CZ200467A3 - Metabolicky řízený způsob fermentace pro výrobu pseudomonové kyseliny - Google Patents
Metabolicky řízený způsob fermentace pro výrobu pseudomonové kyseliny Download PDFInfo
- Publication number
- CZ200467A3 CZ200467A3 CZ200467A CZ200467A CZ200467A3 CZ 200467 A3 CZ200467 A3 CZ 200467A3 CZ 200467 A CZ200467 A CZ 200467A CZ 200467 A CZ200467 A CZ 200467A CZ 200467 A3 CZ200467 A3 CZ 200467A3
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- fermentation
- acid
- fermentation process
- medium
- pseudomonic acid
- Prior art date
Links
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 title claims abstract description 157
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 title claims abstract description 157
- MINDHVHHQZYEEK-UHFFFAOYSA-N (E)-(2S,3R,4R,5S)-5-[(2S,3S,4S,5S)-2,3-epoxy-5-hydroxy-4-methylhexyl]tetrahydro-3,4-dihydroxy-(beta)-methyl-2H-pyran-2-crotonic acid ester with 9-hydroxynonanoic acid Natural products CC(O)C(C)C1OC1CC1C(O)C(O)C(CC(C)=CC(=O)OCCCCCCCCC(O)=O)OC1 MINDHVHHQZYEEK-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 68
- MINDHVHHQZYEEK-HBBNESRFSA-N mupirocin Chemical compound C[C@H](O)[C@H](C)[C@@H]1O[C@H]1C[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](C\C(C)=C\C(=O)OCCCCCCCCC(O)=O)OC1 MINDHVHHQZYEEK-HBBNESRFSA-N 0.000 title claims abstract description 67
- 229960003128 mupirocin Drugs 0.000 title claims abstract description 41
- 229930194369 pseudomonic acid Natural products 0.000 title claims description 35
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 title 1
- 241000589774 Pseudomonas sp. Species 0.000 claims abstract description 22
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 16
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 claims abstract description 16
- JGKQAKOVZJHZTF-LHSFDMIQSA-N 9-[(e)-3-methyl-4-[(2s,3r,4s,5r)-3,4,5-trihydroxy-5-[[(2s,3s)-3-[(2s,3s)-3-hydroxybutan-2-yl]oxiran-2-yl]methyl]oxan-2-yl]but-2-enoyl]oxynonanoic acid Chemical compound C[C@H](O)[C@H](C)[C@@H]1O[C@H]1C[C@]1(O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](C\C(C)=C\C(=O)OCCCCCCCCC(O)=O)OC1 JGKQAKOVZJHZTF-LHSFDMIQSA-N 0.000 claims abstract description 15
- JGKQAKOVZJHZTF-LMLZBOKOSA-N Pseudomonic acid B Natural products O=C(OCCCCCCCCC(=O)O)/C=C(\C[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@](O)(C[C@H]2[C@@H]([C@H]([C@@H](O)C)C)O2)CO1)/C JGKQAKOVZJHZTF-LMLZBOKOSA-N 0.000 claims abstract description 15
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 claims abstract description 10
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims abstract description 10
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 claims abstract description 8
- 239000011707 mineral Substances 0.000 claims abstract description 8
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims description 43
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 28
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 claims description 22
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 18
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 15
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 14
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims description 14
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N glycerol group Chemical group OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 13
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 10
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 10
- 239000003929 acidic solution Substances 0.000 claims description 9
- 239000012670 alkaline solution Substances 0.000 claims description 8
- KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M Potassium hydroxide Chemical compound [OH-].[K+] KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 7
- 230000001276 controlling effect Effects 0.000 claims description 5
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 4
- 241000589516 Pseudomonas Species 0.000 claims description 3
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 claims description 3
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 claims description 3
- GRYLNZFGIOXLOG-UHFFFAOYSA-N Nitric acid Chemical compound O[N+]([O-])=O GRYLNZFGIOXLOG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 229910017604 nitric acid Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 229930184577 Pseudomonic Natural products 0.000 claims 2
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 claims 1
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims 1
- DDHVILIIHBIMQU-YJGQQKNPSA-L mupirocin calcium hydrate Chemical compound O.O.[Ca+2].C[C@H](O)[C@H](C)[C@@H]1O[C@H]1C[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](C\C(C)=C\C(=O)OCCCCCCCCC([O-])=O)OC1.C[C@H](O)[C@H](C)[C@@H]1O[C@H]1C[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](C\C(C)=C\C(=O)OCCCCCCCCC([O-])=O)OC1 DDHVILIIHBIMQU-YJGQQKNPSA-L 0.000 abstract description 5
- 229930187697 mupirocin Natural products 0.000 abstract description 4
- 238000012258 culturing Methods 0.000 abstract description 2
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 abstract description 2
- 239000012535 impurity Substances 0.000 abstract description 2
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 abstract 1
- 239000003513 alkali Substances 0.000 abstract 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 60
- 229960001031 glucose Drugs 0.000 description 20
- 238000005273 aeration Methods 0.000 description 7
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 7
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000012447 hatching Effects 0.000 description 6
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 6
- 235000010755 mineral Nutrition 0.000 description 5
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 5
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 5
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M Potassium chloride Chemical compound [Cl-].[K+] WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 4
- 230000002706 hydrostatic effect Effects 0.000 description 4
- 238000010979 pH adjustment Methods 0.000 description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 4
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 3
- VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L Calcium carbonate Chemical compound [Ca+2].[O-]C([O-])=O VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 3
- 238000005187 foaming Methods 0.000 description 3
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 3
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 3
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 3
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 3
- SPFMQWBKVUQXJV-BTVCFUMJSA-N (2r,3s,4r,5r)-2,3,4,5,6-pentahydroxyhexanal;hydrate Chemical compound O.OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C=O SPFMQWBKVUQXJV-BTVCFUMJSA-N 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910021380 Manganese Chloride Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000019486 Sunflower oil Nutrition 0.000 description 2
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 2
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 2
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 2
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 2
- 230000003698 anagen phase Effects 0.000 description 2
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 229910000019 calcium carbonate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 2
- 229960000673 dextrose monohydrate Drugs 0.000 description 2
- 235000013312 flour Nutrition 0.000 description 2
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 2
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 2
- 239000011565 manganese chloride Substances 0.000 description 2
- 235000002867 manganese chloride Nutrition 0.000 description 2
- 229940099607 manganese chloride Drugs 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 2
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 2
- 239000001103 potassium chloride Substances 0.000 description 2
- 235000011164 potassium chloride Nutrition 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 2
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 2
- 239000002600 sunflower oil Substances 0.000 description 2
- 241000606768 Haemophilus influenzae Species 0.000 description 1
- 241000588747 Klebsiella pneumoniae Species 0.000 description 1
- GLFNIEUTAYBVOC-UHFFFAOYSA-L Manganese chloride Chemical compound Cl[Mn]Cl GLFNIEUTAYBVOC-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 241000588653 Neisseria Species 0.000 description 1
- 241000191967 Staphylococcus aureus Species 0.000 description 1
- 241000193998 Streptococcus pneumoniae Species 0.000 description 1
- 241000193996 Streptococcus pyogenes Species 0.000 description 1
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 1
- 239000010775 animal oil Substances 0.000 description 1
- 229940126573 antibacterial therapeutic Drugs 0.000 description 1
- 229940028420 bactroban Drugs 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- -1 calcium chloride Chemical class 0.000 description 1
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 229940047650 haemophilus influenzae Drugs 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-ZSJDYOACSA-N heavy water Substances [2H]O[2H] XLYOFNOQVPJJNP-ZSJDYOACSA-N 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 239000000543 intermediate Substances 0.000 description 1
- 238000009630 liquid culture Methods 0.000 description 1
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 229910000403 monosodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019799 monosodium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000015816 nutrient absorption Nutrition 0.000 description 1
- 235000006286 nutrient intake Nutrition 0.000 description 1
- 235000014593 oils and fats Nutrition 0.000 description 1
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- PJNZPQUBCPKICU-UHFFFAOYSA-N phosphoric acid;potassium Chemical compound [K].OP(O)(O)=O PJNZPQUBCPKICU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 1
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 238000013094 purity test Methods 0.000 description 1
- 230000001718 repressive effect Effects 0.000 description 1
- AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M sodium dihydrogen phosphate Chemical compound [Na+].OP(O)([O-])=O AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000012086 standard solution Substances 0.000 description 1
- 229940031000 streptococcus pneumoniae Drugs 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 235000011149 sulphuric acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 1
- 239000011573 trace mineral Substances 0.000 description 1
- 235000013619 trace mineral Nutrition 0.000 description 1
- 239000008158 vegetable oil Substances 0.000 description 1
- 235000013311 vegetables Nutrition 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P17/00—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms
- C12P17/16—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms containing two or more hetero rings
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P17/00—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms
- C12P17/16—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms containing two or more hetero rings
- C12P17/162—Heterorings having oxygen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. Lasalocid
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Virology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Oncology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Description
METABOLICKY ŘÍZENÝ ZPŮSOB FERMENTACE PRO VÝROBU PSEUDOMONOVÉ KYSELINY
Odkaz na související přihlášku
Tato přihláška si podle 35 U.S.C. §119 (e) nárokuje prospěch z prozatímní patentové přihlášky Spojených Států č. 60/299 927, podané 21. června, 2001, jejíž obsah je celý zahrnut v tomto textu.
Oblast techniky
Předkládaný vynález se týká metabolicky řízeného způsobu fermentace pro výrobu pseudomonové kyseliny. Konkrétně se předkládaný vynález týká způsobu fermentace pro výrobu pseudomonové kyseliny A regulací hodnoty pH fermentačního kultivačního média prostřednictvím toho, že se do média přidává dextróza, minerální sůl, jako je například chlorid vápenatý, kyselý roztok nebo alkalický roztok.
Dosavadní stav techniky
Pseudomonové kyselina A, také známá jako mupirocin, představuje hlavní složku pseudomonové kyseliny. Pseudomonové kyselina A byla poprvé objevena autory A. T. Fuller et al. V roce 1971 [Nátuře, 234, 416, 1971]. Pseudomonové kyselina A má následující chemický název a obchodní názvy: [2Š-[2 alpha (E), 3 bleta, 4 bleta, 5 alpha [2R*, 3R* (IR*,2R*)]]]-9-[[3methyl-l-oxo-4-[tetrahydro-3,4-dihydroxy-5-[[3-(2-hydroxy-lmethylpropyl)oxiranyl]methyl]-2H-pyran-2-yl]-2-butenyl]oxy]nonanová kyselina, pseudomonové kyselina A, trans-pseudomonová kyselina, BRL-4910A, Bactoderm, Bactroban a Turixin.
• · ·
Pseudomonová kyselina má topickou antíbakteriální terapeutickou aktivitu.
Pseudomonová kyselina A (Mupirocin)
Pseudomonová kyselina A je silné antibiotikum proti Gram(+) baktériím ’ (Staphylococcus aureus, Streptococcus pyogenes, Streptococcus pneumoniae, Klebsiella pneumoniae) Gram(-) baktériím (Haemophilus influenzae, gonorrhoeae) [A. Ward, D. M. Campoli-Richards:
a některým Neisseria Drugs, 32, 425-444, 1986].
za to, že mechanismus
Má se působení zahrnovat inhibici enzymu isoleucin-tRNA syntázy, který ovlivňuje syntézu peptidů v baktériích [J. Hughes a G.Mellows: Biochem. Journal, 191, 209-219, 1980]. Popisy z uvedených literárních odkazů jsou v plném znění zahrnuty formou odkazu.
V současnosti je pseudomonová kyselina vyráběna kultivací Pseudomonas sp. Obvyklý dávkovači systém používající tzv. „fed-batch technologii zahrnuje zásobování živinami na začátku způsobu fermentace bez regulace pH a koncentrace živin.
důsledku fluktuace hladiny pH (spotřebování) živin během způsobu fermentace a deplece ,fed-batch, výtěžek pseudomonové kyseliny je často snížen. Současné zvýšení množství nežádoucích příměsí často představuje hlavní nevýhodu „fed-batch technologie.
Existuje trvalá potřeba zlepšit způsob· fermentace pro
4 9
444 »·
4494 přípravu pseudomonové kyseliny, obzvláště zvýšit stupeň čistoty produktu pseudomonové kyseliny A (např. podstatně snížit nežádoucí příměs pseudomonové kyseliny B).
Podstata vynálezu
Podle jednoho aspektu předkládaný vynález poskytuje zlepšený způsob výroby pseudomonové kyseliny obsahující kroky:
a) přípravy fermentačního média obsahujícího mikroorganismus produkující pseudomonovou kyselinu,
b) regulace pH fermentačního média a
c) získání pseudomonové kyseliny z fermentačního média.
Podle dalšího aspektu předkládaný vynález poskytuje účinný způsob výroby pseudomonové kyseliny, která dosahuje vysokého stupně čistoty (tj. poměr nežádoucí příměsi pseudomonové kyseliny B k pseudomonové kyselině A je menší než 3 %) . Předkládaný vynález tedy poskytuje zlepšený a ekonomický způsob fermentace pro výrobu zvýšeného výtěžku vysoce purifikované pseudomonové kyseliny A.
Podle dalšího aspektu předkládaný vynález poskytuje způsob fermentace pro výrobu pseudomonové kyseliny s použitím kmene Pseudomonas sp. Deponovaného pod číslem kódu NCAIM (P)B 001235 v National Collection of the Agricultural and Industrial Micro-organisms.
Podle dalšího aspektu předkládaný vynález poskytuje způsob fermentace, přičemž pH fermentačního kultivačního média je upraveno tak, aby bylo přibližně 5,5 až 6,0 v průběhu fermentace. Nejvýhodněji je pH fermentačního média regulováno na přibližně 5,7.
Podle dalšího aspektu předkládaný vynález poskytuje způsob • · • · · · · · · « · • · · · · ··· · ··· • · ··· · · ·· · · · ····· • · · · · · « · · · ·· ·· ·· ·· ·· · fermentace pro výrobu pseudomonové kyseliny, kde pH je regulováno zásobováním fermentačního kultivačního média zdrojem asimilovatelného uhlíku. Výhodně je zdroj asimilovatelného uhlíku dextróza.
Podle dalšího aspektu předkládaný vynález poskytuje způsob fermentace pro výrobu pseudomonové kyseliny, kde dextróza je udržován v hladině menší než přibližně 0,5 % ve fermentačním médiu během produkční fáze.
Podle dalšího aspektu předkládaný vynález poskytuje způsob fermentace pro výrobu pseudomonové kyseliny, kde fermentační kultura je zásobována roztokem obsahujícím alespoň 0,1% chlorid vápenatý (CaCl2) během produkční fáze fermentace.
Podle dalšího aspektu předkládaný vynález poskytuje způsob fermentace pro výrobu pseudomonové kyseliny, kde pH fermentačního kultivačního média je regulováno zásobováním fermentačního média alkalickým roztokem a/nebo kyselým roztokem.
Podle dalšího aspektu předkládaný vynález poskytuje způsob fermentace pro optimální kombinaci zásobování dextrózou a kyselým roztokem. Předkládaný vynález poskytuje optimální kombinaci zásobování dextrózou a kyselinou, která může stimulovat biosyntézu pseudomonové kyseliny během fermentace a zabránit represivnímu účinku nadbytku zdroje uhlíku v médiu.
Podrobný popis vynálezu
Není-li uvedeno jinak, termín % se týká % hmotnostního (hmotnost/hmotnost), termín vvm označuje „objem vzduchu/objem fermentačního média/minuta, HPLC se týká vysokoúčinné kapalinové chromatografie. Termín dextróza se také týká glukózy.
• · • · · • ··· ·· · · ··· · ····
Jak se v tomto textu používá, termín submerzní kultura se týká fermentační kultury, která je tekutá kultura s mícháním a provzdušňováním, termín fed-batch technologie se týká způsobu fermentace, kde jedna nebo více složek živin (např. zdroj uhlíku nebo sůl) jsou dodány jako zásoba pouze na začátku fermentačního procesu, metabolicky řízená fermentace se týká způsobu fermentace, během kterého je regulována spotřeba zdroje uhlíku nebo dusíku, produkční fáze se týká období fermentace, během kterého jsou biosyntetizovány požadované molekuly a logaritmická fáze se týká období fermentace, během kterého se mikroorganismus množí logaritmickým způsobem.
Jak se v tomto textu používá, termín minerální sůl se týká soli biologicky důležitého prvku a stopového prvku. Výhodně je síran hořečnatý používán jako minerální sůl, která slouží pro regulaci pH a má některé další přídatné účinky. Nejvýhodněji je jako minerální sůl použit chlorid vápenatý.
Jak se v tomto textu používá, termín asimilovatelný se týká daného mikroorganismu, který má enzymový systém pro absorpci živin a spotřebu nebo použití nebo rozložení takových živin pro použití v biosyntéze komplexních složek mikroorganismu.
Výhodný mikroorganismus produkující pseudomonovou kyselinu pro provádění způsobu fermentace podle vynálezu je kmen Pseudomonas sp. Jiné mikroorganismy produkující pseudomonovou kyselinu zahrnují Pseudomonas sp. Progenies, její přírodní varianty a mutanty. Nejvýhodněji je použit kmen Pseudomonas sp. Deponovaný pod číslem kódu NCAIM (P)B 001235 v National Collection of the Agricultural and Industrial Micro-organisms.
Výhodně je pH fermentačního média regulováno tak, že pseudomonová kyselina A je zvýšena a pseudomonová kyselina B je snížena (tj . poměr nežádoucí příměsi pseudomonová kyseliny • · · · · · · · · » · · • · ··· · · · · · · · · ···· • · · · · · · · · · • · ·· · · · · ·· ·
B k pseudomonové kyselině A je menší než 3 %). Výhodněji je pH fermentačního média regulováno na hladinu pH přibližně mezi
5,2 až 6,2. Nejvýhodněji, pH fermentačního média je pH 5,7.
Výhodně je kmen Pseudomonas sp. pěstován v kultivačním médiu submerzním způsobem (submerzní kultura). Výhodně je fermentační kultivace prováděna při teplotě v rozmezí 20 až 30 °C.
Aby se regulovalo pH fermentační kultury, jedno výhodné provedení zahrnuje zásobování zdrojem asimilovatelného uhlíku do fermentačního kultivačního média. Výhodné provedení zdroje asimilovatelného uhlíku je dextróza. V souladu s tím, zásobování dextrózou slouží jako zdroj uhlíku a její meziprodukty a konečné produkty často snižují pH fermentačního média. Nejvýhodněji je zásobování dextrózou je udržováno v hladině menší než přibližně 0,5 % dextrózy ve fermentačním médiu během produkční fáze.
Další výhodná provedení zdroje asimilovatelného uhlíku zahrnují glycerol, rostlinné a živočišné oleje a tuky.
Když je použit glycerol pro zásobování fermentačního kultivačního média jako zdroj asimilovatelného uhlíku, nemá dostatečný účinek na redukci pH fermentačního média. V souladu s tím je často použit kyselý roztok pro současné zásobování fermentačního média, aby byl dosažen optimální účinek. Výhodně kyselé roztoky zahrnují HCI, HNO3 a H2SO4. Nejvýhodněji je kyselý roztok HCI.
Když je pH fermentačního kultivačního média nízké, alkalický roztok je často použit pro zásobování fermentačního média, aby dosáhlo optimální hladiny pH. Výhodně, alkalický roztok použitý pro zásobování fermentačního média zahrnuje NaOH a KOH. Nejvýhodněji je alkalický roztok NaOH.
Další výhodné provedení pro regulaci pH fermentačního • · · · • · · · · • · · · ·♦ ·· • * · · • · · · · · • · · »» · kultivačního média zahrnuje zásobování minerální solí. Výhodně, je pro zásobování fermentačního kultivačního média použit roztok chloridu vápenatého. Výhodněji je použit 0,30,8% (hmotnost/hmotnost) roztok chloridu vápenatého. Nejvýhodněji je použit 0,1% (hmotnost/hmotnost) roztok chloridu vápenatého.
Způsob podle vynálezu je detailněji znázorněn v následujících příkladech, které rozsah vynálezu nijak neomezuj í.
Příklady provedení vynálezu
Příklad 1
| Násadové médium, g/l | Hlavní fermentační médium, g/l | |
| Monohydrát dextrózy | 20 | 20 |
| Sojová mouka | - | 50 |
| Glycerin | 5 | 10 |
| Kukuřičný výluh | - | 5 |
| Chlorid sodný | 0,5 | 5 |
| Chlorid draselný | 0,5 | |
| Uhličitan vápenatý | 4 | 5 |
| Síran amonný | 2 | - |
| Dihydrofosforečnan draselný | 0,4 | - |
| Chlorid manganatý x 2H2O | 0, 03 | - |
| Síran hořečnatý | 0,4 | |
| Slunečnicový olej | 2 | 10 |
| NaOH, HCI | upravení pH | upravení pH |
| pH před sterilizací | 7,0-7,2 | 6, 5 + 0,3 |
*9 · · · » • · · ···« · · · ··· · ·♦· * * · φ • «····· ·· ··· · »··· • · · · ·· 99 «φ *
Kultivace Pseudomonas sp. v násadovém médiu
Násadové médium (bez dextrózy) bylo připraveno v 601itrové nádobě. Připravené násadové médium (přibližně 40 litrů) bylo sterilizováno po dobu přibližně 45 minut při teplotě přibližně 120 °C.
Roztok dextrózy byl připraven odděleně. PH roztoku dextrózy bylo upraveno s použitím chlorovodíkové kyseliny na přibližně 4,0-5,0. Roztok dextrózy byl sterilizován po dobu přibližně 25 minut při teplotě přibližně 120 °C. Sterilizovaný roztok dextrózy byl přidán do násadového média, aby se dosáhlo koncentrace dextrózy 20 gm/1.
Kmen Pseudomonas sp. (tj. NCAIM(P)B 001235) byl inokulován do sterilizovaného násadového média (přibližně 500 ml) . Kmen Pseudomonas sp. Byl ponechán růst v násadovém médiu, dokud nedosáhl logaritmické růstové fáze. Kultivace pseudomonas byla prováděna s následujícími parametry:
Teplota: přibližně 25+1 °C,
Hydrostatický tlak: přibližně 400±100 kPa (0,4+0,1 bar), Rychlost míchání: přibližně 400 ot/min (rpm),
Stupeň provzdušňování: přibližně 0,5 vvm.
Celkový čas na násadové stádium byl 24 hodin.
Kultivace Pseudomonas sp. Ve fermentačním médiu
Hlavní fermentační médium bylo připraveno ve 300 litrové nádobě. Připravené hlavni fermentační médium (přibližně 200 litrů) bylo sterilizováno po dobu přibližně 45 minut při teplotě přibližně 120 °C.
• · · · · · • 0 0 · 0 · 0 · 0 · · • 0 0 · 0 0 0 0 0 0 0 0 • · 000 ·· · 0 000 0 0000
0· 0 ···» · · 0 • · 00 ·· 00 00 0
Roztok dextrózy byl připraven odděleně. PH roztoku dextrózy bylo upraveno s použitím chlorovodíkové kyseliny na přibližně 4,0-5,0. Roztok dextrózy byl sterilizován po dobu přibližně 25 minut v přibližně 120 °C. Sterilizovaný roztok dextrózy byl přidán do hlavního fermentačního média.
Poté, co bylo připraveno hlavní fermentační médium, bylo přidáno násadové médium obsahující kmen Pseudomonas sp. Po jeho násadovém stádiu. Poměr násadového stádia k hlavnímu fermentačnímu médiu byl přibližně 10 % (hmotnost/hmotnost).
Kultivace fermentačního média byla prováděna s následujícími parametry:
Teplota: přibližně 25±1 °C,
Stupeň provzdušňování: přibližně 0,5-1,0 vvm,
Rychlost míchání: přibližně 300-600 ot/min (rpm), a Hydrostatický tlak: přibližně 500 kPa (0,5 bar).
Jak rychlost míchání tak stupeň provzdušňování byly upraveny ve výše uvedeném rozsahu, aby se reguloval rozpuštěný kyslík na konstantní hladině 30 % v průběhu celého způsobu fermentace.
Trvání kultivace fermentačního média bylo přibližně 64 hodin. Jestliže nastalo pěnění média, byl během fermentace do fermentačního média přidán další olej.
VÝTĚŽEK: dosažený výtěžek pseudomonové kyseliny A byl přibližně 2,056 μς/g fermentačního média, jak bylo změřeno prostřednictvím HPLC. Bylo zjištěno, že nežádoucí příměs pseudomonové kyseliny B je přibližně 18 % (hmotnost/hmotnost) pseudomonové kyseliny A.
·· ·· ·· ·· ·« 9 ·*·· ··«· ♦«· • · ♦ · ···· · · · · • 9 · · · · · · · · « » ·*··· ·· · · · · · « · φ • · · » «· · · · · *
Určení obsahu a čistoty pseudomonové kyseliny A a pseudomonové kyseliny B:
Určení obsahu a čistoty pseudomonové kyseliny A a pseudomonové kyseliny B bylo založeno na testovací metodě podle USP 24. Test na určení obsahu a čistoty byl prováděn prostřednictvím HPLC, ve které byly vyhodnoceny příslušné koncentrace pseudomonové kyseliny A a pseudomonové kyseliny B, a také hmotnostní poměr pseudomonové kyseliny A a pseudomonové kyseliny B.
Chromatografický systém zahrnoval:
Kolona: LiChrosper 100 RP-18,5 m, 250-4,
Detektor: UV 229 nm,
Rychlost průtoku: 0,7 ml/minuta,
Injikovaný objem: 20 μί, a
Mobilní fáze: Příprava vhodné směsi s pH 6,3, fosfátový pufr (0,05 M dihdrogenfosforenan sodný) a acetonitril (75: 25).
Standardní roztok:
Navážky pseudomonové kyseliny A a pseudomonové kyseliny B byly vloženy do 100 ml volumetrické baňky, pak následovalo přidání 25 ml acetonitrilu za vzniku směsi, směs byla naředšna fosfátovým pufrem (pH 6,3) a pak byla míchána. Výsledná koncentrace standardů byla přibližně 100 ug/ml.
Doba: přibližně 15 minut.
Příprava vzorku fermentačního média:
ml mupirocinového fermentační média bylo přeneseno do • · φφφφ φ φ • · ♦ · · · φ φ • φφφ · φ « · φ • ♦♦ · φ φ φ« φ • · φ φφ φ φ ·· φφφ • · φ ΦΦΦ· φ • · φφ φφ φφ
10,0 ml volumetrické baňky a naředěno ethanolem (96%), ultrasonikováno po dobu 20 minut, stočen po dobu 15 minut při 5,000 ot/min (rpm),
1,0 ml supernatantu byl naředěn 10,0 ml s mobilní fáze, zfiltrováno přes Millipore filtr (0,45 pm).
Příklad 2
| Násadové médium, g/1 | Hlavní fermentační médium, g/1 | |
| Monohydrát dextrózy | 20 | 20 |
| Sojová mouka | - | 50 |
| Glycerin | 5 | 10 |
| Kukuřičný výluh | 5 | |
| Chlorid sodný | 0, 5 | 5 |
| Chlorid draselný | 0,5 | - |
| Uhličitan vápenatý | - | 3 |
| Síran amonný | 2 | |
| Dihydrogenfosforečnan draselný | 0,4 | |
| Chlorid manganatý x 2H2O | 0,03 | - |
| Síran hořečnatý | 0,4 | - |
| Slunečnicový olej | 2 | 10 |
| NaOH, HCl | upravení pH | upravení pH |
| pH před sterilizací | 7,0-7,2 | 6, 5+0,3 |
Kultivace Pseudomonas sp. v násadovém médiu
Násadové médium (bez dextrózy) byl připraveno v 60 litrové nádobě. Připravené násadové médium (přibližně 40-60 litrů) • ·
4 4
4444 • ·· • « * ·· • * t * · « bylo sterilizováno po dobu přibližně 45 minut při teplotě přibližně 120 °C.
Roztok dextrózy byl připraven odděleně. Hodnota pH roztoku dextrózy byla upravena s použitím chlorovodíkové kyseliny na přibližně 4,0 až 5,0. Roztok dextrózy byl sterilizován po dobu přibližně 25 minut v přibližně 120 °C. Sterilizovaný roztok dextrózy byl přidán do násadového média tak, aby koncentrace dextrózy byla 20 gm/1.
Kmen Pseudomonas sp. (tj. NCAIM (P) B 001235) byl inokulován do sterilizovaného násadového média 500 ml. Kmen Pseudomonas sp. byl ponechán růst v násadovém médiu dokud nedosáhl logaritmické růstové fáze. Kultivace Pseudomonas byla prováděna s následujícími parametry:
Teplota: přibližně 251 °C,
Hydrostatický tlak: přibližně 40 - 100 kPa (0,4 ±0,1 bar), Rychlost míchání: přibližně 400 ot/min (rpm) a Stupeň provzdušňování: přibližně 0,5 vvm.
Celkový čas na násadové stádium byl 24 hodin.
Kultivace Pseudomonas sp. ve fermentačním médiu
Hlavní fermentační médium bylo připraveno do 300 litrové nádoby. Připravené hlavní fermentační médium (přibližně 200 litrů) bylo sterilizováno po dobu přibližně 45 minut při teplotě přibližně 120 °C.
Roztok dextrózy byl připraven odděleně. Hodnota pH roztoku dextrózy byla upravena s použitím chlorovodíkové kyseliny na přibližně 4,0 - 5,0. Roztok dextrózy byl sterilizován po dobu přibližně 25 minut v přibližně 120 °C. Sterilizovaný roztok dextrózy byl přidán do hlavního fermentačního média tak, aby bylo dosaženo koncentrace 20 gm/1.
* «
• ft · • ftftftft ft ·
Poté, co bylo připraveno hlavní fermentační médium, násadové médium obsahující Kmen Pseudomonas sp. po jeho násadovém stádiu bylo přidáno. Poměr násadového stádia k hlavnímu fermentační médiu byl přibližně 10 % (hmotnost/hmotnost).
Kultivace Pseudomonas sp. ve fermentačním médiu byla prováděna s následujícími parametry:
Teplota: přibližně 25+1 °C,
Provzdušňování Rychlost: přibližně 0,5-l,0vvm,
Rychlost míchání: přibližně 300-600 ot/min (rpm) a
Hydrostatický tlak: přibližně 50 kPa (0,5 bar).
Jak rychlost míchání tak i stupeň provzdušňování byly upraveny ve výše uvedeném rozsahu tak, aby v průběhu fermentace byla udržována konstantní 30% hladina rozpuštěného kyslíku.
Když fermentační médium dosáhlo pH přibližně 5,5-5,8, pH se začalo zvyšovat. Ve fermentačním médium bylo pH regulováno na konstantní hladinu přibližně 5,5 až 6,0. Toho bylo dosaženo přidáváním roztoku chlorovodíkové kyseliny do fermentačního média. Doplňovací rychlost kyseliny chlorovodíkové se měnila v závislosti na skutečném pH média.
Doba kultivace ve fermentačním médiu byla přibližně 66 hodin. V průběhu této fermentace byl do fermentačního média přidán další olej, pokud došlo k jakémukoliv pěnění média.
VÝTĚŽEK: dosažený výtěžek pseudomonové kyseliny byl přibližně 2,251 pg/g fermentačního média podle měření na HPLC. Nežádoucí příměs pseudomonové kyseliny B byla zjištěna přibližně v množství 1,6 % (hmotnost/hmotnost) pseudomonové kyseliny A.
• · · · · · ·· · · · · * · ·♦· ·· ·· ·♦· · ·<·· • · ··'··'«!
·· · · ·· ·· · · ·
Příklad 3
V tomto příkladu byla příprava násadového média, hlavního fermentačního média a kultivace kmenu Pseudomonas sp. v násadovém médiu a hlavním fermentačním médiu byly provedeny shodně jako v příkladu 2.
Kultivace ve fermentačním médiu byl také provedena se stejnými parametry kultivace, jak byly definovány v příkladu
2.
Nicméně, hodnota pH fermentačního média v tomto příkladu byla regulována jiným způsobem. Místo toho, aby se do fermentačního média přidávala chlorovodíková kyselina, pH bylo upravováno tím, že se doplňoval roztok dextrózy.
Bylo pozorováno, že když fermentační médium dosáhlo pH přibližně 5,5-5,8, začalo se pH zvyšovat. V tomto příkladu byla hodnota pH regulována na konstantní hladině přibližně 5,5 až 6,0. Toho bylo dosaženo tím, že se doplňoval roztok dextrózy. Doplňovací rychlost roztoku dextrózy do fermentační média závisela na aktuální hodnotě pH a aktuálním obsahu dextrózy v médiu. Při doplňování dextrózy byla hladina glukózy regulována tak, aby se nezvýšila nad přibližně 0,5 % (hmotnost/hmotnost). Když se pH zvýšilo nad 5,8-6,0 a hladina dextrózy byla vyšší než 0,45 % (hmotnost/hmotnost), hodnota pH se regulovala tak, že se do fermentačního média místo dextrózy přidala chlorovodíková kyselina.
Doba kultivace ve fermentačním médiu byla přibližně 65 hodin. Během fermentace byl přidán další olej, pokud došlo k nějakému pěnění.
VÝTĚŽEK: dosažený výtěžek pseudomonové kyseliny A byl přibližně 3,021 pg/g fermentačního média, jak bylo změřeno prostřednictvím HPLC. Nežádoucí příměs pseudomonové kyseliny B • · 4 4 ·· 4 4 44 4 • ♦ · · 4 4 4 4 · * * • · · · 4 4 44 4 · · 4 • · t«« 1' »4 *44 4 9444 « 4 4 4444 44 4 ·· ·· 44 44 44 4 byla zjištěna ve výši přibližně 2,9 % (hmotnost/hmotnost) pseudomonové kyseliny A.
Předkládaný vynález není nijak omezen, pokud jde o rozsah nároků, specifickými provedeními popisovanými v textu přihlášky. Různé další modifikace vynálezu, kromě těch, které jsou popsány v textu, budou odborníkům zřejmé na základě předcházejícího popisu a průvodních obrázků. Takové modifikace však spadají do rozsahu připojených nároků.
V popisu jsou citovány různé publikace, které jsou tímto v plném rozsahu zahrnuty formou odkazu.
4
4 • 44
PATENTOVÉ
NÁROKY
Claims (33)
- PATENTOVÉNÁROKY1. Způsob fermentace pro výrobu pseudomonové kyseliny vyznačující se tím, že zahrnuje kroky:a) připraví se fermentační médium obsahující mikroorganismus produkující pseudomonovou kyselinu,b) reguluje se pH fermentačního média ac) z fermentačního média se získá pseudomonová kyselina.
- 2. Způsob fermentace podle nároku 1 vyznačující se tím, že pseudomonová kyselina je pseudomonová kyselina A.
- 3. Způsob fermentace podle nároku 1 nebo 2 vyznačující se tím, že mikroorganismus produkující pseudomonovou kyselinu je vybrán ze skupiny, kterou tvoří kmen Pseudomonas sp., jeho potomstvo, a přírodní varianta nebo mutantní varianta Pseudomonas sp.
- 4. Způsob fermentace podle nároku 3 vyznačující se tím, že kmen Pseudomonas sp. je kmen uložený v Národní Sbírce Zemědělských a Průmyslových Mikroorganismů pod číslem NCAIM (P)B 001235.
- 5. Způsob fermentace podle nároku 1, 2, 3 nebo 4 vyznačující se tím, že fermentace probíhá v submerzní kultuře.
- 6. Způsob fermentace podle nároku 1, 2,3, 4 nebo 5Φ Φ · φ φφφ φ φφφφφ φφφ • Φ φ • Φ ·· φφ φφ φφφφ Φ··· • φφφ φ φ φφ φ φ φφφ · φ φ φ φ φ • φ φ φφφφ φφ φφ φφ φφ vyznačující se tím, že fermentace je udržována při teplotě přibližně 20 °C až 30 °C.
- 7. Způsob fermentace podle nároku 1, 2, 3, 4, 5 nebo 6 vyznačující se tím, že hodnota pH fermentačního média je regulována během produkční fáze fermentace.
- 8. Způsob fermentace podle nároku 1, 2, 3, 4, 5, 6 nebo 7 vyznačující se tím, že hodnota pH fermentačního média je regulována na přibližně 5,7.
- 9. Způsob fermentace podle nároku 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 nebo 8 vyznačující se tím, že hodnota pH fermentačního média je regulována tím, že se do fermentačního média přidává zdroj asimilovatelného uhlíku.
- 10. Způsob fermentace podle nároku 9 vyznačující se tím, že doplňování zdroje asimilovatelného uhlíku je metabolicky řízené.
- 11. Způsob fermentace podle nároku 9 nebo 10 vyznačující se tím, že zdrojem asimilovatelného uhlíku je dextróza.
- 12. Způsob fermentace podle nároku 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 nebo 11 vyznačující se tím, že hodnota pH fermentačního média je regulována současným přidáváním zdroje asimilovatelného uhlíku a kyselého roztoku do fermentačního média.*· **9 · · · • · · · • · · ·· • · · »· ·· • » * ♦ ♦ 9 99 9 99 9 9 9 9 • ·· 999 999999 9 9 9 9 9 « *· 99 99 9
- 13. Způsob fermentace podle nároku 12 vyznačující se tím, že zdroj asimilovatelného uhlíku je glycerol a kyselý roztok je chlorovodíková kyselina.
- 14. Způsob fermentace podle nároku 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9,10, 11, 12 nebo 13 vyznačující se tím, že hodnota pH fermentačního média je regulována přidáváním minerální soli do fermentačního média.Způsob fermentace tím, že minerální podle sůl j e nároku 14 vyznačující roztok chloridu vápenatého.Způsob fermentace podle nároku 15 tím, že roztok chloridu vápenatého 0,8% (hmotnost/hmotnost).vyznačující se je přibližně 0,1% až
- 17. Způsob fermentace podle nároku 15 vyznačující se tím, že roztok chloridu vápenatého je přibližně 0,3% (hmotnost/hmotnost).
- 18. Způsob fermentace podle nároku 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9,10, 11, 12, 13, 14, 15, 16 nebo 17 vyznačující se tím, že hodnota pH fermentačního média je regulována přidáváním alkalického roztoku do fermentačního média.
- 19. Způsob fermentace podle nároku 18 vyznačující se tím, že alkalický roztok je vybrán ze skupiny, kterou tvoří hydroxid sodný a hydroxid draselný.ft ft ♦ ft • ftftft ftftft • ft ftft ftft • ftftft · • ftftft · · ·» • «ftftft ftft · · • · ft ftftft ftft ftft ftft ftft
- 20. Způsob fermentace podle nároku 18 vyznačující se tím, že alkalický roztok je hydroxid draselný.
- 21. Způsob fermentace podle nároku 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9,10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 nebo 20 vyznačující se tím, že hodnota pH fermentačního média je regulována přidáváním kyselého roztoku do fermentačního média.
- 22. Způsob fermentace podle nároku 21 vyznačující se tím, že kyselý roztok je vybraný ze skupiny, kterou tvoří kyselina dusičná (HNO3) , kyselina sírová (H2SO4) a kyselina chlorovodíková (HCI).
- 23. Způsob fermentace podle nároku 21 nebo 22 vyznačující se tím, že kyselý roztok je kyselina chlorovodíková.
- 24. Způsob fermentace podle nároku 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9,10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22 nebo vyznačující se tím, že hodnota pH fermentačního média je udržována na hodnotě 5,2 až 6,2.
- 25. Způsob fermentace podle nároku 1 vyznačující se tím, že poskytuje pseudomonovou kyselinu o čistotě alespoň 82% (hmotnost/hmotnost) pseudomonové kyseliny A vzhledem k pseudomonové kyselině B.
- 26. Způsob fermentace podle nároku tím, že čistota je alespoň 97%.25 vyznačující *· ·· ·· ·· • · · · t « • · « · · ·· • ··· · · · · • · · · · ·· ·· »* • 9 • · · • ·»4· «* · ·
- 27. Pseudomonová kyselina, která byla připravna způsobem podle nároku 26.Způsob fermentace pro vyznačující se tím, výrobu pseudomonové kyseliny že zahrnuje kroky:a) připraví se fermentaění médium obsahující mikroorganismus produkující pseudomonovou kyselinu a chlorid vápenatý,b) reguluje se pH fermentačního média tím, že se přidává dextróza a po té v případě potřeby kyselina, ac) z fermentačního média se získá pseudomonová kyselina.
- 29. Způsob fermentace podle nároku 24 nebo 28 vyznačující se tím, že se hodnota pH reguluje na 5,5 až 6,0.
- 30. Způsob fermentace podle nároku 11, 28 nebo 29 vyznačující se tím, že při regulaci pH koncentrace dextrózy dosáhne nejvýše 0,5 % (hmot./hmot.).
- 31. Způsob fermentace podle nároku 28, 29 nebo 30 vyznačující se tím, že se přidá kyselina, když pH dosáhne hodnoty nejméně 5,8 a koncentrace dextrózy je přinejmenším 0,45 % (hmot./hmot.).
- 32. Způsob fermentace podle nároku 1, 28, 29, 30 nebo 31 vyznačující se tím, že poskytuje pseudomonovou kyselinu o čistotě alespoň 82% (hmotnost/hmotnost) pseudomonové kyseliny A vzhledem k pseudomonové • 9 ·· ·“· 99 ·9 · • · · · 9 9 9 9 9 9 9 ···· · · 99 9 9 · « • · ··· · · * · 9 · 9 · 999· • · 9 9999 99 « ♦· 99 99 99 99 9 kyselině Β.
- 33.Způsob fermentace podle nároku 32 vyznačující se tím, že čistota je alespoň 97%.
- 34 .Fermentační pseudomonovou pseudomonové médium kyselinu, kyseliny mikroorganizmu které obsahuje A vzhledem produkuj ícího97% hladinu k pseudomonové kyselině B, přičemž obě kyseliny jsou v médiu přítomny v důsledku fermentace mikroorgamizmu.
- 35.
- 36.Farmaceutická kompozice pseudomonové kyseliny vyznačující se tím, že obsahuje pseudomonovou kyselinu A a farmaceuticky přijatelné excipienty, přičemž hladina pseudomonové kyseliny A je alespoň 97% (hmot./hmot.) vzhledem k pseudomonové kyselině B.Způsob léčení infekce vnímavé k pseudomonové kyselině u zvířete, vyznačující se tím, že se podává kompozice podle nároku 35.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US29992701P | 2001-06-21 | 2001-06-21 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ200467A3 true CZ200467A3 (cs) | 2004-10-13 |
Family
ID=23156895
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ200467A CZ200467A3 (cs) | 2001-06-21 | 2002-06-21 | Metabolicky řízený způsob fermentace pro výrobu pseudomonové kyseliny |
Country Status (16)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US7439045B2 (cs) |
| EP (1) | EP1409703A4 (cs) |
| JP (1) | JP2005518780A (cs) |
| KR (1) | KR20040026669A (cs) |
| AU (1) | AU2002345856A1 (cs) |
| CA (1) | CA2448547A1 (cs) |
| CZ (1) | CZ200467A3 (cs) |
| DE (1) | DE02744598T1 (cs) |
| ES (1) | ES2228294T1 (cs) |
| HR (1) | HRP20040051A2 (cs) |
| HU (1) | HUP0500797A2 (cs) |
| MX (1) | MXPA03012044A (cs) |
| PL (1) | PL374255A1 (cs) |
| SK (1) | SK412004A3 (cs) |
| TR (1) | TR200403211T3 (cs) |
| WO (1) | WO2003000910A2 (cs) |
Families Citing this family (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CA2460970C (en) * | 2001-12-28 | 2005-10-18 | Biogal Gyogyszergyar Rt | Processes for preparing crystalline and amorphous mupirocin calcium |
| IL150907A (en) * | 2002-07-25 | 2007-07-04 | Stephan Cherkez | Process for the preparation of stable amorphous calcium pseudomonate |
| US7589128B2 (en) * | 2004-06-01 | 2009-09-15 | Teva Gyógyszergyár Zártkörüen Müködö Részvénytársaság | Process for preparation of amorphous form of a drug |
| CN101124221B (zh) | 2005-02-21 | 2012-05-23 | 克利亚制药股份公司 | 莫匹罗星的提纯方法 |
| CN108277243B (zh) * | 2018-01-19 | 2021-03-12 | 浙江瑞邦药业股份有限公司 | 一种假单胞菌酸a的制备方法 |
| CN108949845B (zh) * | 2018-08-08 | 2021-08-10 | 福建康鸿生物科技有限公司 | 一种发酵培养基及由发酵培养基制备莫匹罗星的方法 |
| US20240043888A1 (en) * | 2021-02-07 | 2024-02-08 | Hangzhou Zhongmeihuadong Pharmaceutical Co., Ltd. | Fermentation method for mupirocin |
Family Cites Families (25)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE1643240A1 (de) * | 1966-09-16 | 1971-06-24 | Boehringer Sohn Ingelheim | Verfahren zur Herstellung neuer racemischer oder optisch aktiver 1-Phenoxy-2-aminoalkane |
| US4071536A (en) * | 1971-06-12 | 1978-01-31 | Beecham Group Limited | Antibiotics |
| GB1395907A (en) | 1971-06-12 | 1975-05-29 | Beecham Group Ltd | Antibiotics |
| US3977943A (en) * | 1971-06-12 | 1976-08-31 | Beecham Group Limited | Antibiotics |
| JPS5270083A (en) | 1975-12-04 | 1977-06-10 | Yoshitomi Pharmaceut Ind Ltd | Manufacture of an antibiotics, trans-pseudomonic acid |
| GB1577730A (en) * | 1976-10-23 | 1980-10-29 | Beecham Group Ltd | Treatment of infections with pseudomonicacid salts or esters thereof |
| GB1577545A (en) | 1977-07-27 | 1980-10-22 | Beecham Group Ltd | Treatment of swine dysenter |
| CA1103264A (en) * | 1977-09-30 | 1981-06-16 | Norman H. Rogers | Purification of pseudomonic acid |
| CA1115699A (en) | 1978-05-20 | 1982-01-05 | Alan D. Curzons | Lithium pseudomonate and its preparation |
| CA1196284A (en) * | 1982-05-28 | 1985-11-05 | Joshua Oduro-Yeboah | Pharmaceutical formulations |
| GB8415579D0 (en) * | 1984-06-19 | 1984-07-25 | Beecham Group Plc | Compounds |
| GB8428952D0 (en) | 1984-11-16 | 1984-12-27 | Beecham Group Plc | Formulations |
| GB8530796D0 (en) * | 1985-12-13 | 1986-01-22 | Beecham Group Plc | Pharmaceutical composition |
| IE59628B1 (en) * | 1986-06-26 | 1994-03-09 | Beecham Group Plc | Treatment of fungal infections |
| US5594026A (en) * | 1990-12-11 | 1997-01-14 | Smithkline Beecham Group P.L.C. | Polymorphs of crystalline mupirocin |
| US5292892A (en) * | 1991-05-07 | 1994-03-08 | Sankyo Company, Limited | Anti-bacterial compound and pharmaceutical compositions thereof |
| US6503881B2 (en) * | 1996-08-21 | 2003-01-07 | Micrologix Biotech Inc. | Compositions and methods for treating infections using cationic peptides alone or in combination with antibiotics |
| HUP9904308A3 (en) * | 1996-10-01 | 2002-06-28 | Smithkline Beecham Plc | Use of mupirocin for manufacture of a medicament for the treatment of bacterial infections associated with colonisation by pathogenic organisms at the nasopharynx |
| US6231875B1 (en) * | 1998-03-31 | 2001-05-15 | Johnson & Johnson Consumer Companies, Inc. | Acidified composition for topical treatment of nail and skin conditions |
| CZ20012725A3 (cs) | 1999-02-03 | 2002-03-13 | Biogal Gyogyszergyar Rt. | Způsob izolace kyseliny pseudomonové z kultivačního bujonu obsahujícího komplex kyseliny pseudomonové |
| KR20010113674A (ko) * | 1999-02-03 | 2001-12-28 | 자노스 바르가, 테레지아 밀레 | 미생물적 방법에 의하여 슈도몬산 ａ 항생제를 제조하는방법 |
| US6335023B1 (en) * | 1999-06-30 | 2002-01-01 | Ruey J. Yu | Oligosaccharide aldonic acids and their topical use |
| US6528086B2 (en) * | 1999-09-28 | 2003-03-04 | Zars, Inc. | Methods and apparatus for drug delivery involving phase changing formulations |
| IL137363A (en) * | 2000-07-18 | 2005-12-18 | Agis Ind 1983 Ltd | Pharmaceutical compositions containing mupirocin |
| IL150907A (en) | 2002-07-25 | 2007-07-04 | Stephan Cherkez | Process for the preparation of stable amorphous calcium pseudomonate |
-
2002
- 2002-06-21 TR TR2004/03211T patent/TR200403211T3/xx unknown
- 2002-06-21 MX MXPA03012044A patent/MXPA03012044A/es unknown
- 2002-06-21 CA CA002448547A patent/CA2448547A1/en not_active Abandoned
- 2002-06-21 US US10/177,026 patent/US7439045B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2002-06-21 DE DE02744598T patent/DE02744598T1/de active Pending
- 2002-06-21 AU AU2002345856A patent/AU2002345856A1/en not_active Abandoned
- 2002-06-21 WO PCT/US2002/020044 patent/WO2003000910A2/en not_active Application Discontinuation
- 2002-06-21 HR HR20040051A patent/HRP20040051A2/hr not_active Application Discontinuation
- 2002-06-21 KR KR10-2003-7016709A patent/KR20040026669A/ko not_active Ceased
- 2002-06-21 HU HU0500797A patent/HUP0500797A2/hu unknown
- 2002-06-21 PL PL02374255A patent/PL374255A1/xx unknown
- 2002-06-21 ES ES02744598T patent/ES2228294T1/es active Pending
- 2002-06-21 JP JP2003507293A patent/JP2005518780A/ja active Pending
- 2002-06-21 CZ CZ200467A patent/CZ200467A3/cs unknown
- 2002-06-21 SK SK41-2004A patent/SK412004A3/sk not_active Application Discontinuation
- 2002-06-21 EP EP02744598A patent/EP1409703A4/en not_active Withdrawn
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| SK412004A3 (en) | 2004-12-01 |
| JP2005518780A (ja) | 2005-06-30 |
| EP1409703A4 (en) | 2004-08-18 |
| HUP0500797A2 (en) | 2007-06-28 |
| MXPA03012044A (es) | 2004-06-17 |
| CA2448547A1 (en) | 2003-01-03 |
| US7439045B2 (en) | 2008-10-21 |
| TR200403211T3 (tr) | 2005-02-21 |
| WO2003000910A3 (en) | 2003-04-24 |
| AU2002345856A1 (en) | 2003-01-08 |
| ES2228294T1 (es) | 2005-04-16 |
| KR20040026669A (ko) | 2004-03-31 |
| DE02744598T1 (de) | 2005-03-31 |
| EP1409703A2 (en) | 2004-04-21 |
| HRP20040051A2 (en) | 2004-10-31 |
| US20030027292A1 (en) | 2003-02-06 |
| WO2003000910A2 (en) | 2003-01-03 |
| PL374255A1 (en) | 2005-10-03 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN1330750C (zh) | 磷酸甘油酸族氨基酸及氨基酸衍生物的发酵制造方法 | |
| EP2019869B1 (en) | Fermentative production of lipstatin | |
| CA2719581C (en) | Improved fermentation process for higher yield coefficient of lipase-inhibitor with respect to consumed fatty acid | |
| CZ200467A3 (cs) | Metabolicky řízený způsob fermentace pro výrobu pseudomonové kyseliny | |
| CN101538599B (zh) | 提高脱氮假单胞杆菌维生素b12产量的方法 | |
| CN109593807A (zh) | 一种高水平发酵生产安普霉素的方法 | |
| CN102978252A (zh) | 一种l-色氨酸分批补料发酵工艺 | |
| CN108048496B (zh) | 氧化型辅酶q10的发酵生产方法、及由其制备而得的高含量氧化型辅酶q10 | |
| CN103937847B (zh) | 一种发酵生产利普司他汀的方法 | |
| HU209917B (en) | Single-fermentorous process for the preparation of 6-hydroxy-nicotic acid | |
| CN117327747B (zh) | 采用微生物发酵生产d-泛酸的方法 | |
| CN105671110B (zh) | 一种生产达巴万星前体a40926的方法 | |
| CN110468051A (zh) | 一种k252a发酵培养基及其制备方法 | |
| CN111154815A (zh) | 一种提高l-色氨酸生产效率的方法 | |
| CN112795487A (zh) | 一种生产夫西地酸的发酵培养基及发酵方法 | |
| JP2001503244A (ja) | クラブラン酸の調製法 | |
| Adamczak et al. | Properties and yield of synthesis of mannosylerythritol lipids by Candida antarctica | |
| CN111979277A (zh) | 一种生产利普司他汀的培养基及其使用方法 | |
| WO2008002665A1 (en) | Regulation of acid metabolite production | |
| SI20079A (sl) | Metabolično kontrolirani fermentacijski postopek za izdelavo hidroksi kisline lovastatina | |
| CN116814714A (zh) | 一种提高海南霉素发酵水平的补料方法 | |
| CN102732467A (zh) | 一种戊糖片球菌高密度发酵培养基及发酵方法 | |
| JP2001527424A (ja) | ロバスタチンヒドロキシ酸を製造するための代謝コントロール発酵操作 | |
| CN114807275A (zh) | 一种提高普那霉素产量的发酵方法 | |
| CN117737164A (zh) | 一种降低多黏菌素e甲磺酸钠原料中e6含量的方法 |