p-CI-D-Phe, pOMethyl-D-Phe, p-OEthyl-D-Phe, D-NIe, m-CI-D-Phe, 3,4-diOMe-D-Phe, D-Chg; nebo
    A a B znamenají spolu zbytek R3R4N-CHR5-C(O)-, kde alespoň 25 jedna ze skupin R3 a R4 je ethyl-SO2- nebo benzyl-SO2- a další je nezávisle (1 -12C)alkyl nebo R1-SO2- a Rs je (38C)cykloalkyl, (3-8C)cykloalkyl(1-4C)alkyl, fenyl, benzyl, •-•51** difenylmethinyl, kde tyto skupiny jsou popřípadě substituovány atomem chloru nebo skupinou (1-4C)alkoxy.
  10. 10. Sloučenina podle některého z nároků 5 až 9, kde Q znamená
    5 atom vodíku a r je 0, 1 nebo 2.
  11. 11. Farmaceutický prostředek, vyznačující se tím, ž e obsahuje sloučeninu podle některého z nároků 1 až 10 a farmaceuticky přijatelné pomocné látky.
  12. 12. Sloučenina podle některého z nároků 1 až 10 pro použití v lékařství.
  13. 13. Použití sloučeniny podle některého z nároků 1 až 10 pro
  14. 15 výrobu farmaceutického prostředku pro léčení nebo prevenci onemocnění spojených s trombinem.
CZ19982565A 1996-02-13 1997-02-11 Inhibitory serinové proteázy a farmaceutický prostředek CZ291690B6 (cs)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP96200334 1996-02-13
EP96200421 1996-02-19
EP96202337 1996-08-23

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CZ256598A3 true CZ256598A3 (cs) 1999-01-13
CZ291690B6 CZ291690B6 (cs) 2003-05-14

Family

ID=27237508

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CZ19982565A CZ291690B6 (cs) 1996-02-13 1997-02-11 Inhibitory serinové proteázy a farmaceutický prostředek

Country Status (17)

Country Link
US (1) US6034067A (cs)
EP (1) EP1007544A1 (cs)
JP (1) JP2000505437A (cs)
KR (1) KR19990082424A (cs)
CN (1) CN1212706A (cs)
AU (1) AU719216B2 (cs)
BR (1) BR9707501A (cs)
CA (1) CA2246256A1 (cs)
CZ (1) CZ291690B6 (cs)
HU (1) HUP9901187A3 (cs)
NO (1) NO983688L (cs)
NZ (1) NZ331327A (cs)
PL (1) PL328307A1 (cs)
RU (1) RU2191193C2 (cs)
TR (1) TR199801569T2 (cs)
TW (1) TW487708B (cs)
WO (1) WO1997030073A1 (cs)

Families Citing this family (28)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
SE9900043D0 (sv) * 1999-01-11 1999-01-11 Astra Ab New use
TW523513B (en) * 1996-03-01 2003-03-11 Akzo Nobel Nv Serine protease inhibitors
US6262047B1 (en) 1996-10-11 2001-07-17 Cor Therapeutics, Inc. Selective factor Xa inhibitors
US6194435B1 (en) 1996-10-11 2001-02-27 Cor Therapeutics, Inc. Lactams as selective factor Xa inhibitors
US6063794A (en) 1996-10-11 2000-05-16 Cor Therapeutics Inc. Selective factor Xa inhibitors
US6369080B2 (en) 1996-10-11 2002-04-09 Cor Therapeutics, Inc. Selective factor Xa inhibitors
EP0937073A2 (en) * 1996-10-11 1999-08-25 Cor Therapeutics, Inc. Selective factor xa inhibitors
CA2285335A1 (en) 1997-04-14 1998-10-22 Cor Therapeutics, Inc. Selective factor xa inhibitors
WO1998046626A1 (en) 1997-04-14 1998-10-22 Cor Therapeutics, Inc. SELECTIVE FACTOR Xa INHIBITORS
US6369063B1 (en) 1997-04-14 2002-04-09 Cor Therapeutics, Inc. Selective factor Xa inhibitors
CA2285705A1 (en) * 1997-04-14 1998-10-22 Cor Therapeutics, Inc. Selective factor xa inhibitors
WO1998051684A1 (en) 1997-05-15 1998-11-19 Eli Lilly And Company Antithrombotic compound
US6218382B1 (en) 1997-08-11 2001-04-17 Cor Therapeutics, Inc Selective factor Xa inhibitors
US6333321B1 (en) 1997-08-11 2001-12-25 Cor Therapeutics, Inc. Selective factor Xa inhibitors
US6228854B1 (en) 1997-08-11 2001-05-08 Cor Therapeutics, Inc. Selective factor Xa inhibitors
US6344450B1 (en) 1999-02-09 2002-02-05 Bristol-Myers Squibb Company Lactam compounds and their use as inhibitors of serine proteases and method
JP2002536411A (ja) 1999-02-09 2002-10-29 ブリストル−マイヤーズ スクイブ カンパニー Ｘａ因子のラクタム系阻害剤および方法
KR20020027639A (ko) 1999-09-13 2002-04-13 3-디멘져널 파마슈티칼즈 인코오포레이티드 아자시클로알카논 세린 프로테아제 억제제
US6511973B2 (en) 2000-08-02 2003-01-28 Bristol-Myers Squibb Co. Lactam inhibitors of FXa and method
AU2001288819A1 (en) 2000-09-11 2002-03-26 Genentech, Inc. Amidine inhibitors of serine proteases
WO2002060894A2 (en) 2001-01-30 2002-08-08 Bristol-Myers Squibb Company Sulfonamide lactam inhibitors of factor xa
WO2004050637A2 (en) 2002-12-03 2004-06-17 Axys Pharmaceuticals, Inc. 2-(2-hydroxybiphenyl-3-yl)-1h-benzoimidazole-5-carboxamidine derivatives as factor viia inhibitors
EP1626966A1 (en) 2003-05-20 2006-02-22 Genentech, Inc. Benzofuran inhibitors of factor viia
EP1628954A2 (en) 2003-05-20 2006-03-01 Genentech, Inc. Acylsulfamide inhibitors of factor viia
US7405210B2 (en) * 2003-05-21 2008-07-29 Osi Pharmaceuticals, Inc. Pyrrolopyridine-2-carboxylic acid amide inhibitors of glycogen phosphorylase
ES2353309T3 (es) 2004-03-08 2011-03-01 Prosidion Ltd. Hidrazidas del ácido pirrolopiridin-2-carboxílico como inhibidores de glucógeno fosforilasa.
WO2006059164A2 (en) 2004-12-02 2006-06-08 Prosidion Limited Pyrrolopyridine-2-carboxylic acid amides
US11351149B2 (en) 2020-09-03 2022-06-07 Pfizer Inc. Nitrile-containing antiviral compounds

Family Cites Families (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
ZW11290A1 (en) * 1989-07-14 1990-10-31 Smithkline Beecham Corp Hemoregulatory peptides
EP0699074B1 (en) * 1993-04-30 2002-11-13 Merck & Co. Inc. Thrombin inhibitors
SE9301916D0 (sv) * 1993-06-03 1993-06-03 Ab Astra New peptides derivatives
ZA951618B (en) * 1994-03-04 1996-08-27 Lilly Co Eli Antithrombotic agents
ZA951617B (en) * 1994-03-04 1997-02-27 Lilly Co Eli Antithrombotic agents.
US5561146A (en) * 1994-06-10 1996-10-01 Bristol-Myers Squibb Company Modified guanidino and amidino thrombin inhibitors
WO1995035311A1 (en) * 1994-06-17 1995-12-28 Corvas International, Inc. 3-amino-2-oxo-1-piperidineacetic derivatives as enzyme inhibitors
JPH0820597A (ja) * 1994-07-07 1996-01-23 Meiji Seika Kaisha Ltd トロンビン阻害作用を有する複素環カルボニル化合物
CZ189997A3 (cs) * 1994-12-22 1998-09-16 Biochem Pharma Inc. Bicyklické sloučeniny, způsob jejich výroby a farmaceutické prostředky na jejich bázi
TW442452B (en) * 1996-03-01 2001-06-23 Akzo Nobel Nv Serine protease inhibitors having an alkynylamino side chain

Also Published As

Publication number Publication date
RU2191193C2 (ru) 2002-10-20
CN1212706A (zh) 1999-03-31
KR19990082424A (ko) 1999-11-25
TR199801569T2 (xx) 1998-10-21
HUP9901187A2 (hu) 1999-08-30
WO1997030073A1 (en) 1997-08-21
BR9707501A (pt) 1999-07-27
CA2246256A1 (en) 1997-08-21
PL328307A1 (en) 1999-01-18
NO983688L (no) 1998-10-12
NO983688D0 (no) 1998-08-12
CZ291690B6 (cs) 2003-05-14
AU719216B2 (en) 2000-05-04
JP2000505437A (ja) 2000-05-09
NZ331327A (en) 2000-01-28
US6034067A (en) 2000-03-07
TW487708B (en) 2002-05-21
EP1007544A1 (en) 2000-06-14
AU1602597A (en) 1997-09-02
HUP9901187A3 (en) 1999-11-29

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CZ256598A3 (cs) Inhibitory serinové proteázy a farmaceutický prostředek
EP0820287B1 (en) Thrombin inhibitors
RU2178419C2 (ru) Ингибиторы протеазы серина
WO2000005245A2 (en) Inhibitors of urokinase and blood vessel formation
US20010007764A1 (en) Thrombin inhibitors
AU715765B2 (en) Serine protease inhibitors
AU709088B2 (en) Thrombin inhibitors
EP0956293B1 (en) Thrombin inhibitors
RU2172321C2 (ru) Ингибиторы сериновых протеаз
MXPA98007091A (en) Inhibitors of protease being
MXPA98007090A (en) Inhibitors of serine prote
CZ2001276A3 (cs) Inhibitory urokinázy a farmaceutický prostředek, který je obsahuje

Legal Events

Date Code Title Description
PD00 Pending as of 2000-06-30 in czech republic
MM4A Patent lapsed due to non-payment of fee

Effective date: 19970211