CS241491A3 - Novel conjugate of therapeutically usable compounds with a carrier - Google Patents

Novel conjugate of therapeutically usable compounds with a carrier Download PDF

Info

Publication number
CS241491A3
CS241491A3 CS912414A CS241491A CS241491A3 CS 241491 A3 CS241491 A3 CS 241491A3 CS 912414 A CS912414 A CS 912414A CS 241491 A CS241491 A CS 241491A CS 241491 A3 CS241491 A3 CS 241491A3
Authority
CS
Czechoslovakia
Prior art keywords
formula
compound
group
conjugate
iii
Prior art date
Application number
CS912414A
Other languages
English (en)
Inventor
Francesco Angelucci
Laura Bersani
Michele Caruso
Marina Ripamonti
Daniela Ruggieri
Antonino Suarato
Original Assignee
Erba Carlo Spa
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Erba Carlo Spa filed Critical Erba Carlo Spa
Publication of CS241491A3 publication Critical patent/CS241491A3/cs

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H15/00—Compounds containing hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals directly attached to hetero atoms of saccharide radicals
    • C07H15/20—Carbocyclic rings
    • C07H15/24—Condensed ring systems having three or more rings
    • C07H15/252—Naphthacene radicals, e.g. daunomycins, adriamycins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
    • A61K47/58—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. poly[meth]acrylate, polyacrylamide, polystyrene, polyvinylpyrrolidone, polyvinylalcohol or polystyrene sulfonic acid resin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
    • A61K47/64—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A61K47/6807—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug or compound being a sugar, nucleoside, nucleotide, nucleic acid, e.g. RNA antisense
    • A61K47/6809—Antibiotics, e.g. antitumor antibiotics anthracyclins, adriamycin, doxorubicin or daunomycin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6883—Polymer-drug antibody conjugates, e.g. mitomycin-dextran-Ab; DNA-polylysine-antibody complex or conjugate used for therapy
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6889—Conjugates wherein the antibody being the modifying agent and wherein the linker, binder or spacer confers particular properties to the conjugates, e.g. peptidic enzyme-labile linkers or acid-labile linkers, providing for an acid-labile immuno conjugate wherein the drug may be released from its antibody conjugated part in an acidic, e.g. tumoural or environment
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
    • C07H19/02—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing nitrogen
    • C07H19/24—Heterocyclic radicals containing oxygen or sulfur as ring hetero atom

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • External Artificial Organs (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Saccharide Compounds (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)

Description

1
Nový konjugát tetrapeuticky užitečných látek s nosičem
Oblast techniky
Vynález se týká nových konjugátů terapeuticky užitečnýchantracyklinů s nosiči, jako jsou například polyklonální a mo-noklonální protilátky nebo bílkoviny nebo peptidy přírodníhonebo syntetického původu; vynález se také týká způsobu jejich,přípravy, farmaceutických prostředků, které je obsahují, a je-jich použití k ošetřování určitých nádorů u lidí. Vynález setaké týká nových antracyklinových derivátů a způsobu jejichpřípravy.
Dosavadní stav techniky V posledních letech byly syntetizovány četné vysoce cy-totoxické antracyikliny. Například byly syntetizovány antracykvliny, mající morfolinové jádro nebo substituované morfolinovéjádro vázané v poloze C-5* cukrového podílu a vykazující slib-nou protinádorovou účinnost na experimentálních nádorech /Bio-active molecules, Bioaktivní molekuly/ str. 55 až 101, svazek6, vydavatel J. William lown, Elveiser, 1988/.
Podstata vynálezu
Vynález se týká nových linkerů pro uvolňování terapeu-ticky účinných látek z bioaktivních prostředků, které vyka-zují zlepšenou terapeutickou účinnost drog a jejich sníženétoxické působení po podání lidem. Především se bioaktivnímiprostředky míní drogy mající primární nebo .sekundární hydro—xylové skupiny a patřídí do terapeutických tříd, jako jsouantibiotika, protinádorové a protivirové sloučeniny, kon-jugovaných s nosičem, jako jsou protilátky reaktivní s vy-branou populací buněk, nebo jako jsou bílkoviny, peptidy ne-bo polymery přírodního nebo syntetického původu reaktivnís receptorovými tkáněmi.
Každá droga, obsahující alespoň primární nebo sekundární hyd-roxylovou skupinu, je kovalentňě vázána na nosič prostřed-nictvím linkerové větve /"linker arm"/, přičemž je vázána tak,že se linkerová větev váže prostřednictvím kyselinově citlivéacetalické skupiny na primární nebo skundární hydroxylovou po-lohu, Kyselino citlivá acetalická vazba bioaktivního činidlapodle vynálezu umožňuje uvolňování účinné drogy v kyselém vněj-ším nebo vnitřním prostředí receptorové tkáně.
Podstatou vynálezu jsou konjugáty obecného vzorce I
/A - 0 - W - Z/ - T cl /1/ kde znamená A-0- zbytek drogy obecného vzorce A-O-H, přičemž -0-H zna-mená primární nebo sekundární hydroxylovou skupinu, a celé číslo 1 až 30,
W skupinu obecného vzorce II
/11/ kde znamená b celé číslo 1 až 4» B alkylenovou skupinu s 1 až 3 atomy uhlíku, E1 a S2 vždy na sobě nezávisle atom vodíku, ' - alkylovou skupinu, fenylovou skupinu nebosubstituovanou fenylovou skupinu nebo atomhalogenu Z vloženou skupinu /"spacer group"/, T nosičový podíl. S výhodou znamená a číslo 1 až 5» B vhodně znamená sku-pinu vzorce -/CH^g—· Pokud symboly R·^ a R2 znamenají atom ha-logenu, je to zpravidla atom chloru, bromu nebo jodu a alkylo—vo skupino . s 1 až 4 atomy uhlíku je skupina methylová neboethylová. Penylová skupina může být substituována atomem ha-logenu nebo alkylovou skupinou, přičemž atom halogenu a alky-lová skupina jsou shora blíže specifikovány. Výhodnou skupi- nou Z je: i/ -NH- , ii/ -NH-/GH2/c-S-S-, kde znamená £ celé číslo 1 až 4» iii/ -NH-/C/d-N-CH- , kde zamená a/ d nulu b/ d 1 a C skupinu -NH-C0-/CH2/e-0-/GH2/e- , kde zname-ná e celé číslo 2 až 4» c/ d 1 až 4 a C znamená skupinu , kde znamená f 1 nebo 2, nebo d/ £ celé číslo A až ( a C znamená skupinu -CH2- ±v/ skupinu vzorce -NH-/C/^-NH-CO-, kde má C shora uvedenývýznam a d má rovněž shora uvedený význam, v/ skupinu obecného vzorce -/L/-NH- , kde znamená D skupinuobecného vzorce -NH-/CH2/g-C0- , kde znamená g celé číslo2 až 6, vi/ skupinu obecného vzorce -/E/-CO-, kde znamená /e/ skupinuvzorce -NH-/CH9/ -NH- , kde znamená g celé číslo 2 až 6, vii piperazinylkarbonylovou skupinu vzorce
^ch2 -
CHP
X - CO - ch2
Ve shora uvedeném obecném vzorci I znamená droga A-O-H s vý-hodou protinádorově účinnou látku ze souboru zahrnujícího antra-cykliny, jako je například doxorubicin, jeho 3*-deamino-3*-morfolinylové deriváty, kde je morfolinový kruh popřípadě sub-stituován v poloze 2” alkoxyskupinami, například alkoxyskupinamis 1 až 4 atomy uhlíku; pyrimidinové analogy, jako je například5-fluordeoxyuridin nebo arabinofuranosyleytosin /cytarabin/jderiváty vinca alkaloidů, jako je například 4-desacetylvinyl-blastin; a další protinádorově účinná činidla, jako je napřík-ladjpodofyllotoxin a illudiny. Nebo může být drogou obecnéhovzorce A-O-H antivirové činidlo, jako je například 3z-azido-3'-deoxythymidin /AZT/, bromvinyldeoxyuridin /BVEU/, 9-/""/2-hydroxyethoxy/methyl_7guanin /gancyclovir/ nebo antibiotiku^,například thienamycin nebo nové penem deriváty, například/5R, 6S/-karbamoyloxymethyl-6-/~/lR/-hydroxyethyl _/-2-penem- 3-karboxylová kyselina a acetoxymethyl-/5R»6S/-2-karbamoyloxymethyl-6-/”/lR/-hydroxyethyl_7-2-penem-3-karboxylát·
Pokud je podíl A-0- odvozen od antracyklinu A-O-H, mátento podíl obecný vzrec
kde znamená E10 atom vodíku nebo hydroxyskupinu nebo methoxyskupinu
En a E^g atom vodíku a druhý ze symbolů hydroxy skup inu neboR.^ atom vodíku nebo jodu a R^g atom vodíku, R^5 aminoskupinu nebo atom dusíku včleněný do morfoli- nového kruhu.
Morfolinovým kruhem může být například morfolinoskupina/MO/, 3-kyano-4-morfolinoskupina /CM/ nebo 2-methoxy-4-morfo-linoskupina /MM/, přičemž je atom dusíku vázán v poloze C-3*například
och5 /MO/ /CM/ /MM/
Nosičový podíl T je zpravidla vybrán ze souboru zahrnují— - 5 - čího polyklonální protilátku nebo její fragment obsahujícíantigenovou vazebnou polohu, schopnou vázat k nádoru apřipo-jený antigen; monoklonální protilátku nebo její fragment, ob-sahující antigenovou vaznou polohu, schopnou vázat antigens výhodou nebo selektivně na populaci nádorových buněk; pep-tid nebo bílkovinu schopnou výhodné nebo selektivní vazby nanádorové buňky; a polymerní nosič.
Nosičový podíl, s výhodou nosičový podíl odvozený od lát-ky obecného vzorce kde znamená x počet aminoskupin dostupných pro kondenzaci,může být volen ze souboru zahrnujícího polyklonální protilát-ky, které směřují k antigenům spojeným s nádorem; nebo z mo-noklonálních protilátek vážících se na antigeny s výhodou ne-bo selektivně na populacích nádorových buněk; nebo přírodnínebo rekombinantní peptidy nebo bílkoviny nebo růstové fakto-ry, vázající se výhodně nebo selektivně na nádorové buňky;a přírodní nebo systetické nosiče polymerní, jako je pólylysin.Nosičový podíl může být také odvozen od shora zmíněných podí-lů nosičů, jako jsou například 3?ab nebo P/ab*/2 fragmentyprotilátek, nebo od podílů shora uvedených peptidů nebo bílko-vin, získaných rekombinantní DNA technikou.
Jakožto representativní příklady shora uvedených proti-látek a jako případně možná terapeutická použití se uvádějí! - fl-nti-T-hunkové protilátky například protilátka T101 /Noys-ton, I. a kol., J. Immunol., 1980, 125, str. 725/, - anti-CI)5 protilátka jako protilátka 0ET1 /Ortho/ ATCC CB.L8000 /chronická lyfocytová leukemie/, -anti-transferrin receptorová protilátka například protilát-ka 0KT9 /Ortho/ ATCC CRL 8021 /vaječníkové a jiné nádory/, - anti—melanoma protilátka například protilátka Mab 9·2.27/Bumol, T.P. a kol., Proč. Hati. Acad. Sci. USA 1982, 79,str. 1245/ /melanomas/ - anti-karcinoma merkerová protilátka například-anti-CEA 1116 NS-3d ATCC CRL 8019 -anti oi-fetoprotein OM 5-1.1 ATCC HB 154 /také hepatomas/, - 791T/56 /Embleton, M.J. a kol., Br. J. Cancer 1981, 45,str. 582/ /také osteogenní sarkom/, - anti-ovarian karcinome /karcinom vaječníků/ protilátkanapříklad protilátka OTB 5 ATCC HB 9147ř - protilátka proti carcinoma prsu, jako protilátka HMGP an-tigen /Aboud-Pirak E. a kol., Cancer Res., 1988, 48,str. 5188/, - protilátka proti karcinoma močového měchýře jako proti-látka 1G5.10 /Yu,D.S. a kol., Eur. J. Utol. 1987, 13,str. 198/
Jakožto representativní příklady shora uvedených růstovýchfaktorů a bílkovin přírodního nebo rekombinantního původu se uvá-dějí PGP, EGP, PDGP, TGP- , ^-MS, interleukiny, interferony,TNE, melanotropin /MSH/·
Nosičový podíl, odvozený od látky, která může mít obecný vzorec T-/SH/Xl kde znamená xl počet thiolových skupin dostupných pro kondenzaci,je s výhodou odvozen od thiolované polyklonálníi„ nebo mono-klonální protilátky, získané za použití například R-sukeinimidyl-S-acetylthioacetátu /ŠATA/, N-sukcinimidyl-5-/2-pyridylthio/-propionátu /SPDP/, D,L-homocysteinthiolaktonu, N-acetyl-D,L-homocysteinthiolaktonu nebo 2-iminothiolaktonu.
Nosičový podíl, odvozený od látky obecného vzorce t-/0H0/x2 kde znamená x2 celkový počet formylových skupin dostupných prokondenzaci, je s výhodou odvozen od polyklonálních nebo mono-klonálních protilátek majících karbohydrátový módil, s výhodouv oblasti Pc, selektivně oxidovaný na aldehydové skupiny che-mickými nebo enzymatickými způsoby, jak je popsáno v americ-kém patentovém spise číslo 4 671958. Nosič shora uvedeného 0-becného vzorce mů$e být také odvozen formylací nebo oxidacívhodných polymerních nosičů nebo oxidací na aldehydové skupiny karbohydrátových zbytků, vhodných glykoproteinů.
Nosičovy podíl, odvozený od látky obecného vzorce t-/coo^/x5 kde znamená x3 celkový počet karboxylových skupin dostupnýchpro kondenzaci, je s výhodou odvozen od polyaspartové nebo po-lyglutamové kyseliny nebo od rozpustných a biologicky odboura-
HMPA kde znamená /Σ/ -Gly-Phe-Leu-Gly; -ΝΗ-ΖΟΗ^/^-θΟ- /P/ OH, O-C6H4pNO2 η 1 až 5 x/y 90/10 ♦ 95/5 mol/mol % molekulová hmotnost 10000 až 40000, s výhodou 12000 až 20000/viz: J. Kopeček, "Biodegradation of polymers for biomedicaluse", Biologická odbouratelnost polymerů pro biolékařské ú-čely, IUPAO Macromolecules H. Benoit & P. Rempp, , Ed.: str.505 až 520 /1982/ Pergamon, press. Oxford, Anglie/ nebo odpolyaminokyselinových kopolymerů jako je poly/GluNa,Ala,Tyr/ nebo 25000 až 50000 daltonů, které jsou užitečné jakožtonosiče drog pro plicní tkán /R. Duncan a kol., Journal of Bioactive and Compatible Polymers, sv. 4, červenec, 1989/ nebood karboxylových skupin, přirozených, na monoklonálních nebopolyklonálních protilátkách nebo chemicky zavedených zpraco-váním protilátek biíunkčními anhydridy /například maleinan-hydridem/· struktura póly/GluHa,Aia,!yr/kopolymeru
I OH, 1
I OH, OH, H CH, 1t C00“Ka*
OH přičemž x : y : z - 1 : 1 i 1
Vynález se také týká způsobu přípravy konjugátu obecnéhovzorce I, při kterém se kondenzuje derivát obecného vzorce III A - 0 - W - OH /111/ kde A-0- a W mají shora uvedený význam, s látkou nebo s látka-mi, která je nebo které jsou schopny vytvářet skupinu Z a no-sičový podíl T v konjugátu obecného vzorce I, čímž se vytvoříkonjugát obecného vzorce I.
Kondenzace se může provádět prostřednictvím aktivovanéhoderivátu, jako je například směsný anhydrid, azid nebo akti-vovaný ester derivátu obecného vzorce III nebo přímou reakcív přítomnosti kondenzačního činidla, například dicyklohexyl-ka-rhodiimidnŤ Vhodný způsob zahrnuje převádění deriváttpbec-ného vzorce III na aktivovaný derivát obecného vzorce IV kde A—O— a W mají shora uvedený význam a kde znamená 1 aktivač-ní skupinu pro vytvoření amidické vazby, například lí-oxy3uk-cinimidoskupinu, její ve vodě rozpustný derivát N-oxysulfo-sukcinimidoskupinu nebo 2,4-dinitrofenoxyskupinu, 2,3»4>5,6-pentafluorfenoxyskupinu nebo t-butoxykarbonyloxyskupinu a i/ kondenzaci získané sloučeniny obecného vzorce IV se slou-čeninou obecného vzorce t-/nh2/x shora definovanou za získání bioaktivního činidla obecnéhovzorce I majícího alespoň jednu amidickou vazbu nebo ii'/ kondenzaci sloučeniny obecného vzorce IV s thiolovým de-rivátem vzorce
například s 2-aminoethanthiolem, přičemž c znamená 2 a kon-cenzací získané sloučeniny obecného vzorce V A-0-W-HH-/CH2/g-3H /V/ kde A-Ο-, W a c mají shora uvedený význam, se sloučeni-nou obecného vzorce T-/SH/Xl shora definovanou za vzniku konjugátu obecného vzorce I s alespoň jednou sulfidickou vazbou nebo
iii/ reakci sloučeniny obecného vzorce IV s hydrazinem, s dihyd*razidovým derivátem kyseliny jantarové nebo kyseliny adi-pové nebo s diaminosloučeninou a kondenzaci vzniklé slou-čeniny obecného vzorce VI A-O-W-ÍÍH-/C/d-NH2 kde A-Ο-, W, C a d mají shora uvedený význam, se slouče-ninou obecného vzorce t-/gho/x2 shora definovanou za vzniku bioaktivního činidla obecné-ho vzorce I majícího alespoň jednu oximovou vazbu·
Podle výhodného způsobu /iv'/ se kondenzuje sloučenina - 10
obecného vzorce VI, shora uvedená, se sloučeninou obecnéhovzorce VII T-/oo-i7y /VII/ která se získá reakcí zahrnující nosič obecného vzorce
T-/COOH/xJ shora definovaný a kde znamená y celé číslo 1 až 50 a zname-ná celkový počet aktivovaných karboxylových skupin, T znamenánosičový podíl v získaném konjugátu obechého vzorce I a L*znamená hydroxyskupinu nebo aktivační skupinu pro vytvoření a-midové vazby, popřípadě v přítomnosti kondenzačního činidla prozískání konjugátu obecného vzorce I, ve které se nezreagovanépopřípadě přítomné aktivované karboxylové skupiny mohou nechá-vat zreagovat s farmaceuticky vhodným aminem, například s 1-a-mino-2-propano1em·
Podle jiného vhodného způsobu /v*/ se kondenzuje sloučeni-na obecného vzorce IV s aminovým derivátem obecného vzorce
h2k - /ch2/ -COOH
kde má g shora uvedený význam, čímž se získá derivát obecnéhovzorce VIII A-0-W-/D/-0H /VIII/
kde A-0- , W a L mají shora uvedený význam; popřípadě se pře-vádí sloučenina shora uvedeného obecného vzorce VIII na akti-vovaný derivát obecného vzorce IX A - 0 - W - /D/ - L /IX/ kde . A.-0- , W, /d/ a L mají shora uvedený význam a získaná sloučenina obecného vzorce IX nebo sloučenina obecného vzorceVIII se kondenzuje v přítomnosti kondenzačního činidla se slou-čeninou obecného vzorce
T - /NH2/X shora definovanou, za vzniku bioaktivní látky obecného vzorce I.Podle jiného způsobu /vi7 se nechává reagovat sloučenina 11 - obecného vzorce IV a aminoderivátem obecného vzorce H2B - /CH2/g - NH2 kde g má shora uvedený význam, za vzniku derivátu obecnéhovzorce Σ A - 0 - W - /E/ - H A/ kde /E/ má shora uvedený význam, nebo
/vii*/ se nechává reagovat sloučenina obecného vzorce IV s pi-perazinem za vzniku sloučeniny obecného vzorce XI A- 0- » -/piperazin/ - H /XI/ a sloučenina obecného vzorce X nebo XÍ se kondenzuje, jakshora uvedeno, se sloučeninou obecného vzorce VII, jak shorapopsáno, za vzniku sloučeniny obecného vzorce I·
Například aktivačním způsobem pro konverzi sloučeniny o-becného vzorce III nebo VIII na derivát obecného vzorce IV neboIX je reakce sloučeniny obecného vzorce III nebo VIII s N-hyd-roxysukcinimidem nebo s jeho ve vodě rozpustnou v poloze 3substituovanou natriumsulfonátovou solí v přítomnosti N,N*-dicyklohexylkarbodiimidu v rozpouštědle, jako je napříkladethylacetát nebo fi,N-dimethylformamid. V takovém případě znamenáv obecném__vzoreci^EV a IX L skupinu obecného vzorce
L - - 0 -N
V o kde znamená Ha atom vodíku nebo natriumsulfátovou skupinu.Aktivačním způsobem pro převádění nosičů vzorce τ - /gooh/x5 na sloučeniny obecného vzorce VII je reakce takového nosičes p-nitrofenolem v přítomnosti N,Nr-dicyklohexylkarbodiimidua rozpouštědle, jako je například dimethylformamid, přičemžv tomto případě znamená i/ skupinu vzorce pNOgCgH^-O- 12 nebo s N-ethoxykarbonyl-2-ethoxy-l,2-dihydrochinonem /EEDQ//B. Belleau a kol., JACS, 90, str. 1651, 1968/ v rozpouštědle, jako je například tetrahydrofuran nebo dimethylformamid, při=. čemž v obecném vzorci VII znamená L' skupinu vzorce L'z ox 0 oc2h5
Podle jiného způsobu přípravy se nechává reagovat al-kalická sůl nosiče obecného vzorce τ - /cooh/x3 například sodná sůl, s alkylhalogenkarbonátem například s al-ky lhalogenkarbonátem s 1 až 4 atomy uhlíku v alkylovém podílu,s výhodou s ethylchlorkarbonátem vzorce /c2h5o-coci/ v rozpouštědle, například ve vodě nebo v dimethylformamidu. V takovém případě znamená v obecném vzorce VII L* skupinu-COOC^
Kondenzační způsoby pro přípravu konjugátů obecného vzor-ce I z derivátu obecného vzorce III nebo VIII a z nosiče o-becného vzorce T-/HH2/x se provádějí za podmínek schopných vytvořit kovalentní vazbyamidického typu a slučitelné se strukturou nosiče. V souhlases chemickou stabilitou nosiče ve vodných nebo v organickýchrozpouštědlech se může používat různých způsobů pro kopulačníreakci s meziprodukty obecného vzorce IV, V, VI, IX, X a XI.Pro nosiče citlivé k organickým rozpouštědlům se jakožto vý-hodné podmínky uvádějí pufrováné vodné roztoky o hodnotě pH7 - 9,5, teplota 4 až 57 °C a doba jedné hodiny až několikdní. - 15 -
Způsoby příprajvykonjugátů obecného vzorce I kondenzacíderivátu obecného vzorce V s nosičem obecného vzorcese provádějí ® ~ /za podmínek použití pufrovaných vodných roztoků o hodnotě pH6 až 7, o teplotě 4 °C po dobu několika hodin až několika dnů.
Způsoby přípravy konjugátů obecného vzorce 1 kondenzacíderivátu obecného vzorce VI s nosičem obecného vzorce τ - /cho/x2 se provádějí za podmínek vhodných pro vytvoření kovalentníchvazeb oximového nebo hydrazonového typu a slučitelných,se struk-turou nosiče. Jakožto výhodné podmínky se uvádějífvodné roztokyo hodnotě pH 4 až 7»5» teplota 4 až 57 °C a doba několik ho-din až několik dní.
Způsoby přípravy konjugátů obecného vzorce I kondenzacíderivátu obecného vzorce VI, X nebo XI s nosičem obecného vzorce T - /00-1 Vý-še provádějí za podmínek vhodných pro vytvoření kovalentníchvazeb amidického typu a kompatibilních se strukturou nosiče.Jakožto výhodné podmínky se uvádějí použití pufrovaných vod-ných roztoků o hodnotě pH 7 až 9,5, teplota 4 až 57 °0 a dobaněkolik hodin až několik dní.
Jakožto další výhodná podmínka se uvádí použití dimethyl-sulfoxidu nebo dimethylformamidu při teplotě místnosti po do-bu 1 až 5 hodin. Výrazem "několik hodin až několik dnů" se zde vždy mínídoba od 4 hodin do 5 dnů. "apříklad se jakožto vhodné podmínky pro kondenzaci slouče-nin obecného vzorce IV a obecného vzorce IX a protilátek obec-ného vzorce I - /BHj/j uvádí svodný roztok O,1M fosforečnanu sodného a vodný roztok O,1M chloridu sodného při hodnotě pH 8, obsahující monoklo- nální protilátku v množství 1 mg/ml, zpracování 30 násobným - 14 - molárním nadbytkem 10$ roztokem /hmotnost/objem/slouČeniny o-becného vzorce IV nebo IX v Ν,Ν-dimethylformamidu po dobu 24 ho-din při teplotě 20 °C. Eonjugát se čistí gelovou filtrací naSephadexu G-25 ve formě sloupce /Pharmacia Fine Chemical,Piscataway, N.Y./ za eluování PBS /fosfátem pufrovanou solan-kou/· ^akožto vhodné podmínky pro kopulaci mezi sloučeninou obec-ného vzorce Y a funkcionalizovanou protilátkou s thiolovými sku-pinami se uvádí i vodný roztok O,1M octanu sodného a vodný roztokO,1M chloridu sodného při hodnotě pH 6, obsahující monoklonálníprotilátku v koncentraci 1 mg/ml, za zpravování 30 násobným mo-lámím nadbytkem 5$ /hmotnost/objem/ roztoku sloučeniny obecné-ho vzorce V v témže pufru po dobu 24 hodin při teplotě 4 °C·Eonjugát se čistí gelovou filtrací, jak shora uvedeno.
Jakožto vhodné podmínky pro kopulaci mezi sloučeninou obec-ného vzorce VI a nosiči typu T - /oho/x2 se uvádí: vodný roztok O,1M octanu sodného a vodný roztok O,1Mchloridu sodného při hodnotě pH 6 až 7 obsahující monoklonálníptorilátku v koncentraci 1 mg/ml, za zpracování 30 násobnýmnadbytkem molárním 5$ /hmotnost/objem/ roztoku sloučeniny obec-ného vzorce VI v témže pufru po dobu 24 hodin při teplotě 20°C. Eonjugát se čistí gelovou filtrací, jak shora uvedeno.
Jakožto vhodné podmínky pro kondenzaci mezi sloučeninouobecného vzorce VI, X a XI a aktivovaným nosičem obecnéhovzorce VII se uvádí i bezvodé polární rozpouštědlo, napříkladdimethylformamid, obsahující 5 až 50 mg/ml sloučeniny obec-ného vzorce VI, X nebo XI, za zpracování ekvivalentním množ-stvím sloučeniny obecného vzorce VII po dobu 1 až 24 hodinpři teplotě 20 °C.
Sloučeniny obecného vzorce III jakož také aktivované slou-čeniny obecného vzorce IV, V, VI, IX. X a XI jsou nové a spa-dají proto do rozsahu vynálezu.
Sloučeniny obecného vzorce III, V, Ví, X a XI jsou uži— - 15 - tečnými meziprodukty a/nebo terapeuticky účinnými látkami. Pře-devším meziprodukt obecného vzorce III je užitečnou prodrogou " .sloučenin obecného vzorce A - 0 - H, shora popsanou. Derivát obecného vzorce III se může připravovat způsobem objasněným v ná-krese I. Tento způsob zahrnuje kondenzaci drogy obecnéhovzorce A - 0 - H se vhodným enoletherovým derivátem, majícímmaskovanou karboxylovou skupinu, například obecného vzorce XII: E-,
,0 - /CH2/bC00E5 /XII/ kde B, b, a máji shora uvedený význam a kde znamená E^chránící skupinu, jako skupinu methylovou nebo ethylovou, asloučeniny. odstranění chránící skupiny ze získá]Eákres 1 *1 -+
B 0 - /CH2/bG00Ex E,
A - G - 0 /CH^COOH E1
Bez záměru na jakémkoliv omezování vynálezu se uvádí,že protinádorové antracykliny jsou vhodnými hydroxylovanýmidrogami /A-OH/ pro přípravu bioaktivních derivátů obecnéhovzorce I.
Ze tříd antracyklinů se jakožto vhodné sloučeniny uvá-dějí 5z-deamino-3'-morfolinylové deriváty obecného vzorce XIIIjako například 3'-deamino-3'-/4-morfolinyl/doxorubicin /vzor-ce XHIa/ nebo 3'-deamino-/3'-/2-methoxy-4-morfolinyl/doxoru-bicin /vzorce XlIIb/ /E.M. Acton a kol., Morpholinyl Anthra-cyclines, in Bioaktive Molecules, M^rfolinylantracyklinyv bioaktivních molekulách, svazek 6. vyd. J.W.Lowm, Elsevier,1988/. - 16
Konverze antracyklinů obecného vzorce 13a,b na nové kekyselině citlivé deriváty obecného vzorce III, shora defino-vané, se může provádět zpracováním sloučeniny obecného vzorceXII, shora definované, kde znamená Rx zbytek, jako je ethylo-vá skupina, připravené jak popsal J.A. Landgrebe a kol., J.
Org. Chem. 43, str. 1244, 1954, teakcí vhodné sloučeniny, mají-cí ketonovou skupinu,s ethyldiazoacetátem. Výhodné podmínky proprovádění reakce antracyklinů, jakož i jiných sloučenin,mají-cích primární nebo sekundární hydroxylové skupiny, se slou-čeninou obecného vzorce XII zahrnují použití katalyzátoru nabázi sulfonové kyseliny, například p-toluensulfonové kyselinynebo kafrsulfonové kyseliny, v polárním rozpouštědle, jako jenapříklad dimethylformamid, při teplotě místnosti po dobu ně-kolika hodin až jednoho dne. Maskovaná karboxylová skupina kekyselině citlivého podílu vázanému k antracyklinům ve slouče-nině obecného vzorce III, se převádí na aktivovanou karbony-lovou skupinu sloučenin obecného vzorce IV, ze které se novébioaktivní sloučeniny připravují kopulací se vhodnými nosiči.Popřípadě se antracyklinové deriváty obecného vzorce IV mohoupřevádět na deriváty obecného vzorce V, VI, VIII, IX, X a XIa mohou se nechávat reagovat se vhodnými nosiči pro přípra-vu bioaktivních činidel obecného vzorce I. - 17 -
Bovněž terapeutickyjužitečné drogy, jako například shorapopsané, se mohou nechávat reagovat se sloučeninami obecnéhovzorce ΣΙΙ stejným způsobem, jako popsáno pro antracykliny amohou se převádět na bioaktivní činidla pro ošetřování někte-rých onemocnění savců.
Bioaktivní činidla obecného vzorce I podle vynálezu jsouužitečnými terapeutickými prostřdky, jelikož obsahují aceta-lickou vazbu, která uvolňuje mateřskou drogu A-OH po hydro-nievým iontem katalyzovaňé hydrolyse nebo in vivo enzymatic-kým štěpením. Například je dobře známo, že maligní tumory vy-kazují vysoký stupeň glykolysy ve srovnání s normální tkání.
To způsobuje vzrůst produkce laktátu a tím snížení hodnoty pHv nádoru /H.M. Rauen a kol., Z. Naturforsch., díl B, 23, 1968»str. 1461/.
Konjugáty, vyrobené popsanými způsoby, jsou charakterizoványnásledujícími odlišnými chemicko fysikálními způsoby. Napřík-lad podržením původní molekulové hmotnosti,:.přičemž nedocházíke vzniku agregátů, jak je potvrzeno chromátografickou gelovoufiltrací /Yu L.S. a kol., J. Urol. 140. str. 415, 1988/, sesoučasnou a nezávislou detekcí antracyklinu a protilátky růz-ných vlnových délek a gelovými elektroforetickými způsoby.Celkové rozdělení náboje sloučenin získaných je posuzovánochromatografickými způsoby iontové výměny. Koncentrace an-tracyklinu je posuzována spektrofotometrickou titrací protistandardní kalibrační křivce, získané pro mateřský antracyk-lin. Koncentrace bílkoviny se posuzuje kolorimetricky, na-příklad za použití bicinkonové kyseliny /Smith P.K. a kol.Anal. Biochem., 150, str. 76, sl985/ nebo zkouškou s Branfor-dovým barvivém /Bradford M.m., Anal. Biochem., 72, str. 248,1976/. Podržení účinnosti vázat antigen protilátek po kon-jugační proceduře se zkouší způsobem ELISA /Yu D.S. a kol., J. Urol. 140, str. 415, 1988/ a cytofluorimetrickými způsoby/Grallego J. a kol. Int. J. Cancer 33, str. 737, 1984/. Hod-nocení podržení cytotoxicity konjugátů ve srovnání s mateřskou *3 drogou se posuzuje zkouškou inhibice přijímání H-thymidinu - 18 - akceptorovou buňkou po inkubační době dostatečně dlouhé k roz-vinutí maximálního cytotoxického účinku /Dinaa-nw R.O. a kol.,Cancer Res, 48, str. 6097, 1988/.
Hodnocení selektivní cytotoxioity konjugátů se zřetelem naantigen positivní buňky ve srovnání s antigen negativními buň-kami se posuzuje zkouškou inhibice přijímání ^H-thimidinu ant-i-gen positivními buňkami ve srovnání s antigen negativními buň-kami po krátké době inkubace /Lillmann R.O. a kol., Cancer Res.48, str. 6096, 1988/.
Kyselinová senzitivita korjugátu se hodnotí shora uvede-nými chromatografiekými způsoby po inkubaci sloučenin ve vhod-ně pufrovaném roztoku.
Také se používá radioaktivního značení konjugátů v po-dílu protilátky /^^j/ a/nebo v antrjacyklinovém podílu /^c/ aHPLG analytických způsobů pro hodnocení stability v plasmě.
Hodnocení biologické účinnosti se provádí následujícím způsobem:
Sloučeniny obecného vzorce III* /připravené způsobem podlepříkladu 1/ se zkoušejí in vitro proti LoVo /lidské adenokarci-noma/ a LoYo-Doxo odolné /LoVo/LX/ buňky ve srovnání s Loxo-rubicinem a 3 *-deamino-3 *-/”2/s/-methoxy-4-morfolinyl<_/doxoru-bicinem /13b/ za použití jedné buňky po 4 hodinách ošetření/Colony zkouška/. Vypočítává se 50% inhibiční koncentrace/ΐΟ^θ/ na křivce koncentrace - odezva. Hodnoty,uvedené v ta-bulce I, ukazují, že sloučenina obecného vzorce III* je vícecytotoxická než doxorubicin, obě na citlivých a resistentníchbuňkách, avšak 15 až 20 krát méně cytotoxická než její mateř-sku sloučenina XlIIb.
Sloučenina III* se zkouší in vivo za použití CLP-1 myšimající P388-doxorubiein resistentní leukémii /P388/LX Johnson/ve srovnání s doxorubicinem a sloučeninou XlIIb. Hodnoty uve-dené v tabulce II ukazují, že sloučenina III*, podávaná ip 1den po inokulaci nádoru v dávce 0,22 mg/kg je velice účinná/T/C % 184/. - 19 - V 4 Λ
Konjugáty vzorce i', 1”, 1*, l*i a 1 /připravené způ-sobem popsaným v příkladu 5, 6, 9, 11 a 12/, ve kterých je zby-tek cytotoxické drogy 3'-deamino-3 */”2/S/-methoxy-4-morfolinyl_7dexorubicinu vázán acidicky citlivým linkerem, se zkoušejí invivo na P388/LX Johnsonově leukémii ve srovnání s doxorubici-nem a s volnou drogou XlIIb. Hodnoty, uvedené v tabulce III,ukazují, že všechny nové sloučeniny, podané iv jeden den poinokulaci si udržují stejnou účinnost jako volné drogy XlIIb.Terapeutický index, vyjádřený jako poměr mezi í^q-IOO a Oí)”timální dávkou, je vyšší v případě všech konjugátů ve srovnánís volnou drogou XlIIb. V tabulce IV jsou uvedeny t,.^ uvolňování 3z-deamino-3*-/**2/s/-methoxy-4—morf olinyl_/doxorubicinu /XlIIb/ z konjugá-tů při hodnotě pH 3 /acetétový pd.fr/ při teplotě 37 °C.
Tabulka I
Cytotoxicita 4 hodiny po ostření /ΐΟ^θ z ng/ml^
Sloučenina LoVo II»50/ng/ml/ LoVo/DX IL50/ng/ml/ 2180 55 745 R.I. 56,5 2,0 5,0 Doxorubicin XlIIb III* 60 16 240 Tabulka II Protinádorová účinnost proti P388/DX Johnsonově ošetření ip den 1 Sloučenina Dávka T/C5 Toxick mg/kg $ úmrtí Boxorubicin 10 100 0/10 15 100 0/10 22 100 10/10 XlIIb 0,1 156 0/10 0,125 155 1/10 III* 0,22 184 0/10 /^q koncentrace inhibující 50$ růstjcolonie
Poznámky k tabulce I a II 1/ ICW ----------------------... 2/ R.I. index resistence ^ÍC^qIoVo/P^^iCcq^oT·©/ - 20 - 3/ střední doba přežití; % ve srovnání s neošetřenou kontrolní skupinou 4/ hodnocení na bázi autopsie zjištěné u mrtvé myši
Tabulka III
Protinádorová účinnost proti P388/DX Johnsonově leukémii ošetření iv den 1 Sloučenina Dávka^ T/C5 ÍJoxicj mg/kg úmrtí Doxorubicin 16,9 105 0/10 22,0 100 3/10 XHIb 0,076 177 0/28 0,09* 192 0/39 I* 0,16 144 0/10 0,25+ 175 0/20 0,50 167 0/10 I" 0,16 156 0/10 0,25+ 200 0/10 0,50 133 0/10 I" 0,25 111 0/10 t 0,50 144 0/10 1,00* 205 0/20 1,25 200 0/10 I’1 0,66 172 0/10 1,00* 194 0/10 rii 0,66* 233 0/10 1,00 177 0/10 ♦ optimální dávka 5/ Dávka: /ng/kg/ vyjádřeno jako obsah - 21
Tabulka IV
Uvolňování sloučeniny XlXIb z konjuaátu při hodnotě pH 5 apři teplotě 37° C v acetátovém pufru' '
Sloučenina t^Q hodiny i' 2,5 I" _ v *ii• »iii 3,5 24,0 22,0 20,0 3,5 6/ čas, potřebný pro uvolnění 50 % volné drogy XlIIb, sta-noveno HPLC za použití kalibrační křivyk sloučeninyXIIIL·
7/ iontová síla 0,05M
Terapeutické působení sloučenin a zlepšení jejich tera-peutické účinnosti ve srovnání s mateřskou sloučeninou jsoupotvrzeny na živočiších s transplantovanými lidskými nádory.Holé myši, mající xeno/rouby lidských nádorů, se ošetřujívhodnými dávkami konjugátů, volných drog, protilátky a fy-aikáiní směsí drogy a protilátky v ekvivalentních dávkách,růst nádoru se zaznamenává a porovnává se v různých oštřo-vaných skupinách.
Konjugáty se zpracovávají na farmaceutické prostředkyza použití farmaceuticky vhodných nosičů nebo ředidel. Mů-že se používat jakéhokoliv vhodného nosiče nebo ředidla. Ja-kožto vhodné nosiče a ředidla se uvádějí rovněž fysiologickéroztoky soli a Ringersovy dextrosové roztoky.
Vynález blíže objasňují následující příklady praktické-ho provedení, které však nejsou míněny jako omezení vynálezu 22 Příklady provedení vynálezu Příklad 1
Způsob přípravy 14-0-/1-karboxymethyloxy-cyklohexyl/--3 -deamino-3 "/“2/S/-methoxy-4-morfolinyl__7doxorubicinu/“XIII*; A-0- = 13b*, b = 1, B = -/CH^-, R] = R£ = Hj7
3*-Deamino-3 *2-/S/-methoxy-4-morfolinyl_7doxorubicin/XlIIb/ /0,68 g, 1 mmol/, připravený podle britské zveřej-něné přihlášky vynálezu číslo 8928654.6, se rozpustí v bezvodém dimetnylformamidu /20 ml/ a zpracuje se ethyl 2-/cyklohexen-1-yl/-oxy acetátem /“XII*; b = 1, R^ = C2H5’ B = -/CH2/2-, R^ = R2 = H_7 /6 g, 32 mmol/ v přítomnostiroztavené kyseliny p-toluensulfonové /50 mg/. Směs se mí-chá po dobu dvou hodin při teplotě místnosti, načež se vlije do vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného a extrahuja se methylenchloridem. Organická fáze se promyje vodou,,vysuší se bezvodým, síranem sodným a zfiltruje se. Rozpouš-tědlo se odstraní za sníženého tlaku a zbytek se chromata-grafuje, koloně s kyselinou křemičitou, za použití elučníhosystému methylenchlorid/methanol. /objemově 98/2, čímž sezíská esterový derivát /R^ znamená C2H^/ žádané sloučeninyvzorce III*. 23 -
Tato sloučenina se zpracovává vodným 0,1N roztokem hydro-xidu sodného /200 ml/ při teplotě 0 °C za míchání a v přítom-nosti dusíku po dobu jedné hodiny. Pak se hodnota pH směsi upraví na 8,2 kyselinou octovou a provede se extrakce n-butanolem.Organická fáze se promyje vodou, zkoncentruje se na malý objemza sníženého tlaku a chromatografuje se na koloně s kyselinoukřemičitou za použití jakožto elučního systému směsi methylen-chloridu a methanolu /objemově 80/20/, čímž se získá žádanásloučenina vzorce III* /0,35 g, výtěžek 43 % teorie/ ve forměvolného kyselinového derivátu, který se zpracovává ekvivalent-ním množstvím kyseliny chlorovodíkové a lyofilizuje se.
Chromatografie na tenké vrstvě na křemelinové destičce/Merck/ ^254* eluční systém methylenchlorid/me thanol. /objemo-vě 95/5/, R = 0,13 MS-FD: m/e 783 /M+/. 1NMR /200 MHz, DMSO d / S : .. 1,12 /ď, J = 6,4 Hz, 3 H, 0^-57; 1,3-1,9 /m, 12H, fcJ ,CHg-2 7; 2,0-2,7 /m, 7H,. 0^-8, O-CHgCHg-N., O-CH-CH^-N, H-3*/$ 2,94 /s, 2H, CHg-IO/; 3,24 /s, 3H, CH-OCH^/;3,40, 3,73 /dvě m, 2H, NCH2CH2O/; 3,5T /m, 1H, H-47j 3,91 /s,2K, OCH2COOH/í 3,97 /s, 3H, OCtt3-4/; 4,04 /dq, J = 6,4. 1,0Hz,1E, H-5/í 4,35 /dd, J = 2,2, 5,2Hz, 1HL, OCH-OCH-j/; 4,61 /s, 2HL, 0^-14/; 4,92 /m, 1H, H-7/;. 5,24 /m, 1H, H-1 7; 7,6-7,9/m, 3H, H-1, H-2, H-3/j 13,20 /ba, 1H, OH-11/; 14,02 /s, 1H, OH-6/. Příklad 2
Příprava N-oxysukcinimidylového derivátu 14-0-/1-karbo-xymethyloxycyklohexyl/-3 *-deamino-3 2__S/-methoxy-4-aorfo-linyl_7doxorubicinu /“IV*; A-0- = 13b*, b = 1, B = -/CH2/2-,L = -0-»J J 24 -
Sloučenina III*/O,2 g, 0,25 mmol/, připravená způsobem podlepříkladu 1 se rozpustí v bezvodém dimethylformamidu /8 ml/,ochlazeném na O °C a zpracuje se N-hydroxysukcinimidem/0,.2 g/ a dicyklohexylkarbodiimidem /0,4 g/. Směs se udržuje:na teplotě 0 °C po dobu dvou hodin a pak se nechá při teplotěmístnosti přes noc. Pak se směs zkoncentruje na malý objem zasníženého tlaku a chromatografuge se na koloně s kyselinoukřemičitou za použití jakožto elučního systému směsi methylen-chloridu a methanolu /97/3 objemově/. Eluát, obsahující žáda-nou sloučeninu.se odpaří k suchu za sníženého tlaku a pak. sezbytek vyjme do ethylacetátu, zfiltruje se a zkoncentruje sena malý objem za sníženého tlaku. Nakonec se přidá ethylethera žádaná sloučenina vzorce IV*/0,130 g/ se oddělí na nálevceze slinutého) skla, promyje se ethyletherem a uskladní sev prostředí dusíku.
Chromátografie na tenké vrstvě na křemelinové destičce/Merck/, ^254’ e^-u^n^ systém methylenchlorid/methanol /95/5objemově/ R^ = 0,3T MS-FD: m/e 864 /M+/. Příklad 3 Příprava 14-0-/l-hydrazinkarbonylmethyloxy-cyklohexyl/- 3 *-deamino-/7" 2/S/-me thoxy-4-morfolinyl_7čloxorubicinu /"VIA-0- = 13b*, b = 1, B = -/CH2/2-, R] = R2 = H, d = 0_7 - 25 -
Sloučenina vzorce IV* /20 mg/, připravená způsobem podle pří-kladu 2, se rozpustí v tetrahydrofuranu /5 ml/ a přidá se 1Mroztok hydrazinhydrátu v isoproparrolu. Směa se udržuje nateplotě 0 °C po dobu 70 minut. Pak se přidá methylenchlorida směs se promyje třikrát studenou vodou. Organická, vrstva seoddělí, vysuší se bezvodýnL síranem sodným, zfiltruje se a rozpouštědlo se odstraní ve vakuu. Zbytek se chromatografuje nasloupci s kyselinou křemičitou za použití jakožto elučníhasystému směsi methylenchloridu a methanolu /99/1 objemově/.Ethyl^etherem. se vysráží sloučenina vzorce VI*.
Chromatografie v tenké vrstvě na křemelinové destičce/Merck/, eluční systém methylenchlorid/methanol /95/5 objemově/ R^ - 0,25 MS-FD: m/e 7977 /M+/. 1NMR /200 MHz, DMSO dg/ <$ : 1,36 /d, J = 6,6Hz, 3H, CH-j-57; 1,4-1,7 /m, 10H, /; 1,76 /m, 2H, CH2-2*/; 2,30 /m, 2H, CH2-8/í 2,50 /m/TB,H-3/j 2,55 /m, 4H, N.-CHg-CH/OCHy, H-CHg-Cí^-O/; 2,98 /d, J= 18,8Hz, 1H, H-10ax/i 3,22 /dd, J = 1,0, 18,8Hz, 1HřHL-lOe/; 3,39 /s, 3H, CH/OCHyV; 3,55, 3,95 /dvě m, 2H,NCH2CH2O/; 3,70 /m, 1H, H-47; 3,95 /m, 1H, H-5*/i 4,09 /s,3H, CHy-O-4/ϊ 4,10 /m, 2H, O-CÍ^CONH/} 4,50 /m, 1H, NCH2~CH/OCH3//j 4,67 /s, 2H, 01^-14/; 5,28 /m, 1H, H-7/; 5,54/m, 1H, H-l*/; 7,64 /bs, 1H, CONHN^/; 7,78 /t, J=7,9Hz, 1H,H-2/; 8,04 /d, J=7,9Hz, 1H, H-1/; 13,32 /s, 1H, OH-11 /; - 26 - 13,98 /s, 1H, OH-6/.· Příklad 4 Příprava 1 1 -/4-karboxy-1 -n-buty 1/karbamoy lme thyl- oxy-1-cyklohexal/_7-3'-deamino-3 *-/”2/S/-methoxy-4-morfolinyl7doxorubicinu /"VIII*, A-0- = 13b', b = 1, B = -/CHg/ R1 = Rg = H, g = 4_7
% = Aminomáselná kyselina /15 mg, 0,15 mmol/ se rozpustív 0,0514 fosfátového pufru o hodnotě pH 7,6 /2,5 ml/ a přidáse do sloučeniny vzorce IV* /30 mg, 0,033 mmol/, připravenézpůsobenu podle příkladu 2r rozpuštěné v acetonitrilu /3 ml/.Směs se udržuje přes noc při teplotě místnosti, pak se hodnotapB upraví na 6 kyselinou octovou a extrahuje se n-butanolem.Organická vrstva se oddělí a odpaří se ve vakuu. Zbytek: sechromátografuje na sloupci, s kyselinou křemičitou, za použi-tí jakožto elučního činidla směsi methylenchloridu a methanolu/95/5 objemově/, čímž se získá 20 mg žádané sloučeniny vzorceVIII*.
Chromatografie v tenké vrstvě na křemelinové destičce/Merck/ ^254’ e^u^n:í- systém methylenchlorid/methanol /95/1objemově/ = 0,55. MS-FD: m/e 884 /M+/. - 27 - Příklad 5
Příprava konjugátu s polyglutamovou kyselinou vzorce I /“i*:. A-0- % 13b,* b = 1, B = -/CK?/2-, = H, Z = = -NH-NH-CO-, a = 2, T = poly-L-glutamová kyselina_J7
Poly-L-glutamová kyselina, molekulární hmotnost 2 000 -15 000 /Sigma/ /65 mg/ a sloučenina obecného vzorce VI* /20 mg/, připravená podle příkladu 3, se rozpustí v dimethyl-formamidu /2 ml/ a míchá se po dobu tří hodin» Potom se při-dá N-ethoxykarbonyl-2-ethoxy-l,1-dihydrochinolin /25 mg/.
Směs se míchá přes noc, pak se vlije do směsi ethyletheru apetroleumetheru. Sraženina se oddělí na filtru ze slinutéhoskla, promyje se ethyletherem a rozpustí se v 2,5% vodnémroztoku hydrogenuhličitanu sodného /8 ml/. Boztok se vede re-versní fázovou kolonou BP-8, 40 až 63 /tun /Merck/ /30 x 1,8cm/ a eluuje se směsí vody a acetonitrilu od 0 do 20 % aceto-nitrilu. Eluát., obsahující konjugát, se lyofilizuje a oddělíse na filtru ze slinutého skla, promyje se methanolem a ethyletherem, čímž se získá žádaná sloučenina vzorce I* /45 mg/.Podle spektroskopického hodnocení obsahuje konjugát 13 %methoxymorfblinu vzorce XlIIb. Příklad 6 Příprava poly/GluNa, Ala,Tyr/-konjugátu vzorce I**/”l'*: A-0- = 13b*, b = 1, B = -/CH^-, = Rg = H, Z = -NH-NH-CO-, a = 2, T = poly/GluNa, Ala, Tyr/_7
Stejnými způsobem, jako je popsánu v příkladu 5, sepoly/GluNa, Ala, Ityr/ /1:1:1/, molekulová hmotnost 25 000 až50 000 /Sigma/ /60 mg/a sLoučenina VI* /20 mg/, připravenápodle příkladu 3, rozpustí v dimethylformamidu /2 ml/, mí-chá se tři hodiny a zpracuje se. N-ethoxykarbonyl-2~ethoxy-1,2-dihydrochinolinem /25 mg/, čímž se získá po čištění v re-verzní fázové koloně, 35 mg žádané sloučeniny vzorce I**. 28 - Příklad 7 Příprava anti-melanoma konjugátu vzorce I*** A-0- = 13b*, b = 1, B = -/CHg/g-, = H, Z = -ΜΗ-, T = Epl_7
Pomalu se přidává 10*^ M roztok: sloučeniny vzorce IV*,popsané v příkladu 2, v dimethylformamidu /37,5 mel/ do 1 ml2 mg/ml roztoku čištěné. myší. monoklonální antilidské mela-noma protilátky Epl /Giacomini P. a kol., Int. J. Cancer 39,str. 729, 1978/ v 0,1 M roztoku, natriumdihydrogenfosfátu, 0,1 M roztoku chloridu sodného při hodnotě pH 8 při r.t.míchání. Beakční směs se míchá přes noc při r.t. ve tmě a od-středí se. Konjugét. se izoluje gelovou filtrační chromátogra-fií na sloupci Sephadexu-G25 /PD-10, Pharmacia/ za eluování. PBS /Gibco, 10X, Cat.N. 042 - 04200 M/. Vyloučený pík se shro-máždí /1,5 ml/ a zkouší se na antracyklinový obsah spektrofo-tometricky za 480 nm. Obsah bílkoviny se zjišíuje. kolorimetric-ky bílkovinovou analýzou /BOA, Pierce/. Konjugát obsahuje1,27? mg/ml protilátky za poměru antraeyklin/bílkovina 11,4/ 1,0. Chemicko fyzikální profil produktu se stanoví HPLC gelo-vou: filtrační analýzou^/BioSil SEC-250 sloupee, 0,1 M roztoknatriumdihydrogenfosfátu, 0,1 M roztok chloridu sodného;, pH7,0/ s podvojnou detekcí vlnových délek /280 a 480 nm/ aSDS-PAGE. Podle HPLC se zjistí 50% vytváření bílkovinovéhoagregátu při eluování při prázdném objemu sloupce.
Podle SDS-PAGE jak absorpce antracyklinu tak reakce bíl-koviny s barvivém Coomassie je při 160 kD molekulové hmotnos-ti, což potvrzuje vytvoření kovalentních. vazeb a indikujevytváření agregátu v důsledku nokovalentníhoo vzájemného pů-sobení. Příklad 8 Příprava anti-colon karcinomového konjugátu vzorce Ilv /fliv: A-0- = 13b*, b = 1, B = -/CHg/g-, R] = Bg = H, Z = -NH-NH-, T = B72,3_7 - 29 -
Roztok B72,3 protilátky /americký patentový spis číslo4 522 918/ o koncentraci 2,6 mg/ml v 0,1M roztoku natriumdi-hydrogenf osfá tu, hodnota pH 6 pufru /1 ml/ se zpracovává 0,1ml 0,1M roztoku jodistanu sodného ve vodě při teplotě 4 °C vetmě. Po jedné hodině se produkt čistí gelovou filtrační chromá-tografií na koloně Sephadex G25 /PD-10 Pharmacia/ za eluování0,1M. roztokem natriumdihydrogenfosfátového pufru o hodnotěpH 6.
Frakce, obsahující bílkovinu /1,7 mg, 2 ml/ se zpracovává30 molárními ekvivalenty 10% /hmotnost/objem/ roztoku sloučeni-ny vzorce VI*, popsané v příkladu 3, v témže pufru. Po 24 ho-dinách, při teplotě 37 °G ve tmě se reakční směs čistí způsobem,popsaným v příkladu 7.
Konjugát obsahuje 0,48 mg/ml protilátky s poměrem,antra-cyklin/bílkovina 2,4/1 a je z 85 % monomerní. Příklad 9 Příprava kopolymeru 3-niethakryloylamino-2-hydroxy-propanu a 14-0--£l-/”4-/Ií-methakryloylglycylfenylalanyl-leucy lglycyl/hy dra z ino__7-karbonylme thyloxy-cyklohexylj -3 *-deamino-3 */" 2/S/-me thoxy-4-morf olinyl_7doxorubicinu /Iv/ /"IV: A-0- % 13b*, b = 1, B = -/CH^-, R1 = Rg = H, Z = -NHNH-CO-, T = HPMA X=Gly-Phe-Leu-Gly_7. - 30 -
Rozpustí se 0,58 g kopolymeru HRMA /~X=Gly^Hie-Lue-Gly, o ob-sahu 4,2 % /mol/mol %/ P=0CgH^pN02_7, připraveného; podle«Γ. Kopeček a kol., Makromol.Chem. 177, str. 2833 až 2848/1976/_7 radikálovou polymerací 3-methakryloylamino-2-hydroxy-propanu a 4-nitrofenylester N-methakryloylglycylfenylalanyl-leucylglycinu, v suchém dimethylsulfoxidu /15 ml/s derivátemvzorce VI* /0,1 g/, připraveným způspbem podle příkladu 3. - 31
Po dvou dench při teplotě místnosti se přidá l-amino-2-propa-nol /0,4 ml/ a reakční směs se vlije do směsi objemově 1/1acetonu a ethyletheru /300 ml/. Sraženina se oddělí a znovuse rozpustí v 95% ethanolu /10 ml/ a pak se vysráží žádanásloučenina vzorce Iv z acetonu. /80 ml/, oddělí se a promyjese etherem. Výtěžek: 0,51 g.
Obsah antracyklinu /% hmotnostní/ vypočteno jako 3'-deamino-3 */”2/S/-me thoxy-4-morfolinyl_7doxorubicinhydrochlorid/XlIIa/j 3,3 %. % molární poměr ve vzorci Iv /r:s:t/ = /95,7 : 0,79 : 3,52/. Příklad 10 Příprava 1 4-0-/1-piperazinokarbonylme tnyloxy-cyklohex-yl/-3'-deamino-/-2/S/-methoxy-4“morfolinyl_7doxorubicinu/“Xl', A-0- = 13b', b = 1, B = -/CH^-, R, = R£ = H_7
Sloučenina vzorce IV /100 mg/, připravená způsobem podlepříkladu 2, se rozpustí v bezvodém. tetrahydrofuranu /20 ml/,ochladí se na teplotu 0 °C a smísí se s roztokem piperazinu/50 mg v bezvodém. tetrahydrofuranu /2 ml/. Reakční směs se mí-chá při teplotě 0 °C po dobu 15 minut, pak se zředí methylen-chloridem /100 ml/, promyje se vodou /3 x 50 ml/. Organickáfáze se oddělí, vysuší se bezvodým síranem sodným a rozpouště-dlo se odstraní za sníženého tlaku. Surový produkt se chromá- - 32 - tografnje na sloupci s kyselinou křemičitou za použití jakož-to elučního systému směsi methylenchloridu a methanolu /obje-mově 80/20/. Sloučenina vzorce XI*, 80 mg, se vysráží ethyl-etherem. Chromátografie v tenké vrstvě na silikagelové destič-ce /Merck/ 54) eluční systém methylenchlorid/methanol/70/30 objemově/ Rp = 0,60. FD-MS: m/z 868 /100, /Iá+Hj7 + /1HNMR /200 MHz, CDCiy J : 1,35 /ó, J=6,6Hz, 3H, 5*-CH3/; 1,3 až 1,9 /m, 12H, 2*-CH2,cyklohexan/; 2,11 /dď', J=4,2, 14,6Hz, 1H, 8ax-H/; 2,3 až 2r5/m, 5H, 8eq-H, 3 '-H. 3 * *ax-H, 5 **-CH2/; 2,60 /dd, J=3,9,111,2Hz, 1H, 3**eq-H/; 2,86 /m, 4H, C^-NH-CH^; 3,00 /d,JJ=18,9Hz, 1H, 10ax-H/; 3,23 /dď, J=1,2, 18,9 Hz, 1H, 10eq-H/;3,37 /s, 3H, 2**-0CH3/j 3,4 až 3,6 /m, 5H, CON/CH2/2, 6**ax-H/; 3,90 /m, 1H, 6*'eq-H/; 3,98 /q,J=6,6Hz, 1H, 5 -H/; 4,07/s, 3H, 4-0CH3/; 4,18 /s, 2H, OCH2CON/; 4,48 /dd, J=2,5, 3,9Hz, 1H, 2**eq-H/; 4,79 /m, 2H, 14-0^/;. 5,24 /m, 1H, 7-H/; 5,53 /m, 1H, 1 *-H/; 7,37 /d, J=7,7Hz, 1H, 3-H/j 7,76 /dd,J=7,7, 6,8Hz, 1H, 2-H/; 8,02 /d, ď=6,8Hz, 1H, 1-H/; 13,30 /bs,1H, 11-OH/; 13,98 /s, 1H, 6-OH/. Příklad 11 Příprava kopolymeru 3~methakryloylamino-2-hydroxypropa-nu a 14-0- £l-2f“4-/N-methakryloylglycyl/piperazin>lyl_7-karbonylmethyloxy-cyklohexyl^ -3*-áeamino-3 ^”2/S/-methoxy— 4-morfolinyl__7doxorubicinu /Iv^/ /”rVÍ: A-0- = 13b,* b = 1, B = -/CH^-, R] = Rg = H, Z = ^""1 ,4-piperazinyl_7-C0-, T = HPMA a X=Híí;-CH2-CO-_7· - 33 -
0,42 g kopolymeru HPMA /"X=HH-CH2-C0-, 7,6, % /mol/mol %/ o ob-sahu P=OCgH^pND2 Ji připraveného podle J. Kopeček a kol.Makromol. Chem. 177, str. 2833 až 2848 7l976/_7 radikálovoupolymeracl 3-methakryloylamino-2-hydroxypropanu a 4-nitrofe-nylesteru N-methakryloylglycinu, se rozpustí' v suchém di-methylsulfoxidu /2,2 ml/ a nechává se reagovat s derivátemXI* /0,07 g/, připraveným způsobem podle příkladu 10. Pone-chá se po dobu dvou hodin při teplotě místnosti,, pak se přidá1-amino-2-propanoi /0,05 ml/ a reakční směs se vlije do obje-mově 1/1 směsi acetonu a ethyletheru /200 ml/. Sraženina seoddělí a znovu se rozpustí v 95¾ ethanolu /10 ml/ a z tohotoroztoku; se žádaná sloučenina vzorce IV1 vysráží acetonem/80 ml/, oddělí se a promyje se etherem. Výtěžek: 0,39 g. - 34 -
Obsah antracyklinu /hmotnostní %/ počítáno jako 3*-deaminor-3 2/S/-me thoxy-4-morfolinyl_7doxorubicinhydrochlorid /XlIIa/: 9,74 % % molární poměr ve vzorci Ivi /r:s:t/ = /92,4 : 2,15 : 5,45/.Příklad 12 Příprava kopolymeru 3-iaethakryloylamino-2-hydroxypropanua 14-0-{l-Z-4 -/ó-methakryloylaminokaproyl/piperazin.-lyljr-karbonylme thyloxy-cyklohexyl^-3 *-deamino-3 */”2/S/-me thoxy-4-morfolinyl_7doxorubicinu /Iv^/ /~IV1Í: A-O-=13b', b=1, B=-/CH2/2“, S1 = P2 - H, Z = /“1 ,4-piparazinyl_7-G0-, T = ΕΡΜΑ a X=HN-/CH2/^-CO- J-
- 35 -
Rozpustí se 0,6 g kopolymeru HPMA /"XsHN-ZCH^/^-CO-, o ob-sahu. 5,3 % /mol/mol %/ Ρ=00^Η^ρΝ02_7, připraveno podle J.Kope-ček a kol., Makromol. Chem. 177, str. 2833- 2848 /1976/J7 ra-dikálovou polymerací 3-methakryloylamino-2-hydroxypropanu a4-nitrofenyl-N-methakryloylaminokapronátu, v suchém dimethyl-sulfoxidu /3 ml/ a nechává se reagovat s derivátem vzorce XI*/0,1 g/, připraveným způsobem podle příkladu 10.
Po dvou hodinách při teplotě místnosti se přidá 1-amino-2-propanoi/0,1. ml/ a reakční směs se vlije do objemově 1/1směsi acetonu a ethyletheru /200 ml/.
Stejným způsobem, jako je popsáno v příkladu 11, se zíls-ká 0,58 g žádané sloučeniny vzorce IV11.
Hmotnostní obsah antracyklinu,, vypočtený-jakožto 3*-de-amino-3#/—2/S/-methoxy-4-morfolinyl_7doxorubicinhydrochlorid/XlIIa/: 9,2 % % molární poměr ve vzorci IV11 /r:s:t/ = /94,7 : 2,05 : 3,31/ Příklad 13 Příprava konjugátu póly/Glu-Na,Ala,lyr/ /1:1:1/ a1 4-0-/1-piperazinokarbonylme thyloxycyklohexyl/-3 *-deamino>- 2/S/-methoxy-4-morfolinyl_7doxorubicinu /Ivi^'i/ /"Ivili: A-0-= 13b*,'b = 1, B= -/CH^-, R] = R2 = H, Z = Z~1,4-piperaiinyl_7-C0-, T.=poly/Glu-Na, Ala,lýr/_7. 36 -
NH-<JH-CO CIL, NH-CH-CO- Íh3 . Č6h4poh^ jViii
Rozpustí se poly/Glu-Na,Ala,Tyr/ /1:1:1/ molekulová hmot-nost 25 000 až 40 000 /Sigma/, /0,2 g/ ve vodě /5 ml/ za mí-chání při teplotě místnosti. Odpovídající volná kyselina sevysráží z vodného roztoku okyselením, na hodnotu pH 3 0,1 N kyselinou chlorovodíkovou. Poly/Glu-OH,Ala,Tyr/ /0,17 g/ sezíská a vysuší se ve vakuu, pak se rozpustí v suchém dimethyl-formamidu /10 ml/ a smísí se s 14-0-/1-piperazinokarbonyl-methyloxy-cyklohexyl/-3 '-deamino-/” 2/S/-methoxy-4-morfolinylT·doxorubicinem /XI'/ /0,035 g/, přpraveným podle příkladu 10,a N-ethoxykarbonyl-2-ethoxy-1,2-dihydrochinolinem /EEDQ/ /0,08 g/. Přidá se další alikvot EEDQ /0,08 g/ za 3 hodiny.Reakční směs se míchá přes noc při teplotě místnosti, a pak sevlije do ethyletheru /300 ml/. Sraženina se suspenduje ve vo-dě /10 ml/ a zpracovává se 0,1N roztokem hydroxidu sodného/14 ml/; hodnota pH roztoku se upraví na 8,5 0,1N roztokemkyseliny chlorovodíkové a zavede se na sloupec Sephadexu G10.Vodný roztok se lyofilizuje, čímž se získá 0,16 g žádanésloučeniny vzorce Hmotnostní obsah antracyklinu vypoč- ten jakožto 3'-deamino-3 ,/"’’2/S/-metnoxy-4-morfolinyl_7doxo- 37 - rubicinhydrochlorid /XlIIa/: 10 % % molární poměr ve sloučenině vzorce IV111 /r:s:t:u/ /31,33 : 2,01 : 33,33 : 33,33/.
Průmyslová využitelnost
Nové bioaktivní prostředky pro uvolňování terapeuticky účinných látek zvláště antracyklinů se zlepšenou terapeutickou účin-ností a sníženou toxicitou při podávání lidem,,.

Claims (27)

  1. - 38 - PATENTOVÉ
    1. Konjugát obecného vzorce/A - O - W - Z/Q - T NÁROKY /1/ kde znamená A-O- zbytek drogy obecného vzorce A-O-H, přičemž -O-Hná primární nebo sekundární hydroxylovou skupinu, a celé číslo 1 až 30, W skupinu obecného vzorce II
    0/0/- /11/ —I -liga | 5 ΑΛ3ΓΘ0Υ jΑΖ31ΥΝαΛ Ohd I αν^η l 6 ΙΙΙΛ 3 0 «SU známě'- " kde znamená b celé číslo 1 až 4, H alkylenovou skupinu s 1 až 3 atomy uhlíku^ R^ a R^ vždy na sobě nezávisle atom vodíku, alkylovou skupinu, fenylovou skupinu nebo substituovanoufenylovou skupinu nebo atom halogenu Z vloženou skupinu /"spacer group"/, T nosičový podíl.
  2. 2. Konjugát podle nároku 1, kde je podíl A-0- odvozený odantracyklinu obecného vzorce A-O-H. Konjugát podle nároku 2, kde podíl A-0- znamená - 39 -
    Η^θ atom vodíku nebo hydroxyskupinu nebo methoxyskupinu, Rj 1 a Rj2 jeden ze symbolů atom vodíku a druhý ze symbolů; hydroxyskupinu nebo Rj j atom vodíku nebo jodu a R^ atom: vodíku, a R^ aminoskupinu nebo atom dusíku včleněný do morfoli- nového kruhu.
  3. 4. Konjugát podle nároku 1 až 3, kde znamená a celé čís-lo 1 až 5·
  4. 5. Konjugát podle nároku 1 až 4, kde znamená B. skupinu -/ch2/2-.
  5. 6. Konjugát podle nároku 1 až 5, kde znamená Z i/ -NH-, ii/ -Níř-/CH2/c-S-S-, kde znamená c celé číslo 1 až 4,iii/ -NH-/C/d-N-CH-, kde znamená a/ d nulu b/ d 1 a C skupinu -NH-CO-/CH2/e-CO-NH-, kde znamenáe celé číslo 2 až 4, c/ d 1 až 4 a C znamená skupinu -/CH2/^-0-/CH2/^-,kde znamená f 1 nebo 2, nebo d/ d celé číslo 2 až 6 a c znamená skupinu -CHg-iv/ skupinu vzorce -NH-/C/d-NH-CO-, kde má G a d shora uve- dený význam, 40 - v/ skupinu obecného vzorce -/D/-NH-, kde D znamená skupinuobecného vzorce -NH-/CH2/ -C0-, kde znamená g celé čís-lo 2 až 6, vi/ skupinu obecného vzorce -/E/-CO-, kde znamená /E/ sku-pinu vzorce -NH-/CH2/g-NH-, kde znamená g celé číslo 2až 6, vii/ piperazinylkarbonylovou skupinu vzorce CHO / 2-N
    CO - CHg - CH2
  6. 7. Konjugát podle nároku 1 až 6, kde je nosičovy podíl Tvybrán ze souboru zahrnujícího polyklonální protilátku nebojejí fragment obsahující antigenovou vazebnou polohu, schop-nou vázat k nádoru a připojený antigen; monoklonální proti-látku. nebo její fragment, obsahující antigenovou vaznou polo-hu, schopnou vázat antigen s výhodou nebo selektivně na popu-laci nádorových buněk; peptid nebo bílkovinu schopnou výhodnénebo selektivní vazby na nádorové buňky; a polymerní nosič.
  7. 8. Konjugát podle nároku 7, kde podíl T je vybrán ze sou-boru zahrnujícího; anti-T-buňkovou protilátku, anti-CD 5 proti-látku, anti-transferin receptorovou protilátku, anti-melanomaprotilátku, antikarcinoma markerovou protilátku, antikarcino-ma vaječníku protilátku, antikarcinoma prsu protilátku a anti-karcinoma močového měchýře protilátku.
  8. 9. Konjugát podle nároku 7, kde podíl T znamená růstovýfaktor.
  9. 10. Způsob přípravy konjugátu obecného vzorce I podle ná-roku 1 až 9, vyznačující se tím, že sekondenzuje derivát obecného vzorce III A - 0 - W - OH /111/ kde A-0- a W mají v nároku 1 uvedený význam, s látkou nebo s látkami, která je nebo které jsou schopny vytvářet skupinu Z a nosičový podíl I v konjugátu obecného vzorce I, čímž se vytvoří konjugát obecného vzorce I. 41
  10. 11. Způsob podle nároku 10, vyznačující setím, že se kondenzace provádí prostřednictvím aktivovanéhoderivátu obecného vzorce III nebo přímou reakcí v přítomnostikondenzačního činidla.
  11. 12. Způsob podle nároku 10, vyznačující setím, že se převádí derivát obecného vzorce III na aktivova-ný derivát obecného vzorce IV A - 0 - W - L kde A-0- a W mají význam uvedený v nároku 10 a kde znamená Laktivační skupinu pro vytvoření amidické vazby ai7 kondenzuje se získaná sloučenina obecného vzorce IV se sloučeninou obecného vzorceT"/NH2Zx kde T. znamená nosičový podíl a x počet aminoskupin, do-stupných. pro kondenzaci, ii*/ kondenzuje se sloučenina obecného vzorce IV s thiolovýmderivátem vzorce nh2-/ch2/c-sh kde znamená c celé číslo 1 až 4 a kondenzuje se získa-ná sloučenina obecného vzorce V a-o-w-kh-/ch2/c-sh /V/ kde A-Ο-, W a c mají shora uvedený význam, se slouče-ninou obecného vzorce T-/SH/Xl kde T má shora uvedený význam a x1 znamená počet thio-lových skupin, dostupných pro kondenzaci nebo iii */ se nechá reagovat sloučenina vzorce IV s hydrazinem, s dihydrazinovým derivátem kyseliny jantarové nebo ky-seliny adipové nebo s diaminosloučeninou a kondenzujese vzniklá sloučenina obecného vzorce VI A-0-W-NH-/C/d-NH2 kde A-Ο-, W, C a d mají význam uvedený v nároku 6 sesloučeninou obecného vzorce t-/cho/x2 42 - kde znamená T nosičovy podíl a x2 počet formylovýchskupin, dostupných pro kondenzaci. 13· Způsob podle nároku 10, vyznačující setím, že se /iv*/ kondenzuje sloučenina obecného vzorce VI,připravená podle nároku 12, se sloučeninou obecného vzorceVII T-/CO-L'/ /VII/ V » kde znamená T nosičovy podíl a y celé číslo 1 až 30 a celkovýpočet karboxylových skupin, dostupných pro kondenzaci.
  12. 14. Způsob podle nároku 10, vyznačující setím, že /v '/ se kondenzuje sloučenina obecného vzorce IIIs aminovým derivátem obecného vzorce H2N.-/CH2/g - COOH kde g znamená celé číslo 2 až 6, čímž se získá derivátobecného vzorce VIII A-0-W-/D/-0H /VIII/ kde A-Ο-, W má význam uvedený v nároku 1 a D má význam uvede-ný v nároku 6 a popřípadě se převádí sloučenina obecného; vzor-ce VIII na aktivovaný derivát obecného vzorce IX A-0-W-/D/-L /IX/ kdeyQ-O-, W, /D/ mají shora uvedený význam a L znamená aktivač-ní skupinu pro vytvoření amidové vazby a získaná sloučeninaobecného vzorce IX nebo sloučenina obecného vzorce VIII sekondenzuje v přítomnosti kondenzačního činidla se sloučeninouobecného vzorce τ - /nh2/x , definovanou v nároku 12.
  13. 15. Způsob podle nároku 10, vyznačující setím, že /vi */ se nechává reagovat sloučenina obecného; vzor-ce IV s aminoderivétem obecného vzorce H2ií - /CH2/g - NH2 kde g má význam uvedený v nároku 6, za vzniku derivátu obec- ného vzorce X - 43 - A-O-W-/E/-H A/ kde A-0- a W mají význam, uvedený v nároku 10 a /"“e_7 má vý-znam uvedený v nároku 6 nebo /v11*/ se nechává reagovat sloučenina obecného vzorce IVs piperazinem za vzniku sloučeniny obecného vzorce XI A - 0 - W - /piperazin/ - Η /XI/ a sloučenina obecného vzorce X nebo XI se kondenzuje, jakshora uvedeno, se sloučeninou obecného vzorce VII, jak shorapopsáno v nároku 13.
  14. 16. Farmaceutický prostředek, vyznačujícíse t í m , že obsahuje farmaceuticky vhodný nosič nebo ředidloj a jakožto; účinnou látku konjugát obecného vzorce I po-dle nároku 1 až 9 nebo připravítelný způsobem podle nároku1.0 až 15.
  15. 17. Derivát obecného vzorce III definovaný v nároku1 10.
  16. 18. Derivát podle nároku 17, kterým je 14-0-/1-karboxy-me thyloxycyklohexyl/-3 *-deamino-3 *-/"2/S/-methoxy-4-morfo-linyl_7<3oxorubicin. 1,9. Způsob přípravy derivátu, obecného vzorce III podlenároků 17, vyznačující se tím,, že se kon-denzuje droga obecného vzorce A - 0 - tt kde A-0- má v nároku 1 uvedený význam, se sloučeninou obec-ného vzorce XII
    /XII/ kde B, b, R1 a -mají v nároku 1 uvedený význam a R^ zname-ná chránící skupinu a chránící skupina se z vytvořené slouče-niny odstraní. - 44 -
  17. 20. Derivát obecného vzorce IV, definovaný v nároku 12.
  18. 21. Derivát podle nároku 20, kterým je 14-0-/l-karboxy- methyloxycyklohexyl/-3 *-deamino-3 2/S/-me thoxy-4-morfoli- nyl__7doxorubicin. ·
  19. 22. Způsob přípravy derivátu obecného vzorce IV vy-značující se tím, že se převádí; derivát obec-ného vzorce III podle nároku, 19 na derivát obecného vzorce IV.
  20. 23. Derivát obecného vzorce V definovaný v nároku 12.
  21. 24. Způsob přípravy derivátu obecného vzorce V podle ná-roku 23, vyznačující se t í m, že se připra-vuje z derivátu obecného vzorce III způsobem podle nároku 1. 25· Derivát obecného vzorce VI definovaný v nároku 12.
  22. 26. Derivát podle nároku 25, kterým je 14-0-/1-hydrazino-karbonylmethyloxycyklohexyl/-3 *-deamino-3 *-/”2/S/-methoxy-4-morfolinyl_7doxorubícin.
  23. 27. Způsob přípravy derivátu obecného vzorce VI podle ná-roku 25, vyznačující se tím, že se připravu-je z derivátu obecného vzorce III způsobem podle nároku 12.
  24. 28. Derivát obecného vzorce IX definovaný v nároku 14.
  25. 29. Způsob přípravy derivátu obecného vzorce IX podle ná-roku 28, vyznačující se tím, že se připra-vuje z derivátu obecného vzorce III způsobem podle nároku 14.
  26. 30. Derivát obecného vzorce X nebo XI definovaný v náro- « ku 1 5. ; <»
  27. 31. Způsob přípravy derivátu obecného vzorce X nebo XIpodle nároku 30, vyznačující se tím, že sepřipravují deriváty obecného vzorce IV způsobem podle náro-ku 15. JUDr.0to|V0RČÍK advokát )
CS912414A 1990-08-03 1991-08-02 Novel conjugate of therapeutically usable compounds with a carrier CS241491A3 (en)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
GB909017024A GB9017024D0 (en) 1990-08-03 1990-08-03 New linker for bioactive agents

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CS241491A3 true CS241491A3 (en) 1992-02-19

Family

ID=10680097

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CS912414A CS241491A3 (en) 1990-08-03 1991-08-02 Novel conjugate of therapeutically usable compounds with a carrier

Country Status (28)

Country Link
US (2) US5387578A (cs)
EP (1) EP0495053B1 (cs)
JP (1) JP3169222B2 (cs)
KR (1) KR920702234A (cs)
CN (1) CN1058598A (cs)
AT (1) ATE135919T1 (cs)
AU (1) AU650900B2 (cs)
CA (1) CA2067184C (cs)
CS (1) CS241491A3 (cs)
DE (1) DE69118350T2 (cs)
DK (1) DK0495053T3 (cs)
ES (1) ES2088013T3 (cs)
FI (1) FI100697B (cs)
GB (1) GB9017024D0 (cs)
GR (1) GR3019449T3 (cs)
HU (1) HUT61898A (cs)
IE (1) IE76467B1 (cs)
IL (2) IL98986A (cs)
MY (1) MY106526A (cs)
NO (1) NO921287L (cs)
NZ (1) NZ239165A (cs)
PH (1) PH31048A (cs)
PT (1) PT98545B (cs)
RU (1) RU2116087C1 (cs)
TW (1) TW211572B (cs)
WO (1) WO1992002255A1 (cs)
YU (1) YU48441B (cs)
ZA (1) ZA916025B (cs)

Families Citing this family (50)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5439936A (en) * 1989-10-03 1995-08-08 The Regents Of The University Of California Method of treating certain tumors using illudin analogs
GB9017024D0 (en) * 1990-08-03 1990-09-19 Erba Carlo Spa New linker for bioactive agents
DE4236237A1 (de) * 1992-10-27 1994-04-28 Behringwerke Ag Prodrugs, ihre Herstellung und Verwendung als Arzneimittel
GB9309663D0 (en) * 1993-05-11 1993-06-23 Erba Carlo Spa Biologically active compounds
GB9416007D0 (en) * 1994-08-08 1994-09-28 Erba Carlo Spa Anthracyclinone derivatives
US5783178A (en) * 1994-11-18 1998-07-21 Supratek Pharma. Inc. Polymer linked biological agents
JP2000509394A (ja) * 1996-05-01 2000-07-25 アンティバイラルズ インコーポレイテッド 細胞膜を横切って物質を輸送するためのポリペプチド結合体
US6030941A (en) * 1996-05-01 2000-02-29 Avi Biopharma, Inc. Polymer composition for delivering substances in living organisms
US5932553A (en) * 1996-07-18 1999-08-03 The Regents Of The University Of California Illudin analogs useful as antitumor agents
US5723632A (en) 1996-08-08 1998-03-03 Mgi Pharma, Inc. Total synthesis of antitumor acylfulvenes
DE19636889A1 (de) 1996-09-11 1998-03-12 Felix Dr Kratz Antineoplastisch wirkende Transferrin- und Albuminkonjugate zytostatischer Verbindungen aus der Gruppe der Anthrazykline, Alkylantien, Antimetabolite und Cisplatin-Analoga und diese enthaltende Arzneimittel
AU7124598A (en) * 1997-04-18 1998-11-13 Access Pharmaceuticals, Inc. Polymer-platinum compounds
US5965118A (en) * 1997-04-18 1999-10-12 Access Pharmaceuticals, Inc. Polymer-platinum compounds
DE69818987T2 (de) * 1997-05-21 2004-07-29 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University, Stanford Zusammensetzung und verfahren zur verzögerung des transports durch biologische membranen
US6531230B1 (en) * 1998-01-13 2003-03-11 3M Innovative Properties Company Color shifting film
US7141603B2 (en) * 1999-02-19 2006-11-28 The Regents Of The University California Antitumor agents
US6025328A (en) 1998-02-20 2000-02-15 The Regents Of The University Of California Antitumor agents
CN1323294C (zh) * 1998-07-30 2007-06-27 香港澳维有限公司 制备水溶性交联轭合物的方法
US6706892B1 (en) 1999-09-07 2004-03-16 Conjuchem, Inc. Pulmonary delivery for bioconjugation
EP2266607A3 (en) 1999-10-01 2011-04-20 Immunogen, Inc. Immunoconjugates for treating cancer
WO2002032400A1 (en) * 2000-10-16 2002-04-25 Neopharm, Inc. Liposomal formulation of mitoxantrone
WO2002076448A1 (en) * 2001-03-23 2002-10-03 Napro Biotherapeutics, Inc. Molecular conjugates for use in treatment of cancer
CA2445985A1 (en) * 2001-05-04 2002-11-14 University Of Utah Research Foundation Hyaluronic acid containing bioconjugates: targeted delivery of anti-cancer drugs to cancer cells
MXPA03011094A (es) * 2001-05-31 2004-12-06 Medarex Inc Citotoxinas, profarmacos, ligadores, y estabilizadores utiles para ello.
US20050169883A1 (en) * 2002-05-06 2005-08-04 Prestwich Glenn D. Preblocking with non-ha gags increases effectiveness of ha conjugated anticancer agents
NZ550934A (en) * 2004-05-19 2010-05-28 Medarex Inc Chemical linkers and conjugates thereof
US7691962B2 (en) * 2004-05-19 2010-04-06 Medarex, Inc. Chemical linkers and conjugates thereof
US20060105941A1 (en) * 2004-11-12 2006-05-18 Allergan, Inc. Mixed antibiotic codrugs
US7714016B2 (en) * 2005-04-08 2010-05-11 Medarex, Inc. Cytotoxic compounds and conjugates with cleavable substrates
ATE527998T1 (de) * 2005-08-03 2011-10-15 Univ California Illudin-analoga als krebsmittel
CA2623652C (en) * 2005-09-26 2013-11-26 Medarex, Inc. Antibody-drug conjugates and methods of use
AU2006305842B2 (en) 2005-10-26 2011-11-03 E. R. Squibb & Sons, L.L.C. Methods and compounds for preparing CC-1065 analogs
CA2627190A1 (en) 2005-11-10 2007-05-24 Medarex, Inc. Duocarmycin derivatives as novel cytotoxic compounds and conjugates
TWI412367B (zh) 2006-12-28 2013-10-21 Medarex Llc 化學鏈接劑與可裂解基質以及其之綴合物
CN101616911A (zh) * 2007-02-21 2009-12-30 梅达莱克斯公司 具有单个氨基酸的化学连接物及其偶联物
ES2547552T3 (es) 2008-02-01 2015-10-07 Genentech, Inc. Metabolito de nemorrubicina y reactivos análogos, conjugados anticuerpo-fármaco y métodos
MX2011000509A (es) * 2008-07-15 2011-04-05 Genentech Inc Conjugados derivados de antraciclina, proceso para su preparacion y su uso como compuestos antitumorales.
ES2533710T3 (es) 2010-12-02 2015-04-14 Nerviano Medical Sciences S.R.L. Proceso para la preparación de derivados de morfolinil antraciclina
US9556192B2 (en) 2012-10-30 2017-01-31 Nerviano Medical Sciences S.R.L. Functionalized 9-bromo-camptothecin derivatives
CN105849086B (zh) 2012-11-24 2018-07-31 杭州多禧生物科技有限公司 亲水性链接体及其在药物分子和细胞结合分子共轭反应上的应用
US10201614B2 (en) 2013-03-15 2019-02-12 Zymeworks Inc. Cytotoxic and anti-mitotic compounds, and methods of using the same
EP3086815B1 (en) 2013-12-27 2022-02-09 Zymeworks Inc. Sulfonamide-containing linkage systems for drug conjugates
DK3122757T3 (da) 2014-02-28 2023-10-09 Hangzhou Dac Biotech Co Ltd Ladede linkere og anvendelse deraf til konjugering
KR102609034B1 (ko) 2014-09-17 2023-12-01 자임워크스 비씨 인코포레이티드 세포독성 및 항유사분열성 화합물, 그리고 이를 이용하는 방법
FI3319936T3 (fi) 2015-07-12 2026-03-12 Hangzhou Dac Biotech Co Ltd Silloituslinkkereitä soluun sitoutuvien molekyylien konjugoimiseksi
US9839687B2 (en) 2015-07-15 2017-12-12 Suzhou M-Conj Biotech Co., Ltd. Acetylenedicarboxyl linkers and their uses in specific conjugation of a cell-binding molecule
PE20190353A1 (es) 2016-04-15 2019-03-07 Macrogenics Inc Moleculas de union b7-h3 novedosas, conjugados anticuerpo-farmaco de los mismos y metodos de uso de los mismos
KR20220147721A (ko) 2016-11-14 2022-11-03 항저우 디에이씨 바이오테크 씨오, 엘티디 결합 링커, 그러한 결합 링커를 함유하는 세포 결합 분자-약물 결합체, 링커를 갖는 그러한 결합체의 제조 및 사용
US10386338B2 (en) 2017-10-30 2019-08-20 Cynthia Rena Wright DNA/RNA PEMS microcantilever probe for detection of viral infection and detection of genetic variants
JP2024541058A (ja) 2021-11-03 2024-11-06 ハンジョウ ディーエーシー バイオテック シーオー．，エルティディ． 抗体の特異的共役

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB2098219A (en) * 1981-05-08 1982-11-17 Erba Farmitalia Daunorubicin-protein conjugates
JPS63241541A (ja) * 1987-03-30 1988-10-06 Konica Corp 感光性組成物および感光性平版印刷版
IL89220A (en) * 1988-02-11 1994-02-27 Bristol Myers Squibb Co Anthracycline immunoconjugates, their production and pharmaceutical compositions containing them
US5066490A (en) * 1988-06-01 1991-11-19 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health & Human Services Protein crosslinking reagents cleavable within acidified intracellular vesicles
GB9017024D0 (en) * 1990-08-03 1990-09-19 Erba Carlo Spa New linker for bioactive agents

Also Published As

Publication number Publication date
FI921451L (fi) 1992-04-02
JPH05501726A (ja) 1993-04-02
PT98545B (pt) 1999-01-29
GR3019449T3 (en) 1996-06-30
DE69118350T2 (de) 1996-08-22
HUT61898A (en) 1993-03-29
GB9017024D0 (en) 1990-09-19
PH31048A (en) 1998-02-03
IL98986A0 (en) 1992-07-15
CN1058598A (zh) 1992-02-12
NZ239165A (en) 1993-09-27
MY106526A (en) 1995-06-30
IE76467B1 (en) 1997-10-22
FI921451A0 (fi) 1992-04-02
ZA916025B (en) 1992-04-29
WO1992002255A1 (en) 1992-02-20
DK0495053T3 (da) 1996-04-22
RU2116087C1 (ru) 1998-07-27
JP3169222B2 (ja) 2001-05-21
NO921287D0 (no) 1992-04-02
EP0495053A1 (en) 1992-07-22
CA2067184A1 (en) 1992-02-04
EP0495053B1 (en) 1996-03-27
IE912757A1 (en) 1992-02-12
PT98545A (pt) 1992-06-30
NO921287L (no) 1992-04-02
YU134691A (sh) 1994-06-10
KR920702234A (ko) 1992-09-03
YU48441B (sh) 1998-07-10
US5547667A (en) 1996-08-20
FI100697B (fi) 1998-02-13
HU9201146D0 (en) 1992-07-28
TW211572B (cs) 1993-08-21
CA2067184C (en) 2002-11-26
ES2088013T3 (es) 1996-08-01
US5387578A (en) 1995-02-07
AU650900B2 (en) 1994-07-07
AU8311391A (en) 1992-03-02
IL98986A (en) 1995-12-08
ATE135919T1 (de) 1996-04-15
DE69118350D1 (de) 1996-05-02
IL113101A0 (en) 1995-06-29

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CS241491A3 (en) Novel conjugate of therapeutically usable compounds with a carrier
AU687795B2 (en) Lysosomal enzyme-cleavable antitumor drug conjugates
US5846545A (en) Targeted delivery of cyclopropylbenzindole-containing cytotoxic drugs
EP0317957A2 (en) Drug-monoclonal antibody conjugates
AU2018317230B2 (en) Tetramaleimide linkers and use thereof
JP2003531821A (ja) 改変型ドキソルビシンおよびダウノルビシンを含む細胞傷害性薬剤ならびにその治療上の使用
CN114053426A (zh) 一种双药链接组装单元及双药靶向接头-药物偶联物
US5010176A (en) Antibody-drug conjugates
US5776458A (en) Anthracycline-conjugates
US20240293570A1 (en) Highly stable targeted linker-drug conjugate
EP0514515B1 (en) Anthracycline-conjugates
WO2025025846A1 (zh) 含糖基吡啶型连接子的抗体药物偶联物