CZ20021903A3 - Substituované deriváty oxazolu a thiazolu jakoľto HPPAR-alfa aktivátory - Google Patents

Description

Oblast techniky

Předložený vynález se týká jistých nových sloučenin. Obzvláště se předložený vynález týká sloučenin, které aktivují alfa podtyp lidského peroxisómovým proliferátorem aktivovaného receptoru („hPPAR alfa). Předložený vynález se také týká způsobů přípravy těchto sloučenin a způsobů prevence nebo léčení chorob nebo stavů zprostředkovaných PPAR alfa.

Dosavadni stav teohníky

S kardiovaskulární chorobou se spojuje několik nezávislých rizikových faktorů. Ty zahrnují hypertenzi, zvýšené hladiny fibrinogenu, vysoké hladiny triglyceridů, zvýšený LDL cholesterol, zvýšený celkový cholesterol a nízké hladiny HDL cholesterolu. Inhibitory hydroxymethylglutarylkoenzym A reduktázy („statiny) jsou užitečné pří léčení stavů charakterizovaných vysokými hladinami LDL cholesterolu. Bylo ukázáno, že snižováni LDL cholesterolu není dostačující pro snížení rizika kardiovaskulární choroby u některých pacientů, obzvláště u pacientů s normálními hladinami LDL cholestezrolu. Tento populační soubor se identifikuje nezávislým rizikovým faktorem nízkého HDL cholesterolu. Zvýšené riziko kardiovaskulární choroby spojené s nízkými hladinami HDL cholesterolu dosud nebylo uspokojivě ovlivněno lékovou terapií (tj. v současnosti neexistují na trhu žádná léčiva, která by byla užitečná při zvyšování HDL cholestrolu o více než 4 0 ) ·· · · ·♦ ·· ·· ···· · · · · * · · · · · ♦ · · · » • · ······ ···· ··· ··· ·· ·· ····

%). (Bisgaíer, C. L., Pape, Μ. E., Curr. Pharm. Dos., 4, 53 až 70 (1998)).

Syndrom X (včetně metabolického syndromu) je volně definován jako souhrn abnormalit zahrnujících hyperinzulinémii, obezitu, zvýšené hladiny triglyceridů, kyseliny močové, fibrinogenu, malých hustých LDL částic cholesterolu a inhibitoru aktivátoru plasminogenu 1 (PAI-1) a snížené hladiny HDL cholesterolu.

NIDDM je popisován jako inzulínová resistence, která naopak způsobuje anomální výdej glukózy a snížení příjmu glukózy kosterními svaly. Tyto faktory eventuálně vedou ke zhoršené glukózové toleranci (1GT) a hyperinzulinémii.

Peroxisomovým proliťerátorem aktivované receptory (PPAR) jsou sirotčí receptory patřící do skupiny nadrodiny steroidního/retinoidního receptoru ligandem aktivovaných transkripčních faktorů. Viz například Wilson, T. M. a Wahli, W., Curr. Opin Chem. Biol., 1, 235 až 241 (1997) .

Byly isolovány 3 savčí peroxisomovým proliferátorem aktivované receptory a označeny PPAR-alfa, PPAR-gamma a PPAR--delta (rovněž znám jako NUC1 nebo PPARbeta). Tyto PPAR regulují expresi cílových genů vazbou na prvky sekvence DNA, označované jako prvky odpovědi PPAR (PPRE). Dosud byly PPRE identifikovány v promotorech četných genů kódujících proteiny, které regulují lipidový metabolismus, což naznačuje, že PPAR hrají vůdčí roli v dípogenní signální kaskádě a v lipidové homeostázi (Keller, H. a Wahii W., Trende Endoodn. Met., 4, 291 až 296 (1993)).

U jistých sloučenin, které aktivuji nebo jinak interagují s jedním nebo více PPAR se zjistilo, že se účastní regulace hladin triglyceridů a cholesterolu na zvířecích modelech. Viz například US patenty č. 5 847 008 (Doebber a kol.) a 5 859 051 (Adams a kol.) a PCT publikace WO 97/28149 (Leibowitz a kol.) a WO 99/04815 (Shimokawa a kol.) .

Fibráty jsou třída léčiv, která mohou snížit sérové triglyceridy o 20 až 50 %, snížit. LDL cholesterol o 10 až 15 %, posunout velikost částic LDL z více aterogenních s malou hustotou na normálně husté částice LDL-c a zvýšit HDL cholesterol o 10 až 15 %. Experimentální důkazy naznačují, že účinky fibrátů na sérové lipidy jsou zprostředkovány aktivací PPAR-alfa. Viz například B. Staels a kol., Curr. Pharm. Des., 3_(JLL· (1997). Aktivace

PPAR-alfa vede k transkripci enzymů, které zvyšují katabolismus mastných kyselin a snižují de novo syntézu mastných kyselin v játrech, což vede ke snížené syntéze triglyceridů a snížené tvorbě/se.kreci VLDL cholesterolu. Kromě toho aktivace PPAR-alfa snižuje tvorbu apoC-III. Redukce apoC-III, což je inhibitor aktivity LPL,·zvyšuje clearance VLDL cholesterolu. Viz například Auwerx, J. a kol., Atherosclerosis, (Shannon, Irel.), 124 (suppl.), 29 až 37 (1996). Ligandy PPAR-alfa mohou být užitečné při léčení dyslipidémie a kardiovaskulárních poruch, viz Fruchart, J. C., Duriez, P. a Staels, B., Curr. Opin. Lipidol., 10, 245 až 257 (1999).

Podstata vynálezu • · ·!·· ··· ··· ·· ·· ··

Podle prvního aspektu tohoto vynálezu je poskytnuta sloučenina obecného vzorce (I) a její. farmaceuticky přijatelné soli, solváty a hydrolyzovatelné estery

Xi představuje atom kyslíku nebo síry;

R¹ a R² nezávisle představují atom vodíku, atom halogenu, skupinu -CH₃ a skupinu -OCH.₃;

n představuje 1 nebo 2··

X₂ představuje skupinu NH, skupinu NCH₃ nebo atom kyslíku;

jeden z Y a Z je atom dusíku a druhý je atom kyslíku nebo síry;

R³ představuje fenyl nebo pyrídyl (kde atom dusíku je v poloze 2 nebo 3) a je případně substituován jedním nebo více atomy halogenu, skupinami-N0₂, NH₂, CF_3z OCF₃, O-alkylová skupina s 1 až 6 atomy uhlíku s přímým nebo rozvětveným řetězcem, alkylová skupina s 1 až 6 atomy uhlíku s přímým nebo rozvětveným řetězcem, alkenylová s 1 až 6 atomy uhlíku skupina s přímým nebo rozvětveným ^J . ····:.

,ϊ.. .ϊ· .·· ·· ....·· řetězcem nebo alkynylová skupina s 1. až 6 atomy uhlíku s přímým nebo rozvětveným řetězcem, za předpokladu, že když Rs je pyridýl, pak atom dusíku je nesubstituován; a.

R⁴ představuje skupinu CF? nebo CH3.

V dalším aspektu předložený vynález popisuje způsob prevence nebo léčeni choroby nebo stavu zprostředkovaného lidským PPAR-alfa („hPPAR.....alfa) zahrnující podávání terapeuticky účinného množství sloučeniny podle tohoto vynálezu. Choroby nebo stavy zprostředkované hPPAR-alfa zahrnují dyslipidémii včetně související diabetické dyslipidémie a smíšené dyslipidémii, syndrom X (jak je definován v této patentové přihlášce zahrnuje metabolický syndrom), srdeční selhání, hypercholestolémií, kardiovaskulární chorobu včetně aterosklerózý, arteriosklerózu, hypertriglyceridémii, diabetes mellitus typu II, diabetes typu I, insulinovou resistenci, hyperlipidémii, regulaci chuti k jídlu a příjmu potravy u subjektů trpících poruchami jako je obezita, anorexie bulimia a anorexia nervosa. Další choroby nebo stavy zahrnují zánět. Obzvláště jsou sloučeniny podle tohoto vynálezu užitečné při léčení a prevenci kardiovaskulárních chorob a stavů včetně aterosklerózý, arteriosklerózy, hypertríglyceridémie a smíšené dyslipidémie.

V dalším aspektu předložený vynález poskytuje farmaceutické prostředky obsahující sloučeninu podle tohoto vynálezu, výhodně ve spojení s farmaceuticky přijatelným, ředidlem nebo nosičem.

V dalším aspektu předložený vynález poskytuje • · · · · · · · ···· ··· ♦♦· ·· ·♦ ···· sloučeninu podle tohoto vynálezu pro použití při léčení a obzvláště v humánním lékařství.

V dalším aspektu předložený vynález poskytuje sloučeninu podle tohoto vynálezu pro výrobu léčiva k léčení choroby nebo stavu zprostředkovaného hPPAR-alfa.

V dalším aspektu předložený vynález poskytuje způsob léčení pacienta trpícího chorobou nebo stavem zprostředkovaným hPPAR-alfa zahrnující podávání terapeuticky účinného množství sloučeniny podle tohoto vynálezu.

Jak je zde používán, pojem „sloučenina podle tohoto vynálezu znamená sloučeninu obecného vzorce (I) a její farmaceuticky přijatelnou sůl, solvát nebo hydrolyzovatelný ester.

Jakkoli jsou hydrolyzovatelné estery zahrnuty do rozsahu tohoto vynálezu, jsou kyseliny výhodné, protože údaje naznačují, že zatímco estery jsou užitečnými sloučeninami, mohou to být ve skutečnosti kyseliny, na něž se hydrolyzují, které jsou aktivními sloučeninami. Estery, které snadno.hydrolyzuji mohou v podmínkách stanovení in vivo vytvářet karboxylové kyseliny. Obecně je karboxylová kyselina aktivní jak ve vazebných, tak v přechodových transfekčních studiích, zatímco ester se obvykle dobře neváže, ale je aktivní v přechodové vazebné studii, pravděpodobně v důsledku hydrolýzy. Výhodnými hydrolyzovatelnými estery jsou alkylestery s 1 až 6 atomy uhlíku v alkylesterové části, kde alkylová skupina v esterové části může být s přímým řetězcem nebo s rozvětveným řetězcem. Výhodnější jsou methyl- nebo ethylestery.

• ·· ·· ·· ·· · · · · · • · · · · · . -- ······· • · ······ «··· ··· ··· ·· ·· ····

Výhodně X, představuje atom kyslíku.

Výhodně jeden z R¹ a R² představuje atom vodíku, přičemž výhodnější je, když R¹ a R² oba představují atom vodíku.

Výhodně n představuje 1.

Výhodně X₂ představuje skupinu NH.

Výhodně Z představuje atom dusíku.

Výhodně Y představuje atom síry.

Výhodně je R³ fenyl, případně substituovaný. Výhodně R³ je.mono- nebo disubstituován. Výhodně když R³ je pyridyl, pak atom dusíku je v poloze 2. R³ je výhodě monosubstituován v para poloze a je jím výhodněji fenyl. Výhodným susbtituentem je skupina CF₃.

Výhodně R⁴ představuje skupinu CH₃.

Zatímco výhodné skupiny pro každou proměnnou byly obecně uvedeny výše zvlášť pro každou proměnnou, výhodné sloučeniny podle tohoto vynálezu zahrnují sloučeniny, ve kterých několik nebo každá proměnná obecného vzorce (I) je zvolena z výhodných, výhodnějších nebo nejvýhodnějších skupin pro každou proměnnou. Tento vynález je tudíž zamýšlen tak, že zahrnuje všechny kombinace výhodných, výhodnějších a nejvýhodnějších skupin.

Výhodněji jsou sloučeniny obecného vzorce (I)

• 4

* 4 * · 4

4 4 4

4 4 „agonista nebo „aktivující sloučenina nebo „aktivátor nebo podobně se mini ty sloučeniny, které mají pKi pro relevantní PPAR alespoň 6,0, například pro hPPAR-alfa, při vazebných studiích popsaných dále, a které dosahují alespoň 50% aktivace relavantního PPAR ve vztahu k. příslušně označené pozitivní kontrole v transfekčni studii popsané dále v koncetracích ΙΟ'⁵ M nebo nižších. Výhodněji sloučeniny podle tohoto vynálezu dosahují 50% aktivace lidského PPAR-alfa v transfekčním stanovení při koncentracích 10‘⁷ M nebo nižších.

Nejvýhodněji, jsou sloučeniny obecného vzorce (I) selektivními agonisty hPPAR-alfa. Jak je zde používán, „selektivním agonistou hPPAR-alfa je selektivní agonista hPPAR-alfa, jehož EC₅₀ pro PPAR-alfa je alespoň 10-násobně nižší než jeho EC50 pro PPAR-gamma a PPAR-delta. Takovéto selektivní sloučeniny mohou být označeny jako „10-násobně selektivní. EC50 je definována v transfekčním stanovení popsaném dále a je to koncentrace, při které sloučenina dosáhne 50 % své maximální aktivity. Nej výhodněj š.í sloučeniny jsou více než 100-násobně účinnějšími selektivními agonisty hPPAR-alfa.

Výhodné sloučeniny podle tohoto vynálezu zahrnuj i:

ethylester 2-met.hyl~2- [4- ({ (4-methyl~2~ (4-trifluormethyl— fenyl)thiazol-S~y.1 karbony1]amino}ethyl)fenoxy]propionové kyseliny, «9 9 « · 99

9

9 9

9* • 9 • 9 ethylester N-methyl-2~methyl~2-[4-({ [4-me£hy*f-2- H-’* trifluormethylfenyl)thiazol-5-ylkarbonyl]amino}ethyl)fenoxy]propionové kyseliny, «9 99 • · » 19 · «99 « 9 9 •« 9999

4-(1-terc-butyloxykarbonyl-1-methylethoxy)benzylester 4-methyl-2-(4-trifluormethylfenyl)thiazol-5-karboxylové kyseliny, ethylester 2-methyl.-2- [4- ({ [4~methyl~2~ (4-terc-butylfenyl) thiazol-5-ylkarbonyl]aminojmethyl)fenoxy]propionové kyseliny, ethylester 2-methyl~2-[4-({[4-methyl~2-(4-isopropylfenyl)thiazol-5-ylkarbonyl]amino}methyl)fenoxy]propionové kyseliny, ethylester 2~methyl-2~[4-({[4-methyl-2-(4-nitrofenyl)thiazol-5-ylkarbonyl]amino]methyl)fenoxy]propionové kyseliny, ethylester 2-methyl-2-[4-({[4-methyl-2-(4-aminofenyl)thíazol-5-ylkarbony1]amino}methyl)fenoxy]propionové kyseliny, ethylester 2-methyl-2-[4- ({ [4~methyl--2~ (4-aminofenyl) thiazol-5-ylkarbonyl]amino}methyl)fenoxy]propionové kyseliny, ethylester 2-methyl-2- [4- ({ [4-methyl-2- (3,4-dichlo.rfenyl) thiazol-5-ylkarbonyl]aminoImethyl)fenoxy]propionové kyseliny, ethylester 2-methyl-2~[4-({[4-methyl-2~(3-fluor-4-trifluorrnethylfenyl) thiazbl-5-ylkarfoonyl] amino}methyl) fenoxyj propionové kyseliny, ethylester 2-methyl-2-[4-({[4~methyl-2-(4-bromfenyl)thiazol-5-ylkarbony!]amino}methyl)fenoxyj propionové kyseliny, ethylester 2-methyl-2-[4 - ({[4~methyl-2-(4-ethylfenyl)thiazol-5-ylkarbonyl]amino)methyl)fenoxyj propionové kyseliny, ethylester 2-methyl-2-(4-{[(4~methyl-2~fenylthiazol-5-ylkarbonyJ-) aminoj methyl} fenoxy) propionové kyseliny, ethylester 2~methyl~2-[4-({[4-methyl-2-(4-fiuorfenyl)thiazol-5-ylkarbonylj amino}methyl)fenoxyj propionové kyseliny, ethylester 2-methyl-2- [4- ({ [4--methyl-2~ (4-chlorfenyl) thiazol-5-ylkarbony!]amino}methyl)fenoxyj propionové kyseliny ethylester 2-methyl-2~ [4- ({ [4--methyl-2- (4-triřluormethoxyfenyl)thiazol-5-ylkarbonylj amino}methyl)fenoxyjpropionové kyseliny, ethylester 2-methyl-2-[4-({[4-methyl-2~(4-methoxyfenyl)thiazol-5-ylkarbonyl]amino}methyl)fenoxyj propionové kyseliny

ethylester 2-methyl-2- [4- ({ [4-methyl--2~ (4-aceVylenýlř*enyl*)‘thiazol-5-ylkarbonyl]amino}methyl)fenoxy]propionové kyseliny, ethylester 2-methyl-2-(4-({[4-trifluormethyl-2-(4-trifluormethylfenyl)thiazol-5-ylkarbonyl]aminojmethyl)fenoxy]propionové kyseliny, ethylester 2-methyl~2-[4-({[4-trifluormethyl-2-(4-terc-butylfenyl) thiazol-5-ylkarbonyl]amino}methyl)fenoxy]propionové kyseliny,

2-methyl-2-[4-({[4-trifluormethyl-2-[4-terc-butylfenyl)thiazol-5-ylkarbonyl]amino}methyl)fenoxy]propionovou kyselinu, ethylester 2-methyl~2~[4-({[4~methyl~2~(4-trifluormethylfenyl)oxazol-5~ylkarbonyl]amino[methyl)fenoxy]propionové kyseliny, ethylester 2-methyl-2-[4-({[4-methyl-2~(4-tritlurmethyl-2-pyridyl)thiazol-5-ylkarbonyllamino[methyl)fenoxy]propionové kyseliny, ethylester 2-methyl-2-[2-methoxy-4-({[4-methyl-2-(4trifluormethylfenyl)thiazol-5-ylkarbonyl]amino[methyl)fenoxy]propionové kyseliny, ethylester 2-methyl-2- [2-methyl-4- ({' [4-methyl-2~ (4-trifluormethylfenyl)thiazol-5-ylkarbonyl]aminojmethyl)fenoxy]propionové kyseliny.

2-methyl-2- [2-methyl-4- ({ [4-methyl-2- (4-trifluormethylfenyl) thiazol-5-ylkarbonyl] amino}methyl) fenoxy] propionovou kyselinu, ethylester 2-methyl~2-[2-methyl-4-({[4-methyl-2-(4-isopro pyl.fenyl) thiazol-5-ylkarbonyl] amino}methyl) fenoxy] propionové kyseliny,

2-methyl-2~[2-methyl-4-({[4-methyl-2-(4-isopropylfenyl)thiazol-5-ylkarbonyl]amino}methyl)fenoxy]propionovou kyselinu, ethylester 2-m.ethyl~2- [4-- ({ [5-methyl-2-- (4-trifluormethylfenyl) thiazol-4-ylkarbony1]aminoJmethyl)fenoxy]propionové kyseliny,

2-methyl-2-[4-({[5-methyl-2-(4-trifluormethylfenyl)thiazol-4-ylkarbonyl]amino}methyl)fenoxy]propionovou kyselinu, ethylester 2-methyl-2-[4-({f5--methyl--2-(3-triflucrmethylfenyl)thiazol-4-ylkarbonyl)amino]methyl]fenoxy]propionové kyseliny a

2-methyl~2-[4-({[5-methyl-2-(3-trifluormethylfenyl)thiazol-4-ylkarbonyl]amino}methyl)fenoxy]propionovou kyselinu.

Výhodnější sloučeniny podle tohoto vynálezu zahrnu j i:

• ; ♦· ·; . . . .

• · . i · · · · · • · Jí*···· ethylester 2-methyl-2- [ 4— ({ [4-méthyl-2- (4-triřluořítteťftyl-......

fenyl)thiazol-5-ylkarbonyl]amino)ethyl)fenoxy]propionové kyseliny,

2-methyl-2- [4- ({ [4-methyl-2~ (4-trifluormethylfenyl) thiazol-5-ylkarbonyl]amino}ethyl)fenoxy]propionovou kyselinu,

N-methyl-2-methyl-2-[4-({[4-methyl~2-(4-trifluormethylfenyl) thiazol-5-ylk.arbonyl] amino]ethyl)fenoxy]propionovou kyselinu,

2-methyl-2-[4-({[4-methyl-2~(4-terc-butylfenyl)thiazol-5-ylkarbonyl]amino}methyl)fenoxy]propionovou kyselinu,

2-methyl-2-[4-({[4-methyl~2~(4-isopropylfenyl)-thiazol-5-ylkarbonyl]amino}methyl)fenoxy]propionovou kyselinu,

2-methyl~2- (4- ({ [4--methyl-2- (4-nitrofenyl) thiazol-5-ylkarbonyl]amino}methyl)fenoxy]propionovou kyselinu,

2-methyl-2-[4-({[4-methyl-2-(3,4-dichlorenyl)thiazol-5-ylkarbony1]amino}methyl)fenoxy]propionovou kyselinu,

2-methyl-2~[4-({[4-methyl~2-(3-fluor-4-trifluormethylfenyl)thiazol-5-ylkarbonyl]aminojmethyl)fenoxy]propionovou kyselinu,

2-methyl-2-[4-({[4-methyl-2-(4-bromfenyl)thiazol-5-ylkarbonyl]amino}methyl)fenoxy]propionovou kyselinu,

2-methyl-2-[4-({[4-methyl-2-(4-ethylfenyl)thiazol-5-ylkarbonyl]amino}methyl)fenoxy]propionovou kyselinu, • ·

4 4 ««·

44* 44 4· 4444

2-methyl-2-[4-({ [4-methyl-2-fenylthiazol~5-ylk.arbonyl) amino]methyl}fenoxy)propionovou kyselinu,

2-methyl-2~ [4 - ({ [4-methyl-2-- (4-fluorfenyl) thiazol-5-ylkarbonyl]amino}methyl)fenoxy]propionovou kyselinu,

2-methyl-2-[4-({[4-methyl-2-(4-chlorfenyl)thiazol-5-ylkarbonyl]amino}methyl)fenoxy]propionovou kyselinu,

2-methyl~2-[4-({[4-methyl-2~(4-trifluormethoxyfenyl)thiazol-5-ylkarbonyl]amino}methyl)fenoxy]propionovou kyselinu,

2--methyl-2- [4- ({ [4-methyl~2- (4-methoxyfenyl) thiazol-5-ylkarbonyl]amino}methyl)fenoxy]propionovou kyselinu,

2-methyl-2- [4- ({ [4-methyl-2- (4-acetylen.ylfenyl) thiazol-5-ylkarbonyl]amino}methyl)fenoxy]propionovou kyselinu,

2-methyl~2-[4-({[4-trifluormethyl-2-(4-trifluormethylfenyl)thiazol-5-ylkarbonyl]amino}methyl)fenoxy]propionovou kyselinu,

2-methyl~2~ [4- ({ [4-methyl-2- (4-trif luormethylfenyl) oxazol-5-ylkarbonyl]amino}methyl)fenoxy]propionovou kyselinu,

2-methyl~2-[4-({[4-methyl~2~(4-trifluormethyl-2~pyridyl)-thiazol-5-ylkarbony!]amino}methyl)fenoxy]propionovou kyselinu a ♦ · « φ • φ · · φ φ φ φ φ φ • · ·· ··· • •ΦΦ φ·· φφφ φφ φφ φφφφ

2-methyl-2-[2~methoxy-4-({ [4-methyl-2- (4-tri.f luormethylfenyl) thiazol-5-ylkarbonyl]amino]methyl)fenoxy]propionovou kyselinu.

Obzvláště výhodnou sloučeninou podle tohoto vynálezu je 2-methyl-2-[4-({[4-methyl-2-(4-trifluormethylfenyl)thiazol-5-yl-karbonyl]amino}methyl)fenoxy]propionová kyselina.

Výhodné sloučeniny uvedené výše jsou selektivními agonisty hPPAR-alfa.

Odborník v oboru také zjistí, že sloučeniny podle předloženého vynálezu mohou být také využity ve formě farmaceuticky přijatelného soli nebo solvátu. Fyziologicky přijatelné soli sloučenin obecného vzorce (I) zahrnují obvyklé soli vytvořené z farmaceuticky přijatelných anorganických a organických kyselin nebo bází stejně jako adičních solí s kvarterní amon.io.vou bází. Specifičtější příklady vhodných solí s kyselinou zahrnují soli s kyselinou chlorovodíkovou, bromovodíkovou, sírovou, fosforečnou, dusičnou, chloristou, fumarovou, octovou, propionovou, jantarovou, glykolovou, mravenčí, mléčnou, maleinovou, vinnou, citrónovou, palmovou, malonovou, hydroxymaleinovou, fenyloctovou, glutamovou, benzoovou, salicylovou, fumarovou, toluensulfonovou, methansulfonovou, naftalen-2-sulfonovou, benzensulfonovou, hydroxynaftoovo u, jodovodíkovou, jablečnou, steroovou, tříselnou apod. Další kyseliny, jako šťavelová, jakkoli samotné nejsou farmaceuticky přijatelné, mohou být užitečné při přípravě solí užitečných jako meziprodukty při získávání sloučenin podle tohoto vynálezu a jejich farmaceuticky přijatelných solí. Specifičtější příklady bázických solí zahrnují, sodné, • *····· · zioeČReté*..* cholinové.

• · lithné, draselné, horečnaté, hlinité, vápenaté·,·

N,N'-dibenzylethylendiaminové, chlorprokainové, diethanolaminové, ethylendiaminové, N-methylgluk.aniinové a prokainové solí. Dále uvedené odkazy na sloučeninu podle tohoto vynálezu zahrnují jak sloučeniny obecného vzorce (I), tak jejich farmaceuticky přijatelné soli a solváty.

Sloučeniny podle tohoto vynálezu a jejich farmaceuticky přijatelné deriváty se příhodně podávají ve formě farmaceutických prostředků. Takové prostředky mohou příhodně být předloženy pro použití příhodným způsobem ve směsi s jedním nebo více fyziologicky přijatelnými nosiči nebo pomocnými látkami.

Jakkoli je možné, že sloučeniny podle předloženého vynálezu mohou být terapeuticky podávány jako surová chemikálie, je výhodné předložit aktivní složku jako farmaceutický prostředek. Nosič (nosiče) musí být „přijatelný („přijatelné) v tom smyslu, že jsou kompatibilní s dalšími složkami prostředku a nejsou pro jejich příjemce škodlivé.

Předložený vynález tudíž dále poskytuje farmaceutický prostředek obsahující sloučeninu obecného vzorce (I) nebo její farmaceuticky přijatelnou sůl nebo solvát spolu s jedním nebo více fyziologicky přijatelnými nosiči a, případně, dalšími terapeutickými a/nebo profylaktickými složkami.

Prostředky podle tohoto vynálezu zahrnují jak vhodné orální, parenterální (včetně subkutánních, např. injekcí nebo depotních tablet, intradermálních, intrathekálních, intrmuskulárních, např. depotních nebo *» · · ♦· ·♦ ·· • · · · · · · · · · » • · · · · · * 9 * 9 9 9 9 9 9 9

9999 999 999 99 99 9999 intravenózních), rektální'a topické (včetně dermálních, bukálních a sublingválních) podání, ačkoliv nejvhodnější cesta podání může záviset například na stavu a poruše příjemce. Prostředky mohou být příhodně předloženy ve formě dávkové jednotky a mohou být připraveny jakýmikoli způsoby známými v oboru farmacie. Všechny způsoby zahrnují krok spojení sloučenin („aktivní složky) s nosičem, který tvoří jednu nebo více přídatných složek. Obecně se prostředek připraví jednolitým a těsným spojením aktivní složky s kapalnými nosiči nebo jemně dělenými tuhými nosiči nebo oběma a poté, pokud je to nezbytné, tvarování produktu na požadovaný protředek.

Prostředky vhodné pro orální podání mohou být předloženy jako dělené jednotky, jako jsou kapsle, sáčky nebo tablety (např. žvýkací tablety obzvláště pro pediatrické podání), každá z nich obsahující předem stanovené množství aktivní složky; jako prášek nebo granule; jako roztok nebo suspenze ve vodné kapalině nebo nevodné kapalině nebo jako kapalná emulze voda v oleji nebo kapalná emulze olej ve vodě. Aktivní složka může také být předložena jako bolus, lektvar nebo pasta.

Tableta může být vyrobena lisováním nebo stlačením, případně s jednou nebo více přídatnými složkami. Lisované tablety mohou být připraveny lisováním aktivní složky ve volně tekuté formě jako prášku nebo granuli ve vhodném přístroji, případně smíšených s dalšími obvyklými pomocnými látkami, jako jsou pojivá (například sirup, arabská guma, želatina, sorbital, tragant, škrobový sliz nebo polyvinyl-pyrrolidon), plnidla (například laktóza, cukr, mikro-krystalická celulóza, kukřičný škrob, fosforečnan vápenatý nebo sorbitol), mazadla (například • ·

• · ·« · · • * * ♦ ♦ • · · · · • · « · · · · · · · • · 9 9 9999 stearát horečnatý, kyselina stearová, mastek, polyethylenglykol nebo oxid křenmičitý), desintegrancia (například bramborový škrob nebo natriumglykolát škrobu) nebo zvlhčovadla, jako je laurylsíran sodný. Stlačované tablety mohou být vyrobeny stlačováním směsi práškové sloučeniny navlhčené v inertním kapalném ředidle ve vhodném přístroji. Tablety mohou být případně potaženy nebo rýhovány a mohou být formulovány k poskytnutí pomalého nebo řízeného uvolňování aktivní složky v nich uložené. Tablety mohou být potaženy podle postupů v oboru dobře známých.

Alternativně mohou být sloučeniny podle předloženého vynálezu včleněny do orálních kapalných prostředků, jako jsou například vodné nebo olejové suspense, roztoky, emulse, sirupy nebo elixíry. Navíc prostředky obsahující tyto sloučeniny mohou být předloženy jako suchý produkt pro konstitucí s vodou nebo jiným vhodným vehikulem před použitím. Takové kapalné prostředky mohou obsahovat obvyklé přísady, jako jsou suspendační činidla, jak olej sorbitol, sirup, methylcelulóza, glukózový/cukrový sirup, želatina, hydroxyethylcelulóza, karboxymethylcelulóza, gel stearátu hlinitého nebo hydrogenované jedlé tuky; ernulgační činidla, jako je lecitin, sorbitanmonooleát nebo arabská guma; nevodná vehikula (která mohou zahrnovat jedlé tuky), jako je mandlový olej, frakcionovaný kokosový olej, estery olejů, propylenglykol nebo ethylalkohol; konzervancia, jako jsou methyl- nebo propyl-p-hydroxybenzoáty nebo kyselina sorbová. Takové prostředky mohou být také formulovány jako čípky, např. obsahující obvyklé čápkové báze, jako je kakaové máslo nebo jiné glyceridy.

Prostředky pro parenterální podání zahrnují vodné • ·

99 99 99

9 9 9 9 9

9 9 9 9 ·

9 9 9 9 9 9

9 9 9 9 9

9 9 9 99 9 99 9 a nevodné sterilní injekční roztoky, které mohou obsahovat antioxidancia, pufry, bakteriostatika a rozpuštěné látky, které zajišťují isotonicitu prostředku s krví předpokládaného příjemce a vodné a nevodné sterilní suspenze, které mohou zahrnovat suspendační činidla a zahušťovací činidla.

Prostředky mohou být předloženy v dávkové jednotce nebo v nádobě s více dávkami, například uzavřené ampule nebo skleničky, a mohou být skladovány v lyofilizovaném stavu, který vyžaduje pouze přidání sterilního kapalného nosiče, například vody pro injekci, bezprostředně před použitím. Extemporální roztoky a suspenze pro injekci mohou být připraveny ze sterilních prášků, granulí a tablet výše popsaného typu.

Prostředky pro rektální podání mohou být předloženy jako čípek, s obvyklými nosiči, jako je kakaové máslo, tuhý tuk nebo polyethylenglykol.

Prostředky pro topické podání do úst, například bukálně nebo sublingválně, zahrnují pokroutky obsahující aktivní složku v ochucené bázi, jako je sacharóza a arabská guma nebo tragant, a pastilky obsahující aktivní složku v bázi jak je želatina a glycerin nebo sacharóza a arabská guma.

Sloučeniny mohou také být formulovány jako depotní prostředky. Takovéto dlouhodobě působící prostředky mohou být podávány implantací (například subkutánně nebo intramuskulárně) nebo intramuskulární injekci. Například tedy sloučeniny mohou být formulovány s vhodnými polymerními nebo hydrofobními materiály (například jako r · emulze v přijatelném oleji) nebo v iontoměničových pryskyřicích nebo jako špatně rozpustné deriváty, například jako špatně rozpustná sůl.

• «· ·· ·· • · « · · * · • · · · · * • ······ · • · · · · · • · · · «· · · · · · ·

Kromě složek výše zvlášť uvedených mohou prostředky obsahovat další činidla obvyklá v oboru s ohledem na typ prostředku, o který jde, například činidla, vhodná pro orální podání mohou obsahovat příchutě.

Odborník v oboru zjistí, že zde uvedené odkazy na léčení se týkají profylaxe stejně jako léčení zavedených chorob nebo symptomů. Kromě toho se zjistí, že množství sloučeniny podle tohoto vynálezu vyžadované pro použití při léčení se bude lišit v závislosti ňa povaze léčeného stavu a· věku a stavu pacienta a bude v konečném důsledku záviset na rozhodnutí ošetřujícího lékaře nebo veterináře. Obecně však budou dávky použité u dospělého člověka v rozmezí od 0,02 do 5000 mg za den, výhodně od 1 do 1500 mg za den. Požadovaná dávka může příhodně být předložena v jediné dávce nebo jako dělené dávky podávané v příhodných intervalech, například jako 2, 3, 4 nebo více poddávek za den. Prostředky podle tohoto vynálezu mohou obsahovat od 0,1 do 99 % aktivní složky, příhodně od 30 do 95 % pro tablety a kapsle a od 3 do 50 % pro kapalné prostředky.

Sloučenina obecného vzorce (I) pro použití podle předloženého vynálezu může být použita v kombinaci s dalšími terapeutickými činidly, například statiny a/nebo léčivy snižujícími hladinu lipidů, například inhibitory MTP a upregulátory LDLR. Sloučeniny podle tohoto vynálezu mohou být také použity v kombinaci s antidiabetickými činidly, např. metforminem, sulfonylmočovinami a/nebo agonisty PP-ARgamma (například thiazolidindíony, jako je např.

• « ·· ·« • · 9 · • · ♦ · • · · · · • · · · ·· ··«· • ·· pioglitazon a rosiglitazon) .. Sloučeniny také mohou být použity v kombinaci s antihypertensivními činidly, jako jsou antagonisté vápníkového kanálu a ACE inhibitory. Tento vynález tedy poskytuje další aspekt použití kombinace zahrnující sloučeninu obecného vzorce (I) s dalším terapeutickým činidlem při léčení choroby zprostředkované hPPAR-alfa.

Když se sloučeniny obecného vzorce (I) použijí v kombinaci s dalšími terapeutickými činidly, mohou být tyto sloučeniny podány buď sekvenčně nebo současně jakoukoli příhodnou cestou.

Kombinace uvedené výše mohou být příhodně předloženy pro použití ve formě farmaceutického prostředku a tedy farmaceutické prostředky obsahující kombinaci definovanou výše optimálně s farmaceuticky přijatelným nosičem nebo pomocnou látkou tvoři další aspekt tohoto vynálezu. Jednotlivé složky takových kombinací mohou být. podávány buď sekvenčně nebo současně v oddělených nebo kombinovaných farmaceutických prostředcích.

Pokud se kombinují ve stejném, prostředku zjistí se, že tyto dvě sloučeniny musejí být stabilní a kompatibilní navzájem a. s dalšími složkami prostředku a mohou být formulovány pro podání. Když se formulují odděleně, mohou být poskytnuty v jakémkoli příhodném prostředku, příhodně takovými způsoby, jaké jsou v oboru známy pro takové sloučeniny.

Když se sloučenina obecného vzorce (1) použije v kombinaci s druhým terapeutickým činidlem aktivním proti «<· « ·· ·5 B« zz · · · · ····»·« • · ··.··« B • · · B · ··· ···· ··· »*< »B ·· BBBB stejné chorobě zprostředkované PPAR-alfa, dávka každé ze sloučenin se může lišit od dávky, kdy se sloučenina použije samotná. Příhodné dávky odborník v oboru snadno zjistí.

Sloučeniny podle tohoto vynálezu mohou být příhodně připraveny obecným způsobem, kde část jako (A) se kondenzuje s kyselinou (B) za použití peptidové kondenzační reakce nebo alkylací (A) za použití, vhodného nukleofilního aminu s chloridem kyseliny (C) .. Výhodně R je alkylová skupina s 1 až 6 atomy uhlíku, která může být odštěpena hydrolýzou k získání kyseliny obecného vzorce (I) nebo, pokud se snadno hydrolyzuje, může se podat výsledný ester.

Výhodná syntéza (A) , když Χχ je atom kyslíku a X₂ je skupina NH (a R¹ a R² jsou atom vodíku) je:

HO

NHBoc

DMF ; Κ,ΟΟ, I B0*C

A

Je třeba si povšimnout, že tato syntéza se výhodně provádí s aminem, kde alkoholová.funkce je již alkylována kyselinovým, postranním, řetězcem chráněným skupinou R. Například když n je 1, X₃. je atom kyslíku, X₂

• 4 9 * •	• • i •	• · 9 • ·	*9	9 9	• 9	β « • •
9 •	• 9
•	•	• ·		9	9	9	»
9999	»•9	·* 9	99		9«		9999

je skupina NH, Y je atom síry, Z je atom dusíku, R¹ a R² jsou atom vodíku a R³ je 4-F₃C-fenyl:

HOBT/EDC/NEt, DMFř teplota místnosti

Některé z meziproduktů typu (A) jsou komerčně dostupné, zatímco další mohou být syntetizovány postupy odborníkovi v oboru zjevnými. Syntéza meziproduktů typu (B) a (C) jsou ilustrovány dále.

Sloučenin podle tohoto vynálezu mohou být vyrobeny alternativním způsobem, kde sloučeniny obecného vzorce (D) se nechají reagovat s ethyl-(2-brom-2-methylpropionátem) k vytvoření ethylesteru sloučeniny obecného vzorce (I), která se může hydrolyzovat k vytvoření volné kyseliny.

HO

(D) • · · » · · > « • · · ·····» · ········ ···· ··· ··· ·· ·· ····

Sloučeniny obecného vzorce (D) se mohou připravit reakcí mezi sloučeninami obecného vzorce (B) a sloučeninami obecného vzorce (E) s HOBT/EDC/NEt₃ když X₂ je skupina NH nebo skupina NCH3 nebo DIC/DMAP/NEt3 když X₂ je atom kyslíku.

HO

(E)

Pří klady provedení vynálezu

Vynález je dále ilustrován následujícími příklady, které nemají být vykládány jako jeho omezení.

Meziprodukt 1

Postup je popsán, ve Stout, D. ML, J. Med, Chem., 26(6), 808 až 813 (1983). K 4-meth.oxybenzylaminu (25 g,

0,18 mol; Aldrich) se přidá 46% bromovodík ve vodě (106 ml, 0,9 m.ol; Aldrich). Reakční směs se zahřívá na teplotu zpětného toku přes noc, poté se reakční směs ochladí na teplotu 0 °C a neutralizuje na. hodnotu pH 7 pomalu pomocí pevného hydroxidu draselného. Reakční směs se nechá míchat asi 30 minut, poté tuhá látka zfiltruje a vysuší. Tuhá látka se znovu rozpustí v horkém methanolu, zfiltruje a roztok se ochladí k získání 19 g (85 %) meziproduktu 1.

^XH NMR (DMSO-dg) : δ 8,0 (široký s, 1H), 7,2 (d, 2H) (d, 2H), 3,85 (s, 2H), 3,50 (široký s, 2H).

6,75

Meziprodukt 2

Roztok ethyl-(2-chloracetoacetátu) (35,3 g,

29,7 ml, 0,21 mol) a 4-(trifluormethyl)thiobenzamidu (44 g, 0,21 mol) v ethanolu (300 ml) se zahřívá na teplotu zpětného toku přes noc. Po ochlazení na teplotu místnosti se rozpouštědlo odpaří ve vakuu.

Konečný produkt (meziprodukt 2) se rekrystaluje z minima methanolu k získání 40 g (59 %) konečného produktu jako bílé tuhé látky.

^XH NMR (CDC1₃) : δ 8,10 (d, 2H) , 2,80 (s, 3H), 1,4 (t, 3.H) .

7,70 (d, 2H), 4,40 (q, 2H)

Meziprodukt 3

K meziproduktu 2 (1,84 g, hydrofuranu se přidá IN LiOH (6 ml,

5,8 ramol) v tetra6 ramol) a reakční směs se míchá při teplotě místnosti

Po .asi 3 hodinách se reakční směs neutralizuje IN kyselinou chlorovodíkovou, extrahuje 3 x 100 ml EtOAc, vysuší síranem sodným,

zfiltruje a rozpouštědlo odpaří ve vakuu k získání 1,5 g (89 %) meziproduktu 3 jako bílé tuhé látky.

¹H NMR (DMSO-dg) δ 13,55 (široký s, 1H) , 8,25 (d, 2H) , 7,95 (d, 2H), 2,75 (s, 3H).

Meziprodukt 4

K meziproduktu 3 (1 g, 7 mmol) ve směsi CH2CI2/DMF (1:1) se přidá HOBT (565 mg, 4,2 mmol; Aldrich), EDC (800 mg, 4,2 mmol; Aldrich) a meziprodukt 1 (860 mg, 7 mmol). Reakční směs se míchá při teplotě místnosti 18 hodin. Rozpouštědlo se odpaří ve vakuu, zpracuje se s vodou a extrahuje 3x 100 ml CH2CI2. Organické fáze se spojí a promyjí IN HCl, vysuší síranem, sodným, zfiltrují a odpaří k získání směsi (N-substitutované a N,O-substituované sloučeniny) . Směs se rozpustí, v methanolu a zpracuje se s IN NaOH. Reakční směs se míchá 18 hodin při teplotě 50 °C. Rozpouštědlo se odpaří ve vakuu a odparek, se rozpustí v CH2CI2, promyje vodou a vysuší síranem sodným. Rozpouštědlo se odpaří a odparek se chromatografuje (Cl^Clž/methanol : 99/1) k získání 610 mg (47 %) meziproduktu 4 jako bílé tuhé látky.

¹HNM.R (DMSO-dg) : 8 9,30 (s, 1H) , 8,80 (t, 1H) , 8,20 (d, 2H), 6,70 (d, 2H), 4,35 (d, 2H), 2,6 (s, 3H>.

Obecný postup 1 pro přípravu substituovaných thiobenzamidů

K roztoku P4S10 (0,2 mmol) v toluenu (100 ml) se

přidá hydrogenuhličitan sodný (2 mmol) a směs se zahřívá na teplotu zpětného toku přibližně 30 minut. Přidá se substituovaný benzamid (1 mmo.1) a reakce se míchá při teplotě 90 °C 1 hodinu. Reakční směs se poté odpaří do sucha, zpracuje se roztokem chloridu sodného (100 ml) a extrahuje se CH2CI2 (2 x 50 ml) . Organická fáze se vysuší, zfiltruje a odpaří k získáni, konečného produktu.

Meziprodukt 5

Sloučenina pojmenovaná v záhlaví se připraví podle popisu v obecném postupu 1 k získání oranžové tuhé látky (49 %) .

¹H NMR (CDCIa) : δ 7,7 (d, 2H), 7,4 (široký s, 1H), 7,3 (d, 2H) , 7,0 (široký s, 1H)., 1,2 (s, 9H) .

Meziprodukt 6

Sloučenina pojmenovaná v záhlaví se připraví podle popisu v obecném postupu 1 k získání oranžové tuhé látky (26 %).

Teplota tání: 150 ’C.

Obecný postup 2 pro přípravu substituovaných thiobenZamidů • ·· • · « · · • · · · · • · 9 · · * • · · · · ' · · ······

K substituovanému benzonitrilu (1 mmol) v dimethylformamidu (30 ml) se po kapkách během 1 minuty přidá dimethylformamid (21 ml) nasycený plynným chlorovodíkem. Poté se přidá thioacetamid (2 mmol) a reakční směs se zahřívá na teplotu 100 °C 1 hodinu. Asi 1 minutu se probublává plynný chlorovodík a v míchání se pokračuje při teplotě 100 °C dalších 18 hodin. Reakční směs se ochladí na teplotu místnosti, zpracuje se ledem a extrahuje se Et₂O (3 x 250 ml). Organická fáze se promyje vodou (3 x 300 ml) , vysuší se síranem sodným, zfiltruje a odpaří do sucha. Odparek se promyje směsí ísopropylether/pentan (1 : 3) k získání konečného produktu.

Meziprodukt 7

Sloučenina pojmenovaná v záhlaví, se připraví podle popisu v obecném postupu 2 k získání oranžové tuhé látky (83 %).

^XH NMR (DMSO-dg) : H), 8,1 (d, 2H),

10,1 (široký s, 1 H), 9,7 (široký s, 7,9 (d, 2H) , s

Meziprodukt 8

Sloučenina pojmenovaná v záhlaví se připraví podle popisu v obecném postupu 2 k získání žluté tuhé látky (45 %) .

MS m/z 207.(M+l).

Meziprodukt 9

Sloučenina pojmenovaná v záhlaví se připraví podle popisu v obecném postupu 2 k získání oranžové tuhé látky (84 %).

^XH NMR (DMSO-de): δ 10,5 (široký s, 1 H) , 10,05 (široký s, 1H) , 8,1 (m, 3H).

Meziprodukt 10

K 4-brombenzonitr.ilu (1 mmol) se přidá diethyldithiofosfát (1,2 ekv.). K suspenzi se přidá voda (přibližně 100 ml) a .reakčni směs se zahřívá na teplotu 80 °C přibližně 2 hodiny. Reakčni směs se ochladí na teplotu místnosti a extrahuje se Et_?O (3 x 100 ml). Organická fáze se promyje nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného, vysuší síranem sodným a odpaří do sucha, čímž se získá žlutá tuhá látka. Tuhá látka se propláchne isopropyletherem a zachytí filtrací k získáni sloučeniny pojmenované v záhlaví jako žluté tuhé látky (55 %) .

MS m/z 214.

·· · 9

Meziprodukt 11

K 4-ethylbenzami.du. (1 mmol) v toluenu zahřívaném na teplotu zpětného toku se přidá Lawesonovo činidlo (1 ekv.). Poté, co je přidávání hotovo se reakční směs. zahřívá na teplotu zpětného toku 2 hodiny. Reakční směs se ochladí na'teplotu místnosti, zpracuje se s· Et₂O, promvje vodou a organická fáze vysuší síranem sodným, roztok se zfiltruje, odpaří do sucha a odparek se chromatografuje směsí CH₂Cl₂/methanol (98 : 2) k získání 3 cj sloučeniny pojmenované v záhlaví jako žluté tuhé látky (55 %) .

^XH NMR (DMSO-dg) : δ 9,8 (široký s, 1 H) _f 9,4 (široký s, 1 H), 7,8 (d, 2H), 7,2 (d, 2H) , 2,6 (q, 2H), 1,2 (t, 3H) .

Obecný postup 3 pro přípravu 2~substituovaných ethylesterů fenyl-4-methyl-l, 3-thiazol-5-kaboxylové kyseliny

K roztoku substituovaného thiobenzamidu (1 mmol) v ethanolu (100 ml) se přidá ethyl-2-chloracetoacetát (1,1 mmol) a směs se zahřívá na teplotu, zpětného toku přes noc. Reakční směs se ochladl na teplotu místnosti a rozpouštědlo se odpaří. Tuhá látka se krystaluje z diethyletheru nebo hexanu k získání konečného produktu.

o o

//

9« · · * · · · ·« • 999 9 9 · 9 « 9 ·

9 · · · · · ·

9 9 9 · « 9 9

9999 999 999 <9 99 99··

Meziprodukt 12

Meziprodukt 5 se nechá reagovat podle popisu v obecném postupu 3 k získání sloučeniny pojmenované v záhlaví jako bělavé tuhé látky (95 %) .

^TH NMR (CDCls) : δ 8,0 (d, 2H) , 7,55 (d, 2H) , 4,45 (q, 2H) , 3,85 (s, 3H), 2,5 (t, 3H), 1,45 (s, 9H) .

Meziprodukt 13

Meziprodukt 6 se nechá reagovat podle popisu v obecném postupu 3 k získání sloučeniny pojmenované v záhlaví jako bělavé tuhé látky (97 %).

NMR (CDCI3) : δ 7,85 (d, 2H) , 7,25 (d, 2H) , 4,30 (q, 2H) , 2,90 (st, 1H), 2,70 (s, 3H), 1,30 (t, 3H), 1,20 (d, 6H).

Hj^so·

N

Meziprodukt 14

Meziprodukt 7 se nechá reagovat podle popisu v obecném postupu 3 k získání sloučeniny pojmenované v záhlaví jako žluté tuhé látky (74 %).

^XH NMR (CDCI3) : δ 8,25 (d, 2H) , 8,05 (d, 2H), 4,30 (q, 2H) , 2,70 (s, 3H), 1,30 (t, 3H).

·« · · · · ·♦ ·· • · ·· ·· · · · « «

9 9 9 9 9 9 9

9999 999 999 99 99 9999

Meziprodukt 15

Meziprodukt 8 se nechá reagovat podle popisu v obecném postupu 3 k získání sloučeniny pojmenované v záhlaví jako světle žluté tuhé látky (77 %).

^XH NMR (CDCls) : δ 8,0 (d, 1H) , 7,70 (dd, 1H) , 7,40 (d, 1H) , 4,30 (q, 2H), 2,70 (s, 3H) , 1,3 (s, 3H) .

Meziprodukt 16:

Meziprodukt 9 se nechá reagovat podle popisu v obecném postupu 3 k získání sloučeniny pojmenované v záhlaví jako bělavé tuhé látky (40 %).

^XH NMR (DMSO-d₆) : δ 7,95 (m, 3H) , 4,30 (q, 2H) , 2,65 (s, 3H), 1,3 (s, 3H) .

N

Br

Meziprodukt 17

Meziprodukt 10 se nechá reagovat podle popisu v obecném postupu 3 k získání sloučeniny pojmenované v záhlaví jako bělavé tuhé látky (61 %).

• · ·· • « · 4 · · • · ·

4. · 4· 4 ^XH NMR (CDC1₃) : δ 7,70 (d, 2H) , 7,55 (d, 2H) , 4,25 (q, 2H) , 2,70 (s, 3H), 1,30 (s, 3H).

Meziprodukt 11 se nechá reagovat podle popisu v obecném postupu 3 k získání sloučeniny pojmenované v záhlaví jako světle zelené tuhé látky (35 %).

^XH NMR (CDCI3) : δ 7,70 (d, 2H) , 7,15 (d, 2H) , 4,15 (q, 2H) , 2,50 (s, 3H), 2,50 (q, 2H), 1,15 (t, 3H), 1,05 (t, 3H).

O

Meziprodukt 19

Thiobenzamid (Aldrich) se nechá reagovat podle popisu v obecném postupu 3 k získání sloučeniny pojmenované v záhlaví jako bělavé tuhé látky (28 %).

NMR (CDCI3) : δ 8,35 (d, 2H) , 7,60 (m, 3H) , 4,45 (q, 2H) , 3,05 (s, 3H), 1,30 (t, 3H).

O

Meziprodukt 20 «· · · ·· ·· ·· • · · · ··· · · · *

ΊΛ · · · · · · · * · · · ·····* · • · ······ ···· ··· ··· ·· ·· ····

4-Fluorthiobenzamid (Maybridge) se nechá reagovat podle popisu v obecném postupu 3 k získání sloučeniny pojmenované v záhlaví jako bělavé tuhé látky (100 %) .

¹H NMR (CDCI3) : δ 7,75 (dd, 2H) , 6,95 (t, 2H) , 4,15 (q,

2H), 2,60 (s, 3H), 1,20 (t, 3H).

4-Chlorthiobenzamid (Lancaster) se nechá reagovat podle popisu v obecném postupu 3 k získání sloučeniny pojmenované v záhlaví jako světle oranžové tuhé látky (54 %) .

^XH NMR (CDCI3) : δ 7,60 (d, 2H) , 7,10 (d, 2H) , 4,15 (q, 2H) , 2,55 (s, 3H), 1,20 (t, 20 3H).

4-Trifluormethoxythiobenzamid (Interchim) se nechá reagovat podle popisu v obecném postupu 3 k získání sloučeniny pojmenované v záhlaví jako bělavé tuhé látky (100 %).

NMR (CDCI3) : δ 7,90 (d, 2H) , 7,15 (d, 2H) , 4,25 (q, 2H) ; 2,65 (s, 3H), 1,30 (t, 3H).

·» · » »» 99 ·· • · ♦ · · · · · * · · • · · · · · · · • · ······ ···· 999 ··· ·· ·· ··«·

O

Meziprodukt 23

4-Methoxythiobenzamid (Lancaster) se nechá reagovat podle popisu v obecném postupu 3 k získání sloučeniny pojmenované v záhlaví jako bělavé tuhé látky (52 %) ·

NMR (DMSO-d₆): δ 7,8 (d, 2H) , 6,95 (d, 2H) , 4,15 (q,

2H), 3,70 (s, 3H) , 2,50 (s, 3H), 1,15 (t, 3H).

Obecný postup 4 pro přípravu 2-substituovaných fenyl-4-methyl-1,3-thiazol-5-karboxylových kyselin

K roztoku substituovaného thiazolesteru (1 mmol) v ethanolu (100 ml) se přidá (1,5 ekv.) NaOH (IN) a směs se zahřívá na teplotu 40 °C přes noc. Reakční směs se ochladí na teplotu místnosti a roztok se okyselí pomocí kyseliny chlorovodíkové (IN). Sraženina se zachytí, promyje vodou a vysuší ve vakuu k získání konečného produktu.

Meziprodukt 24

Meziprodukt 12 se nechá reagovat podle popisu v obecném postupu 4 k získání sloučeniny pojmenované v záhlaví jako bělavé tuhé látky (64 %).

• · ···· 999 • 99 99 99

9.9 9 9 9 9

9 9 9,-9 9

9 9 9 9 9 · · · · · ·

99· 99 99 9999 ^XH NMR (CDC1₃) : δ 7,70 (d, ZH) , 7,30 (d, 2H), 2,60 (t, 3H) , 1,15 (s, 9H).

Meziprodukt 25

Meziprodukt 13 se nechá reagovat podle popisu v obecném postupu 4 k získání sloučeniny pojmenované v záhlaví jako bělavé tuhé látky (100 %).

^XH NMR (CDCI3) : δ 7,75 (d, 2H) , 7,15 (d, 2H) , 2,85 (st,

1H) , 2, 65 (s, 3H) , 1,15 (d, 6H) .

Meziprodukt 26

Meziprodukt 14 se nechá reagovat podle popisu v obecném postupu 4 k získání sloučeniny pojmenované v záhlaví jako béžové tuhé látky (99 %).

^ΧΗ NMR (DMSO-d₆) : δ 8,15 (d, 2H) , 8,05 (d, 2H) , 2,50 (s, 3H) .

-Cl

Cl

Meziprodukt 27

99

Meziprodukt 15 se nechá reagovat podle popisu v obecném postupu 4 k získání sloučeniny pojmenované v záhlaví jako bělavé tuhé látky (91 %) .

Ť NMR (DMSO-de) : δ 8,35 (d, 1H) , 8,05 (dd, 1H) , 7,90 (d, 1H) , 2,80 (s, 3H) .

· » ·· « · · » t

999 *« ».» ····

Meziprodukt 28

Meziprodukt 16 se nechá reagovat podle popisu v obecném postupu 4 k získání sloučeniny pojmenované v záhlaví jako bělavé tuhé látky (82 %).

^XH NMR (DMSO-d₆) : δ 8,05 (m, 3H) , 2,75 (s, 3H) .

HO

S /=

N

Br

Meziprodukt 29

Meziprodukt 17 se nechá reagovat podle popisu v obecném postupu 4 k získání sloučeniny pojmenované v záhlaví jako bělavé tuhé látky (87 %) .

^XH NMR (DMSO-d₆) : δ 7,70 (d, 2H) , 7,45 (d, 2H) , 2,45 (s, 3H) . .

OH

Meziprodukt 30

O

Meziprodukt 18 se nechá reagovat podle popisu v obecném postupu 4 k získání sloučeniny pojmenované v záhlaví jako světle zelené tuhé látky (79 %).

hl NMR (DMSO-d₆) : δ 8,05 (d, 2H) , 7,50 (d, 2H) , 2,75 (q, 2H), 2,75 (s, 3H) , 1,30 (t, 3H) .

Meziprodukt 31

Meziprodukt 19 se nechá reagovat podle popisu v obecném postupu 4 k získání sloučeniny pojmenované v záhlaví jako bělavé tuhé látky (93 %).

Teplota tání: 215 °C.

Meziprodukt 32

Meziprodukt 20 se nechá reagovat podle popisu v obecném postupu 4 k získání sloučeniny pojmenované v záhlaví jako bělavé tuhé látky (85 %).

NMR (DMSO-d₆) : δ 8,0 (dd, 2H) , 7,30 (t, 2H) , 2,60 (s,

3H) .

HO'

Cl

Meziprodukt 33 • ·

Meziprodukt 21 se nechá reagovat podle popisu v obecném postupu 4 k získání sloučeniny pojmenované v záhlaví jako světle oranžové tuhé látky (92 .%) .

^ΧΗ NMR (DMSO-de) : δ 7,95 (d, 2H] , 7,55 (d, 2H) , 2,60 (s, 3H) .

Meziprodukt 34

Meziprodukt 22 se nechá reagovat podle popisu v obecném postupu 4 k získání sloučeniny pojmenované v záhlaví jako bělavé tuhé látky (66 %).

MS m/z 304 (M+l).

Meziprodukt 35

Meziprodukt 23 se nechá reagovat podle popisu v obecném postupu 3 k získání sloučeniny pojmenované v záhlaví jako bělavé tuhé látky (98 %).

^ΧΗ NMR (DMSO-d₆} : δ 7,95 (d, 2H) , 7,10 (d, ZH) , 3,90 (s, 3H), 2,70 (s, 3H).

O .===—SiMe,

• * ·

Meziprodukt 36

Meziprodukt 17 (1 mmol) se naředí ve směsi MeCN/dioxan (100 ml) poté se přidá chlorid měďný (0,05 ekv.) a 1,1,3,3-tertamethylguanidin (10 ekv.) a' reakcční směs se míchá 15 minut pod atmosférou dusíku. Reakční směs se pročistí ve vakuu a poté se přidá trimethylsilylacetylen (1,1 ekv.) a Pd(PPh₃)₂Cl2 (0,1 ekv.) a reakční směs se míchá při teplotě 80 °C 2 hodiny. Rozpouštědlo se odpaří, odparek se rozpustí v CH2CI2, promyje nasyceným roztokem chloridu amonného, poté hydroxidem amonným a nakonec roztokem chloridu sodného. Organická vrstva se vysuší síranem sodným, zfiltruje a odpaří. Surový produkt se chromatografuje, přičemž se eluuje CH₂C1₂ k získání sloučeniny pojmenované v záhlaví jako béžové tuhé látky (100 %) .

MS m/z 344 (M+l).

Meziprodukt 37

K meziproduktu 36 (1 mmol) v tetrahydrofuranu se přidá Bu^NF a reakční směs se míchá při teplotě místnosti 2 hodiny. Tetrahydrofuran se odpaří, odparek rozpustí v CH₂C1₂, promyje nasyceným roztokem chloridu amonného, poté roztokem hydroxidu amonného a nakonec roztokem chloridu sodného. Organická vrstva se vysuší síranem sodným, zfiltruje a odpaří. Surový produkt se chromatografuje, přičemž se eluuje CH₂C1₂ k získání sloučeniny pojmenované v záhlaví jaké bílé tuhé látky (44 %).

MS m/z 272 (M+l).

Meziprodukt 37 se nechá reagovat podle popisu v obecném postupu 4 k získání sloučeniny pojmenované v záhlaví jako světle žluté tuhé látky (79 %).

MS m/z 244 (M+l).

Meziprodukt

K 4-trifluormethylthiobenzamidu (1 ekv., Lancaster) v dimethylformamidu (150 ml) se přidá ethyl-(2-chlor-4,4,4-trifluoracetoacetát) (1,5 ekv., Lancaster) a reakčni směs se míchá při tepltoě 100 °C 18 hodin. Reakčni směs se ochladí, odpaří a odparek se chromatografuje, přičemž se eluuje CH2CI2. Žlutý olej, který se zachytí se trituruje hexanem k získání sloučeniny pojmenované v záhlaví jako bílé tuhé látky (13 %) .

MS m/z 369.

<·· · · • *· ·· ·· »»9 9 9 9 · • · · « · « • · 9 9 9 · 9 » » · 9 · · »»» .»· ·· ····

Meziprodukt 40

Meziprodukt 39 se nechá reagovat podle popisu v obecném postupu 4 k získání sloučeniny pojmenované v záhlaví jako bílé tuhé látky (94 %).

NMR (DMSO-d₆) : δ 8,1 (d, 2H) , 7,7 (d, 2H) .

Meziprodukt 41

K meziproduktu 5 (1 ekv.) v ethanolu (25 ml) se přidá ethyl-(2-chlor-4,4,4-trifluoracetoacetát) (1 ekv.,

Lancaster) a reakční směs se míchá při teplotě zpětného toku 91 hodin. Reakční směs se ochladí, odpaří, odparek se rozpustí v pentanu a zfiltruje. Rozpouštědlo se odpaří ve vakuu k získání sloučeniny pojmenované v záhlaví jako hnědého oleje obsahujícího 2 sloučeniny, který se použije bez dalšího čištění.

Meziprodukt 42

Meziprodukt 41 se nechá reagovat podle popisu v obecném postupu 4 k získání sloučeniny pojmenované v záhlaví jako směsi 2 sloučenin. Směs se chromatografuje směsí cyklohexan/ethyl-acetát (7/3) k odstranění nečistot, poté směsí CHzClž/methanol (98/2) k získáni sloučeniny pojmenované v záhlaví jako bílé tuhé látky (9,7 %).

MS m/z 329 (M+l).

Meziprodukt 43

K 4-trifluormethylthiobenzamidu (1 ekv.,

Lancaster) v ethanolu (100 ml) se přidá ethyl-(3~brom-2~ -oxobutyrát) (1,1 ekv.) a reakční směs se míchá pří teplotě zpětného toku 18 hodin. Reakční směs se ochladí na teplotu místnosti, odpaří a odparek se rozpustí, v CH2CI2. Organická vrstva se promyje nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného následovaným, vodou, vysuší Na2HCO₄, zfi.lt.ruje a rozpouštědlo se odpaří do sucha. Surový produkt se chromatografuje, přičemž se eluuje CH2CI2 k získání sloučeniny pojmenované v záhlaví jako bílé tuhé látky (60

Meziprodukt 44

Meziprodukt 43 se nechá reagovat podle popisu v obecném postupu 4 k získáni sloučeniny pojmenované v záhlaví jako bílé tuhé látky (74 %),

MS m/z 287.

Meziprodukt 45

K 3-trifluormethylthiobenzamidu (1 ekv.,

Lancaster) v ethanolu (100 ml) se přidá ethyl-(3-brom-2-oxobutyrát) (1,1 ekv.) a reakční směs se míchá při teplotě zpětného toku 18 hodin. Reakční směs ochladí na teplotu místnosti, odpaří a odparek se rozpustí v dichlormethanu, Organická vrstva se promyje nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného, následovaným vodou, vysuší Na2HCO₄, zfiltruje a rozpouštědlo se odpaří do sucha. Surový produkt se chromatografuje, přičemž se eluuje dichlormethanem k získání sloučeniny pojmenované v záhlaví jako žlutého oleje (81 %) .

MS m/z 395.

CF.

HO'

Meziprodukt 46

Meziprodukt 45 se nechá reagovat podle popisu v obecném postupu 3 k získání sloučeniny pojmenované v záhlaví jako bílé. tuhé látky (92 %) .

MS m/z 288 (M+l).

Meziprodukt 47

K meziproduktu 5 (1 ekv.) v ethanolu (100 ml) se přidá, ethyl-(3~brom-2~oxobutyrát) (1,1 ekv.) a reakční směs se míchá při teplotě zpětného toku 18 hodin. Reakční směs se ochladí na teplotu místnosti, odpaří a odparek rozpustí v dichlormethanu. Organická vrstva se pr.omyje nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného, následovaným vodou, vysuší Na₂HCO₄, zfiltruje a rozpouštědlo se odpaří do sucha. Surový produkt se chromatograřuje, přičemž se eluuje dichlormethanem k získání sloučeniny pojmenované v záhlaví jako světle žluté tuhé látky (56 %).·

Teplota tání - 108 °C.

Meziprodukt 47 se nechá reagovat podle popisu v obecném postupu 4 k získáni sloučeniny pojmenované v záhlaví jako světle žluté tuhé látky (99 %).

Teplota tání - 155 °C.

s ·· ·· > » · ·· ···· ) v ethanolu (100 ml) se (1,1 ekv.) a reakční směs

Meziprodukt 49

K meziproduktu 6 (1 ekv přidá ethyl-(3-brom-2-oxobutyrát) se míchá při teplotě zpětného toku 18 hodin. Reakční směs se ochladí na teplotu místnosti, odpaří a odparek rozpustí v dichlormethanu. Organická vrstva se promyje nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného, následovaným vodou, vysuší Na₂HCO₄, zfiltruje a rozpouštědlo se odpaří do sucha. Surový produkt se chromatografuje, přičemž se.eluuje dichlormethanem. k získání sloučeniny pojmenované v záhlaví jako žlutého oleje (48 %).

MS m/z 289.

O

Meziprodukt 50

Meziprodukt 49 se nechá reagovat podle popisu v obecném postupu 4 k získání sloučeniny pojmenované v záhlaví jako bílé tuhé látky (73 %).

MS m/z 262 (M+l).

Meziprodukt

K 4-(trifluormethyl)benzamidu (1 ekv.) v toluenu ·· ·« • · · • · (150 ml) se po kapkách přidá methyl-(3-brom-2-oxobutyrát) (1 ekv.) a reakční směs se míchá při teplotě zpětného toku 20 hodin. Reakční směs se naředí ethyl-acetátem (100 ml) a následně se promyje roztokem hydroxidu sodného (IN), kyselinou chlorovodíkovou (IN) a vodou (3 x 100 ml), vyssuší, zfiltruje a odpaří na sirup. Výsledná směs se vyčistí bleskovou sloupcovou chromatografií (dichlormethan, poté směs dichlormethan/methanol (99,5:0,5)) k získání sloučeniny pojmenované v záhlaví jako bílé tuhé látky (9

MS m/z 285.

HO

Meziprodukt 52

Meziprodukt 51 se nechá reagovat podle popisu v obecném postupu 4 k získání sloučeniny pojmenované v záhlaví jako bílé tuhé látky (86 %).

Teplota tání = 189 °C.

Meziprodukt 53 (4-Trifluormethyl-2-pyridyl)thioamid (Lancaster)

4« « 4 ·· ·* ·· · 44 44 4 4 *44 · 4 4 4 4 4

44 44444· ·

4 444 444

4444 444 »44 44 44 444 se nechá reagovat podle popisu v obecném postupu 3 k získání sloučeniny pojmenované v záhlaví jako bílé tuhé látky (48 %).

Meziprodukt 54

Meziprodukt 53 se nechá reagovat podle popisu v obecném postupu 4 k získání sloučeniny pojmenované v záhlaví jako šedé tuhé látky (84 %).

NMR (DMSO-dg) : δ 9,13 (d, 1H) , 8,43 (dd, 1H) , 8,35 (d, 1H), 2,75 (s, 3H).

Meziprodukt 55

K hydrochloridu 4-hydroxy-3-methoxybenzylaminu (1 ekv., Aldrich) v dichlormethanu (300 ml) při teplotě 0 °C se přidá Et₃N (3 ekv.). Po kapkách se přidá Boc anhydrid (0,95 ekv.) v dichlormethanu (50 ml). Reakční směs se nechá ohřát na teplotu místnosti a v míchání se pokračuje 18 hodin. Reakční směs se poté vlije do roztoku hydroxidu sodného (1N) a směs se extrahuje roztokem hydroxidu sodného (3 x 50 ml). Vodné fáze se spojí, okyselí kyselinou chlorovodíkovou (1N) a extrahují dichlormethanem (3 x 100 ml). Organické vrstvy se promyjí vodou, vysuší síranem sodným, zfiltrují a rozpouštědlo se odpaří ve vakuu k

Ííw fc* ·'» * '· » 9 * * · · · 9 * * » < · » • · · · · • ·· · * ·> U získání sloučeniny pojmenované v záhlaví jako čirého oleje (97 %) .

¹H NMR (CDCI3) : δ 6,75 (m, 3H) , 5,55 (široký s, 1H) , 4,75

(široký s, 1H), 4,15	(d,	2H), 3,80 (s,	3H) ,	1,40 (s,	9H)
O
		Λ
		It^k^NHBoc
Meziprodukt 56
K meziproduktu	55 (1 ekv.) v	DMSO	(100 ml)	se
přidá uhličitan draselný	(3 ekv.) a ethyl-(2	-brom-2-
-methylproprionát) (1	,3	ekv.). Reakčni	směs	se míchá	při

zahříváni na teplotu 100 °C 3 hodiny. Reakčni směs se vlije na led a extrahuje se dichlormethanem (3 x 150 ml). Spojené organické vrstvy se promyjí roztokem hydroxidu sodného (IN), poté vodou a vysuší síranem sodným. Roztok se zfiltruje, odpaří do sucha a surový produkt se krystaluje z horkého hexanu k získání sloučeniny pojmenované v záhlaví jako hnědé tuhé látky (63 %).

Tepltoa tání = 107 až 109 °C.

Meziprodukt 57

K meziproduktu 56 (1 ekv.) v dichlormethanu (10 ml) při teplotě místnosti se po kapkách přidá CF3COOH (7 ekv.) a reakčni směs se míchá při teplotě místnosti 18 hodin. Reakční směs sé odpaří do sucha, .zpracuje se s nasyceným roztokem uhličitému draselného a extrahuje se dichlormethanem (3 x 150 ml). Spojené organické vrstvy se vysuší síranem sodným, zfiltrují a odpaří do sucha, k získání sloučeniny pojmenované v záhlaví jako oleje (100 %) ·

MS m/z 2 67.,

HO.

Meziprodukt 58

K 4-methoxy~3~methylbenzalehydu (1 ekv.., Acros) v ethanolu (150 ml) při teplotě místností se přidá H2NOH,HC1 (1,6 ekv.), (3 ekv.), NaOAc ve 150 ml vody a reakční směs se míchá 2 hodiny. EtOH se odpaří a odparek se extrahuje dichlormethanem (3 x 50 ml). Spojené organické vrstvy se promyjí vodou, vysuší síranem sodným, zfiltrují a odpaří do sucha k získání sloučeniny pojmenované v záhlaví jako bílé tuhé látky (9.3 %) .

Teplota tání ---- 71 až 73 °C.

Meziprodukt 59

Cl ·. * » ·» ·· ·· · ♦ ·i «« · · ··· • · ·«· ·· * • · · ······ · • · ······ ···· ··· ··· ·· ·* ····

K meziproduktu 58 (1 ekv.) v methanolu (200 ml) pří teplotě místnosti se přidá [MeCO₂]NH₄ (6 ekv.), Pd/C (0,01 ekv.) a molekulární síta. Reakční směs se poté zahřívá na teplotu zpětného toku 18 hodin. Reakční směs se zfiltruje přes rozsivkovou zeminu, odpaří do sucha a zpracuje se s kyselinou chlorovodíkovou (IN). Vodná vrstva se promyje dichlormethanem, zfiltruje, alkalizuje na pH >14 a extrahuje dichlormethanem (3 x 50 ml). Spojené organické vrstvy se promyjí vodou, vysuší síranem sodným, zfiltrují a odpaří do sucha k získání sloučeniny pojmenované v záhlaví jako oleje (46 %).

MS m/z 151.

HO

Meziprodukt 60

Meziprodukt 59 (1 ekv.) v přebytku 40% HBr/voda (Aldrich) se zahřívá na teplotu zpětného toku 18 hodin. Reakční směs se poté odpaří do sucha k získání hydrobromidové soli sloučeniny pojmenované v záhlaví jako šedé tuhé látky (97 %).

Teplota tání = 235 až 237 °C.

KCk

NHBoc

Meziprodukt 61

V'1 ♦· ♦ »«· ·»»· «··· * · * « ...

• · ··«'·« · • 4 · ·····« · « · · «· · · · ···· ··· ··· «· 4» ····

K meziproduktu 60 (1 ekv.) v dichlormethanu (300 ml) při teplotě 0 °C .se přidá EtaN (3 ekv.). Po kapkách se přidá Boc anhydrid (0,£i5 ekv.) v dichlormethanu (50 ml). Reakční směs se nechá ohřát na teplotu místnosti a v míchání se pokračuje 18 hodin. Přidá se kyselina chlorovodíková (IN) a reakční směs se extrahuje dichlormethanem (3 x 100 ml). Organické vrstvy se promyjí vodou, vysuší síranem sodným., zfiltrují a rozpouštědlo se odpaří ve vakuu k získání sloučeniny pojmenované v záhlaví jako bílé tuhé látky (96 %),

Teplota tání = 105 až 107 ’C.

NHBoc

Meziprodukt 62

K meziproduktu 61 (1 ekv..} v dimethylformamidu (150 ml) se přidá roztok uhličitanu draselného (3 ekv.) a reakční směs se zahřívá na teplotu 70 ^VC. Po kapkách se přidá ethyl-(2-brom-2~methylproprionát) (1,3 ekv.) a reakční směs se míchá 72 hodin při teplotě 70 °C„ Reakční směs se vlije na led a extrahuje se dichlormethanem (3 x 150 ml) . Spojené organické vrstvy s.e promyjí roztokem hydroxidu sodného (0,5N), poté vodou, a vysuší síranem sodným, roztok se zfiltruje a odpaří do sucha k získání sloučeniny pojmenované v záhlaví jako oleje (69 %) .

^XH NMR (CDC1₃) : δ 7,05 (d, l.H) , 6,90 (dd, 1H) , 6,60 (d,

1H), 4,80 (široký s, 1H>, 4,25 (q, 2H), 4,20 (d, 2H), 2,20 (s, 3H), 1,50 (s, 6H), 1,45 (s, 9H), 1,25 (t, 3K).

• 4 · · · · ♦ * « «Ο ···*<· · • « ······' ···· ··· ·»· ·· ·* ···»

Meziprodukt 63

Κ meziproduktu 62 (1 ekv.) v dichlormethanu (10 ml) při teplotě místnosti se po kapkách přidá CF3COOH (7 ekv.) a reakční směs se míchá při teplotě místnosti 18 hodin. Reakční směs se odpaří do sucha, zpracuje se s nasyceným roztokem uhličitanu draselného a extrahuje se díchlormethanem (3 x 150 ml). Spojené organické vrstvy se vysuší síranem sodným, zfiltrují a odpaří do sucha k získání sloučeniny pojmenované v záhlaví jako oleje (82 %).

^XH NMR (CDCI3) : δ 7,00 (d, 1H), 6,90 (dd, 1H), 6,55 (d,

1H), 4,20 (q, 2H), 3,70 (s, 2H), 2,15 (s, 3H) , 1, 85 (široký s, 2H), 1,50 (s, 6H), 1,20 (t, 3H).

Meziprodukt 64

K 4-hydroxybenzaldehydu (1 ekv.) v dimethylformamidu (150 ml) se přidá NaH (1,5 ekv.) a reakční směs se míchá při teplotě 80 °C 30 minut. Po kapkách se přidá ethyl-(2-brom-2-methylproprionát) (1,2 ekv.) a reakční směs se míchá 24 hodin při teplotě 80 °C. Reakční směs se odpaří do sucha, odparek se zpracuje NaOH a extrahuje se dichlormethanem (5 x 100 ml). Spojené organické vrstvy se vysuší síranem sodným, zfiltrují a rozpouštědlo odpaří k získání

surového meziproduktu 64. Po chromatogra---________ — eluuje.směsí dichlormethan/methanol (98:2) se získá sloučenina pojmenovaná v záhlaví jako olej (20 %).

^XH NMR (CDC1₃) : δ 9,80 (s, 1H) , 7,75 (d, 2H) , 6,80 (d, 2H] 1,55 (s, 6H), 1,3 (s, 9H).

O

OH

Meziprodukt 65

K meziproduktu 64 (1 ekv.) v methanolu (50 ml) pří teplotě místností se přidá NaBH₄ (1 ekv.) a reakční směs se míchá při teplotě místnosti zatímco se sleduje pomocí TLC (dichlormethan/methanol (98:2); Rf = 0,45). Když veškerý výchozí materiál zmizí, rozpouštědlo se odpaří do sucha, odparek se zpracuje s vodou a extrahuje se dichlormethanem (3 x 50 ml). Spojené organické vrstvy se vysuší síranem sodným, zfiltrují a odpaří do sucha k získání sloučeniny pojmenované v záhlaví jako polotuhé látky (1.00 %) .

^XH NMR (CDCI3) 1,50 (s, 6H), δ 7,20 (d, 2H), 6,80 (d, 2H), 4,55 (s, 2H) , 1,35 (s, 9H).

HO,

CF,

Meziprodukt 66 • · 9 · · · · · 9 9 • I · · 9 9 9» * * * .· : .

• · 9 9 9 9 9 · « · 9 · ··· 999 *9 · · 9999

Κ 4~hydroxyfe.nethylaminu (1 ekv.) v dimethylformamidu (75 ml) při teplotě místnosti se přidá HOBT (1,1 ekv.), EDC (1,1 ekv.) a Et₃N (1,5 ekv.). K této směsi se po kapkách přidá meziprodukt. 3 v dimethylformamidu a reakční směs se míchá při teplotě místnosti 18 hodin. Reakční směs se odpaří do sucha, zpracuje se s kyselinou chlorovodíkovou (1N) a extrahuje se ethyl-acetátem (3 x 150 ml). Spojené organické vrstvy se vysuší síranem sodným, zfiltrují a odpaří do sucha. Surový meziprodukt 66 se chromatogafuje, přičemž se eluuje. směsí dichlormethan/methanol (9:1) k získání sloučeniny pojmenované v záhlaví jako bílé tuhé látky (64 %).

^]'H NMR (CDCIa): 8 9,2 (s, 1H) , 8,40 (t, 3H) , 8,10 (d, 2H) , 7/85 (d, 2H) , 7,05 (d, 2H), 6,70 (d, 2H), 3,40 (m, 2H),

2,70 (m, 2H), 2,60 (s, 3H).

Příklad 1

Ethylester 2-methyl-2-[4-({[4-methyl-2-(4-trifluormethylfenyl)nhiazol-5-ylkarbonyl]amino}methyl)fenoxy]propionové kyseliny

K meziproduktu 4 (710 mg, 1,81 mmol) v dimethylformamidu (50 ml) se přidá uhličitan draselný (275 mg, 1,99 mmol) následovaný ethyl-(2-brom-2-methylpropanoátem) (280 μΐ, 1,91 mmol; Aldrich) a reakční směs se zahřívá na teplotu 80 °C. Po 18 hodinách se reakční směs ochladí na • * • * φ

ΦΦΦ • ·

Φ Φ Φ

Φ Φ

ΦΦΦΦ Φ Φ · teplotu místnosti a rozpouštědlo se odpaří ve vakuu.

Odparek se zpracuje s vodou (200 ml), extrahuje 3 x 50 ml dichlormethanu, vysuší síranem sodným, zfiltruje a rozpouštědlo se odpaří ve vakuu. Odparek se chromatografuje (dichlormethan/methanol, 99/1) k získání 680 mg (77 %) sloučeniny z příkladu 1 jako čirého oleje.

^ίΉ NMR (CDC1₃) 6,7 5 (d, 2H) , 2,65 (s, 3H), δ 7,95 6,05 (t, 1,50 (s, (d, 2H) , 7,60 1H), 4,45 (d, 6H), 1,20 (t, (d, 2H), 7,15 (d, 2H), 2H), 4,15 (q, 2H) ,

3H) .

Příklad 2

2-Methyl-2-[4-({[4-methyl-2-(4-trifluormethylfenyl)thiazo.l-5-ylkarbonylj amino}methyl) fenoxy]propionová kyselina.

Ke sloučenině z příkladu 1 (680 mg, 1,39 mmol) v methanolu se přidá 1N roztok hydroxidu sodného (1,6 ml, 1,6 mmol) a reakční směs se míchá při teplotě 60 °C. Po 18 hodinách se reakční směs ochladí na teplotu místnosti a rozpouštědlo se odpaří. Odparek se zpracuje s 1N kyselinou chlorovodíkovou, extrahuje 3 x 20 ml tetrahydrofuranu a rozpouštědlo se odpaří ve vakuu. Získá se 500 mg produktu (75 %). Sloučenina pojmenovaná v záhlaví se vysráží jako bílá tuhá látka, z minimálního objemu dichlormethanu a pentanu.

• * 9 · · · · · *· • · ·· ·· ♦ * * *4* f · · · · 9 · 4 « 9 9 9 9 9 9 9 · · * · · · · 9 9 · ···· 999 999 99 9· 9999

Teplota tání: kolísá od 60 do 70 °C; LC/MS (m/z): 477,22 (100%, AP-) , 479, 12 (100%, AP+) ; analýza pro C23H21F3N2O4S: C 5,71 (57,73), H 4,56 (4,42), N 5,77 (5,85), S 6,15 (6,70).

Zlepšená syntéza 2-methyl-2-[4-({[4-methyl-2-(4-trifluormethylfenyl) thiazol-5-ylkarbonyl] aminojmethyl) fenoxy]propionové kyseliny je:

Meziprodukt 67

K roztoku 212,8 g (1,79 mol) para-hydroxybenzonitrilu v 1,7 litru DMF (8 obj.) chlazeném na teplotu 15 °C se po částech přidá 121 g (3,04 mol, 1,7 ekv.) NaH dispergovaného v parafinu (60 %) během 35 minut. Po návratu na teplotu místnosti se směs míchá 30 minut a během 1 hodiny se pomalu přidá 393 ml (2,68 mol, 1,5 ekv.) ethyl-bromisobutyrátu. Během přidávání se okolní teplota udržuje pod 25 °C chlazením kvůli výskytu mírného exotermického průběhu. Směs se míchá přes noc při teplotě místnosti a zahřívá se na teplotu 80 °C 2 hodiny. Po ochlazení na teplotu pod 20 °C se přebytek hydridu sodného rozloží přidáním 600 ml IN roztoku hydroxidu sodného. Vodný roztok se extrahuje 3-krát 1 litrem ethyletheru. Spojené organické vrstvy se 2-krát promyjí 200 ml IN roztoku hydroxidu sodného (k eliminaci stop para-hydroxybenzonitrilu) a 500 ml roztoku chloridu sodného. Po vysušení síranem horečnatým se zfiltruje a odpaří do sucha, olejový odparek se slije a 33,5 g parafinového oleje se odstraní (horní vrstva). Odhaduje se, že 14,9 g zbytkového parafinového oleje se « ·* * 9 99

9 9 · 9 * » » · · · · · 9 · • Μ ····«» · • · * · · » · ·

9999 999 999 9 9 ·* »··· smísí se 189,9 g olejového odparku. Surový meziprodukt 67 se použije bez dalšího čištění. Výtěžek se odhaduje na 42 % (okolo 17 5 g) ..

Meziprodukt 68

V hydrogenátoru o objemu 1 litr se hydrogenuje směs 59,3 g meziproduktu 67 (0,254 mol. (maximálně).), 43,6 ml (0,762 mol, 3 ekv.) ledové kyseliny octové a 6 g (10 % hmotnostních) Pd/C 10% ve 250 ml ethylalkoholu při tlaku vodíku 2 00 kPa při. teplotě místnosti. Reakce se zastaví po 8 hodinách, když se absorbuje 8,7 litrů vodíku (teoretický objem: 11,4 litrů). Po odfiltrování katalyzátoru se roztok odpaří.do sucha k poskytnutí acetátové soli meziproduktu 68 (olejový odparek). Odparek se vlije do 300 ml vody (pH = 5,5) a vodná vrstva se extrahuje 2-krát 200 ml cyklohexanu. Během uéto operace se objeví gumovitá tuhá látka, která se nechá ve vodné vrstvě (pravdépodoně je to součást acetátové soli). Po přidání 400 ml ethyl-acetátu se bifázická směs ochladí na teplotu 15 °C a zpracuje se s 500 ml of IN roztoku hydroxidu sodného (na pH = 12). Po slití se vodná vrstva extrahuje 2~krát 400 ml ethyl-acetátu. Spojená organická vrstva se promyje 200 ml roztoku chloridu sodného.

Po vysušení síranem horečnatý se organická vrstva zfiltruje a odpaří do sucha k poskytnutí 35,5 g surového meziproduktu 68 (žlutý olej, výtěžek = 58,9 %), který se • * « 9 9 9 9 8 8 9 ♦ * · · «· · 8 8 ·· · 8 9 8 8 8

9 9 89 898 ····*·* 889 98 88 8898 použije kroku bez dalšího čištění (LC-MS čistota = okolo 90 %).

Meziprodukt 69

K suspenzi 302,4 g (1,47 mol) 4-(trifluormethyl)thiobenzamidu v 1,5 litru (5 obj.) ethylalkoholu se přidá pří teplotě místnosti najednou 203,8 ml (1 ekv.) ethyl-(2-chloracetoacetátu). Roztok se zahřívá na teplotu zpětného toku 24 hodin.. Reakční směs se sleduje pomocí TLC (dichlormethan) a HPLC. Po dokončení reakce se rozpouštědlo odpaří za sníženého tlaku. Tuhý materiál se míchá s 5Ό0 ml chlazeného hexanu 30 minut, zfiltruje a dvakrát promyje 150 ml hexanu. Po vysušení se získá 352,9 g surového meziproduktu 69. Druhý výtěžek 25,7 g se získá odpařením

Meziprodukt 70

Ke chlazenému roztoku 378,6 g (1,2 mol) meziproduktu 69 ve 2 litrech (5 obj.) ethylalkoholu se přidá 96,15 q (2 ekv.) hydroxidu sodného ve 2 litrech vody.

Roztok se zahřívá na teplotu 85 °C 1,5 hodiny. Po odpaření ethylalkoholu se vodný roztok naředí 2 litry vody a okyselí na hodnotu 5 pH ~ 1 koncentrovanou kyselinou chlorovodíkovou.. Tuhý materiál se zfiltruje, dvakrát promyje 1 litrem, vody a 1 litrem dichlormethanu. Po vysušení ve • ♦ • · · 9 ·»·

9 9 9 9

99 9 9 9999 vakuové sušárně se získá 267,2 g bělavého prášku. Druhý výtěžek 25,7 g se získá odpařením dichlormethanu a triturací pentanem. Celkový výtěžek je 85% (292,9 g).

Příklad 3

Ethylester 2-methyl-2-[4-({[4-methyl-2-(4-trifluormethylfenyl) t hí a zo.1--5-ylkarbonyl] amino} methyl) fenoxy] propionové kyseliny

Suspenze 38,7 g (0,13 mol) surového meziproduktu 70 ve 200 ml (5 obj.) thionylchloridu se zahřívá na teplotu zpětného toku 3 hodiny. Po návratu na teplotu místnosti se thionylchlorid odapří za sníženého tlaku, odparek se dvakrát suspenduje v toluenu (100 ml) a odpaří do sucha. Získaný surový chlorid kyseliny (bělavá tuhá látka) se použije bez čištění.? K roztoku 35,5 g (1 ekv.)/LC-MS čistota: 90 %) surového meziproduktu 68 a 20,62 ml (1,1 ekv.) triethylaminu v 350 ml dichlormethanu (10 obj.) udržovanému pří teplotě 10 °C se po částech během 20 minut přidá chlorid kyseliny. Směs se poté míchá při teplotě místnosti přes noc. Reakční směs se zalije dalšími 200 ml vody a míchá se 5 minut. Bifázická směs se slije a vodná vrstva se extrahuje dvakrát 200 ml dichlormethanu. Celá organická vrstva se se promyje postupně 200 ml kyseliny chlorovodíkové (IN), 200 ml vody, 200 ml nasyceného vodného roztoku uhličitanu sodného a200 ml roztoku chloridu sodného. Po vysušení síranem hořečnatým, filtraci

♦· 4 4 ♦· ♦ 4 4 4 * 4 4

4 4 >4 * • 444*4 4 4

4 4 4 » 4 • 444 44 44 4444 a odpaření do sucha se. surový materiál suspenduje ve 200 ml isopropyletheru, trituruje, zfiltruje a vysuší k poskytnutí 47,6 g sloučeniny z příkladu 3 (bílý prášek, výtěžek = 69,7

Příklad 4

2--Methyl~2- [4- ( { [4-methyl-2- (4-trifluormethylfenyl) thiazol-5-ylk.arbonyl] amino}methyl) fenoxy]propionová kyselina

K roztoku 230,8 g (0,46 mol) sloučeniny z příkladu 3 v 1,2 litru (5 obj.) tetrahydrofuranu se přidá 480 ml (1,05 ekv.) vodného roztoku hydroxidu sodného (1N). Roztok se míchá při teplotě zpětného toku 18 hodin. Po odpaření tetrahydrofuranu za sníženého tlaku se přidá 500 ml 1N roztoku hydroxidu sodného a 100 ml methylalkoholu. Vodná vrstva se extrahuje dvakrát 400 ml dichlormethanu a okyselí se na pH - 1 pomocí koncentrované kyseliny chlorovodíkové. Olejový odparek se extrahuje.dichlormethanem (3 x 400 ml). Celá organická vrstva se promyje 600 ml roztoku chloridu sodného. Po vysušení síranem horečnatým, filtraci a odpaření do sucha se olejový odparek organizuje s 500 ml pentanu, zfiltruje a promyje dvakrát 250 ml pentanu k poskytnutí, po vysušení, 207,2 g surové sloučeniny z příkladu 4 (bílý prášek). Tuhý materiál se rozpustí ve 310 ml (1,5 obj.) toluenu zahřívaného na teplotu zpětného toku. Po filtraci horkého roztoku a návratu na teplotu místnosti se krystalizovaný materiál zfiltruje, promyje dvakrát 200 • 6

·♦ • » ···» · «♦ ml toluenu a vysuší ve vakuové sušárně k poskytnutí 196,3 g bílého prášku sloučeniny z příkladu 4 (výtěžek = 90 %), teplota tání - 130 až 131 °C; TLC (dichlormethan/methanol = 9/1): monospot, HPLC analýza: 99,5% (detekce při 310 nm).

O

Příklad 5

Ethylester N-methyl-2-methyl~2~[4-({[4-methyl-2-(4-trifluormethylfenyl)thiazol-5-ylkarbonyl]amino[methyl)fenoxy]propionové kyseliny

K roztoku sloučeniny z příkladu 4 (600 mg, 1,2 mmol) v 50 ml dimethylformamidu se přidá 32 mg (1,1 ekv.) NaH a směs se míchá při teplotě 40 °C 30 minut. Poté se přidá 85 μΐ (1,1 ekv.) Mel a reakční směs se míchá při teplotě 40 °C 18 hodin. Po odpaření dimethylformamidu za sníženého tlaku se odparek promyje vodou a extrahuje Et₂O (3 x 50 ml). Organická vrstva se spojí a vysuší síranem, sodným, zfiltruje, odpaří do sucha a chromatografuje 100% dichlormethanem, poté směsí dichlormethan/methanol 99 : 1. k získání 300 mcj sloučeniny z příkladu 5 jako čirého oleje (výtěžek -49%).

MS m/z 521 (M+l) .

O

4 « 44 44 4· * 4 4 4 4 4 » 4 44 • • 4 4 4 4 4 ·

44 4 · 4 4 4 · 4

4. 444 4 4 4

4444 444 4·4 »· 44 4444

Příklad 6

N-Methyl-2-methyl-2-[4- ({[4-methyl-2-(4-trifluormethylfenyl)thiazol-5-ylkarbonyl]aminoJmethyl)fenoxy]propionová kyselina

K roztoku sloučeniny z.příkladu 5 (300 mg, 0,6 mmol) v 50 ml ethanolu se přidá 692 μΐ (1,2 ekv.) hydroxidu sodného (IN) a směs se míchá při teplotě 60 °C 18 hodin. Po odpaření ethanolu za sníženého tlaku se odparek zpracuje s kyselinou chlorovodíkovou a tuhá látka se zachytí, vysuší ve vakuu a rekrystaluje z i-Pr₂O k získání 230 mg sloučeniny z příkladu .6 jako bílé tuhé látky (výtěžek - 49 %) ,

MS m/z 493 (M+l).

Obecný postup 5 pro přípravu solí 2-methyl-2-[4-({[4-methyl-2-(4-trifluormethylfenyl)thiazol-5-ylkarbony1]amino}methyl)fenoxy]propionové kyseliny

Při teplotě místnosti se k roztoku 500 mg sloučeniny z příkladu 2 ve 25 ml acetonitrilu přidá 1 ekvivalent báze’''. Po 3 nebo 24 hodinách míchání* se směs zfiltruje a tuhý materiál se promyje pentanem a vysuší ve vakuové sušárně*. (*Víz tabulka 1 s výsledky uvedená dále).

· · ♦ ♦ · • 9

9

9999 999

9 9 9 · 9

9 9 9 9 *9 9 9 9999

Tabulkči 1

	Báze	Množ- ství báze	Doba míchání	Množ- ství solí	Výtěžek
Příklad 5	Hydroxid sodný (IN roztok)	1,05 ml	24 h	0,37 g	71 %
Příklad 6	N	58 μΐ	3 h	0,38 g	68 %
Přiklad 7	HO^^.nx^OH	100,2 μΐ	3 h	0, 55 g	90 %
Příklad 8	OH OH ^'-'γ'^'γ^^ΟΗ · OH OH	0,204 g	24 h	0,69 g	98 %

Ethylester 2-methyl-2-[4-({[4-methyl-2-(4-trifluormethylfenyl) thiazol-5-ylkarbonyl]amino}methyl)fenoxy]propionové kyseliny

K meziproduktu 66 (1 ekv.) v dimethylformamidu (150 ml) se přidá uhličitan draselný (1,2 ekv.), ethyl-(2-brom-2-methy.lpropionát) (1,1 ekv.) a reakční směs se míchá při teplotě 80 °C 18 hodin. Reakční směs se odpaří do sucha, odparek se zpracuje s hydroxidem sodným (IN) a extrahuje se EtOAc (4 x 50 ml). Spojené organické vrstvy se vysuší síranem sodným, zfiltrují a rozpouštědlo se odpaří k získání surové sloučeniny z příkladu 9. Po chromáto65 • * ·· ·· ♦· •· ··«· · * * • · « · * « · ·····«·· · • ······ »·# ··· ♦· ·» ··*· grafování, přičemž se eluuje směsí dichlormethan/methanol (95:5), se získá sloučenina pojmenovaná v záhlaví jako bílá tuhá látka (86%).

’Ή NMR (CDCI3) : δ 7,95 (d, 2H) , 7,6 (d, 2H) , 7,05 (d, 2H) , 6,75 (d, 2H), 5,70 (t, 1H), 4,20 (q, 2H), 3,60 (m, 2H),

2,80 (m, 2H), 2,75 (s, 3H), i,50 (s, 6H), 1,20 (t, 3H).

Obecný postup 6 pro peptidovou kondenzační reakci mezi meziprodukty typu A a B

K meziproduktu B (1 ekv.) v dichlormethanu (75 ml) při teplotě místnosti se přidá HOBT (1,1 ekv.), EDO (1,1 ekv.) a Et₃N (3 ekv.). Ke této směsi se přidá meziprodukt A a reakční směs se míchá při teplotě místnosti 18 hodin. Reakční směs se promyje kyselinou chlorovodíkovou (1N), roztokem hydroxidu sodného (1N) a 2 x vodou.

Organická vrstva se vysuší síranem sodným, zfiltruje a odpaří do sucha. Surová sloučenina se chromatogafuje nebo krystaluje jak je nezbytné k získání konečného produktu.

Obecný postup 7 pro alkylační reakci mezi meziprodukty typu A a C

K meziproduktu B (1 ekv.) v toluenu (25 ml) se přidá thionylchlorid a reakční směs se zahřívá na teplotu 80 °C 18 hodin. Reakční směs se odpaří do sucha k získání surového meziproduktu C, který se znovu rozpustí v 10 ml toluenu a znovu odpaří do sucha. K meziproduktu A a Et₃N (3 ekv.) v dichlormethanu (50 ml) a při teplotě místnosti se přidá meziprodukt C (1 ekv.) v dichlormethanu a reakční směs se míchá pří teplotě místnosti 3 hodiny. Reakční směs se promyje kyselinou chlorovodíkoovu (1N), roztokem

B B B B B BBB · ·

B · BBB BBB

BBBB BBB BBB BB BB BBB· hydroxidu sodného (IN) a vodou. Organická vrstva se vysuší síranem, sodným, zfiltruje a odpaří do sucha. Surová sloučenina se chromatogafuje nebo rekrystaluje jak je nezbytně k získání konečného produktu.

Obecný postup 8 pro hydrolýzu ethylesterů

K roztoku ethylesterů (1 mmol) v methanolu (50 ml) se přidá (3 ekv.) roztok hydroxidu sodného (IN) a směs zahřívá na teplotu 60 °C přes noc. Reakční směs se ochladí na teplotu místnosti a roztok se okyselí kyselinou chlorovodíkovou (IN) a extrahuje s dichlormethanem (3 x 25 ml). Spojené organické vrstvy se promyjí vodou, vysuší síranem sodným, zfiltrují a odpaří do sucha. Tuhá látka se trituruje EtsO, zachytí a vysuší ve vakuu k získání konečného produktu.

Příklad 10

2~Methyl~2~[4-({[4-methyl-2-(4-trifluormethylfenyl)thíazol-5-ylkarbonyl] amirio}ethyl) fenoxy]propionová kyselina

Sloučenina z příkladu 9 se nechá reagovat podle popisu v obecném postupu 8 k získání sloučeniny pojmenované v záhlaví jako bílé tuhé látky (74 %).

MS m/z 4 93 (Mn-l) .

O

o » · · « · « « • · ·

Příklad 11

4-(1-terc-Butoxyka rbonyl-l-methylethoxy)benzylester kyseliny 4-methyl-2-(4-trifluormethylfenyl)thiazol-5-karboxylové

K meziproduktu 65 (1 ekv.) v dimethylformamidu '(150 ml) se přidá meziprodukt 3 (1 ekv.), DMAP (0,1 ekv.) a DIC (1,1 ekv.}. Reakční směs se míchá při teplotě místnosti, přičemž se sleduje pomocí TLC (díchlormethan/methanol (98:2); R_f = 0,85). Reakční směs se odpaří do sucha, odparek se zpracuje s NaOH (IN) a extrahuje dichlormethanem (5 x 100 ml). Spojené organické vrstvy se vysuší síranem sodným, zfiltrují a rozpouštědlo se odpaří k získání surové sloučeniny z příkladu 11. Po chromatografování, přičemž se eluuje směsí dichlormethan/methanol (80:20) se získá sloučenina pojmenovaná v záhlaví jako čirý olej,- který tuhne během stání (44 %).

Teplota tání ~ 72 °C.

Příklad 12

Ethylester 2~methyl~2-[4—({[4-methyl-2-(4-terc-butylfenyl)68 «· ·· ·· « » ·· ·* 9 · · » · • 4 · · · · · · • ·« ······ · « ··· ··· ·*·· ··· ··· «· ·· ···» ~thiazol~-5-ylkarbonyl]amino}ethyl)fenoxy]propionové kyseliny

Meziprodukt 24 a meziprodukt 68 se nechají reagovat podle popisu v obecném postupu 6 k získání sloučeniny pojmenované v záhlaví jako bílé tuhé látky (72 %). Chromatografie: dichlormethan, poté směs dichlormethan/methanol (99:1), poté směs dichlormethan/methanol (98:2).

MS m/z 495 (M + l).

Příklad 13

2-Methyl--2~ [4-- ({ j, 4~methyl-4-terc-butylfenyl) thiazol-5-ylkarbonyl]aminoJmethyl)fenoxy]propionové kyselina

Sloučenina z příkladu 12 se nechá reagovat podle popisu v obecném postupu 8 k získání sloučeniny pojmenované v záhlaví jako bílé tuhé látky (22 %).

MS m/z 466 (M+l). '

Příklad lí

Ethylester 2-methyl-2-[4-({[4-methyl-2-(4-isopropylfenyl)thiazol-5-ylkarbonyl]amino}methyl)fenoxy]propionové kyseliny • 9 • 99 • *9 • * 9 · • 9 9

9« • 9 9 «99 «·

9« 9 9 • *·

9 · • 99 9

9« ·· 99·9

Meziprodukt 25 a meziprodukt 68 se nechají reagovat podle popisu v obecném postupu 6 k získání sloučeniny pojmenované v záhlaví jako bílé tuhé látky (54 %). Chromatografie: dichlormethan, poté směs dichlorrnethan,/methanol (99:1), poté směs dichlormethan/methanol (.98:2),

Příklad 15

2-Methyl--2- [4- ({ [4-methyl-2- (4-isopropylfenyl) thiazol-5-ylkarbonyljamino}methyl)fenoxy]propionová kyselina

Sloučenina z příkladu 14 se nechá reagovat podle popisu v obecném postupu 8 k získání sloučeniny pojmenované v záhlaví jako bílé tuhé látky (100 %) .

MS m/z 453 (M+l).

Přiklad 16

Ethylester 2-methyl-2-[4 - ({[4-methyl-2-(4-nitrofenyl)thiazol-5-ylkarbonyl]amino)methyl)fenoxy]propionové kyseliny n · • t ·· • * » · · • · ··*· >**

99 *» «· · 9 « * » • · · « · · ·>···· 9 • · · · » « »0* ·» ·· ···*

Meziprodukt 26 a meziprodukt 68 se nechají reagovat podle popisu v obecném postupu 7 k získání sloučeniny pojmenované v záhlaví jako hnědavě žlutého oleje (71 %). Chromatografie: dichlormethan/methanol (99,5:0,5).

NMR (CDC1₃) 6,75 (d, 2H), 2,65 (s, 3H), δ 8,15 (d, 2H), 7,95 (d, 2H), 7,15 (d, 2H), 6,15 (t, 1 H), 4,45 .(d, 2H), 4,15 (q, 2H), 1,50 (s, 6H), 1,15 (t, 3H).

Příklad 17

2~Methyl~2-[4-(([4-methyl-2-(4-nitrofenyl)thiazol-5-ylkarbonyl]aminoJmethyl)fenoxy]propionová kyselina

Sloučenina z příkladu 16 se nechá reagovat podle popisu v obecném postupu 8 k získání sloučeniny pojmenované v záhlaví jako žluté tuhé látky (34 %).

Teplota tání 164 °C.

o

Ethylester 2-methyl-2-[4-({[4-methyl-2-(4-aminofenyl)thiazol-5-ylkarbonyl]aminoJmethyl)fenoxy]propionové kyseliny • *

Příklad .18

K meziproduktu 16 v ethanolu (75 ml) se přidá 10% Pd/C (0,01 ekv.). Reakční směs se zbaví plynu a umístí se pod atmosféru vodíku při teplotě místnosti na dobu 18 hodin. Reakční směs se zfiltruje přes rozsivkovou zeminu a rozpouštědlo se odpaří ve vakuu k získání sloučeniny pojmenované v záhlaví jako žlutého oleje (100 %) .

MS m/z 4 54 (M+l) .

Příklad 19

2-Methyl-2- [4--(( [4-methyl-2- (4-aminofenyl) thiazol-5-ylkarbonyljamino}methyl)fenoxy]propionová kyselina

Sloučenina z příkladu 18 se nechá reagovat podle popisu v obecném postupu 8 k získání sloučeniny pojmenované v záhlaví jako žluté tuhé látky (80 %).

MS m/z. 4 26 (M+l) .

'0

O

Příklad 20

Ethylester 2-methyl-2-[4-({[4-methyl-2-(3,4-dichlorfenyl)-thiazol-5-ylkarbonyl]amino}methyl)fenoxy]propionové kyseliny

Meziprodukt 27 a meziprodukt 68 se nechají reagovat podle popisu v obecném postupu 7 k získání sloučeniny pojmenované v záhlaví jakoé bílé tuhé látky (55 %). Chromatografie: dichlormethan, poté směsí dichlormethan/MeOH (99,5:0,5).

MS m/z 507

Příklad 21

2-Methyl-2~ [4-- ({ [4-methyl-2- (3, 4-dichlorfenyl) thiazol-5-ylkarbony!]amino}methyl)fenoxy]propionová kyselina

Sloučenina z příkladu 24 se nechá reagovat podle obecném postupu 8 k získání sloučeniny pojmenované jako bílé tuhé látky (84 %).

popisu v v záhlaví

Příklad 22

Ethylester 2-methyl-2-[4-({ [4-methyl-2-(3-fluor-4-trifluor73

methytfenyl)thiazol-5-ylkarbonyl]aminojmethyl)fenoxy]propionové kyseliny

Meziprodukt 28 a meziprodukt 68 se nechají reagovat podle popisu v obecném postupu 6 k získání sloučeniny pojmenované v záhlaví jako čirého oleje (52 %). Chromatografie: cyklohexan/EtOAc (9:1 až 7:3).

XH NMR	(DMSO-d6) : δ	8,90	(t,	1H) ,	8,00	(m,	3H) ,	7,25 (d,
2H), 6,	75 (d, 2H),	4,40	(d,	2H) ,	4,15	(q.	2H) ,	2,65 (s,
3H), 1,	55 (s, 6H) ,	1,15	(t,	3H) .

Příklad 23

2-Methyl-2-[4-({[4-methyl-2-(3-fluor-4-trifluormethyl~ fenyl)-thiazol-5-y1 karbony1]amino}methyl)fenoxy]propionová kyselina

Sloučenina z příkladu 22 se nechá reagovat podle popisu v obecném postupu 8 k získání sloučeniny pojmenované v záhlaví jako bílé tuhé látky (70 %).

MS (ΆΡ-) m/z 495 (M-l).

O * ·· ·· ·· • · · · ♦ 9 9 • · ♦ ♦ ·

9 9 9 9 9 9 • · · · · « 999 99 99 999

Příklad 24

Ethylester 2-methyl~2-[4- ({[4-methyl-2-(4-bromfenyl)thiazol-5-ylkarbony!] amino}methyl) fenoxy] propionové kyseliny

Meziprodukt 29 a meziprodukt 68 se nechají reagovat podle popisu v obecném postupu 7 k získání sloučeniny pojmenované v záhlaví jako bílé tuhé látky (52 %) . Chromatografie: dichlormethan, poté směs dichlormethan/methanol (99,5:0,5), poté směs dichlormethan/meťhanol (99:1).

ΧΗ	NMR	(CDC13) :	δ 7	,55 (d,	2H), 7,	35	(d, 2H), 7,	05	(d, 2H),
6,	65 (	d, 2H),	6,25	(t, 1H)	, 4,35	(d,	2H], 4,10	(q.	2H) ,
2,	55 (	S, 3H),	1,4 5	(s, 6H)	, 1,10	(t,	3H) .

Příklad 25

2-Methyl~-2~[4-({[4-methyl-2-(4-bromfenyl)thiazol-5-ylkarbonyl]amino}methyl)fenoxy]propionová kyselina

Sloučenina z příkladu 24 se nechá reagovat podle popisu v obecném postupu 8 k získání sloučeniny pojmenované v záhlaví jako bílé tuhé látky (90 %).

MS m/z 489

-N

CH

O • · ♦ · 99 98 * · · ♦ ·

Příklad 26

Ethylester 2-methyl-2-[4-({[4-methyl-2-(4-ethylfenyl)thiazol-5-ylkčirbonyl] amino }methyl) fenoxyj propionové kyseliny

Meziprodukt 30 a meziprodukt 68 se nechají reagovat podle popisu v obecném postupu 6 k získání sloučeniny pojmenované v záhlaví jako čirého oleje (54 %) . Chromatografie: cyklohexan/EtOAc (8:2 až 6:4).

^]H NMR (DMSO-dg) : δ 8,55 (t, 1 H) , 7,65 (d, 2H) , 7,10 (d, 2H), 7,00 (d, 2H), 6,55 (d, 2H), 4,15 (d, 2H), 3,95 15 (q, 2H), 2,45 (q, 2H), 2,40 (s, 3H), 1,30 (s, 6H) , 1,00

Příklad 27

2-Methyl-2-[4-({[4-methyl-2-(4-ethylfenyl)thiazol-5-ylkar~ bonyl]amino}methyl)fenoxyjpropionová kyselina

Sloučenina z příkladu 26 se nechá reagovat podle popisu v obecném postupu 8 k získání sloučeniny pojmenované v záhlaví jako bílé tuhé látky (62 %).

MS m/z 4 39 (M-í-1) .

o

Příklad 28

Ethylester 2-methyl~2-(4-{[(4-methyl-2-fenylthiazol-5- ’ -ylkarbonyl)amino]methyl}fenoxy)propionové kyseliny

Meziprodukt 31 a meziprodukt 68 se nechají reagovat podle popisu v obecném postupu 7 k získání sloučeniny pojmenované v záhlaví jako čirého oleje (52 %).

^]·Η NMR (CDC1₃) : δ 7,85 (m, 2H)', 7,35 (m, 3H) , 7,15 (d, 2H), 6,75 (d, 2H)-, 6,00 (t, 1H) , 4,50 (d, 2H) , 4,15. (q, 2H) , 2,65 (s, 3H),1,5 (s, 6H) , 1,2 (t, 3H) .

Příklad 29

2~Methyl~2-(4-{[(4-methyl-2-fenylthiazol-5-ylkarbonyl)amino] methyl.} fenoxy) propionová kyselina

Sloučenina z příkladu 28 se nechá reagovat podle popisu v obecném postupu 8 k získání sloučeniny pojmenované v záhlaví jako bílé tuhé látky (46 %).

Teplota tání 17 9 ^UC.

Příklad 30

Ethylester 2-methyl~2~[4-({[4-methyl-2-(4-fluorfenyl)thíazol-5-ylkarbony!]amino}methyl)fenoxy]propionové kyseliny

Meziprodukt 32 a meziprodukt 68 se nechají reagovat podle popisu v obecném postupu 7 k získání sloučeniny pojmenované v záhlaví jako čirého oleje, který při stání tuhne (63 %) . Chromatografie: dichlormethan, poté dichlormethan/methanol (99,5:0,5).

NMR (CDC1₃) : δ 7,85 (dd, 2H) , 2H), 6,80 (d, 2H), 6,35 (t, 1H) 2H), 2,63 (s,,3H), 1,55 (s, 6H)

7,20 (d, 2H), 7,08 (t,

4,50 (d, 2H), 4,20 (q, 1,23 (t, 3H).

Příklad 31

2-Methyl~2- [4--(( [ 4~methyl-2- (4-fluorfenyl) thiazol-5-ylkarbonyl]amino}methyl)fenoxy]propionové kyselina

Sloučenina z příkladu 30 se nechá reagovat podle popisu v obecném postupu 8 k získání sloučeniny pojmenované v záhlaví jako bílé tuhé látky (72 %).

Teplota tání - 159 °C; MS m/z 429 (M+l).

'0 o

Cl

Příklad 32

Ethylester 2-methyl~2-(4-({[4-methyl-2-(4-chlorfenyl)thiazol-5-ylkarbony1]aminojmethyl)fenoxy]propionové kyseliny

Meziprodukt. 33 a meziprodukt 68 se nechají reagovat podle; popisu v obecném postupu 7 k získání sloučeniny pojmenované v záhlaví- jako čirého oleje (78 %). Chromatografie: dichlormethan, poté směs dichlormethan/methanol (99:1).

ΧΗ NMR (CDC13) : 87,	7 5	(d,	2H), 7,35 (d,	2H), 7,15	(d, 2H),
6,75 (d, 2H), 6,05	ít,	1H)	, 4,45 (d, 2H)	, 4,20 (q,	2H) ,
2,65 (s, 3H), 1,50	(s,	6H)	, 1,20 (t, 3H)	•

Příklad 33

2-Methyl~2-[4-({[4~methyl-2-(4-chlorfenyl)thiazol-5-ylkarbonyl]aminojmethyl)fenoxy]propionové kyselina

Sloučenina z příkladu 32 se nechá reagovat podle popisu v obecném postupu 8 k získání sloučeniny pojmenované v záhlaví jako bílé tuhé látky (30 %).

Teplota tání = 131 °C.

• ·	9 ··		··
• · ·	·· · ·	• ·	•
• ·		• «	•
•	• · ·	• ·	•
• · · · ·	• · · « ·	··	• · » ·

Ethylester 2-methyl-2- [ 4 — ({ [4-methyl-2- (4-trifluormethoxyfenyl) thíazol-5-ylkarbonyl] amino]methyl) fenoxy]propionové kyseliny

Meziprodukt 34 a meziprodukt 68 se nechají reagovat podle popisu v obecném postupu 6 k získání sloučeniny pojmenované v záhlaví jako žlutého oleje (41 %). Chromatografie: dichlormethan/methanol (99,5:0,5).

Úl NMR (CDC1₃) : δ 7,90 (d, 2H) , 7,20 (d, 2H) , 7,15 (d, 2H), 6,75 (d, 2.H), 6,05 (t, 1H) , 4,45 (d, 2H) , 4,15 (q, 2H) ,

HO

Příklad 35

2-Methyl-2-[4-({[4-methyl-2-(4-trifluormethoxyfenyl)thiazol-5-ylkarbonyl]aminoJmethyl)fenoxy]propionová kyselina

Sloučenina z příkladu 34 se nechá reagovat podle popisu v obecném postupu 8 k získání sloučeniny pojmenované v záhlaví jako hnědého viskózního oleje (45 %).

Hí NMR (CDCI3) : δ 7,85 (d, 2H) , 7,20 (d, 2H) , 7,20 (d, 2H) ,

6,85 (d, 2.H), 6,05 (t, 1H) , 4,50 (d, 2H) , 2,65 (s, 3H) ,

1,50 (s, 6H).

OMe ·» a· a a • » » a · a • » a « a a «a aa aaia

Příklad 36

Ethylester 2-methyl--2- [4- ({ [4-methyl-2- (4-methoxyfenyl) thiazol-5-ylkarbonyl]aminoJmethyl)fenoxy]propionové kyseliny

Meziprodukt 35 a meziprodukt 68 se nechají reagovat, podle popisu v obecném postupu 6 k získání sloučeniny pojmenované v záhlaví jako čirého oleje, který během stání tuhne (22 %). Chromatografie: cyklohexan/EtOAc (1:1) .

hl NMR ' (DMSO~d6) : δ	8,7 5	(t,	1H) ,	7,90	(d,	2H) ,	7,20	(d,
2H), 7,05	(d, 2H),	6,7 5	(d,	2H) ,	4,35	(d,	2H) ,	4,15	(q,
2H), 3,80	(s, 3H),	2, 5.5	(s,	3H) ,	1,50	(s,	6H),	1,15	(t,

3H) .

O

Přiklad 37

2-Methyl~2-[4-({[4-methyl-2-(4-methoxyfenyl)thiazol-5-ylkarbonyl]aminoJmethyl)fenoxy]propionové kyselina

Sloučenina z příkladu 36 se nechá reagovat podle popisu v obecném postupu 8 k získání sloučeniny pojmenované v záhlaví jaké béžové tuhé látky (51 %).

MS m/z 441 (M+l).

Příklad 38

Ethylester 2-methyl~2~[4-({ [4-methyl-2-(4-acetylenylfenyl)thiazol-5-ylkarbonyl]amino} methyl)fenoxy]propionové kyseliny

Meziprodukt 38 a meziprodukt 68 se nechají reagovat podle popisu v obecném postupu 6 k získání sloučeniny pojmenované v záhlaví jako hnědého oleje, který během stání tuhne (84 %) . Chromatografie: dichlormethan/Et0Ac (95:5) .

MS m/z 4 63 (M+l) .

o

o . 4 *

Přiklad 39

2-Methyl-2-[4-({[4-methyl-2-(4-acetylenylfenyl)thiazol-5-ylkarbonyl]amino}methyl)fenoxy]propionová kyselina

Sloučenina z příkladu 38 se nechá reagovat podle popisu v obecném postupu 8 k získání sloučeniny pojmenované v záhlaví jako světle růžové tuhé látky (44 %) .

MS (AP~) m/z 433 (M-l).

Příklad 40

Ethylester 2-methyl-2-[4-({[4-trifluormethyl-2-(4-trifluormethylfenyl)thiazol-5-ylkarbonyl]amino}methyl)fenoxy]propionové kyseliny

Meziprodukt 42 a meziprodukt 68 se nechají reagovat podle popisu v obecném postupu 7 k získání sloučeniny pojmenované v záhlaví jako čirého oleje (69 %).

Chromá-	cografie: dichlormethan.
]'H NMR	(CDC13) : δ 8,	,00 (d, 2H), 7,	65	(d, 2H), 7,	15	(d, 2H),
6,75 (<	d, 2H), 6,35	(t, 1H) , 4,50	(d,	2H), 4,15	(q,	2H) ,
1,50 (;	s, 6H) , 1,2 0	(t, 3H) .

Příklad 41

2-Methyl--2- [4- ({ [1, 4-trifluormethyl-2- (4-trifluormethylfenyl)thiazol-5-ylkarbonyl]amino}methyl)fenoxy]propionová kyselina

Sloučenina z příkladu 40 se nechá reagovat podle popisu v obecném postupu 8 k získání sloučeniny pojmenované v záhlaví jako čirého oleje, který se sráží v pentanu jako bílá tuhá látka (19 %) . Chromatografie: dichlormethan/methanol (95:5), poté dichlormethan/methanol/AcOH (95:5:2 ml).

NMR (DMSO-dg) : δ 9,55 (t, 1H) , 8,25 (d, 2H), 8,00 (d, 2H) , 7,25 (d, 2H), 6,85 (d, 2H), 4,45 (d, 2H), 1,55 (s, 6H) .

o

Příklad 42

Ethylester 2-methyl-2-[4-({[4-trifluormethyl-2-(4-terc-butylfenyl)thiazol-5-ylkarbonyl]amino)methyl)fenoxy]propionové kyseliny

Meziprodukt 42 a meziprodukt 68 se nechají reagovat podle popisu v obecném postupu 7 k získání sloučeniny pojmenované v záhlaví jako čirého oleje (21 %). Chromatografie: dichlormethan.

^XH NMR (CDC1₃) : δ 7,85 (d, 2H) , 7,45 (d, 2H) , 7,25 (d, 2H) , 6,85 (d, 2H), 6,40 (t, 1H) , 4,60 (d, 2H) , 4,25 (q, 2H) , 1,60 (s, 6H), 1,35 (s, 9H), 1,25 (t, 3H).

Příklad

2-Methyl--2- [4 - ( { [4-trifluormethyl-2- (4-terc-butylfenyl) thiazol-5-ylkarbonyl]amínojmethyl)fenoxy]propionová kyselina

Sloučenina z příkladu 42 se nechá reagovat podle popisu v obecném postupu 8 k získání sloučeniny pojmenované v záhlaví jako čirého oleje, který se sráží v pentanu jako bílá tuhá látka (100 %).

Příklad 44

Ethylester 2-methyl~2-[4-({[4-methyl-2-(4-trifluormethylfenyl )oxazol-5-ylkarbony!]amínojmethyl)fenoxy]propionové kyseliny

Meziprodukt. 52 a meziprodukt 68 se nechají

I* reagovat.podle popisu v obecném postupu 7 k získání sloučeniny pojmenované v záhlaví jako čirého oleje (58 %) Chromatografie: dichlormethan/methanol (99,5:0,5).

	NMR (CDC13)	: δ 8,	05	(d,	2H), 7,	65	(d, 2
7,	15 (d, 2H),	6, 75	(d,	2H)	, 4,50	(d,	2H),
2,	70 (s, 3H),	1,50	(s,	6'H)	, 1,20	(t,	3H) .

Příklad

2-Methyl-2- [4- ({ [4-methyl-2- (4-trif luormethylfenyl) oxazol-5-ylkarbonyl]amino}methyl)fenoxy]propionová kyselina

Sloučenina z příkladu 44 se nechá reagovat podle popisu v obecném postupu 8 k získání sloučeniny pojmenované v záhlaví jako žluté tuhé látky (98 %).

MS (AP-) m/z 461 (M~l).

Příklad 46

Ethylester 2-methyl-2-[4-({[4-methyl-2-(4-triflurmethyl-2-pyridyl) t.hiazol-5~ylkarbonyl] aminojmethyl) fenoxy] propionové kyseliny • · · « · · · ♦ β· • ♦ · · ·*· · « ·· * 9 9 9 9 9 9 9

9999 999 999 99 ·» ····

Meziprodukt 54 a meziprodukt 68 se nechají reagovat podle popisu v obecném postupu 6 k získání sloučeniny pojmenované v záhlaví jako čirého oleje (58 %). Chromatografie: dichlormethan/methanol (99,5:0,5).

Příklad 47

2-Methy1-2-[4-({[4-methyl-2-(4-trifluormethyl-2-pyridyl)thiazol-5~ylkarbonyl]amino Jmethyl)fenoxy]propionové kyselina

Sloučenina z příkladu 46 se nechá reagovat podle popisu v obecném postupu 8 k získání sloučeniny pojmenované v záhlaví jako bílé tuhé látky (11 %; směs volné báze a hydrochloridové solí).

^]'H NMR (CDC1₃) : δ 8,75 (s, 1H) , 8,20 (d, 2H) , 7,95 (d, 2H) , 15 7,15 (d, 2.H) , 6,85 (d, 2H) , 6,20 (t, 1H), 4,45 (d,

2H), 2,65 (s, 3H), 1,50 (s, 6H).

Příklad 48

Ethylester 2-methyl-2-[2--methoxy-4-({[4-methyl-2-(4triflurmethylfenyl)thíazc>l-5~ylkarbonyl]amino}methyl)fenoxy]propionové kyseliny

Meziprodukt 3 a meziprodukt 57 se nechají reagovat podle popisu v obecném postupu 6 k získání sloučeniny pojmenované v záhlaví jako čirého oleje (37 %) .

MS m/z 537 (M+l).

Příklad 49

2-Methyl--2- [2--methoxy-4- ({ [ 4-methyl-2- (4-trifluormethylfenyl)thiazol-5-ylkarbonyl]aminojmethyl)fenoxy]propionová kyselina

Sloučenina z příkladu 48 se nechá reagovat podle popisu v obecném postupu 8 k získání sloučeniny pojmenované v záhlaví jako bílé tuhé látky (53 %).

MS m/z 508.

·· · · 9· ·· 99 • · · · · · · · · 99 • · · « · · · 9 • 9 ····*· • 9·· 999 9·· ·· ·· 999·

Příklad 50

Ethylester 2-methyl-2-[2-methyl-4-({[4-methyl-2-(4-trifluormethylfenyl)thiazo-5-ylkarbonyl]amino}methyl)fenoxy]propionové kyseliny

Meziprodukt 3 a meziprodukt 63 se nechají reagovat podle popisu v obecném postupu 6 k získání sloučeniny pojmenované v záhlaví jako bílé tuhé látky (33 %)· ^XH NMR (CDC1₃): δ 7,95 (d, 2H) , 7,65 (d, 2H) , 7,05 (d, 1H) , 6,95 (dd, 1H), 6,55 (d, 1H), 5,95 (t, 1H), 4,45 (d, 2H),

4.15 (q, 2H), 2,65 (s, 3H), 2,15 (s, 3H), 1,50 (s, 6H),

1.15 (t, 3H).

Příklad 51

2~Methyl--2- [2-methyl--4- ({ [4-methyl-2- (4--trifluormethylfenyl) thiazol-5-ylka.rbonyl] aminojmethyl) fenoxy] propionová kyselina

Sloučenina z příkladu 50 se nechá reagovat podle popisu v obecném postupu 8 k získání sloučeniny pojmenované v záhlaví jako bílé tuhé látky (93 %).

MS m/z 493 (M+l).

•9 99 99

9· 9 9 · • 9 · · 1

9 9 9 9 9 • 9 9 · 9 · 9 9· 9994 • 99

Příklad 52

Ethylester 2-methyl-2-[2-methyl-4-({ [4-methyl-2-(4-isopropylfenyl)thiazol-5-ylkarbonyl]amino}methyl)fenoxy]propionové kyseliny

Meziprodukt 25 a meziprodukt 63 se nechají reagovat podle popisu v obecném postupu 6 k získání sloučeniny pojmenované v záhlaví jaké bílé tuhé látky (51 %) .

Teplota tání == 129 až 131

2-Methyl-2-[2-methyl-4-({[4-methyl-2-(4-isopropylfenyl)thiazol-5-ylkarbonyl. ] amino}methyl) fenoxy] propionová kyselina

Sloučenina z příkladu 52 se nechá reagovat podle popisu v obecném postupu 8 k získání sloučeniny pojmenované v záhlaví jako bílé tuhé látky (85 %).

MS m/z 467 (M+l).

9999 9 ·9 99 99

9 · 9 9 9

9 9 9 9 9

9 9 9 9 9 9

9 9 9 9 9 « · « ·· ·· ·«··

Ο

ο

Příklad 54

Ethylester 2-methyl-2-(4-({[5-methyl-2-(4-trifluormethylfenyl) thiazol-4-ylkarbonyl]aminojmethyl)fenoxy.) propionové kyseliny

Meziprodukt 44 a meziprodukt 68 se nechají reagovat podle popisu v obecném postupu 6 k získání sloučeniny pojmenované v záhlaví jako bílé tuhé látky (85

°) ·

MS m/z 507 (M+l).

Příklad 55

2-Methyl-2- [4- ({ [5-methyl-2- (4-trifluormethylfenyl) thiazol-4-ylkarbonyl]aminoJmethyl)fenoxy]propionová kyselina

Sloučenina z příkladu 54 se nechá reagovat podle popisu v obecném postupu 8 k získání sloučeniny pojmenované v záhlaví jako bílé tuhé látky (39 %).

MS m/z 479 (M+l).

Příklad 56

Ethylester 2-methyl.-2- [4 - ({ [5-methyl-2- (3-trifluormethylfenyl) thiazol-4-ylka.rbonyl] aminojmethyl) fenoxy] propionové kyseliny

Meziprodukt 25 a meziprodukt 63 se nechají reagovat podle popisu v obecném postupu 6 k získání sloučeniny pojmenované v záhlaví jako světle žlutého oleje

Příklad 57

2~Methyl-2.- [4 — ({ [ 5-methyl-2- (3-trifluormethylfenyl) thiazol-4-ylkarbonyl]aminojmethyl)fenoxy]propionová kyselina

Sloučenina z příkladu 56 se nechá reagovat podle popisu v obecném postupu 8 k získání sloučeniny pojmenované v záhlaví jako bílé tuhé látky (74 %).

MS m/z 479 (M+l).

• 9

999 9 99

99 99 99

9 9 9 9 9

9 9 9 9 9

9 9 9 9 9 9

9 9 9 9 9

999 ·9 99 9999

Následující meziprodukty a ligandy se pro vazebné a transfekční studie popsané dále.

připraví

i) 2-(4-{2-[2,3-Ditritió~l-heptyl-3-(2,4-difluorfenyl)ureido]ethyl}fenoxy)-2-methylbutanová kyselina

Tato sloučenina se použije jako kontrolní radioligand pro hPPAR-alfa ve vazebné studii popsané dále. Je také popsána ve WO 00/08002, syntéza je reprodukována dále.

Meziprodukt A

2--{ 4- [2- (Fenylmethyloxykarbonylamino) ethyl] fenoxy}-2-methylbutanová kyselina

Roztok 4-- [2- (fenylmethyloxykarbonylamino) ethyl] fenolu (5,74 5 g; 21,16 mmol) v 2--butanonu (17 ml) a chloroformu (6 g) se po kapkách přidá ke směsi hydroxidu sodného (9,0 g; 225 mmol) a 2-butanonu (67 ml), zatímco se teplota reakční směsi udržuje pod 30 °C. Směs se nechá míchat při teplotě 30 °C 4 hodiny. Přidá se ether (100 ml) a výsledná tuhá látka se zachytí filtrací a promyje etherem (100 ml). Tuhá látka se rozpustí ve vodě (70 ml) a veškerý zbytkový ether se odpaří. Přidá se IN kyselina chlorovodíková k. úpravě hodnoty pH na 1 a výsledný olej se extrahuje dichlormethanem (3 x 50 ml). Spojené extrakty se vysuší (síran sodný) a odpaří k získání žlutého oleje (3,82 g; 4 9 %') .

^XH NMR (CDCls) δ 7,26 (s, 5H) , 7,09 (d, 2H, J = 7,9 Hz),

6,88 (d, 2H, J = 8,4 Hz), 5,09 (s, 2H), 4,75 (široký s,

1H), 3,42-3,44 (m, 2H), 2,75 (t, 2H, J = 6,7 Hz), (m, 2H), 1,47 (s, 3H), 1,04 (t, 3H, J = 2,6 Hz).

1, 92-2,00

Hmotnostní spektrometrie ES m/e (M+H)⁺ = 372.

Meziprodukt B

Methyl-(2-{4-[2-(fenylmethyloxykarbonylamino)ethyl]fenoxy} -2-methylbutyrát)

Roztok meziproduktu A (2,0 g; 5,38 mmol) v dimethylťormamidu (12 ml) se zpracuje s uhličitanem draselným (2,23 g; 16,14 mmol) a methyljodidem (1,54 g; 10,76 mmol) a výsledná směs míchá při teplotě 23 °C 2 hodiny. Směs se zfiltruje a zachycená tuhá látka se promyje ethyl-acetátem (70 ml). Filtrát se promyje roztokem chloridu sodného (4 x 50 ml), vysuší (síran sodný) a odpaří. Odparek se vyčistí chromatografii na silikagelu za použití hexanu, poté 33% ethyl-acetátu-hexanu jako eluentu k získání bezbarvého oleje (1,27 g; 61 %) .

¹H-NMR (DMSO-d₆) δ 7,31 (m, 5H) , 7,06 (d, 2H, J = 8,4 Hz),

6, 68	(d,	2H,	J = 8,4 Hz), 4,98	(s, 2H), 3,67 (s, 3H),
3,15	(m,	2H) ,	2,62 (t, 2H, J = 7,	1 Hz), 1,86 (m, 2H), 1,38
(s,	3H) ,	0,86	(t, 3H, J = 7,3 Hz)	•

Hmotnostní spektrometrie ES⁺, m/e (M+Na)⁺ = 408.

Meziprodukt C

Acetátová sůl methyl-{2 - [4 - (2-ami.noethyl) fenoxy] -2-methylbutyrátu} * · ·· φφ φφ • φ ·φ φφφφ φ φ φ • · · · φ φ · φ • φφ φφφφφφ · • φ φφφφφφ • ΦΦΦ φφφ φφφ φφ φφ φφφφ

Roztok meziproduktu Β (1,27 g; 3,29 mmol) v methanolu (50 ml) a kyseliny octové (0,4 g) se zpracuje s 10% palladiem na uhlí a třepe se v atmosféře vodíku (344,7 kPa) 2 hodiny. Katalyzátor se zfiltruje přes rozsivkouvou zeminu a rozpouštědlo se odpaří k získání žlutého oleje v kvantitativní výtěžku (1,04 g).

^XH NMR (CDC1₃) : δ 7,06 (d, ZH, J = 8,4 Hz), 6,77 (d, 2H, J = 8,4 Hz), 6,70 (široký s, 2H), 3,76 (s, 3H), 3,02 (široký s, 2H), 2,82 (m, 2H), 1,99 (s, 3H), 1,92 (m, 2H), 1,48 (s,

3H), 0,96 (t, 3H, J =7,4 Hz).

Hmotnostní spektrometrie ES⁺, m/e (M+H)⁺ = 252.

Meziprodukt D

Methyl-(2-(4-[2-(2,4-dinitrofenylsulfonylamino)ethyl]fenoxy}-2 -methylbutyrát)

Roztok meziproduktu C (2 g; 6,42 mmol) v dichlormethanu (40 ml) se zpracuje s nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a organická vrstva se oddělí.

Vodná vrstva se extrahuje dichlormethanem (5 x 50 ml) a spojené organické vrstvy se vysuší (síran sodný) a odpaří k získání volné báze jako žlutého oleje (1,61 g; 100 %). Ten se rozpustí v dichlormethanu (40 ml) a zpracuje s pyridinem (0,45 g; 5,61 mmol) a 2,4-dinitrofenylsulfonylchloridem (1,5 g; 5,61 ifimol) a směs se nechá míchat při teplotě 23 °C 3 hodiny. Přidá se voda (60 ml) a organická vrstva se oddělí, promyje vodou (3 x 40 ml) a nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (40 ml). Organická vrstva se vysuší (síran sodný) a odpaří a odparek se vyčistí chromatografií za použití 20% směsi ethyl-acetát95

4 • ·· 444449 4

9 449444

4444 444 444 44 44 4444 hexan jako eluentu k získání světle žluté tuhé látky (1,38 g; 51 %).

^XH NMR (CDC1₃) : δ 8,63 (d, 1 H, J = 2,3 Hz), 8,49 (dd, 1 H,

J - 8,4 Hz, J - 2,3 Hz), 8,07 (d, 1 H, J = 8,4 Hz), 6,89 (d, 2H, J - 8,4 Hz), 6,54 (d, 2H, J = 8,4 Hz), 5,34 (t, 1 H, J = 5,3 Hz), 3,78 (s, 3H) , 3,48 (q, 2H, J = 8,3 Hz),

2,75 (t, 2H, J = 6,6 Hz), 1,92 (m, 2H), 1,42 (s, 3H) , 0,93 (t, 3H, J = 7,5 Hz).

Meziprodukt E

Methyl-[2-· (4-{2- [(2,4-dinitrofenylsulfonyl)(hept-2-en-l--yl) amino] ethyl}fenoxy) -2-methylbutyrát]

Roztok meziproduktu D (315 mg; 0,654 mmol) v tetrahydrofuranu (15 ml) se zpracuje s trifenylfosfinem (343 mg; 1,308 mmol), hept-2-en-l-olem (150 mg; 1,308 mmol) a diethylazodikarboxylátem (228 mg; 1,308 mmol) a směs se nechá míchat při teplotě 23 °C 1 hodinu. Rozpouštědlo se odpaří a odparek se vyčistí chromatografii za použití 10 až 15% směsi EtOAc-hexane jako eluentu k získání polotuhé látky (400 mg; >100 %). TLC a NMR ukazují, že požadovaná sloučenina je přítomna spolu s 1,2-(diethoxykarbonyl)hydrazinem.

Meziprodukt F

Methyl-(2-{4-[2-(hept-2-en-l-ylamino)ethyl]fenoxy}-2-me t h y lbů t: a n o á t)

Roztok meziproduktu E (400 mg; 0,654 mmol) v ** « 4 44 «4

444 444 4 4 44

4 «4·«· «

44 444444 4

4 #44 4 44

444* 444 **44 44 <4 4444 dichlormethanu (5 ml) se zpracuje s triethylaminem (132 mg;

1,308 mmol) a kyselinou merkaptooctovou (78 mg; 0,85 mmol) a směs se nechá míchat při teplotě 23 °C 1 hodinu. Směs se naředí ethylacetátem (30 ml) a promyje se vodou (3 x 20 ml) a vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (30 ml). Organická vrstva se vysuší (síran sodný), odpaří a odparek se vyčistí chromatografií za použití 10% směsi ethylacetát-hexan, poté 50% směsí ethyl-acetát-hexan, poté methanolu jako eluentu k získání oleje (177 mg; 78 % z meziproduktu 24).

^]-H NMR (CDClj) : δ 7,06 (d, 2H, J = 7,5 Hz), 6,75 (d, 2H, J - 7,5 Hz), 5,59 (m, 2H), 3,76 (s, 3H), 3,30 (d, 2H, J = 6,3 Hz), 2,87 (m, 4H), 1,96 (m, 4H), 1,47 (s, 3H), 1,28 (m,

5H) , 0,96 (t, 3H, J = 7,6 Hz), 0,86 (t, 3H, J = 6,9 Hz).

Meziprodukt G'

Methyl-[2-(4-(2-)l-hept-2-enyl-3~(2,4-difluorfenyl)ureido)ethyl)fenoxy)-2-methylbutyrát]

Roztok meziproduktu F (157 mg; 0,452 mmol) v methylenchlorídu (5 ml) se zpracuje s 2,4-difluorfenylisokyanátem (140 mg; 0,904 mmol) a směs se nechá stát při teplotě 23 °C 18 hodin. Rozpouštědlo se odpaří a odparek se vyčistí chromatografií na silikagelu za použití 10%, poté 15% směsí ethyl-acetát-hexan jako eluentu k získání žluté polotuhé látky (212 mg; 93 %). Kontaminována bis-(2,4-difluorfenyl)močovinou, která se koeluuje na slouci.

'•H NMR (CDCI3) : δ 8,85 (široký s, 1H) , 8,02 (m, 1H) , 7,09 (d, 2H, J - 8,4 Hz), 6,77-6, 90 (m, 4H) , 5,70 (m, 1H) , 5,36 (m, 1H), 3,76 (s, 3H), 3,54 (t, 2H, J = 7,3 Hz), 2,84 (t,

2.H, J - 7,1 Hz), 1,55 1,35 (m, 5H), 0,96 (t, 7,4 Hz).

(široký s, 1H) , 3H, J = 7,3 Hz) *4 * • 4 44 · » >

• 4 4

4

4444 44· *

1,46 (s, 3H), , 0,88 (t, 3H,

4 ·

4 4 * 4 ·» «4 * «4

4

4

Φ • 4 <

1,25Hmotnostní, spektrometrie CI/AP⁺, m/e (M+H)⁺ = 503.

2-(4-{2-[l-Hept-2-enyl-3-(2,4-difluorofenyl)ureido]ethyl}fenoxy)-2-methylbutanová kyselina (radioligandový prekurzor)

Roztok meziproduktu G (370 mg; 0,736 mmol) v methanolu (15 ml) se zpracuje s IN NaOH (7,5 ml) a směs se zahřívá na teplotu zpětného toku 2 hodiny. Směs se okyselí IN kyselinou chlorovodíkovou a extrahuje se ethyl-acetátem (3 x 25 ml). Spojené organické vrstvy se promyjí roztokem chloridu sodného, vysuší (síran sodný) a odpaří. Odparek se vyčistí chromatografií na silikagelu za použití 20% směsi ethyl-acetát-hexan, poté ethyl-acetátu jako eluentu k získání hnědého oleje (280 mg; 78 %).

Hl-NMR (CDC1₃) δ 7,95-8,09 (m, 1H) , 7,14 (d; 2H, J= 7,1 Hz), 6,90 (d, 2H, J = 7,4 Hz), 6,81 (d, 2H, J = 5,2 Hz),

5,66 (m, 1H), 5,37 (m,lH), 3,56 (t, 2H, J = 7,4 Hz), 2,87 (t, 2H, J = 7,4 Hz), 2,00 (m, 4H), 1,44 (s, 3H) , 1,27 (m,

6H) , 1,03 (t, 3H, J = 7,3 Hz), 0,88 (t, 3H, J = 7,3 Hz).

Hmotnostní spektrometrie ES, m/e (M+H)⁺ = 489.

Radioligand

2- (4- {2- [2, 3-Ditritio-l-heptyl-3- (2,4-d.ifluorfenyl) ureido] ethyl}fenoxy)-2-methylbutanová kyselina •· » · ·· · » ·*·· ·· · · · • · · · · · • ·· · · · · · • · ······ ···· ··· ··· ·· · · ····

Roztok radioligandového prekursoru připraveného výše (10 mg) v bezvodém dimethylformamidu (3,5 ml) se přenese do reakční nádoby obsahující 10% Pd/C (9,8 mg).

Reakční nádoba se odsaje a zbaví plynu jedním cyklem zmrazení-roztavení-odsátí a poté se vystaví tritiovému plynu (37,37.10¹⁰ Bq). Po 4 hodinách se směs zfiltruje přes rozsivkovou zeminu, odpaří a odparek se rozpustí v acetonitrilu. Část tohoto roztoku (0,8 ml, 98,42.10⁷ Bq) se vyčistí pomocí HPLC (Dynamax C8, 25 min gradient od 4:1 acetonítríl:0,1% TFA do 9:1 acetonitril: 0,1% TFA, 235 nm) . Frakce obsahující čistý materiál se spojí a odpaří pod atmosférou dusíku. Odparek se znovu rozpustí v acetonitrilu k poskytnutí roztoku sloučeniny pojmenované v záhlaví (303,4.10¹° Bq/mmol, radiochemická čistota, 99 %).

2-(4-{2-[l-Heptyl-3-(2,4-difluorfenyl)ureido]ethyl)fenoxy) -2-methylbutanová kyselina

Neznačená (studená) verze výše uvedeného radiolioandu se připraví jako kontrola. Roztok meziproduktu G (10 mg) v bezvodém dimethylformamidu (3,5 ml) se přenese do reakční nádoby obsahující 10% Pd/C (9,8 mg). Reakční nádoba seodsaje a zbaví plynu jedním cyklem zmrazeníroztání-odsátí a poté se vystaví plynnému vodíku. Po 4 hodinách se směs zfiltruje přes rozsivkovou zeminu a odpaří. Odparek se vyčistí chromatografíí za použití 2% směsi methanol/dichlormethan jako eluentu k získání a gumovité látky (7 mg).

(ii) 2-{2-Methyl-4-[({4-methyl-2-[4-(trifluormethyl)fenyl]1,3-thiazol-5-yl}methyl)sulfanyl]fenoxy}octová kyselina

Tato sloučenina se použije jako positivní

9 9 9 99 9

9 99 99 9 9 9 kontrola pro PPAR-delta v transfekčním připravit jak je ukázáno dále.

9 · 9 9 9 9

9999 9 9 9 999 99 9 stanovení a může se

Meziprodukt H

Chlorsulfonová kyselina (15 ml) se ochladí na teplotu 0 °C, poté se přidá 10,0 g (0,05 M) ethyl-[(2-me~ thylfenoxyacetátu] během 10 minut. Reakční směs se míchá při teplotě 0 až 5 °C 30 minut, šarže se odpaří a v míchání se pokračuje 2 hodiny. Reakční směs se vlije na led, čímž se vytvoří bílá tuhá látka, která se promyje ledovou vodou a vysuší pod vysokým vakuem, čímž se získá sloučenina pojmenovaná v záhlaví (12,846 g, 86 %).

2- { 2-Methyl--4-- [ (( 4-methyl-2- [4 - (trifluormethyl) fenyl] -1,3-thiazol-5-yl[methyl) sulfanyl] fenoxy}octová kyselina

Meziprodukt H (4,68g, 16 mM) se zahřívá na teplotu zpětného toku s 9,6 g práškového cínu v ethanolu (20 ml) a směsi dioxan/kyselina chlorovodíková (20 ml). Po 3 hodinách se reakční směs vlije na led a dichlormethan (200 mi) a zfiltruje. Fáze se rozdělí a vodná vrstva se extrahuje 2 x 50 ml dichlormethanu. Spojené organické vrstvy se vysuší (síran horečnatý), zfiltrují a odpaří k získání 3,5 g (97 %) . Tento materiál snadno tvoří disulfidy

100 «· . · · ·♦ ♦ · * · · · ···« · · • · · · · · · • · · ······ • · · · · · · ···· ··· ··· ·· ·· a tedy se použije ihned. Rozpustí se v acetonitrilu (50 ml) s meziproduktem 2 (4,0 g, 14,0 mM) a CS2CO3 (10,1 g, 31,0 rnM) a míchá se 1 hodinu, poté se naředí etherem (200 ml) a vodou (200 ml). Fáze se rozdělí a organická fáze se promyje 2 x NaOH 0,lN (50 ml), vysuší (síran horečnatý), zfiltruje a odpaří k získání surového produktu (6,57 g), který se suspenduje ve směsi hexan:ether (1:1) a zfiltruje k získání čistého meziproduktu 59 (5,0 g, 74 %). Tento materiál se poté hyčlrolyzuje podle popisu uvedeného dále k přípravě sloučeniny pojmenované v záhlaví. Roztok odpovídajícího esteru (1 mmol) v tetrahydrofuranu (10 ml) (v některých případech se přidá několik kapek methanolu k usnadnění rozpustnosti), zpracuje se s with IN LiOH ve vodě (2 ml, 2 mmol) a míchá se 16 hodin při teplotě místnosti (když je reakce pomalá, zvýší se teplota na 50 °C). Roztok se neutralizuje IN kyselinou chlorovodíkovou (2 ml, 2 mmol) a organio rozpouštědlo se odpaří k získání vodného roztoku s nerozpustným produktem. Pokud je nerozpustnou látkou tuhá látka, zfiltruje se a vysuší k získání konečného produktu. Pokud je nerozpustnou látkou olej, extrahuje se ethyl-acetátem (30 ml). Organický roztok se oddělí, promyje vodou (2 x 30 ml), vysuší, zfiltruje a odpaří k získání konečného produktu.

(iii) 2- (2~Methyl-3- (3-{ 3- (4--cyklohexylamino) - [6- (4-fluorfenylpiperazin-l-yl)]-[1,3,5]triazin-2-ylamino)propyl)fenylthio]-2~methylpropionová kyselina

Tato sloučenina se použije jako PPAR-alfa referenční látka při transfekčních stanoveních popsaných dále a připraví se následujícím způsobem:

101

9 • · · 9 · • 9 • 9 9 • 9

9 9 9 9 9 9 9

9» 99

9 9 *9

9 9 9 9

9 9 9 9 9

9 9 9 9

99 9999

Kyanurchlorid ^IHI D1EA

-100%

Cyklohexylamin

OfEA

- .,...1 ! —-fr86%

Vazebná studie

Sloučeniny se testují na jejich schopnost vázat se na hPPAR-gamma, hPPAR-alfa nebo hPPAR-delta za použití stanovení scintilační blízkosti (Scintillation Proximity Assay (SPA)). Doména vážící ligand PPAR (LBD) se exprimuje v E. coli jako polyHis značené fúzní proteiny a vyčistí se. LBD se poté označí biotinem a imobilizuje se na streptavidinem modifikovaných kuličkách pro scintilační blízkost. Kuličky se poté inkubují s konstantním množstvím příslušného radioligandu (³H-BRL 49653 pro PPAR-gamma, radioaktivně značená 2-(4-{2-[2,3-ditritio-l-heptyl-3-(2,4difluorfenyl)ureido]ethyl}fenoxy)-2-methylbutanová kyselina

102 (viz

Jrown.

pro * · · pro hPPAR~alfa a značený GW 2433 pro PPAR-delta P. J., a. kol., Chem. Biol., 4, 909 až 918 (1997) strukturu a syntézu tohoto ligandu) a různými koncentracemi testované sloučeniny a po vyvážení se radioaktivita navázaná na kuličky měří čítačem scintilace. Množství nespecifické vazby, jak se stanoví pomocí kontrolních jamek obsahujících 50 μΜ odpovídajícího neznačeného ligandu, se odečte z každého bodu údajů. Pro každou testovanou sloučeninu se vynesou křivky koncentrace ligandu proti CPM navázaného radioaktivního ligandu a zřejmé hodnoty Ki se odhadnou z uspořádání nelineární nejmenších čtverců dat předpokládajících prostou kompetitivní vazbu. Detaily tohoto stanovení byly sděleny na četných místech (viz, Blanchard, S. G. a kol., Development of a Scintillation Proximity Assay for Peroxisome Proliferator-Activated Receptor gamma Ligand Bínding Domain, Anal. Biochem., 257, 112 až 119 (1998)).

T r a n s f e k o n i s t a n o v e n i

Sloučeniny se screeningují s ohledem na funkční potenci v přechodových transfekčních stanoveních na buňkách CV-1 na jejich schopnost aktivovat podtypy PPAR (transaktivační stanovení). Využije se dříve ustavený chimérní receptorový systém k umožnění srovnání relativní transkripční aktivity podtypů receptoru na stejném cílovém genu a k prevencí endogenní aktivace receptoru, která komplikuje interpretaci výsledků. Viz například Lehmann, J. M.; Moore,

L. B.; Smith-Oliver, T. A.; Wilkison, W. O.; Willson, T.

M. ; Klíewer, S. A., An antidiabetic thiazolidinedione is a high affinity ligand for peroxisome prolíferator-activated recentor γ (PPARy), J. Biol Chem., 270, 12953 až 12956 (1995). Ligand vážící domény pro myší a lidský PPAR-alfa,

103 «/ 9 .

• 9 >· 9 • «

9 9 • ·

9949 ·«« 4 • ·

Λ « • 9 « • 9 »4 »* • 9 9 «9 * • 9 9

9 9 • * 99 9 9

PPAR-gamma a PPAR-delta se každá spojí s DNA vážící doménou pro kvasinkový transkripční faktor GAL4. Buňky CV-l se přechodně transfekuje expresními vektory pro příslušnou chiméru PPAR spolu s reportérovým konstruktem obsahujícím 5 kopií vazebného místa pro DNA GAL4 řídícím expresi secernovarié placentální alkalické fosfatázy (SPAP) a β-galaktosidázy. Po 16 hodinách se médium vymění za médium DME doplněné 10% delipidovaným fetálním telecím sérem a testovanou sloučeninou v příslušné koncentraci. Po dalších 24 hodinách se připraví buněčné extrakty a stanoví se na aktivitu alkalické fosfatázy a β-galaktosidázy. Aktivita alkalické fosfatázy se upraví na transfekční účinnost za použití β-galaktosidázové aktivity jako vnitřního standardu (víz například Kliewer, S. A., a kol., Cell, 83, 813 až 819 (1995)). Rosiglitazon (BRL 49653) se použije jako positivní kontrola při stanovení hPPAR-gamma. Positivní kontrolou při stanovení hPPAR-alfa je 2-[2-methyl-3- (3-{3- (4-cyklohexylamino)-[6-(4-fluorfenylpiperazin-l-yl)][1,3,5]triazin-2ylamino}propyl)fenylthio]-2-methylpropionová kyselina. Positivní kontrolou pro PPAR-delta stanovení je 2-[2-methy.1-4- ({ [4-methyl-2-(trifluormethyl) fenyl]-l, 3-thiazol-5yljmethyl)sulfanyl]fenoxy}octová kyselina.

Tabulka 2

Transaktivační aktivita zvolených sloučenin

Příklad č.	lidský aEC50 μΜ	lidský gEC5o μΜ	lidský yEC5o μΜ
Příklad 1	0,017	10000	10000
Příklad 2	0, 006	2950	10000
Příklad 6	0,230	10000	10000
Příklad 10	0, 108	10000	10000

104 · · · * · · · ·· ·*« 9· · · · _e · • · · 9 9 · » « • · · 9····· « • · · 9 · · · · ··· ·99 ·9· · · « * ··«·

Příklad	13	0,005	10000	0,850
Příklad	15	0,001	4370	2640
Příklad	17	0,027	10000	10000
Příklad	21	0,028	10000	10000
Příklad	23	0,007	9190	10000
Příklad	25	0,010	2700	10000
Příklad	27	0, 002	4080	8, 820
Příklad	29	0,122	10000	10000
Příklad 31	0,044	10000	10000
Příklad	33	0,014	5350	10000
Příklad	35	0,004	4590	10000
Příklad	37	0,020	10000	10000
Příklad 39	0,036	2480	10000
Příklad	41	0, 005	10000	0,832
Příklad	4 5	0,400	1640	10000
Příklad	47	0,020	7300	10000
Příklad	4 9	0,010	1000	10000

105

Claims (25)

1. Sloučenina obecného vzorce (I) a její farmaceuticky přijatelné soli, solváty a hydrolyzovatelné estery

X_x představuje atom kyslíku nebo síry;

R¹ a R² nezávisle představují atom vodíku, atom halogenu, skupinu -CH3 a skupinu -OCH3;

n představuje 1 nebo 2;

X₂ představuje skupinu NH, skupinu NCH3 nebo atom kyslíku;

jeden z Y a Z je atom dusíku a druhý je atom kyslíku nebo síry;

R³ představuje fenyl nebo pyridyl (kde atom dusíku je v poloze 2 nebo 3) a je případně substituován jedním nebo více atomy halogenu, skupinami NO₂, NH₂, CF3, OCF3, O-alkylová skupina s 1 až 6 atomy uhlíku s přímým nebo rozvětveným řetězcem, alkylová skupina s 1 až 6 atomy uhlíku s přímým nebo rozvětveným řetězcem, alkenylová skupina s 1 až 6 atomy uhlíku s přímým nebo rozvětveným

106 řetězcem nebo alkynylová skupina s 1 až 6 atomy uhlíku s přímým nebo rozvětveným řetězcem, za předpokladu, že když R₃ je pyridyl, pak atom dusíku je nesubstituován; a

R⁴ představuje skupinu CF₃ nebo CH₃.

2. Sloučenina obecného vzorce (I), která je agonistou hPPAR-alfa.

3. Sloučenina podle nároku 2, která je selektivním agonistou hPPAR-alfa.

4. Sloučenina podle nároků 1 až 3, kde X_x představuje atom kyslíku.

5. Sloučenina podle nároků 1 až 4, kde jeden z R¹ a R² je atom vodíku.

6. Sloučenina podle nároku 5, kde oba R¹ a R² představují atom vodíku.

7. Sloučenina podle kteréhokoli z nároků 1 až 6, kde n představuje 1.

8. Sloučenina podle kteréhokoli z nároků 1 až 7, kde X₂ představuje skupinu NH.

9. Sloučenina podle nároků 1 až 8, kde Z představuje atom dusíku.

10. Sloučenina podle nároků 1 až 9, kde Y představuje atom síry.

107

11. Sloučenina podle kteréhokoli z nároků 1 až 10, kde R³ je monosubstituován.

12. Sloučenina podle nároku 11, kde R³ je monosubstituován skupinou CF₃.

13. Sloučenina podle nároků 11 nebo 12, kde R³ je monosubstituován v poloze para.

14. Sloučenina podle kteréhokoli z předchozích nároků, kde R³ je fenyl.

15. Sloučenina podle kteréhokoli z předchozích, nároků, kde R⁴ je skupina CH3.

16. Sloučenina zvolená ze skupiny zahrnující ethylester 2-methyl-2-[4-({[4-methyl-2-(4-trifluormethylfenyl) thiazol-5-ylkarbonyl]amino}ethyl)fenoxy]propionové kyseliny, ethylester N-methyl~2~methyl-2-[4- ({[4-methyl-2-(4trifluormethylfenyl)thiazol-5-ylkarbonyl]amino}ethyl)fenoxy]propionové kyseliny,

4-(1-terc-butyloxykarbonyl-l-methylethoxy)benzylester '

4-methyl-2-(4-trifluormethylfenyl)thiazol-5-karboxylové kyseliny, ethylester 2-methyl-2-[4-({[4-methyl-2-(4-terc-butylfenyl)thiazol-5-ylkarbonyl]amino}methyl)fenoxy]propionové kyseliny, ethylester 2-methyl--2- [4- ({ [4~methyl~2- (4-isopropylfenyl) thiazol-5-ylkarbonyl]aminojmethyl)fenoxy]propionové kyseliny, ethylester 2-methyl-2- [4- ({ [4-m.ethyl-2~ (4-nitrofenyl) thiazol-5-ylkarbonyl]aminoJmethyl)fenoxy]propionové kyseliny,

103 ethylester 2-methyl-2~[4-({[4-methyl-2-(4-aminofenyl)thiazol-5-ylkarbonyl]aminoJmethyl)fenoxy]propionové kyseliny, ethylester 2--methyl-2- [4- ( { [4-metb.yl--.2- (4-aminofenyl) thiazol-5-ylkarbonyl]aminoJmethyl)fenoxy]propionové kyseliny, ethylester 2-methyl-2- [4- ( { [4~methyl~2~ (3,4-dichlorfeny.l) thiazol-5-ylkarbonyl]amino Jmethyl)fenoxy]propionové kyseliny, ethylester 2-methyl-2- [4- ({ [4-methyl---2--- (3-fluor-4-trifluormethylfenyl) thiazol-5-ylkarbonyl]aminoJmethyl)fenoxy]propionové kyseliny, ethylester 2-methyl-2~ Γ4- ({ [4~raethyl~2- (4-bromfenyl) thiazol-5-ylkarbonyl]aminoJmethyl)fenoxy]propionové kyseliny, ethylester 2-methyl-2-[4-(([4-methyl-2-(4-ethylfenyl)thiazol-5-ylkarbonyl]amine Jmethyl)fenoxy]propionové kyseliny,

109 ·”; ·· * • « · • · ···· ··· · ethylester 2-methyl--2-- (4—{ [ (4~methyl-2~fenylthiazol-5-ylkarbonyl)amino]methyl}fenoxy)propionové kyseliny, ethylester 2-methyl-2-[4-({[4-methyl-2-(4-fluorfenyl)thiazol-5-ylkarbonyl]amino}methyl)fenoxy]propionové kyseliny, ethylester 2--methyl~2~ [4 — ({ (4~methyl-2- (4-chlorfenyl) thiazol-5-ylkarbonyl]amino}methyl)fenoxy]propionové kyseliny ethylester 2-methyl-2- [4- ({ [4-methyl--2~ (4-trífluormethoxyfenyl) thiazol-5~ylkarbonyl] amino}methyl) fenoxy] -propionové kyseliny, ethylester 2-methyl-2- [4- ({ [ 4--met’nyl~2~ (4-méthoxvfenyl) thiazol-5-ylkarbonyl]amino}methyl)fenoxy]propionové kyseliny ethylester 2~methyl-2~[4-({[4~m.ethyl.-2-(4-acetylenylfenyl)thiazol-5-ylkarbonyl]amino}methyl)fenoxy]propionové kyseliny, ethylester 2-methyl-2- [4- ({ [4-trifluormetbyl-2- {4-t.r.ifluormethylfenyl) thiazol-5~ylkarbonyl]amino}methyl)fenoxy]propionové kyseliny, ethylester 2-methyl~2-[4-({[4-trifluormethyl-2-(4-terc-butylfenyl) thiazol-5-ylkarbonyl] amino)methyl) fenoxy] ·propionové kyseliny,

110

• · · • ♦ ♦· * · • · · • · · · • · · ·· ·· • · i • » » • · • ·· « ♦ · · • · · • · · · · • · · • · ··· ·

2-methyl2- [4- ({ [4-tr.ifluormethyl-2- [4-terc-butylfenyl) thiazol-5~ylkarbonyl]amino}methyl)fenoxy]propionovou kyselinu, ethylester 2-methyl~2-[4-({ [4-methyl-2- (4-tr.ifluormethylfenyl) oxazol-5-yl.karbonyl] amino}methyl) fenoxy] propionové kyseliny, ethylester 2-methyl-2- [4- ({ [4-methyl-2- (4-trit.lurmethyl-2-pyridyl)thiazol-5-ylkarbonyl]amino}methyl)fenoxy] propionové kyseliny, ethylester 2-methyl-2- [2-methoxy~4~ ({ [4~methyl~2- (4trif luormethylf enyl) thiazol -5-ylkarbonyl ] amino} methyl) -fenoxy]propionové kyseliny, ethylester 2-methyl-2- [2-methyl-4~ ({ [4-methyl-2- (4-trifluormethylfenyl)thiazol-5-ylkarbonyl]amino}methyl)fenoxy]propionové kyseliny,

2-methyl~2-[2-methyl-4~({[4-methyl-2-(4-trifluormethylfenyl) thia.zol-5-ylkarbonyl] amino}methyl) fenoxy] propionovou kyselinu, ethylester 2-methyl-2-[2-methyl~4-{{[4-methyl-2-(4-isopropylfenyl) thiazol-5-ylkarbonyl] óimino}methyl) fenoxy] propionové kyše1iny,

2-methyl~2-[2-methyl-4-({[4-methyl-2-(4-isopropylfenyl)thiazol-5-ylkarbonyl]amino}methyl)fenoxy]propionovou kyselinu, • 4 ♦ · ethylester 2-methyl-2- [4 - ({ [5--methyl-2- (4-trifluormethylfenyl) thiazol-4-ylkarbonyl]amino}methyl)fenoxy]propionové kyseliny,

2-met.hyl.-2- [4- ({ [5-methyl-2~ (4-trif luormethylfenyl) thiazol-4-ylkarbonyl]amino}methyl)fenoxy]propionovou kyselinu, ethylester 2-methyl~2~ [4- ({ [5~.methyl-2- (3-trifluormethylfenyl)thiazol-4-ylkarbonyl)amino]methyl]fenoxy]propionové kyseliny a

2-methyl-2-[4 - ({[5-methyl-2-(3-trifluormethylfenyl)thiaz.ol-4-ylkarbonyl] amino}methyl.) fenoxy] propionovou kyselinu.

17. Sloučenina zvolená ze skupany zahrnující:

ethylester 2-met.hyl-2- [4- ({ [4-methyl-2- (4-trifluormethylfenyl) thiazol-5-ylkarbonyl]aminojethyl)fenoxy]propionové kyseliny,

2-methyl-2- [4- ({ [4~rnethyl--2~ (4-trifluormethylfenyl) t h i a z o1-5-y1ka rbon y1]amino}ethy1)fenoxy]p ropi onovou kyselinu,

N-methyl-2-methyl-2-[4-({[4-methyl~2~(4-trifluormethylfenyl )thíazol-5-ylkarbonyl]amino}ethyl)fenoxy]propionovou kyselinu,

2-methyl-2- [4- ({ [4-methy.l-2- (4-terc-butylfenyl) thiazol-5 -ylkarbonyl]amino}methyl)fenoxy]propionovou kyselinu, • · ·

112

99 9999

2-methyl-2-[4- ({[4-methyl-2-(4-isopropylfenyl)-thiazol~5-ylkarbonyl]aminojmethyl)fenoxy]propionovou kyselinu,

2-methyl-2-[4-· ({ [4-methyl~2- (4-nitrofenyl) thiazol-5-ylkarbonyl]aminojmethyl)fenoxy]propionovou kyselinu,

2-methyl--2- [4— (í [4-methyl-2- (3, 4-dichlorenyl) thiazol-5-ylkarbonyl]aminojmethyl)fenoxy]propionovou kyselinu,

2-methyl-2- [4 - ({ [4-methyl-2~ (3-fluor-4--trif luormethylfenyl) thiazol-5-ylkarbonylJaminojmethyl)fenoxy]propionovou kyselinu,

2-methyl-2- [4- ({ [4~-m.ethy.l-2- (4-bromfenvl) thiazol-5- y 1 k a r b o n y 1 ] a m i n o} m e t h v 1) f e n o x y ] p r o p i o n o v o u kyselinu,

2-methyl-2- [4- ({ [4-methyl~2~ (4-ethyl.fenyl) thiazol-5-ylkarbonyl]aminojmethyl)fenoxy]propionovou kyselinu,

2~methyl~2~[4-({[4-methyl-2~fenylthiazol-5-ylkarbonyl)ami n o ] me t h y 1} f e n o x y) p r o p i o n o v o u k y s e .1. i. n u,

2-methyl-2~[4-({[4~methyl~2~(4-fIuorfenyl)thiazol-5-ylkarbonyl]aminojmethyl)fenoxy]propionovou kyselinu,

2-methyl--2~ [4- ({ [4-methyl-2- (4-chlorfenvl) thiazo.l-5-ylkarbonyl]aminojmethyl)fenoxy]propionovou kyselinu,

2-methyl--2- [4- ({ [ 4~methyl~2- (4-trífluormethoxyfenyl) thiazol-5-ylkarbonyl]aminojmethyl)fenoxy]propionovou kyselinu,

2-methyl-2-[4-({[4-méthyl-2-(4-methoxyfenyl)thiazol»· .

113 ·· ·♦ • · · β · • · · · · • · · · · · • · · · · • · · · ♦ ····

-5-ylkarbonyl]amino}methyl)fenoxy]propionovou kyselinu,

2-methyl--2- [4- ({ [4-methyl~2- (4-acetylenylfenyl) thiazol-5-ylkarbonyl]amino}methyl)fenoxy]propionovou kyselinu,

2-methyl~2- [4- ({ [4-trifluormethyl-2- (4-tr.if luormethylfenyl )thiazol-5-ylkarbonyl]amino}methyl)fenoxy]propionovou kyselinu,

2-methyl-2- [4-· ({ [4-methyl-2- (4-trif luormethylfenyl) oxazol-5-ylkarbonyl]amino}methyl)fenoxy]propionovou kyselinu,

2-methy.l~2- [4-- ({ [4-methyl-2- (4-trifluormethyl-2-pyridyl) -thiazol-5-ylkarbonyl]amino}methyl)fenoxy]propionovou kyselinu a

2-m.ethy.l--2- [2-methoxy-4- ({ [4~metbyl~2~ (4-trifluormethylfenyl )thiazol-5-ylkarbony1]amino}methyl)fenoxy]propionovou kyselinu.

18. 2-Methyl-2-[4-({[4-methyl-2-(4-trifluormethylfenyl)thíazol-5-yl~karbonyl]amino}methyl)fenoxy]propionová kyselina.

19. Sloučenina podle kteréhokoli z nároků 1 až 17 pro použití v terapii.

20. Farmaceutický prostředek v y z n a č u j i c í s e t i m, že obsahuje sloučeninu podle kteréhokoli z nároků 1 až 17.

21. Farmaceutický prostředek podle nároku 20, v y z n a114 • 9 ·· 9 • 9 • · · • · • 999 999 9 čující se tím, že dále obsahuje farmaceuticky přijatelné ředidlo nebo nosič.

22. Použití sloučeniny podle kteréhokoli z nároků 1 až 17 pro výrobu léčiva k léčení choroby nebo stavu zprostředkovaného hPPAR-alfa.

23. Použití podle nároku 22, kde choroba nebo stav zprostředkovaný hPPAR-alfa zahrnuje dyslipidémíi, syndrom X, srdeční selhání, hypercholest.olémii, kardiovaskulární chorobu, diabetes mellitus typu II, diabetes typu I, insulinovou resistenci, hyperlipidémii, obezitu, zánět, anorexii bulimia a anorexii nervosa.

24. Způsob léčení choroby nebo stavu zprostředkovaného hPPAR-alfa u pacienta, v y z n a Č u j í c í se t í m, že zahrnuje podávání terapeuticky účinného množství sloučeniny podle kteréhokoli z nároků 1 až 17.

25*. Způsob léčení, podle nároku 24, v y z n a č u j ící se tí m, že chorobou nebo stavem zprostředkovaným hPPAR-alfa je dyslipidémie, syndrom X, srdeční selhání, hypercholestolémie, kardiovaskulární choroba, diabetes mellitus typu II, diabetes typu I, insulinová resistence, hyperlipidémie, obezita, zánět, anorexia bulimia a anorexia