CZ20021512A3

CZ20021512A3 - Léčivo pro léčení plicní choroby a farmaceutický prostředek s obsahem inhibitoru PDE-4 a protizánětlivého kortikosteroidu

Info

Publication number: CZ20021512A3
Application number: CZ20021512A
Authority: CZ
Inventors: Peter N. Goodfellow; Richard Nieman; Theodore J. Thorphy
Original assignee: Smithkline Beecham Corporation
Priority date: 1999-11-02
Filing date: 2000-11-01
Publication date: 2003-04-16
Also published as: MXPA02004350A; AP2002002496A0; JP2003513028A; NO20022057D0; WO2001032127A2; HK1049107A1; ECSP003747A; CN1387404A; CA2388333A1; HUP0203152A3; OA12076A; IL149367A0; BR0015270A; AU1357501A; SK7592002A3; HUP0203152A2; EP1225866A4; TR200201211T2; DZ3225A1; NO20022057L

Description

Léčivo pro léčeni plicní choroby a farmaceutický prostředek s obsahem inhibitoru PDE-4 a protizánětlivého kortikosteroidu

0 0 0 • 0 *

Oblast techniky • 0 0 0 0 0

Přítomný vynález se týká použití inhibitoru PDE-4 ·....’

0 a protizánětlivého kortikosteroidu pro výrobu léčiva pro léčení plicní choroby. Vynález se také týká farmaceutického prostředku, který obsahuje inhibitor PDE-4 a protizánětlivý kortikosteroid a farmaceuticky přijatelný excipient, vhodného pro léčení plicní choroby.

Dosavadní stav techniky

Identifikace nových terapeutických prostředků pro léčení plicních chorob je obtížná z důvodu existence mnoha medíátorů, které jsou odpovědné za rozvinutí nemoci. Proto se zdá málo pravděpodobné, že by eliminace účinků jediného medíátorů mohla mít podstatný efekt na všechny tři komponenty chronického astmatu. Alternativou k mediátorovému přístupu je regulace aktivity buněk odpovědných za patofysiologii choroby.

Jedním takovým způsobem je elevace hladin cAMP (cyklického adenosin-3',5'-monofosfatu neboli cyklického AMP) . Ukázalo se, že cyklický AMP je druhým poslem (second messenger) zprostředkujícím biologické odpovědi na širokou škálu hormonů, neurotransmiterů a léčiv (Krebs, Endocrinology Proceedings of the 4th

International Congress Exceptra Medica, 17 až 29 (1973)) . V případě, kdy se příslušný agonista naváže na specifické povrchové celulární receptory, aktivuje se adenylatcykláza, která urychluje konverzi Mg²⁺-ATP na cAMP. Cyklický AMP moduluje aktivitu

· ·“· · '· • · * · · většiny, pokud ne všech, buněk, které přispívají k patofysiologii extrinsického (alergického) astmatu. Jako takové by zvýšení c-AMP mělo výhodné účinky včetně:

1) relaxace hladké svaloviny dýchacích cest;

2) inhibice uvolňování mediátorů ze žírných buněk;

3) suprese degranulace neutrofilů;

4) inhibice degranulace bazofilů a

5) inhibice aktivace monocytů a makrofágů.

Z toho vyplývá, že sloučeniny aktivující adenylatcyklázu nebo inhibující fosfodiesterázu by měly být účinné v supresi neadekvátní aktivace hladkého svalu dýchacích cest a široké škály zánětlivých buněk. Hlavním buněčným mechanismem inaktivace c-AMP je hydrolýza 3'-fosfodiesterové vazby jednou či více látkami z rodiny izoenzymů, nazývaných cyklické nukleotidové fosfodiesterázy (PDE).

Ukázalo se, že jeden izoenzym cyklické nukleotidové fosfodiesterázy (PDE), PDE-4, odpovídá za rozklad c-AMP v hladkém svalu dýchacích cest a zánětlivých buňkách (Torphy, Phosphodiesterase Isoenzymes: Potential Targets for Novel Anti-asthmatic Agents, New Drugs for Asthma, Barnes, vyd. IBC Technical Services Ltd. (1989)). Výzkum naznačuje, že inhibice tohoto enzymu nejenže produkuje relaxaci hladkého svalu dýchacích cest, ale suprimuje též degranulaci žírných buněk, bazofilů a neutrofilů společně s inhibici aktivace monocytů a neutrofilů. Navíc jsou výhodné účinky inhibitorů PDE-4 výrazně potencovány, pokud je aktivita adenylatcyklázy v cílových buňkách zvýšena příslušnými hormony nebo autokoidy, jak k tomu dochází in vivo. Proto by inhibitory PDE-4 mohly být účinné v plicích, kde jsou hladiny prostaglandinů E₂ a prostacyklinu (tedy aktivátorů adenylatcyklázy) zvýšené. Takovéto sloučeniny nabízí unikátní přístup k farmakoterapii bronchiálního •

tititi · ti ti astmatu a mají signifikantní terapeutické výhody oproti . ·· prostředkům, které jsou v současné době na trhu. j**’*·

Dále by bylo vhodné kombinovat terapie, a to .

titititi v důsledku faktu, že na etiologii mnoha plicních chorob se podílí mnoho mediátorů. Přítomný vynález představuje í . ;

• ti til kombinaci inhibitoru PDE-4 a protizánětlivého kortikosteroidu, konkrétně takového, který se podává inhalací, pro léčení plicních chorob. Takováto kombinace je obzvláště vhodná pro léčení chronické obstrukční plicní nemoci (CHOPN) nebo astmatu.

Podstata vynálezu

Předmětem tohoto vynálezu je použití inhibitoru PDE-4 a protizánětlivého kortikosteroidu pro výrobu léčiva pro léčení plicní choroby.

Výhodným provedením předmětu tohoto vynálezu je použití, kde inhibitorem PDE-4 je kyselina cis-4-kyan-4- (3-cyklopentyloxy-4-methoxy-fenyl)cyklohexan-1-karboxylová, AWD-12-281, NCS-613, D-4418, CI-1018, V11294A, roflumilast nebo T-440 a steroid je vybrán ze skupiny sestávající z dexamethasonu, fluticasonu, beclomethasonu, budesonidu, flunisolidu, mometasonfuroatu a triamcinolon-acetonidu.

Předmětem tohoto vynálezu také je farmaceutický prostředek, jehož podstata spočívá v tom, že obsahuje inhibitor PDE-4 a protizánětlivý kortikosteroid, pro léčení plicní choroby a farmaceuticky přijatelný excipient.

• · · · · ·

• · · • frfr · fr··· frfrfr ·

Výhodným provedením tohoto vynálezu je . , farmaceutický prostředek, jehož podstata spočívá v tom, * , • · · · že inhibitorem PDE-4 je kyselina cis-4 — kyan-4-(3- ! ;

• frfrfr

-cyklopentyloxy-4-methoxyfenyl) cyklohexan-1- ;* _t « • · · «

-karboxylová, AWD-12-281, NCS-613, D-4418, CI-1018, V11294A, roflumilast nebo T-440 a steroid je vybrán ze skupiny sestávající z dexamethasonu, fluticasonu, beclomethasonu, budesonidu, flunisolidu, mometasonfuroatu a triamcinolon-acetonidu.

Dále se uvádí podrobější popis tohoto vynálezu v širších souvislostech.

Přítomný vynález umožňuje způsobu léčení plicní choroby u savce, při kterém se podá pacientovi, který to potřebuje, účinné množství specifického inhibitoru PDE-4 a účinné množství steroidního protizánětlivého prostředku, přičemž léčiva se podají společně nebo odděleně a popořadě, v případě, kdy jsou jednotlivá podání blízko sebe v čase či od sebe vzdálené v čase.

Přítomný vynález zahrnuje farmaceutický prostředek pro léčení plicní choroby u savce, který obsahuje účinné množství specifického inhibitoru PDE-4, účinné množství steroidního protizánětlivého přípravku a farmaceuticky přijatelný excipient.

Kombinační terapie uvažovaná v přítomném vynálezu zahrnuje podání specifického inhibitoru PDE-4 se steroidním • · · · • · φ φ r

-4— · • ·· protizánštlivým přípravkem za účelem prevence vypuknutí plicní choroby či za účelem léčení již vzniklého stavu. Sloučeniny mohou být podány společně v jediné dávkové formě. Sloučeniny mohou být též podány v podobě dvou různých formulací, které mohou být stejné či odlišné. Pro ilustraci, obě léčiva mohou být poskytnuta odděleně jako perorální formulace, nebo jedna může být v podobě perorálního prostředku a druhá jako prostředek inhalační, nebo obě mohou být poskytnuty v inhalační dávkové formě. Mohou být podány ve stejný čas. Mohou být také podány buď v krátkém časovém intervalu či v delším časovém intervalu, například jedno léčivo se podá ráno a druhé se podá večer.

Kombinace může být použita profylakticky nebo po nástupu příznaků. Někdy může (mohou) být kombinace použita(y) pro prevenci progrese plicní choroby či za účelem zastavení poklesu funkce, například plicní funkce.

Specifický inhibitor PDE-4 vhodný pro přítomný vynález může být jakákoliv sloučenina, která je známá jako inhibitor PDE-4 izoenzymu, nebo u které bylo zjištěno, že působí jako inhibitor PDE-4, a sloučeniny, které jsou pouze inhibitory PDE-4,' ne sloučeniny, které inhibují další členy rodiny PDE, stejně jako PDE-4. Obecně se preferuje použití antagonisty PDE-4, který má IC50 poměr přibližně 0,1 nebo vyšší, s ohledem na hodnotu IC₅₀ PDE-4 pro katalytickou formu vážící s vysokou afinitou rolipram vyděleno hodnotou IC₅₀pro formu, která váže rolipram s nízkou afinitou.

Inhibitory PDE používané při léčení zánětu a jako bronchodilatátory, léčiva jako theofylin a pentoxyfylin, inhibují PDE izoenzymy bez ohledu ve všech tkáních. Tyto sloučeniny vykazují vedlejší účinky, zjevně proto, že ···· ♦ · · · · ι • · · 1 • · · · · · » · ·· · · neselektivně inhibují všech 5 tříd izoenzymů PDE ve všech tkáních. Příslušný chorobný stav může být účinně léčen těmito sloučeninami, avšak mohou se projevit nežádoucí vedlejší účinky, které by v případě, pokud by mohly být eliminovány či minimalizovány, zvýšily celkový terapeutický efekt tohoto přístupu léčení určitých chorobných stavů. Klinické studie se selektivním inhibitorem PDE-4 rolipramem, který byl vyvinut jako antidepresivum, například indikují že má psychotropní účinek a produkuje gastrointestinální účinky, například pyrózu, nauzeu a zvracení.

Pro účely zde popisovaného vynálezu je katalytické místo c-AMP vážící R- a S-rolipram s nízkou afinitou nazváno vazebným místem s nízkou afinitou (LPDE-4) a druhá forma tohoto katalytického místa vážící rolipram s vysokou afinitou se nazývá vazebné místo s vysokou afinitou (HPDE4). Termín HPDE-4 se nesmí zaměnit s termínem hPDE-4, který se používá k označení humánní formy PDE-4.

Pro uvedení a ověření způsobu stanovení vazby [³H]rolipramu byly provedeny iniciální experimenty. Detaily této práce jsou uvedeny v příkladu 1 níže.

Pro stanovení, zdali jsou jak vazebná afinita s vysokou aktivitou, tak vazebná afinita s nízkou aktivitou, determinovány stejným genovým produktem, byly známými způsoby transformovány kvasinky a exprese rekombinatní PDE-4 byla následována šestihodinovou fermentační periodou.

Analýza technikou Western-blot za použití protilátky namířené proti PDE-4 naznačuje, že množství exprimovaného PDE-4 roste v čase a dosahuje maxima po 3 hodinách růstu. Navíc v supernatantu kvasinkových lyzátů získaném při vysokorychlostním odstřeďování (100 000 x g) je obsaženo

-6• · · · více než 90 % imunoreaktivního produktu. Vazba [³H]R-(-)~ rolipramu a aktivita PDE se monitoruje společně s expresí proteinu. Aktivita PDE-4 se exprimuje společně s vazebnou aktivitou rolipramu, což značí, že obě funkce jsou determinovány stejným genovým produktem. Obdobně s výsledky Western-blot analýzy, bylo ve frakci kvasinkového supernatantu nalezeno, že je přítomno více než 85 % rolipramem-inhibovatelné aktivity PDE a vazebná aktivita [³H] R-rolipramu.

Celkově je většina rekombinantní.PDE-4 exprimované v tomto systému ve formě LPDE-4 a pouze malá frakce se vyskytuje ve formě HPDE-4. Následně inhibice katalytické aktivity rekombinantní PDE-4 primárně reflektuje účinky sloučeniny ve formě LPDE-4. Inhibice katalytické aktivity PDE-4 může být proto použita jako index účinků sloučenin ve formě LPDE-4. Účinky sloučenin ve formě HPDE-4 mohou být stanoveny prostřednictvím jejich schopnosti kompetice o [³H]R-rolipram. Za účelem vývinu SARs pro oba případy, tedy pro vazebná místa rolipramu jak s nízkou, tak s vysokou afinitou, se stanoví schopnosti vybraných sloučenin, a to dvěma systémy stanovení. Výsledky experimentů využívajících standardních sloučenin se vynesou do tabulky. Podle očekávání jsou některé sloučeniny jasně více účinné v kompetici s [³H]R-rolipramem na místě, pro které rolipram vykazuje vysokou vazebnou afinitu, při porovnání s dalším místem, pro nějž rolipram vykazuje vazbu s nízkou afinitou. Korelace SAR mezi vazbou s vysokou afinitou a vazbou s nízkou afinitou je špatná a došlo se k závěru, že SAR pro inhibici vazby [³H]R-rolipramu s vysokou afinitou je odlišná od SAR pro navázání do vazebného místa rolipramu o nízké afinitě.

• 19 · • 9

Τ

9 9 9 9 9 · * 9 · ·*··- ·· 9 19 ’ • 1 ' ί 9 · 119

1 911 19 9 ti 9 9 9 9

Nyní je známo, že existují alespoň dvě vazebné formy humánní monocytární rekombinantní PDE-4 (hPDE-4), se kterými inhibitory interagují. Jedním vysvětlením těchto poznatků je, že hPDE-4 existuje ve dvou odlišných formách. Jedna váže analoga rolipramu a denbufylinu s vyšší afinitou, zatímco další váží tyto sloučeniny s nízkou afinitou. Výhodné inhibitory PDE-4 pro použití podle přítomného vynálezu budou ty sloučeniny, které mají příznivý terapeutický poměr, například ty sloučeniny, které preferenčně inhibují katalytickou aktivitu c-AMP, v případě, kdy enzym je ve formě vážící rolipram s nízkou afinitou, čímž jsou redukovány nežádoucí účinky, které jsou zjevně spojeny s inhibici formy vážící rolipram s vysokou afinitou. Dalším způsobem vyjádření tohoto předpokladu je fakt, že výhodné sloučeniny budou mít IC50 poměr přibližně 0,1 nebo vyšší s ohledem na hodnotu IC50 katalytické formy PDE-4 vážící rolipram s vysokou aktivitou dělené hodnotou IC50 formy vážící rolipram s nízkou afinitou.

Dalším vylepšením tohoto standardu je případ, kdy inhibitor PDE-4 má poměr IC₅₀ přibližně 0,1 či vyšší; přičemž zmíněný poměr je poměr hodnoty IC50 pro kompetici s vazbou 1 nmol [³H]R-rolipramu na formu PDE-4 vážící rolipram s vysokou afinitou proti hodnotě IC50 pro inhibici katalytické aktivity formy PDE-4 vážící rolipram s nízkou afinitou, při použití 1 mikromol [³H]R-rolipramu jako substrátu. Další opakující vysvětlení tohoto testu lze nalézt v související US přihlášce č. 08/456 274 podané dne 31. května 1995, jejíž text je v tomto spisu zahrnut do odkazů v takovém rozsahu, ve kterém je toto nutné pro provedení přítomného vynálezu.

Příklady vhodných inhibitorů PDE-4 jsou:

•8 · • · * · • ·♦ • » (R)-(+)-1-(4-brombenzyl)-4-[(3-cyklopentyloxy)-4-methoxyfenyl]-2-pyrrolidon;

(R)-( + )-1-(4-brombenzyl)-4-[(3-cyklopentyloxy) -4-methoxyfenyl] -2-pyrrolidon;

3-(cyklopentyloxy-4-methoxyfenyl)-1-(4-N'-[N2-kyan-S-methylisothioureido]benzyl)-2-pyrrolidon; kyselina cis-4-kyan~4-(3-cyklopentyloxy)-4-methoxyfenyl)-cyklohexan-l-karboxylová;

cis-[4-kyan-4-(3-cyklopropylmethoxy-4-difluormethoxyfenyl)-1-cyklohexanol];

(R) -(+)-ethyl[4-(3-cyklopentyloxy)-4-methoxyfenyl)-2-pyrrolidinyliden]acetat; a (S) -(-)-ethyl[4-(3-cyklopentyloxy)-4-methoxyfenyl)-2-pyrrolidinyliden]acetat.

Nejvýhodnější jsou ty inhibitory PDE-4, jejichž poměr IC₅o je vyšší než 0,5, a obzvláště ty sloučeniny, které mají poměr vyšší než 1,0. Výhodné sloučeniny jsou kyselina cis-4· -kyan-4-(3-cyklopentyloxy)-4-methoxyfenyl)cyklohexan-1-karboxylová, 2-karbmethoxy-4-kyan-4-(3-cyklopropylmethoxy-4-difluormethoxyfenyl)-1-cyklohexanon a cis-[4-kyan-4-(3-cyklopropylmethoxy-4-difluormethoxyfenyl)-1-cyklohexanol] ; toto jsou příklady sloučenin, které se vážou preferenčně na vazebné místo s nízkou afinitou a jejichž poměr IC₅₀ je 0,1 a vyšší.

Sloučeniny jsou uvedeny v US patentu č. 5 552 438 vydaném 3. září 1996. Zmíněný patent a sloučeniny v něm popsané jsou v tomto spisu zahrnuty do odkazů v celém svém rozsahu. Obzvláště důležitá sloučenina popsaná v US patentu č. 5 552 438 je kyselina cis-4-kyan-4-(3-cyklopentyloxy)-4-methoxyfenyl)cyklohexan-l-karboxylová, její soli, estery, * · • φ· ·

4ο ·9~ · • · · · • · ♦ · ♦ 9 99 9 9 9 ·

9 9 9 · prekurzory léčiva nebo různé fyzikální formy této sloučeniny.

Sloučenina AWD-12-281 od firmy Astra (N. Hofgen a kol., 15. EFMC Int. Symp. Med. Chem., (6. až 10. září 1998, Edinburgh), Abst. P.98); derivát 9-benzyladeninu nazvaný NCS-613 (INSERM); D-4418 od firem Chiroscience a ScheringPlough; benzodiazepinový inhibitor PDE4 identifikovaný jako CI-1018 (PD-168787, Parke-Davis/Warner-Lambert); derivát benzodioxolu, který popsal Kyowa Hakko v dokumentu WO 99/16766; V-11294A od firmy Napp (L. J. Landells a kol., J. Eur. Resp., (Annu. Cong. Eur. Resp. Soc., 19. až 23. září Ženeva) 1998, 12(dodatek 28): Abst. P2393); roflumilast (CAS reference č. 162401-32-3) a ftalazinon (WO 99/47505) od firmy Byk-Gulden; nebo sloučenina identifikovaná jako T-440 (Tanabe Seiyaku; K. Fuji a kol., J. Pharmacol. Exp. Ther., 284(1), 162 (1998)). Jakákoliv či všechny z výše uvedených sloučenin může nebo by mohla být prospěšná při způsobu zde popsaném.

Několik specifických sloučenin vyčtených výše, které nemají generický či obchodní název, může být připraveno postupy popsanými v souvisejících US patentových přihláškách USSN č. 862 083 podané dne 30. října 1992; USSN č. 862 111 podané dne 30. října 1992, USSN č. 862 030 podané dne 30. října 1992 a USSN č. 862 114 podané dne 30. října 1992, nebo v dokumentech od nich odvozených nebo v US patentu/patentech nárokujících prioritu z jedné či více těchto přihlášek.

Každá z těchto přihlášek či souvisejících patentů je zde zahrnuta do odkazů v celém svém rozsahu.

Steroidní přípravky vhodné pro použití v přítomném vynálezu jsou perorální či inhalační cestou podávané » · 4 4 4

4

4·4 44 a kortikosteroidy a jejich prekurzory léčiva, které vykazují protizánětlivou aktivitu. Příklady těchto steroidů jsou methylprednisolon, prednison, dexamethason, fluticason, beclometason, budesonid, flunisolid, mometason-furoat a triamcinolon-acetonid. Methylprednisolon a prednison jsou perorální a injikovatelné formy protizánětlivých kortikosteroídů; jsou k dostání od různých dceřiných a generických farmaceutických společností. Beclomethasondipropionat se prodává ve formě aerosolu pro inhalaci pod názvem Beconase® a BeconaseAQ® od firmy Glaxo Wellcome. Fluticason-propionat se prodává po názvem Flunase®, též od firmy Glaxo Wellcome. Triamcinolon-acetonid prodává firma Rhone-Poulenc Roher pod názvem Nasacort® ve formě nosního spreje a aerosolu. Flunisolid se prodává jako nosní roztok pod názvem Nasalide® a Nasarel™ od firmy Roche Laboratories Dexamethason se prodává ve formě fosfátové soli firmou Medeva Pharmaceuticals, Inc., pod názvem Dexacort™ Phosphate. Monometason-furorat se prodává ve formě monohydratu jako přípravek do nosu od firmy Schering Corp. pod názvem Nasonex®. Budesonid je dalším inhalovatelným kortikosteroidem používaným pro léčení plicních chorob. Je dodáván na trh firmou Astra Pharmaceuticals, L.P. jako prášek do inhalačního zařízení pod názvem Pulmicort Turbohaler®. Všechna tato léčiva a nosní přípravky nebo perorální nebo injikovatelné formulace lze nalézt v publikaci Physicians' Desk Reference® (PDR), vydání 1999, publikované prostřednictvím Medical Economics Corporation, Inc., New Jersey, USA, která je dostupná na internetové adrese http:Z/www.tomescps.com/fraMain.asp?Mnu=O a na stránkách souvisejících. Další kortikosteroidy, nyní ve vývoji, které by bylo možné použít v přítomném vynálezu jsou vyčteny v tabulce I.

1JU

4Ψ ·

Tabulka I

Inhalovatelné kortikosteroidy

Léčivo	Společnost	Indikace
mometason-furoat	Schering-Plough	astma SAR
rofleponid	AstraZeneca	astma
ciclesonid	Byk- Gulden/Recordat i	astma
butixocort- -propionat	Warner-Lambert/3M	astma/rhinitida
RPR-106541	Rhone-Poulenc Rorer	astma
ST-126	SSP/Torii	astma

Výhodná kombinační terapie je ta, kdy se kombinuje jeden či více z následujících látek: dexamethason, fluticason, beclomethason, budesonid, flunisolid, mometasonfuroat a triamcinolon-acetonid s kyselinou cis-4-kyan-4-(3-cyklopentyloxy)-4-methoxyfenyl)cyklohexan-l-karboxylovou, k dostání pod názvem cilomalast (Ariflo®) . Výhodnou terapií je následné podání steroidu v inhalační dávkové formě a kyseliny ve perorální dávkové formě, přičemž každé z léčiv se podá jednou či dvakrát za den. Co se kyseliny týká, výhodná je perorální forma tablety s kontrolovaným uvolňováním.

Očekává se, že oba účinné přípravky budou podány ve stejný okamžik, či ve velmi krátkém časovém odstupu. Alternativně může být jedno z léčiv podáno ráno a druhé později během dne. Další možností je podání jednoho z léčiv dvakrát za den a druhého léčiva pouze jednou za den, a to buď ve stejnou dobu, s jednou částí léčiva podávaného dvakrát za den, nebo odděleně. S výhodou se obě léčiva podají společně ve stejnou .dobu.

Přítomné sloučeniny a farmaceuticky přijatelné soli, které jsou účinné při podání perorálním cestou, mohou být formulovány jako sirupy, tablety, kapsle, prostředky s řízeným uvolňováním nebo jako pastilky. Formulace ve formě sirupu bude obecně sestávat ze suspenze nebo roztoku sloučeniny nebo soli v kapalném nosiči, například ethanolu, arašídovém oleji, olivovém oleji, glycerinu nebo vodě s ochucovadlem či barvidlem. V případě, kdy je prostředek ve formě tablety, může být použit jakýkoliv farmaceutický nosič běžně používaný pro přípravu pevných formulací. Příklady těchto nosičů zahrnují stearat hořečnatý, bílou hlinku, mastek, želatinu, arabskou gumu, kyselinu stearovou, škrob, laktózu nebo sacharózu. V případě, kdy je prostředek ve formě kapsle, je vhodný jakýkoliv rutinní způsob enkapsulace, například použití výše uvedených nosičů v obalu z tvrdé želatinové kapsle. V případě, kdy je prostředek ve formě měkké želatinové kapsle, lze použít jakýkoliv farmaceutický nosič běžně používaný pro přípravu disperzí nebo suspenzí, například vodné gumy, celulózy, silikáty nebo oleje, a směs se naplní do obalu z měkké želatinové kapsle.

Typické parenterální prostředky sestávají z roztoku či suspenze sloučeniny nebo soli ve sterilním vodném či nevodném nosiči, který popřípadě obsahuje parenterálně přijatelný olej, například polyethylenglykol, polyvinylpyrrolidon, lecitin, arašídový olej nebo sezamový olej.

Typické prostředky pro inhalaci jsou ve formě roztoku, ftft ····

ftft · ftftft • ftft ftftft ftft ft suspenze nebo emulze, které lze podat jako suchý prášek nebo ve formě aerosolu s použitím běžného vyháněcího plynu, jako jsou fluorované uhlovodíky, jako například trichlorfluormethan.

Prostředek obsahující inhibitory PDE-4 bude s výhodou ve formě jednotkové dávky, například tablety či kapsle.

V případě steroidů je výhodná forma odměřené aerosolové dávky, inhalátor suchého prášku s odměřením dávky nebo nosní sprej.

Účinná složka může být podána jednou až šestkrát za den, v množství dostatečném pro vykázání požadované aktivity. Účinná složka se s výhodou podává asi jednou nebo dvakrát za den, výhodněji dvakrát za den.

Sloučeniny podle přítomného vynálezu jsou vhodné pro léčení astmatu indukovaného tělesnou námahou (EIA excercise-induced asthma), astmatu indukovaného prostředí znečišťujícími látkami (PIA - pollution-induced asthma) nebo astmatu indukovaného chladem (CIA - cold-induced asthma), a to jak v případě chronického, tak intermitentně relabujícího stavu, s ohledem na vyvolávající stimul. Sloučeniny podle přítomného vynálezu se s výhodou použijí pro dlouhodobou terapii.

Co se množství podaného léčiva týká, předpokládá se, že v případě inhibitoru PDE-4 se podává množství přibližně 1 až 200 mikrogramů za den dospělému jedinci. Steroidy mohou být podány v souladu s osvědčeným dávkováním.

Příklady provedení vynálezu

4*Γ & .:

Μ «4··

4 4 4 4

44 » 4 4 ·

4· · ♦ · *

4· ··»»

Příklad 1

Vazebná stanovení pro fosfodiesterázu a rolipram

Příklad IA

Izolovaná lidská monocytární PDE-4 a hrPDE (humánní rekombinantní PDE-4) se připraví tak, aby se vyskytovaly primárně ve formě s nízkou afinitou. Proto aktivitu testovaných sloučenin oproti formě PDE-4 s nízkou afinitou lze stanovit s použitím standardních způsobů pro určování katalytické aktivity PDE-4 využívajících 1 pmol [³H]cAMP jako substrátu (Torphy a kol., J. of Biol. Chem., 267 (3), 1798 až 1804 (1992) ) .

Jako zdroj proteinu a obou enantiomerů [³H]-rolipramu se připraví supernatanty z krysích mozků připravené odstředěním při vysoké frekvenci otáčení, přičemž tyto supernatanty se připraví tak, aby měly specifickou aktivitu 94,72.10⁴Bq/mmol. Standardní podmínky stanovení se modifikují, a od publikovaného postupu se liší tak, že jsou shodné s podmínkami pro stanovení PDE, s rozdílem podmínky týkající se cAMP: 50 mmol Tris HCI o pH = 7,5, 5 mmol MgCl₂, 50 pmol 5-AMP a 1 nmol [³H]-rolipramu (Torphy a kol., J. of Biol. Chem., 267, (3), 1798 až 1804 (1992)). Stanovení se provádí při teplotě 30 °C po dobu 1 hodiny. Reakce se ukončí a navázaný ligand se oddělí od volného ligandů použitím Brandelova buněčného separátoru. Kompetice o vazebné místo s vysokou aktivitou se stanoví za podmínek identických s podmínkami pro měření aktivity PDE s nízkou afinitou, s tím rozdílem, že [³H]-cAMP není přítomen.

Ť5• ti ti··· * ♦ ti tititi · · ti ti· ti »· · · · ti

Příklad 1B

Měření aktivity fosfodiesterázy

Aktivita PDE se stanoví za použití enzymatického stanovení [³H]-cAMP SPA nebo [³H]-cGMP SPA, jak je popsáno dodavatelem (Amersham Life Sciences). Reakce se provedou na plotnách o 96 jamkách při teplotě místnosti, v 0,1 ml reakčního pufru obsahujícího (ve finálních koncentracích):

mmol Tris-HCl o pH = 7,5, 8,3 mmol MgCl2, 1,7 mmol EDTA, [³H]-cAMP nebo [³H]-cGMP (přibližně 2000 rozpadů za minutu na pmol), enzym a různé koncentrace inhibitorů. Stanovení se nechá běžet po dobu 1 hodiny a ukončí se přidáním 50 μΐ SPAyttrium silikátových kuliček za přítomnosti síranu zinečnatého. Plotny se protřepávají a nechají se stát při teplotě místnosti po dobu 20 minut. Tvorba radioaktivně značeného produktu se vyhodnotí scintilační spektrometrií.

Vazebné stanovení pro [³H]R-rolipram

Vazebné stanovení [³H]R-rolipramu se provede modifikovanou metodou podle Schneidera a jeho spolupracovníků, viz Nicholson a kol., Trends Pharmacol. Sci., 12, 19 až 27 (1991) a McHale a kol., Mol. Pharmacol., 39, 109 až 113 (1991). R-Rolipram se váže na katalytické místo na PDE-4, viz Torphy a kol., Mol. Pharmacol., 39, 37 6 až 384 (1991) . Následně kompetice o navázání [³H]R-rolipramu poskytuje nezávislou konfirmaci potencí PDE-4 inhibitoru oproti neoznačeným kompetitorům. Stanovení se provádí při teplotě 30 °C po dobu 1 hodiny v 0,5 μΐ pufru obsahujícího (ve finální koncentraci): 50 mmol Tris-HCl o pH = 7,5, 5 mmol MgCl2, 0,05% hovězí sérový albumin, 2 nmol [³H]R• 9 ♦·*·

ΊΤ

9999

9* 9

ΓΤ7 « _A #9 «999 • 9 999 9· *

-rolipramu (5,7 χ ΙΟ⁴ rozpadů za minutu na/pmol) a různé koncentrace radioaktivně neoznačených inhibitorů. Reakce se přeruší přidáním 2,5 ml ledově chladného reakčního pufru (bez [³H]R-rolipramu) a rychlou filtrací ve vakuu (Brandel Cell Harvester) přes Whatman GF/B filtry, které jsou napuštěny 0,3% polyethyleniminem. Filtry se promyjí dalšími 7,5 ml studeného pufru, vysuší se a vyhodnotí kapalinovou scintilační spektrometrií.

Příklad 2

Cilomalast v kombinaci s nízkou dávkou inhalačního kortikosteroidu (ICS) - dávkovači studie

Plán studie:

• Jedná se o fázi IIB, což je randomizovaná, placebemkontrolovaná dávkovači studie s jediným placebo během v průběhu 1 týdne, šestitýdenní dvojitě-slepou terapeutickou fází a jednotýdenní kontrolní .fází prováděná u pacientů s mírným až středně závažným astmatem.

• Populační studie: vyberou se pacienti mužského nebo ženského pohlaví ve věku mezi 18 a 70 lety trpící mírným až středně závažným astmatem, jejichž choroba není adekvátně kontrolována nízkými dávkami inhalačních kortikosteroidů (ne více než 500 pmg dipropionatu beclomethasonu za den či této dávce ekvivalentní). Vyžaduje se, aby pacienti měli screeningové hodnoty FEVi >50 % a <80 % predikované hodnoty s ohledem na výšku, věk, pohlaví a rasu a vykazují 12% či vyšší reversibilitu po podání p₂-agonisty. Aby mohla být provedena randomizace, musí mít pacienti celkové skóre symptomů ohodnocené 6 či více body v průběhu 4 ze 7 dnů před výchozí návštěvou. Velikost vzorku je 300 vhodných pacientů.

vp ·· • •φφ φ » φ φ>

··♦· φ

• φφ • Cilomalast se podává v dávkách 5 mg, 10 mg, 15 mg dvakrát za den po dobu 6 týdnů.

• Subjektům se podává střední dávka ekvivalentní 500 pg beclomethasonu, i když střední dávka ICS je 652 pg.

• Primární cílový bod: změna od základní linie do cílového bodu sledovaná prostřednictvím klinického end-expiračního objemu za 1 sekundu (FEVi) , změny v klinické hodnotě FEVi každý týden a v průběhu 4-hodinové periody následující po první dávce medikace dvojitě slepé studie.

• Sekundární cílové body: použití záchranných léčiv a noční pří znaky.

• Terciární cílové body: klinická hodnota forsírované vitální kapacity (FVC), klinická hodnota pík-expirační průtokové rychlosti (PEFR), forsírovaný expirační průtok při 25 až 75 % (FEF25-75) a 75 % (FEF75), trvalá variabilita PEFR, trvalá hodnota PEFR, souhrnná skóre symptomů.

Kritéria hodnocení

Měření primární účinnosti se definuje jako změna klinického end-expiračního objemu za 1 sekundu (FEVi) od výchozí hodnoty do cílového bodu. Změny v klinické hodnotě FEVi se též analyzují každý týden v průběhu dvojitě slepé terapeutické fáze a v průběhu 4 hodinové periody bezprostředně po podání prvé dávky medikace dvojitě slepé studie. Proměnné sekundární účinnosti se stanoví při použití inhalačního/nebulizovaného $2 agonisty, při nočních symptomech astmatu. Proměnné terciární účinnosti jsou determinovány forsírovanou vitální kapacitou (FVC), • ·· ft ·

«.

w- ·;

• ·· ft · • · · ft klinickou pík-expirační průtočnou rychlostí (PEFR), forsírovaným expiračním průtokem při 25 až 75 % (FEF25-75) a 75 % (FEF75), setrvalou variabilitou PEFR, stálou hodnotou

PEFR (ráno, večer), souhrnnými skóre symptomů (celková skóre v průběhu noci, ráno a v průběhu dne), ranním astmatem, astmatem v průběhu celého dne, použitím inhalačních kortiksteroidů, kašlem, pískoty, dušností/pocity svírání na hrudi, frekvencí exacerbací astmatu a celkovým ohodnocením lékařem a pacientem.

Výsledky studie • Není dokumentováno žádné statisticky významné zlepšení hodnot FEVi a konečné ITT analýzy po podávání 15 mg cilomalastu BID oproti placebu (0,16 L; p = 0,062).

• Odpověď vyjádřená hodnotami FEVi při konečné ITT analýze je závislá na dávce.

• K signifikantnímu zlepšení, co se týká hodnot FEVi (0,21 L; p - 0,033), došlo u pacientů při podávání cilomalastu v dávce 15 mg BID, pokud byli ze studie eliminováni pacienti pobírající dávky inhalačního kortikosteroidu větší než 500 pg beclomethasonu.

• Společně působící podpora cilomalastu v dávce 15 mg BID zahrnuje 4-hodinové FEVi, setrvalé hodnoty PEFR, FEF25-75 a celková hodnotící skóre od pacienta i lékaře.

Příklad 3

Cilomalast v kombinaci s vysokou dávkou inhalačního kortikosteroidu (ICS) - studie ·· * ·· fr

Lo ·· • ·· • · fr frfrfr· • · · · « · • frfrfr fr · · • fr · fr· fr* · ·

Plán studie:

• R, DB, PC, DR u pacientů s mírným až středně závažným astmatem, jimž byl nasazen beclomethason v dávce >800 μ5· • Dávky Cilomalastu jsou 5, 10 a 15 mg dvakrát za den po dobu 4 týdnů.

• 2-týdenní záběh (2 week run-in).

• primární cílový bod: je reprezentován klinickou hodnotou FEVi.

• sekundární cílové body: ranní hodnota PEER, symptomy, variabilita PEFR, večerní PEFR, klinická hodnota PEFR,

FEF25-75 a FEF75, použití neodkladné medikace.

Výsledky studie:

• V žádné dávkovači skupině nebyla zaznamenána ani jedna statisticky signifikantní změna v klinické hodnotě FEVi v průběhu ITT analýzy.

• Pro primární cílový bod nebyla zaznamenána potřeba žádného systému dávkování (dose ordering).

• Celková hodnota FEV_X se statisticky zlepšila při podávání 10 mg cilomalastu BID, jak bylo prokázáno za použití φφφ φ opakovaných analytických měření u pacientů na dávce <800 pg

ICS - inhalačního kortikosteroidu (0,16 L; p = 0,009).

·· · * • φ · · • · φ • Dávka inhalačního kortikosteroidu (beclomethason)se pohybuje v rozmezí 100 až 4000 pg a průměrná dávka je 1136 pg.

• Podpora názoru, že dávka cilomalastu 10 mg BID je dávkou účinnou, vychází též z numericky vynikajících výsledků hodnot 4-hodinového klinického FEVi, klinické hodnoty FVC a PEFR.

• Nelze stanovit vztah dávky a odpovědi, protože koncentrace byly proporcionální dávce a obdobné jako v předcházejících studiích.

»··· *· ··»·

»0 00 0 0 0 0 • 0 0

0*0 ·* »»*♦

Tabulka 1

Porovnání sloučenin z vybraných studií

Studie alergenní stimulace

Komparativní údaje: Studie alergenní stimulace

	Ariflo 15 mg bd	Singu- lair	Ultair	ICS 800 μg budesonidu	B2
% max pokles LAR (efekt léčby)	1/3	12,3	10,7	22,9	+ 6, 9
% o— chrany, max. pokles LAR	žádný	36,4	30,8	32	Žádný pokles
% AUC z LAR (efekt léčby)	3,5	63,5	42,4	neprovedeno
% obehraný,	žádná	56, 9	42,6	neprovedeno
AUC z LAR

22,

Legenda: údaje týkající se cilomalastu se získají z protokolové analýzy provedené u astmatických pacientů na dávce cilomalastu <652 μg ICS (inhalačního kortikosteroidu). Údaje týkající se montelukastu (MT), budesonidu (BDP) a obou se získají z jediné studie v Singulair SBA, která zkoumá účinek přípravku Singulair v porovnání s inhalačními kortikosteroidy.

Mezi chováním skupin označených placebo (Pbo) v obou studiích existují signifikantní rozdíly. Závěrem je, že cilomalast má lepší účinky než Singulair, pokud je přidán k nízké dávce inhalačního kortikosteroidu, navzdory faktu, že ke zlepšení došlo též v placebo (Pbo) skupině v průběhu studie s cilomalastem.

Předchozí údaje a příklady mají ilustrovat přítomný vynález, ne jej omezovat. Je učiněn odkaz na následující patentové nároky, které jsou vyhrazeny původcům přítomného vynálezu.

Claims

1. Použití inhibitoru PDE-4 a protizánětlivého kortikosteroidu pro výrobu léčiva pro léčení plicní choroby.

2. Použití podle nároku 1, kde inhibitorem PDE-4 je kyselina cis-4-kyan-4-(3-cyklopentyloxy-4-methoxyfenyl) cyklohexan-l-karboxylová, AWD-12-281, NCS-613, D4418, CI-1018, V-11294A, roflumilast nebo T-440 a steroid je vybrán ze skupiny sestávající z dexamethasonu, fluticasonu, beclomethasonu, budesonidu, flunisolidu, mometason-furoatu a triamcinolon-acetonidu.

3. Farmaceutický prostředek, vyznačuj ící se t í m, že obsahuje inhibitor PDE-4 a protizánětlivý kortikosteroid, pro léčení plicní choroby a farmaceuticky přijatelný excipient.

4. Prostředek podle nároku 3, vyznačuj í c í se t í m, že inhibitorem PDE-4 je kyselina cis-4-kyan-4-(3-cyklopentyloxy-4-methoxyfenyl)cyklohexan-1-karboxylová, AWD-12-281, NCS-613, D-4418, CI-1018, V11294A, roflumilast nebo T-440 a steroid je vybrán ze skupiny sestávající z dexamethasonu, fluticasonu, beclomethasonu, budesonidu, flunisolidu, mometasonfuroatu a triamcinolon-acetonidu.