CZ20012724A3 - Způsob přípravy antibiotické pseudomonové kyseliny A mikrobiologickou cestou - Google Patents

Způsob přípravy antibiotické pseudomonové kyseliny A mikrobiologickou cestou Download PDF

Info

Publication number
CZ20012724A3
CZ20012724A3 CZ20012724A CZ20012724A CZ20012724A3 CZ 20012724 A3 CZ20012724 A3 CZ 20012724A3 CZ 20012724 A CZ20012724 A CZ 20012724A CZ 20012724 A CZ20012724 A CZ 20012724A CZ 20012724 A3 CZ20012724 A3 CZ 20012724A3
Authority
CZ
Czechia
Prior art keywords
pseudomonas
pseudomonic acid
strain
hungary
budapest
Prior art date
Application number
CZ20012724A
Other languages
English (en)
Inventor
Valeria Szell
Ildiko Lang
Istvan Barta
Aniko Tegdes
Karoly Albrecht
Nee Suto Julianna Mozes
Istvar M. Szabo
Magdolna Petroczki
Janos Erdei
Eva Gulyas
Gabor Balogh
Original Assignee
Biogal Gyogyszergyar Rt
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Biogal Gyogyszergyar Rt filed Critical Biogal Gyogyszergyar Rt
Publication of CZ20012724A3 publication Critical patent/CZ20012724A3/cs

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C12N1/205—Bacterial isolates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P17/00—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms
    • C12P17/16—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms containing two or more hetero rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/02—Drugs for dermatological disorders for treating wounds, ulcers, burns, scars, keloids, or the like
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/06—Antipsoriatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/10—Anti-acne agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/16—Antivirals for RNA viruses for influenza or rhinoviruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P17/00—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms
    • C12P17/16—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms containing two or more hetero rings
    • C12P17/162—Heterorings having oxygen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. Lasalocid
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/38—Pseudomonas

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Plural Heterocyclic Compounds (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Investigating Or Analysing Materials By Optical Means (AREA)

Description

Předložený vynález se týká mikrobiologické metody výroby antibiotické pseudomonové kyseliny A (mupirocin).
Dosavadní stav techniky:
Pseudomonová kyselina A, také známá jako mupirocin, je antibiotikem, které má inhibiční účinek zejména proti grampozitivním bakteriím (jako je Staphylococcus aureus, Sireptococcus pyogenes, Sireptococcus pneumoniae, Klebsiella pneumononiae) a některým gramnegativnim bakteriím (jako Haemophilus infuenzae, Neisseria gonorrhoae) [A. Ward, D.M.Campoli-Richards, Drugs 32, 425-444 (1986)] a její minimální inhibujíci koncentrace je v rozmezí 0,02-0,5 mg/dm’. Pseudomonová kyselina A má inhibicí isoleucin-tRNA synthasového enzymu vliv na syntézu peptidů patogenních bakterií [J. Hughes a G. Mellows, Biochem. J. 191, 209-219, (1980)]. Výhodným znakem tohoto antibiotika je to, že je méně toxické jak pro lidi tak zvířata a je negativní v Ames testu. Pseudomonová kyselina A je v současností užívána při léčbě lidí, v různých prostředcích, pro léčení kožních infekcí (jako je impetigo, pyoderma), nosních infekcí a infekcí zevního ucha, akné, popálenin, ekzémů, psoriasy, v případě ulcerace pro léčení sekundárních infekcí, a pro prevenci nemocničních infekcí.
Chemická struktura pseudomonové kyseliny A byla stanovena jako
- (4-[5S(2S,3 S-epoxy-5S-hydroxy-4S-methylhexyl )-3R,4R-dihydroxytetrahydropyran-2S-yl]-3-methyl-but-2(E)-enoyloxy} nonanová kyselina • · · · • · [E. B. Chain a G. Mellows, J. Chem. Soc. Chem. Comm. 847-848 (1974); R.G.Alexander, J. P. Clayton, K. Luk, N.H.Rpgers, TJ.King,
J.C.S. Perkín I. 561-565 (1978)], jak dokládá vzorec (I):
Je známo, že Pseudomonas fluorescens je schopný produkovat pseudomonovou kyselinu A. Podle britského patentu Č.1 395 907 je kmen Pseudomonas fluorescens NCIB 10586 schopný biosyntetizovat komplex pseudomonové kyseliny sestávající z pseudomonové kyseliny A a jejího isomeru s dvojnou vazbou v cis-pozici mezi atomy uhlíku C2 a C3 a pseudomonové kyseliny B. Poměr složek je 4,5:4,5.1. Podle japonské patentové přihlášky 52-70083 je nicméně kmen Pseudomonas fluorescens Y-11633 schopen biosyntetizovat komplex pseudomonové kyseliny sestávající z pseudomonové kyseliny A, pseudomonové kyseliny B a dalších dvou složek s neznámou strukturou v poměru 9.0,5:0,5.
Podstata vynálezu
Předložený vynález se týká způsobu přípravy pseudomonové kyseliny A zahrnujícího kultivaci na mediu obsahujícím alespoň jeden organický zdroj dusíku nebo uhlíku, za submerzních aeračních podmínek, kmene bakterií Pseudomonas, schopného biosyntézy pseudomonové kyseliny A, a fermentaci Pseudomonas kultury tak, že se tvoří pseudomonová kyselina A. Přednostně kmenem bakterií Pseudomonas je kmen bakterie Pseudomonas sp. č.19/26 uložený pod ukládacím číslem NCAIM(P)B 001235 v „National Collection of • · · · • · · · ···· ·· · • · *· · · ·· ·· ···
Agricultural and Industrial Microorganisms“, v Budapešti, Maďarsku, nebo její mutant nebo variant produkující pseudomonovou kyselinu A.
Předložený vynález je rovněž veden na kulturu Pseudomonas, schopnou biosyntetizovat pseudomonovou kyselinu A v submerzních aeračních podmínkách, sestávající v podstatě z nového kmene bakterií Pseudomonas sp. č. 19/26.
Předložený vynález je dále veden na biologicky čistou kulturu nového kmene bakterií P seudomonas sp. č. 19/26.
Popis obrázku:
Obr.1 je HPLC chromatogram komplexu pseudomonové kyseliny produkovaný Pseudomonas sp. č. 19/26 [NCAIM(P)B 001235],
Podrobný popis vynálezu:
V průběhu výzkumu antimíkrobíálních antibiotik produkovaných bakteriemi bylo izolováno 20 000 mikroorganismů na živném agaru obsahujícím 10 pg/ml kandicinu a 5 pg/ml cyklohexiinidu, aby se zabránilo růstu plísně.
Byla testována antibakteriální účinnost izolovaných bakteriálních kmenů z kultury v protřepávané baňce na rozdílné grampozitivní a gramnegativní testovací mikroorganismy a jejich rezistentní varianty pro antibiotika vyskytující se v léčebné praxi. Aplikací antibioticky rezistentních testovacích mikroorganismů jsme chtěli podnítit rozlišení antimíkrobíálních antibiotik s novým typem působeni.
V průběhu výše uvedeného výzkumu byl vybrán izolát bakterií, označený jako „kmen č. 19/26“. Původně byl tento organismus získán ze vzorku půdy získaného v Argentině. Jeho kultivační bujón měl výrazný antibiotický účinek proti Bacillus subtilis ATCC 6633, Staphylococcus aureus SMITH, vůči penicilinu rezistentnímu Staphylococcus aureus • · ·· · · ·· • · • ·
1 10, neočíslovanému kmenu Streptococcus pneumonia, Slreplococcus pyogenes A 115 ROBB, Alcaligenes faecalis 140001, Bordetella bronchiseptica ATCC 4671, Klebsiella pneumoniae ATCC 10031, k meticillinu a aminoglikosidu rezistentnímu Staphylococcus aureus MRSA 1190Ra dvěma nečíslovaným kmenům Mycoplasma pneumoniae a Haemophilus influenzae. Později byl z tohoto kultivačního bujónu izolován antibakteriálni metabolický produkt kmene č. 19/26 a jako výsledek analýzy chemické struktury bylo zjištěno, zeje identická s pseudomonovou kyselinou A.
Současně byly vybrané kmeny bakterií produkující pseudomonovou kyselinu A podrobeny taxonomíckým studiím. První předběžný srovnávací průzkum byl proveden s vybranými velice blízce příbuznými bakteriálními kmeny za použití Bio-Mérieux ATB Expressíon vybavení s ID 32 GN stripem. To je vhodné pro relativně rychlou (např. v generické úrovni) taxonomické identifikaci daného neznámého bakteriálního kmene, pokud jeho diagnostikované vlastnosti vykazují vysoký stupeň fenetické podobnosti k alespoň jednomu z autentických kmenů, které byly zaneseny do databáze zařízení. Může být stanoveno spektrum, s použitím zdroje uhlíku, neznámého bakteriálního kmene, který má být zkoumán, s tímto vybavením ve 32 testech se 14 různými cukry a 14 organickými kyselinami, přidanými do minimálního kultivačního media doplněného komplexem růstových faktorů. Vyhodnoceni výsledků testů použiti se provede po naočkování a v průběhu 48 hodin inkubační doby prostřednictvím automatického měření zákalů na vyvinutých mikrokulturách označujících intenzity růstu (reakce) jako „ + 1· nebo nebo „?“. Výsledky synchronně studovaných biochemických testů jsou hodnoceny softwarem zařízení. Získaná fyziologicko-biochemická data kmene Č. 19/26 byla uvedena do korelace s daty bakteriálních kmenů, které jsou uvedeny v seznamu databáze (celkový počet každého kmene je v tomto případě 114, mezi nimi 1 1 patří k různým druhům Pseudomonas: P seudomonas aeruginosa l a //, Pseudomonas alcaligenes, Pseudomonas fluorescens l a II, Pseudomonas mendocina, Pseudomonas mesophil ica, Pseudomonas • · · · ·· ·· ·· ·· ·· · · · · 9 9 9 9 p iskett i i, Pseudomonas pseudomallei, Pseudomonas vesicularis, Pseudomonas cepacia, Pseudomonas diminuta, Pseudomonas putida a Pseudomonas stutzeri). Podle výstupu tohoto korelačního experimentu byl kmen č. 19/26 potvrzen jako člen rodu Pseudomonas.
Po úspěšné identifikaci na generické úrovni kmenů c. 19/26 jsme se pokusili identifikovat na úrovni rodu prostřednictvím klasických taxonomických průzkumových metod.
Kultury kmene Č. 19/26 se mohou množit na vhodném pevném mediu ve formě nesporulujících gramnegativních tyčinek, 0,6-1,1 až
1,3-4,0 mikronů. Tyto jsou aktivně pohyblivé s polárním bičíkem. Tyto obligatorně aerobní chemoorganotropní tyčinky mohou atakovat glukózu pouze oxidativně. Nemohou fermentovat a nejsou schopné respirace s nitráty jako terminálními elektronovými akceptory, ale vykazují pozitivní kataiasovou reakci. Nevyvíjejí viditelné kolonie na vzorku syntetického media a pro své množení vždy vyžadují růstové faktory. Při kultivaci za optimálních podmínek jsou jejich kolonie pozitivní na argininhydrolasu, produkuji fiuorescentní pigmenty, ale přítomnost a akumulace poly-p-hydroxy-butarátu v buňkách nemůže být detekována.
Další znaky kmene č. 19/26 jsou následující:
Rozvoj jeho kolonii nebyl pozorován při 41 °C ; neprodukuje levan ze sacharosy, nehydrolyzuje želatinu a škrob, je pozitivní na oxydasu, a nevyužívá glukosu, 2-keto-glukonát, trehalosu a meso-inositol jako samotný zdroj uhlíku.
Všechny tyto stanovené vlastnosti jasně vydělují kmen Pseudomonas č.1 9/26 od druhů P.aeruginiosa, P.fluorescens, P. chlororaphis, P. aureofaciens, P. syringae, P. viridif/ava, P. cichorii, P. stutzeri, P. mendocina, P .alcal ignes, P. pseudoalcaligenes a P. putida . Kultivace kmene č. 19/26 se může provádět pouze na mediu připraveném s (0,2-1,0%) extrakty kvasinek, kukuřičnou tekutinou ······ · · · · ·· · • · · · · · · ···· ······· ·· · ·· · · · ·· · · ·· · • · · · · · · · ·· · ·· · · ·· · · ·· · · · nebo jinými komplexními přírodními živinami obsahujícími velice odlišné růstové faktory.
Na základě těchto konkrétních diagnostikovaných vlastností může být kmen č. 19/26 považován za organismus, který patří k takzvaným „netypickým druhům Pseudomonas“. Tyto „netypické Pseudomonas druhy“ mohou být v budoucnu začleněny do nově vytvořeného bakteriálního taxonu (N. J. Palleroni, „Pseudomonaceae,“ Bergeyš Manual of Systematic Bacteriology, 1 141-219, vyd.: N.R.Krieg a J.G.Holt, Baltimore: Williams a Wilkins, 1984).
Kmen č.19/26 byl uložen 16. července 1996 pod přírůstkovým číslem NCAIM(P)B 001235 ve sbírce National Collection of Agricultural and índustrial Microorganisms, v Budapešti, Maďarsko.
Podle výhodného postupu vynálezu je Pseudomonas sp. bakteriální kmen č. 19/26 uložený pod přírůstkovým číslem NCAIM(P)B 001235 použit pro výrobu v podstatě čisté pseudomonové kyseliny A. Jako zdroje dusíku může použít vybraný kmen pepton, hovězí extrakt, kukuřičná namáčecí tekutinu, kvasinkový extrakt, kaseinová a sojová potrava. Kromě uvedených dusíkových zdrojů mohou být použity v různých kombinacích zdroje uhlíku, jako je glukosa, glycerol a slunečnicový olej.
Ačkoliv složky media přírodního původu obsahují minerální soli, je výhodné přidat do inokulační kultury některé minerální soli (jako amonné, vápenaté, soli železa, zinku, mědi, hořčíku, manganu, sodné nebo draselné solí). Síran horečnatý, chlorid manganatý, síran železnatý, chlorid zinečnatý, síran měďnatý, síran amonný, dihydrogenfosforečnan draselný, chlorid sodný a uhličitan vápenatý jsou preferovány.
Uchovávání kmene se provádí na agarovém mediu obsahujícím pepton-kasein při 4 °C, každé dva týdny čerstvě měněném. K uchování •99999 99 9 9 9 99 • 9 9 9 9 9 9 *··· • · · · · · · · ··
9 9 9 9 9 9 9 9 9 99
9 9 9 9 9 9 9 9 99
9 9 9 9 9 9 9 9 9 99 9 produktivity pseudomonové kyseliny A může být kmen vhodně uložen jako hluboko-mražená kultura nebo v lyofilizované formě.
V průběhu fermentace je kmen Pseudomonas sp. č.19/26 naočkován do vhodného prostředí a kultivován v submerzních a aeračních fermentačnich podmínkách. Hodnota pH kultivačního media je přednostně nastavena na neutrální hodnotu (pH = kolem 7,0), teplota kultivace mezi asi 20 °C a asi 30 °C , přednostně mezi asi 24 °C a asi 26 °C . V závislosti na podmínkách fermentace může být dosaženo maximální hodnoty produktivity antibiotika po 50-60 hodinách. Komplex pseudomonové kyseliny vytvořený v průběhu fermentace obsahuje v podstatě čistou pseudomonovou kyselinu A, nicméně výsledkem biosyntézy je vznik i malých množství pseudomonové kyseliny B vzorce (II)
(Π) a pseudomonové kyseliny C vzorce (III)
(III)
Antibakteriální aktivita antibiotického komplexu pseudomonové kyseliny je determinována mikrobiální metodou agarové difuse.
• ••4 ·« 99 9999
9 9 9 9··999
9 9 9 9 9 999
9 9 9 9 9 9 9 9 99
9 9 9 9 9 · · · · 9·9
Mediem je agar obsahující hovězí extrakt-pepton-glukosu, jehož pH je
6,5, a testovaným organismem je Bacillus suhtilis ATCC 6633. Hodnota aktivity získaná mikrobiologickou metodou reprezentuje primárně množství pseudomonové kyseliny A, jelikož množství dalších složek pseudomonové kyseliny je velmi malé, a vzhledem ke složce A je jejich konkrétní aktivita proti testovaným mikroorganismům - zejména v případě složky B- podstatně slabší.
V případu fermentace jsou přesná množství pseudomonové kyseliny A a doprovodných menších složek ve fermentačním bujónu stanovena vysokotlakou kapalinovou chromatografii (HPLC), kdy je supernatant ultrazvukem zpracovaného a odstředěného vzorku bujónu zředěn na dvojnásobek ethanolem a zkoumán (vybavení: LKB 2248 čerpadlo, LKB 2141 UV detektor ( analýzy při 222 nm), kolona: Nucleosil C8 10 mikrometrů (BST), eluens: směs (35:65) acetonitrilu a vodného roztoku 0,1 Μ NH4H2PO4 (pH : 5,0), průtoková rychlost 1,2 ml/min). Retenční doby: pseudomonové kyseliny A (PSA) je 8,5 min, pseudomonové kyseliny B (PSB) je 6,0 min; a pseudomonové kyseliny C (PSC)je 22,5 min.
HPLC chromatogram antibiotického komplexu pseudomonové kyseliny biosyntetizovaný kmenem Pseudomonas sp. č. 19/26 je znázorněný v tabulce 1. Tento chromatogram indikuje, že komplex pseudomonové kyseliny získaný fermentaci kyseliny kmene č. 19/26 je v podstatě Čistá pseudomonová kyselina A. Celkové množství složek pseudomonové kyseliny B a pseudomonové kyseliny C je pod 5 %. Tímto způsobem je zřejmé, že kmen Pseudomonas sp. č. 19/26 je schopný biosyntetizovat antibiotika v mnohem výhodnějším složení, než kmeny Pseudomonas fluorescens, produkující komplex kyseliny pseudomonové, publikované dříve. Tato skutečnost je výhodou pro průmyslovou produkci.
Postup podle předloženého vynálezu je doložen následujícími příklady. Nicméně, předložený vynález by tím neměl být omezen.
···« ·· ··♦ 99 ·· · • φ · · · · · · · ·· • ·· · ···· ·· · ·· ·· «· ·· ·· ···
Příklady provedení vynálezu:
Příklad
Kmen Pseudomonas sp. č. 19/26 byl uložen na PCA šikmém agarovém mediu. Složeni PCA media bylo následující.· hovězí extrakt3 g pepton5 g agar15 g zředěné do 1000 ml destilovanou vodou. PH media bylo 7,0-7,2.
Naočkovaný šikmý agar by! inkubovaný při 25 °C po 24 hodiny, a buňky byly suspendovány v 5 ml normálního fyziologického roztoku (počet buněk v suspenzi: 1 O9-101 °/ml). Jeden mililitr získané suspenze byl naočkován do 100 ml 1-21 značeného naočkovaného kultivačního media sterilizovaného v 500ml Erlenmeyerově baňce. Složení media I
1 bylo následující:
glukosa10 g glycerol5 g kukuřičná macerační kapalina3 g síran amonný2 g dihydrogenfosforečnan draselný 0,4g síran hořečnatý-voda (1:7) 0,4g chlorid manganatý-voda (1:2) 0,03 g uhličitan vápenatý4 g slunečnicový olej2 g zředěné do 1000 ml pitnou vodou. PH media je upraveno na 7,0 před sterilizací.
Baňka obsahující naočkované medium byla třepána na třepacím stole (260 ot./min, amplituda 10 cm) při 25 °C po 18-20 hodin. Potom bylo 50 ml (1%) třepané kultury naočkováno do 5 litrů media se značkou E-5 sterilizované při 12 1 °C po 45 min v 1 Olitrové nádobě fermentoru.
··♦» ·· • ♦ • · • 9 ··» • · · · · · ··· • · ♦ · < · · · • · · ·· · · ·· · « · « · ·>·· · · · ·· ·· ·· ·· «· ···
Složení E-5 media bylo následující:
glukosa* 50 g
glyceroi 50 g
sojová živina 100 g
kukuřičná maceračni kapalina 15 g
chlorid sodný 25 g
uhličitan vápenatý 25 g
slunečnicový olej 10 g
zředěné do 5 litrů pitnou vodou. (*Glukosa byla sterilizována v 50% roztoku po 30min a přidána do media společně s očkovacím materiálem). PH media bylo upraveno na 7,0 před sterilizací.
Kultivace byla míchána a provzduŠňována po 50-60 hodin. Teplota kultivace byla 25 °C , rychlost míchání byla 500 ot./min, průtok vzduchu byl 200 litrů/hodinu. Jako protipěnící činidlo byl použit slunečnicový olej v minimálním množství (kolem 20-30 ml na fermentátor).
Biosyntéza komplexu pseudomonové kyseliny byla zahájena v 8,-
10. hodině fermentace a maximální koncentrace antibiotika byia zjištěna po 55.-60. hodinách kultivace.
Izolace pseudomonové kyseliny A z fermentačního bujónu byia provedena následujícím postupem: Po ukončení fermentace bylo 4,5 litru získaného kultivačního bujónu odstředěno, potom bylo upraveno pH supernatantu (4,06 litru) na hodnotu 4,5 zředěnou (20%) kyselinou sírovou. Okyselená kapalina potom byla dvakrát extrahována 2,03 litru ethylacetátu. Fáze byly odděleny a ostrá fáze byla připravena z emulsní organické fáze odstředěním. Spojený extrakt byl odpařen ve vakuu. Získaný surový produkt (2,45 g) byl rozpuštěn ve 25 ml směsi chloroform-methanol-99,5% kyselina octová (93:5:2), a získaný roztok byl naplněn do kolony (výška:průměr=:28:5) připravené z 245 g silikagelu 60 (Kieselgel 60, velikost částic:0,063-0,2 mm; Reanal) a • φφ» » φ • · • φ φφ • φ φ φ φφ φφ φ φ φ < φ • φφφ φφφφ φφ φ Φ· ·Φ φφ φφ Φ· »·· výše uvedené směsi rozpouštědla. Promývání probíhalo s výše vedenou směsí rozpouštědel. V případě promývání byly 50ml frakce spojeny a obsah pseudomonové kyseliny A ve frakcích byl analyzován tenkovrstvou chromatografii použitím adsorbentu silikagelu 60 (Kieselgel DC-Alufolien; 105554, Měrek) a rozpouštědlové směsi chloroform-methanol-99,5% kyselina octová (90:8:2). Frakce 34-50 eluované z kolony Kieselgel 60 obsahovaly pseudomonovou kyselinu A. Tyto frakce byly spojeny (850 ml) a za chlazení bylo do získaného roztoku přidáno 280 ml vody. Potom bylo pH roztoku směsi upraveno na 4,5 1N vodným roztokem hydroxidu sodného. Organický roztok byl oddělen z vodné fáze, potom byla vodná fáze opět extrahována 280 ml chloroformu. Spojené extrakty byly odpařeny ve vakuu, a takto mohla být získána čistá pseudomonová kyselina A.
Frakce 14-15 z chromatografie na koloně obsahovaly pseudomonovou kyselinu C, zatímco frakce 54 obsahovala pseudomonovou kyselinu B, menší složky mohou být odstraněny do čisté formy výše popsanými postupy.
Spektroskopické charakterizace izolovaných složek pseudomonové kyseliny byly popsány použitím systému číslováni strukturního vzorce (I), znázorněného výše.
• · · «· · · • ·
Spektroskopická charakterizace pseudomonové kyseliny A:
UV spektrum (10pg/mI, v 95% roztoku ethanolu): Xtnax=:222 nm El%icm = 303,6.
IČ spektrum (KBr): vOH 3483 a 3306, vc=o 1728 (COOCH2), 1720 (COOH) cm'1.
‘H-NMR spektrum (CDC13, Ójms 0):
(ppm) Interakční konstanta (Hz) Přiřazení (integrál. ),násobnost
5.75 (IH)q 2-H
4.08 (2H)t 9'-H2
3.72-3.93 (4H)m 5-H; 7-H; 13-H; 16-Ha
3.55 (1H) dd 2J16*.16b= 1 1 -8; ’J16bx = 2.6 16-Hb
3.48(lH)dd ’J5.6= 8.4; Jj6.7 = 3.2 6-H
2.82(lH)td 6.3; — 2.3 10-H
2.74(lH)dd Ίιο.ιι= 2.3; 3Jn J2 = 7.8 11-H
2.60(lH)dd 2W= 14.5; %5 = 2.7 4-Ha
2.28-2.36 (3H)m 4-Hb; 2'-H2
2.20 (3H)d 4·12.15= 11 15-H3
2.02 (IH)m 8-H
1.61-1.76 (6H)m 9-H2; 3'-H2; 8'-H2
1.33-1.43 (9H)m 12-H; 4'-H,; 5’-H2'; 6'-H2; 7h2
1.22 (3H)d 3J13.14 ~ 6.4 14-H3
0.94 (3H)d 3J12,17 = 7.0 17-H,
HC-NMR spektrum (CDClj roztok, Ótms = 0):
δ (ppm) Přiřazeni δ (ppm) Přiřazení
177.8 s c-r 42.7t,d C-4, C-12
166.9s C-l 39.4d C-8
156.Os C-3 33.9t,t C-9, C-2'
117.7d C-2 31.6t C-4'*
74.9d C-5 28.9t C-5'*
71.4d C-13 28.8t C-6'*
70.4d C-7 28.5t C-8'*
69.Od C-6 25.9t C-7'
65.3t C-16 24.6t C-3'
63.9t C-9’ 20.8q C-14
61.3d C-l 1 19. Iq C-l 5
55.6d C-10 12.7q C-l 7
* zaměnitelná přiřazeni
Chemická ionizace (Cl) hmotové spektrum
Charakteristická spektrální data:
m/z RI(%) Přiřazení
501 100 (M + H)+
327 45 (M+H-HO/CH2/8COOH)+
309 16 (m/z 327-H2O)+
22.7 o o (C12H!9O4)+
···· · · ·· ·· ··
Spektroskopická charakterizace pseudomonové kyseliny B:
UV spektrum (I0pg/ml, v 95% roztoku ethanolu): Xmax=222 nm
280
IČ spektrum (film): vOh3418, vc=o!713 (COOCH2,COOH) cm'1. ’Η-ΝΜΚ spektrum (CDC13, §tms = 0):
δ (ppm) (integrál.),násobnost Interakční konstanta (Hz) Přiřazení
5.68 (lH)s 2-H
4.02 (2H)t 3·Ε·.> 6.6 9'-H2
3.7 (2H)m 7-H.13-H
3.55 (IH)td 3W\6 = 9.3;%.5=1.8 5-H
3.41 (2H)dd J I6a.l6b= 110 16-H2
3.24 (lH)dd 3J5> 9.3; 3Jó 7 = 2.8 6-H
2.92 (lH)td 3·19.κι— 5.6; 3J|o lt — 2.0 10-H
2.69(lH)dd 3Jm.ii= 2.0; 3Jj).i2 = 2.2 11-H
2.62(IH)dd 14.5; 3J4a 5 = 1.9 4-Ha
2.20 (2H)t ’J2.3= 7.4 2'-H2
2.14(3H)br.s 15-Ha
2.10(lH)dd 2J4Mb= 14.5; 3J4K5 = 9.3 4-Hb
1.85 (lH)dd J9a.9b= 14.3; ’J9a.1U= 5.3 9-H.
1.20-1.68 (14H)m 9-Hb; 12-H; 3'-H2.4‘-H2; 5'- H2; 6'-H2; 7'-H2; 8’-H2
1.14(3H)d 13,14 = 6.4 I4-H3
0.88 (3H)d 3J 12.17 = 7.1 17-Hj
·· « ·
Chemická ionizace (Cl) hmotové spektrum
Charakteristická spektrální data:
ffl/z RI(%)Přiřazeni
517 100 (M+H)+
343 70 (M+H-HO/CH2/8COOH) +
Spektroskopická charakterizace pseudomonové kyseliny C:
UV spektrum (10gg/ml, v 95% roztoku ethanolu): Zmax=222 nm E'%,c,n= 307.
IČ spektrum (film): vOh3435, vc=o 1713 (COOCH2,COOH) cm’1 'H-NMR spektrum (CDC13, ÓTMS = 0):
·· · · δ (ppm) (integrál.),násobnost
5.69 (1H)s 2-H
5.25-5.50 (2H)m 10-H;ll-H
4.00 (2H)t Vó.5 9'-H2
3.88(lH)dd 3J67=3J, =3.0 7-H
3.78(lH)dd Ji 6a. 16b“ 1 l.8;3J16a>8=2.6 16-H,
3.68 (lH)dd 3J4b5=2.5;3J56=9.0 5-H
3.55 (lH)qd 13.I4=6.3 13-H
3.49(lH)dd I|6i)6b“l 1 ·8;3Ι|6Η.8=2.0 16-Hb
3.41 (lH)dd 3J5.6=9.0;3J6.7=3.0 6-H
2.58 (lH)dd 2J4l4b=13.8,3J4a5=2.5 4-Ha
2.20 (2H)t 3J,V=7.4 2'-H2
2.00-2.30 (4H)m 4-Hb; 9-H2;12-H
2IO(3H)m 15-H3
1.78 (lH)m 8-H
1.45-1.65 (4H)m 3'-H2; 8'-H2
1.15-1.35 (8H)m 4'-H2; 5'-H2; 6’-H2, 7'-H:
1.08 (3H)d 3J 13,14=6.3 14-H3
0.92 (3H)d 3Ji217=6.8 17-H3
Chemická ionizace (Cl) hmotové spektrum
Charakteristická spektrální data:
miz RI(%)Přiřazení
485 30 (M + H) +
287 60 (M+H-HO/CH2/8COOH) + ·····» ·· 9 9 9 9 9
9 · · · · 9 · 9 9 9
9 9 9 9 9 9 9 9 9 * ' ·····«····· • * · · · · 9 9 ·» 99 9
Ačkoliv zde byla popsána některá výhodná provedení vynálezu, je odborníkovi znalému stavu techniky zřejmé, že mohou být provedeny různé obměny a variace popsaného provedení, bez toho, že by bylo opuštěn duch a rozsah vynálezu. Proto se předpokládá, že vynález je omezen pouze rozsahem daným připojenými nároky a aplikovatelnými právními pravidly.

Claims (11)

  1. PATENTOVÉ NÁROKY
    1.Způsob přípravy pseudomonové kyseliny A vyznačující se tím, že zahrnuje kroky:
    kultivaci na mediu obsahujícím alespoň jeden organický zdroj dusíku nebo uhlíku, za submerznich aeračních podmínek, kmene bakterii Pseudomonas , schopného biosyntézy pseudomonové kyseliny A, a fermentaci Pseudomonas kultury tak, že se tvoří pseudomonová kyselina A, přičemž uvedeným kmenem bakterií Pseudomonas je kmen bakterií Pseudomonas sp. Č.1 9/26 uložený pod přírůstkovým číslem NCAIM(P)B 001235 v národní sbírce National Coliection of Agricultural and Industrial Microorganisms, v Budapešti, Maďarsku.
  2. 2. Způsob podle nároku 1 vyznačuj ící se tím, že uvedený kmen bakterií Pseudomonas je pseudomonovou kyselinu A produkující mutant nebo variant kmenu bakterií Pseudomonas sp. č. 19/26 uložený pod přírůstkovým číslem NCAIM(P)B 001235 v národní sbírce National Coliection of Agricultural and Industrial Microorganisms, v Budapešti, Maďarsku.
  3. 3. Způsob podle nároku 1 vyznačující se tím, že dále zahrnuje krok izolace pseudomonové kyseliny A.
  4. 4. Způsob podle nároku 1 vyznačující se tím, že uvedený organický zdroj dusíku nebo uhlíku je vybrán ze skupiny sestávající z glukosy, glycerolu, slunečnicového oleje, kaseinu, sojové potravy, peptonu, hovězího extraktu, kukuřičné macerační tekutiny a kvasinkového extraktu.
  5. 5. Způsob podle nároku / vyznačující se tím, že uvedené medium obsahuje alespoň jednu minerální sůl.
    Φ Φ Φ Φ ·· ·· ·· φφ . · ·· · φ · · · · ♦· · • · · φ · φ φ φ φ·
    Φ· φ φ φ · · φ · φ φφ φ φ φ φ φ ·· · · ··
    Φ· ·Φ φφ ·φ φ· ···
  6. 6. Způsob podle nároku 5 vyznačuj ící se tím, že uvedená alespoň jedna minerální sůl je vybrána ze skupiny sestávající z amonné, vápenaté soli, soli železa, zinku, mědi, hořčíku, manganu, sodné a draselné soli, a jejich směsí.
  7. 7. Způsob podle nároku 6 vyznačující se tím, že uvedená alespoň jedna minerální sůl je vybrána ze skupiny sestávající ze síranu amonného, uhličitanu vápenatého, síranu železnatého, chloridu zinečnatého, síranu měďnatého, síranu hořečnatého, chloridu manganatého, chloridu sodného a dihydrogenfosforečnanu draselného, a jejich směsí.
  8. 8. Způsob podle nároku 1 vyznačující se tím, že se uvedená fermentace provádí při teplotě mezi asi 20 °C a asi 30 °C .
  9. 9. Způsob podle nároku 8 vyznačující se tím, že se uvedená fermentace provádí při teplotě mezi asi 24 °C a asi 26 °C .
  10. 10. Kultura Pseudomonas , schopná biosyntézy pseudomonové kyseliny A za submerzních aeračních podmínek, sestávající v podstatě z nového kmene bakterií Pseudomonas sp. č.19/26 uloženého pod přírůstkovým Číslem NCA1M(P)B 00Γ235 v národní sbírce National Collection of Agricuitural and
    Industrial Microorganisms, v Budapešti, Maďarsku.
  11. 11. Biologicky čistá kultura nového kmene bakterií Pseudomonas sp. č. 19/26 uloženého pod přírůstkovým číslem NCAIM(P)B
    001235 v národní sbírce National Collection of Agricuitural and
    Industrial Microorganisms, v Budapešti, Maďarsku.
CZ20012724A 1999-02-03 2000-02-03 Způsob přípravy antibiotické pseudomonové kyseliny A mikrobiologickou cestou CZ20012724A3 (cs)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US11845799P 1999-02-03 1999-02-03
US13733499P 1999-06-03 1999-06-03

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CZ20012724A3 true CZ20012724A3 (cs) 2001-12-12

Family

ID=26816383

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CZ20012724A CZ20012724A3 (cs) 1999-02-03 2000-02-03 Způsob přípravy antibiotické pseudomonové kyseliny A mikrobiologickou cestou

Country Status (22)

Country Link
US (3) US6509177B1 (cs)
EP (1) EP1151131A4 (cs)
JP (1) JP2003515311A (cs)
KR (1) KR20010113674A (cs)
CN (2) CN1203184C (cs)
AU (1) AU762768B2 (cs)
BG (1) BG105776A (cs)
BR (1) BR0009179A (cs)
CA (1) CA2360865A1 (cs)
CZ (1) CZ20012724A3 (cs)
HK (1) HK1041903A1 (cs)
HR (1) HRP20010576A2 (cs)
HU (1) HUP0300363A2 (cs)
IL (2) IL144679A0 (cs)
IS (1) IS6028A (cs)
MX (1) MXPA01007806A (cs)
NO (1) NO20013791L (cs)
PL (1) PL358615A1 (cs)
SK (1) SK10892001A3 (cs)
TR (1) TR200102234T2 (cs)
WO (1) WO2000046389A1 (cs)
YU (1) YU55601A (cs)

Families Citing this family (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1203184C (zh) 1999-02-03 2005-05-25 拜奥盖尔药厂有限公司 经微生物学方法制备假单胞菌酸a抗生素的方法
ES2228294T1 (es) 2001-06-21 2005-04-16 Biogal Gyogyszergyar Rt. Proceso de fermentacion metabolico controlado para la produccion de acido pseudomonico.
EP1455769A4 (en) 2001-12-28 2004-09-22 Biogal Gyogyszergyar METHOD FOR PRODUCING CRYSTALLINE AND AMORPHIC MUPIROCIN CALCIUM
IL150907A (en) * 2002-07-25 2007-07-04 Stephan Cherkez Process for the preparation of stable amorphous calcium pseudomonate
ATE458476T1 (de) 2004-06-01 2010-03-15 Teva Gyogyszergyar Zartkoeruen Verfahren für die zubereitung der amorphen form eines medikamentes
ES2455518T3 (es) * 2005-02-21 2014-04-15 Syngen Biotech Co., Ltd. Purificación de mupirocina
US20110008303A1 (en) * 2008-03-17 2011-01-13 Cedars-Sinai Medical Center Methods for treatment and prevention of mrsa/mssa
CN104370896A (zh) * 2013-11-29 2015-02-25 江苏汉邦科技有限公司 一种纯化假单孢菌素的方法
CN103820369B (zh) * 2014-03-07 2015-11-18 浙江瑞邦药业有限公司 一种萤光假单胞菌及其应用
CN108277243B (zh) * 2018-01-19 2021-03-12 浙江瑞邦药业股份有限公司 一种假单胞菌酸a的制备方法
CN108949845B (zh) * 2018-08-08 2021-08-10 福建康鸿生物科技有限公司 一种发酵培养基及由发酵培养基制备莫匹罗星的方法
CN116867905A (zh) 2021-02-07 2023-10-10 杭州中美华东制药有限公司 一种莫匹罗星的发酵方法

Family Cites Families (26)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE1643240A1 (de) 1966-09-16 1971-06-24 Boehringer Sohn Ingelheim Verfahren zur Herstellung neuer racemischer oder optisch aktiver 1-Phenoxy-2-aminoalkane
US3977943A (en) * 1971-06-12 1976-08-31 Beecham Group Limited Antibiotics
GB1395907A (en) 1971-06-12 1975-05-29 Beecham Group Ltd Antibiotics
US4071536A (en) 1971-06-12 1978-01-31 Beecham Group Limited Antibiotics
JPS5270083A (en) * 1975-12-04 1977-06-10 Yoshitomi Pharmaceut Ind Ltd Manufacture of an antibiotics, trans-pseudomonic acid
GB1577730A (en) 1976-10-23 1980-10-29 Beecham Group Ltd Treatment of infections with pseudomonicacid salts or esters thereof
GB1577545A (en) 1977-07-27 1980-10-22 Beecham Group Ltd Treatment of swine dysenter
CA1103264A (en) 1977-09-30 1981-06-16 Norman H. Rogers Purification of pseudomonic acid
CA1115699A (en) 1978-05-20 1982-01-05 Alan D. Curzons Lithium pseudomonate and its preparation
CA1196284A (en) 1982-05-28 1985-11-05 Joshua Oduro-Yeboah Pharmaceutical formulations
GB8415579D0 (en) 1984-06-19 1984-07-25 Beecham Group Plc Compounds
GB8428952D0 (en) 1984-11-16 1984-12-27 Beecham Group Plc Formulations
GB8530796D0 (en) 1985-12-13 1986-01-22 Beecham Group Plc Pharmaceutical composition
IE59628B1 (en) 1986-06-26 1994-03-09 Beecham Group Plc Treatment of fungal infections
IN171883B (cs) 1990-07-27 1993-01-30 Hoechst India
US5594026A (en) 1990-12-11 1997-01-14 Smithkline Beecham Group P.L.C. Polymorphs of crystalline mupirocin
US5292892A (en) 1991-05-07 1994-03-08 Sankyo Company, Limited Anti-bacterial compound and pharmaceutical compositions thereof
US6503881B2 (en) 1996-08-21 2003-01-07 Micrologix Biotech Inc. Compositions and methods for treating infections using cationic peptides alone or in combination with antibiotics
CA2267248A1 (en) 1996-10-01 1998-04-09 Smithkline Beecham P.L.C. Use of mupirocin for the manufacture of a medicament for the treatment of bacterial infections associated with colonisation of the nasopharynx by pathogenic organisms
US6231875B1 (en) 1998-03-31 2001-05-15 Johnson & Johnson Consumer Companies, Inc. Acidified composition for topical treatment of nail and skin conditions
CN1203184C (zh) 1999-02-03 2005-05-25 拜奥盖尔药厂有限公司 经微生物学方法制备假单胞菌酸a抗生素的方法
EP1147210A4 (en) 1999-02-03 2004-06-02 Biogal Gyogyszergyar METHOD FOR ISOLATING PSEUDOMONIC ACID A FROM A CULTURAL SOLUTION CONTAINING PSEUDOMONIC ACID COMPLEX
US6335023B1 (en) 1999-06-30 2002-01-01 Ruey J. Yu Oligosaccharide aldonic acids and their topical use
US6528086B2 (en) 1999-09-28 2003-03-04 Zars, Inc. Methods and apparatus for drug delivery involving phase changing formulations
IL137363A (en) 2000-07-18 2005-12-18 Agis Ind 1983 Ltd Pharmaceutical compositions containing mupirocin
IL150907A (en) 2002-07-25 2007-07-04 Stephan Cherkez Process for the preparation of stable amorphous calcium pseudomonate

Also Published As

Publication number Publication date
IS6028A (is) 2001-07-31
YU55601A (sh) 2003-02-28
US20020042103A1 (en) 2002-04-11
KR20010113674A (ko) 2001-12-28
AU762768B2 (en) 2003-07-03
US20030100083A1 (en) 2003-05-29
BG105776A (en) 2002-05-31
HK1041903A1 (zh) 2002-07-26
HRP20010576A2 (en) 2002-08-31
CN1670217A (zh) 2005-09-21
US7078223B2 (en) 2006-07-18
NO20013791D0 (no) 2001-08-02
CA2360865A1 (en) 2000-08-10
IL144679A (en) 2007-06-17
JP2003515311A (ja) 2003-05-07
US6506591B2 (en) 2003-01-14
EP1151131A4 (en) 2004-05-12
HUP0300363A2 (hu) 2004-06-28
WO2000046389A1 (en) 2000-08-10
CN1203184C (zh) 2005-05-25
IL144679A0 (en) 2002-06-30
EP1151131A1 (en) 2001-11-07
NO20013791L (no) 2001-10-02
BR0009179A (pt) 2001-11-27
CN1354798A (zh) 2002-06-19
WO2000046389A9 (en) 2001-09-07
US6509177B1 (en) 2003-01-21
SK10892001A3 (sk) 2002-06-04
TR200102234T2 (tr) 2002-10-21
AU2980800A (en) 2000-08-25
MXPA01007806A (es) 2003-06-04
PL358615A1 (en) 2004-08-09

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Kunze et al. Nannochelins A, B and C, new iron-chelating compounds from Nannocystis exedens (myxobacteria) production, isolation, physico-chemical and biological properties
US7202063B1 (en) Processes for the production of rhamnolipids
Patel et al. Indole-3-acetic acid (IAA) production by endophytic bacteria isolated from saline dessert, the little Runn of Kutch
CZ20012724A3 (cs) Způsob přípravy antibiotické pseudomonové kyseliny A mikrobiologickou cestou
US5491077A (en) Microbial method
TANAKA et al. PHTHOXAZOLIN A, A SPECIFIC INHIBITOR OF CELLULOSE BIOSYNTHESIS FROM MICROBIAL ORIGIN I. DISCOVERY, TAXONOMY OF PRODUCING MICROORGANISM, FERMENTATION, AND BIOLOGICAL ACTIVITY
Lahoum et al. Antifungal activity of a Saharan strain of Actinomadura sp. ACD1 against toxigenic fungi and other pathogenic microorganisms
KR20020048927A (ko) 마이크로모노스포라를 이용한 콤팩틴의프라바스타틴으로의 히드록시화
JP4365843B2 (ja) 混合培養による二次代謝産物のスクリーニング方法及び製造方法
JP4521145B2 (ja) 抗生物質カプラザマイシン類およびその製造法
Terano et al. Siderophore production and induction of iron-regulated proteins by a microorganism from rhizosphere of barley
ZA200106171B (en) Process for the preparation of pseudomonic acid A antibiotic by microbiological method.
KR960007618B1 (ko) 항생물질 플러스박신
US7794991B2 (en) Stemphones and production thereof
KR100411187B1 (ko) 신규한 스트렙토마이세스 속 ｇ91353(ｋｃｔｃ18056ｐ)균주 및 신규 항세균제
El-Waseif et al. Biosynthesis, optimization and structure elucidation of antimicrobial agent produced by Streptomyces clavuligerus isolated from Egyptian soil.
Yon et al. AL072, a novel anti-Legionella antibiotic produced by Streptomyces sp.
KR0163660B1 (ko) 방선균류인 마이크로모노스포라 속 sa-246 균주를 이용한 항균-항암활성을 갖는 saph 유도체의 제조방법
JP3327982B2 (ja) 新規な抗生物質ｍｉ４８１−４２ｆ４−ａ関連物質
WO1999024439A1 (fr) Nouvelle substance ft-0554 et procede de fabrication
Harikrishnan et al. Enhanced production of phenazine-like metabolite produced
JPH0919294A (ja) チオトロポシンの製造方法および用途
JPH0482135B2 (cs)
WO2003048373A1 (fr) Nouvelle substance fki-0550 et son procede de production