CZ20012494A3

CZ20012494A3 - Substituované 2-aryl-3-(heteroaryl)-imidazo[1,2-a]Pyrimidiny, způsob přípravy těchto sloučenin a farmaceutické kompozice obsahující tyto sloučeniny

Info

Publication number: CZ20012494A3
Application number: CZ20012494A
Authority: CZ
Inventors: John H. Dodd; James R. Henry; Kenneth C. Rupert
Original assignee: Ortho-Mcneil Pharmaceutical, Inc.
Priority date: 1999-11-10
Filing date: 2000-10-27
Publication date: 2001-10-17
Also published as: CN1255406C; JP2003513977A; NO20013419D0; CA2361139A1; AU1444501A; WO2001034605A1; CN1342162A; AU784484B2; PT1140939E; NO20013419L; IL144238A; ID29514A; ATE288915T1; KR20010089805A; RU2264403C2; HK1043591A1; DE60018037D1; HK1043591B; EP1140939A1; AR026410A1

Description

(57) Anotace:

Tento vynález se týká série imidazopyrimidinů obecného vzorce I a farmaceutických preparátů obsahujících tyto sloučeniny. Sloučeniny, které jsou předmětem vynálezu inhibují tvorbu celé řady zánětlivých cytokinů ajsou užitečné v léčbě a prevenci onemocnění sdružených s nadprodukcí těchto cytokinů.

(13) Druh dokumentu: A3 (51) Int. Cl.⁷;

C 07 D 487/04 A 61 K 31/505

A61P 19/02

A 61 P 19/10

A 61 P 25/28 (I) • · · · • · · ·

Substituované 2-aryl-3- (heteroaryl) -imidazo(l ,2-a] pyrimidiny, .způsob přípravy těchto sloučenin a farmaceutické preparáty obsahující ^{* v} tyto sloučeniny Vj

Oblast techniky

Vynález se týká série substituovaných imidazopyrimidinů a farmaceutických preparátů obsahujících tyto sloučeniny. Sloučeniny, které jsou předmětem vynálezu inhibují tvorbu celou řadu zánětlivých cytokinů, zejména TNF-α a IL-Ιβ. Sloučeniny tohoto vynálezu jsou užitečné v léčbě onemocnění zprostředkovaných proteinem p38, jako jsou například revmatoidní artritida, nespecifické střevní záněty, septický šok, osteoporóza, osteoartróza, neurodegenerativní onemocnění a onemocnění spojená s AIDS.

Dosavadní stav techniky

Zánětlivé cytokiny TNF-α a IL-Ιβ hrají důležitou roli v celé řadě zánětlivých onemocnění, jako je například revmatoidní artritida (Dinarello et al., Curr Opin Immunol 1991, 3, 941-8). Artritida je zánětlivé onemocnění, které postihuje milióny lidí a může napadnout jakýkoli kloub v lidském těle. Její příznaky se pohybují od mírné bolesti a zánětu postižených kloubů až k těžkým a vysilujícím bolestem a zánětu. Ačkoli toto onemocnění se vyskytuje hlavně u stárnoucích dospělých, není omezeno pouze na dospělé.

Nejběžnější léčba artritidy zahrnuje použití nesteroidních protizánětlivých léků (NSAID), aby došlo k úlevě od příznaků. Avšak navzdory širokému použití NSAID nemůže mnoho jedinců po delší dobu tolerovat dávky nezbytné k léčbě onemocnění. NSAID navíc léčí čistě příznaky onemocnění bez ovlivnění základní příčiny. Selže-li u pacientů léčba pomocí NSAID, jsou často používány další léky, jako jsou například metotrexát, D-penicilamin, soli zlata a prednison. Tyto léky mají často významné toxické účinky a mechanismus jejich účinku zůstává neznámý. V malých klinických studiích na člověku bylo prokázáno, že antagonisté receptorů pro IL-Ιβ a monoklonální protilátky k TNF-α snižují příznaky revmatoidní artritidy. Navíc k této bílkovinné léčbě existují látky s malou molekulou, které inhibuji produkci těchto cytokinů, a které prokázaly aktivitu na zvířecích modelech artritidy (Boehm et al., J Med Chem 1996, 39: 3929-37). Z těchto malých bylo prokázáno, že SB 203580 účinně snižuje tvorbu TNF-α a IL-1 v buněčných liniích lidských monocytů stimulovaných pomocí LPS s hodnotami IC₅₀ od 50 do 100 nM (Adams et al., WO 93/14081, červenec 23, 1993). Navíc k tomuto in vitro testu inhibuje SB 203580 tvorbu zánětlivých cytokinů u potkanů a myší při hodnotách IC₅₀ od 15 do 25 mg/kg (Badger et al., J Pharm Exp Therap 1996, 279: 1453-61). Ačkoli lidská data nejsou pro SB 203580 v současnosti k dispozici, bylo pro monoklonální protilátky proti TNF-α prokázáno, že jsou účinné v léčbě revmatoidní artritidy (Elliot et al, Arthritis Rheum. 1993, 36: 1681-90). V důsledku perorální aktivity a účinností SB 203580 na zvířecích modelech naznačili výzkumní pracovníci, že sloučenina s tímto

•	• ·	9 9	9 9 :	*· > ·
• · ·		9	·	9 ·	•	i. 97	• ·
· ·	• ·	9	9	• · ' '	9	F^f}9

• ·	•	9	9	• 9···.'·,	9	•
• · ·	• ·	9’9		* · .·.		9Ať	: 9 9

profilem má potenciál jako životaschopná léčebná možnost pro revmatóidní artritidu (Badger et al., J Pharm Exp Therap 1996, 279: 1453-61). L*

SB 203580 a další látky s malou molekulou snižují tvorbu zánětlivých cytokinů inhibicí aktivity serin/threoninové kinázy p38, která je označována jako CSBP v koncentraci IC50 200 nM (Griswold et al., Pharm Commun 1996, 7: 323-9). Ačkoli přesná role této kinázy je neznámá, hraje úlohu jak při tvorbě TNF-α, tak také v signálních odpovědích sdružených s receptorem pro TNF-a.

WO 91/00092 uvádí způsob inhibice tvorby interleukinu-1 monocyty a/nebo makrofágy u člověka prostřednictvím podání diaryl-substituovaného imidazolu fúzovaného s druhým heterocyklickým kruhem obsahujícím dusíkový přemosťující atom, kde druhý kruh může obsahovat také atom síry, kyslíku nebo další atom dusíku, a může obsahovat další nenasycené vazby.

Ve WO 90/15534 a EP 0403251 jsou uvedeny léčebné způsoby pro člověka postiženého T buněčnou virovou infekcí (TIV), která zahrnuje podání účinného množství látky snižující aktivitu monokinů.

Ve WO 91/19497 je uvedena diarylem substituovaná imidazolová sloučenina užitečná pro duální inhibicí onemocnění způsobených 5-lipooxygenázovou dráhou a onemocnění způsobených cyklooxygenázovou dráhou. Tato sloučenina je fúzována k druhému nenasycenému 5 nebo 6 člennému heterocyklickému kruhu obsahujícímu dusíkový přemosťující atom, kde druhý 5-členný kruh také obsahuje atom síry nebo kyslíku a 6-členný kruh může také obsahovat další atom dusíku.

Navzdory těmto známým sloučeninám a způsobům zůstává v oboru potřeba zlepšit způsoby snížení produkce zánětlivých cytokinů pomocí inhibice aktivity serin/threoninové kinázy p38, a příbuzné způsoby léčby a prevence artritidy a dalších zánětlivých chorob.

Pep4-s—vynálezu

Tento vynález poskytuje nové sloučeniny, které inhibují in vitro aktivitu p38 v nanomolárním rozmezí, stejně tak jako způsoby mající stejný účinek. Sloučeniny, které jsou předmětem předkládaného vynálezu, navíc inhibují in vitro sekreci TNF-α.a IL-Ιβ v nanomolárním rozmezí. Na zvířecích modelech byla prokázána inhibice produkce TNF-α indukovaná pomocí LPS. Tyto biologické aktivity byly prokázány v in vitro a in vivo testech pro sloučeniny, které jsou předmětem předkládaného vynálezu, definované Vzorcem I:

Tento vynález také poskytuje farmaceutický preparát obsahující předkládanou sloučeninu a farmaceuticky přijatelný nosič, stejně tak jako poskytuje příslušné syntetické způsoby.

Tento vynález dále poskytuje způsob léčby jedince trpícího stavem, jehož zmírnění je zprostředkováno snížením zánětlivých cytokinů, jejichž účinky se podílí na tomto stavu, kterýžto způsob zahrnuje podání jedinci terapeuticky účinné dávky předkládaného farmaceutického preparátu.

Tento vynález dále ještě poskytuje u jedince způsob inhibice vzplanutí stavu, jehož zmírnění je zprostředkováno snížením zánětlivých cytokinů, jejichž účinky se podílí na tomto stavu, kterýžto způsob zahrnuje podání jedinci profylakticky účinné dávky předkládaného farmaceutického preparátu.

Detailní popis vynálezu

Vynález poskytuje sloučeninu definovanou Vzorcem I

Vzorec I nebo její farmaceuticky přijatelné soli, kde

a) Ri je vybráno z NH₂, 0ι-₆₅ alkylamino, diCi_₅ alkylamino, hydroxy, Ci_₅alkoxy, fenylmetylamino, heterocyklymetyl, C^-s alkylkarbonylamino a substituované fenylkarbonylamino skupiny, kde řečená fenylmetylamino a heterocyklylmetyl skupina může být substituovaná na své fenylové části jedním nebo více členů vybraných ze skupiny obsahující halogen, Ci_₅ alkyl, C1-5 alkoxy, aryl Ci_₃ alkylamino, R'R'' NCH=N- a OR''', kde R', R'' a R jsou nezávisle vybrány z H,

Ci _5 alkyl, fenylmetyl, substituovaný

• · · · ·

fenylmetyl, a-alkyl-fenylmetyl, substituovaný α-alkyl-fenylmetyl, heterocyklylmetyl a substituovaný heterocyklylmetyl;

Y je vybráno ze skupiny obsahující H, halogen, heterocyklus, 0R₄, SR₄, NR₄ a NR₄R₅, kde

R₄ a R₆ jsou nezávisle vybrány z H, heterocyklyl, C₃_₅ karbocyklofenyl, α-alkyl-fenyl Cx_₅ alkyl, nevětvený nebo větvený alkyl volitelně substituovaný pomocí R, NR, N(R)₂, C₃_₅ karbocyklu, fenylu nebo substituovaného fenylu, kde (i) R je H, halogen, Cx_₅ alkyl, fenyl metyl, substituovaný fenyl metyl, SO₂Ph, pyridyl, nebo pyrldyl metyl a (ii) řečený fenyl, heterocyklyl a α-alkyl-fenyl ϋχ_₅ alkyl mohou být substituovány jedním nebo více členů vybraných ze skupiny obsahující halogen, C]_₅ alkyl, Cx_₅ alkoxy, aryl Cx_₃ alkylamino, fenyl metyl, substituovaný fenyl metyl, R'R'' NCH=N- a OR''', jak je zde definováno v (a);

c) R₂ je jeden z pěti členů nezávisle vybraných ze skupiny obsahující halogen, trifluorometyl, -NCH₂PH, Cx-₅ alkyl a Cx-₅ alkoxy;

d) R₃ je H nebo tvoři dohromady aromatický kruh; a

e) X je N nebo CH.

V jedné formě předkládané sloučeniny je R₃ NH₂. V další formě je R₂ prvek vybraný ze skupiny obsahující halogen, trifluorometyl, -NCH₂PH a Cx-₅ alkoxy.

V ještě další formě je Y NR₄ a R₄ je fenylmetyl. V ještě další formě je X CH.

Ledaže je jinak specifikováno, týká se termín alkyl nevětvených, větvených nebo cyklických substituentů tvořených čistě uhlíkem a H bez nenasycených vazeb. Termín alkoxy se týká O-alkylu, kde alkyl je stejný, jako je definováno výše. Termín aromatický kruh se týká 5- až 6- členného kruhu obsahujícího 6-elektronový delokalizovaný konjugovaný π vazebný systém, jako jsou například fenyl, furanyl a pyrolyl. Termín aryl zahrnuje mono a fúzované aromatické kruhy, jako jsou například fenyl, naftyl, difenyl, fluorofenyl, difluorofenyl, benzyl, benzoyloxyfenyl, hydroxyfenyl, karboxyfenyl, trifluorometylfenyl, metoxyetylfenyl, acetamidofenyl, tolyl, xylyl, dimetylkarbamylfenyl a podobně. Termín halo znamená fluoro, chloro, bromo a iodo. Symbol Ph se týká fenylu. Termín heterocyklyl, heterocyklus nebo heterocyklické reziduum představuje jeden nebo fúzovaný kruh mající alespoň jeden atom kruhu jiný než uhlíkový, například pyridinový, pyrimidinový, oxyzolinový, pyrolový, imidazolový, morfolinový, furanový, indolový, benzofuranový, pyrazolový, pyrolidinový, piperidinový a benzimidazolový.

Substituovaný heterocyklylmetyl a substituovaný fenylmetyl mají substituenty, jako jsou například halogen, Cx_₅ alkyl, Cx-₅ alkoxy, aryl Cx-₃

• · ··· ♦ · ♦ · t· • · • · · * · • · ·* alkylamino, R'R'' NCH=N-, a OR''', kde R', R'' , a R''' jsou nezávisle vybrány z H, Cx-s alkyl, fenylmetyl, substituovaný fenylmetyl, a-alkylfenylmetyl, heterocyklylmetyl a substituovaný heterocyklylmetyl.

Termín FCS představuje fetální telecí sérum, TCA představuje kyselinu trichloroctovou a RPMI představuje médium z Roswell Park Memoriál Inst. (Sigma kat. č. R0833). Nezávisle” znamená, že existuje-li více než jeden substituent, mohou být substutuenty odlišné. DME” se týká etylen glykodimetylu.. Termín NaHMDS se týká hexametyldisilazidu sodného.

Termín farmaceuticky přijatelná sůl označuje soli volné báze, která má požadovanou farmakologickou aktivitu volné báze, a která není ani biologicky ani jinak nežádoucí. Tyto soli mohou být odvozeny z anorganických nebo z organických kyselin. Příklady anorganických kyselin jsou kyselina chlorovodíková, kyselina bromovodíkové, kyselina jodovodíková, kyselina chloristá, kyselina dusičná, kyselina sírová a kyselina fosforečná. Příklady organických kyselin jsou kyselina octová, kyselina propionové, kyselina glykolová, kyselina mléčná, kyselina pyrohroznová, kyselina malonová, kyselina jantarová, kyselina jablečná, kyselina maleinová, kyselina fumarové, kyselina vinná, kyselina citrónová, kyselina benzoová, kyselina skořicová, kyselina mandlová, kyselina šťavelová, kyselina pamoová, kyselina sacharová, kyselina metansulfonová, kyselina etansulfonová, kyselina p-toluensulfonová, kyselina metylsulfonová, kyselina salicylové, kyselina hydroetansulfonová, kyselina benzensulfonové, kyselina 2-naftalensulfonová, kyselina p-toluensulfonová, kyselina cyklohexansulfonová a podobně.

Mají-li sloučeniny podle vynálezu jedno nebo více stereogenních center, mělo by být rozuměno, že součástí tohoto vynálezu jsou také všechny možné optické izomery, antipody, enantiomery a diastereomery vzniklé z dalších stereogenních center, které mohou existovat v jejich optických antipodech, racemátech a racemických směsích. Antipody mohou být odděleny způsoby známými osobám znalým oboru, jako jsou například frakční rekrystalizace diastereomerních solí enantiomericky čistých kyselin. Alternativně . mohou být antipody separovány chromatografií na koloně Pirklova typu.

Následující sloučeniny jsou příkladem předkládaného vynálezu:

Sloučenina 1: 2-(4-fluorofehyl)-3-(4-pyridinyl)-imidazo [1,2-a] pyrimidin7-amin; _w •N.

Ν'

F

Sloučenina 1

Sloučenina 2 • · .«L .....

9 9 · 9 · · ‘ ’ · * • · .· · * \ *',** * »* · Sloučenina 2: 2-(3~fluorofenyl)-3-(4-pyridinyl)-imidazo [*l,2-a] pyrimidin7-amin; .

Sloučenina 3: 2-(4-fluorofenyl)-3-(4-chinolinyl)-imidazo [1,2-a] pyrimidin7-amin;

Sloučenina 3

Sloučenina 4

Sloučenina 4: 2-(3-chloro-4-fluorofenyl)-3-(4-pyridinyl)-imidazo [1,2-a] pyrimidin-7-amin;

Sloučenina 5: 2-(fenyl-3-(4-pyridinyl)-imidazo [1,2-a] pyrimidin-7-amin;

Sloučenina 6

Sloučenina 6: 2-(4-fluorofenyl)-3-(2-[(fenylmetyl)amino]-4-pyridinyl]imidazo [1,2-a] pyrimidin-7-amin;

Sloučenina 7: 3-(4-pyridinyl)-2-[3-(trifluorometyl)fenyl] -imidazo [1,2-a] pyrimidin-7-amin;

Sloučenina 7

Sloučenina 8:

(trifluorometyl)fenyl] -imidazo

3-[2-[(fenylmetyl) amino]-4-pyridinyl]-2-[3[1,2-a] pyrimidin-7-amin;

·♦ t ♦ * * <· << v♦· ♦ ·♦· · · ‘ 9^0.* • · · · · I, i»♦ ··· «« ·· ♦ ♦ . . ·» ···

Sloučenina 9: 3-[2-[[(1S)1-fenyletyl] amino]-4-pyrimidinyl]-2-[3(trifluorometyl)fenyl] -imidazo [1,2-a] pyrimidin-7-amin;

Sloučenina 9 Sloučenina 10

Sloučenina 10: 2-(4-fluorofenyl)-3-[2-(metylthio)-4-pyrimidinyl][1,2-a] pyrimidin-7-amin;

imidazo

Sloučenina 11: 3-[2-metylthio) -4-pyrimidinyl]-2-[3-(trifluoro metyl) fenyl] -imidazo [1,2-a] pyrimidin-7-amin;

Sloučenina 11

Sloučenina 12

Sloučenina 12: 2-(3-fluorofenyl)-3-[2-(metylthio)-4-pyrimidinyl][1,2-a] pyrimidin-7-amin;

imidazo

Sloučenina 13: 3-(4-pyrimidinyl)-2-[3-(trifluoro metyl) fenyl] -imidazo [1,2-a] pyrimidin-7-amin;

Sloučenina 14

Sloučenina 13

Sloučenina 14; 2-fenyl-3-[2-(1-piperidinyl)-4-pyrimidinyl]- imidazo [1,2-a] pyrimidin-7-amin;

Sloučenina 15: 3-[2-(metylthio)-4-pyrimidinyl]-2-fenylimidazo pyrimidin-7-amin;

[1,2-a]

T

* ·φ

Sloučenina 16: 2-fenyl-3-(4-pyrimidinyl]-imidazo [1,2-a] pyrimidin-7-amin;

Sloučenina 17: 3-[2-(metylsulfonyl)-4-pyrimidinyl]-2-fenylimidazo [1,2-a]

%/

Sloučenina 18

Sloučenina

18:

(trifluorometyl)fenyl]imidazo

3-[2-(metylsulfonyl)-4-pyrimidinyl]-2-[3[1,2-a] pyrimidin-7-amin;

Sloučenina 19: 2-fenyl-3-[2-[[(1S)-1-fenyletyl]amino] -4-pyrimidinyl]

Sloučenina 19

Sloučenina 20

Sloučenina 20: 3-[[[(4-metoxyfenyl)metyl]amino]-4-pyrimidinyl]-2fenylimidazo [1,2-a] pyrimidin-7-amin;

Sloučenina 21: 2-(4-fluorofenyl)-3-[3-[[(1S)-1-fenyletyl]amino] -4pyridinyl] imidazo [1,2-a] pyrimidin-7-amin;

Sloučenina 22

Sloučenina 21 *4

Sloučenina 22: 3-(2-([(lS)-l-cyklohexyletyl)amino] fluorofenyl) imidazo [1,2-a] pyrimidin-7-amin;

Φ ' •44 •· »4 > *♦

-4-pyrimidinyl )--2- (44 4 4 •»4 • ·4 • t4 ··44

Sloučenina 23: 3-(2-metoxy-4-pyrimidinyl)-2-fenylimidazo [1,2-a] pyrimidin7-amin;

Sloučenina 24: 2-(4-fluorofenyl)-3-(4-pyrimidinyl) imidazo [1,2-a] pyrimidin-7-amin;

Sloučenina 25: 2-(3-chlorofenyl)-3-(4-pyridinyl) imidazo [1,2-a] pyrimidin7-amin;

Sloučenina 26

Sloučenina 25

Sloučenina 26: 3-(2-bromo-4-pyridinyl)-2-(4-fluorofenyl) imidazo [1,2-a] pyrimidin-7-amin; a

Sloučenina 27: 3-(2-bromo-4-pyridinyl)-2-[3-trifluorometyl)fenyl] imidazo

Sloučenina 27

Tento vynález také poskytuje farmaceutický preparát obsahujici předkládanou sloučeninu a farmaceuticky přijatelný nosič.

Farmaceutické preparáty obsahujici sloučeninu, která je předmětem předkládaného vynálezu, jako aktivní složku v promíchané směsi * 9 9 ·9 9 9 '9*·

ΦΦ 9 9 9 9 9 Φ ♦·· • 9 99 9 9 9« ♦ <·9

9 9 9 9 9 9 ·>< ··

9 9 9 9 9 · *V Φ9

99· 99 99 99 φ>’9·9 s farmaceutickým nosičem mohou být připraveny podle konvenčních farmaceutických technik. Nosič může mít celou řadu forem v závislosti na preparátu požadovaném pro podání, jako například pro topické a systémové podání zahrnující, ale neomezující se na pouze intravenózní infúzi, perorální, nazální nebo parenterální podání. Při přípravě preparátů v perorální dávkové formě mohou být použity jakékoli z obvyklých farmaceutických nosičů, jako jsou například voda, glycerol, glykoly, alkoholy, dochucující látky, konzervační látky, dobarvující látky a sirup a podobně pro perorální tekuté preparáty (například suspenze, elixíry a roztoky); nebo nosiče jako jsou například škroby, cukry, metylcelulóza, magnézium stearát, dikalciumfosfát, manitol a podobně v případě perorálních pevných preparátů (například prášky, kapsle a tablety). Všechny excipientní látky mohou být smíšeny podle potřeby s dezintegračními látkami, ředícími látkami, granulačními látkami, lubrikačními látkami, vazebnými látkami a podobně, za použití konvenčních technik známých osobám znalým oboru přípravy dávkových forem.

Přednostní způsob podáni je perorální podáni. Pro jednoduchost podání představují tablety a kapsle výhodnou perorální dávkovou formu, v které jsou samozřejmě použity pevné farmaceutické nosiče. Pokud je požadováno, mohou být tablety potaženy cukrem nebo mohou být entericky potažené pomocí standardních technik. Pro parenterální preparáty zahrnuje nosič obvykle sterilní vodu, avšak mohou být obsaženy i jiné složky, například ke zlepšení rozpustnosti nebo pro konzervační účely. Mohou být také připraveny injekční suspenze, v kterých mohou být použity příslušné tekuté nosiče, suspendující látky a podobně.

Jak je použito v tomto vynálezu, týká se termín cytokin proteinů TNF-α a IL-Ιβ. Cytokiny způsobené poruchy jsou onemocnění člověka a jiných savců, u kterých nadprodukce cytokinů způsobuje příznaky onemocnění. Nadprodukce cytokinů TNF-α a IL-Ιβ je spojena s celou řadou chorob.

Sloučeniny, které jsou předmětem předkládaného vynálezu inhibují tvorbu TNF-α a IL-Ιβ. Tento vynález tedy dále poskytuje způsob léčby jedince trpícího stavem, jehož zmírnění je způsobeno snížením zánětlivých cytokinů, jejichž účinky se podílejí na tomto stavu, kterýžto způsob zahrnuje podání jedinci terapeuticky účinné dávky předkládaného farmaceutického preparátu. Jak je zde používáno zahrnuje termín jedinec·· bez omezení jakéhokoli živočicha nebo uměle modifikovaného živočicha. V přednostní formě vynálezu je jedincem člověk.

Tento vynález dále ještě poskytuje u jedince způsob inhibice vzplanutí stavu, jehož zmírnění je způsobeno snížením zánětlivých cytokinů, jejichž účinky se podílejí na stavu, kterýžto způsob zahrnuje podáni jedinci profylakticky účinné dávky předkládaného farmaceutického preparátu.

• 0

9 0 0	• 0
9 9 . 0	«	0
• 9 99	0	0
9 9 9	0 '	«
'000.··	• 0

00 0. * 99	- . 41	0 0 0 0 0
9 9:.'	. 9 ' 9	0
0 0	99	0 0 0

V jedné formě je stav vybrán ze skupiny tvořené artritidou, nespecifickými záněty střeva, septickým šokem, osteoporózou, osteoartrózou, neuropatickou bolesti, replikaci HIV, HIV demencí, virovou myokarditidou, insulin dependentnim diabetem, non-insulin dependentním diabetem, periodontální nemocí, restenózou, alopecia areata, deplecí T lymfocytů u infekce HIV nebo AIDS, psoriázou, akutní pankreatitidou, rejekcí alotransplantátu, alergickým zánětem plic, aterosklerózou, roztroušenou sklerózou, kachexií, Alzheimerovou chorobou, mozkovou příhodou, Crohnovou chorobou, ischémii, městnavým srdečním selháním, plicní fibrózou, hepatitidou, glioblastomem, syndromem Guillain-Barre a systémovým lupus erytematosus. V přednostní formě vynálezu je stavem revmatoidní artritida.

Jak je zde používáno, znamená léčení poruchy eliminaci nebo jinak zmírnění příčiny a/nebo jejích účinků. Inhibici vzplanutí poruchy se rozumí prevence, oddálení a snížení pravděpodobnosti takového vzplanutí. Podobně terapeuticky účinné a profylakticky účinné dávky jsou dávky, které umožňují léčbu a respektive inhibici poruchy. Způsoby pro určení terapeuticky a profylakticky účinných dávek pro předkládaný farmaceutický preparát jsou známé v oboru. Účinná dávka pro podání farmaceutického preparátu člověku může být určena například matematicky z výsledků studií na zvířatech.

V jedné formě vynálezu jsou perorální dávky předkládaných sloučenin v rozmezí od zhruba 0,05 do zhruba 10 mg/kg denně. V další formě vynálezu jsou perorální dávky předkládaných sloučenin v rozmezí od zhruba 0,05 do zhruba 50 mg/kg denně, a v další formě vynálezu od zhruba 0,05 do zhruba 20 mg/kg denně. Infúzní dávky mohou být v rozmezí například od zhruba 1,0 do 1,0 x 10⁴ ug/kg/min předkládané sloučeniny, smíšené s farmaceutickým nosičem podávané v rozmezí od několika minut do několika dnů. Pro topické podání může být přednostní sloučenina smíšena s farmaceutickým nosičem v koncentraci například zhruba 0,1 až zhruba 10% léku k vehikulu.

Nakonec tento vynález poskytuje postupy přípravy předkládaných sloučenin. Tyto sloučeniny mohou být připraveny, jak je uvedeno níže, ze snadno dostupných výchozích materiálů a/nebo meziproduktů pomocí postupů dobře známých v oboru.

Tomuto postupu bude lépe porozuměno odkazem na Experimentální Detaily, které následují, ale osoby znalé oboru snadno ocení, že tyto Detaily jsou pouze ilustrací vynálezu, jak je popsáno detailněji v patentových nárocích, které následuji posléze. Navíc jsou v této přihlášce citovány různé publikace. Uvedení těchto publikací je tímto začleněno jako reference k této přihlášce, aby byl detailněji popsán dosavadní stav techniky, kterého se vynález týká.

Experimentální detaily

A. Schémata a syntézy

..... · >íf'.' » « · · ♦ ·. · .i.'.)- »·*··,» ιΐ*'·# · »«· «· ·· *·· Sloučeniny definované Vzorcem I, v kterých R je NH₂ a R₃ a Y jsou H, mohou být připraveny podle schématu I. Výchozí sloučenina typu ia, jako je například 4-metyl pyridin nebo 4-metyl chinolin, může být promíchávána při pokojové teplotě s esterem typu lb a dvěmi ekvivalenty, nebo s vhodnou bránící zásadou, jako je například hexametyldisilazid ve vhodném rozpouštědle, jako je například THF, za vzniku enolátu lc, který je poté brómován na typ ld. Meziprodukt typu ld může být dále podroben reakci s 2,6-diaminopyridinem za vzniku sloučeniny definované Vzorcem I, v které R je NH₂ a Y je H.

Schéma I

	NaHMDS
THF
1a 1a' w
Χ'Χ +	°V^zX'Bf
1e
	1d

Ačkoli ilustrovaný způsob vede k tvorbě sloučeniny definované Vzorcem I, kde Ri je NH₂, XjeCHaYjeH, může být toto schéma také použito pro tvorbu jiných sloučenin vynálezu.

Schéma II ukazuje, jak připravit sloučeniny definované Vzorcem I, kde X je N a Y, R₂ a R₃ jsou stejné, jako je definováno H.

Schéma II

J.

♦ · . « :· · '· ' • 4 · ·

4' ·.· •44 ' •4

4

4' • 4 t

4

Λ ♦

«4»

Μ.,* > *··».

, kde X je definováno výše.

M

Schéma III ukazuje, jak připravit sloučeniny definované Vzorcem I CH, Z' je F, Cl nebo Br a Y, R₂ a R₃ jsou stejné, jako je

Schéma III

Z' = F, Cl, Br

3a

NaHMDS

THF

··

··
•	« 0 ♦
*	•
« *	• · 0
♦
• 0

Schéma IV ukazuje, jak připravit sloučeniny definované Vzorcem I, CH, Y je NR, a R< je stejné, jako je definováno výše.

Příklady uvedené níže popisují konkrétněji chemickou syntézu typických sloučenin předkládaného vynálezu. Zbývající sloučeniny zde uvedené mohou být připraveny podobně ve shodě s jedním nebo více těchto způsobů. Nebyl učiněn žádný pokus optimalizovat výtěžky v těchto reakcích a mělo by být zřejmé osobě znalé oboru, že odchylky v reakčních časech, teplotách, rozpouštědlech a/nebo činidlech by mohli zvýšit tyto výtěžky.

Příklady provedení vynálezu

Příklad 1

Imidazo [1,2-a] pyrimidin-7-amin, 3-[2-(fenylmetyl)amino]-4-pyridinyl]-2[3-(trifluorometyl)fenyl]

6,59 g (31,18 mmol) di-t-butyldikarbonátu bylo přidáno do 5,44 g (27,44 mmolu) 2-benzylamino-4 metylpyridinu ve 40 ml t-butanolu. Po 18 hodinách bylo rozpouštědlo odstraněno ve vakuu. Reziduum bylo rozetřeno s hexanem a zfiltrováno. Filtrát byl zakoncentrován ve vakuu za vzniku 4,25 g chráněného aminu. NMR (300 Mhz, DMSO-d₆) δ 8,22 (1H, d, J=5,l Hz), 6,99 (1H, d, J=5,l Hz), 5,10 (2H, s), 2,31 (3H, s), 1,38 (9H, s).

* sodného v tetrahydrofuranu ml (61 mmol) 1,0 M bis (trimetylsilyl) amidu bylo po kapkách pomocí trychtýře a v dusíkové atmosféře přidáno k roztoku 8,97 g (30,07 mmol) N-Boc-2-benzylamino-4-metylpyridinu a 6,58 (30,07 mmol) etyl 3-trifluorometylbenzoátu v 60 ml tetrahydrofuranu. Po 18 hodinách byla reakce ukončena nasyceným roztokem chloridu amonného a rozpouštědlo bylo odstraněno ve vakuu. Reziduum bylo extrahováno promyto 2x200 ml vody, 1x100 ml solného roztoku, zfiltrováno a zakoncentrováno ve vakuu za vzniku chromatografie za produktu ve formě (1H, s)

5,11 (2H, použití hustého s), 1,33

5:1 hexanu/etylacetátu žlutého do 300 ml etylacetátu a vysušeno síranem sodným, hnědého umožnila oleje. Sloupcová získání 10,92 g DMSO-d₆) δ 7,59 oleje.

NMR (300 Mhz,

10,92 g zpětným

HC1, etylacetátu. Organické vrstvy byly separovány, zkombinovány, promyty 200 ml vody, 2x100 ml solného roztoku, vysušeny síranem hořečnatým, zfiltrovány a zakoncentrovány ve vakuu za vzniku 7,91 g viskózního červeného oleje. MH⁺=371, (23,21 mmol) < chlazením ve poté ochlazeno, chráněného aminu bylo zahříváno po dobu 1 100 ml tetrahydrofuranu obsahujícím 20 ml , naředěno 220 ml vody a extrahováno hodiny pod 6M roztoku 2x250 ml

1,30 ml (6,61 mmol) 30% hydrogen bromidu 2,33 g (6,29 mmol) ketonu v 10 ml ledové přidán roztok 0,35 ml (6,79 mmol) brómu v reakční směs byla zahřívána při teplotě 60

kyseliny octové. Po kapkách byl

1,65 ml ledové kyseliny octové a °C po dobu 1 hodiny, ochlazena na pokojovou teplotu a naředěna éterem. Vytvořené olejové reziduum bylo promyto éterem za vzniku 2,27 g (4,28 mmol) hrubého bromidu. MH¹=450.

Roztok 1,89 g (17,13 mmol) 2,4-diaminopyrimidinu ve 20 ml etanolu byl zahřát na teplotu 80°C. Roztok 2,27 g (4,28 mmol) hrubého bromidu v 50 ml etanolu bylo přidáno po kapkách pomocí trychtýře. Reakční směs byla promíchávána při teplotě 80°C po dobu jedné hodiny a poté ochlazena na pokojovou teplotu. Přibližně jedna polovina rozpouštědla byla odstraněna ve vakuu. Po ochlazení na pokojovou teplotu byla reakční směs zfiltrována.

Filtrát byl zakoncentrován ve vakuu, naředěn 250 ml etylacetátu a promyt 2x100 ml 0,5M roztoku hydroxidu sodného, vysušen síranem sodným, zfiltrován a zakoncentrován ve vakuu za vzniku červeno-hnědého oleje. Sloupcovou chromatografií za použití 2% metanolu v etylacetátu bylo získáno 0,4161 g Sloučeniny 8 (Imidazo [1,2-a] pzrimidin-7-amin, 3-[2-[(fenylmetyl)amino]-4 pyridinyl]-2-[3-(trifluoro metyl)fenyl]-) ve formě bělavé pevné látky. MH⁺=461.

Příklad 2 l-fenyl-2-(4-pyridinyl)-etanon a l-fenyl-2-bromo-2-(4-pyridinyl)etanon

1,0 M bis(trimetylsilyl)amid sodný (40 ml, 0,04 mol) v tetrahydrofuranu byl pomocí trychtýře a pod dusíkovou atmosférou po kapkách přidán k roztoku 1,8 g (0,02 mol) 4-pikolinu a 3,0 g (0,02 mol) etylbenzoátu v 60 ml tetrahydrofuranu. Po 18 hodinách byla reakce ukončena nasyceným roztokem chloridu amonného a rozpouštědlo bylo odstraněno ve vakuu. Reziduum bylo extrahováno do 100 ml etylacetátu a promyto 2x200 ml vody, 1x100 ml solného roztoku, vysušeno síranem sodným, zfiltrováno a zakoncentrováno ve vakuu za vzniku oleje. Rozetřením s éterem bylo získáno 1,6 g produktu 1-fenyl-2-(4pyridinyl)-etanonu. MH⁺ 198.

1,8 ml (8,9 mmol) 35% hydrogen bromidu v kyselině octové bylo přidáno k 1,6 g (8,1 mmol) ketonu v 10 ml ledové kyseliny octové. Po kapkách byl přidán roztok 0,46 ml (8,9 mmol) brómu v 1,65 ml ledové kyseliny octové a reakční směs byla zahřívána při teplotě 60°C po dobu 1 hodiny, ochlazena na • ·· pokojovou teplotu a naředěna éterem.

Vytvořená pevná látka byla ♦ - ·'!* , · • -Μ* , · • · : · · · promyta éterem za vzniku 2,5 g bromidu ve formě HBr soli l-fenyl-2-bromo-2-(4pyridinyl)-etanonu. ΜΗ¹⁼=276.

Přiklad 3

Imidazo [1,2-a] pyrimidin -7- amin, 2-fenyl-3-(4-pyridinyl)

Roztok 1,2 g (11 mmol) 2,4-diaminopyrimidinu v 10 ml etanolu byl zahřát na 80°C. Roztok 1,0 g (2,8 mmol) bromidu ve 20 ml etanolu byl přidán po kapkách pomoci trychtýře. Reakční směs byla promíchávána při teplotě 80°C po dobu 3 hodin a poté ochlazena na pokojovou teplotu. Přibližně polovina rozpouštědla byla odstraněna ve vakuu. Po ochlazení na pokojovou teplotu byla reakční směs zfiltrována. Filtrát byl zakoncentrován ve vakuu, naředěn 250 ml etylacetátu a promyt 2x100 ml 0,5 M roztoku hydroxidu sodného, vysušen síranem sodným, zfiltrován a zakoncentrován ve vakuu za vzniku červeno-hnědého oleje. Rozetření rezidua s EtOAc s následnou filtrací vedlo k získání 0,108 g Sloučeniny 5 ve formě bělavé pevné látky. MH^X=288.

NaOH CH₃I sh₂-hci

sch₃

13,23 g (93,2 mmol) jodometanu bylo přidáno stříkačkou po kapkách k roztoku

13,38 g (84,73 mmol) 2-merkapto-4-metylpyrimidin hydrochloridu a 7,46 g (186,4 mmol) hydroxidu sodného ve 120 ml vody. Po 2 hodinách byla reakční směs extrahována 2x125 ml dichlormetanu. Organické vrstvy byly odděleny, zkombinovány, vysušeny pomocí Na₂SO₄, zfiltrovány a zakoncentrovány ve vakuu za vzniku 11,14 g (79,45 mmol) 4-metyl-2-metylthio)pyrimidinu ve formě červeného oleje. MH⁺=140,9.

,+ sch₃

NaHMDS

THF

99%

ml (86 mmol) 1,0 M bis'(trimetylsilyl)amidu sodného v tetrahydrofuranu bylo pod dusíkovou atmosférou přidáno po kapkách pomocí trychtýře k roztoku 6,03 g (43 mmol) 4-metyl-2- (metylthio)pyrimidinu a 6,46 g (43 mmol) etylbenzoátu v 86 ml tetrahydrofuranu. Po dvou hodinách byla reakce ukončena nasyceným roztokem chloridu amonného. Většina tetrahydrofuranu byla odstraněna ve vakuu. Reziduum bylo naředěno 400 ml etylacetátu a 200 ml vody. Organická vrstva byla oddělena a promyta 2x100 ml nasyceného roztoku chloridu sodného, oddělena, vysušena pomocí Na₂SO₄, zfiltrována a zakoncentrována ve vakuu za vzniku 10,45 g (42,77 mmol) 2-[218 (metylthio)pyrimidin-4-yl)-l-fenyletanonu červenohnědého oleje, který se stáním měnil ve • ♦· · • · ·· • ··· ·· • · · · ·· • · · ·· • · · · · · formě

	99 '	• * M ·
•		•	_ξ Λ
	• 9		*	' ♦’ ·
•		•	9 ·	* r 4 , ·
•		·'	9	·, ·
	9 ·			• ft 4·

viskázního na pevnou formu. MH⁺=244,9.

B[2 HBr

AcOH

100%

ml (44,91 mmol) 30% hydrogen bromidu v kyselině octové bylo přidáno k 10,45 g (42,77 mmol) ketonu v 80 ml ledové kyseliny octové. Po kapkách byl přidán roztok 2,40 ml (46,19 mmol) brómu ve 2,60 ml ledové kyselině octové a reakční směs byla zahřívána při teplotě 600C po dobu 45 minut, ochlazena na pokojovou teplotu a naředěna éterem. Výsledný hrubý produkt byl zfiltrován a promyt éterem a vysušen ve vakuu za vzniku 18,06 g (44,69 mmol) hrubého bromidu. MH⁺= 324,9.

Sloučenina 15

Roztok 18,33 g (171,08 mmol) 2,4-diaminopyrimidinu ve 150 ml etanolu byl zahříván na 80°C. Roztok 18,06 g (42,77 mmol) hrubého bromidu v 350 ml etanolu byl po kapkách přidán pomoci trychtýře. Reakční směs byla promíchávána pod zpětným chlazením po dobu 2 hodin. Po ochlazení na pokojovou teplotu byla reakční směs zfiltrována. Precipitát byl rozmíchán ve 150 ml 0,5 M roztoku hydroxidu sodného. Precipitát byl sbírán filtrací, promyt vodou, éterem a hexanem za vzniku 6,72 g (21,1 mmol) produktu ve formě světle žluté pevné látky. MH⁺=334,9.

y kyi'!·¹.¹!¹ h₂n

Sloučenina 15

* ♦ 1 - ~9 • * •‘*t *

Směs 0,60 g (1,79 mmol) niklu ve vodném roztoku, zpětným chlazením pod dusíkovou atmosférou. Reakční směs byla ochlazena na pokojovou teplotu a zfiltrována přes celit. Celit byl promyt etanolem. Zkombinované filtráty byly zakoncentrovány ve vakuu. Reziduum bylo sebráno filtrací, a promyto éterem za vzniku 0,2310 g pevné látky (Sloučenina 16). MH⁺=289,0.

rozetřením s etanolem a pyrimidinu ve formě žluté

Sloučenina 15 thiometylpyrímidinu, přibližně 4 ml 50% ml etanolu a 20 ml vody byla zahřívána pod

Raneyova

Roztok 8,28 g (13,46 mmol) oxonu v 75 ml vody byl přidán po kapkách pomocí trychtýře do 1,50 g (4,49 mmol) thiometyl pyrimidinu v 77 ml metanolu. Výsledný hrubý produkt byl promícháván při pokojové teplotě po dobu 18 hodin, zfiltrován a filtrát byl zakoncentrován ve vakuu, aby se odstranil metanol. Reziduum bylo naředěno 100 ml vody a neutralizováno bikarbonátem sodným v pevné formě. Výsledný hrubý produkt byl zfiltrován a precipitát byl promyt vodou, éterem a vysušen, čímž došlo k získání 1,27 g (3,46 mmol) metylsulfon pyrimidinu ve formě žluté pevné látky (Sloučenina .17) . MH⁺=367,0.

Sloučenina 17 Sloučenina 19

Směs 0,55 g (1,5 mmol) metylsulfon pyrimidinu a 1,82 g (15 mmol) (S)-(-)-ametylbenzenaminu byla zahřívána při teplotě 140°C po dobu 30 minut, ochlazena na pokojovou teplotu, naředěna 100 ml etyl acetátu a promyta 3x50 ml vody, 1x50 ml nasyceného roztoku chloridu sodného, vysušena pomocí Na₂SO₄, zfiltrována a zakoncentrována ve vakuu, což vedlo k získání žlutého oleje. Pomocí sloupcové chromatografie za použití 100¾ etylacetátu jako eluentu došlo k získání 0,3977 g (0,98 mmol) produktu ve formě světle žluté pevné látky (Sloučenina 19). MH⁺=408,l.

B. Testy

Příklad 4

Testy na inhibici p38

Biologické aktivity určitých sloučenin, které jsou předmětem vynálezu byly prokázány v in vitro a in vivo testech. Jak bylo diskutováno výše, látky, které inhibují aktivitu enzymu p38, inhibují tvorbu zánětlivých cytokinů TNF-α a IL-Ιβ.

Vybrané sloučeniny, které jsou předmětem vynálezu, jsou uvedeny v Tabulce 1, v které jsou poskytnuty údaje hmotové spektrometrie ukazující schopnost každé ze sloučenin inhibovat p38, jak je ukázáno na inhibici tvorby TNF-a. Testy, z kterých jsou data získána, jsou popsány níže.

Tabulka 1

Sloučeniny testované na jejich schopnost inhibovat p38, jak je ukázáno na inhibici tvorby TNF-a.

Sloučenina č.	MS ci (M+l)	LPS/PBMC IC₅₀ nM (TNFa)	% inhibice tvorby TNF-a 10 mg/kg u myši
1	306	49	100
2	306	55	100
3	356	333	26
4	340	21	100
5	288	55	100
6	411	6	42
7	356	35	99
8	4 61	4	19
9	476	0,5	97
10	353	37	68
11	403	27	38
12	353	10	51
13	357	278	85
14	372	8	63
15	335	28	23
16	289	304	73
17	367	3414	-
18	435	520	10
19	408	0,40	100
20	424	14	-
21	425	2	97

• « •· •· ♦ ··

• · · · ,.· ., · • · · · · •· »♦·»· • · • · • '·♦ • ·· • <

22	432	1	74
23	319	90	87
24	307	199	91
25	322	162	47

Test na celé buňky PBMC

Reprezentativní sloučeniny, které jsou předmětem předkládaného vynálezu byly testovány v in vitro testu na celé buňky za použití mononukleárních buněk plné krve (PBMC), které byly získány z lidské krve následujícím způsobem. Čerstvě odebraná venózní krev byla antikoagulovaná heparinem, naředěna stejným objemem fosfátového pufru (PBS) a umístěna do sterilní zkumavky nebo jiné nádobky. Alikvóty (30 ml) této směsi byly přeneseny do centrifugačních zkumavek, kde byly podvrstveny tekutinou Ficoll-Hypaque (15 ml). Připravené zkumavky byly centrifugovány při 400 g bez brždění po dobu 30 minut při pokojové teplotě. Přibližně 1/2 až 2/3 vrstvy destiček nad proužkem mononukleárních buněk bylo odstraněno pipetou. Většina vrstvy mononukleárních buněk byla pečlivě odstraněna pipetou a tyto PBMC byly naředěny pomocí PBS a stočeny při 600 g po dobu 15 minut. Výsledné PBMC byly naředěny další částí PBS a stočeny při 400 g po dobu 10 minut při pokojové teplotě. Získané pelety byly naředěny kultivačním médiem s nízkým obsahem endotoxinu RPMI/1% FCS, takže koncentrace buněk byla 0,5-2,0 x 10⁶PMBC/ml. Malý objem suspenze byl odstraněn pro spočítání na hemocytometru a zbývající preparát byl centrifugován při 200 g po dobu 15 minut při pokojové teplotě. Získané PBMC v peletě byly resuspendovány v RPMI/1%FCS do koncentrace 1,67 x 10⁶/ml.

K provedení testu byla suspenze PBMC (180 ul) přenesena do dubletových jamek 96-jamkové mikrotitrační destičky s plochým dnem a inkubovány po dobu 1 hodiny při teplotě 37°C. Roztok testované sloučeniny (10 ul, připravené ve 20-násobku konečné koncentrace) byl přidán do každé jamky a destička byla inkubována po dobu 1 hodiny při teplotě 37°C. Byl přidán roztok (lOul) LPS v RPMI/1% FCS (200 ng/ml) a jamky byly přes noc inkubovány při teplotě 37°C. Supernatant (100 ul) byl odstraněn z každé jamky a naředěn pomocí RPMI/1% FCS (400 ul). Vzorky byly analyzovány na TNF-α za použití komerčního ELISA kitu (Genzyme). Údaje jsou uvedeny v Tabulce 1 výše.

Test in vivo na hlodavcích

Schopnost sloučenin definovaných Vzorcem I inhibovat tvorbu TNF-a indukovanou LPS byla demonstrována v následujících in vivo testech na hlodavcích. Myši (samice BALB/cJ, Jackson Laboratories) hladověly po dobu 30 minut před perorální dávkou 5-10 ml/kg testované sloučeniny 5-50 mg/kg. Třicet minut po aplikaci byl zvířatům injikován intraperitoneálně LPS v dávce 1 mg/kg a zvířata byla vrácena do svých klecí na 1 hodinu. Zvířata byla anestetizována pomocí CO₂, exsangvinována srdeční punkcí a byla odebrána plná krev (0,1-0,7 ml). Krev byla ponechána se srazit a sérum bylo přeneseno do centrifugační zkumavky. Tento vzorek byl centrifugován a sérum bylo staženo, rozděleno do alikvót a zamraženo na -80°C. Vzorky byly testovány komerčním ELISA kitem na TNF-α (Endogen na myší TNF-α). Procento inhibice testovaných sloučenin bylo vypočteno podle následujícího vzorce: % inhibice = [1-(vzorek-pozadí)/(kontrola-pozdí)J x 100. Data jsou uvedena v Tabulce 1 výše.

Test rekombinantního p38

Sloučeniny, které jsou předmětem vynálezu, byly měřeny na jejich schopnost inhibovat aktivitu p38 pomocí následujícího in vitro testu. Roztok (38 ul) purifikovaného rekombinantního p38 (kde množství enzymu bylo určeno empiricky při zvážení lineárního rozmezí testu a přijatelného poměru signálu k šumu; 6xHis-p38 exprimovaný v E.coli), substrátu myelinového bázického proteinu (také určeného empiricky), a pufru o pH 7,5 (Hepes: 25 mM; MgCl₂: 10 mM; MnCl₂: 10 mM) byl přidán do 92 jamek 96-jamkové polypropylenové destičky s kulatými dny. Zbývající jamky byly použity pro kontroly a pro pozadí. Kontrola byla připravena s enzymem, substrátovým pufrem a 21% DMSO a pozadí bylo připraveno se substrátovým pufrem a 2% DMSO. Roztok (12 ul) testované sloučeniny v DMSO (sloučeniny byly naředěny do 125 uM v 10% DMSO/H₂O a analyzovány v 25 uM koncentraci, kde finální koncentrace DMSO byla 2%) byl přidán do testovacích jamek. Roztok ATP/³³PATP (10 ul obsahujících 50 uM neoznačeného ATP a 1 uCi ³³P ATP) byl přidán do všech jamek a zkompletované destičky byly promíchány a inkubovány při teplotě 30°C po dobu 30 minut. Do každé jamky byla přidána směs 50% TCA/10 mM fosforečnanu sodného (60 ul) a destičky byly udržovány na ledu po dobu 15 minut. Obsah z každé jamky byl přenesen do jamek 96-jamkové filtrační destičky (Millipore, Multiscreen-DP) a filtrační destička byla umístěna na vakuový kolektor opatřený kolektorem odpadu. Jamky byly pod vakuem pětkrát promyty pomocí směsí 10% TCA/10 mM fosforečnanu sodného (200 ul) . Byla přidána scintilační látka MicroScint-20, destičky byly utěsněny za použití fólií Topseal-S a vyhodnoceny na scintilačním počítači Packard TopCount za použití ³³P tekutého programu s korekcí barevného potlačení, kde výstup je v jednotkách cpm korigovaných na potlačení barvy. Ačkoli sloučeniny byly úvodně testovány v koncentraci 10 uM, byly sloučeniny testovány, pokud to bylo oprávněno, v čtyřnásobně vyšší a nižší koncentraci. Navíc byly pro některé sloučeniny vypočteny hodnoty IC₅₀ za použití programu Deltagraph 4 upravujícího křivku parametrů. Nejsou uvedena žádná data.

In vitro test na IL-Ιβ

Schopnost sloučenin, které jsou předmětem vynálezu, inhibovat tvorbu IL-Ιβ může být určena následujícím in vitro testem. K plastu adherující buňky jsou připraveny z PBMC. Stručně řečeno jsou PBMC přidány do jamek 96jamkové destičky, jak je uvedeno výše, inkubovány po dobu 1 hodiny při teplotě 37°C a adherující buňky jsou připraveny jemným resuspendováním neadherujících buněk pipetorem, jejich odstraněním a znehodnocením a jemným promytím jamek třikrát 200 ul kultivačního média. Po finálním promytí je přidáno do jamek další kultivační médium (180 ul). Přidání sloučeniny, stimulace pomocí LPS, inkubace a stažení supernatantu jsou stejné jako pro ’ , , ' φ ΐ ' · 'Φφ ^:·'ϊφ·Λ· · * > ¹ , ’ φφφ

TNF-α. Supernatanty jsou analyzovány na interleukin komerčního ELISA kitu (Genzyme). Nej «Φ φ φφφ • φ • φ φ · «« φφ .φ φ « φφ φ φ φ ¹ · φφ

Ιβ ·*φ I φ φ “ •

φ · za použití

w⁸

.9

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY ' ·· • 99

9· •99 *9

Φ ·9

999

9 99

9 99 • · ·· ·’ '99 •

Á 9 '9 9 9

1. Tento vynález poskytuje sloučeninu definovanou Vzorcem I

Vzorec I nebo její farmaceuticky přijatelné soli, kde

a) R_x je vybráno ze skupiny složené z NH₂, Ci.₆₅ alkylamino, diCi_₅alkylamino, hydroxy, Ci-₅ alkoxy, fenylmetylamino, heterocyklymetyl, Ci-s alkylkarbonylamino a substituované fenylkarbonylamino, kde řečená fenylmetylamino a heterocyklylmetyl skupina může být substituovaná na své fenylové části jedním nebo více členů vybraných ze skupiny obsahující halogen, Cj_₅ alkyl, C_x.₅ alkoxy, aryl alkylamino, R'R'' NCH=N- a OR''', kde R', R'' a R''' jsou nezávisle vybrány z H, Ci-5 alkyl, fenylmetyl, substituovaný fenylmetyl, a-alkyl-fenylmetyl, substituovaný α-alkyl-fenylmetyl, heterocyklylmetyl a substituovaný heterocyklylmetyl;

b) Y je vybráno ze skupiny obsahující H, halogen, heterocyklus, 0R₄, SR₄, NR₄ a NR₄R₅, kde

R₄ a R₅ jsou nezávisle vybrány z H, heterocyklyl, C₃.₅ karbocyklofenyl, α-alkyl-fenyl Cj_₅ alkyl, nevětvený nebo větvený alkyl volitelně substituovaný pomocí R, NR, N(R)₂, C₃_₅ karbocyklu, fenylu nebo substituovaného fenylu, kde (i) R je H, halogen, Ci_₅ alkyl, fenyl metyl, substituovaný fenyl metyl, SO₂Ph, pyridyl, nebo pyridyl metyl a (ii) řečený fenyl, heterocyklyl a α-alkyl-fenyl C^s alkyl mohou být substituovány jedním nebo více členů vybraných ze skupiny obsahující halogen, Ci-₅ alkyl, C^s alkoxy, aryl C_x-₃ alkylamino, fenyl metyl, substituovaný fenyl metyl, R'R'' NCH=N- a OR', jak je zde definováno v (a) ;

c) R₂ je jeden z pěti členů nezávisle vybraných ze skupiny obsahující halogen, trifluorometyl, -NCH₂PH, Ci_₅ alkyl a Ci-s alkoxy;

d) R₃ je H nebo tvoří dohromady aromatický kruh; a

e) X je N nebo CH.
2. Sloučenina podle patentového nároku 1, kde X je CH.
3. Sloučenina podle patentového nároku 1, kde R_x je NH₂.
4. Sloučenina podle patentového nároku 1, kde Y je NR₄ a R₄ je fenylmetyl.

• '

4' ·

4 4

4 4 vybraný ze • 4 • •4 •4 •4 • 4

4 4 4

4 >

4 4

4 4
5. Sloučenina podle patentového nároku 1, kde R₂ je člen složené z halogenu, trifluormetylu, -NCH₂PH a
6. Sloučenina tvořené podle patentového nároku 1,

Ν-*ζ u^N

Cj_₆ alkoxy. kde Y je vybrané ze

a.

-ch₂, kde Z je fenylmetyl, substituovaný je 0-5.

—O₂S-, “0“,

-OS-, nebo

-A(R)-, fenylmetyl, SO₂Ph,

S; R je pyridyl .i^fi • ♦ ·· • i ' · í <4, 444 »>** skupiny / £7 skupiny

H, halogen, Cj.s alkyl, nebo pyřidylmetyl a n
7. Sloučenina podle patentového nároku 1, kde R₄ je vybraný z (CH₂)_n “T’'' kde každé R může být stejné nebo odlišné a je nezávisle vybrané z H, halogenu, Ci_₅ alkylu, fenylmetylu, substituovaného fenylmetylu, SO₂Ph, pyridylu a pyridylmetylu a n je 0-5.
8. Sloučenina podle patentového nároku 1, která je 2- (3-chloro-4fluorofenyl)-3-(4-pyridinyl)-imidazo [1,2-a] pyrimidin-7-amin.
9. Sloučenina podle patentového nároku 1, která je 2-fenyl-3-(4-pyridinyl)imidazo [1,2-a] pyrimidin-7-amin.
10. Sloučenina podle patentového nároku 1, která je 2-(4-fluorofenyl)-3-(2[(fenylmetyl)amino]-4-pyridinyl]-imidazo [1,2-a] pyrimidin-7-amin.
11. Sloučenina podle patentového nároku 1, která je 3-(4-pyridinyl)-2-[3(trifluorometyl)fenyl] -imidazo [1,2-a] pyrimidin-7-amin.
12. Sloučenina podle patentového nároku 1, která je 3-[2[(fenylmetyl)amino]-4-pyridinyl]-2-[3-(trifluorometyl)fenyl] -imidazo [1,2—

a] pyrimidin-7-amin.
13. Sloučenina podle patentového nároku 1, která je 2-(4-fluorofenyl)-3-(4chinolinyl)-imidazo [1,2-a] pyrimidin -7- amin.
14. Sloučenina podle patentového nároku 1, která je 2-(3-chlorofenyl)-3-(4pyridinyl) imidazo [1,2-a] pyrimidin-7-amin.
15. Sloučenina podle patentového nároku 1, která je 2-(4-fluorofenyl)-3-[2(metylthio)-4-pyrimidinyl]--imidazo [1,2-a] pyrimidin-7-amin.
16. Sloučenina podle patentového nároku 1, která je 3-[2-metylthio) -4pyrimidinyl]-2-[3-(trifluorometyl) fenyl] -imidazo [1,2-a] pyrimidin-7amin.
17. Sloučenina podle patentového nároku 1, která je 2-(3-fluorofenyl)-3-[2(metylthio)-4-pyrimidinyl] imidazo [1,2-a] pyrimidin-7-amin.
18. Sloučenina podle patentového nároku 1, která je 3-(4-pyrimidinyl)-2-[3(trifluorometyl) fenyl] imidazo [1,2-a] pyrimidin-7-amin.

99 9 · • 9 ; · 9 9 9 9 9 9 9 9 99 • 999 9 9 9 9 4 >- 9 9 9 ·9 9 9 9 9 9 9 ♦a 9 • · 9 . » 9 9 • 9' 9 999 99 99 9* *9 99 9
19. Sloučenina podle patentového nároku 1, která je 3-[2-(metylthio)-4pyrimidinyl]-2- fenylimidazo [1,2-a] pyrimidin-7-amin.
20. Sloučenina podle patentového nároku 1, která je 2-fenyl-3-(4pyrimidinyl]- imidazo [1,2-a] pyrimidin-7-amin.
21. Sloučenina podle patentového nároku 1, která je 3-[2-(metylsulfonyl)

4- pyrimidinyl] -2- fenylimidazo [1,2-a] pyrimidin-7-amin.
22. Sloučenina podle patentového nároku 1, která je 3-[2-(metylsulfonyl)-4pyrimidinyl]-2-[3-(trifluorometyl) fenyl] imidazo [1,2-a] pyrimidin-7-amin.
23. Sloučenina podle patentového nároku 1, která je 2-fenyl-3-[2-[[(1S)-1fenyletyl]amino] -4-pyrimidinyl] imidazo [1,2-a] pyrimidin-7-amin.
24. Sloučenina podle patentového nároku 1, která je 3-[[[(4 metoxyfenyl)metyl]amino]-4-pyrimidinyl]-2-fenylimidazo [1,2-a] pyrimidin-7amin.
25. Sloučenina podle patentového nároku 1, která je 3-(2-metoxy-4pyrimidinyl)-2-fenylimidazo [1,2-a] pyrimidin-7-amin.
26. Sloučenina podle patentového nároku 1, která je 2-(4-fluorofenyl)-3-(4pyrimidinyl) imidazo [1,2-a] pyrimidin-7-amin.
27. Sloučenina podle patentového nároku 1, která je 2-(3-fluorofenyl)-3-(4pyridinyl) imidazo [1,2-a] pyrimidin-7-amin.
28. Sloučenina podle patentového nároku 1, která je 2-(4-fluorofenyl)-3-(4pyridinyl) imidazo [1,2-a] pyrimidin-7-amin.
29. Sloučenina podle patentového nároku 1, která je 3-[2-[[(1S)-1fenyletyl]amino] -4-pyrimidinyl]-2-(3-(trifluorometyl) fenyl] imidazo [1,2a] pyrimidin-7-amin.
30. Sloučenina podle patentového nároku 1, která je 2~fenyl-3-[2-(1piperidinyl)-4-pyrimidinyl]- imidazo [1,2-a] pyrimidin-7-amin.
31. Sloučenina podle patentového nároku 1, která je 3-[2-[[(1S)-1cyklohexyletyl]amino] -4-pyrimidinyl]-2-(4-fluorofenyl) imidazo [1,2-a] pyrimidin-7-amin.
32. Sloučenina podle patentového nároku 1, která je 2-(4-fluorofenyl)-3-[3[[(1S)-1-fenyletyl]amino] -4-pyridinyl] imidazo [1,2-a] pyrimidin-7-amin.
33. Sloučenina podle patentového nároku 1, která je 3-(2-bromo-4- pyridinyl)-2-(4-fluorofenyl) imidazo [1,2-a] pyrimidin-7-amin.
34. Sloučenina podle patentového nároku 1, která je 3-(2-bromo-4- pyridinyl)-2-[3-trifluorometyl)fenyl] imidazo [1,2-a] pyrimidin-7-amin.
35. Farmaceutický preparát obsahující sloučeninu podle patentového nároku 1 a farmaceuticky přijatelný nosič.
36. Způsob léčby jedince trpícího stavem, jehož zmírnění je zprostředkováno zánětlivými cytokiny, jejichž účinky se podílejí na tomto stavu, kterýžto způsob zahrnuje podání jedinci terapeuticky účinné dávky předkládaného faramaceutického preparátu.
37. Způsob inhibice vzplanutí stavu jedince, kteréžto zmírnění stavu je zprostředkováno snížením zánětlivých cytokinů, jejichž účinky se podílí na tomto stavu, kterýžto způsob zahrnuje podání jedinci profylakticky účinné dávky předkládaného farmaceutického preparátu.
38 Způsob podle patentových nároků 36 nebo 37, kde stav je vybrán ze skupiny tvořené revmatoidní artritidou, nespecifickými záněty střeva, *

• «w »9 • • · • V 9. ' 9 ·· • • 9 · · • * • • · · • • * • • '· 9 · '99 << ·♦

bolestí, septickým šokem, osteoporózou, osteoartrózou, neuropatickou replikací HIV, HIV demenci, virovou myokarditidou, insulin dependentním diabetem, non-insulin dependentním diabetem, periodontální restenózou, alopecia areata, deplecí T lymfocytů u infekce HIV psoriázou, akutní pankreatitidou, rejekcí alotransplantátu, zánětem plic, aterosklerózou, roztroušenou sklerózou, Alzheimerovou chorobou, mozkovou příhodou, Crohnovou chorobou, městnavým srdečním selháním, plicní fibrózou, hepatitidou, syndromem Guillaln-Barre a systémovým lupus erytematosus.
39. Způsob podle patentového nároku 38, kde stavem artritida.
40. Postup přípravy sloučeniny podle patentového nároku 1, je nemocí, nebo .AIDS, alergickým kachexií, ischémií, glioblastomem, je revmatoidní kde Rj je HN₂, X

a)

b)

c)

CH a R₅ a Y jsou H, kterýžto postup zahrnuje:

1a reakci sloučeniny a THF za vzniku sloučeniny konverzi sloučeniny lc na Br₂ a AcOH; a

1a' la nebo se sloučeninou lb v přítomnosti NaHMDS la' lc;

sloučeninu ld v přítomnosti 30% Hbr/AcOH,

HBr reakci sloučeniny ld se sloučeniny lf.

sloučeninou le v přítomnosti EtOH za vzniku
41. Postup přípravy sloučeniny podle patentového nároku 1 mající strukturu

2f kterýžto postup zahrnuje:

a) konverzi sloučeniny 2a v přítomnosti NaOH a CH₃I za vzniku sloučeniny 2b;

b)

c) d} *

SH_aHa

2a přítomnosti NaHMDS vzniku

H₂N a THF reakci sloučeniny 2b sloučeniny 2d; konverzi sloučeniny sloučeniny 2e; a sloučeninou reakci sloučeniny 2e sloučeniny 2f.

vzniku
42. Postup podle patentového nároku 41, sloučeniny 2f v přítomnosti Raneyova niklu a který dále zahrnuje EtOH na sloučeninu 2g.

přeměnu
43. Postup podle patentového nároku 41, který dále zahrnuje

a) konverzi sloučeniny 2f na sloučeninu 2h v přítomnosti oxonu a MeOH; a

b) reakci sloučeniny definované Vzorcem halogen, heterocyklus, 0R₄, SR₄, NR₄definované Vzorcem 2i.

2h se sloučeninou Y, kde Y je nebo NR₄R_s za vzniku sloučeniny λ

0 «0 • 0 . • 00· ♦ 0 00 ' . 0 · » 0 * 0 · 00 0 * ·: 0 0 • 0 0 0 • · ♦ ♦ · • 0 0« 0Ί0

« • · *

« r *»»
44. Postup přípravy sloučeniny podle patentového halogen, heterocyklus, OR₄, SR«, NR₄ nebo NR₄R₅, reakci sloučeniny definované Vzorcem 3a se Vzorcem 3b za vzniku

3^ea)

b) nároku 1, kde X je Ha

Y kterýžto postup zahrnuje: sloučeninou definovanou

3c v přítomnosti NaHMDS a THF;

sloučeninou

Z* >» F, Cl, Br

Vzorcem 3c

3a konverzi sloučeniny

Vzorcem 3d v přítomnosti Hbr, Br₂ a AcOH;

sloučeninou definovanou

c) reakci sloučeniny definované Vzorcem 3d se sloučeninou le za vzniku sloučeniny definované Vzorcem 3e v přítomnosti EtOH; a

3e 3f

d) reakci sloučeniny definované Vzorcem 3e s Y za vzniku sloučeniny definované Vzorcem 3f.
45. Postup přípravy sloučeniny podle patentového nároku 1, kde X je CH a Y je NR₄, kterýžto postup zahrnuje:

a) konverzi sloučeniny definované Vzorcem 4a v přítomnosti (BOC)₂O a tBuOH na sloučeninu definovanou Vzorcem 4b;

b) reakci sloučeniny definované Vzorcem 4b se sloučeninou definovanou Vzorcem 4c v přítomnosti NaHMDS a HC1 za vzniku sloučeniny definované Vzorcem 4d;

c) konverzi sloučeniny definované Vzorcem 4d v přítomnosti 30% HBr/AcOH, Br₂ a AcOH na sloučeninu definovanou Vzorcem 4e; a

1e 4e

4f

d) reakci sloučeniny definované Vzorcem 4e se sloučeninou le v přítomnosti EtOH za vzniku sloučeniny definované Vzorcem 4f.