CS269959B2 - Method and agent of alpha-amylase determination - Google Patents
Method and agent of alpha-amylase determination Download PDFInfo
- Publication number
- CS269959B2 CS269959B2 CS844827A CS482784A CS269959B2 CS 269959 B2 CS269959 B2 CS 269959B2 CS 844827 A CS844827 A CS 844827A CS 482784 A CS482784 A CS 482784A CS 269959 B2 CS269959 B2 CS 269959B2
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- amylase
- glucosidase
- alpha
- determination
- substrate
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 13
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 title claims description 9
- 108090000637 alpha-Amylases Proteins 0.000 title description 12
- 102000004139 alpha-Amylases Human genes 0.000 title description 12
- 229940024171 alpha-amylase Drugs 0.000 title description 12
- 239000000758 substrate Substances 0.000 claims description 22
- 239000004382 Amylase Substances 0.000 claims description 19
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims description 16
- 102100024295 Maltase-glucoamylase Human genes 0.000 claims description 9
- 108010028144 alpha-Glucosidases Proteins 0.000 claims description 9
- -1 4-nitrophenyl- Chemical group 0.000 claims description 8
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 claims description 8
- 230000007017 scission Effects 0.000 claims description 8
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 7
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 claims description 6
- WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M Potassium chloride Chemical compound [Cl-].[K+] WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 4
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 claims description 4
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 claims description 4
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 claims description 3
- 239000001103 potassium chloride Substances 0.000 claims description 2
- 235000011164 potassium chloride Nutrition 0.000 claims description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M sodium chloride Inorganic materials [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 2
- 102000006995 beta-Glucosidase Human genes 0.000 description 9
- 108010047754 beta-Glucosidase Proteins 0.000 description 9
- 230000008033 biological extinction Effects 0.000 description 9
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 5
- 230000008859 change Effects 0.000 description 5
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 5
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 5
- 229910052736 halogen Inorganic materials 0.000 description 5
- 150000002367 halogens Chemical group 0.000 description 5
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 5
- BTJIUGUIPKRLHP-UHFFFAOYSA-N 4-nitrophenol Chemical compound OC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 BTJIUGUIPKRLHP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 4
- TWCMVXMQHSVIOJ-UHFFFAOYSA-N Aglycone of yadanzioside D Natural products COC(=O)C12OCC34C(CC5C(=CC(O)C(O)C5(C)C3C(O)C1O)C)OC(=O)C(OC(=O)C)C24 TWCMVXMQHSVIOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- PLMKQQMDOMTZGG-UHFFFAOYSA-N Astrantiagenin E-methylester Natural products CC12CCC(O)C(C)(CO)C1CCC1(C)C2CC=C2C3CC(C)(C)CCC3(C(=O)OC)CCC21C PLMKQQMDOMTZGG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 3
- 108010019077 beta-Amylase Proteins 0.000 description 3
- 229910052801 chlorine Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000000460 chlorine Substances 0.000 description 3
- PFOARMALXZGCHY-UHFFFAOYSA-N homoegonol Natural products C1=C(OC)C(OC)=CC=C1C1=CC2=CC(CCCO)=CC(OC)=C2O1 PFOARMALXZGCHY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N imidazole Natural products C1=CNC=N1 RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 125000000636 p-nitrophenyl group Chemical class [H]C1=C([H])C(=C([H])C([H])=C1*)[N+]([O-])=O 0.000 description 3
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- IQUPABOKLQSFBK-UHFFFAOYSA-N 2-nitrophenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1[N+]([O-])=O IQUPABOKLQSFBK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000013142 Amylases Human genes 0.000 description 2
- 108010065511 Amylases Proteins 0.000 description 2
- ZAMOUSCENKQFHK-UHFFFAOYSA-N Chlorine atom Chemical compound [Cl] ZAMOUSCENKQFHK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- 108010044467 Isoenzymes Proteins 0.000 description 2
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 2
- 235000019418 amylase Nutrition 0.000 description 2
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 2
- 125000002791 glucosyl group Chemical group C1([C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O1)CO)* 0.000 description 2
- 125000006501 nitrophenyl group Chemical group 0.000 description 2
- 229920001542 oligosaccharide Polymers 0.000 description 2
- 150000002482 oligosaccharides Chemical class 0.000 description 2
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 2
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 description 2
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 2
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 2
- FSRMLWKBCQFLJA-HTZQGQHSSA-N (2r,3r,4s,5s,6r)-2-[(2r,3s,4r,5r,6r)-6-[(2r,3s,4r,5r,6r)-6-[(2r,3s,4r,5r,6r)-6-[(2r,3s,4r,5r,6r)-6-[(2r,3s,4r,5r,6r)-6-[(2r,3s,4r,5r,6r)-4,5-dihydroxy-2-(hydroxymethyl)-6-(4-nitrophenoxy)oxan-3-yl]oxy-4,5-dihydroxy-2-(hydroxymethyl)oxan-3-yl]oxy-4,5-dihyd Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O[C@@H]2[C@H](O[C@H](O[C@@H]3[C@H](O[C@H](O[C@@H]4[C@H](O[C@H](O[C@@H]5[C@H](O[C@H](O[C@@H]6[C@H](O[C@H](OC=7C=CC(=CC=7)[N+]([O-])=O)[C@H](O)[C@H]6O)CO)[C@H](O)[C@H]5O)CO)[C@H](O)[C@H]4O)CO)[C@H](O)[C@H]3O)CO)[C@H](O)[C@H]2O)CO)[C@H](O)[C@H]1O FSRMLWKBCQFLJA-HTZQGQHSSA-N 0.000 description 1
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000954 2-hydroxyethyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])O[H] 0.000 description 1
- BOFRXDMCQRTGII-UHFFFAOYSA-N 619-08-9 Chemical compound OC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1Cl BOFRXDMCQRTGII-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WKBOTKDWSSQWDR-UHFFFAOYSA-N Bromine atom Chemical compound [Br] WKBOTKDWSSQWDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- PXGOKWXKJXAPGV-UHFFFAOYSA-N Fluorine Chemical compound FF PXGOKWXKJXAPGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000004366 Glucosidases Human genes 0.000 description 1
- 108010056771 Glucosidases Proteins 0.000 description 1
- XYZZKVRWGOWVGO-UHFFFAOYSA-N Glycerol-phosphate Chemical compound OP(O)(O)=O.OCC(O)CO XYZZKVRWGOWVGO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 1
- 208000016222 Pancreatic disease Diseases 0.000 description 1
- GSEJCLTVZPLZKY-UHFFFAOYSA-N Triethanolamine Chemical compound OCCN(CCO)CCO GSEJCLTVZPLZKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002250 absorbent Substances 0.000 description 1
- 230000002745 absorbent Effects 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 239000012190 activator Substances 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 1
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 1
- GDTBXPJZTBHREO-UHFFFAOYSA-N bromine Substances BrBr GDTBXPJZTBHREO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052794 bromium Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000001309 chloro group Chemical group Cl* 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 1
- 230000002183 duodenal effect Effects 0.000 description 1
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 1
- 229910052731 fluorine Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011737 fluorine Substances 0.000 description 1
- GPRLSGONYQIRFK-UHFFFAOYSA-N hydron Chemical compound [H+] GPRLSGONYQIRFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- PLXPTFQGYWXIEA-UHFFFAOYSA-N nitroformonitrile Chemical compound [O-][N+](=O)C#N PLXPTFQGYWXIEA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940031826 phenolate Drugs 0.000 description 1
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 210000003296 saliva Anatomy 0.000 description 1
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 1
- 239000012488 sample solution Substances 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000002798 spectrophotometry method Methods 0.000 description 1
- 230000007704 transition Effects 0.000 description 1
- 150000008495 β-glucosides Chemical class 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/34—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving hydrolase
- C12Q1/40—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving hydrolase involving amylase
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2334/00—O-linked chromogens for determinations of hydrolase enzymes, e.g. glycosidases, phosphatases, esterases
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2334/00—O-linked chromogens for determinations of hydrolase enzymes, e.g. glycosidases, phosphatases, esterases
- C12Q2334/10—O-linked chromogens for determinations of hydrolase enzymes, e.g. glycosidases, phosphatases, esterases p-Nitrophenol derivatives
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/81—Packaged device or kit
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Description
HENKEL EBERHARD dr., HANNOVER, DObABDJIAN ВARKEW dr., HELGER ROLAND dr., KLINK RAINER dr., WURZBURG UWE dr., DARMSTADT (DE)
MERCK PATENT GESELLSCHAFT MZT BESCHRÍNKTER HAFTUNGjDARMSTADT (DE)
Způsob a Činidlo ke stanovení oC-amylázy
57) Způsob stanovení (X — amylázy enzymatickým Štěpením substrátu <X—amylázy za přítomnosti α-glukosidázy a β — glukosidázy a měřením produktu Štěpení spočívá v použití 4-nitroíenyl-/3 , D-maltoheptaosidu substituovaného halogenem na íenylovém kruhu jako substrátu.
Činidlo obsahuje o,l až 3oo mmol/A 4-nítroíenyl-Д , D-maltoheptaosidu substituovaného halogenem na íenylovém kruhu lo2 až 2,5 . Ιο6 Ό/1 a-glukosidázy lo2 až lo5 U/1 β -glukosidázy lo až 2oo mm o 1/1 puíru a obvyklé aktivační činidlo. Způsob a činidlo ke stanovení — amylázy zajišťuje vyšší citlivost důkazu a -amylázy.
Vynález se týká způsobů a Činidla ke stanovení Ct-amylázy enzymatickým štěpením substituovaného nltrofe nýtového malloheptaoaldu, při kterém Je aglykon /í-glykoaidicky vázán· za přítomnosti ct-glukosidázy a 4-glukosidázy, a měření uvolněného aglykonu.
Stanovení aktivity Ц-amylázy v tělesných kapalinách. Jako například séru, plasmě, močí, dvonáctemíkové š&vě, slinách, má velký význam při klinlcko-chemické diagnostice pro zjištění onemocnění slinivky břišní.
Obvyklé metody pro zjištění α-amylázy spočívají v tom, Že se oC-amylázou odbourá škrob a vzniklé zlomky se stanoví spektroíotometričky. Hlavní nevýhoda těchto metod záleží v tom, že Škrob se muže Jako makromolekula špatně chrakterisovat a normalisovat. .
Novější metody používají proto Jako substráty určité oligosacharidy, které se odbourají za přítomnosti α-glukosldázy aŽ na glukózu, která se stanoví známým způsobem. Reakce Jsou však velice složité a Jsou rušeny endogenní glukózou. Podstatného zjednodušení bylo dosaženo použitím 4-nitroíenýtovaného oligosacharidu o délce řetězce 3 až 12 glukozových jednotek (G3 C12) jako substrátu pro <Z-amylázu. Další reakcí ct-glukosidázy se změří uvolnění p-nitroíenol (DE-OS 27 31 421). V USA patentu č. 4 145 527 jsou popsány substráty pro α-amylázu až se 6 glukozovými Jednotkami, při jejichž přípravě se vždy vyloučí směs úf- a Д-isomerů, která se použije společně s ct- a /З-glukosidázou. Z Anal. Chem. 3ol , 169 (198o) (Fresenisus Z.) Je však známé, že a /3—Isomery na rozdíl od α-lsomerů Jsou měřeny vesměs podstatně nižší aktivity.
Jestliže se použije Jako měřená ve stavu techniky známá veličina p-nitroíenol, nastanou další nevýhody : pKs. hodnota nitrofenolu Je kolem 7,o9; to znamená, že za optimálních podmínek pH pro průběh stanovení a-amylázy (6,8 až 7,1) Je pouze 5o % uvolněného p-nitrofenolu jako barevného fenolátového aniontů a výsledný měrný signál Je příslušně nízký. Kromě toho mohou změny koncentrace vodíkových lontů zkušebního systému, asi použitím kyselých nebo alkalických vzorků, Jako moči nebo dvanácterníkové štJivy, změnit dlsociační stupeň uvolněného p-nitroíenolu a tak zdánlivý molámí extinkčnf koeficient.
Úkolem vynálezu je dát к dispozici způsob a činidlo ke stanovení ď-amylázy, při kterém mohou být odstraněny uvedené nevýhody ve spojení se značným zvýšením citlivosti důkazu a-amylázy.
Neočekávaně bylo zjištěno, že tento úkol se může vyřešit použitím substituovaného 4-nitroíenyl-/b, D-maltoheptaosidu Jako substrátu. Rovněž neočekávaná je skutečnost, že ^-maltoheptaosidový derivát Je lepší substrát pro α-amylázu než příslušný α-iaomer, přičemž zejména z literatury byl známý opak.
Předmětem vynálezu je způsob stanovení α-amylázy enzymatickým štěpením substrátu a-amylázy za přítomnosti g-glukosidázy a ^-glukosldázy a měřením produktu štěpení, který spočívá v použití jako substrátu 4-nltroíenyl-/3 · D-maltoheptaosidu substituovaného halogenem na íenylovém kruhu.
Dále je předmětem vynálezu činidlo ke stanovení ct-amylázy, obsahující o,l až 3oo mmol/1 4-nitroíenyl-/3 · D-maltoh·ptaoaidu substituovaného halogenem na íenylovém kruhu, lo2 aŽ 2,5 . lo6 U/1 a -glukosldázy, lo2 až lo^ U/1 /3-glukosidázy, lo až 2oo mmol/1 pufru a obvyklé aktivační činidlo.
Zavedením elektrone gativních substituentů, t.J. substituentů в indukčním efektem, jako například nitroskupiny, kyanidové skupiny, halogenu, esterové skupiny, s výhodou halogenu jako ? chloru, bromu, fluoru, obzvláště chloru, do 4-nitroíenolového Jádra se přesune pKs- hodnota do -Jcyaelé oblasti. Výhodné místo substituce Je přitom v poloze 2 nitrofenolu. Tím se dosáhne další výhody, že substituovaný 4-nitrořenol uvolněný při reakci в glukosidázou ukazuje za jinak stejných podmínek zvýšení citlivosti indikátorové reakce· .
Výhodným substrátem podle vynálezu je 2-chlor—4-nitrofenyl-/3, D-maltoheptaosid. Ke štěpení /З-vázaného aglykonu při stanovení Ct-amylázy je zapotřebí, aby se kromě ct-glukosidázy použilo také /J-glukosidázy.
Za zkušebních podmínek by se měl očekávat ae substrátem podle vynálezu měrný signál, který je podle poměru extinkčních koeficientu halogen-nítrofenolu a 4-nitrofenolu při 4o5 nm o určitý íaktor větší. Neočekávaně Je však měrný signál značně zvýšen, což dále zvyšuje citlivost stanovení ct-amylázy podle vynálezu. Obr. 1 ukazuje při stanovení α-amylázy srovnání časových křivek rozkladu 2-chlor-4-nitrofenyl-/$ , D-maltoheptaosidu ( I ) a příslušné a,-formy a
4-nltroíenyl-ťX. D-maltoheptaosidu ( III ). Přitom je zřejmé, že například s 4-nltroíenyl-cc» D-maltoheptaosidem se dosáhne změny extinkce o,o24 za minutu; substitucí chlorem ve íenylovém kruhu tato hodnota stoupne na o,o36; přechodem na β-formu se zvýší extinkce na hodnotu vyšší než o,o75, Uzn. o faktor 3. Kromě zřetelného zvýšení absorpce u substrátu podle vynálezu je možno zjistit v případě 2-chlor-4-nÍtrofenyl-d, D-maltoheptaosidu nelineární průběh křivky.
Oba isoenzymy Ct-amylázy slinivky břišní a ct-amylázy slin mají vůči makromolekulárním substrátům různou aktivitu. Neočekávaně ukazují tyto isoenzymy se substráty podle vynálezu stejnou aktivitu.
Při stanovení Ct-amylázy se substráty štěpí cž-amylázou na malé jednotky (C 3, C 4), které se odbourají a-glukosidázou aŽ na /З-glukosid. Působení /J-glukosidázy vede konečně ke štěpení substituované nitroíenylové skupiny, která slouží jako měřená veličina.
Koncentrace substrátu podle vynálezu v testu je s výhodou 2 až lo mmol/1. Koncentrace Ct-glukosidázy je s výhodou v rozmezí 8xlo U/l, koncentrace /3-glukosidázy je s výhodou v rozmezí 2,5xlo^ Ό/1.
К provedení způsobu podle vynálezu jsou zapotřebí pufrové látky, které mohou pokud možno udržet optimální podmínky pH pro průběh reakce ct-amylázy, t.zn. hodnotu pH v rozmezí 5 až 9, s výhodou 6,5 až 7,1. Vhodným pufrem je například fosfátový pufr, N-(2-hydroxyethyl)- piperazin-N-2-ethansulfonová kyselina (HEPES-pufr), imidazol, triethanolamin, glycerin fosfát, s výhodou fosfátový pufr. Koncentrace pufru je s výhodou 5o mmol/1.
Kromě uvedených složek obsahuje činidlo podle vynálezu obvyklý aktivační prostředek, jako chlorid sodný nebo' draselný.
Ke stanovení ct-amylázy se přidá roztok činidla sestávající ze substrátu, Ot-glukosidázy, /3 -glukosidázy, pufru a aktivačního prostředku к roztoku vzorku a například při 3o °C se stanoví extinkce při 4o5 nm.
Činidlo podle vynálezu je vhodné také ve formě savého materiálu impregnovaného tímto činidlem nebo vpracované do fdlií jako Indikátor ke stanovení ct-amylázy.
P ř í< »k .1 a d 1
Stanovení (X-amylázy
Připraví se složení činidla, které obsahuje na» l ml zkušebního objemu následující složky :
činidlo koncentrace
2-chlor-4-nitrofenyl-/3, D—maltoheptaosid Ct — glukosidáza /3 —glukosidáza fosfátový pufr (pH 6,8) chlorid· sodný mMol/t
8o V/ml lo U/ml o,o5 Mol/1 o,o5 .Mol/t
P odmín re л Г:
Teplota : 3o °C
Vlnová délka : 4o5 nm
Provedení testu : 1 ml Činidla 4 lo /ul vzorku
Časová křivka rozkladu s tímto Činidlem je znázorněna ve srovnání s činidlem bez substituce halogenem ve fenylovém kruhu na obr· 1.
Ve srovnání s křivkou lil (substrát : 4-nitrofeny 1-4» D-maltoheptaosld) ukazuje přímka 1 (substrát : 2-chlor-4-nÍtroíenyI/5, D-maltoheptaosid) zřetelné zvýšení změny absorpce (jJ E/min о,об).
Příklad 2
Stanovení d-amylázy, pH—závislost absorpce
Za stejných podmínek Jako v příkladu 1 se měří extlnkce dvou reagenčních roztoků upravených na hodnotu pH 7,1, ze kterých Jeden obsahuje 2-chlor-4-nitrofenol, druhý 4-nitrofenol. Potom se postupně nepatrně zvýší hodnota pH a stanoví se odchylka extinkce. Výsledek ukazuje obr· 2
Nepatrné stoupání horní přímky (reagenční roztok s 2-chlor-4-nítrofenoiem) ukazuje» že extinkce je méně silně ovlivněna změnou hodnoty pH neŽ při použití Činidla se 4-nltroíenolem (spodní přímka).
Příklad 3
Stanovení cl-amylázy, srovnání čistého substrátu ( 2-chior-4-nltrofenyt-/$, D-maltoheptaosidu) se směsí d- a Д-formy·
Připraví se stejné složení činidla Jako v příkladu 1 s rozdílem, že substrát sestává ze stejných dílů CC- a ZJ-formy. Hodnota změny extinkce leží při použití této směsi přesně mezi hodnotami pro čisté isomery·
Claims (2)
1.
Způsob stanovení Д-amylázy enzymatickým štěpením substrátu α-amylázy za přítomnosti -a-glukosldázy a Д-glukosldázy a měřením produktu štěpení, vyznačený tím», že se jako substrát použije 4-nitrofenyl-/3, D-maltoheptaosld substituovaný halogenem na fenylovérr. kruhu·
2.
Způsob podle bodu 1, vyznačený tím, že se Jako substrát použije 2-chlor-4-nltrofenyl-/3, D-m altohe ptaosid·
3.
Činidlo ke stanovení Λ-amylázy podle bodu 1 nebo 2, vyznačené tím, že obsahuje o,l až 3oo mmol/1 4-nltroíenyl-$, D-maltoheptaoeidu substituovaného halogenem na fenylovém kruhu, lo2 aŽ 2.5 . lo6 U/1 a-glukosidázy, lo2 až lo5 U/1 Д —glukosidázy, lo až 2oo mmol/t pufru a • aktivační Činidlo, s výhodou chlorid sodný nebo draselný.
2 výkresy
CS 269959 D2
OBR. 1
LD СЭ
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE19833323245 DE3323245A1 (de) | 1983-06-28 | 1983-06-28 | Verfahren und reagenz zur bestimmung von (alpha)-amylase |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CS482784A2 CS482784A2 (en) | 1989-09-12 |
| CS269959B2 true CS269959B2 (en) | 1990-05-14 |
Family
ID=6202584
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS844827A CS269959B2 (en) | 1983-06-28 | 1984-06-25 | Method and agent of alpha-amylase determination |
Country Status (7)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US4698300A (cs) |
| EP (1) | EP0133329B1 (cs) |
| JP (1) | JPS6062999A (cs) |
| CS (1) | CS269959B2 (cs) |
| DE (2) | DE3323245A1 (cs) |
| IL (1) | IL72226A (cs) |
| ZA (1) | ZA844952B (cs) |
Families Citing this family (20)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE3413118A1 (de) * | 1984-04-06 | 1985-10-24 | Miles Laboratories, Inc., Elkhart, Ind. | Analysenverfahren und mittel zum nachweis esterolytischer und/oder proteolytischer enzyme |
| JPS6128400A (ja) * | 1984-07-19 | 1986-02-08 | Toyobo Co Ltd | α−アミラ−ゼ活性測定法および測定用試薬 |
| US4649108A (en) * | 1984-07-26 | 1987-03-10 | Genzyme Corporation | Alpha amylase assay |
| JPS61112092A (ja) * | 1984-11-07 | 1986-05-30 | Meiji Seika Kaisha Ltd | 新規グルコサミン誘導体及びこれを基質として用いるＮ−アセチル−β−Ｄ−グルコサミニダ−ゼの活性測定試薬 |
| DE3525926A1 (de) * | 1985-07-19 | 1987-01-29 | Boehringer Mannheim Gmbh | Verfahren und reagenz zur spezifischen bestimmung von pankreas-alpha-amylase |
| EP0259521A1 (en) * | 1986-09-10 | 1988-03-16 | Akzo N.V. | Test reagent for amylase determination |
| US5158872A (en) * | 1986-10-07 | 1992-10-27 | Hoechst Celanese Corporation | Aromatic substituted glycoside |
| US4963479A (en) * | 1986-10-07 | 1990-10-16 | Hoechst Celanese Corporation | Reagent system for an alpha-amylase assay containing aromatic substituted glycoside |
| JPH0612999B2 (ja) * | 1986-11-17 | 1994-02-23 | 関東化学株式会社 | 塩素イオン定量用試薬 |
| US5229270A (en) * | 1986-11-17 | 1993-07-20 | Kanto Kagaku Kabushiki Kaisha | Reagent for the determination of chlorine ion |
| IL85581A (en) * | 1987-05-21 | 1992-05-25 | Technicon Instr | Substrate for beta-galactosidase comprising derivatives of 4-nitrophenyl-beta-d-galactopyranoside and beta-galactosidase immunoassay containing said substrate |
| AU621245B2 (en) * | 1989-10-17 | 1992-03-05 | Boehringer Mannheim Gmbh | Hydrolase substrates, a process for the preparation thereof and agents containing them |
| JP2886249B2 (ja) * | 1990-03-14 | 1999-04-26 | 日本食品化工株式会社 | ガラクトシル―マルトオリゴ糖誘導体、その製造法およびα―アミラーゼ活性測定方法 |
| CA2039564A1 (en) * | 1990-04-10 | 1991-10-11 | James R. Rasmussen | Oligosaccharide compounds and preparation thereof |
| DE4021063A1 (de) * | 1990-07-03 | 1992-01-09 | Boehringer Mannheim Gmbh | Neue ss-galactosidase-substrate fuer den cedia |
| JP2770891B2 (ja) * | 1991-06-26 | 1998-07-02 | キッコーマン株式会社 | マルトオリゴシド誘導体、これを有効成分とするα‐アミラーゼ活性測定用試薬及びこれを用いたα‐アミラーゼ活性の測定方法 |
| JP3075377B2 (ja) * | 1991-11-06 | 2000-08-14 | 東洋紡績株式会社 | α−アミラーゼ活性の測定法およびα−アミラーゼ活性測定用試薬 |
| US5766872A (en) * | 1995-11-20 | 1998-06-16 | Dade International Inc. | Method for eliminating hemolysis interference in an amylase analysis |
| US20080050451A1 (en) * | 2006-06-16 | 2008-02-28 | Mabry Helen C | Methods for assessing dehydration and shock, assays and kits for the methods |
| WO2010090810A2 (en) * | 2009-02-05 | 2010-08-12 | Hydradx, Inc. | Diagnostic device and method |
Family Cites Families (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4145527A (en) * | 1976-07-13 | 1979-03-20 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Nitro aromatic glycosides |
| US4102747A (en) * | 1977-07-28 | 1978-07-25 | American Hospital Supply Corporation | Amylase determination |
| DE2755803A1 (de) * | 1977-12-14 | 1979-06-21 | Boehringer Mannheim Gmbh | Verfahren und reagens zur bestimmung von alpha-amylase |
| AT362526B (de) * | 1977-09-13 | 1981-05-25 | Boehringer Mannheim Gmbh | Verfahren und reagens zur bestimmung von alpha- -amylase |
| US4233403A (en) * | 1978-02-27 | 1980-11-11 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Amylase assay |
| US4225672A (en) * | 1979-02-27 | 1980-09-30 | Hall Leo M | Method for producing maltooligosaccharide glycosides |
| DE3328616A1 (de) * | 1983-08-08 | 1985-02-28 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim | Oligoglucosidderivate |
-
1983
- 1983-06-28 DE DE19833323245 patent/DE3323245A1/de not_active Withdrawn
-
1984
- 1984-06-15 EP EP84200866A patent/EP0133329B1/de not_active Expired - Lifetime
- 1984-06-15 DE DE8484200866T patent/DE3481432D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1984-06-25 CS CS844827A patent/CS269959B2/cs unknown
- 1984-06-26 IL IL72226A patent/IL72226A/xx unknown
- 1984-06-28 JP JP59132172A patent/JPS6062999A/ja active Granted
- 1984-06-28 ZA ZA844952A patent/ZA844952B/xx unknown
- 1984-06-28 US US06/625,482 patent/US4698300A/en not_active Expired - Lifetime
-
1987
- 1987-08-04 US US07/081,380 patent/US4857640A/en not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH059069B2 (cs) | 1993-02-03 |
| DE3481432D1 (de) | 1990-04-05 |
| EP0133329A3 (en) | 1987-10-14 |
| IL72226A (en) | 1987-12-31 |
| US4857640A (en) | 1989-08-15 |
| EP0133329B1 (de) | 1990-02-28 |
| US4698300A (en) | 1987-10-06 |
| CS482784A2 (en) | 1989-09-12 |
| DE3323245A1 (de) | 1985-01-10 |
| JPS6062999A (ja) | 1985-04-11 |
| IL72226A0 (en) | 1984-10-31 |
| EP0133329A2 (de) | 1985-02-20 |
| ZA844952B (en) | 1985-02-27 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CS269959B2 (en) | Method and agent of alpha-amylase determination | |
| FI61916C (fi) | Foerfarande och reagens foer bestaemning av alfa-amylas | |
| JPS6163299A (ja) | アルフア・アミラ−ゼの検出法 | |
| US4000042A (en) | Diagnostic reagent for the determination of amylase | |
| CS228127B2 (en) | Reagencni cinidlo | |
| Dupuy et al. | Rapid determination of alpha-amylase activity by use of a new chromogenic substrate. | |
| RU2122740C1 (ru) | Способ определения мочевины в биологических жидкостях и набор реактивов для его осуществления | |
| Rehak et al. | Calorimetric enzymic measurement of uric acid in serum. | |
| Asp | Improved method for the assay of phenylglycosidase activity with a 4-aminoantipyrine reagent | |
| EP0260414B1 (en) | Method of differential assay for alpha-amylase isozymes and a kit for the same | |
| US5766872A (en) | Method for eliminating hemolysis interference in an amylase analysis | |
| EP0243125B1 (en) | Method of measuring phenol and alpha-naphthol, and method of measuring the activity of enzymes | |
| Kovar et al. | Determination of cholesterol in sera | |
| KR920000058B1 (ko) | 가수분해효소 활성을 갖는 물질들의 검출방법 및 약품 | |
| US4983512A (en) | Reagent for determination of acid phosphatase | |
| Ungerer et al. | An enzymatic assay of inorganic phosphate in serum using nucleoside phosphorylase and xanthine oxidase | |
| US5260428A (en) | Agent for the detection of substances with hydrolase activity | |
| IE47123B1 (en) | Analytical device | |
| US6818415B2 (en) | Sodium activation of amylase | |
| JP2000189194A (ja) | α―アミラ―ゼ活性測定試薬及び測定方法 | |
| JPH02276597A (ja) | 体液中のカルシウム測定方法 | |
| Parviainen et al. | Serum amylase and isoamylase assay on the Hitachi 705 automatic clinical chemical analyzer | |
| EP0886139A1 (en) | A reagent for measurement and a measurement method | |
| Bais | Evaluation of an amylase method utilizing p-nitrophenyl glucosides as substrates | |
| JPH1014597A (ja) | 体液中のカルシウムイオン測定用試薬組成物および測定方法 |