CZ2014809A3 - Způsob kultivace in vitro rostoucích oocytů zvířat - Google Patents
Způsob kultivace in vitro rostoucích oocytů zvířat Download PDFInfo
- Publication number
- CZ2014809A3 CZ2014809A3 CZ2014-809A CZ2014809A CZ2014809A3 CZ 2014809 A3 CZ2014809 A3 CZ 2014809A3 CZ 2014809 A CZ2014809 A CZ 2014809A CZ 2014809 A3 CZ2014809 A3 CZ 2014809A3
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- oocytes
- vitro
- maturation
- sulfane
- metaphase
- Prior art date
Links
- 210000000287 oocyte Anatomy 0.000 title claims abstract description 52
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 title claims abstract description 25
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 title claims abstract description 7
- 238000012258 culturing Methods 0.000 title claims description 4
- RWSOTUBLDIXVET-UHFFFAOYSA-N Dihydrogen sulfide Chemical compound S RWSOTUBLDIXVET-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 13
- 230000003698 anagen phase Effects 0.000 claims abstract description 11
- 229910000037 hydrogen sulfide Inorganic materials 0.000 claims abstract description 11
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 25
- 230000035800 maturation Effects 0.000 claims description 16
- 230000031864 metaphase Effects 0.000 claims description 12
- 230000012010 growth Effects 0.000 claims description 11
- 229910052979 sodium sulfide Inorganic materials 0.000 claims description 6
- GRVFOGOEDUUMBP-UHFFFAOYSA-N sodium sulfide (anhydrous) Chemical compound [Na+].[Na+].[S-2] GRVFOGOEDUUMBP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- HYHCSLBZRBJJCH-UHFFFAOYSA-M sodium hydrosulfide Chemical compound [Na+].[SH-] HYHCSLBZRBJJCH-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 4
- QDSAKNAFJWRQIV-UHFFFAOYSA-N (4-methoxyphenyl)-morpholin-4-yl-sulfanyl-sulfanylidene-$l^{5}-phosphane Chemical compound C1=CC(OC)=CC=C1P(S)(=S)N1CCOCC1 QDSAKNAFJWRQIV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- WBHQBSYUUJJSRZ-UHFFFAOYSA-M sodium bisulfate Chemical compound [Na+].OS([O-])(=O)=O WBHQBSYUUJJSRZ-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 2
- 229910000342 sodium bisulfate Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 2
- 230000001850 reproductive effect Effects 0.000 abstract description 5
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 4
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 3
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 3
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 3
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 3
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 3
- -1 (p-methoxyphenyl) morpholino Chemical group 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 210000002257 embryonic structure Anatomy 0.000 description 2
- 230000004720 fertilization Effects 0.000 description 2
- 244000144972 livestock Species 0.000 description 2
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 2
- 230000001776 parthenogenetic effect Effects 0.000 description 2
- YZMHNNLDUWRZFW-UHFFFAOYSA-N (4-methoxyphenyl)-morpholin-4-yl-sulfanyl-sulfanylidene-$l^{5}-phosphane;morpholine Chemical compound C1COCC[NH2+]1.C1=CC(OC)=CC=C1P([S-])(=S)N1CCOCC1 YZMHNNLDUWRZFW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000001253 Protein Kinase Human genes 0.000 description 1
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 244000052616 bacterial pathogen Species 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 1
- 210000002459 blastocyst Anatomy 0.000 description 1
- 210000001109 blastomere Anatomy 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000001671 embryonic stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 230000008092 positive effect Effects 0.000 description 1
- 108060006633 protein kinase Proteins 0.000 description 1
- 238000010374 somatic cell nuclear transfer Methods 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 1
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Řešení se týká způsobu zdokonalené kultivace oocytů s neukončenou růstovou fází v podmínkách in vitro využívající kultivace v subtoxických koncentracích sulfanu. Tato kultivace má velké využití při reprodukčních biotechnologiích hospodářských zvířat.
Description
1
Způsob kultivace in vitro rostoucích oocytů zvířat Oblast techniky Řešení se týká zvýšení vývojové schopnosti rostoucích oocytů kultivací v subtoxických koncentracích sulfanu v podmínkách in vitro. Tento způsob kultivace má velký význam zejména při asistované reprodukci hospodářských zvířat.
Dosavadní stav techniky V současné době se pro asistovanou reprodukci savců (klonování, in vitro oplození, transgenoze) včetně hospodářsky významných druhů využívají oocyty, což jsou samičí pohlavní buňky, které ukončily v těle samice růstovou fázi. Těchto oocytů je vdaný okamžik od jednoho zvířete dostupný jen omezený počet a to limituje využití metod asistované reprodukce. Kromě oocytů s ukončenou růstovou fází se nachází ve vaječnících samice i mnohonásobně vyšší počet oocytů, které ještě růstovou fázi neukončily. Tyto oocyty ale mají sníženou vývojovou schopnost a pro metody asistované reprodukce je nelze použít. To významně snižuje možnosti využití šlechtitelského potenciálu samic s vysokou plemennou hodnotou a omezuje možnosti asistované reprodukce, protože se často nedaří získat dostatek oocytů ve fázi ukončeného růstu. Pokud by se podařilo zvýšit vývojové schopnosti oocytů s neukončenou růstovou fází, využití šlechtitelského potenciálu samic by se zvýšilo a zefektivnily by se i postupy asistované reprodukce.
Podstata vynálezu
Uvedené problémy odstraňuje způsob kultivace in vitro rostoucích oocytů zvířat podle vynálezu, jehož podstata spočívá vtom, že na oocyty s neukončeným růstem se působí během jejich zrání v podmínkách in vitro subtoxickými koncentracemi sulfanu. 2
Způsob podle vynálezu je charakterizován tím, že se oocyty s neukončenou růstovou fází kultivují in vitro s látkami, které působí jako donor sulfanu po dobu, která je u daného druhu běžně nutná pro postup zrání oocytů do metafáze II.
Způsob podle vynálezu je dále charakterizován tím, že se na oocyty s neukončeným růstem a neúplně vyvinutou vývojovou schopností během jejich zrání in vitro působí donory sulfanu, které jsou vybrány ze skupiny sirníku sodného Na2S v koncentracích od 10 do 500 nM, hydrogensirníku sodného NaHS v koncentracích od 5 do 250 nM a kyseliny (p-methoxyfenyl) morfolino-fosfinodithiové v koncentracích od 20 do 200 μΜ, přičemž tato kultivace trvá po dobu, která odpovídá době nutné v podmínkách kultivace in vitro pro postup zrání oocytů do stádia metafáze II.
Způsob zvýšení vývojové schopnosti oocytů podle vynálezu se konkrétně výhodně provádí tak, že se nezralé savčí oocyty s neukončeným růstem a neúplně vyvinutou vývojovou schopností in vitro nejprve kultivují v médiu s donorem sulfanu. Např. Na2S se používá v koncentracích od 10 do 500 nM, NaHS se používá v koncentracích od 5 do 250 nM a kyselina (p-methoxyfenyl) morfolino-fosfinodithiová se používá v koncentracích od 20 do 200 μΜ. Kultivace trvá dobu, která je u daného druhu potřebná pro dozrání oocytů s ukončenou růstovou fází a plnou vývojovou schopností v podmínkách in vitro (tj. u prasete asi 44 hodin, u skotu 22 až 24 hodin).
Způsobem podle vynálezu jsou oocyty vystaveny působení sulfanu, což má pozitivní vliv na aktivitu protein kináz regulujících zrání oocytů. To se ukazuje jako velmi výhodné, protože experimenty původců prokázaly, že kultivace s donory sulfanu má příznivý efekt na zrání rostoucích oocytů. Pokud není použit způsob podle vynálezu, zastaví většina kultivovaných oocytů s neukončeným růstem a neúplnou vývojovou schopností zrání ve stádiu metafáze I a jsou pro většinu biotechnologií nepoužitelné. Způsobem podle vynálezu je dosaženo úplného zrání oocytů do metafáze II u 60 % oocytů. 3
Tyto oocyty lze použít pro další reprodukční biotechnologie, protože jsou s to se vyvíjet v embrya. Výsledkem způsobu kultivace podle vynálezu je podstatné zvýšení podílu oocytů, jež dokončí zrání a jsou využitelné pro další reprodukční biotechnologie. Ve srovnání s tradičními postupy kultivace je nárůst podílu dozrálých oocytů zhruba dvojnásobný, což má velký hospodářský význam. Způsob kultivace in vitro oocytů s neukončenou růstovou fází a neúplnou vývojovou schopností podle vynálezu lze využít zejména při reprodukčních biotechnologiích hospodářských zvířat (např. klonování, ICSI).
Způsob zvýšení vývojové schopnosti rostoucích oocytů kultivací in vitro v subtoxických koncentracích sulfanu podle vynálezu byl původci úspěšně ověřen v laboratořích a stájích u přihlašovatelů, kterými jsou Česká zemědělská univerzita v Praze a Výzkumný ústav živočišné výroby, v.v.i., oba v Praze, CZ. Následující příklady provedení způsob podle vynálezu pouze dokládají, aniž by ho jakkoliv omezovaly. Příklady provedení Příklad 1 Při klasické kultivaci prasečích oocytů s neukončeným růstem dochází v podmínkách in vitro k dokončení zrání do stádia metafáze II u 20 % oocytů. Způsobem podle vynálezu jsou prasečí oocyty s neukončenou růstovou fází kultivovány 44 hodin v kultivačním médiu s přídavkem 150 nM NaHS. Při tomto postupu stoupá významně podíl dozrálých oocytů, které dosáhnou stádia metafáze II (kolem 60 %). Takto získané oocyty lze podrobit standardní partenogenetické aktivaci a navodit u nich vývoj do stádia blastocysty. Takto získané savčí partenogenetické zárodky ve vývojovém stádiu blastocyty lze využít například pro tvorbu embryonálních kmenových buněk. 4 • · ·· ·Μ ··· · Příklad 2 Při tradiční kultivaci oocytů skotu s neukončeným růstem dochází v podmínkách in vitro k dokončení zrání do stádia metafáze II u 15 % oocytů. Způsobem podle vynálezu jsou oocyty skotu s neukončenou růstovou fází kultivovány 24 hodin v kultivačním médiu se 200 nM Na2S. Při tomto postupu stoupá významně podíl dozrálých oocytů, které dosáhnou stádia metafáze II (57 %). Takto získané oocyty lze podrobit standardnímu oplození in vitro. Úspěšně oplozené oocyty se dále vyvíjejí v embrya vhodná pro přenos náhradní matce. Příklad 3 Při klasické kultivaci prasečích oocytů s neukončeným růstem dochází v podmínkách in vitro k dokončení zrání do stádia metafáze II u 20 % oocytů. Způsobem podle vynálezu jsou prasečí oocyty s neukončenou růstovou fází kultivovány v kultivačním médiu s přídavkem 100 μΜ kyseliny (p-methoxyfenyl) morfolino-fosfinodithiové (GYY4137). Při tomto postupu stoupá významně podíl dozrálých oocytů, které dosáhnou stádia metafáze II (kolem 60 %). Takto získané oocyty lze použít pro produkci cytoplastů pro klonování přenosem jader somatických buněk.
Průmyslová využitelnost Řešení se týká zdokonaleného kultivačního postupu oocytů in vitro, jenž využívá účinků subtoxických koncentrací sulfanu, což má velký význam při reprodukčních biotechnologiích hospodářských zvířat.
Claims (3)
- 5 MM Μ· PATENTOVÉ NÁROKY 1. Způsob kultivace in vitro rostoucích oocytů zvířat vyznačující se tím, že na oocyty s neukončeným růstem se působí během jejich zrání v podmínkách in vitro subtoxickými koncentracemi sulfanu.
- 2. Způsob podle nároku 1, vyznačující se tím, že se oocyty s neukončenou růstovou fází kultivují in vitro s látkami, které působí jako donor sulfanu po dobu, která je u daného druhu běžně nutná pro postup zrání oocytů do metafáze II.
- 3. Způsob podle nároku 1, vyznačující se tím, že se na oocyty s neukončeným růstem a neúplně vyvinutou vývojovou schopností během jejich zrání in vitro působí donory sulfanu, které jsou vybrány ze skupiny sirníku sodného Na2S v koncentracích od 10 do 500 nM, hydrogensirníku sodného NaHS v koncentracích od 5 do 250 nM a kyseliny (p-methoxyfenyl) morfolino-fosfinodithiové v koncentracích od 20 do 200 μΜ, přičemž tato kultivace trvá po dobu, která odpovídá době nutné v podmínkách kultivace in vitro pro postup zrání oocytů do stádia metafáze II.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CZ2014-809A CZ2014809A3 (cs) | 2014-11-21 | 2014-11-21 | Způsob kultivace in vitro rostoucích oocytů zvířat |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CZ2014-809A CZ2014809A3 (cs) | 2014-11-21 | 2014-11-21 | Způsob kultivace in vitro rostoucích oocytů zvířat |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ2014809A3 true CZ2014809A3 (cs) | 2016-06-01 |
Family
ID=56087608
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ2014-809A CZ2014809A3 (cs) | 2014-11-21 | 2014-11-21 | Způsob kultivace in vitro rostoucích oocytů zvířat |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CZ (1) | CZ2014809A3 (cs) |
-
2014
- 2014-11-21 CZ CZ2014-809A patent/CZ2014809A3/cs unknown
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2018122615A (ru) | Способы, среда и продукты для культивирования эмбрионов | |
| CN107460161A (zh) | 一种促进未成熟卵母细胞体外成熟的培养基及其应用 | |
| Sun et al. | Progress in in vitro culture and gene editing of porcine spermatogonial stem cells | |
| CZ2014809A3 (cs) | Způsob kultivace in vitro rostoucích oocytů zvířat | |
| CN110684720B (zh) | 一种以异种动物间的卵母细胞为介质获得雄原核的方法 | |
| KR20190123556A (ko) | 고로쇠 수액 과립을 유효성분으로 포함하는 체외수정용 배지 조성물 및 이를 이용한 체외수정 방법 | |
| CZ307949B6 (cs) | Způsob eliminace defektů zrání savčích oocytů vyvolaných glyfosátem C | |
| CZ2018320A3 (cs) | Způsob eliminace defektů zrání savčích oocytů vyvolaných glyfosátem B | |
| CZ307948B6 (cs) | Způsob eliminace defektů zrání savčích oocytů vyvolaných glyfosátem C | |
| CZ2010394A3 (cs) | Zpusob zvýšení vývojové schopnosti rostoucích oocytu aktivací protein kináz C | |
| CZ302580B6 (cs) | Kultivacní medium na prodloužení životnosti savcích oocytu in vitro a zpusob tohoto prodloužení | |
| CZ299271B6 (cs) | Použití inhibitoru histon deacetylázy pro prípravu kultivacního média na prodloužení životnosti savcích oocytu in vitro | |
| CZ2018300A3 (cs) | Způsob eliminace defektů zrání savčích oocytů vyvolaných glyfosátem A | |
| CZ2017366A3 (cs) | Způsob elimace defektů zrání savčích oocytů vyvolaných bisfenolem A nebo bisfenolem S | |
| CN102242151A (zh) | 一种利用显微授精技术生产转基因兔的方法 | |
| KR102027561B1 (ko) | 실라짓 또는 이의 추출물을 유효성분으로 포함하는 체외수정용 배지 조성물 및 이를 이용한 체외수정 방법 | |
| CZ2008441A3 (cs) | Zpusob zvýšení vývojové schopnosti rostoucích oocytu inhibicí kalcineurinu | |
| CZ2014296A3 (cs) | Kultivační medium pro zvýšení kvality savčích oocytů dozrálých v podmínkách in vitro | |
| CZ2014230A3 (cs) | Kultivační médium pro prodloužení životnosti savčích oocytů in vitro | |
| CZ297528B6 (cs) | Použití inhibitoru MAP kinázy JNK pro přípravu kultivačního média na prodloužení životnosti savčích oocytů in vitro | |
| CZ26979U1 (cs) | Kultivační médium pro prodloužení životnosti savčích oocytů in vitro | |
| CZ301317B6 (cs) | Zpusob zvýšení vývojové schopnosti rostoucích oocytu inhibicí histon deacetylázy | |
| CZ27174U1 (cs) | Kultivační medium pro zvýšení kvality savčích oocytů dozrálých v podmínkách in vitro | |
| CZ302925B6 (cs) | Použití aktivátoru draslíkových kanálu závislých na ATP pro prípravu kultivacního média na prodloužení životnosti savcích oocytu in vitro | |
| CZ21336U1 (cs) | Kultivační médium na prodloužení životnosti savčích oocytů in vitro |