CZ2003236A3

CZ2003236A3 - Cyklopentanoindolové deriváty

Info

Publication number: CZ2003236A3
Application number: CZ2003236A
Authority: CZ
Inventors: Marc Labelle; Claudio Sturino; Bruno Roy; Carl Berthelette; Michael Boyd; Nicolas Lachance; John Scheigetz
Original assignee: Merck Frosst Canada & Co.
Priority date: 2000-07-25
Filing date: 2001-07-23
Publication date: 2003-05-14
Also published as: DE60107687T2; BR0112756A; KR100746814B1; DE60107687D1; NO20030374L; CA2416867A1; SK932003A3; DK1305286T3; PL363168A1; EP1305286B1; EE05287B1; ZA200300554B; PT1305286E; AU7743001A; HUP0301745A3; CN1214007C; IS6655A; BG107438A; RS50491B; YU97902A

Description

Cyklopentanoindolové deriváty

Oblast techniky

Vynález se týká cyklopentanoindolových derivátů, a farmaceutických prostředků, které tyto látky obsahují. Uvedené látky jsou strukturně odličné od steroidních, antihistaminových nebo adrenergních agonistických látek a antagonizují překrvení nosní a plicní sliznice, vyvolané prostaglandiny D-typu.

Dosavadní stav techniky

Prostanoidní receptory a běžně užívané selektivní agonistické a antagonistické látky na těchto receptorech jsou popsány ve dvou souhrnných publikacích, a to: Eicosanoids: From Biotechnology to Therapeutic

Applications, Folco, Samuelsson, Maclouf a Velo eds. , Plenům Press, New York, 1996, kap. 14, 137-154 a Journal of Lipid Mediators and Cell Signalling, 1996, 14, 83-87. V publikaci T. Tsuri a další, 1997, Journal of Medicinal Chemistry, sv. 40, s. 3504-3507 se uvádí, že PGD2 je patrně důležitým mediátorem různých alergických onemocnění, jako je alergická rýma, atopické asthma, alergický zánět spojivek a atopická dermatitis. V poslední době publikace Matsuoka a další, Science, 2000, 287, 2013-7, popisuje PGD2 jako klíčový mediátor alergického asthmatu. Kromě toho se v některých patentových spisech, například US 4808608 uvádí., že látky, antagonizující prostaglandin jsou vhodné pro léčení alergických onemocnění a zvláště alergického asthmatu. Látky, antagonizující PGD2 jsou popsány • · · · · ·

například v EP 837052 a v PCT patentových přihláškách WO 98/25919 a WO 99/62555.

V dokumentu US 4808608 se popisují tetrahydrokarbazol-l-alkankyseliny a jejich deriváty jako látky, antagonizující prostaglandiny.

Dokument EP 468785 popisuje kyselinu

4-[(4-chlorfenyl) methyl]-1,2,3,4-tetrahydro-7-(2-chinolinylmethoxy) -cyklopent [b] indol-3-octovou jako látku ze skupiny inhibitorů biosyntézy leukotrienu.

Patentový spis US 3535326 popisuje protizánětlivé látky obecného vzorce

Podstata vynálezu

Vynález si klade za úkol navrhnout nové sloučeniny, antagonizující receptory prostaglandinu, zejména receptor D₂ (DP receptor). Tyto látky by měly být vhodné pro léčení různých onemocnění a poruch, zprostředkovaných prostaglandiny. Vynález si rovněž klade za úkol navrhnout farmaceutický prostředek s obsahem takových látek.

4 4 4

4 4 4 • · · · · · 4

Podstatu vynálezu tedy tvoří cyklopentanoindolové deriváty obecného vzorce I

(I?

a jejich farmaceuticky přijatelné soli, hydrády a estery, kde

R¹, R² a R³ se nezávisle volí ze skupiny (1) atom vodíku a (2) R^c,

R⁴ a R⁵ se nezávisle volí ze skupiny (1) H, (2) F, (3) CN, (4) Cl-C6alkyl, (5) 0R^a a (6) S (O)_nCl-C6alkyl, přičemž každá alkylová skupina je popřípadě substituována atomem halogenu nebo

R⁴ a R⁵ mohou na tomtéž atomu uhlíku tvořit oxoskupinu nebo

R⁴ a R⁵ na tomtéž atomu uhlíku nebo na sousedních atomech uhlíku mohou společně tvořit 3- nebo 4-členný kruh, obsahující popřípadě 1 heteroatom ze skupiny N, S nebo 0 a popřípadě substituovaný 1 nebo 2 skupinami ze skupiny F, CF₃ a CH₃, •4

R⁶ se voli ze skupiny (1) H, (2) Cl-C6alkyl, popřípadě substituovaný 1 až 6 substituenty, nezávisle volenými ze skupiny 0R^a a atom hagelonu a (3) heterocyklický zbytek, popřípadě substituovaný 1 až 4 atomy halogenu nebo

R⁵ a R⁶ na sousedních atomech uhlíku tvoří 3- nebo 4-členný kruh, popřípadě obsahující 1 heteroatom ze skupiny N, S nebo O a popřípadě substituovaný 1 nebo 2 substituenty ze skupiny F, CF₃ a CH₃,

X se volí ze skupiny C=0, S0₂ a Cl-C4alkyl, přičemž alkyl je popřípadě substituován 1 až 6 atomy halogenu,

Ar znamená aryl nebo heteroaryl, přičemž tyto zbytky jsou popřípadě substituovány 1 až 4 substituenty, které se nezávisle volí ze skupin ve významu R^c,

Q znamená Cl-C6alkyl, popřípadě substituovaný 1 až 6 substituenty, které se nezávisle volí ze skupiny (1) atom halogenu, (2) aryl, (3) heteroaryl, (4) OH, (5) 0Cl-C6alkyl, (6) COOH, (7) CONR^aR^b, (8) C(O)NSO₂R⁷, (9) tetrazolyl, přičemž aryl, heteroaryl a alkyl jsou popřípadě subistituovány 1 až 6 substituenty, které se nezávisle volí z atomu halogenu, CF₃ a COOH nebo

Q a R^s společně tvoří 3- nebo 4-členný kruh, popřípadě obsahující heteroatom ze skupiny N, S a 0 a popřípadě substituovaný 1 nebo 2 substituenty, které se nezávisle volí ze skupiny (1) atom halogenu, (2) oxoskupina, (3) 0R^a, (4) COOH, (5) C(O)NHSO₂R⁷ a (6) tetrazolyl,

R⁷ se volí ze skupiny (1) Cl-C6alkyl, popřípadě substituovaný 1 až 6 atomy halogenu, (2) aryl a (3) heteroaryl, přičemž aryl a heteroaryl jsou popřípadě substituovány atomem halogenu, 0Cl-C5alkylovým zbytkem nebo Cl-C6alkylovým zbytkem, přičemž alkylově skupiny jsou popřípadě substituovány 1 až 6 atomy halogenu,

R^a a R^b se nezávisle volí ze skupiny atom vodíku a Cl-C6alkyl, popřípadě substituovaný 1 až 6 atomy halogenu,

R^c znamená (1) atom halogenu, (2) CN, (3) Cl-C6alkyl, popřípadě substituovaný 1 až 6 substituenty, které se nezávisle volí ze skupiny atom halogenu, NR^aR^b, C(O)R^a, C (0R^a) R^aR^b a 0R^a, (4) C2-C6alkenyl, popřípadě substituovaný 1 až 6 substituenty, nezávisle volenými z atomu halogenu a skupiny 0R^a, (5) heterocyklický zbytek, (6) aryl, (7) heteroaryl, (8) C(O)R^a,

• · • · fl (9) C(OR^a)R^aR^b, (10) C(O)OR^a, (11) CONR^aR^b, (12) OCONR^aR^b, (13) S(0)_nR⁷, (14) NR^aC (O) OCl-C6alkyl, kde alkyl je popřípadě substituován 1 až 6 atomy halogenu a (15) S(0)_nNR^aR^b, přičemž heterocyklický zbytek, aryl a heteroaryl jsou popřípadě substituovány 1 až 4 substituenty, nezávisle volenými z atomů halogenu, n znamená 0, 1 nebo 2.

Vynález se rovněž týká farmaceutických prostředků, které obsahují deriváty obecného vzorce I a které je možno použít k léčení a prevenci chorob, zprostředkovaných přes prostaglandiny.

Tricyklický kruhový systém je číslován následujícím způsobem:

Pod pojmem „atom halogenu se v průběhu přihlášky rozumí atom fluoru, chloru, bromu a jodu.

Alkyl znamená skupinu s přímým, rozvětveným, cyklickým nebo bicyklickým řetězcem nebo s kombinací těchto typů řetězců a s obsahem uvedeného počtu atomů. Jako příklady alkylových skupin je možno uvést methyl, ·· 4 ethyl, propyl, isopropyl, butyl, sek.butyl, terč.butyl, pentyl, hexyl, heptyl, oktyl, nonyl, undecyl, dodecyl, tridecyl, tetradecyl, pentadecyl, eikosyl, 3,7-diethyl-2,2-dimethyl-4-propylnonyl, cyklopropyl, cyklobutyl, cyklopentyl, cyklohexyl, cykloheptyl, cyklopropylmethyl, cyklopentylethyl, cyklopropyl, substituovaný methylovou skupinou, cyklobutyl, substituovaný ethylovou skupinou, adamantyl, cyklododecylmethyl, 2-ethyl-1-bicyklo [4.4.0]decyl a podobně. Cl-C6alkyl zahrnuje acyklické alkylové skupiny s uvedeným počtem atomů uhlíku a také -C_xalkyl-C_zcykloalkylové skupiny, v nichž x znamená 0 až 3 a z znamená 3 až 6 za předpokladu, že x+z=3 až 6.

Halogenalkyl znamená alkylovou skupinu ve svrchu uvedeném významu, v níž jeden nebo větší počet vodíkových atomů bylo nahrazeno atomy halogenu až do úplné substituce všech atomů vodíku atomy halogenu.

Cl-C6halogenalkyl například zahrnuje -CF₃, -CF₂CF₃ a podobně.

Alkoxyskupina znamená skupinu s přímým, rozvětveným nebo cyklickým řetězcem s uvedeným počtem uhlíkových atomů. Například Cl-C6alkoxyskupina zahrnuje methoxyskupinu, ethoxyskupinu, propoxyskupinu, isopropoxyskupinu a podobně.

Halogenalkoxyskupina znamená alkoxyskupinu ve svrchu uvedeném významu, v níž jeden nebo větší počet atomů vodíku byl nahrazen atomy halogenu až do úplné substituce všech atomů vodíku atomy halogenu. Například Cl-C6halogenalkoxyskupina zahrnuje -OCF₃, -OCF₂CF₃ a podobně.

4

4 ·

4 ·♦

4 · · · 4 4 · • 4444 44 4

4 · ·

444 · ··

Alkenyl znamená skupinu s lineárním nebo rozvětveným řetězcem nebo kombinaci těchto skupin s uvedeným počtem atomů uhlíku a s alespoň jednou meziuhlíkovou dvojnou vazbou, přičemž atom vodíku může být nahrazen další meziuhlíkovou dvojnou vazbou. C2-C6alkenyl například zahrnuje ethenyl, propenyl, 1-methylethenyl, butenyl, a podobně.

Heterocyklický zbytek znamená nearomatický kruh, obsahující 1 až 4 heteroatomy, přičemž jde o samostatný kruh nebo o kruh, kondenzovaný s druhým kruhem, který se volí ze skupiny 3- až 7-členných alicyklických kruhů s obsahem 0 až 4 heteroatomy, aryl a heteroaryl, přičemž heteroatomy se nezávisle volí ze skupiny O, N a S. Jako příklad heterocyklického kruhu je možno uvést oxetanyl,

1,3-dithiacyklopentan, dihydrobenzofuran a podobně.

Aryl znamená 6- až 14-členný uhlíkový aromatický kruhový systém, obsahující 1 až 3 benzenové kruhy. V případě, že jsou přítomny 2 nebo větší počet aromatických kruhů, jsou tyto kruhy kondenzovány, takže přilehlé kruhy mají společnou vazbu. Jako příklad takových kruhů je možno uvést fenyl a naftyl.

Heteroaryl (Het) znamená 5- až 10-členný aromatický kruhový systém, který obsahuje 1 kruh nebo 2 kondenzované kruhy a 1 až 4 heteroatomy ze skupiny O, S a N. Het zahrnuje například furanyl, diazinyl, ímidazolyl, isoxazolyl, isothiazolyl, oxadiazolyl, oxazolyl, pyrazolyl, pyridyl, pyrrolyl, tetrazinyl, thiazolyl, thienyl, triazinyl, triazolyl, lH-pyrrol-2,5-dionyl,

2-pyron, 4-pyron, pyrrolopyridin, furopyridin a thienopyridin.

V průběhu přihlášky budou používány následuj ící zkratky:

BOC = terč.butyloxykarbonyl

CBZ = karbobenzoxyskupina

DCC = 1,3-dicyklohexylkarbodiimid

DIBAL = diisobutylaluminiumhydrid

DIEA = N,N-diisopropylethylamin

DMAP - 4 -(dimethylamino)pyridin

DMF = dimethylformamid

EDCI = 1-(3-dimethylaminopropyl)-3-ethylkarbodiimidhydrochlorid

EDTA = kyselina ethylendiamintetraoctová, hydrát tetrasodné soli

FAB = bombardování rychlými atomy

FMOC = 9-fluorenylmethoxykarbonyl

HMPA = hexamethylfosforamid

HATU = 0-(7-azabenzotriazol-1-yl)Ν,Ν,Ν',N'-tetramethyl uroniumhexafluorofosfát HOBt = 1-hydroxybenzotriazol

HRMS = hmotová spektrometrie s vysokou rozlišovací schopností

ICBF = isobutylchlormravenčan

KHMDS = hexamethyldisilazan draselný

LDA = lithiumdiisopropylamid

MCPBA = kyselina metachlorperoxybenzoová

Ms = methansulfonyl = mesyl

MsO - methansulfonát = mesylát

NBS = N-bromsukcinimid

NMM = 4-methylmorfolin

PCC = pyridiniumchlorchroman • · · » ···· · ·· ···· • · · • ♦ · • · · • · · ♦ ·· ··

PDC = pyridiniumdichroman

Ph = fenyl

PPTS = pyridinium p-toluensulfonát pTSA = kyselina p-toluensulfonová

r.t. = teplota místnosti rac. = racemický

TfO = trifluormethansulfonát = triflát

TLC = chromatografie na tenké vrstvě

Zkratky pro alkylové skupiny

Me = methyl

Et = ethyl n-Pr = n-propyl i-Pr = isopropyl c-Pr = cyklopropyl n-Bu - n-butyl i-Bu = isobutyl c-Bu = cyklobutyl s-Bu = sek.butyl t-Bu = terc.butyl

Podle jednoho z možných provedení se vynález týká derivátů obecného vzorce I, v němž X znamená Cl-C4alkyl a zvláště takových látek, v nichž X znamená CH₂.

Podle dalšího provedení se vynález týká sloučenin, v nichž Q znamená Cl-C6alkyl, substituovaný skupinou COOH nebo tetrazolyl.

Podle dalšího možného provedení se vynález týká sloučenin obecného vzorce I, v nichž Q znamená C1-C3 alkyl, popřípadě substituovaný 1 až 6 substituenty ze skupiny atom halogenu, COOH, tetrazolyl a CONR^aR^b, kde R^a ·· ···· • · ·

9 9 • ···· · • ·

.....11 • · *

9 9

9 9 · ·· ·· a R^b se nezávisle volí z atomů vodíku a Cl-C6alkylových skupin, popřípadě substituovaných 1 až 6 atomy halogenu, s výhodou fluoru. Ve výhodném provedení Q znamená ClC3alkyl, substituovaný skupinou COOH.

Podle ještě dalšího provedení se vynález týká derivátů obecného vzorce I, v nichž Q a R⁶ společně tvoří

3- nebo 4-členný kruh, popřípadě obsahující 1 heteroatom ze skupiny N, S a 0 a popřípadě substituovaný 1 nebo substituenty ze skupiny atom halogenu, OH, COOH, oxoskupina, tetrazolyl, C(O)NSO₂R⁷ nebo 0Cl-C6alkyl, přičemž alkylové skupiny jsou popřípadě substituovány 1 až 6 atomy halogenu. Ve výhodném provedení Q a R⁶společně tvoří 3- nebo 4-členný kruh, obsahující popřípadě 1 heteroatom ze skupiny N, S a 0 a popřípadě substituovaný COOH nebo tetrazolyl.

Podle dalšího možného provedení se vynález týká sloučenin obecného vzorce I, v němž R³ znamená atom vodíku, R¹ a R² se volí ze skupiny atom vodíku, atom halogenu, Cl-C3alkyl (popřípadě substituovaný 1 až 6 substituenty, nezávisle volenými ze skupiny atom halogenu C(O)R^a, a C(OR^a)R^aR^b), aryl, heteroaryl, heterocykl i cký zbytek, C (0) 0C1-C3alkyl, S (0) _nCl-C3alkyl, S(O)_nNR^aR^b, C(O)R^a, C (OH) R^aR^b a C (0C1-C3 alkyl) R^aR^b, přičemž arylový, heteroarylový nebo heterocyklický zbytek nebo alkylový zbytek jsou popřípadě substituovány 1 až 6 atomy halogenu, n = 0, 1 nebo 2, R^a a R^b se nezávisle volí ze skupiny atom vodíku a Cl-C6alkyl, popřípadě substituovaný atomem halogenu. Atomem halogenu je v tomto provedení s výhodou atom fluoru.

•Φ ···· φφ φ • < φ φφφ » φφφφφ • φ φφφφ ₁₂ φφ

Φ

Φ Φ

Φ · φ · Φ Φ

ΦΦ ΦΦ

Podle dalšího provedení se vynález týká derivátů obecného vzorce I, v nichž R⁴ a R⁵ se nezávisle volí ze skupiny atom vodíku, Cl-C4alkyl, popřípadě substituovaný 1 až 6 atomy halogenu, s výhodou fluoru a 0R^a, kde R^a má význam, uvedený u vzorce las výhodou znamená atom vodíku nebo R⁴ a R^s, vázané na tentýž atom uhlíku znamenají oxoskupinu.

Podle ještě dalšího provedení se vynález týká derivátů, v nichž Ar znamená aryl nebo heteroaryl, popřípadě substituovaný 1 až 4 skupinami, které se nezávisle volí ze skupiny atom halogenu, CN, Cl-C4alkyl, popřípadě substituovaný 1 až 6 atomy halogenu, s výhodou fluoru, C(O)R^a a C(OH)R^aR^b, kde R^a a R^b se nezávisle volí ze skupiny atom vodíku a Cl-C6alkyl, popřípadě substituovaný atomem halogenu, s výhodou fluoru.

Ve výhodném provedení se vynález týká sloučenin obecného vzorce la

(la) kde Ar a R¹ až R⁴ mají význam, uvedený u vzorce I. Ve velmi výhodném provedení znamenají R⁴ a R⁵ atomy vodíku a R¹ v poloze 7 znamená substituent, odlišný od atomů vodíku.

9999

9999 9

Optické isomery, diastereomery, geometrické isomery a tautomery

Sloučeniny obecného vzorce I obsahují jeden nebo větší počet středů asymetrie a mohou se proto vyskytovat jako racemáty, racemické směsi, jednotlivé enanciomery, směsi diastereomerů a jednotlivý diastereomery. Vynález zahrnuje všechny isomerní formy derivátů obecného vzorce I.

Některé z popsaných látek obsahují olefinovou dvojnou vazbu a pokud není výslovně uvedeno jinak, zahrnují geometrické isomery E a Z.

Některé z popsaných látek mohou mít atomy vodíku vázány na různých místech, čímž vznikají tautomery. Příkladem může být keton a jeho enolová forma, čímž vzniká tautomerie keton-enol. Jednotlivé tautomery a jejich směsi jsou rovněž zahrnuty do rozsahu vynálezu.

Sloučeniny obecného vzorce I je možno rozdělit na diastereomerní páry enanciomerů například frakční krystalizací z vodného rozpouštědla, například methanolu nebo ethylacetátu nebo ze směsi rozpouštědel. Takto získaný pár enanciomerů je možno rozdělit na jednotlivé stereoisomery běžným způsobem, například při použití opticky aktivní kyseliny jako dělicího činidla.

Jakýkoliv enanciomer derivátů obecného vzorce I nebo Ia je možno připravit také stereospecifickou syntézou při použití opticky čistých výchozích materiálů nebo reakčních činidel známé konfigurace.

• · · · · · • ·

14.

Soli

Pod pojmem „farmaceuticky přijatelné soli se rozumí soli, připravené při použití farmaceuticky přijatelných netoxických baží, anorganických i organických. Z anorganických solí je možno uvést soli hlinité, amonné, vápenaté, měďnaté, železité, železnaté, lithné, hořečnaté, manganaté, manganičité, draselné, sodné, zinečnaté a podobně. Zvláště výhodné jsou soli amonné, vápenaté, hořečnaté, draselné a sodné. Soli, odvozené od farmaceuticky přijatelných organických baží zahrnují soli s primárními, sekundárními a terciárními aminy, se substituovanými aminy včetně přírodně se vyskytujících substituovaných aminů, soli s cyklickými aminy a bazickými iontoměničovými pryskyřicemi, jde například o soli s argininem, betainem, kofeinem, cholinem,

N,N'-dibenzylethylendiaminem, diethylaminem,

2-diethylaminoethanolem, 2-dimethylaminoethanolem, ethanolaminem, ethylendiaminem, N-ethylmorfolinem, N-ethylpiperidinem, glukaminem, glukosaminem, histidinem, hydrabaminem, isopropylaminem, lysinem, methylglukaminem, morfolinem, piperazinem, piperidinem, polyaminovými pryskyřicemi, prokainem, puriny, theobrominem, triethylaminem, trimethylaminem, tripropylaminem, promethaminem a podobně.

V případě, že derivát podle vynálezu má alkalickou polohu, je možno připravit soli s farmaceuticky přijatelnými netoxickými kyselinami, anorganickými i organickými. Jako příklady vhodných kyselin je možno uvést kyselinu octovou, benzensulfonovou, benzoovou, kafrosulfonovou, citrónovou, ethansulfonovou, fumarovou, glukonovou, glutamovou, bromovodíkovou, chlorovodíkovou, • · · · · ·

1δί· isethionovou, mléčnou, maleinovou, jablečnou, mandlovou, methansulfonovou, mucinovou, dusičnou, pamoovou, pantothenovou, fosforečnou, jantarovou, sírovou, vinnou, p-toluensulfonovou a podobně. Zvláště výhodnými kyselinami jsou kyselina citrónová, bromovodíková, chlorovodíková, maleinová, fosforečná, sírová a vinná.

Je samozřejmé, že pokud není výslovně uvedeno jinak, se pod derivátem obecného vzorce I rozumí jak volné látky, tak jejich farmaceuticky přijatelné soli.

Použití

Schopnost derivátů obecného vzorce I dostávat se do interakce s receptory prostaglandinu, předurčuje tyto látky pro použití při léčení a prevenci nežádoucích příznaků, vyvolaných prostaglandiny u savců, zvláště u lidí. Toto napodobení antagonismu působení prostaglandinu vede k tomu, že uvedené látky zlepšují u savců a zejména u člověka některé chorobné stavy, například některá onemocnění dýchacích cest, alergické stavy, bolestivé stavy, zánětlivé stavy, poruchy sekrece sliznic, kostní poruchy, poruchy spánku, poruchy plodnosti, poruchy krevní srážíivosti, některé oční poruchy a také poruchy imunitního systému včetně autoimunitních chorob. Mimoto mohou uvedené látky vyvolat inhibici neoplastické transformace buněk a metastatického nádorového růstu, takže je možno je použít v případě zhoubných nádorů. Deriváty obecného vzorce I je rovněž možno použít při léčení a/nebo prevenci poruch proliferace, vyvolaných prostaglandiny, například diabetického onemocnění sítnice a novotvorby cév ve zhoubných nádorech. Uvedené látky také vyvolávají inhibici kontrakce hladkých svalů, • ·

vyvolané prostanoidními látkami tak, že tyto kontraktílní prostanoidy antagonizuj! nebo napodobují relaxační látky, takže je možno je použít k léčení menstruačních poruch, předčasného porodu a poruch, spojených s výskytem eosinofilních buněk. Zejména jsou sloučeniny obecného vzorce I látkami, které antagonizuji prostaglandin D2.

Farmaceutickým prostředkem podle vynálezu je tedy možno léčit u savců, zejména u člověka svrchu uvedené poruchy, zejména alergickou rýmu, překrvení nosní sliznice, serosní rýmu, zánět nosní sliznice, asthma včetně alergického asthmatu, chronická obstruktivní plicní onemocnění a j iné formy plicních zánětů, poruchy spánku a poruchy cyklu spánku a bdění, stahy hladkých svalů, spojené s poruchami menstruace nebo s předčasným porodem, poruchy, spojené s elsinofilními buňkami, thrombózy, glaukom a jiné poruchy zraku, okluzivní cévní onemocnění, městnavé srdeční selhání, onemocnění, vyžadující léčení antikoagulačnímí látkami, například stavy po úrazech nebo po chirurgických zákrocích, zánětlivé stavy, gangréna, dále je možno farmaceutický prostředek použít k léčení Raynaudovy nemoci, v případě poruch sekrece sliznic, při bolestivých stavech a migréně, v případě onemocnění, u nichž je zapotřebí dosáhnout řízení tvorby kostní tkáně a resorpce této tkáně, například v případě osteoporózy, při šokových stavech, pří poruchách tepelné regulace včetně horečnatých stavů a při poruchách imunitního systému nebo u stavů, při nichž by bylo žádoucí řídit imunitní systém. Léčenou chorobou je zejména choroba, jejíž vznik je podporován prostaglandinem D2, jako je překrvení nosní sliznice, překrvení plicní tkáně a asthma včetně alergického asthmatu.

9 ·

• · · ir·· ·

Podle jednoho z možných provedení vynálezu obsahuje farmaceutický prostředek deriváty obecného vzorce I v množství, které je účinné pro léčení a prevenci chorob, zprostředkovaných působením prostaglandinu, zejména překrvení nosní sliznice, rýmy, včetně alergické rýmy a asthmatu včetně alergického asthmatu.

Podle dalšího možného provedení vynálezu obsahuje farmaceutický prostředek účinné množství látky pro léčení nebo prevenci chorob, zprostředkovaných působením prostaglandinu D2, zejména jde o překrvení nosní sliznice nebo alergické asthma.

Podle dalšího možného provedení se deriváty obecného vzorce I zpracovávají na farmaceutický prostředek, určený pro léčení překrvení nosní sliznice.

Podle ještě dalšího provedení je farmaceutický prostředek podle vynálezu určen pro léčení asthmatu, zvláště alergického asthmatu.

Rozmezí dávek

Velikost dávky, použité k léčení nebo prevenci svrchu uvedených onemocnění, se bude v případě derivátu obecného vzorce I měnit v závislosti na povaze a závažnosti léčeného onemocnění, v závislosti na zvoleném derivátu obecného vzorce I a na způsobu jeho podání. Dalšími faktory, které mohou ovlivnit velikost dávky jsou věk, hmotnost a celkový zdravotní stav nemocného, jeho pohlaví, způsob stravování, doba podávání, rychlost vylučování, použitá kombinace účinných látek a odpověď

Ιδ· nemocného na podávanou látku. Obvykle se budou denní dávky derivátů podle vynálezu pohybovat v rozmezí 0,001 až 100 mg/kg tělesné hmotnosti, s výhodou 0,01 až 10 mg/kg. V některých případech však může být zapotřebí použít dávky mimo uvedené rozmezí.

Množství účinné látky, které bude smíseno s nosičem na lékovou formu, určenou pro jednorázové podání, se bude měnit v závislostí na způsobu podání a na léčeném organismu. Například léková forma, určená pro perorální podání u člověka, může obsahovat 0,05 mg až 5 g účinné látky ve směsi s příslušným množstvím běžných nosičů, jejichž množství se může pohybovat v rozmezí 5 až 99,95 % hmotnostních, vztaženo na celkovou hmotnost farmaceutického prostředku. Léková forma bude obecně obsahovat 0,1 mg až 0,4 g účinné látky, typicky 0,5 mg, mg, 2 mg, 5 mg, 10 mg, 25 mg, 50 mg, 100 mg, 200 mg nebo 400 mg.

Farmaceutický prostředek

Vynález se týká také farmaceutického prostředku, který jako svou účinnou složku obsahuje derivát obecného vzorce I spolu s farmaceuticky přijatelným nosičem. Pod pojmem farmaceutický prostředek se rozumí produkt, který obsahuje účinnou složku nebo složky a mimoto inertní složku nebo složky, kterými jsou farmaceuticky přijatelné pomocné látky, tvořící nosič, nebo jakýkoliv jiný produkt, který přímo nebo nepřímo vzniká smísením, tvorbou komplexů nebo shlukováním jakýchkoliv dvou nebo většího počtu složek nebo jiným typem reakce nebo interakce mezi dvěma nebo větším počtem složek.

Farmaceutický prostředek podle vynálezu je tedy jakýkoliv

15··

prostředek, získaný smísením derivátů obecného vzorce I s dalšími účinnými látkami a farmaceuticky přijatelnými pomocnými látkami.

Při léčení svrchu uvedených onemocnění je možno podávat deriváty obecného vzorce I perorálně, inhalací ve formě spreje, místně, parenterálně nebo rektálně v lékových formách, které obsahují běžné netoxické farmaceuticky přijatelné nosiče, pomocné látky nebo nosná prostředí. Parenterálním podáním se rozumí podkožní, nitrožilní, nitrosvalové nebo intrasternální podání nebo infuze. Prostředek je určen pro léčení teplokrevných živočichů, jako jsou myši, krysy, koně, skot, ovce, psi, kočky, a podobně, zejména je však prostředek určen pro použití u člověka.

Farmacuetické prostředky s obsahem uvedených účinných látek, se mohou nacházet v lékové formě, vhodné pro perorální podání, jako jsou tablety, kosočtverečné tablety, vodné nebo olejové suspenze, dispergovatelné prášky nebo granuláty, emulze, tvrdé nebo měkké kapsle, sirupy nebo elixíry. Prostředky, určené pro perorální podání je možno připravit běžným způsobem pro výrobu takových prostředků a mohou obsahovat jednu nebo větší počet pomocných látek, jako jsou například sladidla, látky pro úpravu chuti, barviva a konzervační prostředky tak, aby byl získán přijatelný prostředek pro nemocného. Tablety obsahují účinnou složku ve směsi s netoxickými farmaceuticky přijatelnými pomocnými látkami, které jsou vhodné pro výrobu tablet. Tyto pomocné látky mohou být například inertní ředidlo, jako uhličitan vápenatý, uhličitan sodný, laktóza, fosforečnan vápenatý nebo sodný, granulační látky a desintegrační látky, jako ·· ··· ·

• · · ·

2tr.....

kukuřičný škrob nebo kyselina alginová, pojivá, jako škrob, želatina nebo akaciová guma a kluzné látky, jako stearan hořečnatý, kyselina stearová nebo mastek. Tablety mohou být nepovlečené nebo je možno je povlékat známým způsobem k oddálení jejich rozpadu a vstřebání v zažívací soustavě, čímž je možno dosáhnout prodlouženého účinku v delším časovém období. Je například možno použít materiál, zpomalující uvolňování, jako glycerylmonostearát nebo glyceryldistearát. Tablety je možno také povlékat způsobem, popsaným v dokumentech US 4256108, US 4166452 a US 4265874 za vzniku osmotických tablet pro řízené uvolňování.

Prostředky pro perorální použití mohou být také kapsle z tvrdé želatiny, které obsahují směs účinné látky s inertním pevným ředidlem, například uhličitanem vápenatým, fosforečnanem vápenatým nebo kaolinem, nebo může jít o kapsle z měkké želatiny, v nichž je účinná látka smísena s rozpouštědlem, mísitelným s vodou, například propylenglykolem, polyethylenglykolem a ethanolem nebo s olejovým prostředím, například s arašídovým olejem, kapalným parafinem nebo olivovým olej em.

Vodné suspenze obsahují účinnou látku ve směsi s pomocnými látkami, vhodnými pro výrobu vodných suspenzí. Pomocnými látkami mohou být suspenzní činidla, jako sodná sůl karboxymethylcelulózy, methylcelulóza, hydroxypropylmethylcelulóza, alginát sodný, polyvinylpyrrolidon, tragakanthová a akaciová guma, dále je možno použít dispergační činidla nebo smáčedla, jako přírodně se vyskytující fosfatidy, například lecithin nebo kondenzační produkty alkylenoxidu a mastných

kyselin, jako polyoxyethylenstearát nebo kondenzační produkty ethylenoxidu s alifatickými alkoholy s dlouhým řetězcem, jako heptadekaethylenoxycetanol nebo kondenzační produkty ethylenoxidu s parciálními estery, odvozenými od mastných kyselin a hexitolu, jako polyoxyethylensorbitolmonooleát nebo kondenzační produkty ethylenoxidu s parciálními estery, odvozenými od anhydridu mastných kyselin a hexitolu, jako polyethylensorbitanmonooleát. Vodné suspenze mohou také obsahovat jedno nebo větší počet konzervačních činidel, jako jsou ethyl-, nebo n-propyl-phydroxybenzoát nebo jedno nebo větší počet barviv a/nebo látěk pro úpravu chuti a/nebo sladidel, jako je sacharóza, sacharin nebo aspartam.

Olejové suspenze se připravují tak, že se účinná látka suspenduje v rostlinném oleji, jako arašídovém oleji, olivovém oleji, sezamovém oleji nebo kokosovém oleji nebo v minerálním oleji, například v kapalném parafinu. Olejové suspenze mohou obsahovat zahušfovadlo, například včelí vosk, tvrdý parafin nebo cetylalkohol. Je také možno použít svrchu uvedená sladidla a látky pro úpravu chuti, aby bylo možno připravit přijatelný prostředek pro perorální podání. Tyto prostředky je možno konzervovat přidáním antioxidační látky, například kyseliny askorbové.

V dispergovatelných prášcích a granulátech, vhodných pro přípravu vodných suspenzí přidáním vody, se účinná látka nachází ve směsi s dispergačním činidlem nebo smáčedlem, suspenzním činidlem a jedním nebo větším počtem konzervačních činidel. Vhodná dispergační činidla, smáčedla a suspenzní činidla již byla svrchu uvedena.

27“

Prostředky tohoto typu mohou také obsahovat další pomocné látky, jako sladidla, látky pro úpravu chuti a barviva.

Farmaceutický prostředek podle vynálezu může mít také formu emulze typu olej ve vodě. Olejovou fází může být rostlinný olej , například olivový nebo arašídový olej nebo také minerální olej, jako kapalný parafin nebo směsi uvedených látek. Vhodným emulgačním činidlem jsou například přírodně se vyskytující fosfatidy, jako sojový olej, lecitin nebo estery nebo parciální estery, odvozené od anhydridů mastných kyselin a hexitolu jako sorbitanmonooleát a kondenzační produkty těchto parciálních esterů s ethylenoxidem, například polyoxyethylensorbitanmonooleát. Tyto emulze mohou také obsahovat sladidla a látky pro úpravu chuti.

Při přípravě sirupů a elixírů je možno použít sladidla, jako glycerol, propylenglykol, sorbitol nebo sacharózu. Tyto prostředky mohou také obsahovat změkčovadlo, konzervační prostředek, látku pro úpravu chuti a barvivo. Farmaceutický prostředek může také mít formu sterilní injekční suspenze ve vodě nebo v oleji. Takové suspenze je možno připravit známým způsobem při použití svrchu uvedených dispergačních činidel, smáčedel a suspenzních činidel. Sterilním injekčním prostředkem může také být sterilní injekční roztok nebo suspenze v netoxickém ředidle nebo rozpouštědle, vhodném pro parenterální podání, může například jít o roztok v 1,3-butandiolu. Z přijatelných nosných prostředí a rozpouštědel pro tento účel je možno uvést vodu, Ringerův roztok a isotonický roztok chloridu sodného. Je také možno použít pomocná rozpouštědla, jako ethanol, propylenglykol nebo polyethylenglykoly. Mimoto se jako

9 99 9 99

9 9 9 9 99 9

9 9 9 9 9 9

999999 9 9 99

9 9 9 9 9

23........

rozpouštědlo nebo suspenzní prostředí běžně užívají sterilní fixované oleje. Může jít například o syntetické mono- nebo diglyceridy. Při přípravě takových injekčních prostředků je také možno použít mastné kyseliny, například kyselinu olejovou.

Deriváty obecného vzorce I je možno podávat také ve formě čípku pro rektální podání. Tyto prostředky je možno připravit tak, že se účinná látka smísí s vhodnými nedráždivými pomocnými látkami, které jsou pevné při teplotě místnosti, avšak kapalné při teplotě v konečníku a budou se tedy po podání v konečníku roztavovat za současného uvolnění účinné látky. Takovými materiály jsou například kakaové máslo a polyethylenglykoly.

Pro místní podání je možno použít krémy, mazání, gely, roztoky nebo suspenze s obsahem derivátů obecného vzorce I. V průběhu přihlášky se prostředky pro místní podání rozumí také ústní vody a prostředky, určené ke kloktání. Prostředky pro místní podání budou obvykle obsahovat farmaceutický nosič, pomocné rozpouštědlo, emulgační činidlo, látky, usnadňující vstřebávání, konzervační činidlo a změkčovadlo.

Kombinace s dalšími účinnými látkami

Pří léčení a prevenci onemocnění, zprostředkovaných působením prostaglandinů, je mošno deriváty obecného vzorce I podávat spolu s dalšími účinnými látkami. To znamená, že farmaceutický prostředek pro léčení takových onemocnění bude obsahovat účinné množství derivátu obecného vzorce I a jednu nebo větší počet dalších účinných látek. Vhodné kombinace jsou například deriváty ·· ···· • to to » to · • · · • toto·· to • to obecného vzorce I a: (1) látky, antagonizující prostaglandin D2, jako S-5751, (2) kortikosteroidy, jako triamcinolonacetonid, (3) β-agonistické látky, jako salmeterol, formoterol, terbutalin, metaproterenol, albuterol a pdoobně, (4) látky, modifikující působení leukotrienů, včetně látek, antagonizujících leukotrien nebo lipooxygenázu, jako jsou montelukast, zafirlukast, pranlukast, nebo zileuton, (5) antihistaminové látky, jako jsou bromopheniramin, chlorpheniramin, dexchlorpheniramin, triprolidin, clemastin, diphendydramin, diphenylpyralin, tripelennamin, hydroxyzin, methdilazin, promethazin, trimeprazin, azatadin, cyproheptadin, antazolin, pheniramin, pyrilamin, astemizol, norastemizol, terfenadin, loratadin, cetirizin, levocetirizin, fexofenadin, descarboetoxyloratadin a podobně, (6) látky, snižující překrvení, jako phenylephrin, fenylpropanolamin, pseudoephedrin, oxymethazolin, epinephrin, naphazolin, xylomethazolin, propylhexedrin nebo levol-desoxyephedrin, (7) látky, tlumící kašel, jako kodein, hydrocodon, caramiphen, carbetapentan nebo dextramethorphan, (8) jiný ligand prostaglandinu včetně látek s agonistickým působením prostaglandinu F jako latanoprost, misoprostol, enprostil, rioprostil, ornoprostol nebo rosaprostol, (9) diuretické látky, (10) nesteroidní protizánětlivé látky » NSAID, například deriváty kyseliny propionové, jako alminoprofen, benoxaprofen, kyselina bucloxová, * carprofen, fenbufen, fenoprofen, fluprofen, flurbiprofen, ibuprofen, indoprofen, ketoprofen, miroprofen, naproxen, oxaprozin, pirprofen, pranoprofen, suprofen, kyselina riaprofenová a tioxaprofen, dále deriváty kyseliny octové, jako indomethacin, acemetacin, alclofenac, clidanac, diclofenac, fenclofenac, kyselina fenclozinová, φφ φ φ φ φ φφφ φ φφφφ φ φ

2V' ’ φ· fentiazac, furofenac, ibufenac, isoxepac, oxpinac, sulindac, tiopinac, tolmetin, zidometacin a zomepirac, deriváty kyseliny fenaminové, jako kyselina flufenaminová, meclofenaminová, mefenaminová, nifluminová a tolfenaminová, deriváty bifenylkarboxylových kyselin, jako diflunisal a flufenisal, oxicamy, jako isoxicam, piroxicam, sudoxicam a tenoxicam, salicyláty, jako kyselina acetylosalicylová nebo sulfasalazin a pyrazolony, jako apazon, benzipiperylon, fenprazon, mofebutazon, oxyphenbutazon, fenylbutazon, (11) inhibitory cyklooxygenázy-2, (COX-2) , jako celecoxib a refecoxíb, etorícoxíb a valdecoxib, (12) inhibitory fosfodiesterázy typu IV, PDE-IV, například Ariflo, roflumilast, (13) látky, antagonizující receptory chemikinu, zvláště CCR-1, CCR-2 a CCR-3, (14) látky, snižující koncentraci cholesterolu, jako inhibitory reduktázy HMG-CoA, například lovastatin, simvastatin a pravastatin, fluvastatin, atorvastatin a další statiny, sekvestrační látky, jako cholestyramin a colestipol, deriváty kyseliny nikotinové a fenofibrinové, jako gemfibrozil, clofibrat, fenofibrat, benzafibrat a také probucol, (15) antidiabetické látky, jako insulin, sulfonylmočoviny, biguanidy (metformin), inhibitory α-glukosidázy (acarbose) a glitazony (troglitazon, pioglitazon, englitazon, rosiglitazon a podobně), (16) prostředky s obsahem interferonu β, například interferon β-la, nebo interferon β-lb, (17) anticholinergní látky, jako látky, antagonizující muskarin, například ipratropiumbromid a tiotropiumbromid a také látky, selektivně antagonizující muskarinové receptory M3, (18) steroidní látky, jako beslomethason, methylprednisolon, betamethason, prednison, dexamethason a hydrokortison, (19) triptany, běžně užívané k léčení migrény, jako

2*5** sumitriptan a rizatriptan, (20) alendronát a další látky pro léčení osteporózy, (21) další látky, například kyselina 5-aminosalicylová a její prekursory, antimetabolity, jako azathioprin a 6-merkaptopurin, cytotoxické chemotherapeutické protinádorové látky, látky, antagonizující bradykinin (BK2), látky, antagonizující receptor TP, jako seratrodast, látky, antagonizující neurokinin NK1/NK2, látky, antagonizující VLA-4, například látky popsané v dokumentech US 5510332, WO 97/03094, WO 97/02289, WO 96/40781, WO 96/22966,

WO 96/20216, WO 96/01644, WO 96/06108, WO 95/15973 a WO 96/31206. Mimoto je možno prostředky uvedeného typu použít k léčení chorob, zprostředkovaných prostaglandinem D2 tak, že se nemocným podá prostředek, obsahující směs derivátů obecného vzorce I spolu s některou ze svrchu uvedených účinných látek. Množství účinných látek bude takové, jaké se běžně užívá při použití uvedených látek samostatné, v některých případech je však možno při použití takové kombinace použít nižší dávku jedné nebo většího počtu účinných látek.

Způsob výroby účinných látek

Deriváty obecného vzorce I je možno připravit způsoby, které budou dále znázorněny ve schématech 1 až 6 a způsoby, podrobně popsanými v těchto schématech.

Meziprodukty obecného vzorce IV je možno připravit způsobem, uvedeným ve schématu z příslušně substituovaného fenylhydrazinu obecného vzorce II. Reakcí fenylhydrazinu vzorce II s příslušným cyklopentanem vzorce III za podmínek Fisherovy indolové reakce nebo za podobných podmínek se získá produkt vzorce IV.

·· ···· fl · • · ·

I · fl ·· • · a • a a • a a a • · · · • a ··

Schéma 1

(IV)

Cn) podmínky Fisherovy indolové reakce nebo podobné podmínky

Sloučeniny obecného vzorce IV je také možno připravit způsobem, znázorněným ve schématu 2 z příslušně substituovaného anilinu obecného vzorce V. Reakcí anilinu vzorce V s jodem se získá sloučenina vzorce VI. Její kondenzací s příslušným cyklopentanonem s následnou cyklizací za Heckových nebo podobných podmínek s použitím kovového katalyzátoru se získá indol vzorce IV.

Schéma 2

1.. kyselina

2. Heckovy nebo podobné podmínky

Sloučeniny obecného vzorce III je možno způsobem, popsaným ve schématu 3 z příslušně připravit ·· · *· 4 «« »»·· « · ♦ ·*·« « « « ·«· ·» · · 9 · • ··»* 9 9 9 9 9 9 9 ·

O O * · ·· · ····

28···· * ♦* ··· ·· ·· substituovaného silylenoletheru vzorce VII nebo příslušně substituovaného enaminu vzorce VIII. Adicí příslušné elektrofilní látky, například QY, kde Y znamená atom halogenu nebo odštěpitelnou skupinu, se v přítomnosti baze, například alkyllithia nebo Lewisovy kyseliny, jako trifluoroctanu stříbrného, se silylenoletherem vzorce VII se získá cyklopentanon vzorce III. Tuto látku je také možno připravit adicí QY na příslušně substituovaný enamin vzorce VIII za podmínek Storkovy reakce nebo za podobných podmínek.

Schéma 3

Meziprodukty obecného vzorce X je možno připravit způsobem, popsaným ve schématu 4 z příslušně substituovaného indolu vzorce IX. Bromaci sloučeniny vzorce IX je možno uskutečnit působením bromu v polárním a bazickém rozpouštědle, například pyridinu, s následnou monoredukcí dibromovaného meziproduktu v kyselém prostředí za redukčních podmínek v přítomnosti kovů, čímž se získá indol vzorce X.

φφ φ φφ * φφφ φφφφ φ · φ φφφ φφφ φφφ φ φφφφ φφ φ φφφφ · ♦Φ φφφφ

Sloučeniny obecného vzorce I je možno připravit způsobem podle schématu 5 z příslušně substituovaného indolu obecného vzorce IV. Alkylací této látky působením příslušné elektrofilní látky, například ArXY, kde Y znamená atom halogenu nebo odštěpitelnou skupinu, se v přítomnosti baze ve vhodném rozpouštědle, například DMF získá derivát obecného vzorce I.

Sloučeniny obecného vzorce I je také možno připravit způsobem, popsaným ve schématu 6 z příslušně substituovaného bromindolu vzorce XI ze sloučeniny vzorce X s následnou vaznou reakcí, popsanou ve schématu 5. Reakci bromindolu XI s příslušnou organokovovou sloučeninou R³M, kde M znamená kov, jako B, Mg, Zn nebo Sn se v přítomnosti paladia získá produkt vzorce I.

Tentýž bromindol vzorce XI je také nejprve možno uvést do reakce s vhodným metalačním činidlem, například n-BuLi s následným působením elektrofilní látky, například R³Y za vzniku produktu obecného vzorce I.

Schéma 6

• · ·

30·

Reprezentativní sloučeniny

Reprezentativní sloučeniny obecného vzorce I jsou uvedeny v následujících tabulkách. V tabulce jsou uvedeny jednotlivé substituenty, v případě, že substituent není uveden, nachází se v uvedené poloze atom vodíku. Každá uvedená látka zahrnuje racemickou i diastereomerní směs, jednotlivé enanciomery a/nebo diastereomery. Způsoby pro dělení enanciomerů a diastereomerů jsou v oboru známé. Postupy jsou také popsány v příkladové části přihlášky.

phe = fenyl

R1/R2	R3	Q/Rů	X	Ar
7-SO2Me	5-C(O)CH3	CH2CO2H	CH2	4-Cl-phe
7-SO2Me	5-CH(OH)CH3	CH2CO2H	CH2	4-Cl-phe
7- SO2Me	5-Br	CH2CO2H	CH2	2,4-Cl2-phe
7- SO2Me	5-CH=CH2	CH2CO2H	CH2	4-Cl-phe
7- SO2Me	5-c-pr	CH2CO2H	ch₂	4-Cl-phe
7-SO2Me	5-(thiophen-2-yl)	CH2CO2H	CH2	4-Cl-phe
7- SO2NMe2		CH2CO2H	CH2	4-Cl-phe
7-F	5-Br	CH2CO2H/CH3	CH2	4-Cl-phe

R1/R2	R3	Q/R6	X	Ar
5-Br		CH2CO2H	CH2	4-Cl-phe
		CH2CO2H	SO2	2,4-Cl2~phe
		CH2CO2H	SO2	3,4-Cl2-phe
		CH2CO2H	SO2	4-Cl-phe
7-F		CH2CO2H	CO	2,4-Cl2-phe
7-F		CH2CO2H	CO	3,4-Cl2-phe
7-F		CH2CO2H	CO	4-Cl-phe
7-CF₃		CH2CO2H	CH2	2,4-Cl2-phe
7-CF3		CH2CO2H	CH2	3,4-Cl2-phe
7-CF3		CH2CO2H	CHCH3	3,4-Cl2-phe
7-CF3		CH2CO2H	ch₂	4-Cl-phe
7-F		CH(CH3)CO2H	CH2	2,4-Cl2-phe
7-F		CH2CO2H	CH2	2,4-Cl2-phe
7-F		CH2CO2H	CH2	3,4-Cl2-phe
7-F		CH2CO2H	CH2	4-Cl-phe
7-F		CH2CO2H	CH2	2-Cl-4-F-phe
7-F		CH2CO2H	CH2	2-F-4-Cl-phe
7-F		CH2CO2H	1,1-cPr	4-Cl-phe
7-F		CH2CO2H	CH2	2,4,6-Cl3-phe
7-F		CH2CO2H	CH2	2,3,4-Cl3-phe
7-F		CH2CO2H	CH2	2-Br-4-Cl-phe
7-F .		CH2CO2H	CH2	2-Cl-4-Br-phe
7-F		CH2CO2H	CH2	2-F-4-Br-phe
7-F		CH2CO2H	CH2	2-Cl-4-CN-phe
7-F		CH2CO2H	CH2	2-Cl-4-COCH3-phe
7-F		CH2CO2H	CH2	4-CN-phe
7-F		CH2CO2H	CH2	4-COCH3-phe
7-F		CH2CO2H	CH2	3-Cl-4-CN-phe
7-F		CH2CO2H	CH2	3-Cl-4-COCH3-phe
7-F		CH2CO2H	CH2	4-CF3 -phe
7-F		CH2CO2H	ch₂	2-Cl-4-CF3-phe
7-F		CH2CO2H	ch₂	3-Cl-4-CF3-phe

·· ···· • «··· · · · » · · · »· · · ·«

R1/R2	R3	Q/R6	X	Ar
7-F		CH2CO2H	CH2	2,6-Cl2-phe
7-F		CH2CO2H	ch₂	2,4,6-F3-phe
7-F	5-CO2Me	CH(CH3)CO2H	CH2	2,4-Cl2-phe
7-F	5-CO2Me	CH2CO2H	CH2	2,4-Cl2-phe
7-F	5-CO2Me	CH2CO2H	CH2	3,4-Cl2-phe
7-F	5-CO2Me	CH2CO2H	CH2	4-Cl-phe
7-F	5-CO2Me	CH2CO2H	CH2	2-Cl-4-F-phe
7-F	5-CO2Me	CH2CO2H	CH2	2-F-4-Cl-phe
7-F	5-CO2Me	CH2CO2H	1,1-c-pr	4-Cl-phe
7-F	5-CO2Me	CH2CO2H	ch₂	2,4,6-Cl3-phe
7-F	5-CO2Me	CH2CO2H	ch₂	2,3,4-Cl3-phe
7-F	5-CO2Me	CH2CO2H	CH2	2-Br-4-Cl-phe
7-F	5-CO2Me	CH2CO2H	CH2	2-Cl-4-Br-phe
7-F	5-CO2Me	CH2CO2H	CH2	2-F-4-Br-phe
7-F	5-CO2Me	CH2CO2H	ch₂	2-CI-4-CN-phe
7-F	5-CO2Me	CH2CO2H	ch₂	2-Cl-4-COCH3-phe
7-F	5-CO2Me	CH2CO2H	CH2	4-CN-phe
7-F	5-CO2Me	CH2CO2H	CH2	4-COCH3-phe
7-F	5-CO2Me	CH2CO2H	CH2	3-Cl-4-CN-phe
7-F	5-CO2Me	CH2CO2H	CH2	3-Cl-4-COCH3-phe
7-F	5-CO2Me	CH2CO2H	ch₂	4-CF3 -phe
7-F	5-CO2Me	CH2CO2H	CH2	2-Cl-4-CF3-phe
7-F	5-CO2Me	CH2CO2H	CH2	3-Cl-4-CF3-phe
7-F	5-CO2Me	CH2CO2H	ch₂	2,6-Cl2-phe
7-F	5-CO2Me	CH2CO2H	CH2	2,4,6-F3-phe
7-F	5-SOMe	CH(CH3)CO2H	CH2	2,4-Cl2-phe
7-F	5-SOMe	CH2CO2H	CH2	2,4-Cl2-phe
7-F	5-SOMe	CH2CO2H	CH2	3,4-Cl2-phe
7-F	5-SOMe	CH2CO2H	ch₂	4-Cl-phe
7-F	5-SOMe	CH2CO2H	CH2	2-Cl-4-F-phe
7-F	5-SOMe	CH2CO2H	CH2	2-F-4-Cl-phe
7-F	5-SOMe	CH2CO2H	1,1-c-pr	4-Cl-phe

• ·

R1/R2	R3	Q/R⁶	X	Ar
7-F	5-SOMe	CH2CO2H	CH2	2,4,6-Cl3-phe
7-F	5-SOMe	CH2CO2H	CH2	2,3,4-Cl3-phe
7-F	5-SOMe	CH2CO2H	CH2	2-Br-4-Cl-phe
7-F	5-SOMe	CH2CO2H	CH2	2-Cl-4-Br-phe
7-F	5-SOMe	CH2CO2H	CH2	2-F-4-Br-phe
7-F	5-SOMe	CH2CO2H	CH2	2-Cl-4-CN-phe
7-F	5-SOMe	CH2CO2H	CH2	2-Cl-4-COCH3-phe
6,7-F₂	5-SOMe	CH2CO2H	CH2	4-CN-phe
7-F	5-SOMe	CH2CO2H	CH2	4-COCH3-phe
7-F	5-SOMe	CH2CO2H	CH2	3-Cl-4-CN-phe
7-F	5-SOMe	CH2CO2H	CH2	3-Cl-4-COCH3-phe
7-F	5-SOMe	CH2CO2H	CH2	4-CF3 -phe
7-F	5-SOMe	CH2CO2H	CH2	2-Cl-4-CF3-phe
7-F	5-SOMe	CH2CO2H	CH2	3-Cl-4-CF3-phe
7-F	5-SOMe	CH2CO2H	CH2	2,6-Cl2-phe
7-F	5-SOMe	CH2CO2H	CH2	2,4,6-F3-phe
7-SO2Me	5-C(O)CH3	CH(CH3)CO2H	CH2	2,4-Cl2-phe
7-SO2Me	5-C(O)CH3	CH2CO2H	CH2	2,4-Cl2-phe
7-SO2Me	5-C(O)CH3	CH2CO2H	CH2	3,4-Cl2-phe
7-SO2Me	5-C(O)CH3	CH2CO2H	CH2	2-Cl-4-F-phe
7-SO2Me	5-C(O)CH3	CH2CO2H	CH2	2-F-4-Cl-phe
7-SO2Me	5-C(O)CH3	CH2CO2H	1,1-c-pr	4-Cl-phe
7-SO2Me	5-0(0)0¾	CH2CO2H	CH2	2,4,6-Cl3-phe
7-SO2Me	5-C(O)CH3	CH2CO2H	CH2	2,3,4-Cl3-phe
7-SO2Me	5-C(O)CH3	CH2CO2H	CH2	2-Br-4-Cl-phe
7-SO2Me	5-C(O)CH3	CH2CO2H	CH2	2-Cl-4-Br-phe
7-SO2Me	5-C(O)CH3	CH2CO2H	CH2	2-F-4-Br-phe
7-SO2Me	5-C(O)CH3	CH2CO2H	CH2	2-Cl-4-CN-phe
7-SO2Me	5-C(O)CH3	CH2CO2H	CH2	2-C1-4-COCH3-phe
7-SO2Me	5-0(0)0¾	CH2CO2H	CH2	4-CN-phe
7-SO2Me	5-0(0)0¾	CH2CO2H	CH2	4-COCH3-phe
7-SO2Me	5-0(0)0¾	CH2CO2H	CH2	3-Cl-4-CN-phe

• ·

R1/R2	R3	Q/R6	X	Ar
7-SO₂Me	5-C(O)CH3	CH2CO2H	CH₂	3-Cl-4-COCH3-phe
7-SO₂Me	5-C(O)CH3	CH2CO2H	ch₂	4-CF3 -phe
7-SO₂Me	5-C(O)CH3	CH2CO2H	CH₂	2-Cl-4-CF3-phe
7-SO₂Me	5-C(O)CH3	CH2CO2H	CH₂	3-Cl-4-CF3-phe
7-SO₂Me	5-C(O)CH3	CH2CO2H	ch₂	2,6-Cl₂-phe
7-SO₂Me	5-C(O)CH3	CH2CO2H	CH₂	2,4,6-F3-phe
7-SO₂Me	5-CH(OH)CH3	CH(CH3)CO2H	ch₂	2,4-Cl₂-phe
7-SO₂Me	5-CH(OH)CH3	CH2CO2H	CH₂	2,4-Cl₂-phe
7-SO₂Me	5-CH(OH)CH3	CH2CO2H	ch₂	3,4-Cl₂-phe
7-SO₂Me	5-CH(OH)CH3	CH2CO2H	ch₂	2-Cl-4-F-phe
7-SO₂Me	5-CH(OH)CH3	CH2CO2H	ch₂	2-F-4-Cl-phe
7-SO₂Me	5-CH(OH)CH3	CH2CO2H	1,1-c-pr	4-Cl-phe
7-SO₂Me	5-CH(OH)CH3	CH2CO2H	ch₂	2,4,6-Cl3-phe
7-SO₂Me	5-CH(OH)CH3	CH2CO2H	ch₂	2,3,4-Cl3-phe
7-SO₂Me	5-CH(OH)CH3	CH2CO2H	ch₂	2-Br-4-Cl-phe
7-SO₂Me	5-CH(OH)CH3	CH2CO2H	ch₂	2-Cl-4-Br-phe
7-SO₂Me	5-CH(OH)CH3	CH2CO2H	ch₂	2-F-4-Br-phe
7-SO₂Me	5-CH(OH)CH3	CH2CO2H	CH₂	2-Cl-4-CN-phe
7-SO₂Me	5-CH(OH)CH3	CH2CO2H	ch₂	2-Cl-4-COCH3-phe
7-SO₂Me	5-CH(OH)CH3	CH2CO2H	ch₂	4-CN-phe
7-SO₂Me	5-CH(OH)CH3	CH2CO2H	ch₂	4-COCH3-phe
7-SO₂Me	5-CH(OH)CH3	CH2CO2H	CH₂	3-Cl-4-CN-phe
7-SO₂Me	5-CH(OH)CH3	CH2CO2H	ch₂	3-Cl-4-COClÍ3-phe
7-SO₂Me	5-CH(OH)CH3	CH2CO2H	ch₂	4-CF3 -phe
7-SO₂Me	5-CH(OH)CH3	CH2CO2H	ch₂	2-Cl-4-CF3-phe
7-SO₂Me	5-CH(OH)CH3	CH2CO2H	ch₂	3-Cl-4-CF3-phe
7-SO₂Me	5-CH(OH)CH3	CH2CO2H	ch₂	2,6-Cl₂-phe
7-SO₂Me	5-CH(OH)CH3	CH2CO2H	ch₂	2,4,6-F3-phe
7-SO₂Me	5-CO2CH3	CH(CH3)CO2H	ch₂	2,4-Cl₂-phe
7-SO₂Me	5-CO2CH3	CH2CO2H	ch₂	2,4-Cl₂-phe
7-SO₂Me	5-CO2CH3	CH2CO2H	ch₂	3,4-Cl₂-phe
7-SO₂Me	5-CO2CH3	CH2CO2H	ch₂	4-Cl-phe

♦ ···· ·

R1/R2	R3	Q/R6	X	Ar
7-SO2Me	5-CO2CH3	CH2CO2H	CH2	2-Cl-4-F-phe
7-SO2Me	5-CO2CH3	CH2CO2H	CH2	2-F-4-Cl-phe
7-SO2Me	5-CO2CH3	CH2CO2H	1,1-c-pr	4-Cl-phe
7-SO2Me	5-CO2CH3	CH2CO2H	CH2	2,4,6-Cl3-phe
7-SO2Me	5-CO2CH3	CH2CO2H	CH2	2,3,4-Cl3-phe
7-SO2Me	5-CO2CH3	CH2CO2H	CH2	2-Br-4-Cl-phe
7-SO2Me	5-CO2CH3	CH2CO2H	CH2	2-Cl-4-Br-phe
7-SO2Me	5-CO2CH3	CH2CO2H	CH2	2-F-4-Br-phe
7-SO2Me	5-CO2CH3	CH2CO2H	CH2	2-Cl-4-CN-phe
7-SO2Me	5-CO2CH3	CH2CO2H	CH2	2-Cl-4-COCH3-phe
7-SO2Me	5-CO2CH3	CH2CO2H	CH2	4-CN-phe
7-SO2Me	5-CO2CH3	CH2CO2H	CH2	4-COCH3-phe
7-SO2Me	5-CO2CH3	CH2CO2H	ch₂	3-Cl-4-CN-phe
7-SO2Me	5-CO2CH3	CH2CO2H	CH2	3-Cl-4-COCH3-phe
7-SO2Me	5-CO2CH3	CH2CO2H	CH2	4-CF3 -phe
7-SO2Me	5-CO2CH3	CH2CO2H	ch₂	2-Cl-4-CF3-phe
7-SO2Me	5-CO2CH3	CH2CO2H	CH2	3-CI-4-CF3-phe
7-SO2Me	5-CO2CH3 '	CH2CO2H	CH2	2,6-Cl2-phe
7-SO2Me	5-CO2CH3	CH2CO2H	CH2	2,4,6-F3-phe
7-SO2Me	5-CO2CH3	CH2CO2H	SO₂	2,4-Cl2-phe
7-SO2Me	5-CO2CH3	CH2CO2H	S0₂	3,4-Cl2-phe
7-SO2Me	5-CO2CH3	CH2CO2H	SO2	4-Cl-phe
7-SOMe	5-CO2CH3	CH2CO2H	CH2	2,4-Cl2-phe
7-SOMe	5-CO2CH3	CH2CO2H	ch₂	3,4-Cl2-phe
7-SOMe	5-CO2CH3	CH2CO2H	CH2	4-Cl-phe
7-SO2Me	5-CO2CH3	CHCH3CO2H	ch₂	2,4-Cl2~phe
7-SO2Me	5-CO2CH3	CHCH3CO2H	CH2	3,4-Cl2-phe
7-SO2Me	5-CO2CH3	CHCH3CO2H	CH2	4-Cl-phe
7-SO2Me	5-CO2CH3	CH2CO2H/CH3	ΟΪ2	2,4-Cl2-phe
7-SO2Me	5-CO2CH3	CH2CO2H/CH3	CH2	3,4-Cl2-phe
7-SO2Me	5-CO2CH3	CH2CO2H/CH3	CH2	4-Cl-phe
7-SO2Me	5-CO2CH2CH3	CH2CO2H	CH2	3,4-Cl2-phe

• · · • · · · • · ··

R1/R2	R3	Q/R<>	X	Ar
7-SO2Me	5-CO2CH2CH3	CH2CO2H	CH2	4-Cl-phe
7-SO2Me	5-C(OH)(CH2)2	CH2CO2H	CH2	2,4-Cl2-phe
7-SO2Me	5-C(OH)(CH2)2	CH2CO2H	CH2	3,4-Cl2-phe
7-SO2Me	5-C(OH)(CH2)2	CH2CO2H	CH2	4-Cl-phe
7-SO2Me	5-(thiophen-2-yl)	CH2CO2H	CH2	2,4-Cl2-phe
7-SO2Me	5-(thiophen-2-yl)	CH2CO2H	CH2	3,4-Cl2-phe
7-F	5-(thiophen-2-yI)	CH2CO2H	CH2	2,4-Cl2-phe
7-F	5-(thiophen-2-yl)	CH2CO2H	ch₂	3,4-Cl2-phe
7-F	5-(thiophen-2-yl)	CH2CO2H	CH2	4-Cl-phe
7-F	5-(2-oxazolyl)	CH2CO2H	CH2	2,4-Cl2-phe
7-F	5-(2-oxazolyl)	CH2CO2H	CH2	3,4-Cl2-phe
7-F	5-(2-oxazolyl)	CH2CO2H	CH2	4-Cl-phe
7- S02Me	5-(2-oxazolyl)	CH2CO2H	CH2	2,4-Cl2-phe
7- S02Me	5-(2-oxazolyl)	CH2CO2H	CH2	3,4-Cl2-phe
7- S02Me	5-(2-oxazolyl)	CH2CO2H	CH2	4-Cl-phe
7- S02Me	5-i-Pr	CH2CO2H	CH2	2,4-Cl2-phe
7- S02Me	5-i-Pr	CH2CO2H	CH2	3,4-Cl2-phe
7- S02Me	5-i-Pr	CH2CO2H	CH2	4-Cl-phe
7- SO2Me	5-c-Pr	CH2CO2H	CH2	2,4-Cl2-phe
7- S02Me	5-c-Pr	CH2CO2H	CH2	3,4-Cl2-phe
7- S02Me	5-c-Pr	CH2CO2H	CH2	4-Cl-phe
7-F	5-i-Pr	CH2CO2H	CH2	2,4-Cl2-phe
7-F	5-i-Pr	CH2CO2H	CH2	3,4-Cl2-phe
7-F	5-i-Pr	CH2CO2H	CH2	4-Cl-phe
7-F	5-c-Pr	CH2CO2H	CH2	2,4-Cl2-phe
7-F	5-c-Pr	CH2CO2H	CH2	3,4-Cl2-phe
7-F	5-c-Pr	CH2CO2H	CH2	4-Cl-phe
7-F	5-i-Bu	CH2CO2H	CH2	2,4-Cl2-phe
7-F	5-i-Bu	CH2CO2H	CH2	3,4-Cl2-phe
7-F	5-i-Bu	CH2CO2H	CH2	4-Cl-phe
7-F	5-Br	CH2CO2H	ch₂	2,4-Cl2-phe
7-F	5-Br	CH2CO2H	CH2	3,4-Cl2-phe

• ·

R1/R2	R3	Q/R6	X	Ar
7-F	5-Br	CH2CO2H	CH2	4-Cl-phe
7-F	5-1	CH2CO2H	CH2	2,4-Cl2-phe
7-F	5-1	CH2CO2H	CH2	3,4-Cl2-phe
7-F	5-1	CH2CO2H	CH2	4-Cl-phe
6,8-02	7-F	CH2CO2H	ch₂	2,4-Cl2-phe
6,8-02	7-F	CH2CO2H	CH2	3,4-Cl2-phe
6,8-02	7-F	CH2CO2H	CH2	4-Cl-phe
7-F	5-c-Bu	CH2CO2H	CH2	2,4-Cl2-phe
7-F	5-c-Bu	CH2CO2H	CH2	3,4-Cl2-phe
7-F	5-c-Bu	CH2CO2H	CH2	4-Cl-phe
7-F	5-C(OH)(CH₂)3	CH2CO2H	ch₂	2,4-Cl2-phe
7-F	5-C(OH)(CH2)3	CH2CO2H	CH2	3,4-Cl2-phe
7-F	5-C(OH)(CH₂)3	CH2CO2H	CH2	4-Cl-phe
7-SO2Me	5-C(OH)(CH₂)3	CH2CO2H	CH2	2,4-Cl2-phe
7-SO2Me	5-C(OH)(CH₂)3	CH2CO2H	CH2	3,4-Cl2-phe
7-SO2Me	5-C(OH)(CH₂)3	CH2CO2H	CH2	4-Cl-phe
7-SO2Me	5-(2-oxetanyl)	CH2CO2H	ch₂	2,4-Cl2-phe
7-SO2Me	5-(2-oxetanyl)	CH2CO2H	CH2	3,4-Cl2-phe
7-SO2Me	5-(2-oxetanyl)	CH2CO2H	CH2	4-Cl-phe
7-F	5-(2-oxeíanyl)	CH2CO2H	CH2	2,4-Cl2-phe
7-F	5-(2-oxetanyl)	CH2CO2H	CH2	3,4-Cl2-phe
7-F	5-(2-oxetanyl)	CH2CO2H	CH2	4-Cl-phe

R1/R2	R3	R4/R5	Q	Ar
7-F	5-CO2Me	1-OH	CH2CO2H	2,4-Cl2-phe

• · · 99 · ······ • · · ···· · · · • ···· · · · · · · · · • · · · · ···· ···· · ·· ··· ·· ··

3<r

R1/R2	R3	R4/R5	Q	Ar
7-F	5-CO₂Me	1-OH	CH2CO2H	3,4-Cl₂-phe
7-F	5-CO₂Me	1-OH	ch₂co₂h	4-Cl-phe
7-F	5-CO₂Me	2-OH	CH2CO2H	2,4-Cl₂-phe
7-F	5-CO₂Me	2-OH	CH2CO2H	3,4-Cl₂-phe
7-F	5-CO₂Me	2-OH	CH2CO2H	4-Cl-phe
7-F	5-CO₂Me	1-oxo	CH2CO2H	2,4-Cl₂-phe
7-F	5-CO₂Me	1-oxo	CH2CO2H	3,4-Cl₂-phe
7-F	5-CO₂Me	1-oxo	CH2CO2H	4-Cl-phe
6,8-F₂	5-COMe	2-OH	CH2CO2H	2,4-Cl₂-phe
6,8-F₂	5-COMe	1-OH	CH₂CO₂H	3,4-Cl₂-phe
6,8-F₂	5-COMe	1-oxo	CH2CO2H	4-Cl-phe

RÍ/R²	R³	Q <2 1	Ϊ⁶	Ar
7-F	5-C(O)CH3	*WV» A	7 ^co₂h	2,4-Cl₂-phe
7-F	5-C(O)CH3		»1	3,4-Cl₂-phe
7-F	5-C(O)CH3		II	4-Cl-phe
7-F	5-CH(OH)CH3	-Wv* ho₂c		2,4-Cl₂-phe
7-F	5-CH(OH)CH3		II	3,4-Cl₂-phe
7-F	5-CH(OH)CH3		II	4-Cl-phe
7-SO₂Me	5-CO₂Me	ΛΛτν»	7 ^οο₂η	4-Cl-phe

• φ • · · ► φφφφ φφφφ φ

• φ

3$..·

Rl/R²	r3	Qa R⁶	Ar
7-SO2Me	5-CO2Me	*vw» ^v^co₂h	4-Cl-phe
7-SO2Me	5-c-Pr	'Wv' vý ho₂c	4-Cl-phe
7-F	5-CH(OH)CH3	vw co₂h	3,4-Cl2-phe
6,8-02	7-SO2Me	'WV' CO₂H	4-Cl-phe

Zkoušky na stanovení biologické účinnosti

Deriváty obecného vzorce I je možno podrobit následujícím zkouškám k průkazu jejich antagonistického nebo agonistického účinku na prostanoidy in vitro a in vivo a ke stanovení selektivity jejich účinku. Byla prokázána účinnost na receptorech prostaglandinu DP, EP_X, EP₂, EP₃, EP₄, FP, IP a TP.

Stálá exprese prostanoidních receptorů v buněčné linii lidských embryonálních buněk ledvin HEK, 293 (ebna)

Zkouška byla prováděna tak, že cDNA pro prostanoidní receptor, odpovídající plné délce kódové sekvence, byla subklonována v příslušné poloze vektorů pro expresi savčích molekul a pak byla použita k transfekci buněk HEK 293 (ebna). U těchto buněk dochází k expresi jednotlivých typů cDNA, buňky se pěstují za selekčních podmínek a jednotlivé kolonie se izolují po 2 až 3 týdnech růstu při

• · použití příslušných postupů, načež se množí na klonované buněčné linie.

Vazné zkoušky s prostanoidními receptory

Buňky HEK 293 (ebna) se pěstují v kultuře, pak se izolují a membrány buněk se připraví diferenciálním odstředěním s následným rozrušením buněk v přítomnosti inhibitorů proteázy, tak aby bylo možno membrány použít při zkouškách na vazbu receptorů. Zkoušky na vazbu na prostanoidní receptory se provádějí v lOmM MES/KOH, pH 6,0 (EPs, FP a TP) nebo 10 mM HEPES/KOH, pH 7,4 (DP a IP) s obsahem 1 mM EDTA, 10 mM dvojvazného kationtu a příslušného radioaktivního ligandu. Reakce se zahájí přidáním proteinu membrán. Ligandy se přidávají v dimethylsulfoxidu, koncentrace dimethylsulfoxidu se při každé inkubaci udržuje na 1 % objemovém. Nespecifická vazba se stanoví v přítomnosti 1 μΜ odpovídajícího neradioaktivního prostanoidu. Inkubace se provádějí 60 minut při teplotě místnosti nebo při teplotě 30 °C a jsou ukončeny rychlou filtrací. Specifická vazba se vypočítá odečtením nespecifické vazby od celkové vazby. Zbývající specifická vazba pro každou koncentraci ligandu se vypočítá a vyjádří se jako funkce koncentrace ligandu, aby bylo možno vytvořit křivku závislosti na koncentraci pro stanovení afinity ligandu.

Zkoušky na agonistický a antagonistický účinek na prostanoidních receptorech

Byly provedeny zkoušky s neporušenými buňkami k měření stimulace (EP₂, EP₄, DP a IP v buňkách HEK 2 93 (ebna)) nebo k měření inhibice (EP₃ u lidských • · • * · · ··· ·· · ·· · ······« · · · · * * • « ·** · · · · ···· · ·· .·· ·· ·· erythroleukemických buněk HEL), bylo měřeno nitrobuněčné hromadění cAMP nebo mobilizace nitrobuněčného vápníku (EP_lř FP a TP u buněk HEK 293 (ebna) po stálé transfekci apoaequorinem), aby bylo možno stanovit, zda mají ligandy receptorů agonistický nebo antagonistický účinek. V případě zkoušky na hromadění cAMP byly buňky izolovány a znovu uvedeny do suspenze v HBSS s obsahem 25 mM HEPES, pH 7,4. Inkubační směs obsahovala 100 μΜ RO-20174 (inhibitor fosfodiesterázy typu IV, Biomol) a pouze v případě inhibice EP₃ také 15 μΜ forskolinu ke stimulaci produkce cAMP. Vzorky se inkubuji 10 minut při teplotě 37 °C, reakce se ukončí a stanoví se koncentrace cAMP. V případě zkoušky na mobilizaci vápníku se buňky uvedou do styku s kofaktory, redukovaným glutathionem a coelenterazinem, pak se izolují a znovu uvedou do suspenze v Hamově prostředí F12. Mobilizace vápníku se měří sledováním luminiscence, vyvolané vazbou vápníku na nitrobuněčný fotoprotein aequorin. Ligandy se přidávají v dimethylsulfoxidu, jehož koncentrace se udržuje při každé inkubaci na 1 % objemovém. V případě agonistů se odpověď vyjadřuje jako funkce koncentrace ligandu a hodnota EC₅₀a maximální odpověď se srovnávají s prostanoidním standardem, čímž se vypočívá účinnost. V případě antagonistického účinku se stanoví schopnost ligandu vyvolat inhibici agonistické odpovědi Schildovou analýzou a vypočítá se K_B a sklon křivky.

Prevence překrvení nosní sliznice, vyvolaného PGD2 nebo alergenem u alergických ovcí

K pokusu byly použity zdravé dospělé ovce s hmotností 18 až 50 kg. Ovce byly vybrány podle přirozené ·· · • · · • · · • · · · · • * ··· · « ·· ·· » · · • · · · • · · « · • · · · ·

9.99 ♦· ·· kladné kožní reakce na nitrokožní injekci extraktu Ascaris suum.

Měření překrvení nosní sl i zníce bylo, prováděno u bdících ovcí. Ovce byly uloženy hřbetem vzhůru a jejich hlavy byly imobilizovány. Pak byl měřen odpor dýchacích cest v nose NAR při použití rhinometrie s použitím masky. Do nosního průchodu byla aplikována místní anesthetická látka, 2% lidocain, aby bylo možno zasunout nasotracheální trubici. Vyčnívající konec trubice se připoj í na pneumotachograf a zaznamenává se množství procházejícího vzduchu a tlak na osciloskopu, připojeného na počítač pro průběžný výpočet NAR, Překrvení nosní sliznice se vyvolá podáním aerosolového roztoku, ventil se uvede do činnosti lOkrát pro každý nosní otvor. Změny v překrvení sliznice se zaznamenávají před nanesením látky, vyvolávající překrvení a 60 až 120 minut po jejím nanesení.

Prevence obstrukce nosu, vyvolané podáním PGD2 a alergenu u opic Cynomolgus

K pokusu byly použiti samci opic Cynomolgus s hmotností 4 až 10 kg. Opice byly vybírány na základě kladné kožní reakce na intradermální podání extraktu Ascaris suum. Před každým pokusem byly opice ponechány přes noc nalačno, pouze voda byla podávána podle libosti. Následujícího rána byl opicím podán uklidňující prostředek ketamin v dávce 10 až 15 mg/kg i.m. před vyjmutím opice z klece. Pak se opice uloží na vyhřívanou desku s teplotou 36 °C a injekčně se podá najednou dávka 5 až 12 mg/kg propofolu i.v. Pak se opice intubují endotracheální trubicí s vnitřním průměrem 4 až 6 mm a • 4 · · ·· 4 • · · • · · * ·»·· · * ·

•Φ ··«·

anestezie se udržuje kontinuální nitrožilní infusí propofolu 23 až 40 mg/kg/h. V průběhu pokusu se sledují životní funkce, to znamená srdeční frekvence, krevní tlak, počet dechů za minutu a tělesná teplota.

Měření překrvení nosní sliznice se provádí pomocí pneumotachografu, který je spojen s endotracheální trubicí. Tímto způsobem je možno prokázat normální tlak v průdušnici. Pak se užije rhinometr k vyhodnocení překrvení nosní sliznice. Tato technika poskytuje neinvasivní 2D echogram vnitřního prostoru nosu. Objem nosu a minimální průřez podél celé délky nosní dutiny se vypočítá v průběhu 10 sekund počítačem s běžným softwarem (Hood Laboratories, Mass, USA). Překrvení nosní sliznice se vyvolá podáním alergenu přímo do nosní dutiny v objemu 50 μΐ. Změny překrvení nosní sliznice se zaznamenávají před podáním alergenu a 60 až 120 minut po něm. V případě, že dojde k překrvení sliznice, bude to mít za následek snížení vnitřního objemu nosu.

Plicní mechanika u bdících kotulů veverkovitých

Pokus se provádí tak, že se trénované opičky umístí, v aerosolové komoře. Pro kontrolní účely se plicní mechanika měří jako dýchací parametry po dobu přibližně 30 minut ke stanovení normálních hodnot pro příslušný den. V případě perorálního podání se sloučeniny rozpustí nebo uvedeou do suspenze v 1% roztoku methocelu (methylcelulóza 65 HG, 400 cps) a podají se v objemu 1 ml/kg tělesné hmotnosti. Pro aplikaci aerosolu se užije DeVilbissův ultrazvukový rozprašovač. Po 5 minutách až 4 hodinách se pak podá ve formě aerosolu PGD2 nebo antigen Ascaris suum v ředění 1:25.

4 » 4

4 44 * 4 4 «44

4 4 4 4 • 4444 44 4

4 4 4

4444 4 44 4

Po podání PGD2 nebo antigenu se každou minutu vypočítávají údaje jako procentuální změna od kontrolních hodnot pro každý parametr činnosti dýchacích cest včetně odporu R_l a dynamické hodnoty Cdyn- Výsledky pro každou sloučeninu jsou zaznamenávány alespoň 60 minut a pak se srovnávají se základními kontrolními hodnotami, které byly získány předem pro totéž zvíře. Mimo to se odděleně vypočítají průměrné hodnoty pro období, trvající 60 minut po podání PGD2 nebo antigenu a tato hodnota se použije k vypočítání celkové inhibice působení mediátoru nebo antigenu v % zkoumanou látkou. Pro statistické hodnocení se použije párový t-test, zkoušky se provádějí podle publikace McFarlane, C. S. a další, Prostaglandins, 28, 173-182, 1984 a McFarlane, C. S. a další, Agents Actions, 22, 63-68 (1987).

Prevence vyvolání bronchokonstrikce u alergických ovcí

K pokusu byly použity dospělé ovce s průměrnou hmotností 35 kg při rozmezí 18 až 50 kg. Všechna zvířata splňovala dvě podmínky: a) zvířata měla přirozenou kožní reakce na ředění 1:1000 nebo 1:10000 extraktu Ascaris suum (Greer Diagnostic, Leonois, NC), a b) zvířata byla již předem podrobena inhalačním zkouškám při použití extraktu Ascaris suum, při nichž došlo k akutní konstrikci průdušek i k pozdnímu uzávěru průdušek podle publikace W. M. Abraham a další, Am. Rev. Resp. Dis., 128, 839-44, 1983.

Mechanika činnosti dýchacích cest byla měřena tak, že ovce byly bez použití uklidňujících látek uloženy na desku hřbetem vzhůru a jejich hlavy byly imobilizovány.

·* 9 ·· • · · a 9 9 • 9 9 9 9

9999 99 9

9 9 9

9999 9 99 9 ·· ···* • · 9

9 9

9 9 9

99

Po místním znecitlivění nosních průchodů 2% lidocainu byl zaveden nafukovací kathetr jednou nozdrou do spodní části jícnu. Pak byly ovce intubovány při použití endotracheální trubice s manžetou druhým nosním průchodem při použití ohebného bronchoskopu s optickým vláknem k zavedení trubice. Pomocí kathetru v jícnu byl stanoven pleurální tlak, katetr byl naplněn 1 ml vzduchu a byl uložen tak, že při vdechu dochází k negativnímu tlaku s jasně rozeznatelnými oscilacemi, vyvolanými srdeční činností. Laterální tlak v průdušnici se měří cévkou s vnitřním průměrem 2,5 mm s postranním otvorem, cévka se zasune distálně od konce tracheální trubice.

Transpulmonární tlak, který je rozdílem mezi tracheálním tlakem a pleurálním tlakem, se měří diferenciálním převaděčem tlaku (DP45, Validyne Corp., Northridge, CA). Pro měření plicního odporu R_L se konec nasotracheální trubice připojí na pneumotachograf (Fleisch, Dyna Sciences, Blue Bell, PA) . Signály pro průtok s transpulmonální tlak se zaznamenávají na osciloskop (model DR-12, Electronic for Medicine, White Plains, NY), spojený s digitálním počítačem PDP-11 (Digital Equipment Corp., Maynard MA) pro průběžný výpočet R_L z transpulmonárního tlaku, získaného respiračního objemu a procházejícího proudu vzduchu. Pro stanovení R_L se užijí analytické údaje z 10 až 15 dechů. Mimoto se plethysmografem měří objem plynu v hrudníku V_tg, čímž se získá specifický plicni odpor SR_L = R_L · V_tg.

Praktické provedení vynálezu bude osvětleno následujícími příklady, které však nemají sloužit k omezení rozsahu vynálezu.

• · · · · • · · · • · · · · • ······ ·

Příklady provedení vynálezu

1. V příkladové části byly všechny výsledné produkty obecného vzorce I analyzovány při použití NMR, TLC a pomocí elementární analýzy nebo hmotové spektroskopie.

2. Meziprodukty byly analyzovány pomocí NMR a TLC.

3. Většina sloučenin byla čištěna rychlou chromatografii na silikagelu, překrystalováním a/nebo suspendováním v rozpouštědle s následným odfiltrováním pevného podílu.

4. Průběh reakcí byl sledován pomocí TLC, doba reakce je uvedena pouze k ilustračním účelům.

5. Přebytek enanciomeru byl měřen pomocí HPLC v normální fázi na chirálním sloupci ChiralPak AD, 250 x 4,6 mm.

Následující meziprodukty byly připraveny podle údajů, uvedených v literatuře, nebo jsou běžně dodávány od uvedených výrobců.

1. Ethyl-2-(2-oxocyklopentyl)acetát: Acros/Fisher Scientific.

2. 4 -fluor-2-iodanilin: Beugelmans, R. , Chbani, M. Bull. Soc. Chim. Fr. 1995, 132, 306-313.

3. Ethyl-2-(1-methyl-2-oxocyklopentyl) acetát: Hudlicky T, Short R. P., Revol, J.-M., Ránu B. C. J. Org. Chem. 1983, 48, 4453-4461.

4. 4-methylsulfonylanilinhydrochlorid: Acros/Fisher Scientific.

• ·

• ·· ·

Příklad 1

OH

Kyselina (±) -2- {5-acetyl-4- [ (4-chlorfenyl) methyl] - 7- (methyl sul fonyl) -1,2,3 -trihydrocyklopenta [2,3 -b] indol - 3 -yl}octová

Stupeň 1: 2-jód-4-(methylsulfonyl) fenylamin

K energicky míchanému roztoku 100 g

4-(methylsulfonyl)fenylaminu v roztoku v 5,5 litrů ethanolu se při teplotě 50 °C přidá směs 49,3 g jódu a 110 g síranu stříbrného v 1 litru ethanolu. Směs se 1 hodinu míchá a pak se přidání opakuje. Po další hodině se přidá směs 49,3 g jódu- a 43,8 g síranu stříbrného v 1 litru ethanolu a směs se míchá přes noc. Pak se roztok za horka zfiltruje přes celit a rozpouštědlo se stripuje. Odparek se rozetře s 1 litrem ethanolu při teplotě 50 °C celkem 45 minut a roztok se zchladí na 0 °C. Produkt se odfiltruje, čímž se získá 140 g produktu jako hnědá pevná látka.

^JH NMR (aceton-d₆) δ 7,95 (1H, d) , 7,54 (1H, dd) , 6,79 (1H, d), 6,19 (2H, br s), 3,08 (3H, s).

MS (+APCI) m/z 298.2 (M+H) ⁺

Stupeň 2: ( + )-ethyl-2-[7-(methylsulfonyl)-1,2,3-trihydrocyklopenta[2,3-b]indol-3-yl] acetát

O och₂ch₃ • · • ·

K roztoku 150 g 2-jód-4-(methylsulfonyl) fenylaminu a

4,8 g PTSA ve 30 ml DMF, zbaveném plynů a udržovaném pod dusíkem se postupně přidá 135 g tetraethoxysilanu a 129 g ethyl-2-(2-oxocyklopentyl)acetátu a výsledná směs se míchá 6 hodin při teplotě 130 až 140 °C. Pak se přidá ještě 30 ml DMF, roztok se zbaví plynů a pak se postupně přidá 270 ml Hunigovy baze a 3,4 g Pd(OAc)₂- Roztok se zahřívá 2 hodiny na 120 °C a pak se zchladí na teplotu místnosti. Reakce se zastaví přidáním 300 ml 1 N HCl a 200 ml isopropylacetátu, pak se směs zfiltruje přes celit. Fáze se oddělí a kyselá fáze se extrahuje 2x 200 ml isopropylacetátu. Organické vrstvy se spojí, promyjí se nasyceným vodným roztokem chloridu sodného, vysuší se bezvodým síranem sodným, zfiltrují přes celit a odpaří. Surový produkt se dále čistí rychlou chromatografií, k eluci se užije 50% ethylacetát v hexanech, čímž se získá 63 g produktu ve formě žluté pevné látky.

¹H NMR (aceton-dg) δ 10,23 (1H, br s), 7,98 (1H, s), 7,58 (2H, m) , 4,14 (2H, q) , 3,63 (1H, s) , 3,04 (3H, s) , 2,902,65 5H, m), 2,19 (1H, m), 1,22 (3H, t).

MS (+APCI) m/z 322,2 (M+H)⁺.

Stupeň 3: kyselina ( + )-2-[7-(methylsulfonyl)-1,2,3-tríhydrocyklopenta[2,3-b]índol-3-yl]octová

OH

K roztoku 10,4 g esteru ze stupně 2 v 80 ml THF se při teplotě místnosti.přidá 40 ml methanolu a pak 40 ml • · · ·

2N NaOH. Po 1,5 hodině se reakční směs vlije do dělicí nálevky, obsahující směs EtOAc/lN HCl. Fáze se oddělí a kyselá fáze se 2x extrahuje EtOAc. Organické vrstvy se spojí, promyjí se nasyceným vodným roztokem chloridu sodného, vysuší se bezvodým síranem sodným a odpaří do sucha. Surový produkt se podrobí rychlé chromatografii při použití směsi ethylacetátu a hexanů, čímž se získá

9,1 g výsledné kyseliny jako nahnědlá pevná látka. ^τΗ NMR (aceton-ds) δ 10,86 (1H, br s) , 10,25 (1H, br s) , 7,98 (1H, s) , 7,58 (2H, m) , 3,62 (1H, m) , 3,04 (3H, s),

2,89-2,68 (5H, m) , 2,21 (1H, m) . MS (+APCI) m/z 294,0 (M+H)⁺.

Stupeň 4: kyselina (±)-2-[5-brom-7-(methylsulfonyl)-1,2,3 - trihydrocyklopenta [2,3 -b] indol-3 -yl] octová

O;

ΌΗ

Br

154 g pyridiniumtribromidu se přidá k roztoku 50,8 g kyseliny 2- [7- (methylsulfonyl)-1,2,3-trihydrocyklopenta [2 , 3-b] indol-3-yl] octové v pyridinu při teplotě -25 až -30 °C, roztok se v průběhu 15 minut zahřeje na 0 °C a pak v průběhu 30 minut až na teplotu místnosti. Přidá se 1250 ml směsi THF a étheru 1:1 a 2500 ml směsi nasyceného vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného a 6N HCl 1:1, fáze se oddělí, vodná fáze se promyje směsí THF a etheru 1:1, organické vrstvy se spojí a vysuší se síranem sodným. Pak se organická fáze zchladí na 10 °C a přidá se 50,5 ml kyseliny octové a pak ještě pomalu 70,2 g zinku, přičemž teplota se udržuje na hodnotě nižší než 15 °C.

· · » · ····

Reakční směs se 1 hodinu míchá při teplotě místnosti, pak se přidá 3000 ml IN HCI a 1250 ml EtOAc, fáze se oddělí a vodná fáze se promyje 2000 ml EtOAc. Organické vrstvy se spojí, vysuší se síranem sodným a rozpouštědlo se stripuje. Výsledný hnědavý prášek se podrobí rychlé chromatografií při použití 1000 ml 20% EtOAc v hexanech. Tímto způsobem se ve výtěžku 81 % získá 52 g produktu.

NMR (aceton-d₆) δ 10,38 (1H, br s) , 8,00 (1H, d) , 7,76 (1H, d) , 3,66 (1H, m) , 3,13 (3H, s) , 3,00-2,75 (4H, m) ,

2,62 (1H, dd) , 2,26 (1H, m) .

MS (-APCI) m/z 372,2, 370,2 (M-H)'.

Stupeň 5: ( + ) -methyl-2-[5-brom-7-(methylsulfonyl)-1,2,3-trihydrocyklopenta [2,3-b]indol-3-yl]acetát

Kyselina ze stupně 4 se esterifikuje v THF působením etherového roztoku CH₂N₂. Po odpaření rozpouštědel se výsledný ester získá v kvantitativním výtěžku jako bledě hnědá pevná látka.

NMR (aceton-d₆) δ10,41 (1H, br s) , 8,00 (1H, d) , 7,76 (1H, d) , 3,68 (4H, m) , 3,13 (3H, s) , 3,00-2,75 (4H, m) , 2,62 (1H, dd), 2,23 (1H, m).

Stupeň 6: (±) -methyl-2-{5-brom-4-[ (4-chlorfenyl) methyl] -7- (methylsulfonyl) -1,2,3-trihydrocyklopenta [2,3-b] indol-3-yljacetát •SI*

Κ roztoku 3,70 g indolu ze stupně 5 ve 30 ml DMF se při teplotě -78 °C přidá 790 mg 60% suspenze NaH v oleji. Výsledná suspenze se 10 minut míchá při teplotě 0 °C, pak se znovu zchladí na -78 °C a přidá se 2,36 g

4-chlorbenzylbromidu. Po 5 minutách se teplota zvýší na 0 °C a směs se 20 minut míchá. Pak se reakce zastaví přidáním 1 ml AcOH a směs se vlije do dělicí nálevky, obsahující směs 1 N HCl/EtOAc. Vrstvy se oddělí a organická vrstva se promyje nasyceným vodným roztokem chloridu sodného, vysuší se bezvodým síranem sodným a odpaří. Surový materiál se dále čistí rychlou chromatografií, k eluci se užije 10% EtOAc v toluenu a pak směs EtOAc a hexanů, čímž se získá 4,33 g produktu jako bílá pevná látka.

^rH NMR (aceton-ds) δ 8,03 (1H, d) , 7,74 (1H, d) , 7,34 (2H, d) , 6,95 (2H, d) , 5,97 (1H, d) , 5,86 (1H, d) , 3,66 (1H, m) , 3,57 (3H, s) , 3,14 (3H, s) , 2,99 (1H, m), 2,952,75 (2H, m), 2,67 (1H, dd), 2,45 (1H, dd), 2,28 (1H, m).

Stupeň 7: (+)-methyl-2-{5-acetyl-4-[(4-chlorfenyl)methyl]-7-(methylsulfonyl)-1,2,3-trihydrocyklopenta[2,3 -b]indol-3-yl}acetát

φφφφ φ ”52

Κ roztoku 3,0 g bromindolu ze stupně 6 v 15 ml DMF se přidá 3,97 ml 1-ethoxyvinyltributylcínu. Výsledná směs se zbaví plynů tak, že se směsí nechá několik minut probublávat N₂. V oddělené baňce se připraví 538 mg Pd₂(dba) ₃, 720 mg Ph₃As a 9,0 ml DMF a směs se 1 minutu zpracovává působením ultrazvuku. Katalytická směs se pak přidá do reakční nádoby, která se pak zahřívá 30 minut na 90 °C. Po této době se reakční směs zchladí na teplotu místnosti, přidají se 4 ml IN HCI a směs se míchá tak dlouho, až analýza pomocí TLC prokáže spotřebování adičního produktu vinyletheru. Pak se reakční směs zředí vodou, extrahuje se isopropylacetátem, vysuší bezvodým síranem sodným a odpaří. Výsledný materiál se dále čistí rychlou chromatografii, k eluci se užije 20% aceton v toluenu, Čímž se získá 2,7 g výsledného ketonu jako bílé pevné látky.

^XH NMR (CDC1₃) δ 8,19 (1H, s) , 7,74 (1H, s) , 7,16 (2H, d) , 6,55 (2H, d) , 5,35 (1H, D) , 5,29 (1H, d) , 3,71 (1H,

m) , 3,65 (3H, s) , 3,06 (3H, s) , 3,05-2,80 (3H, m) , 2,66 (1H, dd) , 2,50 (1H, dd) , 2,32 (1H, m) , 2,12 (3H, s) .

Stupeň 8: kyselina (+)-2-{5-acetyl-4-[(4-chlorfenyl)methyl]-7-(methylsulfony1)-1,2,3 -trihydrocyklopenta [2,3-b]indol-3-yl}octová

Výsledná látka se připraví z 2,08 g esteru ze stupně 7 způsobem podle stupně 3, čímž se získá 1,99 g produktu ve formě hnědé pevné látky.

^ΤΗ NMR (aceton-d₆) δ 10,76 (1H, br s), 8,19 (1H, d), 7,87

(1H,	d) , 7,27	(2H,	d) , 6,	73	(2H,	d)	, 5,	48 (2H,	s) , 3,79
(1H,	m) , 3,12	(3H,	s) , 3,	05	(1H,	m)	, 3,	00-2,70	(3H, m) ,
2,55	(1H, dd),	2,38	(1H,	m) ,	2,19 (	3H,	S) .

¹³CNMR (aceton-d₆) δ 204,4 177,3 158,0, 142,5, 141,3,

137.5, 136,6, 133,6, 133,3, 132,3, 131,6, 126,6, 125,5,

124.5, 54,8, 48,9, 43,2, 40,5, 40,3, 33,1, 27,5.

MS (+APCI) m/z 460,5, 458,3 (M+H)⁺.

Příklad 2

Kyselina (+)-2-{5-acetyl-4-[(4-chlorfenyl)methyl]-7-(methylsulfonyl)-1,2,3-trihydrocyklopenta[2,3-b]indol-3 -yl}octová, isomer sloučeniny z příkladu 1

150 až 200 mg kyseliny (+)-2-{5-acetyl-4-[(4-chlorfenyl)methyl]-7-(methylsulfonyl)-1,2,3-trihydrocyklopenta[2,3-b] indol-3-yl)octové ze stupně 8 příkladu 1 se rozpustí v 10 ml horkého ethanolu a pak se dělí při použití preparativní chirální HPLC v normální fázi (sloupec ChiralPak AD 50 x 5 cm, velkost částic 20 μιη, mobilní fáze: směs hexanu, 2-propanolu a kyseliny octové 70:30:0,4, průtok 70 až 75 ml/min, tlak 1,96 až

2,1 MPa, detekce UV 265 nm. Doba retence pro oba enanciomery je 38 minut a 58 minut. Výsledný produkt se získá jako méně polární enanciomer s enanciomerní čistotou 98 %.

ee = 98 %, doba retence 12,1 minut (sloupec ChiralPak AD 250 x 4,6 mm, směs hexanu, 2-propanolu a kyseliny octové 75:25:0,1).

Elementární analýza pro C₂₃H₂₂C1NO₅S vypočteno: C 60,06, H 4,82, N 3,05, S 6,97 % nalezeno: C 60,24, H 4,55, N 3,03, S 7,20 %

Příklad 3 » · • · • to • toto ♦ • · to · · ·· • · ♦ · · to • ······ » · • · · · « •••34 · ·· ♦··

Kyselina (-)-2-{5-acetyl-4-[(4-chlorfenyl)methyl]-7-(methylsulfonyl)-1,2,3-trihydrocyklopenta[2,3-b]indol-3 yljoctová, (-)-isomer produktu z příkladu 1

150 až 200 mg kyseliny ( + )-2-{5-acetyl-4-[ (4-chlorfenyl)methyl]-7- (methylsulfonyl)-1,2,3-trihydrocyklopenta[2,3-b]indol-3-yl}octové ze stupně 8 příkladu 1 se rozpustí v 10 ml horkého ethanolu a pak se dělí při použití preparativní chirální HPLC v normální fázi (sloupec ChiralPak AD 50 x 5 cm, velkost částic 20 μτη, mobilní fáze: směs hexanu, 2-propanolu a kyseliny octové 70:30:0,4, průtok 70 až 75 ml/min, tlak 1,96 až

2,1 MPa, detekce UV 265 nm. Doba retence pro oba enanciomery je 38 minut a 58 minut. Výsledný produkt se získá jako polárnější enanciomer s čistotou 96,7 %. Tento enanciomer se nechá překrystalovat z 80% 2-propanolu v hexanech ke zvýšení enanciomerní čistoty.

ee = 96,7 %, doba retence = 15,3 minut (sloupec ChiralPak AD 250 x 4,6 mm, směs hexanu, 2-propanolu a kyseliny octové 75:25:0,1, [a] D²¹ = -10,9° (c = 0,45, MeOH).

Elementární analýza pro C23H22CINO5S vypočteno: C 60,06, H 4,82, N 3,05, S 6,97 % nalezeno: C 59,96, H 4,81, N 3,01, S 7,22 % teplota tání 219,5 °C.

Příklad 3A

Alternativní způsob výroby produktu z příkladu 3

A. Oddělení kyseliny ( + )-2-[5-brom-7-(methylsulfonyl)-1,2,3-trihydrocyklopenta [2,3-b]indol-3-yl]octové »· · · · ·

Suspenze 300 mg kyseliny (±)-2-[5-brom-7- (methyl sulf onyl) -1,2,3-trihydrocyklopenta [2,3 -b] indol-3 -yl] octové ze stupně 4 příkladu 1 a 138 mg (R) - ( + )-1- (naftyl) ethylaminu v 15 ml 2-propanolu a 5 ml acetonu se rozpustí z varu pod zpětným chladičem. Rozpouštědlo se pak odpaří za sníženého tlaku a rozpouštědlo se nechá překrystalovat ze 7 ml směsi 2-propanolu a acetonu 1:1.

Po filtraci se získaná bílá pevná sůl uvede do suspenze v 5 ml methanolu a přidá se 3N HCl až do pH 1. Vzniklá sraženina se odfiltruje a suší na vzduchu, čímž se získá 78 mg výsledného enanciomeru. Doba retence pro oba enanciomery je 6,5 minut a 8,2 minut (sloupec ChiralPak AD, směs hexanu, 2-propanolu a kyseliny octové 75:25:0,2) . Výsledný produkt se získá jako polárnější enanciomer s enanciomerni čistotou 90 %. Postup se opakuje, čímž se produkt získá s enanciomerni čistotou

%. ee = 99 %, doba retence = 8,2 minut (sloupec ChiralPak AD, 250 x 4,6 mm, směs hexanu, 2-propanolu a kyseliny octové 75:25:0,2, [cc]D²¹ = +11,0° (c=0,5 MeOH).

B. Opakuje se způsob, popsaný ve stupních 5 až 8 příkladu 1 při použití svrchu získaného (+)-enanciomeru místo racemátu, čímž se získá produkt z příkladu 3.

Příklad 4

• tt · tttt • · · · · • ♦ · tttt • ···* · · · • · · · tttt* tt · tt · tt ·

Kyselina ( + )-2-{4- [ (4-chlorfenyl)methyl]-5- (hydroxyethyl) -7- (methylsulfonyl) -1,2,3-trihydrocyklopenta [2 , 3-b] indol-3-yl} octová, diastereomer A

Stupeň 1. Redukce ketonu

Do suché baňky se vloží 350 mg kyseliny (-)-2-[5-brom- 7- (methyl sul fonyl) -1,2,3-trihydrocyklopenta [2,3-b]indol-3-yl]octové z příkladu 3 s enanciomerní čistotou 99 % a 30 ml MeOH. K míchanému roztoku se po podílech přibližně 50 mg přidává v intervalu 10 až 15 minut NaBH₄tak dlouho, až analýza pomocí TLC prokáže, že keton byl spotřebován. Pak se reakční směs vlije do dělicí nálevky, obsahující 100 ml nasyceného vodného roztoku chloridu amonného v 10 ml IN HCI a 100 ml EtOAc. Vrstvy se oddělí a vodná vrstva se extrahuje EtOAc, organické vrstvy se spojí, vysuší se bezvodým síranem sodným a odpaří. Výsledný materiál se čistí chirální HPLC následujícím způsobem:

Stupeň 2. Chirální čištění

150 až 200 mg směsi z předchozího stupně v alkoholech se rozpustí v 10 ml horkého ethanolu a směs se dělí pomocí preparativní chirální HPLC v normální fázi (sloupec ChiralPak AD, 50 x 5 cm, velikost částic 20 μπι, mobilní fáze: hexan, 2-propanol a kyselina octová 80:20:0,4, průtok 70 až 75 ml/min, tlak 1,96 až 2,1 MPa, detekce UV 245 nm. Doba retence obou diastereoisomerů byla 33 minut a 51 minut. Výsledná látka byla získána jako méně polární diastereoisomer s čistotou vyšší než

AA ·A A A • A A A A AA * A ·

AAA AAA ·Α·

A AAAA AAA A A A A A • A AAA AAA·

AAAA A AA AAA AA ··

%. ee = 99 %, de > 99 %, doba retence = 6,0 min (sloupec ChiralPak AD 250 x 4,6 mm, hexan, 2-propanol a kyselina octová 75:25:0,2, [a]D²¹ = +7,6° (c=l,0 MeOH).

4’ NMR (aceton-dg) δ 7,95 (1H, d) , 7,83 (1H, d) , 7,32

(2H,	d) ,	6,90	(2H,	d) ,	5,92 (1H, d),	5,65	(1H,	d) ,	5,	19
(1H,	q),	3,60	(1H,	m) ,	3,07 (3H, s),	2,99	(1H,	m) ,	2,	83
(2H,	m) ,	2,65	(1H,	dd)	, 2,39 (1H, m)	, 2,31	(1H,	m)	, 1	,4
(3H,	d) .

¹³CNMR (aceton-dg) δ 173,3, 152,0, 141,1, 139,4, 133,3, 133,2, 132,6, 129,7, 127,8, 126,4, 121,7, 118,8, 117,3, 64,6, 50,3, 45,0, 39,1, 36,5, 36,2, 24,6, 23,5.

MS (-APCI) m/z 462,8, 460,5 (M-H)’.

Elementární analýza pro C₂3H24ClNO₅S vypočteno: C 59,80, H 5,24, N 3,03, S 6,94 % nalezeno: C 59,47, H 5,22, N 2,96, S 7,14 %

Teplota tání 212,4 °C.

Příklad 5

Kyselina 2-{4-[(4-chlorfenyl)methyl] -5-(hydroxyethyl)-7(methylsulfonyl)-1,2,3 -trihydrocyklopenta[2,3-b]indol-3 yl}octová, diastereomer B

150 až 200 mg materiálu ze stupně 1 příkladu 4 s ee = 99 % se rozpustí v 10 ml horkého ethanolu a směs se dělí pomocí preparativní chirální HPLC v normální fázi (sloupec ChiralPak AD, 50 x 5 cm, velikost částic 20 pm, mobilní fáze: hexan, 2-propanol a kyselina octová 80:20:0,4, průtok 70 až 75 ml/min, tlak 1,96 až 2,1 MPa, detekce UV 245 nm. Doba retence obou diastereoisomerů byla 33 minut a 51 minut. Výsledná látka byla získána jako polárnější diastereoisomer s de > 95 %.

♦ « ··· · ι· · « φ · · φφφ φ • φφφφ » · ee = 99 %, de > 95 %, doba retence = 7,9 minut (sloupec ChiralPak AD: 250 x 4,6 mm, hexan, 2-propanol a kyselina octová 75:25:0,2.

^XH NMR	(aceton-d₆)	δ 7,95 (IH, d),	7,8	>3 (IH, d)	, 7,32
(2H,	d)	, 6,90 (2H,	d), 6,00	(IH,	d) ,	5,57	(IH,	d) , 5,20
(IH,	q)	, 3,59 (IH,	m), 3,07	(3H,	s) ,	3,01	(IH,	m) , 2,82
(2H,	m)	, 2,65 (IH,	d), 2,45-	•2,25	(2H,	m) ,	1,45	(3H, d) .
MS (	-AP	'Cl) m/z 462	,6, 460,5	(M-H)

Příklad 6

Kyselina (±) -2 - {4- [ (2,4 -dichlorfenyl) methyl] -5-brom-7- (methylsulfonyl) -1,2,3-trihydrocyklopenta [2,3-b] indol-3 yl}octová

Postupuje se způsobem, popsaným ve stupni 6 příkladu 1 při použití 104 mg methyl-2-[5-brom-7-(methylsulfonyl) -1,2,3 - trihydrocyklopenta [2,3 -b] indol-3 -yl] acetátu ze stupně 5 příkladu 1 a 50 μΐ 2,4-dichlorbenzylchloridu, čímž se získá 50 mg methylesteru výsledné látky jako bílá pevná látka s čistotou vyšší než 95 %.

^XH NMR (aceton-d₆) δ 8,05 (IH, d) , 7,73 (IH, d) , 7,58 (IH, d) , 7,24 (IH, dd) , 6,28 (IH, d) , 5,91 (IH, d) , 5,85 (IH, d) , 3,73 (IH, m) , 3,55 (3H, s) , 3,15, (3H, s), 3,01 (IH, m) , 2,95-2,75 (2H, m) , 2,68 (IH, dd) , 2,49 (IH, dd) ,

2,30 (IH, m).

φφ φ φφ • φ φ φ φ φφφ φ φ φ φφφφ φ φ φ φ φφφ • ••^2 φ *· *· φφφφ φφ φ · φ φ φ • φ φ φ φ φφφ φφφ φφ

Výsledná látka se připraví z 50 mg svrchu získaného methylesteru způsobem podle stupně 3 příkladu 1, čímž se získá 34 mg produktu ve formě bílé pevné látky s čistotou vyšší než 95 %.

^XH NMR (aceton-d₆) δ 10,73 (1H, br s) , 8,05 (1H, d) , 7,73

(1H,	d) , 7,57	(1H,	d), 7,23
(2H,	s), 3,71	(1H,	m) , 3,15
2,75	(2H, m) ,	2,68	(1H, dd),
MS (	-APCI) m/	z 532,	3, 530,1,

(1H, dd) , 6,28, (1H, d) , 5,91 (3H, s) , 3,02 (1H, m) , 2,952,47 (1H, dd), 2,34 (1H, m). 527,9 (M-H)’.

Příklad 7

Kyselina( + )- 2-{4-[(4-chlorfenyl)methyl] -7-(methylsulfonyl)-5-vinyl-1,2,3-tríhydrocyklopenta [2,3-b]indol-3-ylJoctová

Při použití způsobu ze stupně 7, příkladu 1, 112 mg methyl-2-{5-brom-4-[(4-chlorfenyl)methyl]-7-(methylsulfonyl)-1,2,3-tríhydrocyklopenta[2,3-b]indol-3-yl}acetátu ze stupně 6 příkladu 1 a 128 μΐ vinyltributylcínu se získá 94 mg methylesteru výsledné látky ve formě žluté pevné látky. Tento materiál se užije v následujícím stupni bez dalšího čištění.

Výsledná látka se připraví ze 17 mg svrchu získaného methylesteru způsobem podle stupně 3 příkladu 1, čímž se získá 16,5 mg bezbarvého oleje s čistotou vyšší než 95 %.

flfl ··· · ·· · flfl • flfl flfl flfl flfl · ··· ··· ··· • ···· · · · flflfl· · • · flflfl ···· ····_ · fl· flflfl flfl ♦· ^XH NMR (aceton-d₆) Ó 10,68 (1H, br s) , 7,98 (1H, s) , 7,55

(1H,	s), 7,35	(2H,	d) ,	7,12 (1H,	dd) , 6,99 (2H,	d) , 5,74
(1H,	d), 5,63	(1H,	d) ,	5,66 (1H,	d), 5,31 (1H,	d) , 3,64
(1H,	m) , 3,12	(3H,	s) ,	3,10-2,75	(3H, m) , 2,65	(1H, m) ,
2,50	-2,25 (2H,	m) .	MS	(+APCI) m/	z 463,0, 461,0	(M+NH₄) ⁺.

Přiklad 8

Kyselina (±) -2- {4 - [ (4-chlorfenyl) methyl] -5-cyklopropyl-7- (methylsulf onyl) -1,2,3 - trihydrocyklopenta [2,3 -b] indol-3-yl}octová

Do baňky s okrouhlým dnem, obsahujícím 27,6 mg 2- (4- [ (4-chlorfenyl) methyl] -7- (methylsulfonyl) -5-vinyl1,2,3 - trihydrocyklopenta [2,3-b] indol-3 -yl}acetátu, připraveného podle příkladu 7 a 2 ml THF, zchlazeného na 0 °C se přidá několik mg Pd(OAc)₂ a 4 ml etherového roztoku CH₂N₂ a směs se míchá při 0 °C. Pak se přidávají další podíly Pd(OAc)₂ a CH₂N₂ tak dlouho, až ¹H NMR podílu reakční směsi prokáže nepřítomnost atomů vodíku vinylové skupiny. Reakční směs se zfiltruje přes vrstvu silikagelu a odpaří, čímž se získá methylester výsledné látky.

¹H NMR (aceton-d₆) δ 8,00 (1H, s) , 7,34 (3H, m) , 6,92 (2H, d) , 6,04 (1H, d) , 5,93 (1H, d) , 3,54 (4H, m) , 3,05 (3H, s) , 2,96 (1H, m) , 2,81 (2H, m) , 2,65 (1H, dd) , 2,43 (1H, dd) , 2,25 (1H, m) , 2,06 (1H, m) , 0,95-0,70 (4H, m) . MS (+APCI) m/z 495,8, 493,8 (M+Na)⁺.

·« · «· · ·

• ♦ · • · · • ···· • · •••*61 * « · · · • · · ♦ · • · · · · ·· · 9 9 99

Výsledná látka se připraví ze 42 mg svrchu získaného methylesteru způsobem podle stupně 3 příkladu 1, získá se 34 mg bezbarvého oleje.

¹H NMR (aceton-d₆) δ 10,57 (1H, br s) , 7,91 (1H, s) , 7,33 (3H, m) , 6,92 (2H, d) , 6,06 (1H, d) , 5,94 (1H, d) , 3,58 (4H, m) , 3,05 (3H, s) , 2,99 (1H, m) , 2,83 (2H, m) , 2,64 (1H, dd) , 2,50-2,25 (2H, m) , 2,09 (1H, m) , 1,00-0,70 (4H, m) . MS (+APCI) m/z 477,2, 474,9 (M+NH₄)⁺.

Příklad 9

Kyselina (±)-2-{4 - [ (4-chlorfenyl)methyl]-7- (methylsulfonyl) - 5- (2- thienyl) -1,2,3- trihydrocyklopenta [2,3-b]indol-3-yl}octová

Postupuje se způsobem podle stupně 7 příkladu 1 při použití 500 mg 2 - {5-brom-4- [ (4-chlorfenyl) methyl] -7- (methylsulfonyl) -1,2,3 - trihydrocyklopenta [2,3 -b] indol-3-yljacetátu ze stupně 6 příkladu 1 a 600 μΐ 2-thiofenyltributylcínu, čímž se získá 480 mg methylesteru výsledné látky jako nažloutlý olej. Tento materiál se užije v následujícím stupni bez dalšího čištění.

³H NMR (CDC1₃) δ 8,09 (1H, s), 7,52 (1H, s), 7,28 (1H, d) , 7,07 (2H, d) , 6,91 (1H, m) , 6,71 (1H, m) , 6,35 (2H, d) , 5,03 (1H, d) , 4,96 (1H, d) , 3,61 (3H, s) , 3,49 (1H,

9 99 9999

9 99 9 9 9

9 9 9 9 9

9 9 9 9 9 9

999 9· 99 ·· 9 • 9 9

9 9 *Š2

m) , 3,07 (3Η, s) , 3,05-2,70 (3Η, m) , 2,51 (1Η, dd) , 2,39 (1H, dd), 2,25 (1H, m).

Výsledná látka se připraví ze 480 mg svrchu získaného methylesteru způsobem podle stupně 3 příkladu 1, získá se 450 mg produktu ve formě bílé pěny.

^XH NMR sodné soli (dmso-d₆) δ 8,00 (1H, d), 7,59 (1H, dd),

7,31 (1H, d), (2H, d) , 5,26 s), 2,88 (1H, m) , 1,92 (1H,

Příklad 10

7,18	(2H, d) ,	7,04 (1H, dd)	, 6,94	(1H, m) ,	6,37
(1H,	d), 5,04	(1H, d), 3,42	(1H,	m), 3,20	(3H,
m),	2,78 (1H,	m) , 2,62 (1H,	m) , 2	,25-2,05	(2H,
dd) .	MS (-APCI	) m/z 500,3,	498,2	(M-H)'.

Kyselina (+) -2-{7-[(dimethyl amino)sulfonyl]-4- [ (4-chlorfenyl)methyl]-1,2,3-trihydrocyklopenta[2,3-b]indol-3-yl}octová

Stupeň 1: [ (4-amnofenyl) sulfonyl] dimethylamin

K roztoku 40,2 g sulfonylamidu v 1,5 litrech MeOH, zchlazeného na 0. °C se současně přidá pomocí dvou stříkaček v průběhu 3 hodin celkem 220 ml dimethylsulfátu a 464 ml 5 N NaOH. Po spotřebování výchozího materiálu se organické rozpouštědlo odpaří ve vakuu, přidá se vodný roztok chloridu amonného a produkt se extrahuje EtOAc. Organická vrstva se promyje vodou, nasyceným vodným roztokem chloridu sodného a pak se vysuší bezvodým síranem sodným. Organická fáze se odpaří do sucha a surový pevný podíl se nechá překrystalovat z 90% EtOAc v hexanech, čímž se získá 26,2 g výsledné látky jako bílá pevná látka.

· 4

4 4 ^ΧΗ NMR (CDC1₃) δ 7,53 (2Η, d) , 6,69 (2Η, d) , 4,12 (2Η, br

s), 2,64 (6H, s).

Stupeň 2: [ (4-amino-3-jodfenyl) sulfonyl] dimethylamin

Při použití způsobu podle stupně 1 příkladu 1 a

6.1 g [ (4-aminofenyl) sulfonyl] dimethylaminu se získá

4.2 g výsledné látky jako hnědá pevná látka.

^τΗ NMR (CDCI3) δ 8,01 (1H, d) , 7,51 (1H, dd) , 6,75 (1H, d) , 4,58 (2H, br s) , 2,66 (6H, s) .

Stupeň 3: ( + )-ethyl-2 - {7-[ (diemthylamino)sulfonyl]-1,2,3 trihydrocyklopenta [2,3-b] -indol-3-yl}acetát

0.

OEt

Výsledná látka se připraví ze 3,46 g [(4-amino-3- jodfenyl) sulfonyl] dimethylaminu a 1,91 g ethyl-2-(2-oxocyklopentyl)acetátu způsobem podle stupně 2 příkladu 1, čímž se získá 1,11 g bílé pevné látky.

^ΧΗ NMR (aceton-d_s) δ 10,23 (1H, br s) , 7,84 (1H, d) , 7,58 (1H, d) , 7,44 (1H, dd) , 4,15 (2H, q) , 3,63 (1H, m) , 2,952,65 (5H, m) , 2,61 (6H, s) , 2,21 (1H, m) , 1,22 (3H, t) .

MS (-APCI) m/z 349,2 (M-H).

Stupeň 4: Kyselina (±)-2-{7-[ (dimethylamino) sulfonyl-4- [ (4-chlorfenyl) methyl] -1,2,3-trihydrocyklopenta [2,399 9 99 ·

9 • ·

-b]indol-3-yl}octová

Postupuje se způsobem podle stupně 6 příkladu 1 při použití 497 mg esteru ze stupně 3 a 354 mg 4-chlorbenzylbromidu, čímž se získá ethylester výsledné látky, který se hydrolyzuje podle stupně 3 příkladu 1, čímž se získá 500 mg výsledné látky jako bílá pevná látka.

¹H NMR (aceton-d_s) δ 10,78 (1H, br s) , 7,90 (1H, s) , 7,46 (2H, m) , 7,33 (2H, d) , 7,12 (2H, d) , 5,59 (1H, d) , 5,49 (1H, d) , 3,64, (1H, m) , 2,97 (1H, m) , 2,90-2,70 (3H, m) , 2,61 (6H, s) , 2,45 (1H, dd) , 2,30 (1H, m) . MS (-APCI) m/z

445,4 (M-H).

Příklad 11 _

OH

Cl

Kyselina (±)-2-(5-brom-4-[(4-chlorfenyl)methyl]-7 -fluor-1,2,3-trihydrocyklopenta[2,3-b] indol-3-yl} octová

Stupeň 1: Kyselina (±)-2 -(7-fluor-l, 2,3-trihydrocyklopenta [2,3-b]indol-3-yl}octová

OH

Ethylester výsledné látky se připraví z 10,00 g 4-fluor-2-jodfenylaminu a 6,57 g ethyl-2-(2•tt 9999

9 ·· tt tttt ·«·· ·« « ··· ··· ··· **··«« tt tt ·· tt tt • · ··· ·«·· ••*55..........

-oxocyklopentyl)acetátu podle stupně 2 příkladu 1, čímž se získá 5,36 g žluté pevné látky.

Ů’ NMR (aceton-d₆) δ 9,76 (1H, br s) , 7,34 (1H, dd) , 7,03 (1H, d) , 6,78 (1H, td) , 4,14 (2H, q) , 3,57 (1H, m) , 2,852,55 (5H, m) , 2,15 (1H, m) , 1,22 (3H, t) .

Výsledná látka se připraví z 1,24 g svrchu získaného ethylesteru podle stupně 3 příkladu 1, čímž se získá 1,8 g surového a nestálého voskovitého hnědého oleje s čistotou vyšší než 90 %, který se užije jako takový v následujícím stupni.

¹H NMR (aceton-ds) δ 10,90 (1H, br s) , 9,77 (1H, br s) , 7,34 (1H, dd), 7,04 (1H, dd), 6,79 (1H, td), 3,56 (1H,

m) , 2,90-2,50 (5H, m) , 2,16 (1H, m) . MS (-APCI) m/z 232,2 (M-H).

Stupeň 3: Kyselina (±)-2 -(5-brom-7-fluor-1,2,3 -trihydrocyklopenta [2,3-b]indol-3-yl}octová

Postupuje se způsobem podle stupně 4 příkladu 1, při použití 2,2 g kyseliny ze stupně 2 s čistotou vyšší než 90 %, čímž se získá 2,13 g výsledné látky ve formě surové a nestálé hnědé pevné látky. Tento materiál se užije v následujícím stupni bez dalšího čištění.

·· ··· ·

• · · Φ··Φ * 6(?

·· • 9 • ·

9 9

9

99 9999

9 9 9

9 9 9 9

999 99 99 ^ΧΗ NMR (aceton-d₆) δ 10,77 (1H, br s) , 7,09 (2H, m), 3,60 (1H, m), 2,95-2,65 dd), 2,19 (1H, m).

9,84 (1H, br s), (4H, m), 2,56 (1H,

Stupeň 4: Kyselina (±)-2-{5-brom-4-[(4-hlorfenyl)methyl]-7-fluor-1,2,3-trihydrocyklopenta[2,3-b] indol-3-yl}octová

Esterifikací 2,13 g předchozí kyseliny působením diazomethanu s následnou alkylací při použití 1,7 g 4-chlorbenzylbromidu způsobem podle stupňů 5 a 6 příkladu 1 se získá methylester výsledné látky, který se hydrolyzuje způsobem podle stupně 3 příkladu 1, čímž se získá 2,35 g výsledné látky jako hnědá pevná látka.

¹H NMR (aceton-d₆) δ 10,70 (1H, br s) , 7,31 (2H, d) , 7,18

(1H,	d) , 7,06	(1H, d), 6,92 (2H, d), 5,90 (1H,	d) ,	5,74
(1H,	d) , 3,61	(1H, m), 3,00-2,70 (3H, m), 2,65	(1H,	dd) ,
2,39	(1H, dd),	2,26 (1H, m). MS (-APCI) m/z 436	,3,	434,5

(M-H)’.

Příklad 12

Kyselina ( + )-2-{5-brom-4 - [ (4-chlorfenyl)methyl]-7-fluor-1,2,3-trihydrocyklopenta[2,3-b] indol-3-yl}octová, (+)-isomer sloučeniny z příkladu 11

K roztoku 2,35 g kyseliny (+)-2-{5-brom-4-[(4-chlorfenyl)methyl]-7-fluor-1,2,3-trihydrocyklopenta[2,3-b]indol-3-yl}octové ze stupně 4 příkladu 11 ve 130 ml ehtanolu se při teplotě 80 °C přidá 780 μΐ (S)-(-)-1(naftyl)ethylaminu. Roztok se zchladí na teplotu místnosti a míchá se přes noc. Získá se 1,7 g soli, která se nechá znovu překrystalovat ve 200 ml ethanolu. Po • · filtraci se získaná bílá pevná látka neutralizuje IN HC1 a produkt se extrahuje EtOAc. Organická vrstva se promyje nasyceným vodným roztokem chloridu sodného, vysuší se bezvodým síranem sodným a odpaří. Materiál se zfiltruje přes vrstvu oxidu křemičitého, k eluci se užije EtOAc, čímž se získá 500 mg výsledného enanciomeru jako bílá pevná látka. Doba retence obou enanciomerů je 7,5 minut a

9,4 minuty (sloupec ChiralPak AD, hexan, 2-propanol a kyselina octová 95:5:0,1). Polárnější enanciomer se získá v přebytku 98 %. ee = 98 %, doba retence 9,4 minuty (sloupec ChiralPak AD 250 x 4,6 mm, hexan, 2-propanol a kyselina octová 75:25:0,1), [a] D²¹= +39,2° (c = l,0, MeOH) .

Příklad 13

Kyselina (- ) -2 - {5-brom-4- [ (4-chlorfenyl) methyl] - 7- fluor -1,2,3 - trihydrocyklopenta [2,3 - b] indol -3 - yl} octová, isomer sloučeniny z příkladu 11

K roztoku 1,58 g kyseliny (+)-2-{5-brom-4-[(4- chlor fenyl) methyl] -7-f luor-1,2,3 - trihydrocyklopenta [2,3-b]indol-3-yl}octové, izolované ze supernatantu reakční směsi z příkladu 12 ve 180 ml ethanolu se při teplotě °C přidá 530 μΐ (R)-( + )-1-(naftyl) ethylaminu. Roztok se zchladí na teplotu místnosti a nechá se přes noc.

1,07 g získané soli se nechá překrystalovat ze 120 ml ethanolu. Po filtraci se bílá pevná sůl neutralizuje 1 N HCl a produkt se extrahuje EtOAc. Organická vrstva se promyje nasyceným vodným roztokem chloridu sodného, vysuší se síranem sodným a odpaří. Materiál se zfiltruje přes vrstvu oxidu křemičitého, k eluci se užije EtOAc, čímž se získá 64 0 mg výsledného enanciomeru jako bílá

pevná látka. Doba retence enanciomeru byla 7,5 minut a

9,4 minuty (sloupec ChiralPak AD, hexan 2-propanol a kyselina octová 95:5:0,1). Méně polární enanciomer byl získán v enanciomerním výtěžku vyšším než 99 %. ee > 9 9 %, doba retence = 7,4 min (sloupec ChiralPak AD 250 x 4,6 mm, hexan, 2-propanol a kyselina octová 75:25:0,1) .

Příklad 14

Kyselina (±) -2 - {5-brom-4- [ (4-chlorf enyl) methyl] -3 - methyl -1,2,3-trihydrocyklopenta [2,3-b] indol - 3 -yl} octová

Stupeň 1: ( + ) ethyl-2-(5-brom-3-methyl-1,2,3- trihydrocyklopenta [2,3-b] indol-3-yl} acetát

Suspenze 3,52 g 2-bromfenylhydrazinu a 2,90 g ethyl -2-(l-methyl-2-oxocyklopentyl)acetátu ve 40 ml AcOH se zahřívá 1 hodinu na 100 °C. Po této době se přidá 20 ml toluenu a rozpouštědlo se odpaří za sníženého tlaku. Surový materiál se čistí rychlou chromatografii, čímž se získá 1,40 g produktu ve formě žlutého oleje.

► · · ·· • · · • · · · • ····♦· ► · ·

^XH NMR (aceton-d₆) δ 9,85 (1H, br s) , 7,38 (1H, d) , 7,23 (1H, d) , 6,93 (1H, t) , 4,05 (2H, m) , 2,80 až 2,60 (5H, tn) , 2,36 (1H, m) , 1,40 (3H, s) , 1,11 (3H, t) . MS (-APCI) m/z 336.3 (M-H)'.

Stupeň 2: Kyselina ( + )-2-{5-brom-4-[(4-chlorfenyl)methyl]-3-methyl-1,2,3 -tríhydrocyklopenta[2,3-b]indol-3 -yl}octová

Při použití způsobu ze stupně 6 příkladu 1, 290 mg esteru ze stupně 1 a 220 mg 4-chlorbenzylchloridu se získá 120 mg ethylesteru výsledné látky jako špinavě bílá pevná látka.

^XH NMR (aceton-d₆) δ 7,44 (1H, d) , 7,30 (1H, d) , 7,22

(1H,	d) ,	6,92	(1H,	t)	, 6,90	(2H,	d) , 6,05	(1H,	d), 5,85
(1H,	d) ,	3,90	(2H,	q)	, 2,80	(3H,	m) , 2,65	(2H,	d) , 2,36
(1H,	m) ,	1,35	(3H,	s)	, 1,00	(3H,	t) .
MS (	-APCI) m/z	458	X	(M-H) '.

Výsledná látka se připraví ze 105 mg získaného ethylesteru způsobem podle stupně 3 příkladu 1, čímž se získá 90 mg bílé pevné látky.

³Η NMR (acetone-dg) δ 10,50

7,30	(2H,	d) ,	7,22	(1H,	d) ,
6,05	(1H,	d) ,	5,80	(1H,	d) ,
2,36	(1H,	m) ,	1,35	(3H,	s) .

(1H, br s), 7,43 (1H, d),

6,94 (1H, t), 6,90 (2H, d), 2,80 (3H, m) , 2,65 (2H, d) , MS (-APCI) m/z 432,2 (M-H)'

Zastupuj e:

• · • · · ·

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY

1. Cyklopentanoindolové deriváty obecného vzorce I a jejich farmaceuticky přijatelné soli, hydrády a estery, kde

R¹, R² a R³ se nezávisle volí ze skupiny (1) atom vodíku a (2) R^c,

R⁴ a R^s se nezávisle volí ze skupiny (1) H, (2) F, (3) CN, (4) Cl-C6alkyl, (5) 0R^a a (6) S (O)_nCl-C6alkyl, přičemž každá alkylová skupina je popřípadě substituována atomem halogenu nebo

R⁴ a R⁵ mohou na tomtéž atomu uhlíku tvořit oxoskupinu nebo

R⁴ a R⁵ na tomtéž atomu uhlíku nebo na sousedních atomech uhlíku mohou společně tvořit 3- nebo 4-členný kruh, obsahující popřípadě 1 heteroatom ze skupiny N, S nebo 0 • · • · · · • · · · · • ······ · • · · · · ··· a popřípadě substituovaný 1 nebo 2 skupinami ze skupiny F, CF₃ a CH₃,

R^s se volí ze skupiny (1) H, (2) Cl-C6alkyl, popřípadě substituovaný 1 až 6 substituenty, nezávisle volenými ze skupiny 0R^a a atom hagelonu a (3) heterocyklický zbytek, popřípadě substituovaný 1 až 4 atomy halogenu nebo

R⁵ a R⁶ na sousedních atomech uhlíku tvoří 3- nebo 4-členný kruh, popřípadě obsahující 1 heteroatom ze skupiny N, S nebo 0 a popřípadě substituovaný 1 nebo 2 substituenty ze skupiny F, CF₃ a CH₃,

X se volí ze skupiny C=0, S0₂ a Cl-C4alkyl, přičemž alkyl je popřípadě substituován 1 až 6 atomy halogenu,

Ar znamená aryl nebo heteroaryl, přičemž tyto zbytky jsou popřípadě substituovány 1 až 4 substituenty, které se nezávisle volí ze skupin ve významu R^c,

Q znamená Cl-C6alkyl, popřípadě substituovaný 1 až 6 substituenty, které se nezávisle volí ze skupiny (1) atom halogenu, (2) aryl, (3) heteroaryl, (4) OH, (5) 0Cl-C6alkyl, (6) COOH, (7) CONR^aR^b, (8) C(O)NSO₂R⁷, (9) tetrazolyl, přičemž aryl, heteroaryl a alkyl jsou popřípadě subistituovány 1 až 6 substituenty, které se nezávisle volí z atomu halogenu, CF₃ a COOH nebo

99 9999

99 9 9 · 9

9 9

Q a R^s společně tvoří 3- nebo 4-členný kruh, popřípadě obsahující heteroatom ze skupiny N, S a O a popřípadě substituovaný 1 nebo 2 substituenty, které se nezávisle volí ze skupiny (1) atom halogenu, (2) oxoskupina, (3) 0R^a, (4) COOH, (5) C(O)NHSO₂R⁷ a (6) tetrazolyl,

R⁷ se volí ze skupiny (1) Cl-C6alkyl, popřípadě substituovaný 1 až 6 atomy halogenu, (2) aryl a (3) heteroaryl, přičemž aryl a heteroaryl jsou popřípadě substituovány atomem halogenu, 0Cl-C5alkylovým zbytkem nebo Cl-C6alkylovým zbytkem, přičemž alkylové skupiny jsou popřípadě substituovány 1 až 6 atomy halogenu,

R^a a R^b se nezávisle volí ze skupiny atom vodíku a Cl-C6alkyl, popřípadě substituovaný 1 až 6 atomy halogenu,

R^c znamená (1) atom halogenu, (2) CN, (3) Cl-C6alkyl, popřípadě substituovaný 1 až 6 substituenty, které se nezávisle volí ze skupiny atom halogenu, NR^aR^b, C(O)R^a, C(OR^a)R^aR^b a 0R^a, (4) C2-C6alkenyl, popřípadě substituovaný 1 až 6 substituenty, nezávisle volenými z atomu halogenu a skupiny 0R^a, (5) heterocyklický zbytek, (6) aryl,

99 9 • · · 99 9 · · « • 9·9· · · · · · « · * • 9 999 9999 ··· · ♦ 99 ··· ·· ·« (7) heteroaryl, (8) C(O)R^a, (9) C(OR^a)R^aR^b, (10) C(O)OR^a, (11) CONR^aR^b, (12) OCONR^aR^b, (13) S(O)_nR⁷, (14) NR^aC(0)OCl-C6alkyl, kde alkyl je popřípadě substituován 1 až 6 atomy halogenu a (15) S(O)_nNR^aR^b, přičemž heterocyklický zbytek, aryl a heteroaryl jsou popřípadě substituovány 1 až 4 substituenty, nezávisle volenými z atomů halogenu, n znamená 0, 1 nebo 2.
2. Deriváty podle nároku 1, obecného vzorce I, v němž X znamená CH₂.
3. Deriváty podle nároku 1, obecného vzorce I, v němž Q znamená Cl-C6alkyl, substituovaný COOH.
4. Deriváty podle nároku 1, obecného vzorce I, v němž Q a R⁶ společně tvoří 3- nebo 4-členný kruh, popřípadě obsahující 1 heteroatom ze skupiny N, S a 0 a popřípadě substituovaný 1 nebo substituenty ze skupiny atom halogenu, OH, COOH, oxoskupina, tetrazolyl, C(O)NSO₂R⁷nebo 0Cl-C6alkyl, přičemž alkylové skupiny jsou popřípadě substituovány 1 až 6 atomy halogenu.
5. Deriváty podle nároku 1 obecného vzorce I, v němž R³ znamená atom vodíku, R¹ a R² se volí ze skupiny atom vodíku, atom halogenu, Cl-C3alkyl (popřípadě substituovaný 1 až 6 substituenty, nezávisle volenými ze φφ ···· • Φ · φφ • φ φ φ φ φφφ φ φ φ φφφφφφ · • φφφ ···· φ φφ skupiny atom halogenu C(O)R^a, a C(OR^a)R^aR^b) , aryl, heteroaryl, heterocyklický zbytek, C(0)0C1-C3alkyl,

S (0)_nCl-C3alkyl, S(O)_nNR^aR^b, C(O)R^a, C (OH) R^aR^b a C(OC1-C3alkyl) R^aR^b, přičemž arylový, heteroarylový nebo heterocyklický zbytek nebo alkylový zbytek jsou popřípadě substituovány 1 až 6 atomy halogenu, n = 0, 1 nebo 2, R^aa R^b se nezávisle volí ze skupiny atom vodíku a Cl-C6alkyl, popřípadě substituovaný atomem halogenu.
6. Deriváty podle nároku 1 obecného vzorce I, v nichž R⁴ a R⁵ se nezávisle volí ze skupiny atom vodíku, ClC4alkyl, popřípadě substituovaný 1 až 6 atomy halogenu, s výhodou fluoru a 0R^a, kde R^a má význam, uvedený u vzorce las výhodou znamená atom vodíku nebo R⁴ a R⁵, vázané na tentýž atom uhlíku znamenají oxoskupinu.
7. Deriváty podle nároku 1, obecného vzorce I, v nichž Ar znamená aryl nebo heteroaryl, popřípadě substituovaný 1 až 4 skupinami, které se nezávisle volí ze skupiny atom halogenu, CN, Cl-C4alkyl, popřípadě substituovaný 1 až 6 atomy halogenu, s výhodou fluoru, C(O)R^a a C(OH)R^aR^b, kde R^a a R^b se nezávisle volí ze skupiny atom vodíku a Cl-C6alkyl, popřípadě substituovaný atomem halogenu.
8. Deriváty podle nároku 1, obecného vzorce la (la) kde Ar a R¹ až R⁴ mají význam, uvedený v nároku 1.

44 4

4 4 4 • 4

444 4 4
9. Deriváty podle nároku 8, obecného vzorce Ia, v němž R⁴ a R⁵ znamená atom vodíku a R¹ znamená substituent v poloze 7, odlišný od atomu vodíku.
10. Farmaceutický prostředek, vyznačuj ící se t í m, že jako svou účinnou složku obsahuje derivát obecného vzorce I podle některého z nároků 1 až 9 nebo jeho farmaceuticky přijatelnou sůl, hydrát nebo ester spolu s farmaceuticky přijatelným nosičem.
11. Způsob léčení chorob, vyvolaných působením prostaglandinu, vyznačující se tím, že se podává účinné množství derivátů podle nároku 1.
12. Způsob léčení chorob, zprostředkovaných prostaglandínem D2, vyznačující se tím, že se podává účinné množství derivátu podle nároku 1.
13. Způsob léčení překrvení nosní sliznice, vyznačující se tím, že se podává účinné množství derivátu podle nároku 1.
14. Způsob léčení alergického asthmatu, vyznačující se tím, že se podává účinné množství derivátu podle nároku 1.

<
15. Způsob léčení alergické rýmy, vyznačuj ící i s e t í m, že se podává účinné množství derivátu podle nároku 1.
16. Derivát obecného vzorce I podle některého z nároků 1 až 9 nebo jeho farmaceuticky přijatelná sůl, hydrát nebo ester pro použití k léčebným účelům.

flflfl flfl • flfl flfl • flfl · · • ······ · • flflfl • flflfl « flfl flfl · flfl fl flfl flfl · • flflfl • flflfl fl • · · flfl • flfl flfl flfl
17. Derivát obecného vzorce I podle některého z nároků 1 až 9 nebo jeho farmaceuticky přijatelná sůl, hydrát nebo ester pro použití k léčení chorob, zprostředkovaných prostaglandinem.
18. Derivát obecného vzorce I podle některého z nároků 1 až 9 nebo jeho farmaceuticky přijatelná sůl, hydrát nebo ¹ ester pro použití k léčení překrvení nosní sliznice, alergického asthmatu nebo alergické rýmy.
19. Použití derivátu obecného vzorce I podle některého z nároků 1 až 9 nebo jeho farmaceuticky přijatelné soli, hydrátu nebo esteru pro výrobu farmaceutického prostředku pro léčení chorob, zprostředkovaných působením prostaglandinu.
20. Použití derivátu obecného vzorce I podle některého z nároků 1 až 9 nebo jeho farmaceuticky přijatelné soli, hydrátu nebo esteru pro výrobu farmaceutického prostředku pro léčení překrvení nosní sliznice, alergického asthmatu nebo alergické rýmy.
21. Antagonistický farmaceutický prostředek proti účinkům prostaglandinu typu D na překrvení nosní a plicní tkáně, vyznačující se tím, že obsahuje jako účinnou složku antagonistické množství derivátu i obecného vzorce I podle některého z nároků 1 až 9 nebo farmaceuticky přijatelnou sůl, hydrát nebo ester spolu s farmaceuticky přijatelným nosičem.

Zastupuje: