CZ246697A3 - Proline derivatives, process of their preparation and pharmaceutical composition containing thereof - Google Patents

Description

Oblast techniky

acetyl)propyl]pyrrolidin-2-karboxamidových derivátů, kte^é elastase HLE), která je rovněž známá jako lidská neutrofi|ní elastáza (human neutrophil elastase HNE) , což tyto s 1 ouceniny,,.; činí způsobilými použití všude tam, kde je takový typ inhibice é, žádoucí napři klad_e.j.ako_Moinidl a .při^farmakologickém ~ 'r <.-r,,, úl.. .. . 'wimm***^*******··^·*·**·^* výzkumu, při diagnostických a přidružených studiích a při léčení savců, při kterých se uplatňuje výše zmíněná lidská leukocyt-elastáza. Lidská leukocyt-elastáza například aktivně působí v rámci patogeneze akutního respiračního úzkostného systému, (acute respirátory distřesssyndrome ARDS), revmatoidní artritidy, aterosklerózy, rozedmy plic a dalších zánětových poruch, včetně zánětových onemocnění dýchacích cest charakterizovaných zvýšenou a abnormální sekrecí dýchacích cest, jakými jsou chronická bronchitida a cystická fibróza. Uvedená lidská leukocyt-elastáza se rovněž uplatňuje při některých vaskulárních onemocněních a příbuzných stavech (a jejich terapii), při kterých je implikována neutrofilní participace, například při hemorrhagii sdružené s akutní nelymfocytní leukémií, jakož i při reperfuzním zranění, souvisejícím například s myokardinální ischémií a při souvisejících stavech sdružených s koronárním arteriálním onemocněním, jakým je angína srdeční a infarkt, cerebrovaskulární ischémií, jakou je přechodný ischemický záchvat, periferním okluzivním vaskulárním onemocněním, jakým je intermitující kladikace a kritická ischemie okončetin, žílovou insuficiencí, jakou je venální hypertenze, křečové žíly a venální ulcerace, jakož i stavy zhoršené reperfuze sdruženými s rekonstrukční vaskulární chirurgií, trombolýzou 'J a cévní plastikou. Vynález také zahrnuje způsob léčení jednoho nebo více těchto onemocnění a použití jedné nebo více forem nových derivátů-při přípravě léčiva při použití v jednom nebo více uvedených stavech. Vynález také zahrnuje farmaceutické prostředky obsahující jednu nebo více forem nových derivátů jako aktivní složku, postupu přípravy těchto forem nových derivátů, nových meziproduktů užitečných v uvedených postupech a způsobu přípravy uvedených meziproduktů,

Dosavadní stav techniky

Vzhledem ke’značné“ roli“ lndské-leukocyt-estalázy^w byl v minulých létch věnováno velké úsilí vývoji inhibitorů lidské leukocyt-elastázy. V US patentu 4 910 910 je popsána skupina strukturně příbuzných peptidoyltrifluormethanových derivátů, které jsou inhibitory lidské leukocyt-elastázy. Zjistili jsme, že konkrétní formy nových 1-substituovaných N-[2-methyll-(trifluoracetyl)-propyl]pyrrolidin-2-karboxamidových derivátů vzorce I uvedených dále vykazují neočekávaně silnou inhibiční účinnost vůči lidské leukocyt-elastáze.

Podstata vynálezu

Podle jednoho aspektu vynálezu, vynález poskytuje sloučeninu (S)-l-[(S)-2-(methoxykarbonylamino)-3-methylbutyrylj-N-[2-methyl-l-(trifluoracetyl)propyl]pyrrolidin-2-karboxamid nebo jeho solvatovanou formu, obě ve formě diasteréomerní směsi (S)-1-[(S)-2-(methoxykarbonylamino)-3-methylbutyryl]-N[(S)-2-methyl-l-(trifluoracetyl)propyl]pyrrolidin-2-karboxamidu

I (nebo jeho solvátu) a (S)-1-[(S)-2-(methoxykarbonylamino)-3methylbutyryl]-N-[(R)-2-methyl-l-(trifluoracetyl)propyl]pyrrolidin-2-karboxamidu (nebo jeho solvátu) ve formě v podstatě čistého diastereoisomerního (S)-1-[(S)-2-(methoxykarbonylamino)-3-methylbutyryl]-N-[(S) - 2-methyl-l-(trifluoracetyl)propyl]pyrrolidin-2-karboxamidu nebo jeho solvátu.

Je třeba si uvědomit, že sloučenina vzorce I má tři chirální centra (identifikovaná * a tt ve vzorci I) a že proto muže existovat v osmi různých stereomerních formách nebo jako diastereomerní směs dvou nebo více těchto forem. Například sloučenina (S)-1-[(S) -2-(methoxykarbonylamino)-3-methoxybutyryl í 2^metKyÍTl“(ťr i’f luoracetylj propyl' ] pyřřolidin - 2 -karbox -** amid je sloučeninou vzorce I, ve které mají dvě chirální centra identifikované * S konfiguraci a třetí chirální centrum identifikované # má RS konfiguraci. Sloučenina je proto diastereomerní směs zahrnující diastereomer s chirálními centry označenými * a #, všechny mající

S konfiguraci, tj. (Ξ)-1-[(S)-2-(methoxykarbonylamino)-3methylbutyryl]-N-[(S)-2-methyl-l-(trifluoracetyl)propyl]pyrrolidin-2-karboxamid (dále nazývaný jako SSD diastereoisomer vzorce I a který může být také reprezentován jak je uvedeno ve vzorci Ia

ve kterém tlustá vazba označuje vazbu vycházející z roviny papíru) a diastereomer s chirálním centrem označeným * mající Ξ konfiguraci a označeným # mající R konfiguraci, tj. (S)-1[ (S)-2- (methoxykarbonylamino) -3-methylbutyryl]-N-[(R)-2methyl-l-(trifluoracetyl)propyl] pyrrolidin-2-karboxamid (dále označovaný jako SSR diastereoisomer vzorce I) nebo jeho solváty. Tyto diastereomerní směsi zahrnují například směs obsahující přibližně ekvimolární množství SSS a SSR diastereoisomerů, tj . poměr SSS-.SSR je okolo 1:1. Například mohou být získány diastereoisomerní směsi obsahující SSS a SSR diastereoisomery v poměrech 53:47 a 47:53 (SSS:SSR). Zvláštní formy sloučeniny vzorce I, které jsou výhodné jsou diastereoisomerní směsi, které jsou obohaceny SSS diastereoisomerem, tj . poměr SSS:SSR je větší než 1:1. Zvlášť, výhodnou formou sloučeniny je v podstatě čistý SSS diastereoisomer, tj. diastereoisomer obsahující méně než 5 % (výhodněji méně než 3 % a ještě výhodněji méně než 2 %) jiných diastereoisomerů.

Je třeba si uvědomit, že SSS diastereoisomer vzorce.I může také tvořit diastereoisomerní směs s jednou nebo více jinými formami vzorce I, například (S)-1-[2-methoxykarbonylamino-3 -methylbutyryi]-N-[(S)-2-methyl-l-(trifluoracetyl)propyl]pyrrolidin-2-karboxamid -(diastereoisomerní směs SSS a RSS forem vzorce I) nebo 1-[(S)-2-methoxykarbonylamíno-3methylbutyryi]-N-(S)-2-methyl-l-(trifluoracetyl)propyl]pyrrolidin-2-karboxamid (diastereoisomerní směs SSS a SRS forem vzorce I) mohou být získány. Tyto zvláštní diastereoisomerní směsi a jiné diastereoisomerní směsi obsahující okolo 50 % nebo více SSS diastereoisomerů společně s jedním nebo více jiných možných diastereoisomerů s různými konfiguracemi na chirálních centrech označených * a # ve vzorci I jsou dalším aspektem vynálezu.

Diastereoisomerní směs diastereoisomerů SSS a SSR může existovat v amorfní, nekrystalické formě nebo v krystalické formě, v závislosti na poměru přítomných diastereoisomerů SSS:SSR. Výhodná diastereoisomerní směs je směs, která může být izolována v krystalické formě, což je zvlášť, výhodné při přípravě sloučenin nebo jejích formulací s ohledem na požadovanou čistotu a jednotnost. Je třeba si uvědomit, že je mimořádně obtížné získat sloučeninu, která je jedním diastereoisomerem, zcela prostou od ostatních možných diastereoisomerních forem, zvlášč sloučeninu, která má tři chiráiní centra. Předkládaný vynález proto zahrnuje krystalickou formu SSS diastereoisomeru vzorce I nebo jejího solvátu, která obsahuje další možné diastereoisomery v různých konfiguracích na chirálních centrech, označených * a # ve vzorci I. Bylo zjištěno, že múze být získána krystalická diastereoisomerní směs diastereoisomeru SSS a SSR nebo jejich hydrátů, která jev podstatě diastereoisomerní směs diastereoisomeru SSS a SSR v poměru {SSS:SSR} 65:35 nebo větším, tj. obsahuje 35 % nebo méně diastereoisomeru SSR. Předkládaný vynález proto zahrnuje krystalickou formu sloučeniny “ vzorce I“ nebo* j ejlho* solvátu* S obsahem* alespoň 65 % diastereoisomeru SSS. Výhodně má krystalická diastereoisomerní směs například poměr SSS:SSR 80:20 nebo vyšší, například 95:5 nebo vyšší, zvlášč 98,5:1,5 nebo vyšší. Zvlášč výhodná forma sloučeniny podle předkládaného vynálezu je krystalický diastereoisomer SSS, který jev podstatě čistý, tj. obsahuje méně než 5 % jiných diastereoisomeru, například méně než 5 % SSR diastereoisomeru, výhodně méně než 3 % diastereoisomeru SSR a výhodněji méně než 2 % diastereoisomeru SSR.

Amorfní nebo krystalická diastereoisomerní směs SSS a SSR forem nebo v podstatě čistého diastereoisomeru SSS existuje ve formě, která je v podstatě prostá rozpouštědla (zde- uváděná jako forma ketonu a jak je ilustrována ve vzorci Ia pro čistý diastereoisomer} nebo jako solvatovaná, například hydratovaná forma nebo jako směs ketonové a soivatované {hydratované) formy. Hydratovaná forma může existovat například jako gem-diol trifIuorketonové funčnosti, tj . jako sloučenina vzorce Ib (vysvětleno dále) pro v podstatě čistý diastereoisomer SSS nebo jako sloučenina Ic (vysvětleno dále) nebo jako forma, která zavádí molekulu vody jako část krystalové mřížky nebo směsi takových forem. Sloučeniny vzorce Ib nebo Ic mohou být například dále hydratované.

Je třeba si uvědomit, že stupeň hydratace diastereomerní směsi nebo v podstatě čistého diastereoisomeru SSS může být vyjádřen jako poměr hydrátové formy ke ketonové formě. Například může být izolována amorfní, nekrystalická diastereomerní směs forem SSS a SSR ve které se mění poměr hydratované formy ke ketonové formě například od asi 30:70 (tj. obohacená o ketoformu) do asi 95:5 nebo vyšší ( t j . v podstatě v hydratované formě)., včetně takových poměrů, jako jsou asi 50:50 a 60:40. Mohou být získány krystalové formy, které mají poměr SSS:SSR asi 95:5 společně s poměrem hydrátu:ketonu asi 80:20 a které mají poměr SSS:SSR asi 65:35 nebo větší (jako je 98,5:1,5) a jsou v podstatě v hydratované formě. Mohou být také získány krystalické hydráty v podstatě čistého diastereoisomeru SSS obsahující přibližně 4,1 % (hmot./hmot.) a 7,8 % (hmot./hmot.) vody. Takové zvláštní formy jsou dalšími aspekty vynálezu. Je třeba si uvědomit, že předkládaný vynález také zahrnuje jakýkoliv ketal nebo hemiketal (nebo jejich směs) diastereoisomerní směsi nebo formy diastereoisomeru SSS nebo jeho solvátu, který je převeden na gem-diol in vivo, například hydrolýzou, enzymovým štěpením (a kde zbytek je farmaceuticky přijatelný). Předkládaný vynález také zahrnuje jakýkoliv tautomer nebo prekurzor diastereoisomeru SSS nebo jeho solvátu.

Je třeba si uvědomit, že sloučenina vzorce Ib může být vztažena k formě gem-diolu sloučeniny vzorce Ia nebo ke sloučenině o chemickém názvu (S)-1-[(S)-2-(methoxykarbonylamino)-3-methylbutyryl)-N-[(S)-2-methyl-1-(2,2,2,-trifluor1,1-dihydroxyethyl)propylIpyrrolidin-2-karboxamid. Je. třeba si uvědomit, že alternativní jméno pro sloučeninu vzorce Ia je methyl N-[(1S)-1-((2S)-2-[N-((1S)-2-methyl-(2,2,2-ťrifluoracetyl}propyl)karbamoyl]pyrrolidin-l-ylkarbonyl)-2-methylpropyl]karbamat a alternativní název pro sloučeninu Ib je methyl N- ( ( (S) -1- ( (2S) - 2- [N- ( (S) - 3,3,3 - trif luor-2., 2 -dihydroxy-1- iso'~*** ................ l·'>>'*!* .RU—>1111 II I ·Ι·^^Ι.Ι liliiΙΙΙ,ΒΙ^ΙΙΙΜ.^ριιι,Μι^ι^ι 11 ι.φί» II WMl· '(.lUHUIjUd |., H propylpropyl)karbamoylpyrrolidin-1-yl-karbonyl)-2-methylpropyl]karbamat.

Teplota tání krystalického diastereoisomeru SSS obsahující diastereoisomer SSR Obecně závisí na přítomném množství, diastereoisomeru SSR a na množství solvatace (hydratace) . Toto bylo zjištěno obecnými postupy známými v oboru, například diferenční skanovací kalorimetrií (DSC).

Výhodně je krystalický diastereoisomer v hydratované formě. Například byly nalezeny hydratované formy diastereoisomeu SSS, které mají výhodnou vlastnost, že nejsou hygroskopické, například forma A a forma B uvedená dále. Tak výhodná forma diastereoisomeru SSS je krystalická forma obsahující méně než 5 % (výhodně méně než 3 % a ještě výhodněji méně než 2 %) diastereoisomeru SSR v podstatě v hydratované formě. Bylo zjištěno, že takové krystalické formy, například forma A a forma B vykazují dobrou biologickou dostupnost a dobrou rozpustnost ve vodném pufru, což jsou obě výhodné vlastnosti.

Zvlášt výhodná krystalická forma diastereoisomeru SSS vzorce I, pokud jev podstatě čistý a v hydratované formě, má rentgenogram práškového materiálu zahrnující dva hlavní specifické píky při okolo 20 = 10,8 a 11,4°. Tato forma (zde nazývaná jako forma A) obsahuje přibližně 4,1 % vody. Rentgenogram práškového materiálu také obsahuje specifické píky relativně menší intenzity vyskytující se okolo 2Θ = 15,4, 16,8, 18,2, 18,6, 20,6, 21,6, 21,9, 22,8 a 25,0°. Rentgenové difrakční spektrum (XDS) typického vzorku této formy je ukázáno v obrázcích l a 2 dále, kde obrázek 2 ukazuje píky menší intenzity na expandované škále, Další fyzikální data naznačují, že tato krystalická forma je v podstatě forma diolu sloučeniny vzorce lb.

Další výhodná krystalická forma diastereoisomeru SSS vz'ořče'*TT“když j e-v* podstatě-cis tá*axv,»hydratované».formě„má_>1 rentgenogram práškového materiálu obsahující hlavní specifický pík při okolo 20 = 7,2°. Tato forma, zde uváděná jako forma B, obsahuje přibližně7,8 % hmot/hmot. (například 7,3 až 8,3 % hmot./hmot,} vody. Rentgenogram práškového materiálu také obsahuje specifické píky relativně menši intenzity vyskytující se okolo 2.Θ = 7,4, 9,0, 10,8, 11,3, 14,5, 15,9, 17,8, 18,1, 19,7 a 22,5°. XDS typického vzorku této formy je ukázáno v obrázku 3 dále. Další fyzikální data naznačují, že tato krystalická forma je v podstatě monohydrát diolu vzorce lb.

Jestliže diastereoisomer SSS je v podstatě čistý a v podstatě prostý rozpouštědla (tj. v ketonové formě), má rentgenové difrakční spektrum obsahující hlavní specifický pík okolo 20 = 12,1. Toto spektrum také obsahuje píky relativně menší intenzity vyskytující se při okolo 20 - 6,0, 16,8 a 17,7°. XDS typického vzorku této ketonové formy je ukázáno na obrázku 4 dále.

Rentgenová difrakční spektra práškového materiálu se stanoví například za použití rentgenového difraktometru Scintag XDS-2000, s EC&G fotonovým detektorem, seríe GLP (germanium) pracující s počítačem Microvax a užívající sowtware Diffraction Management System, dodávaný firmou Scintag lne., Sunnydale, California, USA. Používá se rentgenová trubka Cu K-alfa s vlnovou délkou l,5406A při 45KV a 40mA. Sběrné štěrbiny se nastaví na 2 a 4 mm a divergenční štěrbiny na 0,5 a 0,2 mm s ohledem na cestu dopadajícího svazku paprsků. Spektra se získají při kontinuálním skenovacím módu se zvýšením 0,02. Každý vzorek se vystaví účinku při 1 stupni 2-theta za minutu (běžný čas 38 minut) a sebere se od 2 do 40 stupňů 2-theta k získání záznamu vzdálenosti proti intenzitě pro tento rozsah.

Pro difrakční analýzu se vzorky naplní do kruhové s ky z hí i'n í ko ve š 1' i t i ny o p řůmě ru ' 2 5 ’ mm* a“ o * hl oub c e* 2 * mm :-***Práškový vzorek se umístí do misky tak, aby byl v přebytku a zarovná se s okrajem misky skleněným podložním sklíčkem.

Jako vnější standatd se použije silikon typu NBS 640b.

Alternativně se použije rentgenový difraktometr Siemens D5000, zaznamenávající difraktogram v módu θ - Θ v rozsahu 2 až 40 stupňů 2-theta se čtyř vteřinovým vystavením s krokem 0,02° 2Θ.

Bylo získáno infračervené spektrum pro typický vzorek formy A. Toto infračervené spektrum bylo získáno rozpouštědlovou licí technikou známou v oboru litím vzorku v acetonitrilu na solné okénko pro analýzu přímou propustností. Infračervené spektrum bylo stanoveno pro vlnové délky v rozsahu 4000 až 400 cm^-1. Infračervené spektrum je ukázáno na obrázku 5. Spektrum na obrázku 5 obsahuje ostré píky při okolo 2968, 1762, 1721, 1690, 1632, 1525, 1447, 1207 a 1154

Bylo také získáno infračervené spektrum'pro typický vzorek formy A za použití spektrometru Nicolet 20SXC FTIR. Spektrum bylo získáno za použití 2% disperze vzorku v bromidu draselném. Infračervené spektrum je ukázáno na obrázku 6 dále. Spektrum na obrázku 6 obsahuje ostré píky při okolo 3402, 3321, 3252, 3060, 2967, 2878, 1699, 1674, 1629, 1535, 1532, 1446, 1271, 1258, 1249, 1175, 1152, 1118, 1089, 1029, 1013, 1004, 635, 593 a 567 cm’¹. Za použití podobných podmínek bylo získáno infračervené spektrum pro typický vzorek formy B. Infračervené spektrum je ukázáno na obrázku 7 dále. Spektrum na obrázku 7 obsahuje ostré píky při okolo

3428, 3304, 2971, 2875, 1708, 1682, 1637, 1556, 1518, 1470,

1449, 1428, 1316, 1310, 1277, 1265, 1236, 1196, 1175, 1144,

1120, 1081, 1036, 1005, 928, 818, 790 a 727 cm’¹. Za použití podobných podmínek bylo získáno infračervené spektrum pro typický vzorek čiastereoisomeru SSS v podstatě v ketonové formě. Infračervené spektrum je ukázáno na obrázku 8. Spektrum na obrázku 8 obsahuje ostré píky při okolo 3415, 3300, 2967, 2876, 1764, 1723, 1711, 1695, 1686, 1634, 1527, 1445, 1356, 1286, 1234, 1213, 1139, 1105, 1061, 1020, 774, 732 a 671 cm'¹.

Je třeba si uvědomit, že se hodnoty 2Θ rentgenogramu práškového materiálu a vlnové délky infračervenového spektra mohou mírně lišit v závislosti na použitém zařízení a tak nelze uváděné hodnoty považovat za absolutní. Například dva hlavní specifické píky, které se vyskytují při okolo 20 = 10,8 a 11,4° pro typický vzorek formy A při použití rentgenového difraktometru Scintag XDS-2000 se vyskytují při okolo 20 = 10,6 respektive 11,2° při použití rentgenového difraktometru D5000 (přičemž se také vyskytují méně intenzivní píky při úměrně relativně nižších hodnotách 20).

Je třeba si uvědomit, že atomy vodíku hydroxylových skupin forem vzorce Ib nebo Ic (nebo jejich hydráty) jsou kyselé a tak takové sloučeniny mohou proto tvořit krystalické, farmaceuticky přijatelné soli, za použití obvyklých postupů, například s bázemi poskytujícími fyziologicky přijatelné kationty, například s alkalickými kovy (jako je sodík nebo draslík), kovy alkalických zemin nebo solemi organických aminu. Předkládaný vynález proto zahrnuje krystalické, farmaceuticky přijatelné soli forem vzorce Ib a Ic nebo jejich hydráty.

Mohou se také připravit různé formy sloučeniny vzorce I uváděné shora nebo její solváty (hydráty), například následujícími postupy, které jsou dalšími separátními aspekty předkládaného vynálezu.

Nekrystalická (amorfní) směs diastereoisomerů ŠSS a SSR se získá oxidací sloučeniny vzorce II vhodným oxidačním

...činidlem.

Jako oxidační činidlo se použije Činidlo známé ve stavu techniky pro přeměnu hydroxylové skupiny na ketoskupinu. Vhodná oxidační činidla a podmínky zahrnují například použití oxalylchloridu, dimethylsulfoxidu a terciárního aminu, použití anhydridu kyseliny octové a dimethylsulfoxidu, použití pyridinového komplexu oxidu chromového v dichlormethanu, použití hypervalentního jodového činidla, jako je l,1,l-třiacetoxy-2,l-benzoidol-3(3H)-on s kyselinou trifluoroctovou v dichlormethanu, použití přebytku dimethylsulfoxidu a ve vodě rozpustného karbodiimidu v přítomnosti kyseliny dichloroctové nebo alkalického vodného manganistanu draselného jako je alkalický vodný roztok manganistanu draselného nebo manganistanu sodného. Zvlášť, výhodná oxidační činidla jsou poslední dvě jmenovaná činidla, zejména alkalický vodný roztok manganistanu draselného nebo sodného, například směs hydroxidu sodného a manganistanu draselného nebo sodného.

Sloučenina vzorce II se muže získat například jak je uvedeno ve schématech l a 2 za použití obvyklých postupů nebo jak je uvedeno v příkladech. Stupně (a) až (d) schématu i se mohou provést jak je uvedeno v US patentu 5 194 588 nebo v Evropském patentu 0 189 305. Stupeň (e) se provede za použití obvyklých postupů pro přípravu karbamátu z primárního aminu, například za použití methylhalogenformiátu, jako je methylchlorformiát, v přítomnosti vhodné báze, jako je triethylamin nebo N-methylmorfolin a ve vhodném rozpouštědle nebo ředidle, například chlorovaném uhlovodíku (jako je dichlormethan nebo chloroform) nebo etherovém rozpouštědle (jako je tetrahydrofuran nebo dioxan) pri teplote v rozsahu například -10 °C až 50 °C, jako je 0 °C až 30 °C. Reakční stupně schématu 2 zahrnují obvyklé .stupně pro ochranu (stupeň (10)), sejmutí chránící skupiny nebo selektivní sejmutí chránící skupiny (stupně (1), (3), (6), (8), (9) a (12)j, kondenzaci (stupně (4), (5), (13) a (14) a tvoření karbamátu (stupně (2), (7) a (11)) dobře známé ve stavu techniky.

Je třeba si uvědomit, že diastereoisomerní směsi diastereoisomerů SSS a RSS a diastereoisomerů SSS a SRS se mohu získat za použití analogických postupů, s vhodným Lnebo D-valinem nebo prolinem (nebo jejich chráněnými deriváty) jako výchozích materiálů a použitím (2R,3S)-3amíno-4-methyl-1,l,1-trifluor-2-pentanolu ve vhodných kondenzačních stupních.

V podstatě čistý diastereoisomer SSS se může získat například oxidací (S)-1-[(S-)-2-(methoxykarbonylamino)-3methylbutyryl]-N-[(S)-2-methyl-l-((R)-2,2,2-trifluor-lhydroxyethyl)propyl]pyrrolidin-2-karboxamidu (vzorce Ila) s vhodným oxidačním činidlem,' jako je oxidační činidlo uvedené shora. Výchozí alkohol se může získat jak je uvedeno ve schématu 2.

CF.

O

HO

IR

Krystalické formy diastereoisomeru SSS obsahující 35 % nebo méně diastereoisomeru SSR se mohou získat z nekrystalické (amorfní) diastereomerní směsi diastereoísomerů SSS a SSR., obsahující diastereoisomery SSS a SSR v přibližně stejném množství (tj. poměr je okolo 1:1, typicky 53:47 nebo 47:53) krystalizaci z vhodného nepolárního rozpouštědla, jako , 'l Ι·Ι1|« „Μ... .^IHIII.1.WM.4. . -‘_f ) . -ΊΤ- ·;— -- -«ťUll.ll^ II- u- li.. -Hj je směs methyl terč.butyletheru a hexanu, výhodně obsahující malé množství vody a případně obsahující malé množství kyseliny chlorovodíkové, například 0 až 0,2 molekvivalentů 36% hmot./hmot. kyseliny chlorovodíkové a 1 až 2,1 molekvivalentů vody. Bylo zjištěno výhodným přidat vodnou kyselinu chlorovodíkovou k rozpouštědlu, jestliže se použije nekrystalická diastereoisomerní směs SSS:SSR v poměru 47:53.

K uvedení krystalizace do Chodu je výhodné očkovat směs krystalickým diastereoisomerem SSS. Krystalický produkt se obvykle izoluje jako směs hydratované formy a ketonové formy, typicky v poměru okolo 80:20 (hydratované forma:ketonová forma) nebo větší. Hydratované forma nebo směs ketonové a hydratované formy se mohou převést na v podstatě ketonovou formu sušením ve vakuové sušárně (například při teplotě okolo '50 °C) . Avšak tato ketonová forma je hygroskopická.·

V podstatě čisté krystalické formy diastereoisomeru SSS se mohou získat rekrystalizací nebo opakovanou rekrystalizací krystalických forem diastereoisomeru obsahující SSR diastereoisomer. Rozpouštědla, nebo směsi rozpouštědel, které se mohou použít zahrnuji například butylacetát, butylacetat/hexan, aceton/voda, aceton/hexan, aceton/petrolejová frakce teploty varu 100 až 120 °C,

1,2-dimethoxyethan/hexan, l, 2-dimethoxyethan/voda/hexan, ethylacetát/voda/hexan, ethylacetát/hexan, voda, dibutylether/hexan, dichlormethan/hexan,

1,2-dimethoxyethan/voda, methanol/toluen, methyl terč.butylether/hexan, isopropanol/hexan a tetrahydrofuran/hexan. K získání formy A je výhodných prvních deset rozpouštědel· nebo jejich směsí uvedených shora. Vlhká směs ethylacetát/hexan je zvlášť výhodná k získání formy A. Zvlášť výhodná rozpouštědla nebo směsi rozpouštědel k získání formy B jsou l,2-dimethoxyethan/voda a voda/methanol, ačkoliv tato forma může být získána jestliže se použije směs ethylacetát/voda/hexan. Pokud se zde uvádí hexan, pak jsou zahrnuty*isomery*hexanu jako*je_yisohexan)_nebo j ej ich směsi.

V podstatě čisté krystalické formy diastereoisomeru SSS se mohou také získat krystalizaci v podstatě čistého diastereoisomeru SSS izolovaného v nekrystalické formě (například oxidací sloučeniny Ha) jako je olej, za použití podobných rozpouštědel nebo směsí rozpouštědel uvedených shora, zejména směsi ethylacetátu, vody a hexanu.

Dále, forma A se také může získat z formy B rekrystalizaci, například jak je uvedeno v příkladu 9. Krystalická ketonová forma se může získat z formy A, například jak je uvedeno v příkladu 10.

Příprava ketalu nebo hemiketalu z ketonu je dobře známá ve stavu techniky. '

3-Amino-4-methyl-l,1,l-trifluor-2-pentanol se může získat jak je popsáno v US patentu č. 4 910 190 nebo jak je uvedeno v příkladech.

Zvlášť výhodný postup pro přípravu (2R,3S)-3-amino-4methyl-l,1,l-trifluor-2-pentanolu, který je dalším aspektem předkládaného vynálezu zahrnuje (jak je ilustrováno v schéma 3} :

(1) reakci (2RS,3SR)-3-amino-4-methyl-l,1,1-trifluor-2pentanolu nebo jeho soli s trifosgenem nebo dimethylkarbonátem v přítomnosti vhodné báze, za získání (4RS,5SR)-4-isopropyl-5-trifluormethyloxazolidin-2-onu, následovanou (2) reakci (4RS,5SR)-4-isopropyl-5-trifluormethyloxazolidin2-onu nebo jeho soli alkalického kovu s (-)-menthylchlorformiátem .za získání (4RS,5SR)-4-isopropyl-3-[(IR,3R,4S)-3p-menthyloxykarbonyl]-5-trifluormethyloxazolidin-2-onu a oddělení isomeru (4S,5R)-4-isopropyl-3-[(lR,3R,4S)-3-pmethyloxykarbonyl]-5-trifluormethyloxazolidin-2-onu, nás!edované...........„ , ............... .......

(3) hydrolýzou isomeru (4S,5R)-4-isopropyl-3-[(IR,3R,4S)-3-pmenthyloxykarbonyl]-5-trifluormethyloxazolidin-2-onu při bazických podmínkách za vzniku (2R,3S)-3-amino-4-methyll,1,1-trifluor-2-pentanolu.

Ve stupni (l) , vhodná báze je vodný hydroxid alkalického kovu, například hydroxid sodný nebo draselný. Reakce se obvykle provádí ve vhodném inertním rozpouštědle nebo ředidle, například uhlovodíku, jako je toluen. Reakce je exothermnía proto se reakce obvykle provádí za vnějšího chlazení, udržováním teploty okolo 0 °c až 50 °C, například při teplotě okolí.

Ve stupni (2) se reakce provádí ve vhodném rozpouštědle nebo ředidle, například v etherovém rozpouštědle,' jako je tetrahydrofuran. Výhodně se oxazolidin převádí na svojí sůl s alkalickým kovem za použití butyllithia při teplotě okolo -78 °C před přidáním (-)-menthylchlorformiátu. Žádaný (4S,5R)-isomer krystaluje ze směsi isomeru a sebere se filtraci.

Ve stupni (3) vhodné podmínky zahrnují například použití vodného roztoku hydroxidu alkalického kovu (jako je hydroxid sodný nebo hydroxid draselný) v etherovém rozpouštědle nebo ředidle, jako je dioxan, při teplotě v rozsahu například 60 až 130 °C (například 90 až 120 °C).

Užitečnost sloučeniny podle vynálezu může být demonstrována standartními testy a klinickými studiemi zahrnující dále uvedené testy.

Měření inhibiční schopnosti

Potence sloučeniny působit jako inhibitor lidské leukocyt-elastázy (HLE) na nízkomolekulárním peptidovém substrátovém_tmethoxy-sukeinyl_;alanyl-alanyl-prolyl-valinp-nitroanilidu se stanoví postupem popsaným v patentovém spisu US 4 910 190. Potence inhibitoru se vyhodnotí získáním kinetické determinace disociační konstanty komplexu vytvořeného interakcí inhibitoru s lidskou leukocyt-elastázou. U sloučeniny z příkladu 1 byla zjištěna 36 nM, u sloučeniny z příkladu 2 byla zjištěna 9 nM.

Modelová akutní leze plic

Živočišné modely emfysemu plic zahrnují intratracheální (i.t.) podání elastolytické proteázy za účelem pozvolna progresivní destrukční leze plic. Tyto leze jsou normálně vyhodnocovány po dobu několika týdnů až měsíců po počátečním podání činidla způsobujícího uvedenou lezi. Tyto proteázy však rovněž indikují leží, která je zřejmá již v průběhu několika prvních hodin. Tato časná leze je z počátku hemorrhagická, potom přechází ke konci prvních 24 hodin do zánětové leze, která se první týden po aplikaci činidla způsobujícího lezi rozptýlí. Za účelem využití uvedené časné léze byl použit následující model.

Křečkové se nejprve mírně anestezují Brevitalem. Potom se jim přímo do průdušnice podá bud' samotný fosfátem pufrovaný fysiologický roztok (PBS), pH 7,4 nebo tento roztok obsahující lidskou leukocyt-elastázu (HLE). Po 24 hodinách se pokusná zvířata utratí, načež se jim odeberou plíce, které se pečlivě zbaví přilehlé vnější tkáně. Po určení hmotnosti plíce za vlhka se plíce promyjí fosfátem pufrovaným fysiologickým roztokem, načež se stanoví celkové počty vymytých červených a bílých krvinek. Uvedené hmotnosti vlhké plíce a celkových počtů vymytých červených a bílých krvinek rostou se zvyšující se dávkou podané HLE. Sloučeniny, které jsou účinnými inhibitory lidské leukocyt-elastázy mohou eliminovat nebo snížit rozsah enzymem indukované leze, což se projeví sníženou hmotností vlhké plíce a celkového počtu η ./vymytých červených a bílých, krvinek vzhledem k hodnotám, které se za stejných podmínek získají v případě, kdy byla podána samotná lidská leukocyt-elastáza. Sloučeniny podle vynálezu mohou být vyhodnoceny jejich intracheálním podáním ve formě roztoku nebo suspenze ve fosfátovém pufrovaném fyziologickém roztoku a to buď současně s podáním lidské leukocyt-elastázy (400 ^g) nebo v různých okamžicích před tímto podáním nebo jejich intravenózním nebo orálním podáním ve formě roztoků v různých okamžicích před podáním lidské leukocyt-elastázy (10Ό /xg) a to za účelem stanovení jejich schopnosti eliminovat lezi indukovanou lidskou leukocyt-elastázou. Roztok sloučeniny podle vynálezu se vhodně připraví za použití 10% polyethylenglykolu 400 ve fosfátovém pufrovanémfysiologickém roztoku.

Akutní hemorrhagický test

Při tomto testu se monitoruje pouze stupeň hemorrhagie v plicích po intratracheálním podání lidské neutrofilní elastázy (HNE). Stupeň hemorrhagie se kvantifikuje rozrušením erythrocytů izolovaných v plicní promývací tekutině a srovnáním získaného výsledku se zředěními veškeré krve křečka. Postupuje se podle protokolu, který je analogický s protokolem popsaným Fletcher-em a kol. v American Rewiew of Respirátory Disease (1990), 141, 672-677), Sloučeniny, u

H-,—r.-i—-4^.

kterých má být demonstrována jejich inhibiční účinnost vůči lidské neutrofilní elastáze in vitro se vhodně připraví pro stanovení postupem, který již byl uveden výše v souvislosti s modelovou akutní leží plic. Samci syrských křečků (bez potravy 16 až 18 hodin před použitím) se slabě anestezují Brevitalem sodným (30 mg/kg í.p.}. Tyto sloučeniny jsou potom intravenosně nebo orálně podávány křečkům ve stanovenou dobu, tj. 30 nebo 90 minut před intratracheálním podáním 50 /ig/zvíře lidské neutrofilní elastázy ve 300 μΐ fosfátem pufrovaného fysiologického roztoku (PBS), pH 7,4. Čtyři hodiny po podání tohoto enzymu se zvířata usmrtí předávkováním pentobarbitalu sodného, načež se jim otevře .< Η, I «. rt iWiiii WW)»· · f III—>1 —I* tálů Ι||ι·ιΐ)ΙΙ·Ιι hrudník a vyjmou se plíce a průdušnice a srdce se odstraní. Extrahované plíce se potom pomocí tracheální cévky promyjí třemi 2 ml podíly fysiologického roztoku. Zpětně získané promývací podíly se sloučí (asi 5 ml), získané objemy se zaznamenají a potom skladují při teplotě 4 °C až do okamžiku, kdy se použijí, k vlastnímu stanovení. Za účelem výpočtu množství krve v každém vzorku se roztavené promývací sloučené podíly a vzorek veškeré krve křečka sonifikují (působením ultrazvuku) za účelem rozrušení erythrocytů a příslušně naředí do individuálních jamek 96-jamkové mikrotitraČní plotny. Potom se stanoví optické hustoty (OD) rozrušených promývacích podílů a krevních vzorků při vlnové délce 540 nm. Stanoví se poměr (μΐ krevních ekvivalentů)/(ml promývacího podílu) srovnáním optické hustoty testovaných vzorků s optickými hustotami standartní křivky, připravené z veškeré krve křečka. Celkové μΐ-ekvivalenty izolované krve se stanoví pro každý vzorek vynásobením objemu zpětně získané promývací tekutiny výše uvedeným poměrem (μΐ krevních ekvivalentů)/(ml promývacího podílu). Získané výsledky se potom vyjádří jako procentická inhibice hemorrhagie pro každou testovanou sloučeninu podanou ve specifickém, okamžiku před podáním lidské neutrofilní elastázy a ve specifikované dávce a to vzhledem ke kontrolnímu pokusu zahrnující podání pouze fosfátem pufrovaného fysiologického roztoku. ED^g pro sloučeninu z příkladu 2 bylo nalezeno 1,9 mg/kg po orálním podání a 0,6 mg/kg po intravenosním podání.

Při podávání sloučenin podle vynálezu v dávkách použitých při výše uvedených testech in vivo nebyla pozorována žádná zjevná toxicita.

Je třeba uvést, že využitelnost účinnosti sloučenin podle vynálezu při modelové akutní lezi plic a akutním hemorrhagickém testu se neomezuje pouze na efysem. Tyto testy naopak demonstrují obecnou inhibiČní účinnost in vivo sloučenin podle vynálezu vůči lidské leukocyt-elastáze.

- .. ... i. . II,..nu, ni----' ** ' W H l—Él *1l~ ι· η,ι.»'·Ι||,·ιη u,»W ' iiiiiih—iih

Dalším znakem předkládaného vynálezu je příprava farmaceutického prostředku, který obsahuje farmaceuticky účinné množství sloučeniny podle vynálezu (nebo její určité formy) nebo jejího solvátu a farmaceuticky přijatelné ředidlo nebo nosič. Jak již bylo uvedeno výše, dalším znakem vynálezu je způsob použití sloučeniny podle vynálezu (nebo její určité formy) nebo jejího solvátu při léčení nemocí nebo stavů u savců, zejména u lidí, při kterých se uplatňuje účinek lidské leukocyt-elastázy, zejména akutní a chronické bronchitičy, rozedmy plic, reperfuzním zranění, respiračním úzkostném, syndromu u dospělých, cystické fibróze, periferním vaskulárním onemocnění, jako je kritická ischemie okončetin nebo intermitující kladikace.

Sloučenina podle vynálezu může být podána teplokrevnému živočichu, zejména člověku, který toto podání potřebuje pro léčení nemoci, při které se uplatňuje účinek lidské leukocyt-elastázy, ve formě farmaceutického přípravku, který je například obecně popsán v patentu US 4 910 190. Výhodným způsobem podání je práškový nebo kapalný aerosol. Ve formě práškového aerosolu může být sloučenina podle vynálezu podána stejným způsobem jako natrium-cromolyn v turboinhalačním zařízení Spinhaler (které je komerčně dostupné u firmy Fisons

Corp., Bedford, Massachusets) v množství asi 0,1 až 50 mg/kapsli, přičemž průměrnému člověku se aplikuje denně 1 až 8 takových kapslí. Každá taková kapsle, která má být použita v uvedeném turboínhalátoru obsahuje požadované množství sloučeniny podle vynálezu, přičemž zbytek 20 mg kapsle je tvořen farmaceuticky přijatelným nosičem, jako je laktóza. Ve formě kapalného aerosolu může být sloučenina podle vynálezu (nebo její konkrétní forma) podána za použiti rozprašovače, jakým je například rozprašovač Retec, ve kterém je roztok rozprašován stlačeným vzduchem. Takový aerosol může být například podáván jednou až asi osmkrát denně následujícím z pů-s ob em. «. R o z p r a š o va č „ s e . nap 1 n i „ r o ztokem^sloučeniny^fnebo její konkrétní formy) například 3,5 ml tohoto roztoku obsahujícího 10 mg/ml uvedené sloučeniny. Tento roztok se potom v rozprašovači rozpráší stlačem vzduchem, přičemž pacient normálně vdechuje (respirační objem) po dobu osmi minut rozprašovačem u úst.

Alternativním způsobem .podání může být parenterální podání, včetně subkutánního depozitu pomocí osmotické pumpy nebo výhodně perorální podání. Sloučeniny podle vynálezu mohou být výhodně formulovány v perorální nebo parenterální dávkovači formě získané smíšením 10 až 250 mg sloučeniny/jednotka dávky s konvenčním vehikulem, pomocnou farmaceutickou látkou, pojivém, konzervačním činidlem, stabilizátorem, aromatizující látkou nebo jinou obdobnou látkou akceptovatelnou farmaceutickou praxí, například látkami popsanými v patentu US 3 755 340. Za účelem parenterálního podání se 3- nebo 4-krát denně aplikuje 1 až 10 mililitrová intravenózní, intramuskulární nebo subkutánní injekce obsahující 0,02 až 10 mg/kg tělesné hmotnosti sloučeniny podle vynálezu (nebo její konkrétní formy). Tato injekce by měla obsahovat sloučeninu podle vynálezu (nebo její konkrétní formu) ve vodném isotonickém sterilním roztoku nebo suspenzi, případně obsahující konzervační činidlo, jako je fenol, nebo solubilizační činidlo, jakým je kyselina ethylendiamintetraoctová (EDTA). Za účelem parenterálního podání nebo pro použití ve formě aerosolu může být připravena vodná formulace rozpuštěním sloučeniny podle vynálezu (nebo její konkrétní formy} v 5 až 10% polyethylenglykolu

400/fosfátový pufrový živný roztok, následnou aseptickou filtrací a skladováním za použití standartních postupů.

Obecně může být sloučenina podle vynálezu (nebo její konkrétní forma) podávána lidem v denní dávce například 5 až 100 mg sloučeniny (nebo její konkrétní formy) ve formě aerosolu nebo 50 až 1000 mg sloučeniny intravenózněnebo orálně nebo za použití kombinace obou těchto způsobů podání.

-->~·-·.·*.·· · -fc-TW—H—R»—l ........... ' ¹ ................»11111*.....IL.....ΙΙ|Ι·»Ι II W U

Nicméně je zřejmé, že může být nezbytné měnit podanou dávku sloučeniny v souladu s vžitou praxí v závislosti na charakteru a závažnosti léčené nemoci, konkurenční terapii a věku a hmotnosti léčeného pacienta. Je rovněž samozřejmé, že může být použito ekvivalentní množství soivatované (například hydratované) formy sloučeniny podle vynálezu. Protokoly pro podávání inhibitorů lidské leukocyt-elastázy a pro vyhodnocování stavu pacientů jsou popsané v evropských patentových přihláškách s publikačními čísly 458 535, 458 536, 458 537 a 463 811 v souvislosti s léčením nebo prevencí cystické fíbrózy, ARDS, bronchitidy a hemorrhagie sdružené s akutní nelymfocytní leukémií nebo její terapií.. Sloučenina podle vynálezu (nebo její konkrétní forma) může být použita výhodně orálním podáním k léčení těchto nemocí a stavů a to buď samotná' nebo v'kombinaci s jiným farmaceutickým činidlem·, které je indikováno pro léčení takové nemoci nebo takového stavu. Za účelem terapeutického nebo profylaktického léčení vaskulárního onemocnění nebo příbuzného stavu u savců, při kterých se uplatňují účinky neutrofilů, může být sloučenina podle vynálezu (nebo její konkrétní forma) podána perorální nebo parenterální cestou a to buď samotná nebo současně nebo sekvenčně s jinými terapeutickými činidly, které jsou v takových případech obvykle podávány. Užitečnost sloučeniny podle vynálezu (nebo její konkrétní formy) v takovém léčení vaskulárních nemocí a příbuzných stavu může být demonstrována za použití postupů popsaných v mezinárodní přihlášce č- WO 92/22309.

V následující části popisu bude vynález blíže obsasněn pomocí konkrétních příkladů jeho provedení, které mají pouze ilustrativní charakter a nikterak neomezují rozsah vynálezu, který je jednoznačně definován formulací patentových nároků.

V těchto případech, pokud není výslovně uvedeno jinak:

i) teploty se udávají ve stupních Celsia (° C).; operace se provádějí při okolní nebo pokojové teplotě, tj. při teplotě v rozmezí 18 až 25 °C, ii} organická rozpouštědla se suší nad bezvodým síranem sodným,· odpaření rozpouštědla se provádí v rotační odparce za sníženého tlaku (600 až 4000 Pa, 4,5 až 30 mm Hg) při teplotě lázně nejvýše 60 °C, iii) chromatografie znamená mžikovou chromatografii (metoda Still) prováděnou na silikagelu typu Kieselgel (Art. 9385 od firmy E, Merck, Darmstadt, Spolková republika Německo) ,- eluování se provádí za použití jak stupňových tak rampových gradientů a je označena parentetickým termínem gradient, následovaným počátečními a finálními poměry,· chromatografie na- tenké vrstvě se provádí na silikagelových deskách, například na 0,25 mm silikagelových deskách GHLF (Art. 21521 od firmy Analtech, Newark, DE, USA).

iv) průběh reakcí se obvykle sleduje chromatografií na tenké vrstvě a reakční doby jsou uváděny pouze pro ilustraci,

v) teploty tání jsou nekorigované a (rozkl.) značí rozklad; udané teploty tání jsou teplotami tání produktů připravených popsanými postupy; existující polymorfie může mít za následek při některých přípravách izolaci produktů s odlišnými teplotami tání, vi) finální produkty mají uspokojivá nukleární magnetická rezonanční spektra; kde byly zkoumány, byly v podstatě čisté, stanoveno HPLC, vii) výtěžky jsou uvedeny.pouze pro ilustraci a nepředstavují výtěžky, kterých by mohlo být dosaženo optimalizací postupů; v případě, že je žádoucí získat větší množství finálního produktu,' preparační postup se opakuje, viii) v těch případech, kdy jsou uvedeny údaje nukleární magnetickorezonančního spektra, jsou tyto údaje uvedeny ve formě hodnot delta pro hlavní diagnostické protony, uvedených v částech per milion (ppm) vzhledem k tetramethylsilanu (TMS), použitému jako vnitřní standard a stanovených při 250 MHz za použití DMSO-dg jako rozpouštědla; pro tvary signálů jsou použity konvenční zkratky,· pro AB spektra jsou uvedeny přímo pozorované posuny, ix) použité chemické symboly mají obvyklé významy, přičemž jsou použity jednotky a symboly soustavy SI,

x) snížené tlaky jsou uvedeny v absolutním tlaku v Pa, zatímco zvýšené tlaky jsou uvedeny v naměřeném tlaku v barech, xi) poměry rozpouštědel jsou udány v objemech, xii) hmotová spektra (MS) jsou zaznamenávána při energii elektronů 70 elektronvoltů v modu chemické ionizace za použití přímé expozice V2orku,· ionizace může být provedena nárazem elektronu (El) nebo rychlými atomy (FAB); obecně jsou zaznamenány pouze píky, které indikují základní hmotu, xiii) HPLC se použije ke stanovení poměru diastereoisomerů *

SSS:SSR vzorce I v izolovaném materiálu, za použití reverzní fáze SUPLECO LC-18, kolony 25 cm x 4,6 cm a směsi voda .-acetonitril (70:30) jako elučního

.......... ιυ·ι .- n . _f;/-in-irÍia ....Pn°irpk_i _; 0_ml/min ,_inj ekční._obj em~2 0 μΐ .

pomocí ventilu a detekce vlnové délky 205 nm. Retenční čas pro SSS diastereoisomer je okolo 9,9 minut a pro SSR diastereoisomer okolo 11,7 minut.

Příklady provedení vynálezu

Příklad 1

Hydrochlorid .1-(3-dimethylaminopropyl)-3-ethylkarbodiimídu (1,84 g) se přidá k roztoku (S)-1-[(S)-2-(methoxykar- bonylamino)-3-methlybutyryl]-N-[2-methyl-l-(2,2,2-trifluor1-hydroxyethyl)propyl]pyrrolidin-2-karboxamidu (0,41 g) rozpuštěném v dimethylsulfoxidu (DMSO; 5 ml) a toluenu (5 ml) a potom následuje přidání po kapkách kyseliny dichloroctové (0,32 ml) . Vzniklý roztok se míchá při teplotě 20 °C po dobu 2 hodin. Roztok se potom vlije do ethylacetátu (200 ml) a promyje se postupně 1M kyselinou chlorovodíkovou, vodou a solankou. Organický roztok se suší (MgSO₄) a koncentruje se ve vakuu. Zbytek se čistí mžikovou chromatografií (gradientově eluce,· methanol :methylenchlorid, 3:97 až 5:95) a získá se (S)-1-[(S)-2-(methoxykarbonylamíno)3-methylbutyryi] -N- [2-methyl-l- (2,2, 2-trif luoracetyl) propyl]·pyrrolidin-2-karboxamid (0,27 g) jako bílá pěna (jako směs ketonu a hydratovaných forem); TLC, R^ = 0,4 (methanol:di25 chlormethanu, 2,5:97,5).

^LH NMR (DMSO/D₂O) : 4,44 (m, 1H) , 4,00 (Μ, 2H) , 3,72 (Μ, 1H), 3,51 (m, 4H) , 2,02 - 1,75 (m, 6H) , 0,95 - 0,78 (m, 12H) .

Analýza pro ^ΐ8^Η28^Ρ3^3θ5 . 0,3H₂O:

vypočteno: C, 50,42; H, 6,72; N, 9,80; naleyeno : C, 50,31; H, 6,28; N, 9,56.

Výchozí látka (S)-l-[(S)-2-(methoxykarbonylamino)-3methylbutyryl]-N-[2-methyl-1-(2,2,2-trifluor-1-hydroxyethyl)propyl]-pyrrolidin-2-karboxamid se získá následovně:

Methylchlorformiát (0,12 ml) se přidá k roztoku

4-met hry tr i' f luor- 2 - hy d roxý-'*¹^*^-1^'¹ pentyl)]-L-prolinamidu (získán jak je popsáno v US patentu 5 194 588) (0,5 g) a triethylaminu (0,57 ml) v dichlormethanu (13,6 ml) při teplotě 0 °C. Roztok se míchá 0,5 hodiny a potom se vlije do ethylacetátu (100 ml). Organický roztok se promyje postupně nasyceným-vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného, vodou a solankou. Roztok se suší (MgS0₄) a koncentruje se ve vakuu. Zbytek se čistí mžikovou chromatografií (gradientova eluce; methanol:methylenchlorid, 5:95 až 7:93) a získá se (S)-1-[(S)-2-(methoxykarbonylamino)3-methylbutyryl]-N-[2-methyl-l-(2,2,2-trifluor-l-hydroxyethyl)propyl]-pyrrolidin-2-karboxamíd (0,51 g); TLC, R_f = 0,2 (methanol .-methylenchlorid, 5:95); MS: m/z = 426 (M+l),

Příklad 2

Roztok manganistanu draselného (16,6 g) ve vodě (100 ml) se přidá po kapkách k 0 °C roztoku (S)-1-[(S)-2-(methoxykarbonylamino)-3-methylbutyryl]-N-[ (S)-2-methyl-l- ((R)-2,2,2trifluor-l-hydroxyethyl)propyl] pyrrolidin-2-karboxamidu (15 g) v terč.butylalkoholu (175 ml), vodě (100 ml)a 0,6 M roztoku hydroxidu sodného (175 ml). Roztok se míchá 2 hodiny a potom se ochladí přidáním methanolu (70 ml) a potom se míchá po dobu 1 hodiny. Směs se filtruje přes infuziorovou hlinku, okyselí se na pH za použití l M kyseliny chlorovodíkové a nasyceného roztoku chloridu sodného. Produkt se extrahuje do etheru (5 x 100 ml) a rozpouštědlo se odstraní za vakua. Vzniklý olej se chromatografuje (methanol .·dichlormethan 5:95) a rozpouštědlo se odstraní a získá se olej. Hexan (40 ml) se přidá k míchanému roztoku oleje v ethylacetátu (který byl předběžně nasycen vodou) (40 ml) a míchání pokračuje po dobu 24 hodin, přičemž se tvoří krystalická látka. Přidá se další část hexanu (40 ml) a pevná látka se sebere a suší se ve vakuu (40 °C) a získá se (S)-1[ (S)-2-(methoxykarbonylamino)-3-methylbutyryl]-N-[(S)-2měthyl- i¹-'(2t2t2-trif luoracetyl·) propyl·] pyrrolidin-2 -karbox^#, amid (9,45 g), jako bílá pevná krystalická látka (jako v podstatě forma A).

^-H NMR (300 mHz, DMS0/D20) :	4,42	(m,	1H) ,	4,02	(d,	1H) ,
(m, 1H), 3,59 (m, 1H), 3,54	(s,	3H) ,	2,23	(m,	1H) ,	2,00
1,76 (m, 6H), 0,91 (m, 6H),	0,85	(d,	3H) ,	0,80	(d,	3H) .
Analýza pro ^18^28^3^3^5-^2	0:

vypočteno: C, 48,97; H, 6,85; N, 9,51;

nalezeno: C, 49,02,- H, 6,80; N, 9,66; (XDS uveden v obrázku l) .

Výchozí látka (S)-l-[(S)-2-(methoxykarbonylamino)-3methylbutyryl]-N-[(S)-2-methyl-1-((R)-2,2,2-trifluor-lhydroxyethyl)propyl]-pyrrolidin-2-karboxamid se získá následovně:

i) N-[(Fenylmethoxy)karbonyl]-L-valyl-L-prolin-tert.butylester (905 g) se rozpustí v ethanolu (4 litry) a přidá se palladium na uhlíku (20 g) Reakční směs se třepe pod atmosférou vodíku (8,929 kg/cm^) po dobu 12 hodin a potom se katalyzátor odfiltruje přes infuziorovou hlinku. Filtrát se koncentruje za sníženého tlaku a zbytek se dvakrát znovu odpaří z toluenu (1 litr) a získá se L-valyl-L-prolin terč.butylester jako olej (628 g) TLC, Rf = 0,2, aceton:hexan (20:80); MS: m/z = 271 (M+l).

ii) Roztok uhličitanu sodného (110,5 g) ve vodě (1,5 litru) a terč.butylester L-valyl-L-prolinu v tetrahydrofuranu (THF, litr) se spojí a ochladí se na teplotu 0 °C. Směs se zředí etherem (400 ml) a po kapkách se přidá methylchlorformiát (39,4 g). Vzniklá směs se nechá ohřát na teplotu okolí během hodin. Vrstvy se oddělí a organická fáze se promyje dvakrát 1 M kyselinou chlorovodíkovou, potom nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a solankou. Vodná fáze se extrahuje etherem, všechny organické fáze se spojí a suší se (MgSO₄) a rozpouštědlo se odstraní a získá se terč. bu tyle s. t e r„ N.- (met hoxyka rb o nyl.) 1 yl - prol i nu_ (125,9

g) · ¹H NMR· (300 MHz, DMS0/d4-trifluoroctová kyselina): 4,23 (dd, 1H) , 4,06 (d, 1H) , 3,78 (m, 1H), 3,57 (m, 1H) , 3,55 (s, 3H) , 2,16 (m, 1H), 1,95 (m, 3H), 1,80 (m, 1H), 1,42 (s, 9H), 0,94 (m, 6H); MS: m/z = 329 (M+l).

iii) K roztoku terč.butylesteru N-[methoxykarbonyl]-L-valylL-prolinu (813 g) v toluenu (3 litry) se přidá iontoměničová pryskyřice Amberlyst-15 (190 g). Reakční směs se zahřívá na 120 °C k oddestilování vody přítomné v pryskyřici jako azeotrop voda/toluen. Sebere se přibližně 400 ml destilátu. Zahřívání potom pokračuje pod zpětným chladičem po dobu 1,5 hodiny. Reakční směs se ochladí na teplotu 60 °C a pryskyřice se odstraní filtrací. Filtrát se extrahuje l N NaOH (2,5 litry) a potom nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného. Spojené zásadité extrakty se extrahují směsí THF/ethylacetát (1:1, 1 litr) a potom se ochladí v ledové lázni. Vodný roztok se okyselí na pH 1,5 za použití studené 3 M kyseliny chlorovodíkové (l litr) a extrahuje se dvakrát směsí THF/ethylacetát (1:1, 1,5 litr a 1 litr). Extrakty se spojí a promyjí solankou, suší se (MgSO^) a rozpouštědlo se odstraní odpařením. Vzniklý materiál se rozpustí v etheru (i litr) a nechá se krystalovat při teplotě 0 °C během 48 hodin. Vzniklá pevná látka se sebere filtrací, promyje se studeným etherem a po vysušení ve vakuu se získá N-[methoxykarbonyl]L-valyl-L-prolín {373 g).

¹H NMR (300 MHz, DMSO): 12,4 (s, 1H), 7,37 (d, 1H), 4,25 (dd, 1H), 4,00 (t, 1H), 3,79 (m, 1H), 3,55 (m, 1H), 3,51 (s, 3H), 2,11 (m, 1H), 1,85 (m, 4H), 0,91 (d, 3H), 0,87 (d, 3H), MS: m/z = 273 (M+l).

iv) N-Methylmorfolin (8,5 ml) se přidá k roztoku N-(methoxykarbonyl )-L-valyl-L-prolinu (12,5 g) v THF (150 ml) a roztok se ochladí na teplotu -15 °C v lázni led/aceton. Po kapkách se přidá isobutylchlorformiát (6,6 ml) a směs se míchá 1 hodinu. Potom se přidá druhá část N-methylmorfolinu (8,5 ml)

j.i i. .Biyi. —>.»—..1^1—, Ml lltlUH — —H (|n n.i li ifn a následovně hemioxalátová sůl (2R,3S)-3-amino-4-methyl1,i,l-trifluor-2-pentanolu (10 g). Reakční směs se potom' míchá 12 hodin, přičemž se nechá ochladit na teplotu okolí. Reakční směs se zředí etherem (500 ml) a postupně se promyje nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanů sodného, 1 M HCl a solankou. Vodné vrstvy se extrahují etherem a všechny organické fáze se spojí a suší se (MgS0₄). Roztok se filtruje a rozpouštědlo se odstraní odpařením. Vzniklý materiál se filtruje přes silikagel za použití etheru jako eluentu. Etherová frakce obsahující produkt se spojí a rozpouštědlo se odstraní odpařením. Produkt se suší ve vakuu a získá se .(S) -1 -[(S)-2-methoxykarbonylamino)-3-methylbutyryl]-N-[(S)-2methyl-1-(R)-(2,2,2-trifluor-1-hydroxyethyl)propyl]pyrrolidin2-karboxamid (16,1 g).

¹H NMR (300 MHz, DMSO'): 7,61 (d, 1H) , 7,28 (d, 1H) , 6,44 (d,

1H) , 4,44 (m, 1H) , 4,05 (m, 1H), 3,98 (m, 1H) , 3,75 (m, 2H), 3,55 (m, 1H), 3,50 (s, 3H) , 1,83 (m, 6H), 0,90 (d, 3H), 0,86 (d, 3H); MS: m/z = 426.

Hemioxalátová sůl (2R,3S)-3-amino-4-methyl-l,l,l-trifluor-2-pentanolu, použitá ve stupni (i) se získá následovně:

i) Trifosgen (23 g) se přidá v jedné dávce k dobře míchané směsi hemioxalátové soli (2RS, 3SR)-3-amino-4-methyl-l,1,1trifluor-2-pentanolu (50 g) v toluenu (250 ml) a 2 M roztoku hydroxidu sodného (350 ml). Reakce se stane exotermní a umístí se do ledové lázně. Po 0,5 hodině se reakční směs ohřeje na teplotu 25 °C a TLC stanoví přítomnost podstatného množství nezreagovaného aminu. Potom se upraví pH roztoku za použití 50% hydroxidu sodného na hodnotu přibližně 12. Přidá se další část trifosgenu (8 g) a roztok se míchá 1 hodinu. Potom se pH reakční směsi sníží za použití 1 M směsi kyseliny chlorovodíkové na hodnotu 7 a extrahuje se dvakrát etherem. Spojené etherové vrstvy se promyji vodou, solankou a suší se (MgSO₄). Rozpouštědlo se odstraní odopařením a získá se olej, který krystaluje při stání. Vzniklá pevná látka se sebere filtrací - a -p r omy j e „ s e „ smě s i „ e.t he r: hexan {1:1) íská^se^ž?^. „ g (4RS,SSR)-4-isopropyl-5-trifluormethyloxazolidin-2-onu jako bílá pevná látka, teploty tání 71 až 72 °C.

^ΧΗ NMR (300 MHz, DMSO): 8,45 (s, 1H) , 5,11 (m, 1H) , 3,61 (m,

1H), 1,72 (m, 1H), 0,86 (d, 6H).

ii) n-Butyllithium (20 ml 10 M roztoku v hexanu) se přidá k roztoku (4RS,5SR)-4-isopropyl-5-trifluormethyloxazolidin-2-onu (35,8 g) v THF (600 ml) při teplotě -78 °C a potom se míchá 0,5 hodiny. Přidá se (-)-menthylchlorformiát (41 ml čerstvě destilovaného) a potom pokračuje míchání při teplotě -78 °C po dobu 0,5 hodiny. Roztok se ohřeje na teplotu 25 °C a reakce se ochladí přidáním nasyceného vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného. Produkt se extrahuje do etheru a promyje se vodou a solankou. Roztok se suší (MgS0₄) a rozpouštědlo se odopaří ve vakuu. Vzniklý olej krystaluje stáním a získá se pevná látka, která se sebere filtrací.

Pevná látka se promyje směsí ether:hexan (1:1) a po vysušení se získá (4S,5R)-4-isopropyl-3-[(IR,3R,4S)-3-p-methyloxykarbonyl]-5-trifluormethyloxazolidin-2-onu (23,15 g), teploty tání 138 až 140 °C.

NMR (300 MHz, DMSO): 5,51 (dd, 1H), 4,68 (m, 1H), 4,26 (m, 1H), 2,27 (m, 1H) , 1,94 (d, 1H) , 1,78 (m, 1H) , 1,62 (d, 2H) ,

1,42 (m, 2H) , 1,01 (dd, 2H) , 0,95 - 0,84 (m, 24H) , 0,71 (d,

3H) ;

¹⁹FNMR (376,5 MHz, DMSO): -76,9910; 99 % d.e. Další Část 4,3 g (99 % d.e). se získá z matečného louhu). (Poznámka: isomer (4R,5S) má teplotu tání 80 až 82 °C a 19FNMR (376,5 MHz, DMSO): -77,0019.

iii) Roztok (4S,5R)-4-isopropyl-3-[(IR,3R,4S)-3-p-menthyloxykarbonyl]-5-trífluormethyloxazolidin-2-onu (27 g) v dioxanu (70 ml) a 50% roztok hydroxidu draselného (80 ml) se zahřívá na teplotu 100 °C po dobu 2 dnů. Reakce se ochladí, zředí se etherem (400 ml) a organická vrstva se oddělí. Potom se upraví pH vodného roztoku na 9 (původně okolo 14) za použití 6 M kyseliny chlorovodíkové. Vodná vrstva se extrahuje třikrát etherem (300 ml). Organické fáze se spojí, suší (MgSO₄) a přidá se dobře promíchaný roztok dihydrátu kyseliny šfavelové (4,5 g) v acetonitrilu (100 ml). Vysrážená pevná látka se sebere filtrací, promyje se etherem a suší se ve vakuu (60 °C) a získá se 15,9 g bílé pevné látky. Pevná látka se rozetře s etherem (300 ml) , sebere se filtrací a po vysušení se získá (2R, 3S)-3-amino-4-methyl-i, 1, l-trifluor-2pentanol, izolovaný jako hemioxalátová sůl (13,4 g, výtěžek 88 %) jako bílá pevná látka, teploty tání 184 až 186 °C.

Íh NMR (300 MHz, DMSO)	: 5,71	(šs	, 3H) ,	4,08	(ddd
(m, 1H), 1,81 (m, 1H),	0,92	(m,	6H) .
Analýza pro CgH-^F-jNO.	0,5C2H	2°4 :
vypočteno: C,	38,99;	H,	6,06;,	N, 6,	48;
nalezeno: C,	38,75;	H,	5,95;	N, 6,	. 47 .

(2RS,3SR)-3-Amino-4-methyl-l,1,l-trifluor-2-pentanol, použitý ve stupni (1) se získá jak je popsáno v US patentu 4 910 190.

Příklad 3

Za použití podobného oxidačního postupu, který je popsán v příkladu 2, ale použitím (S)-1-[(S)-2-(methoxykarbonylamino)3-methylbutyryl]-N-[2-methyl-l-(2,2,2-trifluor-l-hydroxyethyl)31 propyl]pyrrolidin-2-karboxamidu a přidáním roztoku manganistanu draselného při teplotě 5 až 10 °C a potom mícháním při teplotě 10 °C po dobu jedné hodiny, předcházející zpracování methanolem se získá (po zpracování extrakcí do terč.butyl methyletheru, následované promytím solankou a koncentrací ve vakuu) (S)-1-[(S)-2-(methoxykarbonylamino)-3-methylbutyryl][2-methyl-l-(2,2,2-trifluoracetyl)propyl]pyrrolidin-2-karboxamid jako guma (v 75% výtěžku),· poměr SSS.-SSR 53:47,- hydrát .· ketonu 1:1, ¹H NMR jsou podobná jako u produktu z příkladu 1. [Použije se podobný postup, ale přidá se roztok manganistanu draselného při^teplotě^okolí^místo _5_až_ 10 ,.°C. ~ Zí ská^ se_produkt v poměru SSS:SSR 47:53]

Výchozí materiál, (S)-1-[(S)-2-(methoxykarbonylamino)-3methylbutyryl]-N-[2-methyl-l-(2,2,2-trifluor-l-hydroxyethyl)propyl]pyrrolidin-2-karboxamid se získá jako olej (55% výtěžek) za použití analogického postupu, jak je popsán v příkladu 2, část (iv), ale použije se 3-amino-4-methyl-l,1,1trifluor-2-pentanol (jako směs diastereoizomerů), získaný jak je popsáno v US patentu 4 910 190 nebo následovně:

i) Roztok močoviny (72 g) v DMF (810 ml) se přidá k dusitanu* sodnému (90 g), míchá se 10 minut a potom se ochladí na teplotu 15 °C. Během 30 minut se přidá isobutyljodid (97,2 ml) a reakční směs se míchá při okolní teplotě 20 minut. Směs se znova ochladí na 'teplotu 15' °C a pomalu se přidá voda- (810 ml). Směs se míchá 5 minut při okolní teplotě a potom se extrahuje dvakrát methylterc.butyletherem. Spojené organické extrakty se promyji dvakrát 20% vodným roztokem thiosulfátového roztoku a koncentrací ve vakuu se získá 2-methyl-i-nitropropan (39 g), který se použije bez dalšího čištění.

ii) Molekulová síta 3A (27,04 g) se zahřívají ve vakuu na teplotu 120 °G po dobu 20 hodin a přidají se k roztoku

2-methyl-l-nitropropanu (13,0 g) v methyl terč.butyletheru (420 ml). Směs se míchá 5 minut, přidá se uhličitan draselný (64,5 g) a směs se míchá dalších 30 minut. Směs se ochladí na teplotu 15 °C a během 30 minut se přidá fluoralhydrát (22,0 g). Reakční směs se míchá při okolní teplotě 16 hodin, potom se ochladí na tepltu 15 °C a přidá se voda (270 ml). Po 5 minutovém míchání při okolní teplotě se organická táze oddělí a promyje se 10% vodným uhličitanem sodným, 2 M roztokem kyseliny chlorovodíkové a vodou. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku při teplotě pod 40 °C a olej se destiluje azeotropně s isopropylalkoholem při teplotě pod 50 °C a získá ,se^4;methýl-3;nitro;l, 1,1-trifluor-2-pentanol^,(2l·, 3„g)«^jako*»»··^-.- olej, který se použije bez dalšího čištění.

iii) Roztok 4-methyl-3-nitro-1,1, l-trifluor-2-pentanolu (17,1 g) v isopropanolu (115 ml) a kyselině octové (0,43 ml) se hydrogenuje přes 10% palladium na uhlíku (2,4 g) při tlaku vodíku 0,35 MPa do úplné sorpce vodíku. Katalyzátor se odstraní filtrací přes infusiorovou hlinku a filtrační koláč se promyje isopropanolem. Filtrát se odpaří ve vakuu dokud žádný další isopropanol neodestiluje a zbytek se rozpustí v acetonitrilu (40 ml). Za míchání se přidá roztok kyseliny súavelové (3,94 g) v acetonitrilu (80 ml) a směs se ochladí na 5 °C. Produkt který krystaluje se sebere filtrací, promyje se studeným acetonitrilem a po sušení při teplotě 50 °C' se získá 3-amino-4-methyl-l,1,l-trifluor-2-pentanol jako oxalátová sůl (9,08 g).

Příklad 4

Heaxan (13 ml) se přidává k roztoku (S)-l-[(S)-2-(methoxykarbonylamino)-3-methylbutyryl] -N-[2-methyl-l-(2,2,2-trifluoracetyl)propyl]pyrrolidin-2-karboxamidu (0,85 g; SSS:SSR 53:47; hydrát:ketonu 1:1) v terč.butyl methyletheru (8,5 ml) dokud trvá zákal. Roztok se potom ohřeje a získá se čirý roztok, ten se naočkuje v podstatě čirým krystalickým SSS diastereoisomerem a nechá se stát. Bílé pevné krystaly se seberou filtrací a získá se (S)-1-[(S)-2-(methoxykarbonylamino)-3-methylbutyryl]-N-[(S)-2-methyl-l-(2,2,2trifluoracetyl)propyl]pyrrolidin-2-karboxamid jako krystalická pevná látka v 30% výtěžku, SSSzSSR 95:5,hydrát;ketonu 80:20; NMR podobné k produktu z' příkladu 2.

Příklad 5

Za použití postupu podobnému tomu, který je popsán v příkladu 4, ale vycházejícího z diastereomerní směsi . SSS :SSR-53 :47-.(1 _r73»g)*a*poměru*hydrát^L:ketonu*95 :

přidáním 36% hmot./hmot. kyseliny chlorovodíkové (0,06 ml) a vody (0,04 ml) ke krystalizačnímu rozpouštědlu před přidáním hexanu se získá krystalický diastereomer v 22 % výtěžku s poměrem SSS:SSR 98,5:1,5 v podstatě v hydratované formě.

Příklad 6

Za použití postupu podobnému tomu, který je popsán v příkladu 5, ale s nepoužitím kyseliny chlorovodíkové se získá krystalická diastereomerní směs s poměrem SSS:SSR 65:35 v podstatě v hydratované formě.

Příklad 7

Za použití postupu podobnému tomu, který je popsán v _t. příkladu 5, ale vycházeje z diastereomerní směsi SSS:SSR

47:53 a poměru hydrát:ketonu 60:40 se získá krystalický diastereomer v 18% výtěžku s poměrem SSS:SSR 98,5:1,5 v podstatě v hydrtované formě.

Příklad 8

Produkt získaný v příkladu 2 (5 g) se rozpustí v

1,2-dimethoxyethanu (DME; 6 ml) za slabého zahřívání. K roztoku se přidá opatrně voda (5 ml) a získá se čirý roztok, Roztok se nechá ochladit na teplotu okolí, naočkuje se v podstatě čistým krystalickým diastereoisomerem a nechá se stát 16 hodin. Krystalická hmota, která se vytvoří u dna zařízení se opatrně rozdrobí a sebere se vakuovou filtrací. Krystalický produkt se promyje směsí DME a vody a nechá se sušit na vzduchu po.dobu 16 hodin a získá se SSS diaštereoisomer (obsahující méně než 2 % diastereoisomeru SSR) v podstatě ve formě B, s obsahem vody 7,3 % hmot./hmot; (XDS spektrum je uvedeno na obrázku 3). (Za použití podobného iWI>1 -- . -¹** M*· _w *1..*-----•'«ψ..*· ΊΝ*ημϊ>ιιΙ^ι·Κ^,*ΙΙ *^·ϊ-limy*,.ÉT.) postupu ale použitím rekrystalovane forma A jako výchozího materiálu se získá formy A, s obsahem vody 7,7 % hmot./hmot.]

Příklad 9

Produkt z příkladu 8 (4,78 g) se rozpustí v ethylacetátu (14,7 ml) za zahřívání na teplotu 60 °C v inertní atmosféře. Pomalu se přidá hexan (22 ml) a roztok se nechá ochladit na 22 °C. Krystalický produkt se sebere filtrací a promyje se hexanem (10 ml) a potom se suší na vzduchu a získá se krystalický diastereoisomer (obsahující méně než 2 % SSR diastereoisomeru) v podstatě ve formě A s obsahem vody 4,1 % hmot./hmot.

Příklad 10

Produkt z příkladu 2 (1 g) se rozpustí v cyklohexanu (20 ml) a roztok se destiluje při atmosférickém tlaku při teplotě 80 °C na objem 7 ml. Čirý roztok se nechá ochladit na 24 °C. Suspendovaná pevná látka se sebere vakuovou filtrací, která se provádí pod atmosférou suchého dusíku a suší se v exsikátoru ve vakuu v přítomnosti oxidu fosforečného. Tak se získá krystalický diastereoisomer (obsahující méně než 2 %

SSR diastereoisomeru) v podstatě ve formě ketonu; (XDS spektrum ukazuje obrázek 4).

Schéma 1 i

CSZ-NH COJH

HN

COjR

T

CBZ = benzyloxykarbonyl

Vhodné podmínky zahrnuj í:

(a) DMF, 1-hydroxybenztriazol, Et-^N, dicykíohexylkarbodiimid, ⁰ C až teplota okolí (b) R = ^cBu: trifluoroctová kyselina, CH₂C1₂, 0 °Č až teplota okolí

R = Me: methanol/vodný NaOH, teplota okolí (c) ⁱBuO.CO.Cl, N-methylmorfolin, THF, -35 °C až 0 °C, následované aminoalkoholem (d) H₂, 10% Pd-C, EtOH (e) CH₃O.CO.C1, Et₃N, CH₂C1₂, 0 °C

Schéma 2

('Ί

- ύ!

Schéma 2 (pokračování)

Vhodné podmínky pro schéma 2 zahrnuj í:

Stupně (l), (8), (9); jako pro stupeň (d) schématu 1; Stupně (2), (7), (11): MeOCOCl, Et^N nebo N-methylmorfolin, CH₂C1₂ nebo THF, 0 °C až 30 °C; Stupně (3), (6): kyselina trifluoroctová, CH₂C1₂, 0 °C až teplota okolí; Stupně (4), (5): jako stupeň (a) schématu 1; Stupeň (10): Me^SiCl, THF, N-methylmorfolin, 0 až 30 °C; Stupeň (12): kyselá vodná hydrolýza; Stupně (13), (14): jako stupeň (c) schéma 1.

Schéma 3

Claims (16)

1. i. Derivát prolinu vzorce I

   NÁROKY nebo jeho solvatovaná forma nebo jeho ketal nebo hemiketal, jako diastereoisomerní směs, obsahující 50 % nebo více diastereoisomeru vzorce Ia , nebo jeho soivatované formy nebo ketalu nebo nebo hemiketalu.
2. 2. Derivát prolinu podle nároku 1, vzorce I, kterým je (S)-1-[(Š)-2-(methoxykarbonylamino)-3-methylbutyryl]-N-[2methyl-1-(trifluoracetyl)propyl]pyrrolidin-2-karboxamid nebo jeho solvát, oba ve formě diastereoisomerní směsi (S)-1- [(S)2-(methoxykarbonylamino)-3-methylbutyryl]-N-[(S)-2-methyl-l(trifluoracetyl)propyl]pyrrolidin-2-karboxamidu nebo jeho solvátu a (S)-1-[(S)-2_T(methoxykarbonylamino)-3-methylbutyryl] -N-[ (R)-2-methyl-1-(trifluoracetyl)propyl]pyrrolidin-2karboxamid nebo jeho solvát a ve formě v podstatě čistého diastereoisomeru (S)-1-[(S)-2-(methoxykarbonylamino)-3methylbutyryl] -N-[(S)-2-methyl-l-(trifluoracetyl)propyl]pyrrolidin-2-karboxamidu vzorce Ia nebo jeho solvátu.
3. 3. Derivát prolinu, solvát, ketal nebo hemiketal, jak je nárokováno v nároku 1 nebo 2, který je v krystalické formě.
4. 4. Derivát prolinu nebo solvát jak je nárokováno v kterémkoliv z předchozích nároků, který je ve formě v podstatě čistého diastereoisomerů vzorce la nebo jeho hydratované formy.
5. 5. Derivát prolinu jak je nárokován v kterémkoliv z předchozích nároků, který je v podstatě ve formě čistého diastereoisomerů vzorce Ib nebo jeho hydratované formy nebo jeho farmaceuticky použitelné soli.
6. 6. ' Derivát prolinu jak je nárokováno v nároku 4, který je krystalický, je v hydratované formě a má rentgenogram práškového materiálu obsahující píky při okolo 2-theta = 10,8, 11,4, 15,4, 21,6 a 21,9 stupňů.
7. 7. Derivát prolinu jak je nárokováno v nároku 4, který je krystalický, jev hydratované formě a má rentgenogram práškového materiálu obsahující specifické píky při okolo 2-theta = 7,2, 7,4, 9,0, 9,2, 10,8, 11,3, 14,5, 15,9, 17,8, 19,7 a 22,5 stupňů.
8. 8. Farmaceutický prostředek vyznačující se tím, že obsahuje derivát prolinu, solvát, ketal, hemiketal nebo farmaceuticky přijatelnou sůl jak je nárokováno v kterémkoliv z předchozích nároků, společně s farmaceuticky přijatelným ředidlem nebo nosičem.
9. 9. Způsob přípravy derivátu prolinu podle nároku 1 vzorce I nebo jeho solvatované formy, vyznačující se tím, že se oxiduje sloučenina vzorce II

   - 4U - vhodným oxidačním činidlem,
10. 10. Způsob přípravy podle nároku 9, vyznačuj ící se t í m, že se použije sloučenina vzorce Ila

    O . =

    HO jako výchozí látka.
11. 11. Způsob podle nároku 10,vyznačující se tím, že dále následuje tvoření krystalů z roztoku produktu v rozpouštědle, vybrané ze souboru, který zahrnuje butylacetát, směs butylacetátu a hexanu, směs acetonu a vody, směs acetonu a hexanu, směs acetonu a petrolétheru teploty varu 100 až 120 °C, směs 1,2-dimethoxyethenu a hexanu,, směs 1,2-dimethoxyethanu, vody a hexanu, směs ethylacetátu, hexanu a vody, vodu, směs dibutyletheru a hexanu, směs dichlormethanu a hexanu, směs methanolu a toluenu, směs terč.butyl methyletheru a hexanu, směs isopropanolu a hexanu a směs tetrahydrofuranu a hexanu.
12. 12. Způsob, přípravy derivátu prolinu jak je nárokováno v nároku 6 nebo v nároku 7,vyznačující se tím, že zahrnuje tvořeni krystalů z roztoku v podstatě čistého diastereoisomeru vzorce Ia v hydratované formě v rozpouštědle vybraném ze souboru, který zahrnuje butylacetát, směs butylacetátu a hexanu, směs acetonu a vody, směs acetonu a hexanu, směs acetonu a petrolétheru, teploty varu 100 až 120 °C, směs 1,2-dimethoxyethanu a hexanu, směs 1,2-dimethoxyethanu, vody a hexanu, směs ethylacetátu a hexanu, směs ethylacetátu, hexanu a vody a vodu.
13. 13. Derivát prolinu vzorce I připravený postupem podle nároku 11 nebo 12.
14. 14. Derivát prolinu vzorce II nebo Ha.

    -.11..1..11' JLTt..JT' ' Ji-ťHi ·|ΐίι1|^|ΐί 'y.lll IŤT' .^1, '
15. 15. Způsob přípravy meziproduktu (2R,3S)-3-amino-4-methyl1,1,l-trifluor-2-pentanolu nebo jeho soli, vyznačuj. ící se tím, že zahrnuje

    i) reakci (4RS,5SR)-4-isopropyl-5-trifluormethyloxazolidin2-onu nebo jeho soli s alkalickým kovem, s (-)-menthylchlorformiátem za vzniku (4RS,5SR)-4-isopropyl-3-[(lR,3R,4S)-3-pmenthyloxykarbonyl]-5-trifluormethyloxazolidin-2-onu, ii) separaci isomeru (4S,5R)-4-isopropyl-3-[(lR,3R,4S)-3-pmenthyloxykarbonylj-5-trifluormethyloxazolidin-2-onu a iii) hydrolýzu isomeru (4S,5R)-4-isopropyl-3-[(IR,3R,4S)-3-pmenthyl thyloxykarbonyl]-5-trifluormethyloxazolidin-2-onu při bazických podmínkách za vzniku (2R,3Ξ)-3-amino-4-methyl-1,1,1trifluor-2-pentanolu.
16. 16. Způsob podání derivátu prolinu podle nároku 1 vzorce

    I nebo jejího solvátu člověku, v případě potřeby, k léčbě nemoci nebo- Stavu, kdy je poškozena lidská leukocyt-elastáza.