CZ20022682A3 - Farmaceutické kompozice pro léčení zánětlivého onemocnění - Google Patents

Description

Předmětný vynález se týká kompozic a způsobů prevence nebo léčby zánětlivých onemocnění pomocí podávání inhibitoru fosfodiesterasy 4 v kombinaci s inhibitorem syntézy prostaglandínu, jehož příkladem jsou nesteroidní protizánětlivá léčiva (NSAID).

Dosavadní stav techniky

Identifikace nových terapeutických činidel pro léčení pulmonárních nemocí je ztíženo skutečností, že za rozvinutí uvedeného typu onemocnění je zodpovědno několik zprostředkovatelů. Proto se tedy zdá nepravděpodobné, že by eliminace účinku jediného zprostředkovatele mohla mít výrazný vliv na všechny tři složky chronického astmatu. Alternativou k tomuto „zprostředkovatelskému přístupu je regulace aktivity buněk zodpovědných za patofyziologii uvedeného onemocnění.

Jednou z těchto cest je zvýšení hladiny cAMP (cyklického adenosin-3',5'-monofosfátu). Bylo prokázáno, že cyklický AMP je druhým přenašečem, který zprostředkovává biologické odezvy na široké spektrum hormonů, neuropřenašečů a léčiv (viz.

Krebs, „Endocrinology Proceedings of the 4^th International Congress Excerpta Medica, 17-29, 1973). Pokud se příslušný agonista váže k receptorům na povrchu příslušné buňky, dochází k aktivaci adenylátcyklasy, která přeměňuje zvýšenou rychlostí Mg²⁺-ATP na cAMP.

Cyklický AMP upravuje aktivitu většiny, pokud ne všech, buněk, které přispívají k patofyziologii vnějšího (alergického) astmatu. Samotné zvýšení hladiny cAMP může vyvolávat příznivé účinky, jejichž skupina zahrnuje 1) relaxaci hladkého svalstva dýchacích cest, 2) uvolnění zprostředkovatele inhibice žírných buněk, 3) potlačení degranulace neutrofilu, 4) inhibici degranulace bazofilu a 5) inhibici monocytu a aktivaci makrofágů. Sloučeniny, které aktivují adenylátcyklasu nebo inhibují fosfodíesterasu by skutečně měly být účinné při potlačování nevhodné aktivace hladkého svalstva dýchacích cest a širokého spektra zánětlivých buněk. Základním buněčným mechanismem inaktivace cAMP je hydrolýza 3'-fosfodiesterové vazby jednou nebo více látkami ze skupiny izoenzymů, které se označují jako cyklické nukleotidové fosfodiesterasy (PDE).

Bylo prokázáno, že určitý izoenzym, kterým je cyklická nukleotidová fosfodiesterasa IV (PDE IV), je zodpovědný za rozklad cAMP v hladkém svalstvu dýchacích cest a v zánětlivých buňkách (viz. Torphy,Phosphodiesterase Isozymes: Potential Targets for Novel Anti-asthmatic Agents v publikaci New Drug for Asthma, editor Barnes, IBC Technical Services Ltd., 1989). Z výsledků výzkumu vyplývá, že inhibice tohoto enzymu způsobuje nejen relaxaci hladkého svalstva dýchacích cest, ale rovněž potlačuje degranulaci žírných buněk, bazofilů a neutrofilů a zároveň inhibuje aktivaci monocytů a neutrofilů. Kromě toho příznivé účinky inhibitorů PDE IV jsou výrazně posilovány, pokud je aktivita adenylátcyklasy cílových buněk zvýšena pomocí vhodných hormonů nebo jiných látek produkovaných vnitřními orgány, jak je tomu v in vivo prostředí.

• · · · · ·· ·· 9» • · · · « · · · · · » · • ··· · « · ···«· · · • · · · · · · · ··· ·# ·· »· ·· ···»

Inhibitory PDE IV by tak byly účinné v plicích, kde je zvýšená hladina prostaglandinu E₂ a prostacyklinu (což jsou aktivátory adenylátcyklasy). Takovéto sloučeniny by tedy nabízely jedinečný přístup k farmakoterapii bronchiálního astmatu a vykazují výrazné terapeutické výhody oproti činidlům, která jsou v současnosti dostupná na trhu.

Kromě toho by uvedené sloučeniny mohly být užitečné pro kombinování různých terapií ve světle skutečnosti, že příčinou mnoha pulmonárních onemocnění je několik zprostředkovatelů. Předmětem tohoto vynálezu je kombinace inhibitoru PDE 4 a nesteroidního protizánětlivého léčiva pro léčení zánětlivého onemocnění nebo chorobného stavu léčitelného selektivním inhibitorem PDE 4, který souvisí se zánětlivou složkou související se syntézou prostaglandinů.

Podstata vynálezu

Prvním aspektem předmětného vynálezu je způsob léčení zánětlivého onemocnění savce, který zahrnuje podávání pacientovi, který potřebuje takovouto léčbu, účinného množství specifického inhibitoru PDE 4 a účinného množství nesteroidního protizánětlivého činidla, přičemž uvedená léčiva jsou podávána společně, nebo odděleně a postupně, přičemž při postupném podávání se uvedená léčiva podávají v krátkých nebo dlouhých časových odstupech.

Kombinační terapie podle předmětného vynálezu zahrnuje podávání inhibitoru PDE 4 spolu s nesteroidním protizánětlivým činidlem za účelem vyléčení zánětlivého onemocnění. Uvedené · · · .4 0 · 0 0 · 0 · 0 ·

00· 0 0 · 0

00· ·· *· 40 0* 000 0 sloučeniny je možné podávat společně v jediné dávkovači formě, nebo je možné tyto sloučeniny podávat odděleně ve formě dvou různých farmaceutických prostředků. Tak je například možné obě léčiva podávat odděleně ve formě orálních prostředků nebo je možné jedno léčivo podávat ve formě orálního přípravku a nebo ve formě čípku nebo injekčně nebo ve formě intravenózní infúze. Uvedená léčiva je možné podávat současně nebo je možné je podávat s krátkým časovým odstupem nebo s dlouhým časovým odstupem, jak je tomu například v případě, kdy je jedno léčivo podáváno ráno a druhé léčivo je podáváno večer.

Specifickým inhibitorem PDE 4, který je možné použít podle předmětného vynálezu, může být jakákoli sloučenina, o které je známo, že inhibuje enzym PDE 4, nebo o které je zjištěno, že se chová jako inhibitor PDE 4, přičemž tyto sloučeniny musí inhibovat pouze PDE 4 a ne PDE 4 spolu s dalšími enzymy ze skupiny PDE. Obecně se podle tohoto vynálezu výhodně používají PDE 4 antagonisté, jejichž poměr IC50 je přibližně 0,1 nebo více, přičemž tento poměr se vypočte jako podíl hodnoty IC50 pro katalytickou formu PDE IV, která váže rolipram s vysokou afinitou, a IC₅₀ pro formu, která váže rolipram s nízkou afinitou.

Inhibitory PDE, jako jsou theofylin a pentoxyfilin, inhibují všechny nebo většinu PDE izoenzymů bez ohledu na druh tkáně. Tyto sloučeniny však vykazují vedlejší účinky, a to zřejmě proto, že neselektivně inhibují všechny třídy PDE izoenzymů ve všech tkáních. Cílové onemocnění je možné uvedeným typem sloučenin účinně léčit, avšak může dojít k výskytu nežádoucích vedlejších účinků, jejichž vyloučení nebo minimalizace, by vedla ke zvýšení celkového • «9 * » · · * · · · • · · · 9 ·· · 9 ·· 9 • · · ··♦· « * » • 999 * · 9 999 9 9 9 9 • · · · 9 · · 9 • · ♦ 9 9 9 · 99 *· 9 « · 9 terapeutického účinku tohoto přístupu k léčení některých onemocnění. Tak například klinické studie provedené se selektivním PDE 4 inhibitorem, jakým je rolipram, který byl vyvinut jako antidepresivum, odhalily, že rolipram vykazuje psychotické účinky a zároveň má gastrointestinální účinky, jako je například pálení žáhy, nauzea a zvracení.

Pro účely tohoto textu je katalytické místo cAMP, které váže R a S rolipram s nízkou afinitou označováno jako „nízkoafinitní vazné místo (ve zkratce LDPE 4) a druhá forma tohoto katalytického místa, která váže rolipram s vysokou afinitou, je označována jako „vysokoafinitní vazné místo (ve zkratce HPDE 4). Zkratka „HDPE 4 však nesmí být zaměňována s výrazem „hPDE 4, který se používá pro označení lidského PDE 4 .

Počáteční experimenty byly provedeny s cílem ustanovit a vyhodnotit test vaznosti [³H]R-rolipramu. Detailní popis tohoto testu je popsán níže v příkladu 1.

Aby bylo možné stanovit, jestli stejný genový produkt vykazuje jak vysokoafinitní vaznou aktivitu, tak nízkoafinitní vaznou aktivitu, byly známými metodami transformovány kvasinky a po této transformaci následovala exprese rekombinantního PDE 4, přičemž doba fermentace činila 6 hodin. Analýza Western blot, provedená s použitím protilátky orientované proti PDE 4, odhalila, že množství exprimovaného PDE 4 rostlo s časem a dosáhlo maxima po 3 hodinách růstu. Kromě toho po vysokorychlostním odstředění (100 000 x g) se více než 90 procent imunoreaktivního produktu nacházelo v kapalině nad kvasnými lyzáty. Vázaní [³H]R-rolipramu a aktivita PDE byly monitorovány spolu s expresí proteinu. Aktivita PDE 4 byla koexprimována s aktivitou pro vázání rolipramu, čímž bylo prokázáno, že obě tyto funkce vykazuje stejný genový produkt. Podobně jako v případě analýzy Western blot bylo zjištěno, že 85 procent aktivity PDE inhibovatelné rolipramem a aktivity pro vázání [³H]-rolipramu je soustředěno v kapalné frakci nacházející se nad kvasinkami.

Celkově bylo zjištěno, že většina rekombinantního PDE 4, exprimovaného v uvedeném systému, existuje ve formě LPDE 4 a jen malý podíl existuje ve formě HPDE 4. V důsledku toho inhibice katalytické aktivity rekombinantního PDE 4 primárně odráží účinky sloučenin na LPDE 4. Inhibici katalytické aktivity PDE 4 je tak možné používat jako index účinnosti sloučenin vůči LPDE 4. Účinnost sloučenin na HPDE 4 je možné stanovit zkoumáním jejich schopnosti konkurovat při vázání [³H]R-rolipramu. Za účelem vyvinutí SAR jak pro nízkoafinitní, tak pro vysokoafinitní vazná místa rolipramu, byly účinnosti vybraných sloučenin stanovovány ve dvou testovacích systémech. Výsledky těchto experimentů, při kterých byly použity standardní sloučeniny, byly uspořádány do tabulek. Podle očekávání vykázaly některé sloučeniny v porovnání s [³H]R-rolipramem zřetelně vyšší účinnost při vázání v místě, ve kterém rolipram vykázal vysokoafinitní vaznost, v porovnání s dalším místem, které se označuje jako nízkoafinitní. SAR korelace mezi vysokoafinitní vazností a nízkoafinitní vazností byla jen nepatrná a byl učiněn závěr, že SAR pro inhibici vysokoafinitního vázání [³H]R-rolipramu byla odlišná od SAR pro nízkoafinitní vazné místo rolipramu.

« «4 4 4 *· ·4 4 4 > · » · 4 · · · 4 4 t *

444*4 4 44444 4 4

444 44 4 4 4« 4 4 444·

Nyní bylo zjištěno, že existují alespoň dvě vazné formy na lidském monocytovém rekombinantním PDE 4 (hPDE 4), se kterými interagují inhibitory. Jedním z možných vysvětlení pro tato pozorování je, že hPDE 4 existuje ve ,dvou odlišných formách. Jedna z těchto forem váže sloučeniny, jako je rolipram a denbufylin, s vysokou afinitou, zatímco druhá z těchto forem váže uvedené sloučeniny s nízkou afinitou. Výhodnými inhibitory PDE 4 pro použití podle předmětného vynálezu jsou takové sloučeniny, které vykazují příznivý terapeutický poměr, tj. sloučeniny, které přednostně inhibují katalytickou aktivitu cAMP v případě, že uvedený enzym má formu, jež váže rolipram s nízkou afinitou, čímž dochází ke snížení výskytu uvedených vedlejších účinků, které jsou zjevně spojeny s inhibici formy, jež váže rolipram s vysokou afinitou. Jinými slovy výhodnými sloučeninami podle tohoto vynálezu jsou sloučeniny, jejichž IC₅o poměr je přibližně 0,1 nebo vyšší, přičemž tento poměr se vypočte jako podíl hodnoty IC₅₀ pro katalytickou formu PDE 4, která váže rolipram s vysokou afinitou, a IC₅₀ pro formu, která váže rolipram s nízkou afinitou.

Dalším zlepšením tohoto standardu je stav, kdy poměr IC₅₀ inhibitoru PDE 4 je přibližně 0,1 nebo více, přičemž uvedený poměr se vypočte jako podíl hodnoty IC₅o při srovnání s vázáním lnM [³H]R-rolipramu k formě PDE, jež váže rolipram s vysokou afinitou, a hodnoty IC₅₀ pro inhibici katalytické aktivity PDE IV ve formě, jež váže rolipram s nízkou afinitou, kdy se jako substrát používá 1 μΜ [³H]-sAMP. Podrobnější popis tohoto testu je uveden v patentu Spojených států amerických číslo US 5,998,428, jehož obsah je v rozsahu nezbytném pro provedení φ φ zahrnut v tomto textu jako • ····»· · φ φ φ φ φ φ · • Φ φφ φ · φφφφ předmětného vynálezu materiál.

odkazový

Nejvýhodnějšími inhibitory PDE 4 podle tohoto vynálezu jsou sloučeniny, jejichž poměr IC₅₀ je vyšší než 0,5, ještě výhodněji pak sloučeniny, jejichž poměr IC₅₀ je vyšší než 1,0. Výhodnou sloučeninou pro použití podle předmětného vynálezu je kyselina cis-4-kyano-4-(3-cyklopentyloxy-4-methoxyfenyl)cyklohexan-l-karboxylová (Ariflo®) . Kromě toho je možné při provádění předmětného vynálezu použít následující inhibitory PDE 4: AWD-12-281 od společnosti Astra (Hofgen, N a spolupracovníci, 15^th EFMC Int. Symp. Med. Chem. (Edinburgh, 6. až 10. září 1998, anotace P.98); derivát 9-benzyladeninu s označením NCS-613 (INSERM); sloučeninu D-4418 od společností Chiroscience a Schering-Plough; benzodiazepinový inhibitor PDE 4 s označením CI-1018 (PD-168787; od společností ParkerDavis/Warner-Lambert); benzodioxolový derivát popsaný ve zveřejněné mezinárodní přihlášce číslo WO 99/16766 (Kyowa Hakko); sloučeninu V-11294A od společnosti Napp (Landells,

L. J. a spolupracovníci, Eur. Resp. J [Annu. Cong. Eur. Resp. Soc. (19. až 23. září, Ženeva 1998)] 1998, 12 (Suppl. 28), anotace P2393); roflumilast (referenční číslo CAS 162401-32-3) a ftalazinon (viz. zveřejněná mezinárodní přihláška číslo WO 99/47505 (Byk-Gulden)); nebo sloučeninu označenou jako T-440 (Tanabe Seiyaku; Fuji, K. a spolupracovníci,

J. Pharmacol. Exp. Ther., 1998, 284(1), 162).

Nesteroidními protizánětlivými léčivy (NSAID), která je možné použít podle předmětného vynálezu, jsou takové sloučeniny, které inhibují syntézu prostaglandinů. Má se za to, že nesteroidní protizánětlivá léčiva (NSAID) působí • 99 9* 99 ·· 99 * · · 9 9 99 9 · ·« ·

999 9999 · · ·

99999 9 9 9 9 9 9 · 9

999 9999

999 99 9 9 ·» 9 · 9 9 9 9 prostřednictvím inhibice cyklooxygenasy-1 (COX-1) a cyklooxygenasy-2 (COX-2) a do skupiny tohoto typu sloučenin spadá mnoho látek. Jako příklad takovéto sloučeniny je možné uvést jedno nebo více nesteroidních protizánětlivých léčiv (NSAID) vybraných ze skupiny zahrnující aspirin, karprofen, cholínsalícylát, ketoprofen, salicylát hořečnatý, salicylamind, salsalat, salicylát sodný, thiosalicylát sodný, sodnou sůl meklofenamátu, oxyfenbutazon, fenylbutazon, indomethacin, piroxikam, sulindak, tolmetin a sodnou sůl tolmetinu, kyselinu mefenamovou, zomerpirak, ibuprofen, fenoprofen, naproxen a sodnou sůl naproxenu, diklofenak, flurbiprofen, ketoprofen, ketorolak, trometamol,.celecoxib, diflunisal a nabumaton. Všechny tyto sloučeniny jsou dostupné z komerčních zdrojů a jsou dobře popsány v odborné lékařské a jiné vědecké literatuře.

Kombinované analgetické a protizánětlivé účinky nesteroidních protizánětlivých léčiv (NSAID) a specifických inhibitorů PDE 4 činí tuto kombinaci zvlášť užitečnou pro utišení symptomů bolestivého a/nebo zánětlivého stavu, jejichž skupina zahrnuje revmatické poruchy, jako je revmatická artritida, osteroartritida a spondyloartropatie, jakož i poruchy tkáně obklopující kloub a revmatismus měkké tkáně. Uvedenou kombinaci je rovněž možné použít pro léčení pulmonárních onemocnění, včetně zánětlivého stavu.

Předpokládá se, že obě aktivní činidla se podávají současně nebo s velmi krátkým časovým odstupem.

V alternativním případě může být jedno léčivo užito ráno a druhé později během dne. Při jiném léčebném režimu může být jedno léčivo užíváno dvakrát denně a druhé jen jednou denně, a • to to toto 4· ·· ·♦· · t *to to · · ♦ · • toto ···· ·· · • *··#· · ····· · · • ··· ···· ··« toto ·· ·· ·· toto·· to buď současně s léčivem užívaným dvakrát denně nebo odděleně. Ve výhodném provedení se obě léčiva užívají společně v jednom okamžiku.

Sloučeniny používané podle předmětného vynálezu a jejich farmaceuticky přijatelné soli, které jsou aktivní po orálním podání, je možné formulovat jako sirupy, tablety, kapsle, přípravky s řízeným uvolňováním léčiva nebo pastilky. Farmaceutický prostředek ve formě sirupu se obvykle skládá ze suspenze nebo roztoku dané sloučeniny nebo její soli v kapalném nosiči, jako je například ethanol, podzemnicový olej, olivový olej, glycerin nebo voda, přičemž tento sirup dále obsahuje chuťové látky a barviva. Pokud má farmaceutická kompozice podle předmětného vynálezu formu tablety, je možné použít jakýkoli farmaceuticky přijatelný nosič, jenž se běžně používá pro výrobu pevných farmaceutických prostředků. Jako příklad takovéhoto nosiče je možné uvést stearát hořečnatý, sádru, mastek, želatinu, arabskou gumu, kyselinu stearovou, škrob, laktosu a sacharosu. Pokud má farmaceutická kompozice podle předmětného vynálezu formu kapsle, je vhodné použít jakýkoli běžně užívaný způsob enkapsulace, jako je například enkapsulace výše uvedených nosičů v tvrdém želatinovém pouzdru, jež tvoří danou kapsli. Pokud má farmaceutická kompozice podle předmětného vynálezu formu kapsle tvořené měkkým želatinovým pouzdrem, je možné pro výrobu této kapsle použít jakýkoli farmaceuticky přijatelný nosič, jenž se běžně používá pro přípravu disperzí nebo suspenzí, jako jsou například vodné kaučuky, celulosy, křemíčitany nebo oleje, a tyto disperze nebo suspenze se následně vpravují do kapsle tvořené měkkým želatinovým pouzdrem.

ft ftft ftft ftft ftft ftft • ftft · · ftft · · ·· · ftftft ftftftft ftft · « ftft··· · ftftftft· · · ft ftftft ftftftft • ftft ftft ftft ftft ft* ftftftft

Typické farmaceutické kompozice pro parenterální podávání se skládají z roztoku nebo suspenze dané sloučeniny nebo její soli ve sterilním vodném nebo nevodném nosiči, který může případně obsahovat parenterálně přijatelný olej, jako je například polyethylenglykol, polyvinylpyrrolidon, lecitin, podzemnicový olej nebo sezamový olej.

Typické farmaceutické kompozice pro inhalaci mají formu roztoků, suspenzí nebo emulzí, které je možné podávat ve formě suchého prášku nebo ve formě aerosolu s použitím běžných hnacích látek, jako jsou fluorované uhlovodíky, jejichž příkladem je trichlorfluormethan.

Ve výhodném provedení předmětného vynálezu je farmaceutickou kompozicí obsahující inhibitory PDE 4 jednotková dávkovači forma, jako je tableta nebo kapsle, nebo přípravek s řízeným uvolňováním léčiva. Ačkoli se nesteroidní protizánětlivá léčiva (NSAID) obvykle užívají ústy, některá z nich, jako je diklofenak, ketoprofen, ketorolak, piroxikam a tenoxikam, je možné podávat i intramuskulární injekcí. Ketorolak a tenoxikam je rovněž možné podávat intravenózní injekcí.

Aktivní složku podle předmětného vynálezu je možné podávat 1 až 6krát denně v dávce, která postačuje pro dosažení požadované aktivity. Výhodně se uvedená aktivní složka podává přibližně jednou až dvakrát denně, výhodněji pak dvakrát denně.

Co se týče množství podávaného léčiva, předpokládá se, že inhibitory PDE 4 se budou podávat dospělému člověku v množství • · 4 ·· 44 ·4 4 4 • 4 4 · · 4 · ·

9 9 9 9 9 · •4 4 4 · 4 4 4 · 4 • · · 9 · · 9

44 44 4444 od 1 mikrogramu do 200 miligramů denně. Co se týče nesteroidních protizánětlivých léčiv (NSAID), tato léčiva se podávají v souladu se schváleným dávkováním.

Příklady provedení vynálezu

Vynález bude dále blíže popsán pomocí následujících příkladů, které slouží jen pro ilustraci a nijak neomezují jeho rozsah.

Příklad 1

Test vaznosti fosfodiesterasy a rolipramu

Příklad 1A

Bylo stanoveno, že izolovaný monocytový PDE 4 a hrPDE 4 (tj. rekombinantní lidský PDE 4) existují primárně v nízkoafinitní formě. Proto bylo možné testovat aktivity sloučenin proti nízkoafinitní formě PDE 4 pomocí standardních testů katalytické aktivity PDE 4, při kterých se jako substrát používal 1 μΜ [³H]cAMP (víz. publikace Torphy a spolupracovníci, J. of Biol. Chem., 1992, 267, 1798).

Jako zdroj proteinu byly použity kapaliny nad pevnou látkou, získané po odstředění extraktů z krysího mozku, a oba enantiomery [³H]-rolipramu byly připraveny tak, aby jejich měrná radioaktivita byla 25,6 Ci/milimol. Standardní testovací podmínky byly oproti publikovanému postupu modifikovány, takže byly stejné jako podmínky PDE testu s výjimkou posledního cAMP: 50 mM Tris HC1 (pH 7,5), 5 mM MgCl₂ a 1 nM [³H]-rolipramu (víz. publikace Torphy a spolupracovníci, J. of Biol. Chem., • · · · · »· ·♦ ·· • · ♦ * » · · • · · · · » ······ · · • · · · 9 9·· ··· ·♦ ·9 99 ·· 9999

1992, 267, 1798) . Test probíhal 1 hodinu při teplotě 30 °C. Reakce byla ukončena a navázaný ligand byl oddělen od volného ligandu pomocí sběrače buněk Brandel. Srovnání pro vaznosti jednotlivých látek pro vysokoafinitní místo bylo testováno za stejných podmínek jako srovnání pro vaznosti jednotlivých látek pro nízkoafinitní místo s tím rozdílem, že ve směsi nebyl přítomen [³H]-cAMP a 5'-AMP.

Příklad 1B

Měření aktivity fosfodiesterasy

Aktivita PDE byla testována pomocí [³H]cAMP SPA nebo [³H]cGMP scintilační proximitní analýzy (SPA) enzymového testu tak, jak byla popsána dodavatelem (Amersham Life Sciences). Reakce probíhaly v 96jímkových platech při teplotě místnosti v 0,1 mililitru reakčního tlumivého roztoku, který obsahoval (výsledné koncentrace): 50 mM Tris HCI, pH 7,5, 8,3 mM MgCl₂, 1,7 mM EGTA, [³H]cAMP nebo [³H]cGMP (přibližně 2000 dpm/pmol), enzym a různé koncentrace inhibitorů podle tohoto vynálezu. Test byl ponechán probíhat po dobu 1 hodiny a byl ukončen přidáním 50 mikrolitrů SPA kuliček křemičitanu yttritého v přítomnosti síranu zinečnatého. Plata byla protřepána a ponechána stát 20 minut při teplotě místnosti. Vytvoření radioaktivně označeného produktu bylo testováno scintilační spektrometrií. Aktivity PDE 3 a PDE 7 byly testovány s použitím 0,05 μΜ [³H]cAMP jakožto substrátu, zatímco aktivita PDE 4 byla testována pomocí 1 μΜ [³H]cGMP jakožto substrátu.

Test vaznosti [³H]R-rolipramu

Test vaznosti [³H]R-rolipramu byl proveden modifikací způsobu popsaného Schneiderem a spolupracovníky, viz.

publikace Nicholson a spolupracovníci, Trends Pharmacol. Sci., · · · · ·· ·· ·9 9· • · · · · · · • · · 9 9 9

99999 · · • 9 9 9 9

99 99 9999

1991, 12, 19 a publikace Mc Hale a spolupracovníci, Mol. Pharmacol., 1991, 39, 109. R-rolipram se váže ke katalytickému místu PDE 4, viz. publikace Torphy a spolupracovníci, Mol. Pharmacol., 1991, 39, 376. V souladu s tím, kompetitivní vázání [³H]R-rolipramu poskytuje nezávislé srovnání účinností jednotlivých, radioaktivně neoznačených inhibitorů PDE 4. Uvedený test probíhal 1 hodinu při teplotě 30 °C v

0,5 mikrolitru tlumivého roztoku, který obsahoval (výsledné koncentrace): 50 mM Tris HCl, pH 7,5, 5 mM MgCl₂, 0,05 % albuminu z telecího séra, 2 nM [³H] R-rolipramu (5,7 x 104 dpm/pmol) a různé koncentrace radioaktivně neoznačených inhibitorů. Reakce byla ukončena přidáním

2,5 mililitru ledově studeného pufru (neobsahujícího [³H]-rolipram) a rychlou vakuovou filtrací (sběrač buněk Brandel) skrz filtry Whatman GF/B, které byly předem nasáknuty 0,3procentním polyethyleniminem. Uvedené filtry byly promyty dalšími 7,5 mililitru studeného pufru, vysušeny a zkoumány kapalnou scintilační spektrometrií.

Příklad 2

Příprava tablet s řízeným uvolňováním léčiva

Farmaceutický prostředek s řízeným uvolňováním léčiva byl připraven s použitím složek uvedených v tabulce 1.

• 00 ·» ·* *0 ·· 000 0000 0 0 0 0 000 0000 00 0 0 000 0 0 0 0*0 0 0 0 0 0 000 0000

00 00 00 00 0000

Tabulka 1

Složka	Obsah (hmotnostní procento)
Ariflo®	3,3
Hydrogenfosforečnan vápenatý (bezvodý)	88,5
Carbomer 934P	3,3
Carbomer 941P	1, β
Stearát hořečnatý	1,0
Běloba Opadry White OY-S-9603	2,4
Přečištěná voda	zbytek do 100

Míšení a lisování probíhalo následovně:

Míšení

Pomocné látky a léčivo byly umístěny do mísíce a promíchány. Ke vzniklé směsi byl přidán stearát hořečnatý a míchání probíhalo další 3 minuty. Během mísícího procesu byly pomocné látky a léčivo spolu promíchány, prosety skrz síto a znovu promíchány.

Lisování

Přibližně 350 miligramů každé směsi bylo lisováno do tablet. Byla použita tableta, jejíž výsledná pevnost byla 98,1 newtonů (10 kilopondů).

Běloba Opadry White byla suspendována v přečištěné vodě a tato suspenze byla použita pro potažení tablet. Voda byla odstraněna během procesu potahování a netvořila část konečného produktu.

• fcfc fc* fcfc • · · · · fcfc · • fcfc · · · · • fc·· fcfc · fcfcfc • · · · · ··· fcfc fcfc fcfc • fc ·« • · · • · • * • · • fc fcfcfc·

Příklad 3

Tablety s okamžitým uvolněním léčiva

Složka	Množství (mg/tableta)	Množství (mg/tableta)	Množství (mg/tableta)
Ariflo®	5,0	10,0	15,0
Monohydrát laktosy	113,0	108	103
Mikrokrystalická celulosa	70,0	70,0	70,0
Sodná sůl glykolátu škrobu	10,0	10,0	10,0
Stearát hořečnatý	2,0	2,0	2,0
Běloba Opadry White OY-S-9603	5,0	5,0	5, 0
Celková hmotnost tablety (mg)	205,0	205,0	205, 0

Příklad 4

Léčba artritidy

Pacientovi, u kterého byla diagnostikována artritida a který trpěl bolestí v důsledku zánětu kloubu, byla dvakrát denně podávána tableta s řízeným uvolňováním léčiva, která obsahovala 30 miligramů produktu Ariflo® a jejíž příprava byla popsána v příkladu 2, a tableta Relafenu, jež obsahovala 500 miligramů nabumetonu. Léčba pokračovala až do vymizení příznaků uvedeného zánětu.

Claims (2)

1.

Inhibitor PDE 4 a nesteroidní protizánětlivé léčivo (NSAID) pro použití při léčení zánětlivého onemocnění, kdy uvedený inhibitor PDE 4 a nesteroidní protizánětlivé léčivo (NSAID) se podávají společně, nebo odděleně a postupně, přičemž při postupném podávání se uvedená léčiva podávají v krátkých nebo dlouhých časových odstupech.

2. Inhibitor PDE 4 a nesteroidní protizánětlivé léčivo (NSAID) pro použití definované v nároku 1, kdy uvedeným inhibitorem PDE 4 je kyselina cis-4-kyano-4-(3cyklopentyloxy-4-methoxyfenyl)cyklohexan-l-karboxylová a uvedené nesteroidní protizánětlivé léčivo (NSAID) je vybrané ze skupiny zahrnující aspirin, karprofen, cholinsalicylát, ketoprofen, salicylát hořečnatý, salicylamind, salsalat, salicylát sodný, thiosalicylát sodný, sodnou sůl meklofenamátu, oxyfenbutazon, fenylbutazon, indomethacin, piroxikam, sulindak, tolmetin a sodnou sůl tolmetinu, kyselinu mefenamovou, zomerpirak, ibuprofen, fenoprofen, naproxen a sodnou sůl naproxenu, díklofenak, flurbiprofen, ketoprofen, ketorolak, trometamol, celecoxib, diflunisal a nabumaton.