CZ127999A3

CZ127999A3 - Inhibitor sekundárního zákalu

Info

Publication number: CZ127999A3
Application number: CZ991279A
Authority: CZ
Inventors: Masayuki Isaji; Hiroshi Miyata; Yukiyoshi Ajisawa
Original assignee: Kissei Pharmaceutical Co., Ltd.
Priority date: 1996-10-14
Filing date: 1997-10-09
Publication date: 1999-07-14
Also published as: HUP9904617A3; CN1233172A; EP0958815A1; NO991627L; EP0958815A4; CN1111403C; AU4471897A; HUP9904617A2; CA2267320A1; AU745028B2; IL129421A0; WO1998016214A1; BR9712308A; NZ335042A; KR20000049136A; US6376543B1; NO991627D0; EA199900374A1; EA001745B1

Description

Oblast techniky

Předložený vynález se týká farmaceutické kompozice užitečné jako inhibitor sekundárního zákalu.

Zejména se předložený vynález týká inhibitoru pro sekundární zákal po chirurgické operaci zákalu, který obsahuje jako aktivní složku N-(3,4-dimethoxycinnamoyl)anthranilovou kyselinu představenou vzorcem I

CH₃O.

ch₃oHOOC (I) nebo její farmaceuticky akceptovatelnou sůl.

Dosavadní s-éav techniky

Zákal je úporná oční choroba, která se vyskytuje a vyvíjí různými faktory a následně vede k nižšímu vidění vlivem zakalení čočky. Většinou to je senilní zákal v závislosti na věku. Výskyt zákalu se počítá 60 až 70 % šedesátých letech věku a téměř 100 % v osmdesátých nebo vyšších letech.

V současné době je společnost tvořena rozsáhle ze starých lidí, a prevence a léčení zákalu se stane důležitějším pro budoucnost. Avšak v současné době neexistuje žádný jistý terapeutický prostředek, který má inhibiční aktivitu vůči rozvoji zákalu.

• · · · β ··

Je tudíž nutný vývoj účinného terapeutického prostředku.

V souhlase s tím za současné situace léčení zákalu bude nakonec závislé na korekcích zraku za použití očních brýlí, kontaktních čoček atd.., nebo chirurgických operací jako je vkládání intraokulárních čoček do poouzdra čočky po extrakapsulární extrakci kataraktu.

Při chirurgickém zákroku u zákalu se poukazuje na problém sekundárního zákalu po tomto chirurgickém zákroku.

Tento sekundární zákal znamená zakalení na povrchu zbývajícího posteriorního pouzdra po extrakapsulární extrakci zákalu. Mechanismus sekundárního zákalu je v postatě následující.

Po excisi čočkových epiteliálních buněk (anteriorní pouzdro), sekundární zákal vzniká z migrace a proliferace zbylých čočkových epiteliálních buněk, které nejsou úplně odstraněny v době extrakce kůry čočky, do posteriorního pouzdra, což vede k zakalení posteriorního pouzdra. Tak vzniká sekundární zákal z abonormální proliferace zbylých čočkových epiteliálních buněk v ekvatoru, což je následováno tvorbou Elschnigových perliček.

Při chirugickém ošetření zákalu je nemožné odstranit úplně čočkové epiteliální buňky a tak je obtížné předejít perfektně sekundárnímu zákalu. Uvádí se, že výskyt výše uvedeného zakalení posteriorního pouzdra je 40 až 50 % u afakických očí a 7 až 20 % u pseudofakických očí.

Na druhé straně, v oblasti medikace zákalu byly podporovány extenzívní studie, aby se nalezly látky schopné inhibovat sekundární zákal. Dosud například bylo potvrzeno, že metabolické antagonisty jako je mitomycin, daunomysin, 5-FU a kolchicin jsou účinné.

Avšak tato léčiva mají problémy jako jsou vedlejší účinky jAtarshii Ganka, sv. 12, č. 3, str. 451-452 (1995), ·· • to · · · · ··«· • · · · · · · · · to to · « · to «·«· « tototo ··« to····· · · • toto ·· toto 4 ·· ·»

Japanese Journal of Ophtalmic Surgery, sv. 8, č. 3, str. 439446 (1995) | a nejsou dostatečné pro klinické použití. Navíc se uvádí, že tvorba sekundárního zákalu byla význačně inhibována, když intraokulární čočka byla povlečena indometacinem a Se ethylendiamintetraoctová kyselina (EDTA) je účinná při sekundárním zákalu (japanese Journal of Ophtalmic Surgery, sv.8 č. 3, str. 439-446, (1995), IQL and RS, sv. 19, č. 2, str. 78 až 82 (1995), japonská zveřejněná patentová přihláška (kokai) č. Hei.8-175984| . Avšak klinicky dostatečná léčiva předcházející sekundárnímu zákalu a inhibující sekundární zákal nebyla dosud vyvinuta.

N- (3,4-Dimethoxycinnamoyl)anthranilová kyselina (generický název: Tranilast) představená výše uvedeným vzorcem I tohoto vynálezu se rozsáhle používá jako léčivo pro léčení alergických poruch jako je bronchiální astma, alergická rýma, atopická dermatitida a alergická konjuktivita a kožních poruch jako e keloid a hypertrofická jizva.

Například je známo, že Tranilast má inhibiční aktivi ty na uvolnění chemického mediátoru vyvolané alergickou rakcí, přílišnou akumulaci kolagenu fibroplastickými buňkami v kožních tkáních a přílišnou proliferaci hladkých svalových buněk v koronárních arteriových cévách.

Žádným způsobem není však zveřejněno, že Tranilast má inhibiční aktivitu vůči tvorbě sekundárního zákalu a neni vůbec známo, že Tranilast je užitečný jako inhibitor pro sekundární zákal.

Podstata vynálezu

Předložený vynález se týká inhibitoru sekundárního zákalu, který obsahuje jako aktivní složku N-(3,4-dimethoxycinnamoyl)anthranilovou kyselinu představenou vzorcem I °^Η3°'γ^χϊ5ψ^ζ^^<3ΟΝΗ-γ^| φ CH₃Čr^ HOOC'^^X^ nebo její farmaceuticky akceptovatelnou sůl.

Předložený vynález se také týká způsobu prevence nebo léčení sekundárního zákalu, který zahrnuje podávání N-(3,4dimethoxycinnamoyl)anthranilové kyseliny představené výše uvedeným vzorcem I nebo její farmaceuticky akceptovatelné soli.

Předložený vynález se také týká použití N-(3,4-dimethoxy.cinnamoyl)anthranilové kyseliny představené výše uvedeným vzorcem I, nebo její farmaceuticky akceptovatelné soli pro výrobu farmaceutické kompozice pro prevenci nebo léčení sekundárního zákalu.

Dále se předložený vynález týká použití N-(3,4-dimethoxycinnamoyl)anthranilové kyseliny představené výše uvedeným vzorcem I nebo její farmaceuticky akceptovatelné soli jako inhibitoru sekundárního zákalu.

Původci provedli rozsáhlé studie, aby nalezli sloučeniny mající inhibiční aktivitu vůči tvorbě sekundárního zákalu. Výsledkem je, že bylo zjištěno, že N-(3,4-dimethoxycinnamoyl)anthranilové kyselina představená výše uvedeným ♦ * ·

0 0 0 0 0

0 0

0 vzorcem I tohoto vynálezu se vyznačuje inhibičním účinkem na růst čočkových epiteliálních buněk a je zvlášt užitečná jako inhibitor sekundárního zákalu, čímž je vytvořen základ tohoto vynálezu.

V souhlase s tím původci potvrdili, že Tranilast významně potlačil proliferaci čočkových epiteliálních buněk v in vitro testu používajícího krysí čočkové epiteliální buňky pro potvrzení inhibiční aktivity na buněčnou proliferaci.

V důsledku toho Tranilast má vynikající inhibiční účinek na proliferaci čočkových epiteliálních buněk a je zvlášt užitečnou sloučeninou jako inhibitor sekundárního zákalu.

Tudíž mohou být připraveny farmaceutické kompozice, které jsou užitečné jako inhibitory sekundárního zákalu, které obsahuji jako aktivní složku Tranilast nebo jeho farmaceuticky akceptovatelnou sůl.

Jsou známy různé metody pro přípravu Tranilastu a jeho solí, které jsou aktivními složkami a tyto sloučeniny mohou být snadno připraveny podle způsobů popsaných v literatuře a podobně (japonská zveřejněná patentová přihláška (kokoku) č. Sho. 5S-40710, tamtéž, č. Hei. 01-29013, tamtéž č. Hei. 01-50219, tamtéž č. Hei. 03-37539, atd.).

Jako příklady farmaceuticky akceptovatelných solí Tranilastu mohou být uvedeny soli s anorganickými zásadami jako je sodná sůl a draselná sůl, soli vytvořené s organickými aminy, jako je morfolin, piperazin a pyrrolidin a soli vytvořené s aminokyselinami.

Když se farmaceutické kompozice tohoto vynálezu použijí při praktickém léčení, mohou být použity různé dávkovači formy farmaceutických kompozic v závislosti na použití.

♦ · 9 » · 9 » · 9 · » · · · · a » · · * · 9

Farmaceutické kompozice tohoto vynálezu mohou být podávány jako zadržované uvolňované přípravky. Například Tranilast nebo jeho sůl se začlení do pelety nebo mikropouzdra zadržované uvolňovaného polymeru jako nosiče a peleta neabo mikropouzdro se chirurgicky vpraví do tkání, které mají být ošetřeny. Tranilast nebo jeho sůl mohou být také aplikovány zavedením předupravané intraokulární čočky.

Jako příklady zadržované uvolňovaných polymerů mohou být uvedeny ethylen-vinylacetatový kopolymer, polyhydromethakrylat, polyakrylamid, polyvinylpyrrolidon, methylcelulosa, polymer kyseliny mléčné, kopolymer kyselina mléčná-kyseliny glykolová a podobně a výhodně biodegradovatelný polymer jako je polymer kyseliny mléčné a kopolymer kyselina mléčná-kyselina glykolová.

Když se farmaceutické kompozice tohoto vynálezu pouzí vají v praktickém léčení, dávkováni Tranilastu nebo jeho farmaceuticky akceptovatelné soli jako aktivní složky se příslušně rozhoduje v závislosti na hmotnosti, těla, věku, pohlaví, stupni symptomů každého pacienta, který má být léčen. Například, když se vkapává do očí, tyto sloučeniny se podávají přibližně v rozmezí od 10 mikrog do 50 miligramů na den na dospělou osobu.

Dávkování Tranilastu nebo jeho farmaceuticky akceptovatelné soli se může případně zvyšovat a snižovat v závislosti na stupni symptomů a terapeutické hodnotě každého pacienta, který má být léčen.

Příklad provedení vynálezu

Předložený vynález je dále osvětlen detailněji pomocí následujícího příkladu to to to ♦ to » to · · to « »·· · ·· to • ·*·*· · ··*« to·· « « to to· to» 4 ·· toto

Příklad

Inhibiční aktivita na proliferaci čočkových epiteliálních buněk

1) Kultura krysích čočkových epiteliálních buněk

Krysí oční čočky byly odebrány a rozřezány do úzkých proužků. Proužky byly přichyceny ke kultivační desce a subkultivovány v Dulbeccově modifikovaném Eagle's Mediu (DMEM) obsahujícím 10 % fetálního telecího séra (FBS) při 37 °C v atmosféře 5%n£ho CC>2 ve vzduchu po dobu 4 dnů. Čtvrtý den (v bodě, kdy čočkové epiteliální buňky byly přemístěny a profilovány z očních čočkových tkání) bylo medium odsáto a buňky byly promyty fosfátem pufrovaným solným roztokem (PBS (-)), a to jemným způsobem. Pak byl PBS(-) odsát, byl přidán alikvot 0,25%n£ho tripsinového roztoku obsahujícího 0,02 % EDTA na kultivační desku a byla zjišťována morfologie buněk mikroskopií s fázovým kontrastem. Když se buňky zakulacovaly, byla přidána stejná hodnota DMEM obsahující 10 % FBS do tripsinového roztoku, aby se zastavilo působení Tripsinu.

Připojené buňky byly odebrány z desky pipetací media za použití úzké sběrné pipety. Buněčná suspenze byla převedena do nádobky, pak bylo přidáno mediium a buněčná suspenze byla míchána asi 20 x živě pipetací sběrnou pipetou a odstředěna při 100 až 110.g po dobu 1 minuty. Pak byl supernatant odstraněn, bylo přidáno čerstvé medium ke sraženině a čočková epiteliální buněčná suspenze byla připravena pipetací za pomoci sběrné pipety. Suspenze byla dále subkultivována v DMEM obsahujcíím 10 % FBS k použití pro experiment.

2) Příprava testovaných léčiv

Tranilast byl přidán do lšního vodného roztoku »»·· * · · · · < · ♦ · » · · · « • * * * · · » φ • *·«*·» ··· ·«· • · · · « hýdrogenuhličitanu sodného, aby se připravil 1,0 %ní roztok a rozpuštěn zahříváním při 70 °C. Roztok byl sterilizován s miliporézním filtrem a zředěn pomocí DMEř-1 obsahujícím 10 % FBS na konečnou předepsanou koncentraci.

3) Experimentální metoda

Buněčná suspenze (2.10 buněk/0,1 ml) a Dí-IEM medium (1,9 ml) obsahující různé koncentrace Tranilastu a 10 % FBS bylo přidáno na kultivační desku (60 mra) a kultivována při 37 °C v atmosféře 5 % ^ve vzduchu. Po čtyřech dnech bylo medium odsáto, buňky byly promyty pomocí PBS(-) a byl na desku přidán 1 ml 0,25%ního tripsinového roztoku obsahujícího 0,02 % EDTA. Po odebrání buněk z desky pipetací pomocí sběrné pipety bylo spočítáno množství životných buněk za použití hemocytometru.

4) Vyhodnocení účinku

Byly vypočteny střední a standardní variační hodnota každé skupiny. Statistická analýza významnosti byla provedena jednocestnou analýzou rozptylu a byla potvrzena statistická významnost. Pak byla provedena analýza významnosti mezi skupina mi pomocí Dunnettova násobného testu.

5) Výsledky

Jak je znázorněno v obr. 1, Tranilast významně potla čil proliferaci čočkových epiteliálnich buněk v závislosti na koncentraci.

» · · ·

9 • * * • 9 9 9

9 9999 9

9 9 · 4

Stručný popis výkresu

Obr. 1 je diagram znázorňující inhibiční aktivitu na proliferaci krysích čočkových epiteliálních buněk pomocí Tranilastu. Pořadnice ukazuje počet krysích čočkových epiteliálních buněk (krát 10^ buněk) a souřadnice ukazuje koncentrace Tranilastu, jež byly přidány (mikrog/ml). Symboly x a xx v diagramu ukazují významně rozdíl při p menším než 0,05 a p menším než 0,01.

Průmyslová využitelnost

Farmaceutická kompozice obsahující jako aktivní složku Tranilast nebo jeho farmaceuticky akceptovatenou sůl má významnou inhibiční aktivitu na proliferaci čočkových epiteliálních buněk a je vhodným inhibitorem sekundárního zákalu.

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY

0 9 9 9

9 9 9 9 •99 999 • 9 ♦ · 09 py

1. Inhibitor sekundárního zákalu vyznačený tím, že obsahuje jako aktivní složku N-(3,4-dimethoxycinnamoyl)anthranilovou kyselinu představenou vzorcem nebo její farmaceuticky akceptovatelnou sůl.
2. Způsob prevence nebo léčení sekundárního zákalu vyznačený tím, že zahrnuje podávání N-(3,4-dimethoxycinnamoyl)anthranilové kyseliny představené vzorcem

CH₃O.

CONH^/^

CH₃O'

HOOC nebo její farmaceuticky akceptovatelné soli.
3. Použití N-(3,4-dimethoxycinnamoyl)anthranilové kyseliny představené vzorcem • · to · nebo její farmaceuticky akceptovatelné soli k výrobě farmaceutické kompozice pro prevenci nebo léčení sekundárního zákalu.
4. Použití N-(3,4-dimethoxycinnamoyl)anthranilové kyseliny představené vzorcem

CH₃O.

CH₃O·

CONH.

HOOC nebo její farmaceuticky akceptovatelné soli jako inhibitoru sekundárního zákalu.

Zastupuje: JUDr. Ing. Milan Hořejš

4 44··

4·44

1/1

Obr. 1

Počet krysích čočkových epiteliálních buněk (.10^) buněk