CS593085A3 - Mixture of microbial cultures for improving efficiency of a fodder utilization for ruminants and process for preparing microbial cultures - Google Patents
Mixture of microbial cultures for improving efficiency of a fodder utilization for ruminants and process for preparing microbial cultures Download PDFInfo
- Publication number
- CS593085A3 CS593085A3 CS855930A CS593085A CS593085A3 CS 593085 A3 CS593085 A3 CS 593085A3 CS 855930 A CS855930 A CS 855930A CS 593085 A CS593085 A CS 593085A CS 593085 A3 CS593085 A3 CS 593085A3
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- rumen
- microorganisms
- strains
- feed
- bacteria
- Prior art date
Links
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims description 56
- 241000282849 Ruminantia Species 0.000 title claims description 24
- 238000009629 microbiological culture Methods 0.000 title claims description 15
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title description 20
- 210000004767 rumen Anatomy 0.000 claims description 101
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims description 54
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 44
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims description 42
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims description 32
- XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-N dimethylselenoniopropionate Natural products CCC(O)=O XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 31
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 25
- 235000013305 food Nutrition 0.000 claims description 24
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 claims description 21
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 claims description 21
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 20
- 230000012010 growth Effects 0.000 claims description 17
- 235000013379 molasses Nutrition 0.000 claims description 17
- IUVKMZGDUIUOCP-BTNSXGMBSA-N quinbolone Chemical compound O([C@H]1CC[C@H]2[C@H]3[C@@H]([C@]4(C=CC(=O)C=C4CC3)C)CC[C@@]21C)C1=CCCC1 IUVKMZGDUIUOCP-BTNSXGMBSA-N 0.000 claims description 16
- 235000019260 propionic acid Nutrition 0.000 claims description 15
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 claims description 14
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 13
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 claims description 11
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 claims description 11
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 claims description 10
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims description 9
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 claims description 7
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 claims description 7
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 claims description 6
- 239000008107 starch Substances 0.000 claims description 6
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 claims description 6
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 claims description 4
- 239000003550 marker Substances 0.000 claims description 4
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 3
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 claims description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 3
- 150000002016 disaccharides Chemical class 0.000 claims description 2
- 244000144972 livestock Species 0.000 claims description 2
- 150000002772 monosaccharides Chemical class 0.000 claims description 2
- 239000004459 forage Substances 0.000 claims 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 45
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 32
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 31
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 20
- 235000013312 flour Nutrition 0.000 description 19
- 235000013339 cereals Nutrition 0.000 description 17
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 17
- 229960001192 bekanamycin Drugs 0.000 description 16
- 229930182824 kanamycin B Natural products 0.000 description 16
- SKKLOUVUUNMCJE-FQSMHNGLSA-N kanamycin B Chemical compound N[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N SKKLOUVUUNMCJE-FQSMHNGLSA-N 0.000 description 16
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 15
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 15
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 15
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 15
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 15
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 15
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 15
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 13
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 13
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 11
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 10
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L Sodium Carbonate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 10
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 10
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 10
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 10
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 239000000047 product Substances 0.000 description 9
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 8
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 8
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 8
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 8
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 7
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 7
- 229930027917 kanamycin Natural products 0.000 description 7
- 229960000318 kanamycin Drugs 0.000 description 7
- SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N kanamycin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N 0.000 description 7
- 229930182823 kanamycin A Natural products 0.000 description 7
- FERIUCNNQQJTOY-UHFFFAOYSA-N Butyric acid Chemical class CCCC(O)=O FERIUCNNQQJTOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 6
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 6
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 6
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 6
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 6
- 230000008569 process Effects 0.000 description 6
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 5
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 5
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 5
- 238000011161 development Methods 0.000 description 5
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 5
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 5
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 5
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 5
- 229910000029 sodium carbonate Inorganic materials 0.000 description 5
- 235000017550 sodium carbonate Nutrition 0.000 description 5
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 5
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 5
- 229910001868 water Inorganic materials 0.000 description 5
- VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L Calcium carbonate Chemical compound [Ca+2].[O-]C([O-])=O VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- 239000000440 bentonite Substances 0.000 description 4
- 229910000278 bentonite Inorganic materials 0.000 description 4
- SVPXDRXYRYOSEX-UHFFFAOYSA-N bentoquatam Chemical compound O.O=[Si]=O.O=[Al]O[Al]=O SVPXDRXYRYOSEX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 4
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 4
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 4
- 235000013365 dairy product Nutrition 0.000 description 4
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 4
- 239000003651 drinking water Substances 0.000 description 4
- 235000020188 drinking water Nutrition 0.000 description 4
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 4
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 4
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 4
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 4
- 230000035764 nutrition Effects 0.000 description 4
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 4
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 4
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 4
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 4
- 235000019786 weight gain Nutrition 0.000 description 4
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 4
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- PLXBWHJQWKZRKG-UHFFFAOYSA-N Resazurin Chemical compound C1=CC(=O)C=C2OC3=CC(O)=CC=C3[N+]([O-])=C21 PLXBWHJQWKZRKG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 241000209140 Triticum Species 0.000 description 3
- 235000021307 Triticum Nutrition 0.000 description 3
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 3
- 235000016383 Zea mays subsp huehuetenangensis Nutrition 0.000 description 3
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 3
- 239000001569 carbon dioxide Substances 0.000 description 3
- 229910002092 carbon dioxide Inorganic materials 0.000 description 3
- WIIZWVCIJKGZOK-RKDXNWHRSA-N chloramphenicol Chemical compound ClC(Cl)C(=O)N[C@H](CO)[C@H](O)C1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 WIIZWVCIJKGZOK-RKDXNWHRSA-N 0.000 description 3
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 3
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 3
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 3
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 3
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 3
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 3
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 3
- 235000009973 maize Nutrition 0.000 description 3
- 239000012266 salt solution Substances 0.000 description 3
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 3
- AKHNMLFCWUSKQB-UHFFFAOYSA-L sodium thiosulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=S AKHNMLFCWUSKQB-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 3
- 235000019345 sodium thiosulphate Nutrition 0.000 description 3
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 3
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 3
- 230000004584 weight gain Effects 0.000 description 3
- QIJRTFXNRTXDIP-UHFFFAOYSA-N (1-carboxy-2-sulfanylethyl)azanium;chloride;hydrate Chemical compound O.Cl.SCC(N)C(O)=O QIJRTFXNRTXDIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 2
- 229930191564 Monensin Natural products 0.000 description 2
- GAOZTHIDHYLHMS-UHFFFAOYSA-N Monensin A Natural products O1C(CC)(C2C(CC(O2)C2C(CC(C)C(O)(CO)O2)C)C)CCC1C(O1)(C)CCC21CC(O)C(C)C(C(C)C(OC)C(C)C(O)=O)O2 GAOZTHIDHYLHMS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 241000283903 Ovis aries Species 0.000 description 2
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 2
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 2
- 230000006978 adaptation Effects 0.000 description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 2
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 2
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 2
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 2
- 229910000019 calcium carbonate Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 2
- 235000011148 calcium chloride Nutrition 0.000 description 2
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 229960005091 chloramphenicol Drugs 0.000 description 2
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 229960001305 cysteine hydrochloride Drugs 0.000 description 2
- 235000021051 daily weight gain Nutrition 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 2
- 235000003642 hunger Nutrition 0.000 description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 2
- 229910017053 inorganic salt Inorganic materials 0.000 description 2
- KQNPFQTWMSNSAP-UHFFFAOYSA-N isobutyric acid Chemical compound CC(C)C(O)=O KQNPFQTWMSNSAP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N methanoic acid Natural products OC=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 2
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 2
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 2
- 229960005358 monensin Drugs 0.000 description 2
- GAOZTHIDHYLHMS-KEOBGNEYSA-N monensin A Chemical compound C([C@@](O1)(C)[C@H]2CC[C@@](O2)(CC)[C@H]2[C@H](C[C@@H](O2)[C@@H]2[C@H](C[C@@H](C)[C@](O)(CO)O2)C)C)C[C@@]21C[C@H](O)[C@@H](C)[C@@H]([C@@H](C)[C@@H](OC)[C@H](C)C(O)=O)O2 GAOZTHIDHYLHMS-KEOBGNEYSA-N 0.000 description 2
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 2
- 238000009304 pastoral farming Methods 0.000 description 2
- 230000002688 persistence Effects 0.000 description 2
- 230000001932 seasonal effect Effects 0.000 description 2
- 238000010972 statistical evaluation Methods 0.000 description 2
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 2
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 2
- 235000013619 trace mineral Nutrition 0.000 description 2
- 239000011573 trace mineral Substances 0.000 description 2
- NQPDZGIKBAWPEJ-UHFFFAOYSA-N valeric acid Chemical compound CCCCC(O)=O NQPDZGIKBAWPEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 2
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 2
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 2
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 2
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 2
- 150000003722 vitamin derivatives Chemical class 0.000 description 2
- RIPZAYPXOPSKEE-DKWTVANSSA-N (2r)-2-amino-3-sulfanylpropanoic acid;hydrate Chemical compound O.SC[C@H](N)C(O)=O RIPZAYPXOPSKEE-DKWTVANSSA-N 0.000 description 1
- XYHKNCXZYYTLRG-UHFFFAOYSA-N 1h-imidazole-2-carbaldehyde Chemical compound O=CC1=NC=CN1 XYHKNCXZYYTLRG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HYZDOKBFNBVDPA-UHFFFAOYSA-N 2-(aminomethyl)-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydrochloride Chemical compound Cl.NCC(CO)(CO)CO HYZDOKBFNBVDPA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZNQVEEAIQZEUHB-UHFFFAOYSA-N 2-ethoxyethanol Chemical compound CCOCCO ZNQVEEAIQZEUHB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GWYFCOCPABKNJV-UHFFFAOYSA-M 3-Methylbutanoic acid Natural products CC(C)CC([O-])=O GWYFCOCPABKNJV-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 4-(3-methoxyphenyl)aniline Chemical compound COC1=CC=CC(C=2C=CC(N)=CC=2)=C1 OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101100248198 Arabidopsis thaliana RGGA gene Proteins 0.000 description 1
- 241000606125 Bacteroides Species 0.000 description 1
- 241000283725 Bos Species 0.000 description 1
- PQRFZVPEJNZXRT-UHFFFAOYSA-N Cannabin Natural products C=1C(OC)=CC(O)=C(C(C=2OC3C(C(O)C(O)C(COC4C(C(O)C(O)C(C)O4)O)O3)O)=O)C=1OC=2C1=CC=CC=C1 PQRFZVPEJNZXRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 244000025254 Cannabis sativa Species 0.000 description 1
- 241000283705 Capra hircus Species 0.000 description 1
- 241000282994 Cervidae Species 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-CUHNMECISA-N D-Cellobiose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-CUHNMECISA-N 0.000 description 1
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 1
- QXNVGIXVLWOKEQ-UHFFFAOYSA-N Disodium Chemical compound [Na][Na] QXNVGIXVLWOKEQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 208000010201 Exanthema Diseases 0.000 description 1
- 230000005526 G1 to G0 transition Effects 0.000 description 1
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 240000004658 Medicago sativa Species 0.000 description 1
- 235000017587 Medicago sativa ssp. sativa Nutrition 0.000 description 1
- 241000283898 Ovis Species 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M Potassium hydroxide Chemical compound [OH-].[K+] KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241000589180 Rhizobium Species 0.000 description 1
- 241000605036 Selenomonas Species 0.000 description 1
- BLRPTPMANUNPDV-UHFFFAOYSA-N Silane Chemical compound [SiH4] BLRPTPMANUNPDV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004133 Sodium thiosulphate Substances 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 1
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000011609 ammonium molybdate Substances 0.000 description 1
- 235000018660 ammonium molybdate Nutrition 0.000 description 1
- APUPEJJSWDHEBO-UHFFFAOYSA-P ammonium molybdate Chemical compound [NH4+].[NH4+].[O-][Mo]([O-])(=O)=O APUPEJJSWDHEBO-UHFFFAOYSA-P 0.000 description 1
- 229940010552 ammonium molybdate Drugs 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 239000003674 animal food additive Substances 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960000892 attapulgite Drugs 0.000 description 1
- 235000021053 average weight gain Nutrition 0.000 description 1
- 244000052616 bacterial pathogen Species 0.000 description 1
- 229910052788 barium Inorganic materials 0.000 description 1
- DSAJWYNOEDNPEQ-UHFFFAOYSA-N barium atom Chemical compound [Ba] DSAJWYNOEDNPEQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QRZGKKJRSA-N beta-cellobiose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QRZGKKJRSA-N 0.000 description 1
- GWYFCOCPABKNJV-UHFFFAOYSA-N beta-methyl-butyric acid Natural products CC(C)CC(O)=O GWYFCOCPABKNJV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910021538 borax Inorganic materials 0.000 description 1
- 244000309464 bull Species 0.000 description 1
- LLSDKQJKOVVTOJ-UHFFFAOYSA-L calcium chloride dihydrate Chemical compound O.O.[Cl-].[Cl-].[Ca+2] LLSDKQJKOVVTOJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- FUFJGUQYACFECW-UHFFFAOYSA-L calcium hydrogenphosphate Chemical compound [Ca+2].OP([O-])([O-])=O FUFJGUQYACFECW-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 1
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 239000003638 chemical reducing agent Substances 0.000 description 1
- UHZZMRAGKVHANO-UHFFFAOYSA-M chlormequat chloride Chemical compound [Cl-].C[N+](C)(C)CCCl UHZZMRAGKVHANO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229940097572 chloromycetin Drugs 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- JZCCFEFSEZPSOG-UHFFFAOYSA-L copper(II) sulfate pentahydrate Chemical compound O.O.O.O.O.[Cu+2].[O-]S([O-])(=O)=O JZCCFEFSEZPSOG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229960002433 cysteine Drugs 0.000 description 1
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000034994 death Effects 0.000 description 1
- 150000004691 decahydrates Chemical class 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000000593 degrading effect Effects 0.000 description 1
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 1
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 235000019621 digestibility Nutrition 0.000 description 1
- 230000001079 digestive effect Effects 0.000 description 1
- 230000008034 disappearance Effects 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L disodium hydrogen phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910000397 disodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019800 disodium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- AJFXNBUVIBKWBT-UHFFFAOYSA-N disodium;boric acid;hydrogen borate Chemical compound [Na+].[Na+].OB(O)O.OB(O)O.OB(O)O.OB([O-])[O-] AJFXNBUVIBKWBT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- DANUORFCFTYTSZ-UHFFFAOYSA-N epinigericin Natural products O1C2(C(CC(C)(O2)C2OC(C)(CC2)C2C(CC(O2)C2C(CC(C)C(O)(CO)O2)C)C)C)C(C)C(OC)CC1CC1CCC(C)C(C(C)C(O)=O)O1 DANUORFCFTYTSZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000005884 exanthem Diseases 0.000 description 1
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 244000144992 flock Species 0.000 description 1
- 230000037406 food intake Effects 0.000 description 1
- 235000012631 food intake Nutrition 0.000 description 1
- 235000019253 formic acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 1
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 1
- 239000004463 hay Substances 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-ZSJDYOACSA-N heavy water Substances [2H]O[2H] XLYOFNOQVPJJNP-ZSJDYOACSA-N 0.000 description 1
- 244000309465 heifer Species 0.000 description 1
- QMEZUZOCLYUADC-UHFFFAOYSA-N hydrate;dihydrochloride Chemical compound O.Cl.Cl QMEZUZOCLYUADC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 1
- 230000006651 lactation Effects 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 1
- 230000033001 locomotion Effects 0.000 description 1
- WRUGWIBCXHJTDG-UHFFFAOYSA-L magnesium sulfate heptahydrate Chemical compound O.O.O.O.O.O.O.[Mg+2].[O-]S([O-])(=O)=O WRUGWIBCXHJTDG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 235000012054 meals Nutrition 0.000 description 1
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 1
- 238000011177 media preparation Methods 0.000 description 1
- 239000013028 medium composition Substances 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 235000010755 mineral Nutrition 0.000 description 1
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 1
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000004570 mortar (masonry) Substances 0.000 description 1
- AYOOGWWGECJQPI-NSHDSACASA-N n-[(1s)-1-(5-fluoropyrimidin-2-yl)ethyl]-3-(3-propan-2-yloxy-1h-pyrazol-5-yl)imidazo[4,5-b]pyridin-5-amine Chemical compound N1C(OC(C)C)=CC(N2C3=NC(N[C@@H](C)C=4N=CC(F)=CN=4)=CC=C3N=C2)=N1 AYOOGWWGECJQPI-NSHDSACASA-N 0.000 description 1
- DANUORFCFTYTSZ-BIBFWWMMSA-N nigericin Chemical compound C([C@@H]1C[C@H]([C@H]([C@]2([C@@H](C[C@](C)(O2)C2O[C@@](C)(CC2)C2[C@H](CC(O2)[C@@H]2[C@H](C[C@@H](C)[C@](O)(CO)O2)C)C)C)O1)C)OC)[C@H]1CC[C@H](C)C([C@@H](C)C(O)=O)O1 DANUORFCFTYTSZ-BIBFWWMMSA-N 0.000 description 1
- QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N nitrogen group Chemical group [N] QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000005022 packaging material Substances 0.000 description 1
- 229910052625 palygorskite Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000002085 persistent effect Effects 0.000 description 1
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 230000035479 physiological effects, processes and functions Effects 0.000 description 1
- 229940072033 potash Drugs 0.000 description 1
- BWHMMNNQKKPAPP-UHFFFAOYSA-L potassium carbonate Substances [K+].[K+].[O-]C([O-])=O BWHMMNNQKKPAPP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 235000015320 potassium carbonate Nutrition 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 206010037844 rash Diseases 0.000 description 1
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 1
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 1
- 239000006152 selective media Substances 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 229910000077 silane Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 1
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000010339 sodium tetraborate Nutrition 0.000 description 1
- XOIQMTLWECTKJL-FBZUZRIGSA-M sodium;(2s,3r,4s)-4-[(2s,5r,7s,8r,9s)-2-[(2r,5s)-5-ethyl-5-[(2r,3s,5r)-5-[(2s,3s,5r,6r)-6-hydroxy-6-(hydroxymethyl)-3,5-dimethyloxan-2-yl]-3-methyloxolan-2-yl]oxolan-2-yl]-7-hydroxy-2,8-dimethyl-1,10-dioxaspiro[4.5]decan-9-yl]-3-methoxy-2-methylpentanoate Chemical compound [Na+].C([C@@](O1)(C)[C@H]2CC[C@@](O2)(CC)[C@H]2[C@H](C[C@@H](O2)[C@@H]2[C@H](C[C@@H](C)[C@](O)(CO)O2)C)C)C[C@@]21C[C@H](O)[C@@H](C)[C@@H]([C@@H](C)[C@@H](OC)[C@H](C)C([O-])=O)O2 XOIQMTLWECTKJL-FBZUZRIGSA-M 0.000 description 1
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 1
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 1
- 239000012086 standard solution Substances 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 150000004685 tetrahydrates Chemical class 0.000 description 1
- 230000032258 transport Effects 0.000 description 1
- 229940005605 valeric acid Drugs 0.000 description 1
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
- A61K35/74—Bacteria
- A61K35/741—Probiotics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23K—FODDER
- A23K10/00—Animal feeding-stuffs
- A23K10/10—Animal feeding-stuffs obtained by microbiological or biochemical processes
- A23K10/16—Addition of microorganisms or extracts thereof, e.g. single-cell proteins, to feeding-stuff compositions
- A23K10/18—Addition of microorganisms or extracts thereof, e.g. single-cell proteins, to feeding-stuff compositions of live microorganisms
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23K—FODDER
- A23K50/00—Feeding-stuffs specially adapted for particular animals
- A23K50/10—Feeding-stuffs specially adapted for particular animals for ruminants
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
- C12N1/205—Bacterial isolates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Virology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Animal Husbandry (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Physiology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Birds (AREA)
- Fodder In General (AREA)
- Feed For Specific Animals (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Description
V
IV - 1 - ; Vynález se týká směsi mikrobiálních kultur pro zlepšeníúčinnosti využívání krmivá u přežvýkavců s obsahem nosičů,zředovadel, konzervačních činidel používaných v’živočišnávýrobě a nutričních látek běžně podávaných přežvýkavcům.
Vynález se dále týká způsobu přípravy mikrobiálníchkultur kmenů mikroorganismů používaných jako účinné složkyVe výše uvedené směsi* Přežvýkavci se složeným žaludkem, jako ovce /Ovis ariesaries/, skot /Bos primigenium taurus/, koza /Capra hircus/a jejich divocí příbuzní /jelen a muflon atd./, mají důle-žitou úlohu jako článek potravního řetězu a v ekonomice.Jejich speciální význam spočívá v tom, že žijí z potravy,která nemůže být využita ostatními býlo&žravci. Předžaludkyposkytují anaerobní.prostředí pro floru bachoru, která jeschopna trávit celulózu a využívat dusíku nebílkovinnéhopůvodu vedle běžných živin. Složení flory bachoru závisíširoce na poměru potravy a adaptaci na dietu. Taková adap-tace však trvá několik dní a konečná.stabilizace může v vyžadovat několik týdnů. Náhlá změna poměru ovlivňuje nao-pak nepříznivě příjem, stravitelnost a produkci a může vy-volat onemocnění nebo dokonce smrt.
Je dobře známo, že v 1 ml tekutiny z bachoru žijea roste miliony bakterií. Anaerobní fermantace pomocíbakterií je velice důležitá pro normální trávení a příjempotravy. Živiny produkující energii jsou fermentovány nakyselinu octovou, propionovou a máselnou, kterých zvířecí «i hostitel používá jako mastných kyselin; bakteriální hmota procházející střevy je trávena a používána jako v íi zdroj bílkovin* Se zřetelem na produkci mléka a masa č má přísun kyseliny octové a propionové a jejich vzá- f í.;. jemný podíl podstatný význam. Flora bachoru hraje ? tudíž důležitou úlohu při udržování a pžndukci pře- žvýkavců. í?
Po narození se flora bachoru spontánně rozvíjí i; a podržuje si svoje složení po odstavení na pevnou ? potravu.. Není však jisté, že tato náhodná flora před- stavuje optimální fermentační systém. Bylo by výhodné regulovat složení a/nebo množství flory bachoru podle £
ekonomických hledisek. L
Vzrůst produkce těkavých mastných kyselin v ba-choru a tudíž zlepšení využití potravy a spolu lze použít úspěšně k separaci mikroorganismů· Frak»ticky kterýkoliv bakteriální kmen lze značkovat ge-netickými značkovači, například pomocí faktoru anti- V ' · biotické resisten.ee, který umožňuje identifikaci bak- .terie mezi jinými bakteriemi·
Autoři tohoto vynálezu izolovali bakteriez bachoru, geneticky označili kmeny a po kultivaci jeznovu vpravili do bachoru. Potom odebírali periodickyvzorky obsahu bachoru, pěstovali je v selektivním mediua zjistili, že některé z kmenů, které měly výhodnéfermentační vlastnosti pro zvíře a které byly schopnérůst in vitro, by mohly růst v bachoru a udržet se zdepo dlouhou dobu, bylo-li krmeno stejnou potravou jakoběhem izolace, stimulovaly by zažívání a tudíž využitípotravy zvířetem. Předmětem vynálezu je směs mikrobiálních kulturpro zlepšení účinnosti využívání krmivá u přešvýkavcůs obsahem nosičů, zředovadel, konzervačních činidel použí-vaných v živočišné výrobě a nutričních látek běžně podá-vaných přežvýkavcům, která obsahuje jako účinnou složkuv množství do 99 hmot. alespoň jednu mikrobiální kul- v turu z kmenů mikroorganizmů, uložených v Madarské státnísbírce lékařsk-eých bakterií Státního ústavu hygieny podčísly 00 287, 00288 a 00289, schopných upravovat hmot-nostní poměr kyseliny octové ke kyselině propionové nahodnotu 1,5 až 4,0:1, a schopných růst v bachoru a zdr-
žovat se tam alespoň po dobu 60 dní, zbytek do 100 jShmot. tvoří známé krmné komponenty, například seno, pícea melasa.
Jestliže má být smésí použito ke zvýšení produkcemasa, je účinnou složkou s výhodou mikrobiální kulturaschopná upravovat poměr kyseliny octové ke kyselině pro-pionové na 2,0 až 3,5 ku 1, například .2 ku 1. Pro tvorbumléka je optimální poměr kyseliny octové ke kyselině pro-pionové asi 3,0 ku 1, pro udržovací chov nebo pro bře-zivost asi 4,0 ku 1 a pro chov jalovic asi 2,0 až 3,0 ku 1.Doporučuje se tudíž používat směsi schopné upravovat poměrkyseliny octové ke kyselině propionové na optimální hodno-tu pro tyto účely. V literatuře existuje určitá nejistotatýkající se požadovaných poměrů kyseliny octové ke kyseliněpropionové, přičemž výhodný poměr je funíceí přežvýkavce,použité potravy a dalších faktorů a jeho výběr je úkolemodborníků /viz například V.Kaufmann, K.Rohr, Vliv krmivána bakteriální fermentaci v předžaludcích, Handbuch derTiernahrung, 263, 1969» Parsey, Hamburk, Berlín/.
Směs má výhodně formu pasty mikroorganizmů, lyofilizátunebo suspenze. Předmětem vynálezu je dále způsob přípravy mikro-biálních kultur používaných jako účinné složky ve výšeuvedených směsích, který spočívá v tom, že se odebírajíz bachoru zvířat krmených potravou nebo krmivém obsahujícím celulózu, škrob nebo mono- a disacharidy vzorky, vyše-třuje se metabolismus mikroorganizmů izolovaných ze vzor-ku in vitro a invivo a mikroorganizmy upravující poměrkyseliny octové ke/kyselině propionové na hodnotu 1,5až 4,0 : 1 se kultivují v prostředí obsahujícím stejnoupotravu nebo krmivo jako zdroj uhlíku nebo dusíku, dorostoucích mikroorganizmů se zavádí antibiotická resistence v jako genetický značkovač, kterýÝ; umožňuje selekci, gene-ticky značené kmeny se kultivují, kultury se znovu zavá-dějí do bachoru zvířat krmených stejnou potravou nebokrmivém, z bachoru se odebírají vzorky, speočítá se poěetbuněk geneticky značeného kmene, oddělí se kmeny přetrá-vající alespoň 60 dní a tyto kmeny se upravují do formypřijatelné v praxi živočišné výroby a výživy.
Tyto kmeny se spřípadně upravují do formy přijatelnépro praxi živočišné výroby a výživy.
Podle výhodného provedení způsobu podle vynálezuse sondou odebírají vzorky z bachoru přežvýkavce krme-ného senem, obilnou moukou nebo melasou, a kultury ob-sahující bakterie bachoru sekrozptýlí na pevná médiaobsahující zdroje dusíku a uhlíku, anorganické soli,tekutinu z bachoru a agar /Bryant a Burkey, D. Dairy
ι:·ΐ 1
Sci., 36, 205, 1953/· Kultury se inkubují za anaerob-ních podmínek, potom se izolují klony a kultivují sev podobném médiu jako uvedeno vpředu.
Narostlé kultury se naočkují do tekutéhoprostředí obsahujícího zdroj dusíku, anorganické so-li, tekutinu z bachoru a jako zdroj uhlíku seno nebocelulózu, nebo v jiných případech obilnou mouku nebomelasu, a inkubují se tak dlouho, až začne intenziv-ní růst v médiu.
Buňky pěstované na seně /celulóze/, moucez obilovin /škrobu/ nebo melase /cukru/ jako zdrojiuhlíku se nanesou, kultivují a izolují na pevné me-dium obsahující celulózu /pro buňky pěstované na se-ně/, glukózu /pro buňky pěstované na seně/, glukózu/pro buňky pěstované na mouce z obilovin/ nebo sacha-rózu /pro buňky pěstované na melase/ jako zdroj uhlí-ku. Získané kultury se geneticky značkují. Proznačení lze použít kteréhokoliv dědičného genetické-ho značkovače, který umožní identifikaci značenéhomikroba mezi ostatními mikroby.
Podle dalšího výhodného provedení vynálezuse vnášejí do vybraných buněk geny rezistence na anti-biotika. Jestliže bakterie žijící v bachoru jsou citli- vé na určitá antibiotika a.přidájí-li se X nim resis»tentní buňky, lze růst i zánik posledně zmíněných mi-krobů snadno sledovat, jestliže se vzorky nanesou hamedia obsahující totéž antibiotikum. V tomto případěporostoui jenom rezistentní buňky. Při transformaci /Bergmans a spol., J. Bacte-riol. 146, 564, 1981/ zavádějí autoři tohoto vynálezuplOll plasmid /Simon a spol., Proč. 8th North AmericanEhizobium Conference, Winnipeg, Kanada, Univ. of Mani-toba Press, 1983/ nesoucí geny rezistence na kanamycina chloramfenikol do selektovaných kultur, které rostouna celulóze, mouce z obilovin nebo na melase. PlasmidDNA byl izolován z buněk E. coli /Birnboim a Doly, Nucl.Acid. Pes. 7, 1513» 1979/. Kmen je uložen v Maňarskéstátní sbírce lékařských bakterií státního ústavu hy-gieny, Budapešť, pod číslem 00264·
Po transformaci pomocí DNA nesoucí geny resis-tence na antibiotika se selektují buňky obsahující avyjadřující novou genetickou informaci na pevném médiuvýše uvedeného složeni, avšak doplněné o kanamycin.
Tyto rezistentní kmeny budou uloženy. Těmito izolovanými a uloženými kulturami se oč-kují media obsahující zdroj dusíku, anorganické soli,tekutinu bachoru /k docílení polopevné konsistence/ a
*·'..,ι.tMrAVjf/^jk^UvtAí. 'IZ^řSSÍjZv.V.U^JkU.hřA.V-.tífx'j'Jit. <ΰιι6'\' iS^ifáAMtów^rtiíítójltflzÍAý^ÍMA^^/i.^^ínJ^iSÍ^U.švZťíTj/.^iZftyiVPÍI/?^ - 10 - inkubují se za anaerobních podmínek. Vyvinuté kultu-šesmísí s potravou ovcí hladovějících po dobu jed-noho dne. Před a po krmení zvířat bakteriemi, jsouodebírány denně vzorky z bachoru; vzorky se vnáše-jí na výše popsaná pevná média obsahující kanamycina počítají se bakteriální buňky rezistentní a citli-vé na antibiotikum. Kvalitativně i kvantitativně serovněž stanoví produkce těkavých mastných kyselinv bachoru. Je známo, že Využívání potravy přežvýkav-ci je ovlivňováno poměrem mastných kyselin /Eskelanda spol., J. Anim. Sci., 33, 282, 1971; Church a spol.,Digestive; Physiology and Nutrition of ruminants, sva-zek 2, str. 622-625, 1971/. Jak bylo uvedeno výše, jeza optimální poměr kyseliny octové ke kyselině propio-nové považován poměr 2,0 až 3,5 ku 1, 3 ku 3La 4 ku 1pro růst„ produkci mléka a pro udržování, jakož i probřeživost /W. Kaufinann a K. Éohr.; Vliv potravy na bakte-riální fermentaci v předžaludcích, Hanbuch der Tier- ·· ... nahrung, str· 263, Prey, Hamburg - Berlín, 1969/.
Podle výhodného provedení způsobu podle vyná-lezu, se bakterie izolují ze vzorků z bachoru a hod-botí se schopnost izolátů produkovat těkavé mastnékyseliny. Mikroorganismus se pěstuje za anaerobníchpodmínek v popsaném úplném médiu, obsahujícím tekuti- - 11 - nu z bachoru, potom se stanoví v kulturách koncentra-ce kyseliny octové, propionové a máselné. Mikrobiál-ní buňky produkující těkavé mastné kyseliny v poža-dovaných poměrech se geneticky označí a sleduje se je-jich růst v bachoru.
Kmeny, které jsou schopné růst v bachoruzvířete krmeného popsanou potravou nejméně po dobu60 dní a které mohou fermentovat dietní uhlohydrátyv optimálním poměru na těkavé mastné kyseliny, se se-lektují, pěstují, izolují, udržují a ukládají, a je-lito žádoucí, jejich kultury ve formě přijatelné pro ži-vočišnou; výrobu se perorálně podávají přežvýkavcůmza účelem vývoje nebo regulace flory bachoru. Tři kmeny, a to Hh-GY0KI-l-123Sz, Hh-GYOKI-2-14Ab a Hh-GY0KI-3-81-Me, schopné růstu v bachoru pře-žvýkavců krmených seneírn, moukou z obilovin, nebo mela-sou, které by mohly setrvávat po dlouhou dobu; v bacho-ru a ovlivňovat příznivě trávení, byly uloženy v Ma-ďarské státní sbírce, lékařských bakterií Státního ústa-vu hygieny pod čísly 00287, 00288 a 00289·
Podle vynálezu je výhodné kultivovat mikro-organismy, izolované z bachoru při teplotě 32 °C až37 °C za anaerobních podmínek* za vyloučení kyslíku,v médiu obsahujícím zdroje uhlíku a dusíku, anorganické
l.$ - 12 - soli, redukční činidla a tekutinu z bachoru; poslé-ze jmenovaná tekutina je zdrojem růstových faktorů.
Jako zdroj uhlíku lze používat glukózu,celulózu, se-no, mouku z obilovin nebo melasu, zatímco anorganic-ké soli, kvasničný extrakt, kasein a podobné přísa-dy jsou vhodné jako zdroje dusíku.
Esenciálním znakem vynálezu je, že se použí-vá jednobuněčných organismů s výhodou: fermentujícíchzkrmenou potravu a dávku a schopných přetrvávat podlouhou dobu v bachoru, k modulaci flory v bachoru.
Pro selekci takových kmenů se používá genetickýchznačkovačů, jak bylo popsáno výše, například genů kó-dujících rezistenci na antibiotika, enzymové protei-ny nebo jiné zjistitelné proteiny. Lze používat rov-něž auxotrofních buněk.
Genetický značkovač se zavádí do buňky pomocívektorové molekuly DNA, například pomocí plasmidu ne-bo fágu, ale selektovatelné charakteristiky, napří-klad resitenci vůči antibiotikům lze volit i pomocísponténí selekce.
Selektované kmeny, které mají výhodné fer-mentační charakteristiky a přetrvávají po dlouhoudobu v bachoru, se používají buá ke zvýšení rozvojeflory v bachoru u sajících mlááat přežvýkavců nebo - 13 - k výhodnému modifikování skladby flory bachoru. Dopo-ručuje se podávat přípravek s potřevou nebo s pitnouvodou.
Mikroorganismy vybrané pro výrobu preparátupodle vynálezu se kultivují v mediu obsahujícím or-ganické zdroje uhlíku, organické nebo anorganickézdroje dusíku a anorganické soli, a potom se izolujíve formě vhodné pro perorální podávání nebo pro trans-port. Je-li to žádoucí,, kultura mikroorganismů se u-pravuje smícháním s pevnými nebo tekutými nosiči ne-bo jinými přísadami. Preparát lze míchat s krmivémnebo pitnou vodou nebo jej lze zkrmovat samotný. V případě ovcí se přidává například 1 až 20 g,s výhodou 5 g, kultury mikroorganismu podle vynálezuk asi 0,5 kg potravy. Jako krmivá lze například použítsměsi mouky z kukuřice, sena z vojtěšky a krmivá prohovězí dobytek; aktuální poměr se stanovuje se zřete-lem na aktuální podmínky a požadovaný denní přírůstekhmotnosti. Hovězímu dobytku se podává obvykle 10 až200 g, s výhodou?. 50 g kultury mikroorganismu podle vy-nálezui denně, např. ve směsi s asi 5 kg obvyklé potra-vy.
Způsob zlepšování účinnosti využívání potra- - 14 - vy u přežvýkavců patří rovněž do rozsahu tohoto vyná-lezu.
Po kultivaci v tekutém prostředí, jak bylouvedeno vpředu, se mikroorganismy separují odstředě-ním nebo filtrací. Lze vyrábět pasty, lyofilizovanépreparáty nebo suspenze obsahující spory$ mohou býtpřidávány přísady přijatelné pro živočišnou výrobu avýživu. Další přísady například proteiny, aminokyse-liny a glycerol mohou napomáhat k udržování života-schopnosti mikroorganismů. Ke směsím podle vynálezupoužívaným ke zlepšení využívání potravy u přežvý-kavců lze přidávat rovněž další látky používané ob-vykle v praxi, například antibiotika, která stimu-lují růst hostitelského zvířete /monensin, nigericin,salynomycin atd./ nebo zvýšit setrvání zkrmovanýchmikroorganismů.
Mikrobiální kultury podle vynálezu umožňujítvorbu živé mikrobiální kultury u přežvýkavců nebovýhodnou modifikaci ustavené flory. Během období sání mláSat je flora bachoruneschopná účinně fermentovat obvyklou potravu. Florase rozvíjí spontánně a nahodile a její skladba nenínikterek pro hostitelské zvíře optimální.
Zkrmováním selektovaných mikrobiálních kmenů - 15 - místo pomalého a spontánního rozvoje flory bachoru lze docílit rychlého rozvoje, a flora bachoru budeschopna optimálního využití potravy. Výhoda přítomného způsobu spočívá v tom„ žes mikroorganismy připravenými popsaným způsobem /na-příklad kmeny 00287, 00288 a 00289/ lze docílit rychléadaptace; nebo rozvoje flory bachoru během změny potra-vy nebo odstavení zvýěením růstu mikroorganismů v ba-choru schopných optimální degradace potravy.
Způsobu lze kromě jiného použít, v následu-jících případech: - u dojnice během, změny laktace, na koncibřeživosti a během sezónních a jiných změn dávek, - u hovězího dobytka na začátku a konci ob-dobí pastvy, při změně výkrmu přechodem na intenziv-ní výkrm moukou z obilovin a během jiných změn růsto-vě-výkrmové diety, - u ovcí během sezónních změn krmeni, na po-čátku a na konci období pastvy a během začátku inten-zivního růstu a výkrmu.
Podobné možnosti jsou i u choyu koz· Mikro-biálních kultur připravovaných: způsobem podle vyná-lezu lze použiti u několika speciálních případů, na- 1 ť
L 1.< - 16 - příklad u divoce žijících, přežvýkavců, v oboráchlovné zvěře a u polní zvěře.
Je třeba poznamenat, že ačkoliv mikrobiálníkultury použité ve směsích podle vynálezu pocházejís výhodou z bachoru, jsou vhodné i jiné bakterie pro-dukující kyselinu octovou a/nebo kyselinu propiono-vou, které nemusejí pocházet nezbytně z bachoru. Ta-kovými bakteriemi jsou některé členy rodu Angero-vibrio /lipolytica/, Bacteroides, Selenomonas /ru-minanticum/ a Propionibacteria.
Vynález bude dále vysvětlen: pomocí násle-dujících, avšak neomezujících příkladů. Podrobněbude popsána příprava mikrobiálních kmenů, kteréjsou schopny využívat základní dávky obsahující hlav-ně celulózu /seno/, škrob /mouka z obilnin/ a sacha-rózu /melasu/ a přetrvávají po dlouhou dobu v bacho-ru. Použití přípravku je popsáno pro ovce, rozsahochrany vynálezu se však týká i organismů, jež jsouschopné růst na jiných krmiyech a týká se i rozvojenebo modifikace flory bachoru: u jiných druhů přežvý-kavců . * - 17 - Přiklad 1
Modifikace flory v bachoru zvířat krmených senem a/ Izolace mikroorganismů schopných růst na seně
Ovce byly laparatomizovány a opatřeny bacho-rovou sondou /pištěli/ a krmeny senem po dobu 1 mě-síce . Sondou se odebírá vzorek z bachoru, ředí a na-náší se na RGCA pevné médium následujícího složení:
Roztok solí I:
destilovaná voda
Roztok solí II: 0,6 g ad 100,0 g.
NaCl 1,2 g 1,2 g KÍ^PO* 0,6 δ CaCl2 0,12 δ MgSO4.7H2O 0,25 δ destilovaná voda ad 100,0 ml /resazurin /0,1% roztok/ 0,1 ml agar /Bacto/ * 2,5 δ tekutina z bachoru 10,0 ml glukóza 0,05 δ cellobióza 0,05 δ monohydrát hydrochloriducysteinu 0,05 δ - 18 uhličitan sodný /8% roztok/ 5,0 g destilovaná voda ad 50,0 ml.
Poznámka:
x/ Difco Labs. Detroid, USA xx/ Vzorek obsahu bachoru se filtruje přes několik vrstev gázy, potom se filtrát uchovává pod kyslič-níkem uhličitým při teplotě -20 °C. Před sterilizací pod plynným kysličníkem uhli-čitým se hodnota pH média RCGA nastaví na 6,8. Steri-lizace, příprava média a kultivace se provádějí podleBryanta a Burkeye /J. Dairy Sci., 36, 205, 1953/·
Tekutina z bachoru se ředí sterilní směsí ná-sledujícího složení: roztok solí I /viz vpředu/ 7,5 ml roztok solí II /viz vpředu/ 7,5 ml monohydrát hydrochloridu cysteinu 0,05 g Na2C03 0,3 g resazurin /0,1% roztok/ 0,1 ml destilovaná voda ad 100,0 ml
Tato směs se označuje jako HB.
Kultury se inkubují za anaerobních podmínekpři teplotě 35 °C /viz Atlas of Rumen Microbiology,
Ogimoto a Tmai, Japan Scientific Soeieties Press, To-ky o, 1981/ po dobu 120 hddin, potom se individuálníklony očkují do média obsahujícího extrakt ze sena následujícího složení: roztok solí I /viz vpředu/ 15,0 % roztok solí II /viz vpředu/ 15,0 % resazurin /0,1% roztok/ 0,1 %
Tripton L42 /Oxoid/* 15,0 % kvasničný extrakt /Oxoid/ * 0,5 % kapalina z bachoru*3* 10,0 %
Na2C03 0,4 % monohydrát hydrochloridu cysteinu 0,05 %extrakt ze sena *** 10,0 %.
Označení média: RGCF tekuté médium «/ Oxoid Ltd., Londýn, V. Británie ««/ Viz vpředu rxk/ Pro přípravu extraktu ze sena se seno jemnénařeže, částice se suspendují ve vodě, vaříse a zfiltruje. Filtrát se přidává do médiapřed sterilizací. Před sterilizací se hodnoty pH upraví na 6,5· r z
Zkumavky obsahující 5 ml sterilního média se U naočkují mikrobiální suspenzí získanou z individuál-ních klonů vyrostlých na RGCA pevném médiu a inkubujíse za anaerobních podmínek při teplotě 35 °G. Růst 20 - se kontroluje mikroskopickým zkoušením a kulturase nanese na pevné médium RGCA, kde se 2,0 % celu-lózy Bacto nahradí glukózou a cellobiózou·
Kultury se inkubují za anaerobních podmí-o nek při teplotě 35 C po dobu 120 hodin, potom sevzniklé individuální klony buněk využívajících ce-lulózu očkují na RGCA médium obsahující celulózu.
Takto lze získat bachorové mikroorganismyschopné růst na seně nebo na celulóze. b/ Genetické značení bakterií bachoru schopnýchrůst na seně
Genetické značení se provádí plasmidem plOllEfcoli podle Simona a spol. /Proč. 8th North Ameri-can Rhizobium Conference, Winnipeg, Kanada, Univ. ofManitoba Press, 1983/·
Plasmid DNA se izoluje z kultury E.coli po-dle Birnboima a Dolyho /Nucl. Acid. Res. 7, 1513» 1979/a rozpouští se ve vodném roztoku obsahujícím následu-jící složky: 75 mM CaGlg 5 mM MgCl2 10 mM tris. HC1 pufrs, «/ tris-/hydroxymethyl/-aminoethan hydrochlorid. - 21 -
Mikroby schopné růst na seně a izolova-né podle A/ příkladu 1 se kultivují na RGCF mé-diu a separují se odstředěním pod kysličníkem uhli-čitým. Buňky se suspendují ve vodném roztoku ob-sahujícím následující složky v 1 litru: 75 mM CaCl25 mM MgClg 10 mM hydrochlorid-monohydrátu cysteinu 1 mM thiosíranu sodného o
Suspenze má obsahovat 5 x 10 buněk v ml. Suspen-ze se ředí stejným objemem roztoku obsahujícíhoplasmid DNA /0,1 yUg/ml/ a inkubujé se po dobu 60minut při teplotě 4 °C. Potom se v inkubaci pokra-čuje při 41 °C po dobu 2 minut, pak se kultura na-náší na pevné médium obsahující 500/Ug/ml kanamy-cinu B a celulózu. jako zdroj uhlíku. Kultura seihkubuje při 35 °G po dobu 120 hodin za anaerob-ních podmínek a zkoušejí se klony, které jsouschopny růstu v přítomnosti 500/Ug/ml kanamycinu B.
Plasmid plOll nese geny určující resisten-ci na kanamycin a chloramfenikol; déle obsahujezdroj replikace umožňující start replikace v buň-kách E.coli. Je-li přenesen do jiných bakteriív důsledku chybějícího vodného zdroje umožňují-' í<SlťZCOu>j7U/V.ú .λ^^ϊΙίΛΛ ú.^úV^ii-iuAArnV/í^fí/^Á?,^ Ý,>Uíy<.-'.3V<·'. ··',*>«.'-' - 22 čího replikaci, je plasmid DNA buá eliminován neboinkorporován do chromosomů /částečně nebo úplně/a probíhá genetická rekombinace. Výsledný gen inkor-porovaný do chromosomu je vytěsněn a udělí buňkámrezistenci na kanamycin a chloromycetin. V pokusech autorů tohoto vynálezu byly získány klony rezistentní na kanamycin B o trans-—5 formační frekvenci 3x10 ·
Bylo izolováno několik rezistentních klo-nů a byla zjištěna citlivost na antibiotika u po-
* R čátečních, na kanamycin B rezistentních /Km / kme-nů. Výsledky dosažené s několika kmeny jsou udá-ny v tabulce 1.
Tabulka 1
Citlivost na kanamycin B u bakterií z bachoru a ge-neticky značených kmenů a degradujících seno
Mikroby Nejmenší účinná koncentra- ce kanamycinu B, yUg/ml tekutina z bachoru 31 počáteční kmeny 4,0 až 7,5 geneticky značené Km kmeny
Hh-GY0KI-l-8 500 - 23 - pokračování tabulky 1 27 250 91 500 123 1000 142 500
Takto lze získat organismy původem z bachoru,které Jsou schopné využívat seno nebo celulózu a ros-tou v přítomnosti vysokých množství kanamycinu B.
Kmen Hh-GYOKI-1-123 /Km®/ se nanese na RGCAmédium obsahující celulózu, načež se přidá kanamycinB v koncentracích 1000, 5000 a 10.000 ýug/ml. Kultu-ry se inkutují za anaerobních podmínek při teplotě35 °C po dobu 168 hodin, a izolují se kmeny rostou-cí v přítomnosti 10.000 /Ug/ml antibiotika.
Takto se spontánní selekcí získají spontánnímutanty vysoce rezistentní na kanamycin B. Jedenz těchto kmenů byl označen jako Hh-GY0KI-l-123Sz auložen v Madarské státní sbírce; lékařských bakteriíStátního ustavu hygieny v Budapeěti pod číslem 00287. C/ Znovuzavádění značených mikrobů do bachoru
Sterilní pevné médium, označené jako RGCFa, seočkuje kulturou kmene Hh-GYOKI-1-123 /Km®/ na RGCAšikmých agarech při teplotě +4 °C. Složení RGCFa media - 24 - je následující: 1. KgHK^ 0,3 % 45 ml roztoku 2. /NH4/2SO4 0,6 % NaCl 0,6 % MgS04.2H20 0,06 % CaCl2.2H20 0,06 % kh2po4 0,3 % 45 ml roztoku směsi 3· Celulóza /Bacto/* 1,8 % fe i - Agar /Bacto/X 3,0 % 65 ml roztoku směsi 4. kvasniěný extrakt 0,1 % 20 ml roztoku 5. cystein.HCl.HgO 0,1 % 20 ml roztoku 6. thiosíran sodný 0,1 % Na2C03 0,2 % 10 ml roztoku směsi XX 7. kapalina z bachoru 20 ml
Vysvětlivky:
x/ Difco Labs. Detroit USA xx/ viz vpředu Těchto sedm roztoků se připravuje odděleněa míchá se v udaném pořadí.
Kultivace se provádí v 500 ml Erlenmeyerověbaňce obsahující 150 ml média za anaerobních podmí-nek. Růst se kontroluje po dobu 48 hodin, potom sesmíchá kultura s krmivém pro ovce krmené senem. g 340 ml kultury obsahující 4,7 x 10 bakterií v ml - 25 - bylo podáno perorálně ovcím. Před podáním a v ná-sledujících dnech byly bachorovou sondou odebírány50 až 200 ml vzorky. Vzorky se ředí roztokem HB ananášejí se na RGCA médium neobsahující kanamycin Bnebo jiná antibiotika. Kultury se irikubují za anaerob-ních podmínek při teplotě 35 °C po dobu 72 hodin,a počítají se bakteriální klony. Výsledky jsou udány v tabulce 2»
Tabulka 2
Změny flory bachoru u ovcí po podání kmene
Hh-GYOKI-1-123 /KmR/ *·
Vzorek Počet buněk/ml bez antibiotik v přítomnosti
1000yUg/mlkanamycinu B Před podáním 5x10° 0 Po podání 1. den 5,9xlO6 2,OxlO4 2, den 3,2xlO7 4,lxl04 3. den 2,4xlO6 3,lxlO4 6, den 3,9xlO7 l,8xl04 8. den 9,8xl06 l,O5xlO5 15. den 8,-lxlO5 3,lxlO4 - 26 - Z tabulky je vidět, že podané mikroorga-nismy přetrvávají a rostou v bachoru.
Podle výše uvedeného způsobu autoři vynále-zu také kultivovali kmen Hh-GXOKI-l-123Sz rezis-tentní na 10.000 ^ug/ml kanamycinu H a perorálnějej podávali patnáctého dne stejné ovci.
Orálně bylo podáváno 140 ml kultury obsahu-
O jící 2x10 bakterií na ml.
Bakterie ze vzorků z bachoru byly kultivová-ny a počítány jako dříve. Výsledky jsou uvedeny v ta-bulce 3.
Tabulka 3
Změny ve floj$e bachoru ovce. po přidání kmene ' T?
Hh-GX0KI-l-123Sz /Km/
Vzorek
Počet buněk/ml bez antibiotik v přítomnosti 8000 /U /ml
kanamycinu B Před podáním 1,4x10 Po podání 1. den 7,4x10 2. den 1,7x10 0 3,2xl04 l,3xlO4 t -27 - pokračování tabulky 3 5. den 4,OxlO6 9,lxlO3 7t den Ι,ΙχΙΟ7 2,0xl04 14. den 8,0xl06 3,lxlO4 21. den 7,lxlO5 6,2xlG4 28. den 8,2xl06 8,lxl04 35. den 8,7xlOa6 l,8xl04 Údaje z tabulky 3 ukazují, že podané mikro organismy jsou přítomny ve značném množství v ba- j; ΪΙ i ’ choru a protože fluidní fáze obsahu bachoru se kon- í ; tinuálně vyprázdňuje, dochází bez pochyby k repli- » ·' u -i kaci. ' h j í
Odlišnosti v počtu bakterií u jednotlivých j
vzorků!lze vysvětlit změnami v konsistenci obsahu j I bachoru od hustého do fluidního stavu. r á I j Příklad 2 ! ξ [ ·jí·
Modifikace flory bachonu ovcí krmených mou- f S
II kout z obilovin f m
’ ..... )N A/ Izolace mikroorganismů schopných růstu za mouce ή
H z obilovin g > b v
Způsob popsaný pod a/ v příkladě 1 se opakuje í s tím rozdílem, že počáteční vzorek se odebírá z ba- 1 choru ovcí krmených moukou z obilovin, individuální - 28 - izoléty se očkují do RGCF tekutého média /vizvpředu/ obsahujícího 2 % mouky z obilovin práško-vané ve hmoždíři místo extrahovaného sena, kulturyrostlé na RGGF tekutém médiu se nanesou na RGCApevném médiu /viz vpředu/ a klony vzniklé z buněk,schopných; využívat mouku z obilnin se izolují napodobném médiu·
Takto se získají mikroorganismy schopné růs-tu na mouce z obilovin jako zdroji uhlíku. b/ Genetické značení bakterií bachoru využí-vajících mouku z obilovin
Způsob popsaný pod B/ v příklad 1 se opakujes tím rozdílem, že kmeny získané podle bodu A/ v pří-kladě 2 se použijí k transformaci pomocí plOll plas-miduDNA, místo těch, které se získají podle bodu A/v příkladu 2.
Rezistence několika transformovaných kmenů
*D a Kin kmenů na kanamycin B je uvedena v tabulce 4· *» Γ' lí - 29 -
Tabulka 4
Citlivost bakterií bachoru a kmenů značených gene**ticky a využívajících mouku z obilovin na kanamycin B
Mikroorganismy »1 ií
Nejnižší koncentracekanamycinu inhibujícírůst, ^.ug/ml kapalina z bachoru 31 počáteční kmeny 1,8
H geneticky značené Km kmenyHh-GYOKI-2-4 250 -l4Ab 250 -37 250 -81 125
Provedením výše uvedeného způsobu se získá-vají mikroby pocházející z bachoru, které jsouschopné využívat mouku z obilovina jako zdroj uhlí-ku a jsou 18 x rezistentnější na kanamycim B nežflora bachoru.
Kmen označený jako Hh-GY0KI-2-14Ab byl ulo-žen v Maůarské státní sbírce: lékařských bakteriíStátního ústavu hygieny v Budapešti pod číslem00288. μ; h íi - 30 - 0/ Znovuzavádění geneticky značených mikroorganismůdo bachoru
Způsob popsaný pod bodem C/ v příkladě 1 seopakuje s tím rozdílem, že sterilní RGCFa médium,obsahující 1,8 % škrobu místo 1,8 % celulózy /Bacto/,se očkuje, smíchá s potravou pro ovce a denně se son-dou; odebírají vzorky před podáním a po podání.»310 mlkultury obsahující 7,1x10^ bakterií/ml bylo podává-no orálně ovci.
Tabulka 5
Změny flory bachoru u ovce po přidání kmene
Hh-GY0KI-2-l4Ab /KmR/
Vzorek Počet buněk/ml
Bez antibiotik V přítomnosti 250 /Ug/ml kanamycinu B Před podáním 4i3xlO6 1,4x1ο1 Po podání: l.den 4,1.106 l,8xlO3 2. den 3,2xlO6 2,lxlO3 3» den 8,OxlO3 Ι,ΙχΙΟ3 6. den 9,lxlO6 7,lxlO2 8. den 8,0xl06 8,lxl03 - 31 - pokračování tabulky 5 15*den 6,8xlO6 8,7xlO3 22. den 5,OxlO6 9,8xlO3 29. den 8,OxlO6 Ι,ΙχΙΟ4 36. den 9,lxlO6 7,OxlO3 43. den 7,OxlO6 7,9xlO3 60« den 6,lxlO6 7,OxlO3 Údaje z tabulky 5 ukazují, že podané mikro-organismy zůstávají a replikují se po dlouhou dobuv bachoru. Příklad 3
Modifikace flory bachoru ovc® krmené melasouA/ Izolace mikroorganismů schopných růstu na melase
Způsob popsaný pod bodem A/ v příkladě 1 seopakuje s tím rozdílem, že počátečníí vzorky jsouodebírány od ovce krmené melasou, individuální izo-láty se očkují do RGCF média obsahujícího glukózumísto extrahovaného sena, kultury vyrostlé v teku-tém médiu se nanesou do RGCA média, klony vyrostléz buněk využívajících melasu se očkují do stejnéhoRGCA média. - 32 -
Tak se získají mikroorganismy pocházejícíz bachoru využívající melasu. B/ Genetické značení bakterií využívajících melasu
Způsob popsaný pod bodem B/ v příkladě 1 seopakuji s tím rozdílem, že buňky připravené podlebodu A/ v příkladě 3 se transformují plOlí plasmi-dem DNA místo buněk získaných podle bodu A/ v pří-kladě 1.
R
Rezistence některých Km kmenů na kanamycin Bje uvedena v tabulce 6.
Tabulka 6
Rezistence bakterií bachoru a geneticky značenýchkmenů využívajících melasu na kanamycin B
Mikroorganismy
Nejnižší koncentracei kana-mycinu B inhibující růst kapalina z bachoru 31 počáteční kmeny 7,5
R geneticky značené Kin kmeny' Hh-GYOKI-3-2 250 -14 500 -34 250 - 33 pokračování tabulky 6 81Me 500 -132 500
Takto se získávají izoláty vysoce rezistent- ' šj' ní na kanamycin B a využívající melasu·
Kmen označený jako Hh-GY0KI-3-81Me je uloženv Maóarské státní sbírce lékařských bakterií Stát-ního ústavu hygieny v Budapešti pod číslem 00289. 0/ Znovuzavedení geneticky značených bakterií do h
bachoru. J •í
Způsob popsaný pod bodem C/ v příkladě 1se opakuje s tím rozdílem, že kmen Hh-GY0KI-3-81Me se .očkuje do RGCFA média obsahujícího 1,8 % glukózy namísto 1,8 % glukózy namísto 1,8 % celulózy, a kul-tura se smíchá s potravou pro ovce krmené melasou.380 ml kultury obsahující 1,6x10^ bakterií/ml bylopodáno perorálně. Denně se -odebírá jeden vzorek son-dou z bachoru před a po podání.
- 34 -
Tabulka 7
Změny ve floře bachoru ovce po podéní kmeneHh-GY0KI-3-81Me /KmS/
Vzorek
Počet buněk/ml
Bez antibiotik V přítomnosti 500
/Ug/ml kanamycinuB Před podáním 5,0x10° 0 Po podání 1, den Ι,ΙχΙΟ6 l,9xio5 2. den l,8xl07 2,5xlO5 3. den 6,2xlO6 6,lxlO5 6· den 8,lxl06 8,7xl05 8. den 6,2xlO6 9,1x10 15.x den l,3xlO3 l,3xlO5 22. den 3,OxlO6 3,lxlO5 29. den 1,1x106 7,OxlO5 36. den 8,0xl05 9,lxlO4 43. den. 6,lxlO6 8,lxlO5 60. den 6,8xl06 δ',ΛχΙΟ^ MM·» _ M — MMMM M «... M MMMM «. MMM MMMMmMMMMMMMM·» M-WIM — WTtm-WMM·
Poznámka:x/ omyl ve vzorku - 35 Údaje ukazují, že podané mikroorganismy setr-vávají dlouhou dobu v bachoru ovcí krmených melasou· Příklad 4
Změny v poměrech těkavých mastných kyselin působe-ním bakteriálního preparátu
Dvě ovce jsou krmeny úplnými dávkami po dobu14 dní a sondou jsou odebírány vzorky z bachoru· Dvalitry kapaliny z bachoru se filtrují několika vrstva-mi gázy. Příslušný zbytek se suspenduje do litru fý-siologického pufru /viz níže/ smíchá se a zfiltruje sejako dříve. Dva filtráty se smísí, ponechají se státpo dobu dvou hodin, pevná hmota vznášející se na po-vrchu >se odstraní a kapalná fáze se použije ke zkoušení·
Složení fysiologického pufru je následující:
Na2HPO4 0,316 &Ά KH2P°4 0,152 g/1 NaHCO^ 2,260 g/1 KC1 0,375 g/1 NaCl 0,375 g/1 MgSO^ 0,112 g/1 CaCl2.H2O 0,050 g/1 PeSO4.7H2O 0,008 g/1
1 i 36
MnS04.H20
ZnS04.7H20
CuSO4.5H2O
CoC12.6H20 0,004 S/10,004 &/10,002 g/10,001 g/1
Zjistí se hodnota pH směsi a je-li to žádou-cí, pomocí vodné kyseliny chlorovodíkové nebo roz-toku hydroxidu sodného se upraví hodnota pH na 7,2/Cheng a spol.í J.Dairy Sei. 38, 1225, 1955/· K získané směsi se přidá stejný objem fysiolo-gického pufru a do 1 litru zředěné směsi se suspen-dují 4 g dávky. 30 ml každé suspenze se nalije doErlenmeyerovy banky o objemu 100 ml. 200 dávek se ste-rilizuje a 200 jiných nikoliv.
Sterilní média a média obsahující živé bakte-rie z bachoru se zaoěkují bakteriálními kmeny, kte-ré mají být sledovány z hlediska produkce; kyselinyoctové, propionové a máselné.
Sledují se bakteriální kmeny schopné přetr-vávat dlouhou dobu v; bachoru po kultivaci in vitro.Kromě toho jsou také sledovány bakteriální kmenyizolované z tekutiny bachoru ovce: krmené úplnou ne-bo jakoukoli dávkou podle bodů A, B a C z příkladu 1.
Bakterie, které mají být sledovány, se kulti- - 37 - vují na RGC + CG médiu /viz níže/ za anaerobníchpodmínek při teplotě 37 °C po dobu 48 hodin.Složení RGC + CG média: roztok solí I /viz A příkladu 1/ 15 % roztok solí II /viz A příkladu 1/ 15 % roztok stopových prvkůx 0,3 % kvasničný extrakt /Oxoid/ 0,5 % zfiltrovaná tekutina z bachoru 10,0 % Na2CO3 0,4 % cy s te in>. HC1. HgO 0,05 % thiosíran sodný 0,008 % celulóza /Bacto/ 0,3 % glukóza 2,0 % x Složení roztoku stopových prvků: ZnClg 40 mg CuC12.2H20 10 mg tetraborát dvojsodný /dekahydrát/ 10 mg molybdenát amonný /tetrahydrát/ 10 mg FeClyóHgO 200 mg MnCl2.4H2O 10 mg deionizovaná voda ad 1000 ml
Kultury se naočkují do média připravenéhov Erlenmeyerových baňkách* Dva ml každé kultury - 38 - se naočkují do dvou paralelních baněk po 50 ml media·Nesterilní kultury se zaočkují rovněž·
Baňky se inkubují za anaerobních podmínekpo dobu 40 hodin. Růst se zastaví 10% kyselinou mravenčil·a sleduje se obsah těkavých, mastných kyselin, v kultu-rách.
Kultury se zfiltrují vrstvami gázy a odstředíse při 4000 ot./min. po dobu 15 minut, potom se zfil-trují znovu a vnesou na separační kolonu Carlo Erba GI-452 plynově-kapalinového chromatografu opatřeného pla-menových ionizačním detektorem pro stanovení Cg-C^mastných kyselin.
Teplota kolony: 150 °C
Separační kolona: 2 m délky, 4 mm šíře /vnitřní prů-měr/ skleněná trubice naplněná 10% ethyleglykol-adi-pátem a 2% kyselinou o-fosforečnou na silanovaném si-likagelovém nosiči /průměr částic 0,2 až 0,3 mm/.
Teplota injektoru: 190 °C
Proud dusíku: 50 ml/min
Proud vodíku: 50 ml/min
Proud vzduchu: 200. ml/min
Pohyb papíru: 160 cm/hod.
Trvání chromatografie: 20 min. »
Objem vzorku: lyúl. - 39 - U každého vzorku bylo prováděno trojí měření.
Standartní roztok obsahuje kyselinu octovou, propio-novou, isomásienou, máselnou, isovalerovou a valero-vou. Z ovce krmené úplnými dávkami bylo izolovánovíce než 90 kmenů bakterii. Potom byly kmeny označenygeneticky a sledovány /pozitivní kmeny byly sledoványněkolikrát/. Reprezentativní výsledky jsou uvedenyv tabulce 8.
Vysvětlení zkratek použitých v tabulce 8: S: očkováno po sterilizaci NSí kultura obsahující živou floru bachoru byla očko-vána a/ stopová množství b/Z negativní kontrola: obsah těkavých mastných kyse-lin v médiu připraveném z tekutiny z bachoru,fysiologického pufru a krmivá použitého pro,po-kus /průměr ze 12 měření/; c/ pozitivní kontrola: obsah těkavých mastných kyse-lin inkubované kultury, obsahující počáteční: báká-te rie z bachoru, a jinak připravené stejným způ-sobem /průměr ze 12 měření/
- 40 - d/ jako sub c/, k médiu však bylo přidáno 5 ppm monensinu sodného /průměr ze 6 měření/; e/ jako sub c/, k médiu však bylo přidáno 10 ppmmonensinu sodného /průměr ze 6 měření/. 41
co 0 44
P 3 40 £
X I 3 O ΛP OO 14O ft ; 0 00 CJP PP PΦ Φ -003 03 >
fcjř S 1 Φ (0 0 a »3 'č 3 bO & P P 0 f> A ‘k 1 0 1 0 Φ > o X oi a O 14 bO & P P 63 P Φ P 'k t 1 i—1 φ » s Φ 03 X bO s *rl rd 1 k 1 rj Φ (0 'S 03 G o P bO £ *ri H 63 P Φ 03 k 1 05 0 1 o P Φ 03 ft o £ X ho £ •H rd 14 O fl X 1 1 á Φ $5 o X co a P (0 & •H rH o o 0 s 1 63
O P4
M
P Φ
P
S 40 H c- trs os c- i: χι- M* c- t- 0v o- so ' xř CM xf- ό 00 M3 ř- ·* ·*- ·* r» 0* «i 1 ·* 0» ' 0* 0* O o O rH m n CM H H r-4
OS
O 1 1 1 0 i 1 1 1 0 ο 0 0 CM Η Ρ γ4 0» •S 0 0 0 ο 0 0 ’ 0 ο 0 0 trs 2 IfS CM os Η Ρ C— m tTS η trs η ITS •Μ· η 0« Λ Λ 0S 0 0 1 0« ·% Μ ·* o o ο ο 1 ο ο Ο ο 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 ο- Ο 00 U0 C- 1 Ρ Μ- Ρ 00 Ρ οο SO IÍS η S0 00 1 Ι" OS Ο σν 0* •S ·* 0¾ 0* 0* ·* 01 •S Η CM ο Η ο Ο 1 ο Ο γΜ ο Η Ο 00 ιη Η Η 1 Η 00 as (Η C— Ο η Os CM οο trs Μ0 SO ΚΟ Λ 0« Λ μ *» 1 ** 0* 0* 0» Ρ CM ο γΗ CM CM rM 1 γΗ γΗ Η w co S5 1 63 ω η 1 3 ΐ CM Η χί- Η ρ Ο Ρ Ο Ρ Ο 00 1 1 1 1 1 1 Λ Η Λ CM Λ m S 1 « 1 S | 1 i1
ί! I • b i íí
• I !i >a
I! i!
0
P o f-t
P tí o 44
40 Čí Ό ΦI I I I
I - 42 -
OJ > \ S'g °
O
P o o
•H
(X
O
X
(X as asfl a •Η -rlΗ HΦ ΦW 0
φ as φ« fl H &3 * 5 t)0 g >» t> 14 P ?k
I as φ as > oi « o & s “ o 14 Φ r4 «Ο 3_ σ\ rH Ol CO M-. CM ca ί- ir\ o OJ c- irs ca co O co r4 r— ο ca IÍY Ol o •\ ♦* ·» r» «% Λ Λ Λ O O o o CM M- CM OJ CM rH Ol as i i r-4 φ as φ οι β 01 •h 'asH a φ as Hta a o •rl Nr4 -rl
WJ &
CO & r4 1 •p Ή f>
O χυ es (4 Λ4
O ft co lí\ m Μ- -Φ r-4 rd γΗ «« ·* Λ as o as O as o as o 1 1 1 Ol Μ- μ- to <o to Μ- Γ- Μ- t- rH r-1 co η γπ n ΓΊ n η η η O1 CO m ·* r« Λ ·* •s 0% •s <* «* ·* ·* o o O o o o o o o o O o to ·§ < 'φ 33 Φoi to<1a g"g 'žs kos»x s x i
0 § -P '«O φ asoi tí & 3
I
I o •r4 asaseasasajasasajas
o co <o r-4 C—· o H co t— o Γ- r-4 <£> n to O M- c- l£\ c— vo v£> ΟΟ CA Λ rn *» •t »* »» - »* e» 0* ·* r4 OJ rH Ol O o O o o o o O KO r4 M- n Γ- Ol O co ca t- r-4 Ol Ol Ol M- o η o r-t p4 n t- n o ·» *« *» ·% ·* ·* . ·* 0* ·* r-f r4 H Ol Ol CM OJ r4 rH r4 OJ CO řZ3 ca a ta m ca tu ca <2; ca N XS O SX as as as as n Ol co o r4 to r4 Ol Μ- lf\ UA IO p4 r4 ι I 1 1 1 1 V4 H H H H H H •H M M M M M X O O O o O O a Φ P O ÍH O & 8 S h CÍJ s i A 1 <-4 A A A S XI 3 3 3 3 3 3 ca - 43 - \ i 3 §· O h op, OJ co
P P •H *rl
r-l i—I
Φ © XO CO CO f> & j? 2
I Φ i—(
I
Φ Λ<0 P
I Φ
CO
(H *HI
rHΦCO a g
2 M 1? 2 «Λ =<
tsO 3 00 N Φ J3
I o
•H cn trs
H r-1
lí\ CO o\ o CM m «t o o co co trs tJ- pokračování tabulky 8 3 w 8 o "S *!ž & a s. a a X. &3 S?\
I
Φ esco P
I o +> o\ «Μ- <n
CM
Ch
CM CM co
P
M
O
ÍM PΦ P ť • ·8
CO CO » ja σ\ o
H á s o
I
Hh-GYOKT-126 S 0,56 0,60 a 0,52 a a 0,93 NS 0,83 1,14 a 1,55 0,11 0,70 0,73 - 44 - Údaje z tabulky 8 dokazují, že poměrytěkavých mastných kyselin produkovaných fermen-taěním působením flory bachoru lze modulovat v širo-kém rozsahu podáváním mikrobiálních kultur připrave-ných. podle vynálezu. Například produkci kyselinypropionové lze významně stimulovat kulturou připra-venou z kmene Hh-GY0KI-48a, kdežto kmen Hh-GYOKI-lO9bstimuluje produkci kyseliny octové. Stimulování pro-dukce. jednotlivých mastných kyselin bylo pozorovánona médiu postrádajícím /S/ i obsahujícím /NS/ živémikroby bachoru. V našem pokusném systému monensinsodný snižoval poměr kyseliny octové ke kyselině pro-pionové o 0,1 nebo 0,2 /d,e/.
Mikroorganismy vybrané' výše uvedeným způ-sobem jsou značeny geneticky, podávány přežvýkavcůma zkoušeny na růst přežvýkavců a na přetrvávání opa-kováním postupu popsaného v bodě b/ v příkladě 1. Kiněny s výhodnou fermentaění strukturou, a dlouhým pře-trváním v bachoru budou podávány perorálně za úěelemiúpravy produkcec těkavých mastných kyselin. - 45 - P ř í k 1 ad 5
Bakteriální přípravek pro perorální podávání přežvý-kavcům
Bakterie, které mají být podávány, se kulti-vují na RGCA = CO médiu /příklad 4/ za anaerobníchpodmínek popsaným způsobem. Po kultivaci se buňkyoddělují filtrací nebo odstředěním.
Oddělené buňky se suspendují ve fysiologic-kém pufru /příklad 4/ a lyofilizují se. lyofilizo vánýbakteriální preparát se skladuje, vhodně upraví a po-dává perorálně pře žvýká vcům.
Mikroorganismy lze kultivovat v jiném běžněpoužívaném médiu, například v médiu obsahujícím glukó-zu a škrob atd. jako zdroje uhlíku a anorganické solijako zdroje dusíku. Přípravek lze podávat snadno smícháním s po-travou nebo s pitnou vodou, samotný nebo spolu s jiný-mi biologicky účinnými látkami, například s antibio-tiky a vitaminy.
Kromě lyofilizováného preparátu; lze připra-vovat i jiné produkty. Mikroorganismy mohou být taképodávány po smíchání filtrované nebo odstředěné bak-
!1 - 46 - teriální masy se vhodným nosičem nebo zřeňovadly, na-příklad s uhličitanem vápenatým, koncentráty, premixya jinými.
Bakteriální kmen/y/ jsou voleny z mikroor-ganismů připravených způsobem podle vynálezu a výhod-ně zlepšujícím floru bachoru, a jejich množství„ kte-ré má být zkrmováno se určuje v závislosti na dávce; apotřebě zvířete. Je-li potřebné snížení poměru kyse-liny octové ke kyselině propionové, může se použít, napříkladkultura připravená z kmene Hh-GYOKI-48a, avšak pro zvý-šení tohoto poměru se doporučuje podání kmene Hh-GYOKI- 3-81Me.
Stanovení požadovaného množství mikrobiálníchbuněk nemůže znamenat pro odborníka problém. Doporučujese podávat buňky v množství 5x10^ až 5x10? kultivova-ných mikroorganismů na 1 ml tekutiny z bachoru. Příklad6
Podávání kmenů Hh-GY0KI-48a a Hh-GY0KI-l-123Sz ovcím
Hh-GY0KI-48a kmen se kultivuje na RGCA-CG médiu/příklad 4/ v pětilitrových fermentorech /užitečný objem/při teplotě 37 °C za anaerobních podmínek. Permentacese zahajuje očkováním 10 mililitry kultury podobnéhosložení, PQ 48 hodinách kultivace se buňky oddělí odstře- • · ' .
- 47 - . II Ί t děním /5000 otáček za min./a vlhký sediment váží- ! |
- - ' ' : ‘ . ; ' ': ' IH cí 58 g se smíchá pečlivě se 4kg kukuřičné-mouky. í í jí
Směs se rozdělí na osm: stejných dílů a perorólně se ? ií ί
« Ί L podává osmi ovcím,, které před tím 24 hodin hladově- ly. Kmenu Hh-GYOKI-l-123Sz lze použít podobně, s bak-
. · IN teriálním výtěžkem 53 g· 1 ? ' Ϊ ? ií { V růstově výkrmném pokuse bylo 23 ovcí krmě-no ad libitum senem z hubené trávy a zvířata byla podobu 5 týdnů každý týden vážena. Pokusné skupiny, se-stávající z osmi ovcí, byly krmeny jedním z bakteriál-ních preparátů, každá pro jediné krmení a sedm ovcí 1 ( :: í sloužilo jako kontrola. Denně bylo konzumováno zvíře-tem 600 až 900 g sena plus minerální a vitaminový pre- mix smíchaný s kukuřičnou moukou /100 g/. Výsledky . - - ' . "· . - ' ' lÍ 5' jsou uvedeny v tabulce 9· ;i 51 jí P, il — 48 — IA O 1 ia O o : ia o O o »A ·* Λ •v: r*- .'·.·* «* ' •s co 00 M0 co o C— 00 xf- co 00 04 04 i 04 04 - (Ό 04 04 co 04 04 tA IA IA O IA O O ' tA IA O *» r* r» »* ·* ·* Λ co VO CO o co co co n co CO Ol 04 04 m 04 04 04 on 04 Ol
Hmotnostní přírůstek ovcí krmených ad libitum. senem z trávy fl tu CO Ό'>5+» 04 rd M σ +» XJ M <U O •P tí X0 -P XI O o § ft Λ (0 rd
O Λ4
N
CO IA O IA tA IA o O n o IA O ·* Λ V* r» Λ *» 04 ** co C— 0— o o to 00 rd co 00 04 04 04 n m 04 04 1 co 04 04 O IA O o o IA : ia a IA o O •s r» ·* ·» «% «s o 00 c— o CO vx, c- 04 t— tA m 04 Ol m Ol 04 04 <u m 04 04 fl
<U IA IA O IA o : ia O Vd fi Φ O IA IA ·* ·* Λ £> ·* <» CO c— c— o o IA c— O Ol \o IA 04 04 04 m 00 04 C\J co co 04 04 •3 ft O O IA O IA O O IA tA O 0¼ *» A ** *» ·* r* CO c— co o co IA tr- co tA IA 04 04 04 m 04 04 oj 04 04 04 xu o
Ό OJ0 rd>H MO Ή:P. >O rd 04 CO Μ· ΙΛ VĎ t~ CO <O Ord IX 25,5 24,5 25,5 27,5 27,0 .28,0
o IA o o m o o : ia o ·* <* n »»· . — ·» O O rH CM o rH O m m co m cn co m m o IA ΙΛ ia o o m o IA ·*. ·* «* n ·» ca ca o O CM ca O ca CM CM CM m m m CM CM m tí φ m όS>>+»
CM aJ o o IA o IA IA ΙΛ o O ·* «* ·* Λ Λ μ- H r- ca 00 rM 00 ca o o ι co CM CM CM n CM CM (*3 H 8 o ·* CA IA Λ o IA Λ CA IA o S ía o ÍA ·* CO IA co O c- O H CM m CM m φ rn CM CM CM m a §
I o O IA O 3 O o IA O IA Λ' Φ *k ·» - ·* oo o 00 CA O o IA C— co o CM n CM CM O cn CM CM CM co ra o. pokračování tabulky 9 >o Φ +» Ό, X)
O 'φ ►
P 0} +» o o Ό Ogj hω o ΉΛ X)
o IA IA IA IA : tA O O IA •s r» ·« r* · ·* ·* CA CA i CA 00 CA co o- CO CA CM CM CM CM CM CM CM CM CM
cm m m· iarH i—I r-1 i—I co c- co ca o
Η Η Η H CM 28,0 28,0 28,0 29,0 29,0 30,0
H
CM
I
I - 50 -
Pokračování tabulky 9 • in 33,5 0 Λ CM m co 0 • ·% ·« *^· CM H m m ti Φ 0 0 • Λ m d 0 σ\ m CM '>i -P CM m • Λ •X CM m r- m CM • tn 0 H ·% Λ. 0 CO n CM Ή ti +i >O m Φ 0 0 O P ti ·* OJ -P o\ C~- O 0 CM CM O i Λ .ti XD > O d 0 ď H *5 ω CM m 0 Ή CM CM P< >o o
H Φ
O (—1
I (0 +» ti Φ d Φ
S Φ •Γ3 Φ *.- · IT\ - 51 -
Průměrná hmotnost a denní přírůstek hmotnosti pokusných a kontrolních ovci
CM «
iH
KO n Λ co
CM ΙΛ + Ε-ΓΩ- ·»o
CY
O t-
O
O
CO
CM co
I <á o\
CM
CM
CO a a> Ό '>»
P
PM WO
<4O P> O
US a)
rH
O ř4
P fl
O Λ4
Cl 00
CM o r4 bj 03 m
CM
H f
rH t r4
Cl Λ σ\
CM c—
CO M σ\ Cl r—1 p co o H ·* 00 O co CM + 1 ši CM 'Φ U-i 0) O r4 o β O CM 0) ·* co a co CM +- Λ CM M tí Φ P
CO
CO !l· S'? if Ěí
O
O co
CM
O n •3
A c— c—
CM
ít : «Λ * Μ- tí <i> η ό >> +»
OJ
rH «5
CO Μ- Ι
B
H o
I s i i - 52 - O\
VO ·« a η c·— ·» o n t- n ·% o\
OJ
OJ
O Ολ
OJ M- σ\ 0t c-
OJ Ή
CJ Φ P X> M to O £3 o w f—1 Ό tí •a 00 O +» Λ «* > 2 o •3 0 04 ft Λ o
<M
H + o c- M- M- + ií\ n
H +
VO
H + pokračování tabulky 10
ff
Kiv/jgaajBaaaaiMÉBfl
- 53 -
Ovce krmené kmeny Hh-GYOKI-l-123Sz aHh-GYOKI-48a kontrolní skupina měly při chudých dáv-kách přírůstky v průměru 2620, 3875 a 360 g během35denní pokusné doby.
Počáteční tělesné hmotnosti mezi sku-pinami se významně nelišily, avšak u konečných těles-ných hmotností /tabulka 11/ a u denních přírůstků/tabulka 12/ byly nalezeny významné rozdíly.
Tabulka IX
Statistické hodnocení konečných tělesných hmotností kontrola Hh-GYOKI- 1-123SZ Hh-GYOKI- 48a průměr /kg/ 28,357 30,375 31,6875 korigovaný kvadrát standartní odchylky 1,476 3,910 2,281 p /%/ <5,0 <0,1
i - 54 -
Tabulka 12
Statistické hodnocení přírůstků tělesné hmotnosti./5 týdnů/ kc >ntrola Hh-GYOKI- 1-123SZ Hh-GYOKI- 48a počet zvířat celkový hmot. pří- 7 8 8 růstek skupin Ag/ 2,5 21,0. 31,0 maximální přírůstek Ag/ 2,5 4,5 5,0 minimální přírůstek Ag/ průměrný přírůstek -2,0 1,0 2,0 na ovci Ag/ korigovaný kvadrát 0,3571 2,6250 3,8750 standartní odchylky 2,143 1,768 0,839 standartní odchylka + 1,355 + 1,244 + 0,857 Údaje dokazují, že přípravky vyráběné po-dle vynálezu mohou významně stimulovat přírůstek hmot-ností ovcí, > Příklad 9
Setrvávání geneticky značených bakterií v hovězím ba-choru
Způsob popsaný pod bodem C v příkladě 1 :4*ΐΧΛ«Λ«Λ>-7Ζ<*’ Μνκηρ^ &i
-55 se opakuje s tím: rozdílem, že kmen Hh-GY0KI-l-123Sz, rezistentní vůči 10.000 yUg/ml kanamycinu, se kulti- vuje ve 4 litrech média RGCTa. Po dosažení stacionár-ní fáze /třicátá osmá hodina/ se kultura izoluje od-středěním /5000 otáček za minutu/ a buňky se důklad-ně smíchají s 500 g kukuřičné mouky a použijí se kekrmeni krav. Týdně se odebírají sondou vzorky a po-dle bodu G z příkladu 1 se zjišťuje setrvávání podá- j. něho kmene v bachoru. Λ Výsledky ukazují, že kmen Hh-GY0KI-l-123Szroste v bachoru hovězího dobytka a může zde přetrvá-vat nejméně 40 dní. i* 4 ij Η v
Účinek mikroorganismů Hh-GY0KI-48a na zvýšení hmot-* nosti ve srovnání s negativními a positivnímikontrolami
Mikroorganismus Hh-GY0KI-48a sepěstují způsobem, popsaným v příkladu 6 s tím roz-dílem, že se do živné půdy nepřidává šíáva z bacho-ru. 41 g bakterií ve formě vlhké pasty, získané poodstředění se smísí s 1,2 kg kukuřičného šrotu apak se získaný materiál rozdělí na 12 stejných dílů. Dále se postupuje stejným způso-bem jako v příkladu 6, s tím rozdílem, že se rozdě-lí 36 ovcí do tří skupin, positivním kontrolám sepodává kromě přídatného krmivá a sena ještě 100 gkrmivá. Výsledky jsou uvedeny v následu-jící tabulce 13, v níž n znamená počet zvířat vuvedené skupině. - 57 -
Tabulka 13
Negativní kontrolní skupina, n 12 číslo hmotnost (kg) v týdnu přírůstek v kg : i i č zvířete a 1 2 4 za 4 týdny 1 32,8 31,0 33,2 34,1 1,3 lJ 2 34,8 33,0 35,4 37,0 2,2 s i 3 26,7 27,4 28,5 30,1 3,4 4 32,5 35,4 36,3 35,7 3,2 1 Ě 5 32,6 30,6 32,0 34,0 1,4 F 6 35,0 35,1 34,9 35,2 0,2 ϊ 1 Π 3$j6 N 7 34,7 36,4 37,7 3,0 4 8 35,8 36,8 37,5 38,1 2,3 il 9 32,0 32,7' 34,0 35,0 3,0 H 10 30,0 30,3 32,0 34,2 4,2 11 34,0 33,9 35,5 36,6 2,6 i *·, 12 35,8 35,0 36,1 38,0 2,2 i V 1 &í Φ celkem 396,7 397,8 411,8 425,7 29,0 5 «£ , t* průměr 33,06 33,15 34,3 35,475 2,4 j i { - 58 -
Positivní skupina, n =12 číslo hmotnost (kg) v týdnu přírůstek v kg zvířete 0 1 2 2 4 4 za 4 týdny 13 35,2 37,6 38,0 39,0 3,8 14 31,6 32,7 33,4 35,3 3,7 15 33,3 34,6 36,3 37,0 3,7 16 33,2 34,0 35,6 36,0 2,8 17 34,5 36,8 39,0 39,6 5,1 18 27,3 29,5 31,4 32,4 5,1 19 34,5 36,0 37,4 37,7 3,2 20 31,7 31,6 34,0 35,0 3,3 21 31,o 36,8 38,0 38,7 7,7 22 35,5 37,0 38,9 39,8 4,3 23 34,4 35,5 37,7 38,8 4,$ 24 34,0 34,9 37,2 37,9 3,9 celkem 396,2 417,0 436,9 447,2 51,0 průměr 33,0 34,75 36,40 37,266 4,3 - 59 - pokusná skupina, n = 12 • »< i přírůstekza 4 týdny číslo zvířete hmotnost (kg) v týdnu 0 1 . 2 4 25 33,2 35,9 37,4 •38,1 4,9 26 33,6 35,7 37,0 37,9 4,3 27 34,7 36,4 37,4 38,0 3,3 28 33,5 35,0 36,8 37,3 3,8 29 28,8 32,0 33,2 34,2 5,4 30 27,6 31,9 33,4 35,0 7,4 31 32,0 32,5 35,5 36,1 4,1 32 30,5 35,6 35,9 38,0 7,5 33 33,4 33,7 34,5 35,3 1,9 34 31,3 36,0 37,3 38,9 7,6 35 34,7 33,5 34,1 36,8 2,1 36 31,6 34,8 36,1 37,2 5,4 celkem 384,9 413,0 428,6 442,8 57,7 průměr 32,075 34,42 35,7 36,98 4,8
MB ί«
- 60 Výsledky matematické analýzy ,-<;: J- J . í
Srovnání mezi negativní apositivníkontrolnískupina positivníkontrolní a pokusnou skupinou mezi negativníkontrolní apokusnou skupinou S = + 1,236 S = + 1,664 S = + 1,613 ú= 1.9 Δ= 0,5 Δ « 2,4 t = 3,766 t = 0,736 t = 3,645 p <0,01 p <0,5 p < 0,05 velmi významné slabě významné významné
Poznámky: S, 4 , t a p jsou statistické konstanty.S znamená standardní odchylku, 4 znamená rozdíl hodnot pro průměr,t znamená t-vzorek, p hodnota pro statistickou významnost. >-Π4ΤrtíuwHaiuw,-rr,.·»] t.’<VATA JVC'.: - 61 - Z výsledků svrchu uvedených po-kusů je zřejmé, že, hmotnost zvířat ve skupině, kte-.ré byly podávány mikroorganismy v průběhu 28 dní,přepočítáno na jedno zvíře převýšilo průměrnou hmot-nost kontrolních zvířat o 2,4 kg. Přírůstek zvířatv positivní kontrolní skupině byl průměrně 4,3 kg,tj. o 0,5 kg méně než průměrný přírůstek zvířat,ošetřených mikroorganismy. To může znamenat, že připodávání prostředku podle vynálezu ve svrchu uvede-ném množství jehňatům při udržení přírůstku je mož-no uspořit na jedno zvíře alespoň 100 g nákladnéhokrmivá denně. Pří k 1 a d 11
Způsob výroby.prostředku s obsahem mikroorganismuHh-G®0KI-48a A· Způsob výroby lyofilizováného prostředku.
Pasta bakterií OE-950, získanézpůsobem podle příkladu 6 po odstředění s hmotností100 g se lyofilizuje v lyofilizačním zařízení
- 62 - (Labor MIM, Maúarsko), pak se 54 g takto získanéhoproduktu opatrně promísí se 486 g pšeničných klíčků,a uloží se do zásobníku nebo pytle, nepropustnéhopro bakterie. Tímto způsobem se získá prostředek s obsahem 10 % účinné látky. * B. Způsob výroby prostředku, který obsahuje jakonosič pšeničné klíčky 100 g vlhké pasty mikroorganismůpo odstředění, tak, jak byla získána způsobem podlepříkladu 6, se promísí se 100 g nebo 900 g pšeničnýchklíčků a pak se uloží do zásobníku nebo pytle, nepro-pustného pro bakterie. Tímto způsobem se získá pro-středek s obsahem 5 nebo 10 % účinné látky. C. Způsob výroby prostředku, obsahujícího jako nosičbentonit 100 kg bentonitového prášku "Veegumneutrál" (Lehmann und Voss Co., Hamburg, NSR) se ste-rilizuje 2 hodiny při teplotě 160 °C, pak se při tep-lotě místnosti vloží do mísícího zařízení typuLodige íM 130 (výrobce: Gebruder Lodige Maschinenbau
I - 63 -
GmbH, Paderborn, NSR)· Mísící zařízení se uvede doichodu a přívodem pro kapalinu se přivede 10 kg sus-penze mikroorganismů, získané způsobem podle pří-kladu 6. získané disperze mikroorganismů a bentonituse suší při teplotě 30 °C až do dosažení obsahu vody6 až 8 % a pak se uloží do zásobníků nebo pytlů, ne-prostupných pro bakterie. Vždy 5 g takto získaného produktuse skladuje při teplotě 4 °C, přiteplotě místnostia při teplotě 37 °C, přičemž ve dnech 0, 20, 51 a 72se odeberou vzorky, prostředek se uvede do suspenzeve sterilní směsi HB se složením uvedeným v příkladu1 a po příslušném zředění se naočkuje na agar RGCA,jehož složení je rovněž popsáno v příkladu 1. Pak semikroorgahismy pěstují 46 hodin za anaerobních pod-mínek, načež se počítá množství vytvořených kolonií. Získané výsledky jsou uvedeny vnásledující tabulce 14.
- 64 -
+
Tabu 1 k a 14 ,
Stálost produktu s obsahem bentonitu jako nosiče
Teplota Počet bakterií/g produktu ve dni 0 20 51 72 4 °C - 4,3 x 107 teplota místnosti 2 x 108 6 x 107 37 °G 3 x 107 2,5 x 108 8 x 108 9 x 106 8 x 107 9 x 106 5 x 106 Z údajů, uvedených v tabulce jezřejmé, že se obsah bakterií v prostředku, který ob-sahuje bentonit v průběhu svrchu uvedeného měřeníjen velmi málo mění· D. Způsob výroby prostředku s obsahem atapulgitujako nosiče 100 kg koloidního atapulgitu"Pharmasorb HVM" (Chemie-Mineralien KG, Břemen, NSR)se sterilizuje 2 hodiny při teplotě 160 °0, po
- 65 - zchlazení na teplotu místnosti se atapulgit uložído mísícího zařízení typu Diosna P-25O-A (výrobce:Dierks Sohne Maschinenfabrik, Osnabruck, NSR). Mísící zařízení se uvede do chodua přívodem pro kapalínu se přijívede 10 kg suspenzemikroorganismů, připravené způsobem, popsanýta v pří-kladu 6.
Takto získané disperze atapulgitua mikroorganismů se suší při teplotě 30 °0 až do do-sažení obsahu vody 6 % a pak se ukládá do zásobníkůnebo pytlů, neprostupných pro mikroorganismy. Vždy 5 g produktu se skladuje přiteplotě 4 °C, při teplotě místnosti a při teplotě37 °C, načež se ve dnech O, 20, 51 a 72 odeberouvzorky. Prostředek se uvede do suspenze ve sterilnísměsi HB se složením, uvedeným v příkladu 1 a po od-povídajícím zředění se očkuje na agat RGGA, jehožsložení je rovněž popsáno v příkladu 1. Mikroorganismyse pěstují 46 hodin za anaerobních podmínek a pak sepočítá množství vytvořených kolonií. Získané výsledky jsou uvedeny vnásledující tabulce 15.
-λ; 27aÍ ;W··'.··. · · ." * ;Λ· - 66 - T a b u 1 k a 15
Stálost prostředku podle vynálezu, který obsahujejako nosič atapulgit /
Teplota Počet bakterií/g produktu ve dni 0 20 51 72 4 °<3 2 x 108 1,5 x 107 3 x 107 teplota
7 R místnosti 9 x 10' 3 x 10 9 x 107 5 x 108
37 °G 2 x 108 9 x 107 8 x 105 K, Z údajů, které jsou uvedeny vtabulce, je zřejmé, že se obsah bakterií v pro-středku podle vynálezu, který obsahuje jako nosičatapulgit za svrchu uvedených teplotních podmínekjen velmi málo mění.
Produkty, které byly způsobempodle tohoto příkladu vyrobeny v odstavcích A až D
- 67 - mohou být doplněny také jinými nosiči, napříkladvojtěškovou moukou, drcenými kukuřičnými palicemi,mletým uhličitanem vápenatým, hydrogenfosforečnanemdraselným nebo jinými látkami, které se obvykle po-užívají při výrobě přídatných krmiv a dalších krmiv.Prostředek, získaný tímto způsobem se před svým po-užitím přidává do přídatného krmivá, do krmivá nebodo pitné vody.
Claims (4)
- vadel, konzervačních Činidel používaných v živočišné ťivý-robě a nutričních látek běžně podávaných přežvýkavcům,vyznačená tím, že obsahuje jako plčinnou složku v množstvído 99 hmot. alespoň jednu mikrobiální kulturu z kmenů v mikroorganizmů, uložených v Madarské státní sbírce lékařskýchbakterií Státního ústavu hygieny pod čísly 00287, 00288 a00289, schopných upravovat hmotnostní pomér kyseliny octovéke kyselině propionové na 'hodnotu 1,5 až 4,0 : 1, a schop- v ných růst v bachoru a zdržovat se tam alespoň po dobu 60dní, zbytek do 100 hmot. tvoří nňiué krmné komponenty,například seno, píce a melasa.
- 2. Směs podle bodu 1, vyznačená tím, že obsahuje mikro-biální kulturu schopnou upravovat poměr kyseliny octové kekyselině propionové u přežvýkavců na 2,0 až 3,5 : 1.
- 3. Směs podle bodu 1 nebo 2, vyznačená tím, že máformu pasty mikroorganizmů, lyofilizátu nebo suspenze.
- 4. Způsob přípravy mikrobiálních kultur kmenů . mikro-organizmů používaných jako účinné složky ve směsi podlebodu 1 až 3, vyznačený tím, že se odebírají z bachoru sví-' řK / 2. > _ zvířat krmených potravou nebo krmivém obsahujícím celu-lózu, škrob nebo mono- a disacharidy vzorky, vyšetřuje semetabolismu^ mikroorganizmů izolovaných ze vzorku in vitroa in vivo a mikroorganizmy upravující poměř kyseliny: octovéke kyselině propionové na hodnotu 1,5 až 4,0 : 1 se' kulti-vují v prostředí obsahujícím stejnou potravu nebo krmivojako zdroj uhlíku nebo dusíku, do rostoucích mikkoorganizmůse zavádí antibiotická resistence jako genetický značkovač, V 'i který umožňuje selekci, geneticky značené kmeny se kulti-vují, kultury se znovu; zavádějí do bachoru zvířat krmenýchstejnou potravou nebo krmivém, z bachoru se odebírají vzorky,spočítá se počet buněk geneticky značeného kmene, oddělí sekmeny přetrvávající alespoň 60 dní a tyto kmenty se upravujído formy přijatelné v ,praxi živočišné výroby a výživy.£ ; j t t E
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| HU843084A HU193294B (en) | 1984-08-15 | 1984-08-15 | Preparation influencing the digestion of ruminants advantageously |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CS593085A3 true CS593085A3 (en) | 1992-01-15 |
Family
ID=10962468
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS855930A CS593085A3 (en) | 1984-08-15 | 1985-07-15 | Mixture of microbial cultures for improving efficiency of a fodder utilization for ruminants and process for preparing microbial cultures |
Country Status (24)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS6192539A (cs) |
| AT (1) | AT392287B (cs) |
| AU (1) | AU596076B2 (cs) |
| BE (1) | BE903079A (cs) |
| CA (1) | CA1276084C (cs) |
| CH (1) | CH676189A5 (cs) |
| CS (1) | CS593085A3 (cs) |
| DE (1) | DE3529383A1 (cs) |
| DK (1) | DK370585A (cs) |
| ES (1) | ES8706386A1 (cs) |
| FI (1) | FI853125A7 (cs) |
| FR (1) | FR2569085B1 (cs) |
| GB (1) | GB2163650B (cs) |
| GR (1) | GR851991B (cs) |
| HU (1) | HU193294B (cs) |
| IL (1) | IL76104A0 (cs) |
| IT (1) | IT1188183B (cs) |
| MX (1) | MX7713E (cs) |
| NL (1) | NL8502260A (cs) |
| NO (1) | NO164152C (cs) |
| NZ (1) | NZ213117A (cs) |
| SE (1) | SE8503815L (cs) |
| SU (1) | SU1625317A3 (cs) |
| ZA (1) | ZA856200B (cs) |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| NO974299D0 (no) * | 1997-09-18 | 1997-09-18 | Forskningsparken I Aas As | Metode for stabil merking av mikroorganismer |
| ES2261059B1 (es) * | 2005-01-05 | 2007-11-01 | Alimentacion Siglo Xxii, S.L. | Procedimiento de seleccion de microorganismos celuloliticos a partir de flora ruminal y reproduccion por fermentacion industrial de la flora seleccionada. |
| EP2082739A1 (en) | 2008-01-25 | 2009-07-29 | PURAC Biochem BV | Lactylates for the prevention and treatment of infections caused by gram-positive bacteria in animals |
Family Cites Families (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5310129B2 (cs) * | 1972-05-29 | 1978-04-11 | ||
| SE393517B (sv) * | 1973-06-25 | 1977-05-16 | Grace W R & Co | Sett att oka mjolkproduktionen hos kor |
| GB1443392A (en) * | 1974-02-20 | 1976-07-21 | Grace W R & Co | Ruminant feed additive |
| FR2261757A1 (en) * | 1974-02-27 | 1975-09-19 | Grace W R Ltd | Feed additive for ruminants with digestive upsets - prepd. by incubation of rumen microorganisms in starch-contg. concentrate feed medium |
| HU173822B (hu) * | 1975-06-02 | 1979-08-28 | Chinoin Gyogyszer Es Vegyeszet | Sposob poluchenija pitatel'nykh sred dlja razmozhenija kormovykh drozhej i nitchatykh gribov i/ili belkov iz rastitel'nykh skhodov |
| AT365046B (de) * | 1978-07-13 | 1981-12-10 | Sp Kt Bjuro Dezintegrator | Verfahren zur herstellung eines futtermittels fuer nutztiere und gefluegel |
| US4764510A (en) * | 1986-04-11 | 1988-08-16 | Eli Lilly And Company | Antibiotic A42125 and process for its production |
-
1984
- 1984-08-15 HU HU843084A patent/HU193294B/hu not_active IP Right Cessation
-
1985
- 1985-07-15 CS CS855930A patent/CS593085A3/cs unknown
- 1985-08-14 CH CH3493/85A patent/CH676189A5/de not_active IP Right Cessation
- 1985-08-14 IT IT21933/85A patent/IT1188183B/it active
- 1985-08-14 AU AU46196/85A patent/AU596076B2/en not_active Ceased
- 1985-08-14 AT AT2369/85A patent/AT392287B/de not_active IP Right Cessation
- 1985-08-14 ES ES546144A patent/ES8706386A1/es not_active Expired
- 1985-08-14 GB GB08520398A patent/GB2163650B/en not_active Expired
- 1985-08-14 GR GR851991A patent/GR851991B/el unknown
- 1985-08-14 FR FR858512387A patent/FR2569085B1/fr not_active Expired - Lifetime
- 1985-08-15 CA CA000488801A patent/CA1276084C/en not_active Expired - Lifetime
- 1985-08-15 IL IL76104A patent/IL76104A0/xx not_active IP Right Cessation
- 1985-08-15 ZA ZA856200A patent/ZA856200B/xx unknown
- 1985-08-15 NZ NZ213117A patent/NZ213117A/xx unknown
- 1985-08-15 MX MX851048U patent/MX7713E/es unknown
- 1985-08-15 SU SU853946999A patent/SU1625317A3/ru active
- 1985-08-15 NO NO85853212A patent/NO164152C/no unknown
- 1985-08-15 JP JP60179999A patent/JPS6192539A/ja active Pending
- 1985-08-15 SE SE8503815A patent/SE8503815L/xx unknown
- 1985-08-15 NL NL8502260A patent/NL8502260A/nl not_active Application Discontinuation
- 1985-08-15 DK DK370585A patent/DK370585A/da not_active Application Discontinuation
- 1985-08-15 FI FI853125A patent/FI853125A7/fi not_active Application Discontinuation
- 1985-08-16 DE DE19853529383 patent/DE3529383A1/de not_active Withdrawn
- 1985-08-16 BE BE1/011317A patent/BE903079A/fr not_active IP Right Cessation
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| DE60119515T2 (de) | Probiotica für verwendung als haustierfutter | |
| RU2336692C1 (ru) | Способ кормления гусей | |
| WO1994011492A1 (en) | Method of favorably modifying poultry intestinal microflora | |
| JPH10330274A (ja) | 鳥類用生菌剤の投与方法 | |
| CN102292430A (zh) | 单胃动物饲料 | |
| RU2652836C1 (ru) | Кормовая добавка с пробиотической активностью для сельскохозяйственных животных, птиц, лошадей и рыб | |
| WO1993014187A1 (en) | A bacterial strain of the species bacillus coagulans: its use as a probiotic agent | |
| RU2458526C1 (ru) | Пробиотическая кормовая добавка для сельскохозяйственных птиц и пушных зверей | |
| DE3781652T2 (de) | Zubereitung, geeignet fuer die behandlung von darmstoerungen. | |
| US5139777A (en) | Composition and method for improving the efficiency of ruminant feed utilization | |
| US5179020A (en) | Antibiotic resistant strain of lactobacillus acidophilus | |
| US5256425A (en) | Antibiotic resistant strain of lactobacillus acidophilus | |
| EP0063490B1 (en) | Lactation improvement method | |
| RU2062038C1 (ru) | Способ выращивания поросят | |
| RU2347807C1 (ru) | Штамм escherichia coli - продуцент лизина, способ получения кормовой добавки, содержащей данный штамм, композиция, полученная этим способом, и способ кормления моногастричных животных и птиц | |
| CS593085A3 (en) | Mixture of microbial cultures for improving efficiency of a fodder utilization for ruminants and process for preparing microbial cultures | |
| GB1603292A (en) | Animal feeds and feed additives containing orthosomycin antibiotic | |
| RU2739401C1 (ru) | Фитосинбиотическая кормовая добавка для телят | |
| RU2110927C1 (ru) | Биопрепарат "анта-1"-кормовая добавка для бройлерных цыплят | |
| CN109170201A (zh) | 一种含有果寡糖和百里香提取物的具有抑菌作用的饲料添加剂及生产方法 | |
| JPH08333263A (ja) | 動物成長促進剤 | |
| RU2342851C1 (ru) | Кормовая добавка для поросят подсосного периода | |
| RU1777772C (ru) | Способ кормлени цыпл т | |
| JPH06141784A (ja) | スベリヒユを含有する家畜、家禽用の飼料 | |
| Essary | Growth factor studies with all vegetable protein chick rations |